CN106119344B - 一种结合荧光强度和荧光偏振检测dna的纳米探针 - Google Patents
一种结合荧光强度和荧光偏振检测dna的纳米探针 Download PDFInfo
- Publication number
- CN106119344B CN106119344B CN201610447720.1A CN201610447720A CN106119344B CN 106119344 B CN106119344 B CN 106119344B CN 201610447720 A CN201610447720 A CN 201610447720A CN 106119344 B CN106119344 B CN 106119344B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- probe
- nano
- fluorescence
- fluorescence intensity
- capture probe
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 239000000523 sample Substances 0.000 title claims abstract description 78
- 238000002875 fluorescence polarization Methods 0.000 title claims abstract description 29
- 239000010931 gold Substances 0.000 claims abstract description 30
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 claims abstract description 30
- 102000034287 fluorescent proteins Human genes 0.000 claims abstract description 25
- 108091006047 fluorescent proteins Proteins 0.000 claims abstract description 25
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims abstract description 12
- 230000008859 change Effects 0.000 claims abstract description 11
- 238000012546 transfer Methods 0.000 claims abstract description 11
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 9
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims abstract description 8
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 26
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 claims description 14
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 claims description 12
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 claims description 11
- 230000008878 coupling Effects 0.000 claims description 9
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 claims description 9
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 8
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 claims description 7
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 claims description 6
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000011616 biotin Substances 0.000 claims description 6
- 238000002372 labelling Methods 0.000 claims description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 abstract description 19
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 abstract description 7
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 abstract description 7
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 abstract description 7
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 abstract description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 abstract description 5
- 230000003321 amplification Effects 0.000 abstract description 2
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 abstract description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 abstract description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 23
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 14
- 108010002687 Survivin Proteins 0.000 description 12
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 8
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- 102000000763 Survivin Human genes 0.000 description 3
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 3
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 3
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 3
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 3
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 2
- 238000001069 Raman spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 2
- 239000012103 Alexa Fluor 488 Substances 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000001237 Raman spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000031018 biological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 230000004907 flux Effects 0.000 description 1
- 238000012252 genetic analysis Methods 0.000 description 1
- 230000007614 genetic variation Effects 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- 239000002070 nanowire Substances 0.000 description 1
- 108091027963 non-coding RNA Proteins 0.000 description 1
- 102000042567 non-coding RNA Human genes 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 239000002096 quantum dot Substances 0.000 description 1
- 238000010791 quenching Methods 0.000 description 1
- 230000000171 quenching effect Effects 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004416 surface enhanced Raman spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 1
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6813—Hybridisation assays
- C12Q1/6816—Hybridisation assays characterised by the detection means
- C12Q1/6818—Hybridisation assays characterised by the detection means involving interaction of two or more labels, e.g. resonant energy transfer
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6813—Hybridisation assays
- C12Q1/6816—Hybridisation assays characterised by the detection means
- C12Q1/682—Signal amplification
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了属于核酸检测技术领域的一种结合荧光强度和荧光偏振检测DNA的纳米探针。所述的纳米探针包括荧光蛋白、捕捉探针、报告探针和纳米金颗粒；其中，荧光蛋白作为供体与捕捉探针相连，纳米金颗粒作为受体与报告探针相连；捕捉探针与报告探针通过部分碱基互补配对形成能量转移供受体对；所述的捕捉探针与目标DNA完全互补配对。所述纳米探针结合了高灵敏度的荧光强度参数和荧光偏振参数，实现了非扩增式的DNA高灵敏度检测；同时利用共振荧光能量转移形成和消失过程中，荧光强度和荧光偏振相反的变化趋势，引入荧光强度/荧光偏振的比值，放大了DNA的检测信号。
Description
技术领域
本发明属于核酸检测技术领域，具体涉及一种结合荧光强度和荧光偏振检测DNA的纳米探针。
背景技术
基因是遗传变异的物质基础，支配着生命的基本构造和性能。现有的基因分析针对群体细胞，其结果只是细胞群体信号的平均值或其中占优势数量的细胞信息。但是细胞存在异质性，即使来源相同的单个细胞，由于随机的生物过程和环境扰动等原因，彼此也存在许多方面差异。与现有基因测序技术相比，单细胞测序技术不仅有助于认识细胞异质性，而且还能检测到微量的基因表达子或者罕见非编码RNA，也可用于寻找新的细胞类型、进行细胞亚型鉴定等。而在单细胞层面进行核酸的准确高通量检测是单细胞测序技术的基础工作。
2005年，美国约翰霍普金斯大学的Zhang等开发了一种基于量子点荧光染料和Cy5染料的夹心式发光探针，能够用来测定DNA的含量，遗憾的是，该检测需要复杂的细胞核提取等预处理过程，且对于荧光光子检测仪器的要求较高。(Zhang C.Y.,Yeh H.C.,KurokiM.T.,et al.,Single-quantum-dot-based DNA nanosensor,Nature materials,2005,4(11):826-831.)2010年，韩国科学技术院的Taejoon等人利用目标DNA单链将纳米金颗粒和金纳米线连接起来，并观察到表面拉曼增强效应(SERS)，实现了对多种病原体核酸的并行检测，但该方法的材料合成过程繁琐，对纳米线的操作困难，且拉曼光谱检测设备较为昂贵。(Kang T,Yoo S M,Yoon I,et al.Patterned multiplex pathogen DNA detection byAu particle-on-wire SERS sensor[J].Nano letters,2010,10(4):1189-1193.)2014年，德国的Michaelis等人利用核酸分子杂交前后荧光分子的连接位置的改变，实现荧光共振转移效率的变化，从而检测目标DNA的含量，然而该检测方法的灵敏度较低，检测限有待进一步提高。(Michaelis J,van der Heden van Noort G J,Seitz O.DNA-triggered dyetransfer on a quantum dot[J].Bioconjugate chemistry,2013,25(1):18-23.)
