CN106146339B

CN106146339B - 阿利吉仑的5‑位差向异构体、其制备方法及用途

Info

Publication number: CN106146339B
Application number: CN201510195269.4A
Authority: CN
Inventors: 金珠; 翟建国; 周宜遂; 舒琳; 欧阳辉; 索韡
Original assignee: China Resources Double Crane Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: China Resources Double Crane Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2015-04-23
Filing date: 2015-04-23
Publication date: 2018-02-23
Anticipated expiration: 2035-04-23
Also published as: CN106146339A

Abstract

本发明属于医药化工领域，涉及阿利吉仑的5‑位差向异构体、其制备方法和用途。阿利吉仑5‑位差向异构体的分子结构如式Ⅱ所示。本发明还涉及所述阿利吉仑的5‑位差向异构体的制备方法，及其用于检测阿利吉仑或其药学上可接受盐中阿利吉仑5‑位差向异构体的含量、杂质或光学异构体含量，检测阿利吉仑或其药学上可接受盐的纯度，以及对其制备过程中进行质量控制的用途。

Description

阿利吉仑的5-位差向异构体、其制备方法及用途

技术领域

本发明属于医药化工领域，涉及一种阿利吉仑的5-位差向异构体，还涉及该差向异构体的制备方法及用途。

背景技术

阿利吉仑(如结构式I)是一种新型的非肽类直接肾素抑制剂，有关的药效学、药代动力学和临床研究结果在期刊文献Drugs of the Future,Vol.26,No.12,pp1139-1143(2001)中有详细的陈述，其特点是通过剂量依赖性地降低肾素活性，从源头上减少肾素-血管紧张素系统(RAS)的主要活性肽—血管紧张素II的生成，有效的降低轻中度高血压患者的血压水平。阿利吉仑以其富马酸盐的形式于2007年3月首次在美国上市，商品名为TEKTURNA^TM，经临床研究证实具有良好的降压作用，已成为副作用少、用药安全的全新型抗高血压的新药。

已有专利文献US5,559,111、EP0678503、WO02/02508、WO2007/045420、WO2011/019789和US7,009,078等报道了阿利吉仑的合成方法。其中，专利WO02/02508采用了以下合成路线：

专利WO2007/045420则采用了另外一种合成路线：

阿利吉仑合成的关键在于采用不对称合成的方法构建分子中的四个手性中心，从而获得4位羟基为S构型、5位氨基为S构型、2位和7位异丙基为S构型的单一光学对映体。其中，对于5位氨基手性中心的构建过程，在上述已知合成方法均得到解决。如上述专利WO02/02508所示合成方法中，将化合物7的双键与次溴酸进行立体选择性的加成反应，得到(3S,5R,1’S,3’S)构型的化合物4，并进一步经立体专一反应获得阿利吉仑；又如上述专利WO2007/045420所示合成方法中，将化合物16的双键与次溴酸进行立体选择性的加成反应，并进一步经立体专一反应获得阿利吉仑。

众所周知，无论合成方法中采用何种化学反应进行5位氨基手性中心的构建，其5位S构型的选择性均不可能是100％，或多或少可能产生5位R构型的异构体，从而在最终生成得到(2S,4S,5S,7S)构型的阿利吉仑时或多或少混入(2S,4S,5R,7S)构型的异构体。该异构体2、4、7位的构型均与目标分子阿利吉仑一致，仅5位构型不一致，化学上称为“5-位差向异构体”。

与其它的化学合成药物一样，药物活性物质(API)的纯度是阿利吉仑商业化利用的一个关键指标。在API的生产过程中可能会引入起始原料、反应中间体及副产物、降解产物等称为有关物质的杂质，其中有些杂质对患者可能是有害的，为了用药安全，国际人药注册协调委会(ICH)要求API必须具有足够的纯度，其杂质的含量需控制在药物质量标准规定的限度之内。

对于阿利吉仑这类单一光学对映体药物，具有多个光学异构体，这些异构体的化学分子式与阿利吉仑相同，各项理化性质也相同或相似，但它们进入人体后的药效及对人体的毒性与阿利吉仑可能存在较大不同。ICH要求将这些可能的光学异构体作为杂质进行限度研究，以保障药物的药效和毒性。如在API生产的ICHQ7A指导原则中，对原辅料及生产条件提出规范化的要求，在生产API的某个特定阶段需要对中间体或成品中的杂质进行检验，检验方法常为高效液相色谱(HPLC)法。应用HPLC法检验样品中杂质的含量，通常采用外标法或者加校正因子的自身对照法，其前提条件是获得被测杂质的对照品。