核酸可以通过碱基配对特异性连接互补探针，进而可根据系统的质量改变、谐振频率偏移、表面拉曼增强等效应对目标核酸进行检测，但是其灵敏度较低，偶联物复杂，过程繁琐，难以取得实用。另外，现有的纳米探针，例如分子信标技术，用于DNA检测时存在假阳性干扰，稳定性不足，对细胞毒性较大，且灵敏度、速度、通量等方面有待进一步提高。(Yeh H.Y.,Yates M.V.,Mulchandani A.,et al.,Molecular beacon–quantum dot–Aunanoparticle hybrid nanoprobes for visualizing virus replication in livingcells,Chemical Communications,2010,46(22):3914-3916.)
除了传统的荧光强度检测指标，荧光偏振是荧光分子本征性的检测参数，目前尚未有结合荧光强度和荧光偏振的检测方法的报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种结合荧光强度和荧光偏振检测DNA的纳米探针，采取的技术方案如下：
一种结合荧光强度和荧光偏振检测DNA的纳米探针，所述的纳米探针包括荧光蛋白1、捕捉探针2、报告探针3和纳米金颗粒4；其中，荧光蛋白1作为供体与捕捉探针2相连，纳米金颗粒4作为受体与报告探针3相连；捕捉探针2与报告探针3通过部分碱基互补配对形成能量转移供受体对；所述的捕捉探针2与目标DNA完全互补配对。
所述的荧光蛋白1表面用链霉亲和素修饰。
所述的纳米金颗粒4的直径为2nm-15nm。
所述捕捉探针2的结构为biotin-5’-(A,T,C,G)m-3’；其中，biotin为用于偶联荧光蛋白1的生物素，5’-(A,T,C,G)m-3提供捕获目标DNA的配对区域，15≤m≤40，具体的碱基序列根据目标DNA的序列决定。
所述报告探针3的结构为5’-(A,T,C,G)n-3’-SH；其中，-SH为用于偶联纳米金颗粒4的巯基，5’-(A,T,C,G)n-3’提供与捕捉探针3配对的区域，m-15≤n≤m-3。
报告探针3中C、G碱基的数目较少，因此报告探针3与捕捉探针2形成的dsDNA具有较低的退火温度(35-40℃)，在室温下(25℃)反应时竞争性偶联的效率较高。
报告探针3的碱基数目少于捕捉探针2，碱基数差基本上决定了供受体间距。碱基数差过大，供受体之间的能量转移效率将变低；而碱基数差过小，报告探针3与捕捉探针2形成的配对区域不容易与目标DNA接触，产生空间位阻效应，竞争性偶联效率较低。所述纳米探针的碱基数目适中，荧光蛋白1和纳米金颗粒4的间距合适，保证了较高的竞争性偶联效率和能量转移效率。
本发明的有益效果为：所述纳米探针结合了高灵敏度的荧光强度参数和荧光偏振参数，实现了非扩增式的DNA高灵敏度检测；同时利用共振荧光能量转移形成和消失过程中，荧光强度和荧光偏振相反的变化趋势，引入荧光强度/荧光偏振的比值，放大了DNA的检测信号。
附图说明
图1为所述纳米探针的结构示意图；其中，1-荧光蛋白、2-捕捉探针、3-报告探针和4-纳米金颗粒。
图2为所述纳米探针的能量转移示意图。
图3为目标DNA竞争性取代报告探针的示意图。
具体实施方式
本发明可用于DNA含量的高灵敏度检测。下面结合附图和实施例对本发明做进一步描述，但本发明的保护范围不限于此。
survivin具有肿瘤特异性，且与肿瘤细胞的分化增殖及浸润转移密切相关，survivin基因在常见的肿瘤细胞中均有表达。设计出本发明中的相应探针，即可对肿瘤细胞中的survivin基因进行检测。
实施例1
(1)原料的准备
在荧光蛋白Alexa Fluor 488(激发波长488nm，发射波长为519nm)外围修饰1个链霉亲和素；
纳米金颗粒的数量为链霉亲和素数量总结合位点个数的5-10倍；一个链霉亲和素的可用结合位点为3个，所以纳米金颗粒的数量为链霉亲和素的15-30倍，试验中取纳米金颗粒160pmol，纳米金颗粒直径为2nm。
设计合成报告探针和捕捉探针，合成的针对survivin基因的探针序列如表1所示。其中，报告探针中带下划线的部分代表报告探针末端的非配对碱基，在报告探针末端设置2-3个非配对碱基可以增强竞争性偶联的效率；待测基因序列中带下划线的部分为靶向序列区。
表1：针对survivin基因的探针序列
(2)纳米金颗粒-报告探针的合成
首先将纳米金颗粒和3’端修饰有巯基-SH的报告探针通过Au-S键偶联结合；为保证每个纳米金颗粒和报告探针都连接上，报告探针需过量，一般取报告探针的分子数为纳米金颗粒的2-10倍。
将300pmol的报告探针与150pmol纳米金颗粒混合，加入PBS缓冲液，最终反应体积为300ul；然后在4℃环境下反应24小时，无需搅拌；反应结束后，将反应液转移到容量为500ul、截留分子量为10K的超滤离心管中，调节离心机的转速为6000r/min，离心20min，重复两次，去除未与纳米金颗粒结合的报告探针，得到约20ul的“纳米金颗粒-报告探针”溶液；反应中采用的纳米金颗粒的分子量约为15K，报告探针的分子量约为7K，所以用截留分子量为10K的超滤离心管能将未参与反应的报告探针去除。