基于前述原因，为保障阿利吉仑上市药品的药效一致性和毒性最小，最佳的方法是采用高效液相色谱法检验其杂质如5-位差向异构体的含量，而高效液相色谱法所采用的外标法或者加校正因子的自身对照法，均需要使用5-位差向异构体作为对照品。

但是，目前为止还没有有关阿利吉仑的5-位差向异构体的报道，因此有必要开发阿利吉仑5-位差向异构体的合成方法以获得对照品，以及开发一种分析方法用于API的生产过程中的质量控制。

发明内容

本发明的目的是获得阿利吉仑的5-位差向异构体，并以该差向异构体作对照品，对阿利吉仑、其盐或其水合物中5-位差向异构体含量进行检测，从而对阿利吉仑、其盐或其水合物的API纯度进行控制。为达到上述目的，提供了如下技术方案：

本发明第一方面涉及一种阿利吉仑5-位差向异构体、其盐或水合物，其中，阿利吉仑的5-位差向异构体的分子结构如式Ⅱ所示，化学名称为：(2S,4S,5R,7S)-5-氨基-N-(2-胺甲酰基-2-甲基丙基)-4-羟基-2-异丙基-7-(4-甲氧基-3-(3-甲氧基丙氧基)苄基)-8-甲基壬酰胺。

本发明第二方面涉及本发明第一方面阿利吉仑5-位差向异构体、其盐或水合物的制备方法，其包括以下步骤：

以如下所示的化合物(3S,5R,1’S,3’S)-4为合成的起始原料，其化学名称为：(3S,5R)-5-[(1S,3S)-1-溴-3-[[4-甲氧基-3-(3-甲氧基丙氧基)苯基]甲基]-4-甲基戊基]二氢-3-异丙基-2(3H)-呋喃酮；

a)将化合物(3S,5R,1’S,3’S)-4与叠氮化钠反应得如下所示的化合物(3S,5R,1’R,3’S)-5；

b)将化合物(3S,5R,1’R,3’S)-5与3-氨基-2,2-二甲基丙胺反应得如下所示的化合物4R,5R-2；

c)将化合物4R,5R-2与一种氧化剂反应得如下所示的化合物5R-3；

d)将化合物5R-3与金属硼氢化物反应得化合物5R-2及化合物4R,5R-2的消旋体混合物；

e)将d)中的混合物通过催化氢化得化合物5R-1和化合物4R,5R-1的消旋体混合物；

f)将e)中的消旋体混合物分离制备得到式II化合物。

本发明第二方面任一项的制备方法中，包括以下(1)-(21)中的任意一项或多项：

(1)步骤a)中，反应时还加入第一溶剂，所述第一溶剂为N,N-二甲基甲酰胺、三丙二醇、吡啶或N-甲基吡咯烷酮，优选为三丙二醇；

(2)步骤a)中，化合物(3S,5R,1’S,3’S)-4与叠氮化钠的摩尔比为1:3～1:10，优选为1:5；

(3)步骤a)中，反应温度为60～100℃，优选为80～90℃；优选反应48～72小时；

(4)步骤a)中，反应完毕后加入水和第一有机溶剂进行萃取，所述第一有机溶剂为甲基叔丁基醚、二氯甲烷或乙酸乙酯；萃取出的有机层经浓缩、硅胶柱层析纯化得化合物(3S,5R,1’R,3’S)-5；

(5)步骤b)中，反应时还加入第二溶剂，所述第二溶剂为甲基叔丁基醚、四氢呋喃、N-甲基吡咯烷酮或氯仿，优选为甲基叔丁基醚；

(6)步骤b)中，反应时还加入有机碱；具体地，所述有机碱选自吡啶、2-羟基吡啶、三乙胺和金刚烷胺中的一种或多种；优选，所述有机碱为2-羟基吡啶；

(7)步骤b)中，反应温度为40～110℃，优选为60～100℃，更优选为70～90℃；

(8)步骤b)中，反应完毕后加入水和第二有机溶剂进行萃取，其中，第二有机溶剂为甲基叔丁基醚、二氯甲烷或乙酸乙酯；萃取出的有机层经浓缩、硅胶柱层析纯化得化合物4R,5R-2；

(9)步骤c)中，还加入第三溶剂，所述第三溶剂为氯仿或二氯甲烷；

(10)步骤c)中，反应温度为-30～10℃，优选为-20～0℃；

(11)步骤c)中，所述的氧化剂选自三氧化铬-吡啶络合物、二氧化锰、三正丁氧基铝和戴斯-马丁过碘烷中的一种或多种，优选为戴斯-马丁过碘烷；

(12)步骤c)中，氧化反应完毕后加入饱和碳酸氢钠和硫代硫酸钠溶液，分离的有机层经浓缩、柱层析纯化得化合物5R-3；

(13)步骤d)中，还加入了第四溶剂，所述第四溶剂为甲醇、乙醇或四氢呋喃；

(14)步骤d)中，反应温度为-10～60℃，优选为0～50℃；

(15)步骤d)中，所述金属硼氢化物选自硼氢化钾、硼氢化钠和硼氢化锂中的一种或多种；

(16)步骤d)中，反应完毕后加入氯化铵溶液和二氯甲烷进行萃取，萃取出的有机层经浓缩、柱层析(例如硅胶柱层析)纯化得化合物5R-2及化合物4R,5R-2的消旋体混合物；

(17)步骤e)中，催化剂为钯碳，优选含钯重量为5％或10％的钯碳；

(18)步骤e)中，还加入第五溶剂，所述第五溶剂为甲基叔丁基醚、乙醇、甲醇、四氢呋喃、乙酸乙酯、乙酯异丙酯或二氯甲烷，优选为甲醇或四氢呋喃；

(19)步骤e)中，催化氢化反应的压力为1～10bar，优选为1～3bar；

(20)步骤e)中，催化氢化反应完毕后依次加入饱和碳酸氢钠溶液和盐水，分离的有机层经浓缩、硅胶柱层析纯化得化合物5R-1及化合物4R,5R-1的消旋体混合物；

(21)步骤f)中，分离方法为将步骤e)获得的消旋体混合物在制备液相色谱仪上进行分离制备；具体地，使用的色谱柱为Chiralpak IA或类似型号的制备柱；更具体地，以正己烷和乙醇(优选，乙醇含0.2％w/w二乙胺)为流动相，其中正己烷与乙醇的体积比为80:20～60:40，优选为70:30。

在本发明的实施方案中，作为起始原料的化合物(3S,5R,1’S,3’S)-4按照专利WO02/02508中实施例C1所述的方法制备获得。

上述第一、二方面的“其盐”是指阿利吉仑5-位差向异构体药学上可接受盐。

本发明第三方面还涉及一种检测样品中阿利吉仑5-位差向异构体、其盐或水合物存在的方法，包括以权利要求3所述阿利吉仑5-位差向异构体为对照品。

本发明第三方面任一项的方法，其中，所述样品含有阿利吉仑、其盐或水合物，或者所述样品含有制备阿利吉仑过程中的中间体。

本发明第三方面任一项的方法，其中，所述检测为定量检测；具体地，所述检测采用高效液相色谱；更具体地，所述检测采用高效液相色谱的外标法或加校正因子的自身对照法检测阿利吉仑5-位差向异构体的含量。

本发明第三方面任一项的方法，包括以下(1)～(5)中的任意一项或者多项：

(1)色谱柱以碳八或碳十八键合硅胶为填充剂，例如YMC-Pack ODS-A型色谱柱(4.6mm×150mm,3μm)或等效柱；

(2)流动相A、流动相B以下表含量相配进行梯度洗脱；流动相A和流动相B为不同体积比的缓冲溶液-乙腈混合液；具体地，缓冲溶液配制方法为：将5.65重量份己烷磺酸钠一水合物和2.75重量份磷酸二氢钠一水合物溶于1000ml水，形成的缓冲溶液用85％的磷酸调节pH值至2.3；更具体地，缓冲溶液-乙腈混合液中缓冲溶液与乙腈的体积比为(10:90)-(90:10)；优选，流动相A中缓冲溶液与乙腈的体积比为20:80；优选，流动相B中缓冲溶液与乙腈的体积比为80:20；

(3)检测波长为200～300nm，优选为230nm；

(4)流速为0.5～1.5ml/min，优选为1.0ml/min；

(5)柱温为25～35℃，优选为30℃。

本发明第三方面的另一方法中，将阿利吉仑和阿利吉仑5-位差向异构体单独及混合进样，分别得到阿利吉仑的保留时间、阿利吉仑5-位差向异构体的保留时间和两者的分离度数据。本发明一个实施方式中，阿利吉仑的保留时间约为10.9min，阿利吉仑5-位差向异构体的保留时间约为11.2min，两者色谱峰的分离度约为1.56。

本发明第四方面提供了所述阿利吉仑5-位差向异构体、其盐或水合物在检测阿利吉仑、其盐或水合物中杂质或光学异构体含量中的用途。

本发明第五方面提供了所述阿利吉仑5-位差向异构体、其盐或水合物在检测阿利吉仑、其盐或水合物的纯度中的用途。

本发明第六方面提供了所述阿利吉仑5-位差向异构体、其盐或水合物在阿利吉仑、其盐或水合物的质量控制中的用途。

上述第三至六方面中，“阿利吉仑、其盐”的“盐”指阿利吉仑药学上可接受盐，“阿利吉仑5-位差向异构体、其盐”的“盐”指阿利吉仑5-位差向异构体药学上可接受盐。

本发明中，术语“外标法”是指：将对照品阿利吉仑5-位差向异构体配成已知浓度的对照品溶液，以HPLC法测定对照品溶液中阿利吉仑5-位差向异构体的峰面积；以HPLC法测定阿利吉仑或其药学上可接受盐的样品中阿利吉仑5-位差向异构体的峰面积；通过峰面积比值等于阿利吉仑5-位差向异构体的浓度比计算得到阿利吉仑、其盐或水合物中阿利吉仑5-位差向异构体的含量。

本发明中，术语“加校正因子的自身对照法”是指：

1)以阿利吉仑和阿利吉仑5-位差向异构体作为样品，配制系列不同浓度的溶液，绘制标准曲线求得斜率，通过斜率计算阿利吉仑5-位差向异构体的校正因子；

2)以HPLC法测定阿利吉仑、其盐或水合物的样品中含有的阿利吉仑的峰面积和阿利吉仑5-位差向异构体的峰面积；

3)通过校正因子来计算阿利吉仑5-位差向异构体在阿利吉仑、其盐或水合物中的含量。

本发明的有益效果：

本发明首次获得了阿利吉仑的5-位差向异构体(5R-1)，从而实现了以5R-1为对照品对阿利吉仑或其药学上可接受的盐中5R-1含量进行检测，从而能够对阿利吉仑或其药学上可接受盐的API纯度、杂质含量进行测定和控制。

本发明还以5R-1为对照品对阿利吉仑或其药学上可接受盐的制备中间体的5R-1含量进行检测，从而对阿利吉仑或其药学上可接受盐的制备和生产过程进行控制。

附图说明

图1：化合物5R-1的ESI-MS图谱。

图2：化合物5R-1的¹H-NMR图谱。

图3：化合物5R-1的¹³C-NMR图谱。

图4：化合物5R-1的¹H-¹HCOSY图谱。

图5：化合物5R-1的HSQC图谱。

图6：阿利吉仑半富马酸盐样品溶液的HPLC图谱。

图7：化合物5R-1对照品溶液的HPLC图谱。

图8：化合物5R-1与阿利吉仑半富马酸盐混合溶液的HPLC图谱。

具体实施方式

下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。

在以下实施例中，所述分离制备，在Shimadzul C20A型制备液相色谱仪上进行，其中采用Chiralpak IA或类似型号的制备柱为色谱柱；所述浓缩，是在R-200型旋转蒸发仪上进行；所述的HPLC色谱图，是在waters e2695高效液相色谱仪上测定；质谱在JEOLAccuTOF CS(JMS T100CS)型质谱仪上测定；核磁共振¹H谱和¹³C谱在Bruker AVANCEIII400型核磁共振仪上测定；所述的旋光度，是在WZZ-2S型自动旋光仪上测定，其中，样品的比旋度的计算公式为：

式中D为钠光谱的D线，l为测定管长度(dm)，α为测得的旋光度。

实施例1(3S,5R)-5-[(1R,3S)-1-叠氮基-3-[[4-甲氧基-3-(3-甲氧基丙氧基)苯基]甲基]-4-甲基戊基]二氢-3-异丙基-2(3H)-呋喃酮((3S,5R,1’R,3’S)-5)的制备

以如下所示的化合物(3S,5R,1’S,3’S)-4为合成的起始原料，其化学名称为：(3S,5R)-5-[(1S,3S)-1-溴-3-[[4-甲氧基-3-(3-甲氧基丙氧基)苯基]甲基]-4-甲基戊基]二氢-3-异丙基-2(3H)-呋喃酮。化合物(3S,5R,1’S,3’S)-4通过专利WO02/02508中实施例C1所述的方法制备。

将化合物(3S,5R,1’S,3’S)-4(10.0g，20mmol)、叠氮化钠(6.5g，100mmol)和三丙二醇(80ml)及水(53ml)的混合物于80℃搅拌反应48小时，反应混合物冷却至室温，加入二乙胺基-1-丙胺(8ml)，再于室温搅拌反应3小时。将反应混合物倒入水(200ml)中，用甲基叔丁基醚(3×200ml)萃取，有机相依次用0.5N的盐酸(200ml)、5％的碳酸氢钠(200ml)、水(3×200ml)、盐水(200ml)洗。有机相用无水硫酸钠(200g)干燥后，过滤并减压浓缩，柱层析纯化(柱层析硅胶，流动相：乙酸乙酯/正己烷＝1:5)，得如下所示的化合物(3S,5R,1’R,3’S)-5(6.9g，产率75.0％)为淡黄色油状物。

¹H-NMR(400MHz,CDCl₃,ppm^-1)δ:0.82-0.98(m,12H),1.44-1.50(m,2H),1.68-1.83(m,3H),1.96-2.22(m,5H),2.47-2.53(m,1H),2.67-2.71(dd,1H),3.11-3.16(m,1H),3.30(s,3H),3.52(t,2H),3.78(s,3H),4.05(t,2H),4.16-4.21(m,1H),6.59-6.92(m,3H)。ESI-MS(m/z):484.3(MNa⁺)。

实施例2(2S,4R,5R,7S)-N-(3-氨基-2,2-二甲基-3-氧丙基)-5-叠氮基-4-羟基- 2-异丙基-7-(4-甲氧基-3-(3-甲氧基丙氧基)苄基)-8-甲基壬酰胺(4R,5R-2)的制备

将(3S,5R,1’R,3’S)-5(4.0g，8.6mmol)，3-氨基-2,2-二甲基丙酰胺(5.0g，43mmol)，2-羟基吡啶(1.0g，10.5mmol)，三乙胺(0.5g)和甲苯(50ml)混合后，搅拌回流溶解。浴温80–90℃，搅拌反应20小时，减压蒸干溶剂，加入二氯甲烷(60ml)和水(50ml)搅拌溶解，水相用二氯甲烷(30ml)萃取两次，合并有机相，并且用水(30ml)洗涤3次后，用无水硫酸钠干燥后蒸干，得到油状物，将油状物用硅胶柱层析纯化(流动相：乙酸乙酯/石油醚＝1/1)得到如下所示的化合物4R,5R-2(3.9g，78.5％产率)为无色油状物。

¹H-NMR(400MHz,CDCl₃,ppm^-1)δ:0.88-0.98(m,12H),1.20(s,6H),1.44-1.63(m,3H),1.69-1.93(m,5H),2.05-2.31(m,4H),2.65-2.70(dd,1H),3.02-3.05(m,1H),3.34-3.46(m,6H),3.56(t,2H),3.82(s,3H),4.09(t,2H),5.62(brs,1H),6.05(brs,1H),6.49(brs,1H),6.70-6.79(m,3H)。ESI-MS(m/z):578.3(MH⁺)。

实施例3(2S,5R,7S)-5-叠氮基-N-(2-胺甲酰基-2-甲基丙基)-2-异丙基-7-(4-甲氧基-3-(3-甲氧基丙氧基)苄基)-8-甲基-4-氧壬酰胺(5R-3)的制备

在化合物4R,5R-2(4.0g，6.9mmol)的二氯甲烷(100ml)溶液中加入戴斯-马丁过碘烷(2.9g，6.9mmol)，加入时保持温度在-20℃。加毕，缓慢升温至0℃并且将反应液在0℃搅拌3小时。向反应液中分别加入饱和碳酸氢钠和硫代硫酸钠水溶液(各20ml)，待反应液变澄清之后向反应液中加入二氯甲烷(50ml)，搅拌后分出有机相，并且再用二氯甲烷(50ml)萃取水相两次，合并所有有机相，并且将有机相用无水硫酸钠干燥后蒸干，残余物经硅胶柱层析纯化，得到如下所示的化合物5R-3的粗品(4.5g，100％产率)，为黄色油状物。ESI-MS(m/z):576.1(MH⁺)。

实施例4(2S,5R,7S)-5-叠氮基-4-羟基-N-(2-胺甲酰基-2-甲基丙基)-2-异丙基- 7-(4-甲氧基-3-(3-甲氧基丙氧基)苄基)-8-甲基壬酰胺(5R-2和4R,5R-2消旋体混合物)的制备

将实施例3中得到的中间体5R-3(4.4g，6.9mmol)的粗品溶于甲醇(50ml)，并且加热到50℃，向溶液中分批加入硼氢化钠(0.52g，13.8mmol)。加毕，反应液在50℃继续搅拌30分钟后，冷却到室温。向反应液中加入饱和氯化铵水溶液(20ml)，搅拌后分离出有机相，再用二氯甲烷(50ml)萃取水相两次。合并所有有机相，用无水硫酸钠干燥后蒸干，得到残留物，将残留物用硅胶柱层析纯化(流动相：乙酸乙酯/石油醚＝1/1)得到如下所示的5R-2和4R,5R-2的混合物(2.8g，70.0％产率)，为无色油状物。ESI-MS(m/z):578.1(MH⁺)。

实施例5(2S,4S,5R,7S)-5-氨基-N-(2-胺甲酰基-2-甲基丙基)-4-羟基-2-异丙基-7-(4-甲氧基-3-(3-甲氧基丙氧基)苄基)-8-甲基壬酰胺(5R-1)的制备

将实施例4中得到的5R-2和4R,5R-2的消旋体混合物(2.8g，4.8mmol)溶于甲醇(50ml)中，并向此溶液中加入钯碳(含钯10％，0.5g)。向此反应液通入氢气，保持氢气压力为2.0bar搅拌过夜。将反应混合物过滤，滤液蒸干溶剂，得到的残留物在制备液相色谱仪上进行分离制备，其中采用Chiralpak IA制备柱为色谱柱，以正己烷:乙醇(含0.2％二乙胺)＝70:30为流动相，减压蒸干溶剂得到5R-1(0.5g，18.7％产率)，为白色固体。

对所得的化合物5R-1进行旋光度测定：取本品约0.2g，精密称定，置25ml量瓶中，加乙醇使溶解并稀释至刻度，摇匀得供试液。取供试液在自动旋光仪上测定旋光度，重复读数3次，取算术平均值。测定的结果如表1所示。

表1

按照比旋度的计算公式计算，化合物5R-1的比旋度为[α]_D ²⁰＝+20.4°(乙醇，C＝5.40mg/ml)；作为参考，阿利吉仑的比旋度为[α]_D ²⁰＝-11.4°(乙醇，C＝8.21g/ml)。

对所得的化合物5R-1，进行质谱(见图1)、核磁共振氢谱(见图2)、碳谱(见图3)、¹H-¹HCOSY谱(见图4)、HSQC谱(见图5)的测定，结果发现：

¹H-NMR(400MHz,CDCl₃,ppm^-1)δ:0.84-0.99(m,12H),1.09-1.20(m,7H),1.41-1.47(m,2H),1.53-1.61(m,2H),1.75-1.83(m,2H),2.05-2.23(m,5H),2.62-2.67(m,1H),2.74-2.76(m,1H),3.28-3.47(m,6H),3.57(t,2H),3.83(s,3H),4.09(t,2H),5.85-6.00(brs,1H),6.35-6.45(brs,1H),6.61(brs,1H),6.67-6.78(m,3H).

¹³C-NMR(400MHz,CDCl₃,ppm^-1)δ:17.7,19.6,21.1,24.0,24.2,28.8,29.6,30.5,31.7,32.6,36.4,42.8,43.1,47.1,50.8,53.8,56.0,58.6,66.1,69.4,71.2,111.8,114.6,121.4,134.2,147.6,148.2,176.0,179.9.

ESI-MS(m/z):552.4(MH⁺)。

¹H-¹HCOSY测试的结果见图4，HSQC测试的结果见图5。以上结果均与目标化合物的化学结构相符合。

实施例6高效液相色谱法中外标法检测阿利吉仑或其盐的5R-1含量

(1)阿利吉仑半富马酸盐样品溶液的制备：取阿利吉仑半富马酸盐样品(参照专利US7,009,078中实施例G1方法制备得到)适量，精密称定后，加入水-乙腈(3:1)溶解并定容，得到0.3mg/mL的阿利吉仑半富马酸盐样品溶液。

(2)化合物5R-1对照品溶液的制备：取实施例5所得化合物5R-1适量，精密称定，加入水-乙腈(3:1)溶解并定容，得到0.3mg/mL的化合物5R-1对照品溶液。

(3)加化合物5R-1的混合溶液的配制：分别精密称取阿利吉仑半富马酸盐样品及化合物5R-1对照品适量，加入水-乙腈(3:1)溶解并定容至刻度。

(4)以上三种溶液采用高效液相色谱测定，测定条件为：

高效液相色谱仪型号：waters e2695

色谱柱类型：YMC-Pack ODS-A型色谱柱(4.6mm×150mm,3μm)；

检测波长：230nm；

流速：1.0ml/min；

柱温：30℃；

进样量：10μl；

稀释剂：水-乙腈(3:1)；

流动相：缓冲溶液配制方法：取己烷磺酸钠一水合物5.65g和磷酸二氢钠一水合物2.75g，加水1000ml溶解，用85％磷酸调节pH值至2.3。以体积比20:80的缓冲溶液-乙腈混合液为流动相A；以体积比80:20的缓冲溶液-乙腈混合液为流动相B，流动相A、B按表2配比进行梯度洗脱：

表2

(5)计算结果：

阿利吉仑半富马酸盐样品溶液色谱图见图6，化合物5R-1对照品溶液色谱图见图7，加化合物5R-1混合溶液的色谱图见图8。

由图8可知，化合物5R-1、阿利吉仑的保留时间分别约为10.9min、11.2min，两者的分离度约为1.56。

按照下式采用外标法计算样品溶液中化合物5R-1的含量，结果见表3。

式中，A_样为样品溶液中化合物5R-1的峰面积；

W_对为配制对照品溶液时化合物5R-1的称样量(mg)；

V_样为样品溶液的定容体积(ml)；

A_对为对照品溶液中化合物5R-1的峰面积；

V_对为对照品溶液的定容体积(ml)；

W_样为样品溶液的称样量(mg)。

表3

实施例7高效液相色谱法中加校正因子的自身对照法检测阿利吉仑或其药学上可接受盐中5R-1的含量

(1)阿利吉仑半富马酸盐样品溶液的制备：取阿利吉仑半富马酸盐样品(参照专利US7,009,078中的实施例G1所述的方法制备得到)适量，精密称定，加入水-乙腈(3:1)溶解并定容至刻度，得到每ml含阿利吉仑半富马酸盐对照品0.3mg的溶液。(2)化合物5R-1对照品溶液的制备：取实施例5所得化合物5R-1适量，精密称定，加入水-乙腈(3:1)溶解并定容至刻度，得到每ml含化合物5R-10.3mg的对照品溶液。

(3)加化合物5R-1的混合溶液的配制：分别精密称取阿利吉仑半富马酸盐对照品及化合物5R-1对照品适量，加入水-乙腈(3:1)溶解并定容至刻度。

(4)采用高效液相色测定以上溶液，测定条件参照实施例6。

以系列样品溶液的5R-1浓度为横坐标、5R-1峰面积为纵坐标绘制5R-1标准曲线，以系列对照品溶液的阿利吉仑浓度为横坐标、阿利吉仑峰面积为纵坐标绘制阿利吉仑标准曲线，得到化合物5R-1标准曲线和阿利吉仑标准曲线及对应的斜率值K。按照下式计算得到化合物5R-1相对于阿利吉仑的校正因子f值为0.9965。

f＝K_阿利吉仑/K_5R-1

采用上述高效液相色谱法测定样品溶液和0.3mg/mL的对照品溶液，按照下式计算样品溶液中化合物5R-1的含量，结果见表4。

式中，A_5R-1为样品溶液中化合物5R-1的峰面积；f_5R-1为化合物5R-1相对于阿利吉仑的校正因子(0.9965)；A_样为样品溶液中阿利吉仑的峰面积。

表4

项目	数值
		A_5R-1	2270
A_样	3179032
		样品溶液中化合物5R-1含量	0.071％

尽管本发明的具体实施方式已经得到详细的描述，本领域技术人员将会理解。根据已经公开的所有教导，可以对那些细节进行各种修改和替换，这些改变均在本发明的保护范围之内。本发明的全部范围由所附权利要求及其任何等同物给出。

Claims

1.制备式Ⅱ所示阿利吉仑5-位差向异构体、其盐或水合物的方法，包括如下步骤：

a)将化合物(3S,5R,1’S,3’S)-4与叠氮化钠反应制得化合物(3S,5R,1’R,3’S)-5；

b)将化合物(3S,5R,1’R,3’S)-5与3-氨基-2,2-二甲基丙胺反应制得化合物4R,5R-2；

c)将化合物4R,5R-2与氧化剂反应制得化合物5R-3；

d)将化合物5R-3与金属硼氢化物反应制得化合物5R-2及化合物4R,5R-2的消旋体混合物；

e)将步骤d)得到的消旋体混合物催化氢化制得化合物5R-1和化合物4R,5R-1的消旋体混合物；

f)将步骤e)得到的消旋体混合物分离得到式II化合物；

。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于以下(1)-(21)中的任意一项或者多项：

(1)步骤a)中，反应时还加入第一溶剂，所述第一溶剂为N,N-二甲基甲酰胺、三丙二醇、吡啶或N-甲基吡咯烷酮；

(2)步骤a)中，化合物(3S,5R,1’S,3’S)-4与叠氮化钠的摩尔比为1:3～1:10；

(3)步骤a)中，反应温度为60～100℃；

(4)步骤a)中，反应完毕后加入水和第一有机溶剂进行萃取，所述第一有机溶剂为甲基叔丁基醚、二氯甲烷或乙酸乙酯；萃取出的有机层经干燥后浓缩、硅胶柱层析纯化得化合物(3S,5R,1’R,3’S)-5；

(5)步骤b)中，反应时还加入第二溶剂，所述第二溶剂为甲基叔丁基醚、四氢呋喃、N-甲基吡咯烷酮或氯仿；

(6)步骤b)中，反应时还加入有机碱；

(7)步骤b)中，反应温度为40～110℃；

(8)步骤b)中，反应完毕后加入水和第二有机溶剂进行萃取，其中，第二有机溶剂为甲基叔丁基醚、二氯甲烷或乙酸乙酯；萃取出的有机层经干燥后浓缩、硅胶柱层析纯化得化合物4R,5R-2；

(10)步骤c)中，反应温度为-30～10℃；

(11)步骤c)中，所述的氧化剂选自三氧化铬-吡啶络合物、二氧化锰、三正丁氧基铝和戴斯-马丁过碘烷中的一种或多种；

(12)步骤c)中，氧化反应完毕后加入饱和碳酸氢钠和硫代硫酸钠溶液，分离的有机层经干燥后浓缩、柱层析纯化得化合物5R-3；

(14)步骤d)中，反应温度为-10～60℃；

(16)步骤d)中，反应完毕后加入氯化铵溶液和二氯甲烷进行萃取，萃取出的有机层经干燥后浓缩、柱层析纯化得化合物5R-2及化合物4R,5R-2的消旋体混合物；

(17)步骤e)中，催化剂为钯碳；

(18)步骤e)中，还加入第五溶剂，所述第五溶剂为甲基叔丁基醚、乙醇、甲醇、四氢呋喃、乙酸乙酯、乙酯异丙酯或二氯甲烷；

(19)步骤e)中，催化氢化反应的压力为1～10bar；

(21)步骤f)中，分离方法为将步骤e)获得的消旋体混合物在制备液相色谱仪上进行分离制备。

3.根据权利要求2所述的方法，其中，第(1)项中，步骤a)中，所述第一溶剂为三丙二醇。

4.根据权利要求2所述的方法，其中，第(2)项中，步骤a)中，化合物(3S,5R,1’S,3’S)-4与叠氮化钠的摩尔比为1:5。

5.根据权利要求2所述的方法，其中，第(3)项中，步骤a)中，反应温度为80～90℃。

6.根据权利要求2所述的方法，其中，第(5)项中，步骤b)中，所述第二溶剂为甲基叔丁基醚。

7.根据权利要求2所述的方法，其中，第(6)项中，步骤b)中，所述有机碱选自吡啶、2-羟基吡啶、三乙胺和金刚烷胺中的一种或多种。

8.根据权利要求2所述的方法，其中，第(6)项中，步骤b)中，所述有机碱为2-羟基吡啶。

9.根据权利要求2所述的方法，其中，第(7)项中，步骤b)中，反应温度为60～100℃。

10.根据权利要求2所述的方法，其中，第(7)项中，步骤b)中，反应温度为70～90℃。

11.根据权利要求2所述的方法，其中，第(10)项中，步骤c)中，反应温度为-20～0℃。

12.根据权利要求2所述的方法，其中，第(11)项中，步骤c)中，所述的氧化剂为戴斯-马丁过碘烷。

13.根据权利要求2所述的方法，其中，第(14)项中，步骤d)中，反应温度为0～50℃。

14.根据权利要求2所述的方法，其中，第(16)项中，步骤d)中，所述柱层析为硅胶柱层析。

15.根据权利要求2所述的方法，其中，第(17)项中，步骤e)中，催化剂为含钯重量为5％或10％的钯碳。

16.根据权利要求2所述的方法，其中，第(18)项中，步骤e)中，所述第五溶剂为甲醇或四氢呋喃。

17.根据权利要求2所述的方法，其中，第(19)项中，步骤e)中，催化氢化反应的压力为1～3bar。

18.根据权利要求2所述的方法，其中，第(21)项中，步骤f)中，使用的色谱柱为Chiralpak IA制备柱。

19.根据权利要求2所述的方法，其中，第(21)项中，步骤f)中，以正己烷和乙醇为流动相，其中正己烷与乙醇的体积比为80:20～60:40。

20.根据权利要求19所述的方法，其中，第(21)项中，步骤f)中，流动相中的乙醇含0.2％w/w二乙胺。

21.根据权利要求19所述的方法，其中，第(21)项中，步骤f)中，正己烷与乙醇的体积比为70:30。