(3)纳米金颗粒-dsDNA的合成
将5’端修饰有biotin的捕捉探针与纳米金颗粒-报告探针以1:1.2的摩尔比混合，室温下反应8h，使捕捉探针与报告探针不完全配对结合成dsDNA，得到40ul“纳米金颗粒-dsDNA”溶液；其中，捕捉探针能与survivin基因的DNA完全互补配对。
(4)特异性检测survivin基因含量的纳米探针的合成
将50pmol修饰有链霉亲和素的荧光蛋白溶液(1ul)加入到纳米金颗粒-dsDNA溶液中，然后加入PBS缓冲液，形成100ul最终反应液，室温反应45分钟，让纳米金颗粒-dsDNA一端的biotin与荧光蛋白外围的链霉亲和素充分反应，形成能特异性检测survivin基因含量的纳米探针，其结构如图1所示。
(5)细胞中survivin基因含量的检测
当纳米探针没有接触到目标DNA，用光源激发荧光蛋白1时，荧光蛋白1吸收的光能不以光子的形式发射出去，不具有发光特性，如图2所示；同时荧光蛋白1偶联纳米金颗粒后质量增大，荧光偏振增大；另外荧光淬灭相当于荧光蛋白1的有效浓度降低，同样使得荧光偏振增大。用多功能酶标仪检测纳米探针的荧光强度和荧光偏振，然后与相同浓度的纯荧光蛋白对比，由于形成表面能量转移后，纳米探针的荧光强度降低80％以上，荧光偏振可增加2-4倍，此时荧光强度/荧光偏振的比值极低，如图3所示。
当纳米探针与目标DNA接触后，目标DNA与捕捉探针2的亲和性更强，通过竞争性关系取代报告探针3偶联于捕捉探针2，使荧光蛋白1和纳米金颗粒4之间的距离增大，超出产生能量转移的有效距离，此时用光源激发荧光蛋白1，荧光蛋白1恢复发光的特性；同时目标DNA的分子量比纳米金颗粒略小，使得荧光蛋白1的分子质量降低，荧光偏振减小；另外荧光蛋白1恢复发光特性，相当于荧光蛋白1的有效浓度增大，同样使得荧光偏振减小，此时荧光强度/荧光偏振的比值大幅增加，如图3所示。
在384孔板中每孔加入所述纳米探针1pmol，然后在每孔中分别加入不同含量的survivin基因序列，室温下反应2h。在有温控设备的情况下，提高反应温度至30-35℃，可将竞争性偶联反应时间缩短至0.5h以内。
竞争性偶联反应完毕后，使用多功能酶标仪检测纳米探针的荧光信号变化，记录荧光强度和荧光偏振参数，根据荧光强度/荧光偏振的比值变化反映出survivin含量的变化，荧光强度/荧光偏振的比值越大说明survivin的含量越多。
Claims (2)
1.一种利用结合荧光强度和荧光偏振检测DNA的方法，所述方法不用于有生命的人体或者动物体的疾病诊断，其特征在于，
将纳米探针与目标DNA接触，反应完毕后，使用多功能酶标仪检测纳米探针的荧光信号变化，记录荧光强度和荧光偏振参数，根据荧光强度/荧光偏振的比值变化反映出目标DNA含量的变化，荧光强度/荧光偏振的比值越大说明目标DNA的含量越多；
所述的纳米探针包括荧光蛋白(1)、捕捉探针(2)、报告探针(3)和纳米金颗粒(4)；其中，荧光蛋白(1)作为供体与捕捉探针(2)相连，纳米金颗粒(4)作为受体与报告探针(3)相连；捕捉探针(2)与报告探针(3)通过部分碱基互补配对形成能量转移供受体对；所述的捕捉探针(2)与目标DNA完全互补配对；所述的纳米金颗粒(4)的直径为2nm-15nm；
所述捕捉探针(2)的结构为biotin-5’-(A,T,C,G)m-3’；其中，biotin为用于偶联荧光蛋白(1)的生物素，5’-(A,T,C,G)m-3’提供捕获目标DNA的配对区域，15≤m≤40；
所述报告探针(3)的结构为5’-(A,T,C,G)n-3’-SH；其中，-SH为用于偶联纳米金颗粒(4)的巯基，5’-(A,T,C,G)n-3’提供与捕捉探针(2 )配对的区域，m-15≤n≤m-3。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的荧光蛋白(1)表面用链霉亲和素修饰。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201610447720.1A CN106119344B (zh) | 2016-06-20 | 2016-06-20 | 一种结合荧光强度和荧光偏振检测dna的纳米探针 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201610447720.1A CN106119344B (zh) | 2016-06-20 | 2016-06-20 | 一种结合荧光强度和荧光偏振检测dna的纳米探针 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN106119344A CN106119344A (zh) | 2016-11-16 |
| CN106119344B true CN106119344B (zh) | 2020-06-09 |
Family
ID=57470179
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201610447720.1A Active CN106119344B (zh) | 2016-06-20 | 2016-06-20 | 一种结合荧光强度和荧光偏振检测dna的纳米探针 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN106119344B (zh) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20180179577A1 (en) * | 2016-12-22 | 2018-06-28 | Jiaming HU | Lipid-polymer Hybrid Nanoparticle Biochip and Application Thereof |
| CN109306351A (zh) * | 2017-07-28 | 2019-02-05 | 上海海洋大学 | 一种纳米生物探针及末端转移酶介导的检测方法 |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1435493A (zh) * | 2003-03-05 | 2003-08-13 | 东南大学 | 固相化核酸检测探针及其制备方法 |
| CN101519696A (zh) * | 2009-02-19 | 2009-09-02 | 中国人民解放军第三军医大学第一附属医院 | 基于量子点的核酸传感器及其制备方法和检测方法 |
| CN101519695A (zh) * | 2009-02-19 | 2009-09-02 | 中国人民解放军第三军医大学第一附属医院 | 多靶标量子点标记核酸芯片及其制备方法和检测方法 |
| CN101538615A (zh) * | 2009-04-28 | 2009-09-23 | 哈尔滨医科大学 | 用于检测样本中mircoRNAs含量的核苷酸序列及检测方法 |
| CN101812529A (zh) * | 2010-04-23 | 2010-08-25 | 中国科学院上海微系统与信息技术研究所 | 纳米复合探针及其用于基因芯片膜转印的检测方法 |
| CN103773756A (zh) * | 2013-10-18 | 2014-05-07 | 南京农业大学 | 一种特异性纳米金dna探针的制备方法 |
-
2016
- 2016-06-20 CN CN201610447720.1A patent/CN106119344B/zh active Active
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1435493A (zh) * | 2003-03-05 | 2003-08-13 | 东南大学 | 固相化核酸检测探针及其制备方法 |
| CN101519696A (zh) * | 2009-02-19 | 2009-09-02 | 中国人民解放军第三军医大学第一附属医院 | 基于量子点的核酸传感器及其制备方法和检测方法 |
| CN101519695A (zh) * | 2009-02-19 | 2009-09-02 | 中国人民解放军第三军医大学第一附属医院 | 多靶标量子点标记核酸芯片及其制备方法和检测方法 |
| CN101538615A (zh) * | 2009-04-28 | 2009-09-23 | 哈尔滨医科大学 | 用于检测样本中mircoRNAs含量的核苷酸序列及检测方法 |
| CN101812529A (zh) * | 2010-04-23 | 2010-08-25 | 中国科学院上海微系统与信息技术研究所 | 纳米复合探针及其用于基因芯片膜转印的检测方法 |
| CN103773756A (zh) * | 2013-10-18 | 2014-05-07 | 南京农业大学 | 一种特异性纳米金dna探针的制备方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Nano-flares: Probes for Transfection and mRNA Detection in Living Cells;Dwight S. Seferos等;《J Am Chem Soc.》;20071219;第129卷(第50期);第2页倒数第2段，图1 * |
| Nanoparticle Probes for the Detection of Cancer Biomarkers, Cells, and Tissues by Fluorescence;Alyssa B. Chinen等;《Chemical Reviews》;20150827;第115卷;10530-10574 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN106119344A (zh) | 2016-11-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Wu et al. | A three-dimensional DNA walking machine for the ultrasensitive dual-modal detection of miRNA using a fluorometer and personal glucose meter | |
| CN104764782B (zh) | 一种用于检测miRNA‑20a的硼掺杂石墨烯量子点电化学发光传感器的制备及其应用 | |
| Wang et al. | Elaborately designed diblock nanoprobes for simultaneous multicolor detection of microRNAs | |
| CN107603592B (zh) | 一种磁性荧光纳米材料的制备方法及其荧光检测方法 | |
| CN110129416B (zh) | DNA walker信号放大构建MnO2-UCNPs荧光共振能量转移分析方法 | |
| Chang et al. | Cobalt oxyhydroxide nanoflake based fluorescence sensing platform for label-free detection of DNA | |
| CN106119344B (zh) | 一种结合荧光强度和荧光偏振检测dna的纳米探针 | |
| Zhao et al. | Fluorescent materials with aggregation-induced emission characteristics for array-based sensing assay | |
| Gao et al. | A fluorescence assay for microRNA let-7a by a double-stranded DNA modified gold nanoparticle nanoprobe combined with graphene oxide | |
| CN109844514B (zh) | 非编码rna的电化学传感器的制备方法及其应用 | |
| CN110628874B (zh) | 非诊断目的基于poly(A)加尾及生物循环发光技术超灵敏检测miRNA的方法 | |
| CN107287291A (zh) | 一种基于g‑C3N4与CdTe/CdS量子点相互作用的双标记核酸检测方法 | |
| CN104726603B (zh) | 一种基于石墨烯量子点的分子信标传感器及其制备与应用 | |
| CN113322305B (zh) | 一种基于金纳米团簇/MnO2纳米花的电化学发光传感器的制备及应用 | |
| CN107462709A (zh) | 一种双信号氮包氧化石墨烯量子点适配体传感器制备方法 | |
| Kong et al. | Ultra‐Fast Single‐Nucleotide‐Variation Detection Enabled by Argonaute‐Mediated Transistor Platform | |
| CN109444098A (zh) | 一种基于循环扩增技术和羧基碳量子点的荧光生物传感器及其制法和应用 | |
| Feng et al. | Construction of aptasensors for sensitive detection of 8-OH-dG based on a diffusion mediated electrochemiluminescence quenching effect | |
| CN105886620A (zh) | 用于活细胞内多种mRNA含量实时并行检测的纳米探针 | |
| CN115266877A (zh) | 一种基于g-C3N4纳米片的电化学发光传感器及检测病毒基因应用 | |
| Wu et al. | programmably engineered FRET-nanoflare for ratiometric live–cell ATP imaging with anti-interference capability | |
| CN112553379B (zh) | 基于液相芯片检测呼吸道传染病病毒的方法及试剂盒 | |
| Pavagada et al. | Platforms for bioorthogonal oligonucleotide-templated reactions: translating concepts into devices | |
| CN111965148A (zh) | 一种基于硅纳米粒子荧光传感的microRNA检测方法及其应用 | |
| CN114606294B (zh) | 一种核酸检测的曲线建立方法、检测方法及其试剂盒 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |