CN106102747A

CN106102747A - 释放no的硝基氧基‑色烯结合物

Info

Publication number: CN106102747A
Application number: CN201580012500.XA
Authority: CN
Inventors: 约翰·J·塔利; 爱得华多·J·马丁内斯
Original assignee: China's Pharmaceutical Co
Current assignee: China's Pharmaceutical Co
Priority date: 2014-01-14
Filing date: 2015-01-14
Publication date: 2016-11-09
Also published as: EP3094333A4; MX369245B; BR112016016386A2; IL246794B; AU2015206528A1; WO2015109013A1; CA2936952A1; MX2016009222A; EP3094333A1; CA2936952C; IL246794A0; WO2015109011A1; EP3094333B1; ES2836374T3; AU2015206528B2; US10266511B2; BR112016016386B1; US20160340330A1

Abstract

本发明提供了释放NO的硝基氧基‑亚烷基‑连接的色烯结合物，其具有式(I)的结构：其中Z、R¹、R²、R³、R⁴、X和L如详细说明书中所定义；提供了包含至少一种式(I)的化合物的药物组合物；以及提供了使用式(I)的化合物愈合伤口，预防和治疗恶性肿瘤，以及治疗光化性角化病、囊性纤维化和痤疮的可用方法。

Description

释放NO的硝基氧基-色烯结合物

相关申请的交叉引用

本申请要求于2014年1月14日提交的美国临时申请第61/927,344号的权益。上述申请的全部公开内容通过引用并入本文。

领域

本发明总体上涉及释放NO的色烯结合物化合物、包含所述化合物的药物组合物、可用于通过施用治疗有效量的所述化合物而治疗个体的方法，以及制备所述化合物的方法。更具体地，本发明涉及一类释放NO的硝基氧基-色烯胃保护性化合物、其药物组合物，以及可用于愈合伤口、预防并治疗恶性肿瘤和治疗光化性角化病、囊性纤维化和痤疮的方法。

背景技术

尽管已有几十年的努力，恶性肿瘤仍然是治疗学发展中的特别疑难的疾病。根据癌症预防联盟(伊利诺伊大学)，在过去三十年，甚至在人口老龄化调整之后，恶性肿瘤发病率已经增加了24％。显著地，尽管在此期间有显著的进步，总的五年存活率实际上保持不变(大约50％取决于恶性肿瘤)。因此，需要新的药物以开发更有效地拯救生命的恶性肿瘤治疗方法。

塞来昔布，选择性COX-2抑制剂，是世界上最成功的药物之一，其为数百万患者减轻疼痛和炎症。此外，已经在诸如结肠癌、乳腺癌、肺癌、前列腺癌和胰腺癌的几类人类恶性肿瘤中发现了COX-2过表达，且COX-2过表达似乎控制许多细胞过程。COX-2在肿瘤、细胞凋亡和血管生成中起作用，因此，其代表着用于开发预防和/或治疗人类恶性肿瘤的新药的极好的药物靶标。目前，塞来昔布被批准限制性用于家族性腺瘤性息肉病(FAP)中息肉的减少。

使用塞来昔布的腺瘤预防(APC)试验证实了塞来昔布在预防散发性结直肠腺瘤中的人类功效。然而，该试验也显示抗癌功效所需的塞来昔布的提高的剂量伴随而来的是不利的心血管(CV)事件的同时增加(Cancer Prev.Res.2,310-321(2009))。

开发更有效的或更具选择性的COX-2抑制剂并没有改善CV安全性；这一不利因素被认为是基于机理的作用。这在通过的VIGOR试验中得到证实，是一种极其有效且具有高选择性的COX-2抑制剂，其因关于伴随长期、高剂量使用而来的心脏病发作和中风的增加的风险的CV问题而在2004年退出市场。这些事实已经破坏了新型COX-2抑制剂的开发并且减缓了将它们的效用扩展至其他疾病适应症如恶性肿瘤的研究。

色烯昔布类代表能在炎症和恶性肿瘤中实现未满足的医疗需求的一类昔布。色烯昔布类含有羧酸酯部分并且在昔布类分子中独特地不结合于COX-2活性位点的疏水结合域中。在炎症和疼痛的标准鼠模型中，所选的色烯衍生物具有与年久的二芳基杂环昔布(例如，塞来昔布、伐地考昔、罗非昔布和依托昔布)相当的效力、功效和选择性(Bioorg.Med.Chem.Lett.20(23):7155-7158(2010)；Bioorg.Med.Chem.Lett.20(23):7159-7163(2010)；Bioorg.Med.Chem.Lett.20(23):7164-716(2010))。已证实一种苯并吡喃衍生物在减轻急性牙疼痛中是有效的(Clin.Pharmacol.Ther.83(6):857-866(2008))。

一氧化氮(NO)是重要的内源性信号分子和血管扩张剂。NO由NO合酶(NOS)从L-精氨酸合成，所述NO合酶(NOS)以三种不同的亚型存在，即，组成型表达的内皮(eNOS)和神经元(nNOS)型，和主要诱导型(iNOS)。已显示精氨酸施用在有正常肾功能或肾功能不足的原发性高血压患者中降低了血压和肾血管阻力(Am.J.Hypertens.12,8-15(1999))。也已显示NO不足促进塞来昔布和其他COX抑制剂的血管副作用(Blood 108,4059-4062(2006))。

NO在恶性肿瘤中的作用是复杂的；然而，使用NSAID的释放NO的化合物的药理学证据已经显示出在细胞培养和动物恶性肿瘤模型中增加的抗肿瘤功效。预期NO的不同分子机理将同时提高塞来昔布的抗癌功效，并通过预防与COX-2抑制相关的血压的增加而改善CV安全性，同时维持优于NSAID的胃保留性。

NO递送的不同分子机制是众所周知的。例如，据报道供给一氧化氮的NSAID(NO-舒林酸、NO-布洛芬、NO-吲哚美辛和NO-阿司匹林)抑制各种培养的人类恶性肿瘤细胞的生长，提供了不依赖于组织类型的效果的证据(J.Pharmacol.Exp.Ther.303,1273-1282(2002))。

在另一实例中，据报道供给一氧化氮的阿司匹林在仓鼠肿瘤模型中预防胰腺癌(Cancer Res.66,4503-4511(2006))。

已知存在环氧合酶(COX)的两种亚型，存在于几乎所有组织中的组成型(COX-1)和响应于炎症刺激而上调的诱导型(COX-2)。COX-2的发现导致了作为抗炎药物(昔布类)的选择性COX-2抑制剂的发展，所述选择性COX-2抑制剂显示几乎没有被认为与COX-1的抑制相关的抗血小板活性和胃肠道溃疡。

NSAID是对疼痛、发烧和炎症的最广泛使用的治疗之一，且长期以来已知其可以降低恶性肿瘤在多个器官位点的风险。在医学界，阿司匹林在治疗和预防恶性肿瘤中的使用具有广泛的支持；然而，定期服用阿司匹林的风险也是公认的且风险-效益比不足以推荐阿司匹林治疗用于恶性肿瘤预防。随着昔布类的出现，研究已经集中在作为用于治疗和预防某些恶性肿瘤的靶标的COX-2上。来自上述APC试验的令人信服的数据证实塞来昔布可用于在高风险结肠直肠癌患者中预防散发性结直肠腺瘤。

肺癌是美国恶性肿瘤相关死亡的主要原因，且肺癌导致比乳腺癌、前列腺癌和结肠癌合并在一起还多的死亡。目前的研究表明COX-2和表皮生长因子受体(EGFR)是非小细胞肺癌(NSCLC)中的重要介质。一项研究证明了通过使用吉非替尼和塞来昔布阻塞EGFR和COX-2路径两者而在减缓肿瘤发展上的强的协同效应(Zhang,X,Clin.Cancer Res.11,6261-6269(2005))。

在人类NSCLC患者中，埃罗替尼(酪氨酸激酶抑制剂)和塞来昔布的组合显示出高的响应率和明显的临床益处(Reckamp,K.L,Clin.Cancer Res.12,3381-3388(2006))。NSCLC目前代表COX-2抑制恶性肿瘤疗法的优选适应症之一(Brown,J.R.,Clin.CancerRes.10,4266s-4269s(2004)；和Gadgeel,S.M.,Cancer110,2775-2784(2007))。

COX-2生物学的关键特征是单凭其能力就导致在许多转基因老鼠模型中的恶性肿瘤形成。COX-2衍生的PGE2在肿瘤生长中起显著作用且是许多人类恶性肿瘤中的最丰富的前列腺素。通过COX-2的花生四烯酸的代谢导致结合于肿瘤抑制基因p53的几种前列腺素(PGs)的形成，预防p53介导的细胞凋亡。COX-2衍生的PGE2促进上皮细胞向间质细胞的转化并因此增加对肺癌中EGFR酪氨酸激酶抑制剂的抗性(Krysan,K.,J.Thorac.Oncol.3,107-110(2008))。

在美国，结肠直肠癌(CRC)是恶性肿瘤相关死亡的第二大原因。结肠直肠癌进展和转移通过经前列腺素内过氧化物合酶2(PTGS2)和上皮细胞生长因子(EGF)信号传导路径(Wang,D.,Cancers3,3894-3908(2011))的异常信号传导发生。COX-2过表达有助于PTGS2信号传导并因此COX-2抑制剂可以为结直肠肿瘤提供成功的治疗方式(Eberhart,C.E.,Gastroenterology107,1183-1188(1994))。

一氧化氮显示了许多重要的药理作用，包括血管舒张vascular relaxation(血管舒张vasodilatation)以及血小板聚集和粘附的抑制。NO合成的抑制导致全身血压的增加。NO也通过抑制血管平滑肌细胞增殖以及预防低密度脂蛋白氧化和巨噬细胞活化而预防动脉粥样硬化形成。血管NO生成在控制血压中是重要的，且越来越多的证据表明NO信号传导在抵抗包括高血压、心肌梗塞和中风在内的几种CV疾病的发作和发展中是关键因素。NO可用于抵抗与COX-2抑制相关的CV不利因素。

起初生产释放NO的COX抑制剂是为了改善胃肠的(GI)耐受性(Inflammopharmacology 11(4),415-22(2003))。萘普西诺是NSAID萘普生的释放NO的前药。在慢性大鼠研究中，与单独的萘普生相比，萘普西诺显示出显著改善的GI耐受性(LifeSciences 62,235-240(1998))。在另一实例中，与NSAID布洛芬共同给药的L-精氨酸显示出对胃粘膜抵抗布洛芬诱发的胃粘膜损伤的保护作用(Free Radic.Res.38(9),903-11(2004))。

NO调节转录因子NF-κB的活性，这不仅代表了炎症控制的潜在的机制，还代表了凋亡机制的调控。NO促进细胞凋亡且可以逆转肿瘤细胞对化学治疗剂的耐药性。使用释放NO的NSAID的研究已经证实NO在细胞培养中有助于抗癌活性且在啮齿类恶性肿瘤模型中提高体内功效。例如，据报道，在结肠癌和膀胱癌的啮齿类模型中一氧化氮-萘普生是抵抗致癌作用的有效药剂(Cancer Prev.Res.2,951-956(2009))。

US 2005/0014729中已经报道了可用于治疗包括痤疮和炎症在内的皮肤病症的色烯。其中所描述的用于上述用途的化合物包含以下结构的色烯：

US 2005/0113409中报道了与可用于治疗炎症并减少与长期使用COX-2抑制剂相关的不良心血管事件和/或溃疡事件的色烯非共价键结合的一氧化氮释放剂，其包括以下结构的(S)-6-氯-7-(1,1-二甲基乙基)-2-(三氟甲基)-2H-1-苯并吡喃-3-羧酸：

WO 2001/045703中已经报道了可用于治疗炎症和减少与长期使用COX-2抑制剂相关的不良心血管事件和/或溃疡事件的释放一氧化氮的色烯前药，其包括以下结构的用硝基氧基烷基取代的色烯：

WO 2006/040676中报道了可用于治疗炎症、恶性肿瘤并减少与长期使用COX-2抑制剂相关的不良心血管事件和/或溃疡事件的释放一氧化氮的色烯前药，其包括以下结构的用硝基氧基烷基取代的色烯：

在美国专利7,932,294中报道了可用于治疗炎症和减少与高剂量的抗炎药物相关的不良心血管事件的释放一氧化氮的前药。其中所描述的化合物包括用硝基氧基-亚乙基-二硫-亚乙基氧基-羰基基团取代于磺酰胺的氮上的塞来昔布，产生以下结构(1)：

EP 01336602中报道了可用于治疗炎性疾病、缺血性疾病、退化性疾病和增殖性疾病的硝酸酯前药。其中所描述的化合物包括用硝基氧基-亚烷基-羰基或羧基(二硝基氧基)亚乙基-羰基基团取代于磺酰胺的氮上的塞来昔布，分别产生以下结构(2*)和(3)：

*注：美国专利7,776,902和WO 2004/000781中也报道了上述结构(2*)。

WO 2004/037798中报道了可用于治疗COX-2介导的疾病和恶性肿瘤的释放一氧化氮的化合物。其中所描述的化合物包括在磺酸胺的氮处用硝基氧基-亚烷基-羰基或硝基氧基-亚丁基-O-羰基取代的塞来昔布，分别产生以下结构(4)和(5)：

发明简述

与用于现有的治疗炎症、疼痛和恶性肿瘤的药品相比，基于色烯的昔布类药物具有许多优点。本发明的分子具有肾保留、对胃肠道更安全的潜力，并且由于其固有的且独特的结构性质、药理学性质和理化性质而不会表现出昔布类诱发的高血压。

本文所描述的是一族释放NO的色烯结合物，其向患有诸如恶性肿瘤、光化性角化病、囊性纤维化或痤疮的疾病适应症的个体提供治疗益处，或向个体提供伤口愈合益处。此类释放NO的色烯结合物可以减少恶性肿瘤治疗的胃糜烂、改善CV安全性、允许更高剂量的恶性肿瘤治疗化合物、提高恶性肿瘤治疗功效、和/或维持优于NSAID的胃保留性。

在一个实施方案中，提供了式(I)的化合物：

及其药物可接受的盐，其中Z、R¹、R²、R³、R⁴、X和L如在详细描述中所定义的。本发明的化合物可以以互变异构体、几何异构体或立体异构体形式存在。本发明还涵盖了式(I)的化合物的酯、代谢物、肟、前药、鎓、水合物、溶剂化物和N-氧化物形式。本发明认为所有此类化合物，包括但不限于顺式和反式几何异构体(Z-和E-几何异构体)、R-和S-对映体、非对映体、右旋异构体、左旋异构体、阻转异构体、差向异构体、构象异构体、旋转异构体、异构体的混合物以及其外消旋体，落入本发明的范围内。

详细描述

A.化合物

本发明的一个实施方案是式(I)的化合物或药物可接受的盐，或式(I)的化合物或盐的溶剂化物：

其中Z选自CF₃、OCF₃和C₂F₅；R¹、R²、R³和R⁴各自独立地选自H、烷基、芳烷基、环烷基、环烯基、卤素、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烷硫基、卤代烷硫基、五氟硫烷基、羟基烷基、三烷基甲硅烷基、炔基和烯基；–X–选自O、NH、S、 –L–为C_1-8亚烷基，其中至少一个–CH₂–基团任选地被独立地选自CH(R⁶)和C(R⁶)₂的基团替代，或–L–选自CH₂CH₂OCH₂CH₂、CH₂CH₂SCH₂CH₂、CH₂CH₂S-SCH₂CH₂、CH₂CH₂N(R⁷)CH₂CH₂、CH₂CH₂N(R⁷)CH₂、CH₂N(R⁷)CH₂CH₂、CH₂OCH₂CH₂、CH₂SCH₂CH₂、CH₂S-SCH₂CH₂和R⁵选自H、烷基、环烷基、环烯基、芳基、芳烷基和杂环基；R⁶独立地选自烷基、环烷基、环烯基、芳基、芳烷基、杂环基、羧基、羧基亚烷基和硝基氧基C_1-3亚烷基，条件是当–X–为O或NH且–L–为C_1-6亚烷基时，至少一个–CH₂–基团必须被独立地选自CH(R⁶)和C(R⁶)₂的基团替代；以及R⁷选自H、烷基、环烷基、环烯基、芳基、芳烷基、杂环基、羧基、羧基亚烷基和酰基。

在另一族式(I)的化合物中，R¹选自H、烷基和卤素；R²选自烷基、卤素、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烷硫基、卤代烷硫基和五氟硫烷基；R³选自H、烷基、环烷基、卤素、卤代烷基、羟基烷基和三烷基甲硅烷基；R⁴选自H、烷基、卤素、炔基和烯基；–X–选自O、NH、S、R⁵选自H、烷基和环烷基；以及R⁷选自H、烷基、环烷基、芳基、芳烷基、杂环基和酰基。

在本发明的另一实施方案中是式(II)的化合物或药物可接受的盐，或式(II)的化合物或盐的溶剂化物：

其中：R¹选自H、甲基、Cl和F；R²选自Cl、Br、甲基、三氟甲氧基、五氟硫烷基、OCH₃、OCH₂CH₃、OCF₂H、SCH₃、SCH₂CH₃、SCF₃、SCF₂H、CF₃和CF₂CF₃；R³选自H、甲基、叔丁基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、CH(CH₃)CH₃CH₂、CH₂CH(CH₃)₂、C(CH₃)₂CH₂OH、Cl、F、Br、CF₃和Si(CH₃)₃；R⁴选自H、Cl、甲基、乙基、C≡CH、CH＝CH₂和Br；–L–为C_1-6亚烷基，其中至少一个–CH₂–基团任选地被独立地选自CH(R⁶)和C(R⁶)₂的基团替代，或–L–选自CH₂CH₂OCH₂CH₂、CH₂CH₂SCH₂CH₂和CH₂CH₂N(R⁷)CH₂CH₂；R⁶独立地选自烷基、环烷基、芳基、芳烷基、杂环基、羧基、羧基亚烷基和硝基氧基C_1-3亚烷基，条件是当–L–为C_1-6亚烷基时，至少一个–CH₂–基团必须被独立地选自CH(R⁶)和C(R⁶)₂的基团替代；以及R⁷选自H、烷基、环烷基和酰基。

在另一族式(II)的化合物中，R¹为H或甲基；R²选自Cl、Br、甲基、三氟甲氧基和五氟硫烷基；R³选自H、甲基和叔丁基；R⁴选自H、Cl、甲基和乙基；且–L–为CH₂CH₂OCH₂CH₂。非限制性的实例包括：

本发明还涉及化合物的亚类，包括化合物的药物可接受的盐，其中化合物具有式(III)的结构：

其中：R¹选自H、甲基、Cl和F；R²选自Cl、Br、甲基、三氟甲氧基、五氟硫烷基、OCH₃、OCH₂CH₃、OCF₂H、SCH₃、SCH₂CH₃、SCF₃、SCF₂H、CF₃和CF₂CF₃；R³选自H、甲基、叔丁基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、CH(CH₃)CH₃CH₂、CH₂CH(CH₃)₂、C(CH₃)₂CH₂OH、Cl、F、Br、CF₃和Si(CH₃)₃；R⁴选自H、Cl、甲基、乙基、C≡CH、CH＝CH₂和Br；–L–为C_1-6亚烷基，其中至少一个–CH₂–基团任选地被独立地选自CH(R⁶)和C(R⁶)₂的基团替代，或–L–选自CH₂CH₂OCH₂CH₂、CH₂CH₂SCH₂CH₂、CH₂CH₂S-SCH₂CH₂、CH₂CH₂N(R⁷)CH₂CH₂和R⁶独立地选自烷基、环烷基、芳基、芳烷基、杂环基、羧基、羧基亚烷基和硝基氧基C_1-3亚烷基，条件是当–L–为C_1-6亚烷基时，至少一个–CH₂–基团必须被独立地选自CH(R⁶)和C(R⁶)₂的基团替代；且R⁷选自H、烷基、环烷基和酰基。

在另一族式(III)的化合物中，R¹为H或甲基；R²选自Cl、Br、甲基、三氟甲氧基和五氟硫烷基；R³选自H、甲基和叔丁基；且R⁴选自H、Cl、甲基和乙基。

在另一族式(III)的化合物中，–L–为C_2-3亚烷基，其中至少一个–CH₂–基团被CH(R⁶)替代；且R⁶为硝基氧基甲基。非限制性的实例包括：

在另一族式(III)的化合物中，–L–为非限制性的实例包括：

在另一族式(III)的化合物中，–L–选自CH₂CH₂OCH₂CH₂、CH₂CH₂SCH₂CH₂、CH₂CH₂S-SCH₂CH₂和CH₂CH₂N(R⁷)CH₂CH₂。R⁷为甲基或乙酰基。非限制性的实例包括：

本发明还涉及化合物的亚类，包括化合物的药物可接受的盐，其中化合物具有式(IV)的结构：

其中R¹选自H、甲基、Cl和F；R²选自Cl、Br、甲基、三氟甲氧基、五氟硫烷基、OCH₃、OCH₂CH₃、OCF₂H、SCH₃、SCH₂CH₃、SCF₃、SCF₂H、CF₃和CF₂CF₃；R³选自H、甲基、叔丁基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、CH(CH₃)CH₃CH₂、CH₂CH(CH₃)₂、C(CH₃)₂CH₂OH、Cl、F、Br、CF₃和Si(CH₃)₃；R⁴选自H、Cl、甲基、乙基、C≡CH、CH＝CH₂和Br；–L–为C_1-6亚烷基，其中至少一个–CH₂–基团任选地被独立地选自CH(R⁶)和C(R⁶)₂的基团替代，或–L–选自CH₂OCH₂CH₂、CH₂SCH₂CH₂和CH₂N(R⁷)CH₂CH₂；R⁵选自H、烷基和环烷基；R⁶独立地选自烷基、环烷基、芳基、芳烷基、杂环基、羧基、羧基亚烷基和硝基氧基C_1-3亚烷基；且R⁷选自H、烷基、环烷基和酰基。

在另一族式(IV)的化合物中，R¹为H或甲基；R²选自Cl、Br、甲基、三氟甲氧基和五氟硫烷基；R³选自H、甲基和叔丁基；且R⁴选自H、Cl、甲基和乙基。

在另一族式(IV)的化合物中，–L–为C_1-3亚烷基，其中至少一个–CH₂–基团必须被独立地选自CH(R⁶)和C(R⁶)₂的基团替代；R⁵为H或甲基；且R⁶独立地选自H或甲基。非限制性的实例包括：

在另一族式(IV)的化合物中，–L–选自CH₂OCH₂CH₂、CH₂SCH₂CH₂和CH₂N(R⁷)CH₂CH₂；R⁵为H或甲基；且R⁷为甲基或乙酰基。非限制性的实例包括：

本发明还涉及化合物的亚类，包括化合物的药物可接受的盐，其中化合物具有式(V)的结构：

其中R¹选自H、甲基、Cl和F；R²选自Cl、Br、甲基、三氟甲氧基、五氟硫烷基、OCH₃、OCH₂CH₃、OCF₂H、SCH₃、SCH₂CH₃、SCF₃、SCF₂H、CF₃和CF₂CF₃；且R³选自H、甲基、叔丁基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、CH(CH₃)CH₃CH₂、CH₂CH(CH₃)₂、C(CH₃)₂CH₂OH、Cl、F、Br、CF₃和Si(CH₃)₃；R⁴选自H、Cl、甲基、乙基、C≡CH、CH＝CH₂和Br；–L–为C_1-6亚烷基，其中至少一个–CH₂–基团任选地被独立地选自CH(R⁶)和C(R⁶)₂的基团替代，或–L–选自CH₂CH₂OCH₂CH₂、CH₂CH₂SCH₂CH₂、CH₂CH₂S-SCH₂CH₂、CH₂CH₂N(R⁷)CH₂CH₂和R⁵选自H、烷基和环烷基；R⁶独立地选自烷基、环烷基、芳基、芳烷基、杂环基、羧基、羧基亚烷基和硝基氧基C_1-3亚烷基；且R⁷选自H、烷基、环烷基和酰基。

在另一族式(V)的化合物中，R¹为H或甲基；R²选自Cl、Br、甲基、三氟甲氧基和五氟硫烷基；R³选自H、甲基和叔丁基；且R⁴选自H、Cl、甲基和乙基。

在另一族式(V)的化合物中，–L–为C_2-4亚烷基，其中至少一个–CH₂–基团必须被独立地选自CH(R⁶)和C(R⁶)₂的基团替代；R⁵为H或甲基；且R⁶独立地选自H、甲基和硝基氧基甲基。非限制性的实例包括：

在另一族式(V)的化合物中，–L–为CH₂CH₂OCH₂CH₂或CH₂CH₂N(R⁷)CH₂CH₂；R⁵为H或甲基；且R⁷为甲基或乙酰基。非限制性的实例包括：

B.其他实施方案

在另一实施方案中，提供了包含本文结构式的化合物和药物可接受的载体的药物组合物。

在另一实施方案中，药物组合物进一步包含一种或多种额外的药物活性化合物。

在另一实施方案中，提供了治疗或预防疾病病况的方法，其包括向个体施用治疗有效量的本文结构式的化合物，其中待治疗或预防的病况包括例如，恶性肿瘤。进一步的非限制性的实例包括非小细胞肺癌、皮肤癌、肝癌、结肠直肠癌(包括转移性结肠直肠癌和FAP)、胶质母细胞瘤(和其他CNS相关恶性肿瘤)、鳞状细胞癌、膀胱癌、乳腺癌、胆道癌、子宫颈癌、前列腺癌、小细胞肺癌、卵巢癌、胰腺癌、胃肠癌和CNS恶性肿瘤。

在另一实施方案中，提供了用于愈合伤口的方法，其包括向个体施用治疗有效量的本文结构式的化合物。

在另一实施方案中，提供了治疗病况的方法，其包括向个体施用治疗有效量的本文结构式的化合物，其中待治疗的病况包括，例如，光化性角化病、囊性纤维化和/或痤疮。

在另一实施方案中，提供了治疗病况的方法，其包括向个体施用治疗有效量的本文结构式的化合物，其中待治疗的病况包括，例如，自身免疫性病症、炎性病症和/或自身炎性病症。

在另一实施方案中，提供了包括施用本文结构式的化合物和至少一种额外的药物活性化合物的组合的方法。

在另一实施方案中，提供了本文结构式的化合物用于制备治疗个体的疾病病况的药物的用途。

在另一实施方案中，提供了制备本文结构式的化合物的方法。

在另一实施方案中，提供了可用于制备本文结构式的化合物的中间体。

在另一实施方案中，提供了通过施用治疗有效量的本文结构式的化合物、通过激活个体中NO抗肿瘤机制和COX-2-抑制剂抗肿瘤机制两者而提高恶性肿瘤-治疗功效的方法。

在另一实施方案中，提供了通过施用治疗有效量的本文结构式的化合物治疗患有由COX-2过表达引起的疾病病况(包括但不限于恶性肿瘤)的个体的方法。

在另一实施方案中，提供了通过施用治疗有效量的本文结构式的化合物改善个体中CV安全性的方法。

在另一实施方案中，提供了通过施用高剂量的本文结构式的化合物治疗患有包括但不限于恶性肿瘤的疾病病况的个体的方法。

在另一实施方案中，提供了个体中胃保护的方法，其包括施用治疗有效量的本文结构式的化合物。

在另一实施方案中，提供了在个体中释放NO的方法，其包括施用治疗有效量的本文结构式的化合物。

在另一实施方案中，提供了个体中胃保护的方法，其包括施用治疗有效量的本文结构式的化合物，该化合物在个体中释放NO，优选通过缓释释放。

在另一实施方案中，提供了个体中胃保护的方法，其包括施用治疗有效量的本文结构式的化合物，该化合物在个体中释放NO，优选通过缓释释放，其中所述NO释放可能是由作用于本文结构式的化合物的硝基氧基部分的酶学机制引起的。

在另一实施方案中，提供了个体中胃保护的方法，其包括施用治疗有效量的本文结构式的化合物，该化合物在个体中释放NO，优选通过缓释释放，其中NO释放可能是由作用于本文结构式的化合物的硝基氧基部分的非酶学机制引起的。

在另一实施方案中，提供了治疗患有包括但不限于恶性肿瘤的疾病病况的个体的方法，其包括施用治疗有效量的本文结构式的化合物而不引起实质性不良心血管事件。

在另一实施方案中，提供了治疗患有包括但不限于恶性肿瘤的疾病病况的个体的方法，其包括施用治疗有效量的本文结构式的化合物，而不引起血压的实质性变化，同时维持胃保留性。

应认识到，本发明的化合物能以放射性标记的形式存在，即，所述化合物可以包含含有不同于通常在自然界中所发现的原子质量或质量数的原子质量或质量数的一个或多个原子(例如，同位素)。可选地，多个单一结构的分子可以包括至少一个以不同于在自然界中发现的同位素比的同位素比出现的原子。氢、碳、磷、氟、氯和碘的放射性同位素分别包括²H、³H、¹¹C、¹³C、¹⁴C、¹⁵N、³⁵S、¹⁸F、³⁶Cl、¹²⁵I、¹²⁴I和¹³¹I。包含那些放射性同位素和/或其他原子的其他放射性同位素的化合物在本发明的范围内。氚，即³H和碳-14，即，¹⁴C，放射性同位素由于其易于制备和可检测性而是特别优选的。包含同位素¹¹C、¹³N、¹⁵O、¹²⁴I和¹⁸F的化合物非常适合用于正电子发射断层扫描。通常可通过本领域技术人员熟知的方法制备本文的结构式的放射性标记的化合物及其前药。方便的是，可通过进行在实施例和方案中公开的流程通过用非放射性标记的试剂取代可容易获得的放射性标记的试剂制备此类放射性标记的化合物。

C.定义

术语“取代基”、“基团(radical)”、“基团(group)”、“部分(moiety)”和“片段(fragment)”可以互换使用。

如果取代基被描述为“任选取代的”，取代基可以是(1)未取代的或(2)在可取代的位置被取代。如果可取代的位置未被取代，则默认的取代基为H。

单数形式“一个/一种(a)”和“一个/一种(an)”可以包括复数参照对象，除非上下文另有明确规定。

取代基中的碳原子的数目可以通过前缀“C_A-B”表示，其中A是取代基中碳原子的最小数目且B是取代基中碳原子的最大数目。

术语“氢”表示单个-H原子(H)且可以与符号“H”互换地使用。可以将氢连接至例如，氧原子以形成“羟基”基团(即，-OH)或可以将两个氢基团连接至碳原子以形成“亚甲基”(-CH₂-)基团。

术语“羟基(羟基hydroxyl)”和“羟基(羟基hydroxy)”可互换地使用。

术语“酯”表示

术语“O-连接的酯”表示通过酯中的共价O连接至母骨架的酯。

术语“卤素”是指氟(-F)、氯(-Cl)、溴(-Br)或碘(-I)。

术语“烷基”表示包含1至约15个碳原子且小于或约等于氘的天然丰度的直链或支链的非环状烷基基团。在一些实施方案中，烷基是C₁-₁₀烷基、C_1-7烷基、C_1-6烷基或C_1-5烷基基团。烷基的实例包括但不限于：甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、戊-3-基(即，)等。

术语“烷基羰基”表示与羰基连接的烷基基团。

术语“羟基烷基”包括其中任何一个或多个烷基碳被以上所定义的羟基基团取代的基团，例如，单羟基烷基、二羟基烷基和三羟基烷基。羟基烷基的更具体的实例包括羟甲基、羟乙基和羟丙基。

羟基烷基可以被以下取代：例如，烷基、羟基烷基、羟基烷氧基、羟基烷氧基烷基、氨基、氨基烷基、芳基、芳烷基和杂环基。进一步的非限制性的实例包括被甲基、异丁基、苄基、异丙基、苄基和仲丁基取代的羟基烷基。

术语“羟基烷氧基”表示与烷氧基基团连接的羟基基团(例如，羟基-C-O-骨架)。

术语“羟基烷氧基烷基”表示与烷基基团连接的羟基烷氧基基团。非限制性的实例包括羟乙基-O-乙基和羟甲基-O-乙基。

羟基烷氧基烷基可以例如，被烷基、羟基烷基、羟基烷氧基、羟基烷氧基烷基、氨基、氨基烷基、芳基、芳烷基和杂环基取代。进一步的非限制性的实例包括被甲基、异丁基、苄基、异丙基和仲丁基取代的羟基烷氧基烷基。取代的羟基烷氧基烷基的更具体的非限制性的实例包括被甲基、异丁基、苄基、异丙基和仲丁基取代的羟乙基-O-乙基。

术语“卤代烷基”包括其中任何一个或多个烷基碳原子被如上所定义的卤素取代的烷基基团。例如，单卤代烷基、二卤代烷基和三卤代烷基。单卤代烷基基团，例如，可以在基团中含有溴原子、氯原子或氟原子。二卤代基团可以含有两个相同的卤素基团或不同卤素基团的组合。三卤代烷基基团可以含有三个相同的卤素基团或不同卤素基团的组合。卤代烷基的非限制性的实例包括氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、氯甲基、二氯甲基、三氯甲基、三氟乙基、五氟乙基、七氟丙基、二氟氯甲基、二氯氟甲基、二氟乙基、二氟丙基、二氯乙基、二氯丙基、碘甲基、二碘甲基和三碘甲基。

术语“亚烷基”表示包含2至约15个碳原子的二价直链或支链饱和碳链。术语“亚烷基(alkylene)”和“亚烷基(alkylenyl)”可以互换地使用。亚烷基基团的非限制性的实例包括亚甲基、亚乙基亚丙基亚丁基和亚戊基。

亚烷基基团中的一个或多个可取代的碳可以被以下替代：例如，–CH(Z⁶)-、-CH(Z⁶)-O-、-C(Z⁶)₂-、其中Z⁶、Z⁷和Z⁸可以，例如，独立地选自H、烷基、羟基、氨基烷基、酰基氨基、酰氨基、羧基、羧基烷基、羟基烷基、环烷基、芳基、杂环基(例如，杂芳基，更特别地是苯二甲酰亚氨基)、芳烷基、烷基-O-、烷基-S-和烷基-NH-，或Z⁷可以与Z⁸共同形成环；Z⁷可以是例如，H、烷基、羟基烷基、芳基、杂环基、烷基羰基、芳基羰基、杂环基羰基、羧基烷基羰基、烷氧基羰基烷基羰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基和杂芳基磺酰基。

取代的亚烷基的实例包括，亚乙基氧基亚丙基亚乙基氧基羰基亚乙基亚乙基氧基亚乙基氧基亚甲基亚乙基氧基亚丙基亚乙基羰基亚乙基硫代羰基和亚乙基亚硫酰基

在亚烷基基团中，一个或多个相邻的可取代的碳可以被基团替代。

当亚烷基中的一个或多个可取代的碳被取代，且所得的基团具有多种取向(例如，对比)时，单一取向表示包括两种取向。

术语“烷氧基”为RO-，其中R为如上所定义的烷基。烷氧基基团的非限制性的实例包括甲氧基、乙氧基和丙氧基。术语“烷氧基(alkyloxy)”和“烷氧基(alkoxy)”和“烷基-O-”可以互换地使用。

术语“卤代烷氧基”为RO-，其中R为卤素取代的烷基。卤代烷氧基基团的非限制性的实例包括三氟甲氧基和三溴甲氧基。

术语“烷氧基烷基”是指被烷基基团取代的烷氧基部分。烷氧基烷基基团的实例包括甲氧基甲基、甲氧基乙基、甲氧基丙基和乙氧基乙基。

术语“烷氧基羰基”是指被羰基取代的烷氧基基团。非限制性的实例包括甲氧基羰基和乙氧基羰基。

术语“烷氧基羰基烷基”是指被烷基取代的烷氧基羰基基团。

术语“烷氧基羰基烷基羰基”是指被羰基取代的烷氧基羰基烷基基团(例如，)。

术语“烯基”是指含有至少一个双键的不饱和、非环状烃基。此类烯基基团包含2至约15个碳原子。

术语“炔基”是指含有至少一个三键的不饱和、非环状烃基。此类炔基基团包含2至约15个碳原子。非限制性的实例为炔丙基。

术语“氰基”表示具有四分之三的共价键被单个氮原子共享的碳基团。

术语“甲硅烷基”表示基团。

术语“烷基甲硅烷基”表示被甲硅烷基基团取代的烷基。

术语“羰基”表示四分之二的共价键与单个氧原子共享的碳基团。

术语“烷基羰基”表示与羰基基团连接的烷基基团。

术语“卤代烷基羰基”表示与羰基基团连接的卤代烷基基团。

术语“羰基烷基”表示与烷基基团连接的羰基基团。

术语“羰基烷基羰基”表示与羰基基团连接的羰基烷基基团。

术语“羰氧基”表示二分之一的共价键与羰基基团共享的氧基团。

术语“烷基羰氧基”表示与羰氧基基团连接的烷基基团。

术语“烷基羰氧基烷基”表示与烷基基团连接的烷基羰氧基基团。

术语“烷基羰氧基烷基羰基”表示与羰基基团连接的烷基羰氧基烷基基团。

术语“硫代羰基”表示具有四分之二的共价键与单个硫原子共享的碳基团，即，

术语“脲基(ureido)”表示且可以与脲基(carbamido)互换地使用。

术语“酰基”是其中R可以是例如，H、烷基、硝基氧基亚烷基、芳基和芳烷基。酰基的更具体的实例包括甲酰基、乙酰基、苯甲酰基、硝基氧基甲基羰基和硝基氧基乙基羰基。

术语“酰基氨基”是其中R可以是例如，H、烷基、硝基氧基亚烷基、芳基和芳烷基。酰基氨基的更具体的实例是乙酰基氨基。

术语“羧基”包括与羰基基团中两个未共享的键之一连接的羟基基团。

术语“羧基氨基”包括与氨基基团连接的羧基基团。

术语“羧基氨基亚烷基”包括与亚烷基基团连接的羧基氨基基团。

术语“羧基酯基”包括通过酯基与母骨架连接的羧基基团。

术语“羧基亚烷基”包括与亚烷基基团连接的羧基基团(例如，)。羧基亚烷基的非限制性的实例包括羧基亚甲基和羧基亚乙基。术语“羧基亚烷基”和“羟基羰基亚烷基”可以互换地使用。

术语“羧基烷基羰基”表示与羰基基团连接的羧基烷基基团。

术语“硫代羧基”包括与硫代羰基基团中两个未共享的键之一连接的如上所定义的羟基基团。

术语“硫代羧基亚烷基”包括与亚烷基基团连接的如上所定义的硫代羧基基团。非限制性的实例包括硫代羧基亚甲基和硫代羧基亚乙基。

术语“酰氨基”包括通过羰基与母分子骨架连接的氨基基团(例如，其中Z¹和Z²可以是H、烷基或芳烷基，或者Z¹可以与Z²共同形成杂环基，其中至少一个杂原子是酰氨基氮)。术语“酰氨基”和“甲酰胺基”可以互换地使用。酰氨基基团的实例包括单烷基氨基羰基、二烷基氨基羰基。酰氨基基团的更具体的实例包括N-甲基氨基羰基和N,N-二甲基氨基羰基。

术语“氨基甲酸酯”为其中R可以是例如，H、烷基或酰基。

术语“环”包括可以包含一个或多个环杂原子(例如，杂芳基和杂环基)的任何芳香族环化碳基团或非芳香族环化碳基团(例如，分别地，芳基和环烷基)。

术语“环烷基”包括完全饱和的3至约15个碳原子的任何单环、双环或三环的环化碳基团。环烷基可以以稠合方式或悬垂(pendant)方式与芳基、环烷基或杂环基基团连接。

环烷基可以被烷基、烷氧基、羧基烷基、羟基烷基、氨基、酰基氨基、酰氨基、烷基氨基、硝基氧基亚烷基、硝基氧基、羰基、酰基、芳烷基、芳基、杂环基或环烷基取代。

术语“环烯基”包括部分饱和的3至约15个碳原子的稠合或悬垂的任何单环、双环或三环的环化碳基团，其包含一个或多个双键，但不是芳香族的。

环烯基可以被烷基、烷氧基、羧基亚烷基、羟基烷基、氨基、酰基氨基、酰氨基、烷基氨基、硝基氧基亚烷基、硝基氧基、羰基、酰基、芳烷基、芳基、杂环基、环烯基或环烷基取代。

术语“芳基”是指任何单环、双环或三环的环化碳基团，其中至少一个环是芳香环。芳香族基团可以以稠合或悬垂的方式与非芳香族的环烷基基团或杂环基基团连接。芳基基团的实例包括但不限于苯基和萘基。

术语“芳基羰基”表示与羰基基团连接的芳基基团。术语“芳酰基”和“芳基羰基”可以互换地使用。芳基羰基的实例包括苯甲酰基和甲苯酰基。

术语“卤代芳基羰基”表示与羰基基团连接的卤素基团。

术语“芳烷基”包括与烷基基团连接的芳基且可以与芳基烷基互换地使用。芳烷基的实例包括苄基、二苯甲基、三苯甲基、苯乙基和二苯乙基。术语“苄基”和“苯甲基”可以互换地使用。

术语“杂环基”是指具有5至约15个选自碳、氮、硫和氧的环成员的任何单环、双环或三环环系，其中至少一个环成员是杂原子。杂环基包括完全饱和的、部分饱和的和完全不饱和的基团(例如，杂芳基)。杂环基可以以悬垂的方式与另一个杂环基基团、芳基基团或环烷基基团稠合或连接。

杂环基包括同一环化的环系中的不同杂原子的组合。当氮是环成员时，杂环基可以通过环氮与母分子骨架连接。完全饱和的五元和六元杂环基的非限制性实例包括：吡咯烷基、咪唑烷基、哌啶基、哌嗪基、四氢呋喃基、吗啉基和噻唑烷基。部分饱和的杂环基的实例包括二氢噻吩基二氢吡喃基、二氢呋喃基和二氢噻唑基。

杂环基可以被例如，烷基、烷氧基、羧基烷基、羟基烷基、氨基、酰基氨基、酰氨基、烷基氨基、硝基氧基亚烷基、硝基氧基、羰基、酰基、芳烷基、芳基、杂环基或环烷基取代。非限制性的实例包括，被羟基烷基、烷氧基烷基、酰基、羰基或烷基氨基羰基取代的五元杂环基。更特别地，吡咯烷基可以被羟基烷基、烷氧基烷基、酰基、羰基或烷基氨基羰基取代。取代的和未取代的5元杂环基可以以悬垂的方式稠合或连接至额外的杂环基基团、芳基基团或环烷基基团。例如，吡咯烷基-2,5-二酮可以与苯基稠合得到异二氢氮茚基,1,3-二酮(也称“苯二甲酰亚氨基”)。

术语“杂环烷基”包括通过烷基基团与母分子骨架连接的杂环基基团(例如，杂环基-烷基-骨架)。

术语“烷基杂环基羰基”包括通过羰基基团与母分子骨架连接的烷基取代的杂环基基团(例如，烷基-杂环基-羰基-骨架)。

六元杂环基可以被例如，羟基烷基、烷氧基烷基、酰基、羰基或烷基氨基羰基取代。更具体地，哌啶基、哌嗪基和吗啉基可以被羟基烷基、烷氧基烷基、酰基、羰基或烷基氨基羰基取代。取代的和未取代的6元杂环基可以以悬垂的方式稠合或连接至额外的杂环基基团、芳基基团或环烷基基团。

术语“杂芳基”是指芳香族杂环基基团。杂芳基可以以悬垂的方式稠合或连接至另一个杂环基、芳基或环烷基基团。杂芳基包括同一环化基团中不同杂原子的组合。当氮是环成员时，杂芳基可以通过环氮与母分子骨架连接。杂芳基的非限制性实例包括吡啶基、噻吩基、呋喃基、嘧啶基、咪唑基、吡唑基、噻唑基、噻二唑基、异噻唑基、噁唑基、异噁唑基、吡咯基、哒嗪基、吡嗪基、喹啉基、异喹啉基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、吲哚基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、苯并咪唑基、异吲哚基、苯并三唑基嘌呤基和硫茚基。术语“杂芳基”也理解为包括任何含氮的杂芳基的N氧化物衍生物。

术语“杂芳氧基”包括通过氧原子与母分子骨架连接的杂芳基基团(例如，杂芳基-O-骨架)。

术语“杂芳基羰基”包括通过羰基基团与分子骨架连接的杂芳基基团(例如，杂芳基-羰基-骨架)。

术语“卤代杂芳基羰基”包括通过羰基基团与分子骨架连接的卤素取代的杂芳基基团(例如，卤代杂芳基-羰基-骨架)。

术语“烷基氨基”包括通过氨基基团与分子骨架连接的烷基基团(例如，烷基-NH-骨架)。烷基氨基的具体非限制性的实例包括N,N-二甲基氨基-骨架和N-甲基氨基-骨架。

术语“氨基烷基”包括通过烷基基团与分子骨架连接的氨基基团(例如，NH₂-烷基-骨架)。

术语“氨基芳基”包括氨基取代的芳基基团。

术语“氨基芳基羰基”包括通过羰基基团与分子骨架连接的氨基芳基基团(例如，NH₂-芳基-羰基-骨架)。

术语“氨基羰基”包括与羰基基团连接的氨基基团。

术语“芳基氨基羰基”包括通过氨基羰基基团与分子骨架连接的芳基基团。

术语“芳烷氧基”包括通过氧原子与母分子骨架连接的芳基烷基基团。术语“芳基烷氧基”和“芳烷氧基”可以互换地使用。

术语“芳烷氧基羰基”包括与羰基基团连接的芳烷氧基基团。

术语“杂芳烷氧基羰基”包括通过羰基基团与分子骨架连接的杂芳烷氧基基团。

术语“杂芳烷基羰基”包括通过羰基基团与分子骨架连接的杂芳烷基基团。

术语“芳氧基”是RO-，其中R是芳基。

术语“芳硫基”是RS-，其中R是芳基。

术语“烷硫基”是RS-，其中R是烷基(例如，烷基-S-骨架)。

术语“卤代烷硫基”是RS-，其中R是卤素取代的烷基(例如，卤代烷基-S-骨架)。

术语“巯基烷基”是HSR-，其中R是烷基(例如，HS-烷基-骨架)。

术语“芳氧基烷基”包括与烷基基团连接的芳氧基基团。

术语“磺酰基”是-SO₂-。

术语“烷基磺酰基”包括与磺酰基基团连接的烷基基团，其中烷基如上所定义。

术语“芳基磺酰基”包括与磺酰基基团连接的芳基基团。

术语“杂芳基磺酰基”包括与磺酰基基团连接的杂芳基基团。

术语“烷基磺酰基烷基”，包括与烷基基团连接的烷基磺酰基基团，其中烷基如上所定义。

术语“卤代烷基磺酰基”包括与磺酰基基团连接的卤代烷基基团，其中卤代烷基如上所定义。

术语“五氟硫烷基”表示被5个氟基团取代的硫部分(即，-SF₅)。

术语“磺酰胺”表示与氨基基团连接的磺酰基。例如：NH₂SO₂-和-NHSO₂-。磺酰胺可以与氨磺酰、亚磺酰氨基和氨基磺酰基互换地使用。

术语“硝基氧基”表示

术语“硝基氧基亚烷基”包括与亚烷基基团连接的硝基氧基基团(例如，)。

的结构显示等于例如，等于以及等于

术语“亚烷基氧基亚烷基”是其中亚烷基如上所定义。

术语“亚烷基氧基羰基”是其中亚烷基如上所定义。

术语“琥珀酰基”表示

术语“亚胺”表示包含结构>C＝N-的化合物。

术语“昔布类”通过选择性抑制前列腺素形成而引起较少胃肠副作用的一类非甾族化合物的抗炎药物中的任何一员。术语“昔布类”和“选择性COX-2抑制剂”可以互换地使用。

术语“药物可接受的”意指适于在药物制剂中使用，，其通常被认为用于此类用途是安全的，经国家政府或者州政府的管理机构官方批准用于此类用途，或在美国药典或其他通常公认的药典中列出用于动物且更特别地用于人。

术语“药物可接受的盐”是指可以提高期望的药理活性或可以提高化合物的稳定性的盐。药物可接受的盐的实例包括用无机酸或有机酸形成的酸加成盐、金属盐和胺盐。用无机酸形成的酸加成盐的实例包括使用盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、硝酸和磷酸的盐。用有机酸形成的酸加成盐的实例包括乙酸、丙酸、己酸、庚酸、环戊烷丙酸、乙醇酸、丙酮酸、乳酸、柠檬酸、丙二酸、琥珀酸、苹果酸、马来酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、邻-(4-羟基-苯甲酰基)-苯甲酸、肉桂酸、杏仁酸、甲磺酸、乙磺酸、1,2-乙二磺酸、2-羟基乙烷-磺酸、苯磺酸、对氯苯磺酸、2-萘磺酸、对甲苯磺酸、樟脑磺酸、4-甲基-二环[2.2.2]辛-2-烯基-羧酸、葡庚糖酸、4,4’-亚甲基双(3-羟基-2-萘甲酸)、3-苯基丙酸、三甲基乙酸、叔丁基乙酸、月桂基硫酸、葡萄糖酸、谷氨酸、羟基萘甲酸、水杨酸、硬脂酸和粘糠酸的盐。金属盐的实例包括含钠离子、钾离子、钙离子、镁离子、铝离子、铁离子、钡离子、铋离子、锂离子和锌离子的盐。胺盐的实例包括使用氨、槟榔碱、精氨酸、苯乙苄胺、苄星(benzathamine)、甜菜碱(betaine)、氯普鲁卡因(chloroprocaine)、胆碱、克立咪唑(clemizole)、胞嘧啶、丹醇、二乙醇胺、二乙胺、二乙基氨基乙醇、依泊胺(epolamine)、乙醇胺、亚乙基二胺、鸟嘌呤、咪唑、赖氨酸、葡甲胺、吗啉乙醇、烟酰胺、哌嗪、普鲁卡因(procaine)、吡哆醇(pyridoxine)、叔丁胺(特丁胺)、硫胺素、胸腺嘧啶、三乙醇胺、氨丁三醇和尿嘧啶的盐。

术语“治疗有效量”是指当施用于个体用于治疗疾病时，足以影响疾病的治疗的化合物的量。“治疗有效量”可随化合物、疾病及其严重程度、待治疗的个体的年龄、体重等而变化。

本发明的化合物可以以互变异构体、几何异构体或立体异构体形式存在。本发明还包括式I的化合物的酯、代谢物、肟、前药、鎓、水合物、溶剂化物和N氧化物。本发明设计所有此类化合物，包括顺式和反式几何异构体、R-和S-对映体、非对映体、右旋异构体、左旋异构体、异构体的混合物以及其外消旋体均落入本发明的范围内。

术语“溶剂化物”表示溶剂的分子或离子与本发明的化合物的分子或离子的分子或离子复合物。术语“溶剂化物”包括术语“水合物”。

术语“水合物”表示含有以分子形式结合的水的本发明的化合物。

所述的一些化合物包含一个或多个立体中心且是包括R形式、S形式以及存在的各个立体中心的R形式和S形式的混合物。

术语“释放NO”意指释放(releasing)、释放(liberating)或产生(generating)一氧化氮(NO)。

术语“患者”是指患有所述的任何病况的人类和非人类动物。非人类动物可以是伴侣动物，例如但不限于犬科物种和猫科物种。

术语“患者”和“个体”是可互换的。

术语“个体”是指用于本文所述方法的合适的个体，其包括哺乳动物个体。根据本发明的哺乳动物包括但不限于人、犬科动物、猫科动物、牛科动物、山羊、马科动物、绵羊、猪、啮齿动物、兔类动物、灵长类动物等且包括子宫内的哺乳动物。个体可以是任一性别且在发育的任何阶段。

术语“色烯”是指以下结构的具有与六元杂环吡喃环稠合的6碳芳香环的化合物：

术语“色烯”旨在包括在以上结构的任一点(用“R”基团表示)被任何取代基取代的化合物。术语“色烯”还可以是指包含以上色烯结构的基团的化合物。术语“苯并吡喃”旨在与术语“色烯”是可互换的。

术语“缀合物(conjugate)”是指通过两个或多个化学部分或化学实体的共价连接而形成的化合物。

合适的保护基团和缩略语列表：

乙酰基(Ac)

酰基缩醛

苯甲酰基(Bz)

苄基(Bn,Bnl)

苄基酯

氨基甲酸酯

苄氧羰基(Cbz)

二甲氧基三苯甲基、[双-(4-甲氧基苯基)苯基甲基](DMT)

二噻烷

乙氧基乙基醚(EE)

甲氧基甲基醚(MOM)

甲氧基三苯甲基[(4-甲氧基苯基)二苯基甲基]、(MMT)

甲醚

甲基(Me)

甲基酯

甲硫基甲基醚

原酸酯

噁唑啉

新戊酰(Piv)

苯二甲酰亚氨基

对甲氧基苄基羰基(Moz或MeOZ)

对甲氧基苄基(PMB)

炔丙基醇

甲硅烷基基团(例如，三甲基甲硅烷基(TMS)、叔丁基二甲基甲硅烷基(TBDMS)、三异丙基甲硅氧基甲基(TOM)和三异丙基甲硅烷基(TIPS))

甲硅烷基酯

叔丁基酯

叔丁氧基羰基(BOC或tBOC)

四氢吡喃基(THP)

甲苯磺酰基(Ts或Tos)

三甲基甲硅烷基乙氧基甲基(SEM)

三苯甲基(三苯基甲基，Tr)

β-甲氧基乙氧基甲基醚(MEM)

(4-硝基苯基)磺酰基或(4-硝基苯基)(二氧代)-λ(6)-磺酰基)(硝基苯磺酰基)

2-氰乙基

2-硝基苯基亚磺酰基(Nps)

3,4-二甲氧基苄基(DMPM)

9-芴基甲氧基羰基(FMOC)

缩略语列表：

ACN 乙腈

BLQ 定量水平以下

DCC 二环己基碳二亚胺

DCI 二环己基碳二亚胺

DCM 二氯甲烷(dichloromethane)或二氯甲烷(methylenechloride)

DIPEA 二异丙基乙胺

DMAP 4-二甲基氨基吡啶或N,N-二甲基氨基吡啶

DME 1,2-二甲氧基乙烷

DMF N,N-二甲基甲酰胺

DMSO 二甲基亚砜

eq. 当量/等同物

EtOAC 乙酸乙酯

EtOH 乙醇

Fmoc 芴基甲氧基碳酰氯

HPLC 高效液相色谱

h 小时

K₂CO₃ 碳酸钾

LC/MS 液相色谱质谱

LC/MS/MS 液相色谱串联质谱

MeOH 甲醇

MgSO₄ 硫酸镁

min. 分钟

mL 毫升

mmol 毫摩尔

Na₂S₂O₃ 硫代硫酸钠

Na₂SO₄ 硫酸钠

NaH 氢化钠

NaHCO₃ 碳酸氢钠

NaI 碘化钠

NaIO₄ 高碘酸钠

NaOCH₃ 甲醇钠

NBS N-溴代琥珀酰亚胺

NIS N-碘代琥珀酰亚胺

NMR 核磁共振

NO 一氧化氮

psi 英镑/平方英寸

PyBOP 苯并三唑-1-基-氧基-三-(二甲基氨基)-磷六氟磷酸盐

RuCl₃ 三氯化钌水合物

TEA 三乙胺

TFA 三氟乙酸

THF 四氢呋喃

TLC 薄层色谱

TSA 对甲苯磺酸

D.通用合成方案

可以使用通用合成方案及以下详述的实验流程中示出的方法制备本发明的化合物。这些通用合成方案和实验流程是为了说明的目的而提供的且不意图限制。用于制备本发明的化合物的起始材料是市售的或可以使用本领域已知的常规方法制备。

色烯酸和酰氯：在步骤1中，当Z＝CF₃时，根据文献(即，美国专利6,034,256)中所述的流程通过使水杨醛(由对应的酚制成)与4,4,4-三氟巴豆酸乙酯反应(方案1)制备色烯酸，或当Z＝CF₂CF₃时，通过使水杨醛(由对应的酚制成)与4,4,5,5,5-五氟丁-2-烯酸乙酯(CAS#[37759-78-7])反应制备色烯酸。可选地，在Z＝CF₃的情况下，根据ACSMed.Chem.Lett.2014,5,1162–1166中所述的流程通过使水杨醛与4,4,4-四氟巴豆醛和手性催化剂反应随后氧化而制备手性色烯酸(方案2)。在Z＝CF₂CF₃的情况下，通过类似的方法使用4,4,5,5,5-五氟戊-2-烯醛制备手性色烯酸，所述4,4,5,5,5-五氟戊-2-烯醛通过使用与制备下示4,4,4-四氟巴豆醛(INT-07)相同的流程由4,4,5,5,5-五氟戊-2-烯-1-醇制备。

方案1

方案2-步骤1

方案2-步骤2

Z为CF₃或CF₂CF₃；

R¹为H或甲基；

R²选自Cl、Br、甲基、三氟甲氧基和五氟硫烷基；

R³选自H、甲基和叔丁基；以及

R⁴选自H、Cl、甲基和乙基。

使用标准方法(例如，亚硫酰氯或草酰氯；参见以下方案3)将色烯酸转化为酰氯。

色烯酰胺和色烯酯(流程A)：使用催化量的N,N-二甲基氨基吡啶和叔胺碱(例如，三乙胺、二异丙基乙胺等)，将用硝酸酯官能化的胺类或醇类(例如1,3-二硝基丙三醇、单硝酸异山梨醇酯等)直接与色烯酰氯(方案3)在惰性溶剂(例如，二氯甲烷、四氢呋喃等)中反应。

方案3

Z为CF₃或CF₂CF₃；

R¹为H或甲基；

R²选自Cl、Br、甲基、三氟甲氧基和五氟硫烷基；

R³选自H、甲基和叔丁基；

R⁴选自H、Cl、甲基和乙基；

X选自O、NH、以及

-L-为C₁-C₈亚烷基，其中至少一个–CH₂–基团任选地被独立地选自CH(R⁶)和C(R⁶)₂的基团替代，或

-L-选自CH₂CH₂OCH₂CH₂、CH₂CH₂SCH₂CH₂、CH₂CH₂S-SCH₂CH₂、CH₂CH₂N(R⁷)CH₂CH₂、CH₂N(R⁷)CH₂CH₂、CH₂CH₂N(R⁷)CH₂、CH₂OCH₂CH₂、CH₂SCH₂CH₂和

R⁵为H或甲基；

R⁶选自甲基和硝基氧基C_1-3亚烷基，条件是当–X–为O或NH且–L–为C_1-6亚烷基时，至少一个–CH₂–基团必须被独立地选自CH(R⁶)和C(R⁶)₂的基团替代；以及

R⁷为甲基或酰基。

色烯酰胺(流程B)：在某些情况下，更高效的是首先产生醇官能化的酰胺并且随后将所述醇转化为硝酸酯(方案4)。在步骤1中，使用催化量的N,N-二甲基氨基吡啶和叔胺碱(例如，三乙胺、二异丙基乙胺等)使双官能的氨基醇直接与色烯酰氯在惰性溶剂中(例如，二氯甲烷、四氢呋喃等)反应以提供酰胺醇。在步骤2中，如在美国专利2,975,208中所述，在乙酸和乙酸酐中使用发烟硝酸直接将醇转化为硝酸酯，或通过两步法在二氯甲烷中使用四溴化碳和三苯基膦将醇转化为溴化物随后在乙腈中用硝酸银处理。

方案4

Z为CF₃或CF₂CF₃；

R¹为H或甲基；

R²选自Cl、Br、甲基、三氟甲氧基和五氟硫烷基；

R³选自H、甲基和叔丁基；

R⁴选自H、Cl、甲基和乙基；

R⁵为H或甲基；

R⁷为甲基或酰基。

色烯酯(流程C)：在某些情况下，更高效的是首先产生醇官能化的酯并且随后将醇转化为硝酸酯(方案5)。在步骤1中，使用酸催化作用(例如，甲苯磺酸、硫酸、甲磺酸等)使色烯酸和二醇(例如，乙二醇、1,3-丙二醇、1,4-丙二醇、2-(2-氨基乙氧基)乙醇、双(2-羟乙基)醚、2,2'-硫基二乙醇、2-羟乙基二硫化物等)的反应纯净地进行或在惰性溶剂(例如，二氯甲烷、氯仿等)中进行。在步骤2中，如在美国专利2,975,208中所述，在乙酸和乙酸酐中使用发烟硝酸直接将醇转化为硝酸酯，或通过两步法在二氯甲烷中使用四溴化碳和三苯基膦将醇转化为溴化物随后在乙腈中用硝酸银处理。

方案5

Z为CF₃或CF₂CF₃；

R¹为H或甲基；

R²选自Cl、Br、甲基、三氟甲氧基和五氟硫烷基；

R³选自H、甲基和叔丁基；

R⁴选自H、Cl、甲基和乙基；

R⁵为H或甲基；

R⁷为甲基或酰基。

色烯酯(流程D)：在某些情况下，更高效的是首先产生卤素官能化的酯随后将卤素转化为硝酸酯(方案6)。在步骤1中，使用催化量的N,N-二甲基氨基吡啶和叔胺碱(例如，三乙胺、二异丙基乙胺等)使色烯酰氯和卤代醇(例如，1,3-二溴-2-丙醇)在惰性溶剂(例如，二氯甲烷，四氢呋喃等)中反应。在步骤2，在乙腈中用硝酸银将醇直接转化为硝酸酯。

方案6

Z为CF₃或CF₂CF₃；

R¹为H或甲基；

R²选自Cl、Br、甲基、三氟甲氧基和五氟硫烷基；

R³选自H、甲基和叔丁基；

R⁴选自H、Cl、甲基和乙基；

R⁵为H或甲基；

R⁷为甲基或酰基。

卤代烷基色烯酯：通过如在Syn.Comm.,1984,14(9),857-864中所述的标准方法使用诸如氯甲基氯磺酸酯和氯乙基氯磺酸酯的试剂将色烯酸转化为卤代烷基酯(方案7)。

方案7

Z为CF₃或CF₂CF₃；

R¹为H或甲基；

R²选自Cl、Br、甲基、三氟甲氧基和五氟硫烷基；

R³选自H、甲基和叔丁基；

R⁴选自H、Cl、甲基和乙基；以及

R⁵为H或甲基。

色烯烷基二酯硝酸酯：文献(表11)中已知有许多羧酸硝酸酯，且使用叔胺碱(例如，三乙胺、二异丙基乙胺等)使其与卤代烷基色烯酯在极性溶剂(例如，DMSO、DMF、NMP等)中直接反应(方案8)。

方案8

Z为CF3或CF2CF3；

R¹为H或甲基；

R²选自Cl、Br、甲基、三氟甲氧基和五氟硫烷基；

R³选自H、甲基和叔丁基；

R⁴选自H、Cl、甲基和乙基；

R⁵为H或甲基；

R⁷为甲基或酰基。

色烯烷基碳酸酯硝酸酯：在步骤1中，通过使用叔胺碱(例如，三乙胺、二异丙基乙胺等)使醇官能化的硝酸酯(表14)与氯代烷基氯甲酸酯在惰性溶剂(例如，二氯甲烷、四氢呋喃等)中反应而将醇官能化的硝酸酯转化为卤代烷基碳酸酯硝酸酯。在步骤2中，使用叔胺碱(例如，三乙胺、二异丙基乙胺等)使色烯酸与卤代烷基碳酸酯硝酸酯(方案9)在极性溶剂(例如，DMSO、DMF、NMP等)中反应。

方案9

Z为CF₃或CF₂CF₃；

R¹为H或甲基；

R²选自Cl、Br、甲基、三氟甲氧基和五氟硫烷基；

R³选自H、甲基和叔丁基；

R⁴选自H、Cl、甲基和乙基；

R⁵为H或甲基；

R⁷为甲基或酰基。

色烯酸

6,8-二氯-2-(三氟甲基)-2H-色烯-3-羧酸(CA-01a)

步骤1：3,5-二氯-2-羟基苯甲醛(INT-01)

从酚经水杨醛制成色烯酸。将2,4-二氯酚(10.0g,61.3mmol)和六亚甲基四胺(17.2g,122.6mmol)溶解于80mL甲磺酸中并在100℃加热1.5h。将反应物用乙酸乙酯稀释，并将有机层用水、随后饱和碳酸氢钠洗涤，经硫酸镁干燥并蒸发。使用乙酸乙酯/己烷梯度通过色谱法纯化产物3,5-二氯-2-羟基苯甲醛(INT-01)以得到黄色油(7.5g,产率64％)。¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ11.39(s,1H),7.64(s,1H),7.52(s,1H)。LC t_r＝3.95min(C-18柱，5％至95％乙腈/水在1.7mL/min下历时6min，在254nm处在23℃下检测)。

步骤2：6,8-二氯-2-(三氟甲基)-2H-色烯-3-羧酸乙酯(INT-02)

将3,5-二氯-2-羟基苯甲醛(INT-01)(7.5g,39.3mmol)溶解于15mL的二甲基亚砜中。添加4,4,4-三氟巴豆酸乙酯(9.38mL,62.8mmol)和三乙胺(11.0mL,78.6mmol)，并加热至85℃保持三天。将反应物冷却，用水稀释，并用乙酸乙酯萃取。将有机层用3N盐酸溶液、饱和碳酸氢钠溶液和盐水洗涤，经硫酸镁干燥并蒸发以得到棕褐色固体INT-02(12.5g,产率93％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.66(s,1H),7.40(d,J＝2.4Hz,1H),7.16(d,J＝2.4Hz,1H),5.84(q,J＝6.6Hz,1H),4.43-4.40(m,2H),1.38(t,J＝7.1Hz,3H)。LC t_r＝5.20min(C-18柱，5％至95％乙腈/水在1.7mL/min下历时6min，在254nm处在23℃下检测)。ES(pos)MS m/z341(对C₁₃H₉Cl₂F₃O₃的M+H计算值要求341)。

步骤3：6,8-二氯-2-(三氟甲基)-2H-色烯-3-羧酸(CA-01a)

将INT-02(12.5g,36.6mmol)溶解于15mL甲醇和1.5mL水中。添加固体氢氧化钠(4.47g,111.8mmol)，并使反应在室温下搅拌过夜。用1N盐酸溶液将反应酸化并且将所得到的沉淀物过滤，用水和己烷洗涤，并干燥为棕褐色固体CA-01a(10.2g,产率89％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.66(s,1H),7.40(d,J＝2.4Hz,1H),7.16(d,J＝2.4Hz,1H),5.84(q,J＝6.6Hz,1H),4.43-4.40(m,2H),1.38(t,J＝7.1Hz,3H)。LC t_r＝4.33min(C-18柱，5％至95％乙腈/水在1.7mL/min下历时6min，在254nm处在23℃下检测)。ES(pos)MS m/z 313(对C₁₁H₅Cl₂F₃O₃的M+H计算值要求313)。

(S)-7-(叔丁基)-6-氯-2-(三氟甲基)-2H-色烯-3-羧酸(CA-11)

步骤1：3-叔丁基-4-氯苯酚(INT-03)

在二氯甲烷中将3-叔丁基苯酚(50.0g,333mmol)和氯化铁(162.6mg,1.0mmol)加热至60℃。逐滴添加磺酰氯(35.0mL,433mmol)并将该混合物在60℃加热过夜。将反应物蒸发并溶解在乙酸乙酯中。将有机层用水和盐水洗涤，经硫酸镁干燥并蒸发。直接使粗产物INT-03(68.4g,产率111％)进入下一步骤。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.21(d,J＝8.5Hz,1H),6.93(d,J＝3.0Hz,1H),6.63(dd,J＝8.5,3.0Hz,1H),4.79(s,1H),1.48(s,9H)。LC t_r＝4.18min(C-18柱，5％至95％乙腈/水在1.3mL/min下历时6min，在254nm处在23℃下检测)。

步骤2：4-叔丁基-5-氯-2-羟基苯甲醛(INT-04)

将INT-03(68.4g,370.4mmol)溶解于甲磺酸(200mL)中并将反应冷却至0℃。添加六亚甲基四胺(103.9g,740.8mmol)，随后分批加入甲磺酸(200mL)，保持放热反应在100℃以下。随后将反应在100℃下搅拌过夜，随后冷却至室温并倒入冷水中(3L)。将产物用乙酸乙酯萃取并将有机层用水、饱和碳酸氢钠和盐水洗涤，经硫酸镁干燥并蒸发以提供为黑色油的INT-04(58.8g,产率75％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ9.84(s,1H),7.53(s,1H),7.12(s,1H),1.51(s,9H)。LC t_r＝4.66min(C-18柱，5％至95％乙腈/水在1.3mL/min下历时6min，在254nm处在23℃下检测)。ES(pos)MS m/z 213(对C₁₁H₁₃ClO₂的M+H计算值要求213)。

步骤3：7-(叔丁基)-6-氯-2-(三氟甲基)-2H-色烯-3-羧酸乙酯(INT-05)

将INT-04(58.8g,276mmol)、4,4,4-三氟巴豆酸乙酯(45.4mL,304mmol)和碳酸钾(49.6g,359mmol)在DMSO(175mL)中加热至85℃。3h后，将反应物用水稀释并用乙酸乙酯萃取。将有机层用水和盐水洗涤，经硫酸镁干燥并蒸发以提供为黑色油的INT-05(62.8g,产率63％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.65(s,1H),7.22(s,1H),7.06(s,1H),5.71(q,J＝6.8Hz,1H),4.39-4.30(m,2H),1.49(s,9H),1.38(t,J＝7.1Hz,3H)。LC t_r＝5.76min(C-18柱，5％至95％乙腈/水在1.3mL/min下历时6min，在254nm处在23℃下)检测。ES(pos)MS m/z 363(对C₁₇H₁₈ClF₃O₃的M+H计算值要求363)。

步骤4：7-(叔丁基)-6-氯-2-(三氟甲基)-2H-色烯-3-羧酸(CA-11a)

将INT-05(62.8g,173mmol)溶解于甲醇(1.25L)中并加入在水(125mL)中的氢氧化钠(22.7g,568mmol)。将反应在室温下搅拌过夜。蒸发甲醇并将所得到的水层用二乙醚洗涤，用3N的盐酸水溶液酸化，随后用乙酸乙酯萃取。将有机层经硫酸镁干燥并蒸发至深橙色、油状固体。将该固体破碎并用最小量的二氯甲烷洗涤以去除有色杂质从而提供为米白色固体的CA-11a(34.5g,产率59％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.85(s,1H),7.60(s,1H),7.05(s,1H),5.95(q,J＝7.3Hz,1H),1.43(s,9H)。LC t_r＝4.87min(C-18柱，5％至95％乙腈/水在1.3mL/min下历时6min，在254nm处在23℃下检测)。ES(pos)MS m/z 335(对C₁₅H₁₄ClF₃O₃的M+H计算值要求335)。

步骤5：(S)-7-(叔丁基)-6-氯-2-(三氟甲基)-2H-色烯-3-羧酸(CA-11)

在Thar 350制备型SFC上使用ChiralPak AD柱进行制备型对映体分离(10μ，300×50mmI.D.；流动相A：CO₂及流动相B：异丙醇；梯度：B 25％；流动速率：200mL/min；背压：100bar；柱温：38℃；波长：220nm)。将样品以～45mg/mL溶解于甲醇中并以3-mL分量注入。化合物CA-11a(20.0g)经手性色谱以产出各个对映体。柱的初始峰为(R)-异构体(8.44g；手性HPLC：AD(正己烷/i-PrOH 9：1，λ＝254nm)，t_r＝4.28min，93.8％ee)，且柱的第二峰为(S)-异构体CA-11(8.16g；手性HPLC：AD(正己烷/i-PrOH 9：1，λ＝254nm)，t_r＝5.87min，90.4％ee)。

(S)-6-五氟硫烷基-2-(三氟甲基)-2H-色烯-3-羧酸(CA-08)

步骤1：2-羟基-5-(五氟硫烷基)苯甲醛(INT-06)

将五氟硫烷基苯酚(10.0mmol)和六亚甲基四胺(20.0mmol)溶解于甲磺酸(15mL)中并加热至100℃保持1.5h。将反应物用乙酸乙酯稀释并将有机层用水、饱和碳酸氢钠洗涤，经硫酸镁干燥并蒸发。将产物通过硅胶柱色谱法使用乙酸乙酯/己烷梯度进行纯化以得到INT-06。

步骤2：4,4,4-三氟丁-2-烯醛(INT-07)

将4,4,4-三氟丁-2-烯-1-醇(3.28g,26.0mmol)溶解于二氯甲烷(80mL)中。添加氯铬酸吡啶(5.61g,26.0mmol)并使反应在室温下搅拌过夜。将深红色反应混合物经硅藻土和脱色炭过滤。将包含约25mmol的INT-07在～80mL的二氯甲烷(0.31M)中的溶液的深棕色/绿色滤液直接用于下一步骤。

步骤3：(S)-6-(五氟硫烷基)-2-(三氟甲基)-2H-色烯-3-甲醛(INT-08)

向4,4,4-三氟丁-2-烯醛(INT-07；三氟巴豆醛)的二氯甲烷(～0.31M,～20mmol,66mL)溶液中添加INT-06(10.0mmol)、(S)-(-)-α,α-二苯基-2-吡咯烷甲醇三甲基甲硅烷基乙醚(2.0mmol)和2-硝基苯甲酸(2.0mmol)。将反应物在室温下搅拌过夜，浓缩，并通过硅胶柱色谱法(0-15％乙酸乙酯-己烷梯度)进行纯化以提供(INT-08)。

步骤4：(S)-6-五氟硫烷基-2-(三氟甲基)-2H-色烯-3-羧酸(CA-08)

将INT-08(5.0mmol)溶解于DMF(20mL)中并添加(单过硫酸盐)(7.10mmol)。将反应物在室温下搅拌48h，用水稀释，并用乙酸乙酯萃取。将乙酸乙酯层经无水硫酸镁干燥并在真空下浓缩。将粗产物通过硅胶柱色谱法进行纯化以产出(CA-08)。

(S)-6-五氟硫烷基-8-甲基-2-(三氟甲基)-2H-色烯-3-羧酸(CA-09)

步骤1：2-甲基-4-(五氟硫烷基)苯酚(INT-09)

将INT-06(20mmol)溶解于四氢呋喃(40mL)中并冷却至0℃。向该混合物中添加水(16mL)随后硼氢化钠(20mmol)并将反应温度升至室温并搅拌48h。将反应物用1N的盐酸水溶液稀释以调整pH值至6，并用二乙醚萃取。将有机层用盐水洗涤，经硫酸镁干燥并蒸发。将粗产物通过硅胶柱色谱法进行纯化(乙酸乙酯/己烷梯度)以获得INT-09。

步骤2：2-羟基-3-甲基-5-(五氟硫烷基)苯甲醛(INT-10)

将INT-09(10.0mmol)和六亚甲基四胺(20.0mmol)溶解于甲磺酸(15mL)中，并加热至100℃保持1.5h。将反应物用乙酸乙酯稀释并将有机层用水、饱和碳酸氢钠洗涤，经硫酸镁干燥并蒸发。将产物通过硅胶柱色谱法使用乙酸乙酯/己烷梯度进行纯化以得到INT-10。

步骤4和5：(S)-6-五氟硫烷基-8-甲基-2-(三氟甲基)-2H-色烯-3-羧酸(CA-09)。

使用与制备CA-08类似的流程，使INT-10与INT-07反应以得到相应的色烯醛，并且随后使用进行氧化提供CA-09。

(S)-6-五氟硫烷基-8-乙基-2-(三氟甲基)-2H-色烯-3-羧酸(CA-10)

步骤1：2-(1-羟乙基)-4-(五氟硫烷基)苯酚(INT-11)

将INT-06(20mmol)溶解于四氢呋喃(40mL)并将混合物冷却至0℃。向所述冷溶液中逐滴添加在二乙醚中的溴化甲基镁(3.0M；20mmol)。通过TLC监控反应，并且一旦完成，将该混合物倒入水中并用乙酸乙酯萃取。将有机层用饱和碳酸氢钠洗涤，经硫酸镁干燥并蒸发。将产物通过硅胶柱色谱法使用乙酸乙酯/己烷梯度进行纯化以得到INT-11。

步骤2：2-乙基-4-(五氟硫烷基)苯酚(INT-12)

将INT-11(15mmol)溶解于四氢呋喃(30mL)中并冷却至0℃。向该混合物中添加水(12mL)随后添加硼氢化钠(15mmol)并将反应温度升至室温并搅拌48h。将反应物用1N的盐酸水溶液稀释以调整pH值至6，并用二乙醚萃取。将有机层用盐水洗涤，经硫酸镁干燥并蒸发。将粗产物通过硅胶柱色谱法(乙酸乙酯/己烷梯度)进行纯化以获得INT-12。

步骤3：3-乙基-2-羟基-5-(五氟硫烷基)苯甲醛(INT-13)

将INT-12(10.0mmol)和六亚甲基四胺(20.0mmol)溶解于甲磺酸(15mL)中，并加热至100℃保持1.5h。将反应物用乙酸乙酯稀释并将有机层用水、饱和碳酸氢钠洗涤，经硫酸镁干燥并蒸发。将产物通过硅胶柱色谱法使用乙酸乙酯/己烷梯度进行纯化以得到INT-13。

步骤4和5：(S)-6-五氟硫烷基-8-乙基-2-(三氟甲基)-2H-色烯-3-羧酸(CA-10)

使用与制备CA-08类似的流程，使INT-13与INT-07反应以得到相应的色烯醛并且随后使用进行氧化提供CA-10。

使用与制备CA-01a和CA-11类似的流程，并使用美国专利6,034,256中所述的流程制备其他的色烯酸(表1)。

表1.色烯酸

色烯酰氯

6,8-二氯-2-(三氟甲基)-2H-色烯-3-碳酰氯(C-01)

将CA-01a(500mg,1.6mmol)溶解于二氯甲烷(5mL)中。添加亚硫酰氯(290μL,4.0mmol)和1滴DMF，并将反应物搅拌为悬浮液过夜。将反应物用乙酸乙酯稀释，并将有机层用饱和碳酸氢钠溶液和盐水洗涤，经硫酸镁干燥并蒸发。将所得到的油C-01a在未经进一步纯化下用于下一步骤(506mg,产率95％)。

7-(叔丁基)-6-氯-2-(三氟甲基)-2H-色烯-3-碳酰氯(C-11a)

将CA-11a(3.5g,10.46mmol)溶解于二氯甲烷(30mL)和DMF(1mL)中。逐滴添加亚硫酰氯(1.9mL,26.2mmol)并在室温下搅拌过夜。1h后，将反应物蒸发并用乙酸乙酯稀释。将有机层用饱和碳酸氢钠和盐水洗涤，经硫酸镁干燥并蒸发。将C-11a(2.48g,产率67％)分离为淡黄色固体。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.02(s,1H),7.35(s,1H),7.12(s,1H),5.71(q,J＝6.7Hz,1H),1.50(s,9H).LC t_r＝5.46min(C-18柱，5％至95％乙腈/水在1.7mL/min下历时6min，在254nm处在23℃下检测)。

(S)-7-(叔丁基)-6-氯-2-(三氟甲基)-2H-色烯-3-碳酰氯(C-11)

将CA-11(500mg,1.49mmol)溶解于二氯甲烷(4mL)和DMF(1mL)中。逐滴添加亚硫酰氯(271μl,3.73mmol)并将反应物在室温下搅拌。1h后，将反应物蒸发并用乙酸乙酯稀释。将有机层用饱和碳酸氢钠和盐水洗涤，经硫酸镁干燥并蒸发。将所得到的半固体C-11(513mg,产率97％)原样用于下一步骤。

使用与制备C-01a、C-11a和C-11类似的流程，并且通过用表1列出的其他合适的色烯酸以及文献中已知的其他色烯酸替代CA-01a制备其他的酰氯(表2)。

表2.色烯酰氯

色烯酰胺硝酸酯

实例1a：2-(2-(6,8-二氯-2-(三氟甲基)-2H-色烯-3-甲酰胺基)乙氧基)乙基硝酸酯

步骤1：将C-01a(0.5mmol)、2-(2-氨基乙氧基)乙醇(0.5mmol)、催化量的N,N-二甲基氨基吡啶和二异丙基乙胺(0.6mmol)在2.5mL的二氯甲烷中搅拌过夜。将反应物用乙酸乙酯稀释，并将有机层用饱和碳酸氢钠溶液和盐水洗涤，经硫酸镁干燥并蒸发。将该材料通过色谱法使用乙酸乙酯/己烷梯度进行纯化以提供醇INT-14。

步骤2：在室温下向INT-14(0.4mmol)的二氯甲烷(1.0mL)溶液中添加三苯基膦(0.4mmol)和四溴化碳(0.4mmol)。搅拌3h后，将反应物倒入水(50mL)中，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，并用饱和盐水溶液(50mL)洗涤。将合并的有机层经硫酸镁干燥、过滤、并在减压下浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法使用乙酸乙酯/己烷梯度进行纯化以提供溴化物INT-15。

步骤3：硝酸酯形成(也参见Kornblum,N,et.al.,J.Am.Chem.Soc.1966,88,1707–1711)：将INT-15(0.25mmol)溶解于乙腈(ACN,1.0mL)中并添加硝酸银(AgNO₃)(0.30mmol)。将反应物在65℃加热24h，冷却并通过过滤去除卤化银沉淀物。蒸发滤液并将残余物通过硅胶柱色谱法使用乙酸乙酯/己烷梯度进行纯化以提供实例1a。

使用与制备实例1a类似的流程，通过用来自表2中的其他色烯酰氯替代C-01a制备其他类似物(表3)。

表3.色烯酰胺硝酸酯的实例

色烯2-二硝基甘油酯硝酸酯

实例12a：1,3-双(硝基氧基)丙-2-基6,8-二氯-2-(三氟甲基)-2H-色烯-3-羧酸酯

将C-01a(0.5mmol)、1,3-二硝基丙三醇(0.5mmol)(根据Lange,K.,et.al.,J.Bioorg.Med.Chem.Lett.2009,19,3141-3144制备)、催化量的N,N-二甲基氨基吡啶和二异丙基乙胺(0.6mmol)在2.5mL的二氯甲烷中搅拌过夜。将反应物用乙酸乙酯稀释，并将有机层用饱和碳酸氢钠溶液和盐水洗涤，经硫酸镁干燥并蒸发。将该材料通过色谱法使用乙酸乙酯/己烷梯度进行纯化以提供实例12a。

实例22a：1,3-双(硝基氧基)丙-2-基7-(叔丁基)-6-氯-2-(三氟甲基)-2H-色烯-3-羧酸酯

步骤1：1,3-二溴代丙-2-基7-(叔丁基)-6-氯-2-(三氟甲基)-2H-色烯-3-羧酸酯(INT-16)

将C-11a(925mg,2.62mmol)溶解于二氯甲烷(10mL)中。添加1,3-二溴-2-丙醇(294μL,2.88mmol)和二异丙基乙胺(684μL,3.93mmol)，并将该混合物在室温下搅拌过夜。将反应物用乙酸乙酯稀释，用水和盐水洗涤，经硫酸镁干燥并蒸发。将产物通过硅胶柱色谱法使用乙酸乙酯/己烷梯度进行纯化以提供INT-16(890mg,64％产率)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.73(s,1H),7.27(s,1H),7.09(s,1H),5.71(q,J＝6.8Hz,1H),5.35-5.30(m,1H),3.76-3.67(m,4H),1.49(s,9H)。LC t_r＝5.87min(C-18柱，5％至95％乙腈/水在1.3mL/min下历时6min，在254nm在23℃下处检测)。ES(pos)MS m/z 535(对C₁₈H₁₈Br₂ClF₃O₃的M+H计算值要求535)。

步骤2：1,3-双(硝基氧基)丙-2-基7-(叔丁基)-6-氯-2-(三氟甲基)-2H-色烯-3-羧酸酯。

将INT-16(890mg,1.66mmol)溶解于乙腈(5mL)中。添加硝酸银(892mg,5.25mmol)并将反应加热至70℃保持4天。将反应物冷却、过滤并蒸发滤液。将残余物通过硅胶柱色谱法使用乙酸乙酯/己烷梯度进行纯化以提供为泡沫的实例22a(157.3mg,产率19％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.70(s,1H),7.26(s,1H),7.09(s,1H),5.67(q,J＝6.7Hz,1H),5.60-5.55(m,1H),4.84(ddd,J＝15.7,10.7,4.0Hz,2H),4.71(dd,J＝12.6,5.8Hz,2H),1.49(s,9H)。LC t_r＝5.45min(C-18柱，5％至95％乙腈/水在1.3mL/min下历时6min，在254nm处在23℃下检测)。ES(pos)MS m/z 499(对C₁₈H₁₈ClF₃N₂O₉的M+H计算值要求499)。

使用制备实例12a或实例22a的流程，通过用来自表2的其他色烯酰氯替代C-01制备其他类似物(表4)。

表4.色烯1,3-二硝基甘油酯硝酸酯的实例

色烯异山梨醇酯硝酸酯

实例33a：(3S,3aR,6R,6aS)-6-(硝基氧基)六氢呋喃并[3,2-b]呋喃-3-基7-(叔丁基)-6-氯-2-(三氟甲基)-2H-色烯-3-羧酸酯

将C-11a(500mg,1.42mmol)溶解于二氯甲烷(4mL)中。添加单硝酸异山梨醇酯(298mg,1.56mmol)和二异丙基乙胺(371μL,2.13mmol)并使反应在室温下搅拌过夜。将该混合物用乙酸乙酯稀释并用碳酸氢钠和盐水洗涤，经硫酸镁干燥并蒸发。将残余物通过硅胶柱色谱法使用乙酸乙酯/己烷梯度(0-30％)进行纯化以提供为泡沫的实例33a(495,产率69％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.67(d,J＝13.2Hz,1H),7.23(d,J＝1.9Hz,1H),7.08(s,1H),5.70-5.64(m,1H),5.44-5.39(m,2H),5.10-5.04(m,1H),4.57(dd,J＝21.9,5.3Hz,1H),4.17-4.07(m,3H),3.98-3.93(m,1H),1.49(s,9H)。LC t_r＝5.42min(C-18柱，5％至95％乙腈/水在1.3mL/min下历时6min，在254nm处在23℃下检测)。ES(pos)MS m/z 508(对C₂₁H₂₁ClF₃NO₈的M+H计算值要求508)。

实例33：(S)-(3S,3aR,6R,6aS)-6-(硝基氧基)六氢呋喃并[3,2-b]呋喃-3-基7-(叔丁基)-6-氯-2-(三氟甲基)-2H-色烯-3-羧酸酯

将C-11(513mg,1.45mmol)溶解于二氯甲烷(5mL)中。添加单硝酸异山梨醇酯(305mg,1.60mmol)和二异丙基乙胺(379μL,2.18mmol)并使反应在室温下搅拌过夜。将该混合物用乙酸乙酯稀释并用碳酸氢钠和盐水洗涤，经硫酸镁干燥并蒸发。将残余物通过硅胶柱色谱法使用乙酸乙酯/己烷梯度(0-30％)进行纯化以提供为泡沫的实例33(491mg,产率67％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.66(s,1H),7.22(s,1H),7.08(s,1H),5.68(q,J＝6.8Hz,1H),5.43-5.40(m,2H),5.09(t,J＝5.2Hz,1H),4.60(d,J＝4.9Hz,1H),4.16-4.08(m,3H),3.96(dd,J＝11.4,5.6Hz,1H),1.49(s,9H)。¹⁹F NMR(400MHz,CDCl₃)δ-78.5(d,J＝6.7Hz,3F)。¹³C NMR(400MHz,CDCl₃)δ162.7、152.8、151.7、136.7、131.8、127.1、117.4、115.9、115.7、86.5、81.6、81.2、78.3、73.4、CF₃(70.8、70.5、69.4)、36.7、29.3。LC t_r＝5.70min(C-18柱，5％至95％乙腈/水在1.3mL/min下历时6min，在254nm处在23℃下检测)。ES(pos)MSm/z 508(对C₂₁H₂₁ClF₃NO₈的M+H计算值要求508)。手性HPLC：AD(正己烷/i-PrOH 9：1,λ＝254nm)，t_r＝17.99min，100％ee。

使用与制备33a和33类似的流程，并且通过用来自表2的其他色烯酰氯替代C-11a制备其他的类似物(表5)。

表5.色烯异山梨醇酯硝酸酯的实例

色烯二乙二醇酯硝酸酯

实例34a：2-(硝基氧基)乙氧基)乙基6,8-二氯-2-(三氟甲基)-2H-色烯-3-羧酸酯

将C-01a(0.5mmol)、2-(2-羟基乙氧基)乙基硝酸酯(1.0mmol)(根据WO 2011/101245制备)、催化量的N,N-二甲基氨基吡啶和二异丙基乙胺(0.6mmol)在2.5mL的二氯甲烷中搅拌过夜。将反应物用乙酸乙酯稀释，并将有机层用饱和碳酸氢钠溶液和盐水洗涤，经硫酸镁干燥并蒸发。将该材料通过色谱法使用乙酸乙酯/己烷梯度进行纯化以提供实例34a。

使用与制备实例34a类似的流程，通过用来自表2的其他色烯酰氯替代C-01a制备其他类似物(表6)。

表6.色烯二乙二醇酯硝酸酯的实例

色烯二亚乙基硫基乙二醇酯硝酸酯

实例45a：2-((2-(硝基氧基)乙基)硫基)乙基6,8-二氯-2-(三氟甲基)-2H-色烯-3-羧酸酯

步骤1：将C-01a(0.5mmol)、2,2'-硫基二乙醇(1.0mmol)、催化量的N,N-二甲基氨基吡啶和二异丙基乙胺(0.6mmol)在2.5mL的二氯甲烷中搅拌过夜。将反应物用乙酸乙酯稀释，并将有机层用饱和碳酸氢钠溶液和盐水洗涤，经硫酸镁干燥并蒸发。将该材料通过色谱法使用乙酸乙酯/己烷梯度进行纯化以提供醇INT-17。

步骤2：在室温下向INT-17(0.4mmol)的二氯甲烷(1.0mL)溶液中添加三苯基膦(0.4mmol)和四溴化碳(0.4mmol)。搅拌3h后，将反应物倒入水(50mL)中，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，并用饱和盐水溶液(50mL)洗涤。将合并的有机层经硫酸镁干燥、过滤并在减压下浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法使用乙酸乙酯/己烷梯度进行纯化以提供溴化物INT-18。

步骤3：将INT-18(0.25mmol)溶解于乙腈(1.0mL)中并添加硝酸银(0.30mmol)。将反应物在65℃下加热24h，冷却并通过过滤去除卤化银沉淀物。蒸发滤液并将残余物通过硅胶柱色谱法使用乙酸乙酯/己烷梯度进行纯化以提供实例45a。

使用与制备实例45a类似的流程，通过用来自表2的其他色烯酰氯替代C-01a制备其他类似物(表7)。

表7.色烯二亚乙基硫基乙二醇酯硝酸酯的实例

色烯二亚乙基乙酰胺酯硝酸酯

实例56a：2-(N-(2-(硝基氧基)乙基)乙酰胺基)乙基6,8-二氯-2-(三氟甲基)-2H-色烯-3-羧酸酯

步骤1：将二乙醇胺(5.0mmol)和二异丙基乙胺(5.0mmol)溶解于二氯甲烷(10mL)中，并在0℃下逐滴添加乙酰氯(4.5mmol)，并且将混合物搅拌2h。将反应物用乙酸乙酯稀释，并将有机层用饱和碳酸氢钠溶液和盐水洗涤，经硫酸镁干燥并蒸发。将该材料通过色谱法使用甲醇-二氯甲烷梯度进行纯化以提供醇INT-19。

步骤2：将C-01(0.5mmol)、INT-19(1.0mmol)、催化量的N,N-二甲基氨基吡啶和二异丙基乙胺(0.6mmol)在2.5mL的二氯甲烷中搅拌过夜。将反应物用乙酸乙酯稀释，并将有机层用饱和碳酸氢钠溶液和盐水洗涤，经硫酸镁干燥并蒸发。将该材料通过色谱法使用乙酸乙酯/己烷梯度进行纯化以提供醇INT-20。

步骤3：在室温下向INT-20(0.4mmol)的二氯甲烷(1.0mL)溶液中添加三苯基膦(0.4mmol)和四溴化碳(0.4mmol)。搅拌3h后，将反应物倒入水(50mL)中，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，并用饱和盐水溶液(50mL)洗涤。将合并的有机层经硫酸镁干燥、过滤并在减压下浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法使用乙酸乙酯/己烷梯度进行纯化以提供溴化物INT-21。

步骤4：将INT-21(0.25mmol)溶解于乙腈(1.0mL)中并添加硝酸银(0.30mmol)。将反应物在65℃下加热24h，冷却，并通过过滤去除卤化银沉淀物。蒸发滤液并将残余物通过硅胶柱色谱法使用乙酸乙酯/己烷梯度进行纯化以提供实例56a。

使用与制备实例56a类似的流程，通过用来自表2的其他色烯酰氯替代C-01a制备其他类似物(表8)。

表8.色烯二亚乙基乙酰胺酯硝酸酯的实例

色烯二亚乙基N-甲基氨基酯硝酸酯

实例67a：2-(甲基(2-(硝基氧基)乙基)氨基)乙基6,8-二氯-2-(三氟甲基)-2H-色烯-3-羧酸酯

步骤1：使用发烟硝酸使2-(甲基氨基)乙醇(1.0mmol)在二氯甲烷中硝化，随后加入乙酸酐。将所得到的2-(甲基氨基)乙基硝酸盐溶解于7M氢氧化钠水溶液中并使用溴乙醇使其烷基化以提供2-((2-羟乙基)(甲基)氨基)乙基硝酸酯。

步骤2：使C-01a(0.5mmol)、2-((2-羟乙基)(甲基)氨基)乙基硝酸酯(0.51mmol)、催化量的N,N-二甲基氨基吡啶和二异丙基乙胺(0.6mmol)在2.5mL的二氯甲烷中搅拌过夜。将反应物用乙酸乙酯稀释，并将有机层用饱和碳酸氢钠溶液和盐水洗涤，经硫酸镁干燥并蒸发以提供实例67a。

使用类似的流程通过用来自表2的其他色烯酰氯替代C-01a制备其他类似物(表9)。

表9.色烯二亚乙基N-甲基氨基酯硝酸酯的实例

色烯乙基二硫酯硝酸酯

实例78a：2-((2-(硝基氧基)乙基)二硫烷基)乙基6,8-二氯-2-(三氟甲基)-2H-色烯-3-羧酸酯

步骤1：将C-01a(0.5mmol)、2-羟乙基二硫化物(1.0mmol)、催化量的N,N-二甲基氨基吡啶和二异丙基乙胺(0.6mmol)在2.5mL的二氯甲烷中搅拌过夜。将反应物用乙酸乙酯稀释，并将有机层用饱和碳酸氢钠溶液和盐水洗涤，经硫酸镁干燥并蒸发。将该材料通过色谱法使用乙酸乙酯/己烷梯度进行纯化以提供醇INT-22。

步骤2：在室温下向INT-22(0.4mmol)的二氯甲烷(1.0mL)溶液中添加三苯基膦(0.4mmol)和四溴化碳(0.4mmol)。搅拌3h后，将反应物倒入水(50mL)中，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，并用饱和盐水溶液(50mL)洗涤。将合并的有机层经硫酸镁干燥、过滤并在减压下浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法使用乙酸乙酯/己烷梯度进行纯化以提供溴化物INT-23。

步骤3：将INT-23(0.25mmol)溶解于乙腈(1.0mL)中并添加硝酸银(0.30mmol)。将反应物在65℃加热24h，冷却并通过过滤去除卤化银沉淀物。蒸发滤液并将残余物通过硅胶柱色谱法使用乙酸乙酯/己烷梯度进行纯化以提供实例78a。

使用与制备实例78a类似的流程，通过用来自表2的其他色烯酰氯替代C-01a制备其他类似物(表10)。

表10.色烯乙基二硫酯硝酸酯的实例

硝基氧基羧酸

制备硝基氧基羧酸的方法在文献中是已知的，并且表11中引用了代表性的合成流程。

表11.硝基氧基羧酸

2-(甲基(2-(硝基氧基)乙基)氨基)乙酸(NA-11)

如美国专利2,975,208中所述在未保护羧酸的情况下使用发烟硝酸在乙酸和乙酸酐中进行2-((2-羟乙基)(甲基)氨基)乙酸的硝化以提供NA-11。可选地，在上述条件下处理2-((2-羟乙基)(甲基)氨基)乙酸乙酯提供2-(甲基(2-(硝基氧基)乙基)氨基)乙酸乙酯并且皂化提供所需的酸NA-11。该方案由Decker,M.,et.al.,Bioorg.Med.Chem.Lett.2004,14,4995–4997进行修改而成。关于另一可靠的方法参见：J.F.Gilmeret.al.,Bioorg.Med.Chem.Lett.2007,17,3217–3220。

色烯卤代烷基酯

氯甲基6,8-二氯-2-(三氟甲基)-2H-色烯-3-羧酸酯(C-12a)

如Syn.Comm.,1984,14(9),857-864中所述将色烯酸转化为氯甲酯。将羧酸CA-01a(200mg,0.64mmol)、四丁基硫酸氢铵(22mg,0.06mmol)和碳酸氢钠(204mg,2.43mmol)溶解于1：1的二氯甲烷-水混合物(1.2mL)中。逐滴添加在150μL的二氯甲烷中的氯甲基氯磺酸酯(75μL,0.74mmol)，并在室温下搅拌过夜。将反应物用乙酸乙酯稀释，并将有机层用饱和碳酸氢钠溶液和盐水洗涤，经硫酸镁干燥并蒸发以得到C-12a(197mg,产率85％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.77(s,1H),7.44(d,J＝2.5Hz,1H),7.19(dd,J＝2.5,0.3Hz,1H),5.91(abq,J＝36.4,6.2Hz,2H),5.84(q,J＝6.6Hz,1H)。LC t_r＝5.04min(C-18柱，5％至95％乙腈/水在1.7mL/min下历时6min，在254nm处在23℃下检测)。

碘甲基6,8-二氯-2-(三氟甲基)-2H-色烯-3-羧酸酯(C-13a)

在1.5mL的乙腈中将C-12a(530mg,1.69mmol)和碘化钠(381mg,2.54mmol)加热至60℃保持5h，随后在室温下搅拌48h。将反应物用乙酸乙酯稀释。将有机层用0.2M硫代硫酸钠溶液和盐水洗涤，经硫酸镁干燥并蒸发以得到为淡黄色油的C-13a(505mg,产率66％)。¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ7.72(s,1H),7.44(d,J＝2.4Hz,1H),7.19(d,J＝2.4Hz,1H),6.11(abq,J＝32.7,5.0Hz,2H),5.82(q,J＝6.6Hz,1H)。LC t_r＝5.21min(C-18柱，5％至95％乙腈/水在1.7mL/min下历时6min，在254nm处在23℃下检测)。

1-氯乙基6,8-二氯-2-(三氟甲基)-2H-色烯-3-羧酸酯(C-14a)

将羧酸CA-01a(0.50mmol)、四丁基硫酸氢铵(0.05mmol)和碳酸氢钠(2.0mmol)溶解于1：1的二氯甲烷-水混合物(1.0mL)中。逐滴添加在150μL的二氯甲烷中的1-氯乙基氯磺酸酯(0.60mmol，如US2860123A中所述进行制备)，并在室温下搅拌过夜。将反应物用乙酸乙酯稀释，并将有机层用饱和碳酸氢钠溶液和盐水洗涤，经硫酸镁干燥并蒸发以提供C-14a。

使用与制备C-12a至C-14a类似的流程，通过用文献中已知的表1中列出的其他合适的色烯酸替代CA-01a制备其他卤代烷基色烯酯(表12)。

表12.卤代烷基色烯酯

色烯烷基二酯硝酸酯

实例89a：(2-(硝基氧基)乙酰氧基)甲基6,8-二氯-2-(三氟甲基)-2H-色烯-3-羧酸酯

将2-(硝基氧基)乙酸(NA-01)(1.0mmol)、C-12a(1.0mmol)和三乙胺(1.25mmol)溶解于3mL二甲基亚砜中，并在室温下搅拌48h。将反应物用乙酸乙酯稀释。将有机层用饱和碳酸氢钠溶液和盐水洗涤，经硫酸镁干燥并蒸发。通过色谱法使用乙酸乙酯/己烷梯度进行纯化而提供实例89a。

使用与制备实例89a类似的流程，通过用来自表12的其他色烯卤代烷基酯和来自表11的其他硝基氧基酸替代C-12a制备其他类似物(表13)。

表13.色烯亚甲基二酯硝酸酯的实例

硝基氧基醇

制备硝基氧基醇的方法是文献中已知的并且表14中引用了代表性合成流程。

表14.硝基氧基醇

2-((2-羟乙基)硫基)乙基硝酸酯(NAA-10)

在丙酮中通过用碘化钾处理将市售的2-((2-氯乙基)硫基)乙酸乙酯转化为相应的碘化物。立即在黑暗中在乙腈中用硝酸银处理2-((2-碘乙基)硫基)乙酸乙酯以得到2-((2-(硝基氧基)乙基)硫基)乙酸乙酯。用氢氧化钠水溶液将2-((2-(硝基氧基)乙基)硫基)乙酸乙酯皂化以提供2-((2-羟乙基)硫基)乙基硝酸酯。

硝基氧基氯代烷基碳酸酯

氯甲基(2-(硝基氧基)乙基)碳酸酯(NC-01)

将硝基氧基醇NAA-01(0.50mmol)和三乙胺(0.60mmol)溶解于二氯甲烷(1.0mL)中。逐滴添加氯甲酸氯甲酯(0.60mmol)，并将该混合物在室温下搅拌2h。将反应物用乙酸乙酯稀释，并将有机层用0.1N的盐酸溶液和盐水洗涤，经硫酸镁干燥并蒸发以提供NC-01。在没有进一步纯化的情况下使用残余物。

使用与制备NC-01类似的流程，通过用自表14的其他硝基氧基醇替代NAA-01和用诸如氯甲酸氯甲酯和1-氯乙基氯甲酸酯的氯甲酸酯制备其他氯甲基碳酸酯(表15)。

表15.硝基氧基氯代烷基碳酸酯

色烯烷基碳酸酯硝酸酯

实例163：(S)-(((2-(硝基氧基)乙氧基)羰基)氧基)甲基6,8-二氯-2-(三氟甲基)-2H-色烯-3-羧酸酯

将氯甲基碳酸酯NC-01(1.0mmol)、色烯酸CA-01(1.0mmol)和三乙胺(1.25mmol)溶解于3mL二甲基亚砜中，并在室温下搅拌48h。将反应物用乙酸乙酯稀释。将有机层用饱和碳酸氢钠溶液和盐水洗涤，经硫酸镁干燥并蒸发。通过色谱法使用乙酸乙酯/己烷梯度进行纯化而提供实例163。

使用与制备实例163类似的流程，通过用来自表15的其他氯代烷基碳酸酯替代NC-01，并且用文件中已知的表1中列出的其他合适的色烯酸替代CA-01制备其他类似物(表16)。

表16.色烯亚甲基二酯硝酸酯的实例

E.治疗方法

本文结构式的化合物是包括本文结构式的药物可接受的盐，或本文结构式的化合物的溶剂化物或盐的溶剂化物。

本发明进一步提供通过向个体施用治疗有效量的如由本文结构式所述的一种或多种化合物治疗个体中的疾病病况的方法，所述个体患有或者易患有此类疾病病况。在一个实施方案中，治疗是预防性治疗。在另一实施方案中，治疗是姑息治疗。在另一实施方案中，治疗是恢复性治疗，例如，对伤口愈合、痤疮和炎症的治疗。在另一实施方案中，个体是哺乳动物。在又一实施方案中，个体是人。

1.病况

根据本发明可被治疗的病况括但不限于，自身免疫性病症、慢性炎性病症、急性炎性病症、自身炎性病症、疼痛、恶性肿瘤、肿瘤、肺癌、结肠直肠癌等。

在一个实施方案中，将本文所述的方法用于治疗、预防或改善疾病病况，其包括向有此需要的个体施用治疗有效量的本文结构式的化合物，其中所述病况选自恶性肿瘤疼痛、Barrett’s食管、Lynch综合征、非小细胞肺癌、头颈癌、皮肤癌、肝癌、转移性结肠直肠癌(和FAP)、肾细胞癌、胶质母细胞瘤、鳞状细胞癌、膀胱癌、乳腺癌、胆道癌、子宫颈癌、前列腺癌、小细胞肺癌、卵巢癌、胰腺癌、胃肠癌和CNS癌。

在另一实施方案中，将本文所述的方法用来治疗、预防或改善疾病病况，其包括向有此需要的个体施用治疗有效量的本文结构式的化合物，其中所述病况选自恶性肿瘤、光化性角化病、囊性纤维化和痤疮。

在又一实施方案中，将本文所述的方法用于愈合伤口，其通过向有此需要的个体施用治疗有效量的本文结构式的化合物。

在一个实施方案中，将本文所述的方法用来治疗、预防或改善疾病病况，其包括向有此需要的个体施用治疗有效量的本文结构式的化合物，其中所述病况选自结肠直肠癌、非小细胞肺癌和头颈癌。

在一些实施方案中，将本文所述的方法用于向有此需要的患者施用治疗有效量的本文结构式的化合物以治疗、预防或改善由酶失调和/或炎症介质生成失调、稳定性失调、分泌失调和翻译后加工失调而引起的疾病病况或病症。可能失调的炎症介质的实例包括一氧化氮、前列腺素和白细胞三烯。可能失调的酶的实例包括环氧合酶和一氧化氮合酶。

在一些实施方案中，将本文所述的方法用于向有此需要的患者施用治疗有效量的本文结构式的化合物以治疗、预防或改善由自身免疫性病症、慢性和/或急性炎性病症，和/或自身炎性病症引起或与自身免疫性病症、慢性和/或急性炎性病症，和/或自身炎性病症相关的疾病病况或病症。病症的实例包括但不限于关节炎、类风湿性关节炎、骨关节炎、幼年型关节炎、银屑病关节炎。

在某些实施方案中，可将本文所述的方法用于向有此需要的患者施用治疗有效量的本文结构式的化合物以治疗、预防或改善肿瘤及其症状。这些病况的实例包括但不限于下列：

在一个实施方案中，能将本文所述的方法用于向有此需要的患者施用治疗有效量的本文结构式的化合物以治疗、预防或改善转移性结肠直肠癌。

在另一实施方案中，能将本文所述的方法用于向有需要的患者施用治疗有效量的本文结构式的化合物以治疗、预防或改善由COX-2过表达为特征的或与COX-2过表达相关的疾病病况，所述疾病病况包括但不限于恶性肿瘤、自身免疫性病症疾病病况诸如类风湿性关节炎和其他以疼痛和/或炎症为特征的病症。

COX-2过表达见于多种医疗状况。本文给出的以COX-2过表达为特征的病况的实例不意图限制而仅仅出于说明的目的。期刊文章Transgenic mouse for conditional,tissue-specificCox-2over expression(Kamei et al.Genesis.2006Apr；44(4):177-82.)描述了COX-2过表达见于例如，心血管病况、急性和慢性炎症反应、神经退行性疾病和恶性肿瘤。示例性且非限制性的心血管病况包括败血症(Cuenca et al.,Infiltration ofInflammatory Cells Plays an Important Role in Matrix MetalloproteinaseExpression和Activation in the Heartduring Sepsis.2006；Am J Pathol.169(5):1567-1576.)，主动脉瘤(King et al.,Selective Cyclooxygenase-2Inhibition withCelecoxib Decreases Angiotensin II-Induced Abdominal Aortic AneurysmFormation in Mice.Nov2006；Arterioscler Thromb Vasc Biol.26:1137-1143.)，以及心肌梗死(LaPointe et al.,Inhibition of Cyclooxygenase-2improves cardiacfunction after myocardial infarction in the mouse.2004；Am J Physiol HeartCirc Physiol.286:H1416-H1424,)。示例性且非限制性的急性和慢性炎症反应分别包括损伤相关的炎症和类风湿性关节炎。示例性且非限制性的神经退行性疾病包括帕金森病(Teismann,Peter.COX-2in the neurodegenerative process of Parkinson'sdisease.Nov 2012；38(6):395-397.)和阿尔茨海默氏病(Rogers,Joseph.Neuroinflammatory Mechanisms in Alzheimer's Disease:Basic和ClinicalResearch.Springer Science and Business Media,Jan 2001.,203-204)。示例性且非限制性的恶性肿瘤包括非小细胞肺癌和结肠直肠癌。

在另一实施方案中，当施用治疗有效量的本文结构式的化合物时，具有高的基线COX-2活性的患者更有可能改善。可通过尿PGE-M含量测定COX-2活性的基线水平。

术语患者是指患有上述病况的人类或非人类动物。非人类动物可以是伴侣动物例如，但不限于犬科动物和猫科动物物种。术语“患者”和“个体”是可以互换的。

2.个体

本文所述的方法的合适的个体包括哺乳动物个体。根据本发明的哺乳动物包括但不限于人、犬科动物、猫科动物、牛科动物、山羊、马科动物、绵羊、猪科动物、啮齿动物、兔类动物、灵长类动物等并且包括子宫内的哺乳动物。个体可以是任一性别且在发育的任何阶段。

3.施用和剂量

可以以治疗有效量的前药的形式施用本发明的化合物。

可以通过任何合适的途径以适用于此途径的药物组合物的形式以及对预期的治疗有效的剂量施用本发明的化合物。本领域技术人员使用医药领域熟悉的临床前和临床方法容易确定预防或阻止医疗状况的进展以治疗或改善医疗状况、或减轻其症状所需要的本发明的化合物的治疗有效剂量。

为了方便，可以以单位剂型施用本发明的化合物。如果需要，可以使用每天多个剂量的单位剂型以增加每日总剂量。单位剂型例如，可以是片剂或胶囊，其包含约0.01mg、约0.05mg、约0.1mg、约0.5mg、约1mg、约5mg、约10mg、约15mg、约20mg、约25mg、约30mg、约35mg、约40mg、约45mg、约50mg、约55mg、约60mg、约65mg、约70mg、约75mg、约80mg、约85mg、约90mg、约95mg、约100mg、约125mg、约150mg、约175mg、约200mg、约250mg或约500mg的本发明的化合物。在一个实施方案中，所述单位剂型包含约0.01mg至约500mg的本发明的化合物。在另一实施方案中，所述单位剂型包含约0.02mg至约400mg的本发明的化合物。在另一实施方案中，所述单位剂型包含约0.05mg至约250mg的本发明的化合物。在另一实施方案中，所述单位剂型包含约0.1mg至约200mg的本发明的化合物。在另一实施方案中，所述单位剂型包含约0.5mg至约150mg的本发明的化合物。在另一实施方案中，所述单位剂型包含约1.0mg至约100mg的本发明的化合物。

本发明的化合物和/或包含本发明的化合物的组合物的治疗效果所需的剂量方案基于多种因素，包括患者的类型、年龄、体重、性别和身体状况、病况的严重程度、施用途径和使用的特殊化合物的活性。因此，剂量方案可随包括但不限于此处列出的患者间个体因素的可变性而变化。每天每千克体重约0.001mg至约100mg的本发明的化合物的剂量水平在治疗上述病况中是有用的。在一个实施方案中，本发明的化合物的每日总剂量(以单次或分次剂量施用)通常为约0.001mg/kg至约20mg/kg(即，mg化合物/kg体重)。在另一实施方案中，本发明的化合物的每日总剂量为约0.005mg/kg至约10mg/kg。在另一实施方案中，每日总剂量为约0.005mg/kg至约5mg/kg。在另一实施方案中，每日总剂量为约0.01mg/kg至约1mg/kg。在另一实施方案中，每日总剂量为约0.8mg/kg至约15mg/kg。在另一实施方案中，每日总剂量为约0.2mg/kg至约4mg/kg。这些剂量基于重量为约65kg至约75kg的平均人类个体。医生将能够容易地为体重落在该范围之外的个体诸如婴儿或儿童确定剂量。在一天内可将本发明的化合物的施用重复多次(通常不大于四次)以达到所需的日剂量。

本发明进一步包含本发明的化合物作为药物(例如，单位剂量片剂或单位剂量胶囊)的用途。

在另一实施方案中，本发明包含本发明的化合物用于生产药物(例如，单位剂量片剂或单位剂量胶囊)以治疗一种或多种之前在上述讨论治疗方法的部分中确定的病况的用途。在一个实施方案中，所述病况是恶性肿瘤。在另一实施方案中，所述病况是炎性病况。

F.药物组合物

为了治疗上述提及的病况，可以如下施用本文所述的一种或几种化合物，这些代表并不是限制性的：

1.口服施用

可以口服施用(包括吞咽)本发明的一种或几种化合物，以便所述化合物进入胃肠道或直接从口(例如，口腔或舌下施用)吸收至血流中。

用于口服施用的合适的组合物包括但不限于固体制剂，诸如片剂、锭剂、丸剂、扁囊剂，以及硬胶囊和软胶囊，其可以包含液体、凝胶或粉末。用于口服施用的组合物可以配制为即释或调释(包括延迟释放或持续释放，任选地使用肠溶衣)。

液体制剂可以包括但不限于可用于软胶囊或硬胶囊中的溶液、糖浆和悬浮液。此类制剂可以包括药物可接受的载体例如，水、乙醇、聚乙二醇、纤维素、-或一种油或多种油。所述制剂还可以包括一种或多种乳化剂和/或悬浮剂。

在片剂剂型中存在的药物的量可以为剂型的约0.05重量％至约95重量％，更典型地为剂型的约2重量％至约50重量％。此外，片剂可以包含崩解剂，所述崩解剂包含剂型的约0.5重量％至约35重量％，更典型地为剂型的约2重量％至约25重量％。崩解剂的实例包括但不限于甲基纤维素、羧甲基纤维素钠或羧甲基纤维素钙、交联羧甲基纤维素钠、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基纤维素、淀粉等。

用于片剂的合适的润滑剂可以以约0.1重量％至约5重量％的量存在，并且包括但不限于硬脂酸钙、硬脂酸锌或硬脂酸镁，硬脂酰富马酸钠等。

用于片剂的合适的粘合剂包括但不限于明胶、聚乙二醇、糖类、树胶、淀粉、羟丙基纤维素等。用于片剂的合适的稀释剂包括但不限于甘露醇、木糖醇、乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇和淀粉。

用于片剂的合适的表面活性剂和助流剂，可以以约0.1重量％至约重量3％的量存在，并且包括但不限于聚山梨醇酯80、十二烷基硫酸钠、滑石和二氧化硅。

在另一实施方案中，药物组合物包含治疗有效量的本文结构式的化合物或其药物可接受的盐以及药物可接受的载体。

2.肠胃外施用

可以直接将本发明的化合物施用至血液、肌肉或内部器官中。用于肠胃外施用的合适的方式包括但不限于静脉内、肌内、皮下动脉内、腹膜内、鞘内、颅内等。用于肠胃外施用的合适的装置包括但不限于注射器(包括针注射器和无针注射器)和输液方法。

用于肠胃外施用的组合物可以配制为即释或调释(包括延迟释放或持续释放)。

多数肠胃外制剂为包含赋形剂的水溶液，所述赋形剂包括但不限于盐、缓冲剂和碳水化合物。

也可以以脱水方式(例如，通过冻干)制备肠胃外制剂或将肠胃外制剂制备为无菌非水溶液。这些制剂可以与合适的媒介物诸如无菌水一起使用。也可以在肠胃外溶液的制备中使用溶解度增强剂。

3.局部施用

可以将本发明的化合物局部施用至皮肤或经皮施用。用于该局部施用的制剂可以包括但不限于洗剂、溶液、乳膏剂、凝胶剂、水凝胶、软膏剂、泡沫剂、埋植剂、贴剂等。用于局部施用制剂的药物可接受的载体可以包括但不限于水、乙醇、矿物油、甘油、聚乙二醇等。也可以通过电穿孔、离子导入法、超声波法等进行局部施用。

用于局部施用的组合物可以配制为即释或调释，包括延迟释放或持续释放。

4.直肠施用

可以通过将活性剂与合适的无刺激性的赋形剂混合而制备用于直肠施用本发明的化合物的栓剂，所述无刺激性的赋形剂包括但不限于可可脂，合成的单、二或三酸甘油酯，脂肪酸或聚乙二醇，这些在常温下是固体，但在直肠温度下是液体，并且其将因此在直肠中熔化并释放药物。

也可以使用药学领域已知的其他载体材料和施用方式。可以通过任何熟知的药学技术诸如有效的配方和施用方法制备本发明的药物组合物。关于有效的配方和施用方法的上述考虑是本领域中熟知的，并描述于标准教科书中。在例如，Hoover,John E.,Remington's Pharmaceutical Sciences,Mack Publishing Co.,Easton,Pa.,1975；Liberman,et al.,Eds.,Pharmaceutical Dosage Forms,Marcel Decker,New York,N.Y.,1980；以及Kibbe,et al.,Eds.,Handbook of Pharmaceutical Excipients(3^rd Ed.),American Pharmaceutical Association,Washington,1999中讨论了药物的配方。

G.组合及组合治疗

可单独地使用或与其他药物活性化合物组合地使用本发明的化合物以治疗诸如以上那些先前所描述的的病况。可以同时(在同一剂型中或在分开的剂型中)施用或顺序地施用本发明的一种或几种化合物和其他药物活性化合物，或本发明的几种化合物和其他药物活性化合物。因此，在一个实施方案中，本发明包括通过向个体施用治疗有效量的一种或多种本发明的化合物以及一种或多种其他药物活性化合物治疗病况的方法。

在另一实施方案中，提供了药物组合物，其包含一种或多种本发明的化合物、一种或多种其他药物活性化合物以及药物可接受的载体。

在另一实施方案中，所述一种或多种其他药物活性化合物选自抗炎药物、细胞抑制药物、细胞毒性药物、抗增殖剂和血管生成抑制剂。

在另一实施方案中，所述一种或多种其他药物活性化合物选自抗癌药物和抗炎药物。

也可将本文所述的释放NO的色烯结合物任选地与由于其对待治疗的病况的治疗价值而被选择的其他治疗试剂组合使用。一般而言，本文所述的化合物，与在使用组合治疗的实施方案中的其他药剂不必在同一药物组合物中施用，并且由于不同的物理和化学特性，任选地通过不同的途径施用。通常初始施用是根据既定方案做出的并且随后，基于观察到的效果、剂量、施用方式和施用时间进行后续修改。在某些情况下，将本文所述的释放NO的色烯结合物与另一治疗剂或另一释放NO的色烯结合物组合施用是适当的。仅举例而言，通过施用也具有治疗益处的另一治疗剂(其也包括治疗方案)增强了释放NO的色烯结合物的疗效。不管正在治疗的疾病、病症或病况如何，患者体验到的总体益处是两种治疗剂的简单加和或者患者体验到增强的益处。

当将药物用于治疗组合中时，治疗有效剂量改变。用于实验测定用于组合治疗方案中的药物和其他药剂的治疗有效剂量的方法是记载的方法。组合治疗进一步包括在不同时间开始和停止以协助患者的临床管理的周期性治疗。在任何情况下，以任何顺序或甚至同时施用多种治疗剂(其中之一是如本文所述的释放NO的色烯结合物)。如果同时地施用，则任选地以单一的、统一的形式，或以多种形式(仅举例而言，作为单一药丸或两个单独的药丸)提供多种治疗剂。

在一些实施方案中，治疗剂中的一种可以以多个剂量给药，或治疗剂中的两种均作为多个剂量给药。如果不同时，则多个剂量之间的时间任选地在多于零周至少于12周之间变化。

此外，所述组合方法、组合物和制剂不限于仅两种药剂的使用，还设想了多个治疗组合的使用。应理解，可以根据多种因素任选地修改治疗、预防或改善寻求减轻的病况的剂量方案。这些因素包括但不限于个体患有的病症，以及个体的年龄、体重、性别、饮食和身体状况。因此，实际使用的剂量方案变化很大，并因此在某些实施方案中偏离本文所述的剂量方案。

组成本文公开的组合治疗的药剂任选地是组合剂型或是以意图用于基本上同时施用的分开的剂量形式。组成组合治疗的药剂也可以任选地与被需要两步施用的方案施用的任一药剂顺序施用。所述两步施用方案任选地需要顺序施用活性药剂或间隔开施用分开的活性药剂。根据各个药剂的性质(包括但不限于药剂的效能、溶解度、生物利用率、血浆半衰期和动力学曲线)，多个施用步骤之间的时间段范围从几分钟至几小时。

在另一实施方案中，任选地将释放NO的色烯结合物与向患者提供额外的益处的方法组合使用。任选地在疾病或病况发生之前、期间或之后施用释放NO的色烯结合物及任何其他的治疗，并且在一些实施方案中，施用包含释放NO的色烯前药的组合物的时机有所不同。因此，例如，将释放NO的色烯结合物用作预防剂，并且向具有发展病况或疾病的倾向的个体连续施用以阻止疾病或病况的发生。任选地在症状发作期间或发作之后尽快向个体施用释放NO的色烯结合物。尽管本文已经示出并描述了本发明的实施方案，但是此类实施方案仅通过举例的方式提供对于本领域技术人员而言将是显而易见的。目前，在不背离本发明的情况下本领域技术人员将想到各种变形、改变和替换。应理解，在本发明的某些实施方案中在实施本发明中使用了本文所述的实施方案的各种替代方案。

可以将释放NO的色烯结合物与抗癌药物组合使用，所述抗癌药物包括但不限于下列类别：烷化剂、抗代谢剂、植物碱和萜类、拓扑异构酶抑制剂、细胞毒性抗生素、血管生成抑制剂和酪氨酸激酶抑制剂。

对于在恶性肿瘤和肿瘤性疾病中的用途，最适宜可将释放NO的色烯结合物与下列的非限制性实例抗癌剂的一种或多种一起使用。作为第一个实例，烷化剂包括但不限于顺铂(PLATIN)、卡铂(PARAPLATIN)、链脲佐菌素(ZANOSAR)、白消安(MYLERAN)和环磷酰胺(ENDOXAN)。作为第二个实例，抗代谢剂包括但不限于巯嘌呤(PURINETHOL)、硫鸟嘌呤、喷司他丁(NIPENT)、阿糖胞苷(ARA-C)和甲氨喋呤(RHEUMATREX)。作为第三个实例，植物碱和萜类包括但不限于长春新碱(ONCOVIN)、长春花碱和紫杉醇(TAXOL)。作为第四个实例，拓扑异构酶抑制剂包括但不限于伊立替康(CAMPTOSAR)、拓扑替康(HYCAMTIN)和依托泊苷(EPOSIN)。作为第五个实例，细胞毒性抗生素包括但不限于放线菌素D(COSMEGEN)、多柔比星(ADRIAMYCIN)、博来霉素(BLENOXANE)和丝裂霉素(MITOSOL)。作为第六个实例，血管生成抑制剂包括但不限于舒尼替尼(SUTENT)和贝伐单抗(AVASTIN)。作为第七个实例，酪氨酸激酶抑制剂包括但不限于伊马替尼(GLEEVEC)、埃罗替尼(TARCEVA)、拉帕替尼(TYKERB)和阿西替尼(INLYTA)。作为第八个实例，EGFR抑制剂包括但不限于单克隆抗体西妥昔单抗(ERBITUX)。作为第九个实例，靶向HER2的药剂包括但不限于单克隆抗体帕妥珠单抗(PERJETA)和曲妥珠单抗(HERCEPTIN)，这两者在前列腺癌和乳腺癌中与COX-2具有强的共表达连接。

在个体患有或者处于患有炎性病况的风险下的情况下，任选地将本文所述的释放NO的色烯结合物与用于治疗炎性病况的一种或多种药剂或方法以任意组合一起使用。用于治疗自身免疫病况和/或炎性病况的治疗剂/治疗包括但不限于下列实例的任何一个。作为第一个实例，皮质类固醇包括但不限于可的松(cortisone)、地塞米松和甲基泼尼松龙。作为第二个实例，非类固醇抗炎药物(NSAID)包括但不限于布洛芬、萘普生、乙酰氨基酚、阿司匹林、非诺洛芬(NALFON)、氟比洛芬(ANSAID)、酮洛芬、奥沙普秦(DAYPRO)、双氯芬酸钠(VOLTAREN)、双氯芬酸钾(CATAFLAM)、依托度酸(LODINE)、吲哚美辛(INDOCIN)、酮咯酸(TORADOL)、舒林酸(CLINORIL)、托美汀(TOLECTIN)、甲氯芬那酸(MECLOMEN)、甲芬那酸(PONSTEL)、萘丁美酮(RELAFEN)和吡罗昔康(FELDENE)。作为第三个实例，免疫抑制剂包括但不限于甲氨蝶呤(RHEUMATREX)、来氟米特(ARAVA)、硫唑嘌呤(IMURAN)、环孢霉素(NEORAL,SANDIMMUNE)、他克莫司和环磷酰胺(CYTOXAN)。作为第四个实例，CD20阻滞剂包括但不限于利妥昔单抗(RITUXAN)。作为第五个实例，肿瘤坏死因子(TNF)阻滞剂包括但不限于依那西普(ENBREL)、英夫利昔单抗(REMICADE)和阿达木单抗(HUMIRA)。作为第六个实例，白细胞介素-1受体拮抗剂包括但不限于阿那白滞素(KINERET)。作为第七个实例，白细胞介素-6抑制剂包括但不限于托珠单抗(ACTEMRA)。作为第八个实例，白细胞介素-17抑制剂包括但不限于AIN457。作为第九个实例，Janus激酶抑制剂包括但不限于索西替尼。作为第十个实例，syk抑制剂包括但不限于福他替尼。

H.试剂盒

本发明进一步包含适用于进行以上所述的治疗方法或预防方法的试剂盒。在一个实施方案中，试剂盒包含包括一种或多种本发明的化合物的第一剂型以及用于足以实现本发明的方法的数量的剂量的容器。

I.生物测定

血浆中化合物新陈代谢&微粒体稳定性

本发明包括在体内被酶促活化以产生色烯的化合物。在血浆或S9肝微粒体碎片中孵育后，分析化合物的化合物种类消失与色烯和/或中间化合物出现的比率。

在37℃下在血浆或S9肝微粒体碎片(大鼠或人)中以一式三份孵育化合物(1μM)，将反应用乙腈淬灭，并通过LC/MS/MS(T＝0min、10min、20min、30min、45min和60min)分析样品。将标准反相HPLC和API 4000三重四极杆质谱法用于分析。由结果计算清除速率常数、体外半衰期和固有清除率。

表17.在大鼠或人S9肝微粒体碎片或新鲜血浆中孵育60min后相对于总可能(+/-S.D.)的色烯酸的释放最大百分比

体内一氧化氮释放的测量

本发明的化合物包含释放NO的部分，所述释放NO的部分在体内释放NO。通过向Sprague Dawley大鼠施用单次口服(PO)灌胃剂量测量一氧化氮释放的药物动力学(PK)。对于各个试验化合物使用2-6Sprague Dawley(IGS)雄性大鼠。研究前，使动物禁食并且仅在8-小时血液抽取后喂食。对动物称重并在治疗的当天按照体重分别给药。在2％DMSO/0.5％甲基纤维素/0.1％Tween 20的水溶液或2％DMSO/25％HP-β-CD(羟丙基-β-环糊精)的水溶液中以30-100mg/kg使用10mL/kg(体积/动物)来口服(PO)施用化合物。通过制备150mg/mLDMSO化合物储备液并加入至35℃-40℃下的温暖的媒介物以制备透明溶液或细悬浮液而配制化合物。对发现处于严重痛苦或垂死状态的动物实施安乐死。主要通过在不同时间尾静脉穿刺或隐静脉穿刺或通过颈静脉导管进行外周血收集(例如给药前，15min、30min、1h、2h、4h、8h和24h)。将全部的血液样品收集于K₂EDTA微量采血管中(Fisher#02-669-38)中，通过离心处理成血浆，并将血浆在-80℃下冷冻。

将解冻的血浆样品(30μL)连同对照大鼠血浆用PBS(70μL)稀释。将样品在2000x g下旋转10min并随后将80μL的30％PBS稀释的血浆样品转移至96-孔板的适当的孔中。在标准曲线孔中以100μM、33.3μM、11.1μM、3.7μM、1.23μM和0.41μM使用硝酸钠。向各个孔中添加10μL的硝酸还原酶溶液和10μL的所述酶的辅助因子溶液以将硝酸盐转化为亚硝酸盐(Cayman Chemical#780001硝酸盐/亚硝酸盐比色检测试剂盒)。将该板在在室温下孵育2h并随后向各个孔添加50μL的Griess试剂A，并混合。5min后，向各个孔中添加50μL的Griess试剂B，并混合。将该板在室温下孵育10min，并使用酶标仪测量在540nm下的吸光度。由参照标准孔产生标准曲线，并且测定各个抽取的血液的硝酸盐/亚硝酸盐(NO_x)水平(μM)和标准偏差(+/-S.D.)并以硝酸盐/亚硝酸盐(NOx)水平对血液抽取时间作图。

表18.在大鼠中口服施用后体内一氧化氮释放

血液取样时间	实例22a*	实例33a*	实例33**
				剂量(mpk)	62.6	66.0	33.0
给药前NOx(μM)	15.4(+/-2.8)	14.8(+/-1.9)	10.5(+/-3.0)
				30minNOx(μM)	20.5(+/-5.9)	21.4(+/-7.1)	10.5(+/-3.7)
1小时NOx(μM)	28.0(+/-0.4)	24.2(+/-4.6)	12.3(+/-3.9)
				2小时NOx(μM)	36.9(+/-0.4)	28.6(+/-7.5)	16.6(+/-6.0)
3小时NOx(μM)	43.1(+/-1.6)	34.8(+/-8.0)	20.8(+/-8.4)
				4小时NOx(μM)	36.0(+/-7.2)	23.4(+/-3.4)	23.0(+/-9.8)
8小时NOx(μM)	11.9(+/-3.0)	16.3(+/-9.4)	23.4(+/-8.5)
				24小时NOx(μM)	15.4(+/-2.8)	14.8(+/-1.9)	17.9(+/-2.7)

*两只大鼠的平均值 **三只大鼠的平均值

急性炎症的大鼠气囊模型

通过测量指示炎症反应的PGE2水平评估色烯释放的研究。本发明的化合物通过选择性COX-2抑制降低炎性反应，降低患者的PGE-2水平。

动物：收到Sprague-Dawley大鼠(Charles River Laboratories,R#3234,PO#738990,雄性,160-180g)，分别对其进行检查，并以每笼5只大鼠在笼子中饲养。出于识别的目的在大鼠的耳部作标记。

化合物和给药溶液：通过将40g(2-羟丙基)-β-环糊精(HP-β-CD,Sigma,Cat.332593,MKBJ5858V批次)溶解于160mL用于注射的无菌盐水(USP级(Hospira,26-801-FW批次))中制成过滤除菌(0.2μm,Nalgene,Cat.151-4020,批次1095610)的25％的溶液来制备媒介物。通过将0.6gλ-角叉菜胶(Fluka,Cat.22049,1318338批次)溶解于热的60mL用于注射的无菌盐水(USP级)中制备1％角叉菜胶溶液。将该溶液贮存在4-8℃。将测试化合物溶解于DMSO(Fisher Scientific,Cat.D128-500,874999批次)中以制备75mM的储备液。在50℃下将0.25mL的化合物的DMSO储备液与12.5mL的HP-β-CD溶液混合(最大DMSO浓度为媒介物的最终体积的2％)。所有测试化合物的最终浓度为1.5mM，并将化合物在制备后2h之内以0.01mmol/kg(每只大鼠12nmol测试化合物)给药。

第0天-气囊启动：在生物学工作橱中将大鼠麻醉，将颈部的颈背用70％的异丙醇(Butler Schein Animal Health,Cat.002498,29EMS07104547批次)随后1％的聚维酮-碘溶液(Ricca Chemical Co.,Cat.3955-16,2205469批次)清洗。使用固定于20mL注射器的23G×1¹/₂英寸针头皮下注射(SC)20mL的无菌(0.22μm,Millipore,Cat.SLGP033RS,R2KA55925批次,失效期为08/2015)空气。使大鼠恢复常规饲养。

第3天-气囊维护：在生物学工作橱中将大鼠麻醉，将颈部的颈背用70％的异丙醇随后1％的聚维酮-碘溶液清洗。使用固定于20mL注射器的23G×1¹/₂英寸针头皮下注射(SC)10mL的无菌空气。使大鼠在干净的笼子中恢复常规饲养。

第6天-化合物施用和角叉菜胶损害：在研究开始时，称量每只大鼠并根据平均体重分成5只大鼠/组的治疗组。每只大鼠以6.809mL/kg(1.6mL/235g)的它们各自的测试材料/媒介物经口服灌胃给药。在施用测试材料/媒介物两小时后，将1.0mL的室温的1％角叉菜胶盐水溶液注入大鼠的气囊中。角叉菜胶注射四小时后，将大鼠麻醉，并将5mL的分泌物缓冲液注入气囊。轻轻地按摩气囊，立即去除分泌物，并记录分泌物的体积。将分泌物收集于在冰浴上的血清分离管中。将分泌物离心(冷冻)并将等分的上清液贮存在-80℃下的标记的Eppendorf管中。

研究终止：在该研究的存活中的部分完成时，经CO₂窒息使动物安乐死，并根据标准方案处置尸体。

数据分析：将分泌物样品解冻至室温并通过ELISA(R&D Systems,Cat.KGE004B,307711批次)测定PGE2。通过比较治疗组与媒介物组的平均值测定对平均分泌物体积的治疗的统计显著性。测定各个组的平均细胞因子浓度和标准偏差。与媒介物组相比，测定了各个化合物组的对平均细胞因子浓度的治疗的统计显著性。通过Student’s t-Test对比对照组计算统计显著性(p-值)。使用下列方程计算相对于对照组生成的PGE2的百分比：

PGE2产量％＝(100/平均媒介物对照)*(均值检验)

PGE2产量S.D.％＝(100/平均媒介物对照值)*(S.D.)

表19.相对于对照PGE2产量的体内抑制百分比

COX-1&COX-2体外活性评估

本发明包括为色烯结合物的化合物，因此评估了它们的选择性COX-1抑制或COX-2抑制。在美国专利5,760,068中描述了COX-1和COX-2体外活性的测定。

重组COX-1和COX-2的制备：

1.将包含人或鼠科动物COX-1或COX-2的编码区的碎片克隆到杆状病毒转移载体的BamH1位点中以产生COX-I和COX-II的转移载体。

2.通过将杆状病毒转移载体DNA转染至SF9昆虫细胞中分离重组杆状病毒。

3.纯化重组病毒并制备病毒的高滴度储备液。

4.用重组杆状病毒储备液感染SF9昆虫细胞。72h后将细胞离心并将细胞沉淀均质化。将均浆离心并测定上清液的COX活性。

COX-1和COX-2活性测定：

1.使用ELISA检测形成的前列腺素将COX活性测定为形成的PGE2/μg蛋白质/时间。

2.在包含花生四烯酸的缓冲液中孵育包含适当的COX酶的昆虫细胞膜。

3.在添加花生四烯酸之前，用酶将化合物预孵育10-20min。

4.十分钟后停止花生四烯酸和酶之间的反应并通过标准的ELISA技术测量形成的PGE2。

抗增殖活性的评估

本发明的化合物旨在抑制患者的肿瘤的生长。使用可从美国典型培养物保藏中心(ATCC)获得的各种人肿瘤细胞诸如A549肺肿瘤细胞、DU145前列腺肿瘤细胞、HT29结肠癌细胞、MIA PaCa-2胰腺癌细胞、MCF-7(ER⁺)乳腺肿瘤细胞以及作为对照的BEAS-2B细胞(永生化正常肺上皮细胞)(Clin.Cancer Res.6,2006-2011(2000))在体外评估测试化合物的抗肿瘤生长潜力。使用基于MTT的细胞增殖测定法来测定测试化合物对细胞增殖的影响。在美国专利8,143,237中描述了基于MTT的细胞增殖测定法。

使用MTT细胞增殖测定试剂盒(Roche Applied Sciences,Germany)进行基于MTT[3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基溴化四唑]掺入的细胞增殖测定。根据供应商提供的说明书进行该测定。简言之，将相等数量的细胞接种在96-孔平底板中并用不同浓度下的测试化合物孵育三天。媒介物对照培养孔接收等体积的媒介物溶液。其后，向各个孔中添加0.5mg/mL的MTT试剂并将微孔板在37℃下在5％CO₂的存在下进一步孵育4h。随后通过添加增溶溶液溶解细胞并允许细胞在37℃下孵育过夜。在甲臜晶体完全溶解后，在酶标仪(BioRad,USA)中读取540nm处的吸光度。将从一式四份孔中获得的结果(平均光密度值(OD)±标准背离(SD))用来计算测试化合物的细胞增殖的抑制作用(50％的抑制浓度，IC₅₀)。

肺癌细胞迁移的抑制

本发明的化合物具有抗肺癌效果。进行功效测试以评估测试化合物对肺癌细胞迁移(转移的模型)的抑制。在Mol.Med.Reports 3,1007-1013(2010)中描述了评估肺癌细胞迁移的方法。

细胞培养：从美国典型培养物保藏中心(ATCC,Manassas,VA)获得人肺癌细胞A549。将细胞孵育在辅以10％胎牛血清(FBS)和青霉素/链霉素(GibcoBRL,Grand Island,NY,USA)的RPMI-1640介质中。

单层伤口愈合测定

本发明的化合物具有伤口愈合性能。在丝裂霉素C(3μg/mL)的存在下通过30分钟预孵育阻断在融合A549单层中的细胞增殖。在引入伤口前30min时，将在细胞培养缓冲液中的测试化合物添加于融合单层。随后用移液器尖头刮擦A549单层。在倒置显微镜上用相差显微镜评估伤口面积。以零至96h的间隔获得相同面积的图像。使用Paint.Net v.3.10软件从图像评估通过伤口愈合的细胞迁移率。细胞迁移表达为相对于在相同时间段内未处理的对照细胞，迁移面积的倍数变化。

用于静脉内(IV)、口腔灌胃(PO)或腹膜内(IP)施用的化合物制剂

使用25％羟丙基-β-环糊精-PBS缓冲液(HP-β-CD-PBS)以1mg/mL配制化合物用于施用。HBCD-PBS是优选的用于化合物施用的制剂介质。也可以使用其他的制剂媒介物，包括在盐水中的2％的Tween 80和在0.9％氯化钠水溶液中的20％的聚乙二醇(PEG-300)。

测试化合物在大鼠中的最大耐受量(MTD)的测定

为了估算用于恶性肿瘤的动物模型中的功效测试的测试化合物的剂量，测定了不良事件发生时的剂量。在Mol.Cancer Ther.5,1530-1538(2006)中描述了测定大鼠中MTD的方法。

为了测定剂量以用于功效研究，测定最大耐受量(MTD)。用各种浓度的测试化合物喂食雄性F344大鼠六周。基于在无死亡或无毒性迹象的情况下引起10％的体重损失的最高剂量测定MTD。每周记录两次体重。每天检查动物的毒性迹象。在结束时，使动物安乐死，并解剖和检查器官。

大鼠中的化合物代谢(PK)

通过向Sprague Dawley大鼠的单剂量静脉内(IV)施用测试化合物的药物动力学(PK)。

对于各个测试化合物，使用三只Sprague Dawley(IGS)雄性大鼠。对动物称重并在治疗的当天根据体重分别给药。通过外科手术植入的颈静脉导管，使用10mL/kg(体积/动物)以10mg/kg静脉内(IV)施用化合物。对发现处于严重痛苦或垂死状态的动物实施安乐死。主要通过在不同时间尾静脉穿刺或隐静脉穿刺进行外周血收集(T＝15min、30min、1h、2h、4h、8h和24h)。将全部血液样品收集在EDTA微量采血管中，通过离心处理成血浆，并将血浆在-80℃下冷冻。用使用标准反相HPLC和API 4000三重四极杆质谱的LC/MS/MS法进行生物分析。使用存在的化合物的量计算PK参数C_max、T_max和AUC。

化合物对血压的影响

已经显示COX-2抑制剂在体内对血压有不利影响，评估了本发明的化合物的效果对自发性高血压大鼠(SHR)中的血压影响。

在该研究中使用三十二只雄性、自发性高血压大鼠(SHR)、12-周龄(四组，每组八只)。最初，在整个研究中，每天通过尾套测量平均动脉血压(MAP)。动物经历2天的血压训练和1天的基线血压测量。对动物称重并在治疗的当天根据体重分别给药。在第一天以10mg/kg使用10mL/kg(体积/动物)将化合物口服施用(PO)或经腹膜内(IP)注射施用一次。给药后监测血压6天。测量总共7个时间点：第0天作为基线以及研究的第1天、第2天、第3天、第4天、第5天和第6天。对发现处于严重痛苦或垂死状态的动物实施安乐死。塞来昔布是在这些研究中测试的阳性对照。

抗炎功效：大鼠角叉菜胶足垫水肿：本发明的化合物是色烯的结合物，因此评估了它们在炎症模型中体内功效。在美国专利5,760,068中描述了测定在大鼠角叉菜胶足垫水肿中的功效的方法。

选择雄性Sprague Dawley大鼠使每组平均体重相等。禁食后，在测试前十六小时中可自由摄取水，用在包含0.5％的甲基纤维素和0.025％的表面活性剂的媒介物中的测试化合物对动物口服给药(1mL)。单独用媒介物对对照组给药。

给药后一小时，对所有的动物，在一只脚中施用0.1mL的1％的角叉菜胶/无菌0.9％盐水溶液的足底注射。使用位移体积描记仪测量注射脚的体积。在角叉菜胶注射三小时后再次测量脚体积。在治疗组和对照组之间比较三小时脚体积测量；计算水肿的抑制百分比。

抗炎功效-大鼠角叉菜胶诱发的痛觉缺失测试

本发明的化合物是色烯的结合物，因此在炎性痛觉缺失的模型中评估它们的体内功效。在美国专利5,760,068中描述了测定角叉菜胶诱发的痛觉缺失测试中的功效的方法。

选择雄性Sprague Dawley大鼠使每组平均体重相等。禁食后，在测试前十六小时中可自由摄取水，用在包含0.5％的甲基纤维素和0.025％的表面活性剂的媒介物中的测试化合物对动物口服给药(1mL)。仅用媒介物对对照组给药。

给药后一小时，对所有的动物，在一只脚中施用0.1mL的1％的角叉菜胶/无菌0.9％盐水溶液的足底注射。在角叉菜胶注射三小时后，将大鼠放置在地板下的有高强度光的树脂玻璃容器中。二十分钟后，在注射脚或未注射脚上开始热刺激。通过光电管测定脚撤离。测量直至脚撤离的时间并将其在治疗组和对照组之间进行比较。计算痛觉过敏的脚撤离的抑制百分比。

结肠癌的异种移植小鼠模型中的肿瘤生长抑制

本发明的化合物在患者中具有抗结肠癌效果。在癌症肿瘤的动物模型中进行功效测试。在J.Drug Delivery 2011,1-9(Article ID 869027)和Invest.New Drugs 2014,32(6),1105-12中描述了测定结肠癌的异种移植小鼠模型中肿瘤生长抑制的方法。

将HT-29细胞用胰蛋白酶处理，再悬浮于无菌PBS中，并通过在200×g下短暂离心而沉淀。将细胞沉淀再悬浮于无菌PBS并使用血细胞计数器计数。将细胞再悬浮于PBS中至最终浓度为5×10⁷个细胞/mL。用在0.1mL的PBS中的5×10⁶个HT-29细胞皮下注入雌性HRLNnu/nu小鼠的高位腋部区域。当平均肿瘤负荷为100-200mg(目标150mg，～10天的对数生长)(在该点开始治疗)时将小鼠筛分入治疗组(10只小鼠/组)。将小鼠分布在治疗组中使得每组中平均肿瘤负荷在总平均值的10％以内。每周3次记录体重和肿瘤测量值，并且每天记录临床症状。使用数显卡尺测定并根据公式V＝(L×W²)/2计算肿瘤体积，所述公式中V为体积，L为长度且W为宽度。根据体重分别对小鼠给药，每天一次(QD)或每天两次(每天两次或Q12Hx2)。在1％甲基纤维素/0.1％Tween-80/2％DMSO或2％DMSO/25％羟丙基-β-环糊精(HP-β-CD)的水溶液中配制测试化合物，并以1mpk、3mpk或10mpk经口服给药(p.o.)施用。施用5-FU(腹膜内给药；Q7Dx3；100mpk)和塞来昔布(口服给药；Q12Hx2；30mpk)作为阳性对照，并且单独施用媒介物作为作为阴性对照。对肿瘤负荷大于2g或发现处于垂死状态的动物实施安乐死，如果不对动物实施安乐死，则在治疗28天后收获并测量肿瘤。对离开研究的每个动物进行肉眼尸检并记录异常发现。基于相对于阴性对照的动物存活率和肿瘤生长抑制测量药物功效。

非小细胞肺癌(NSCLC)异种移植小鼠模型中的肿瘤生长抑制

本发明的化合物抑制患者的癌性肿瘤的生长。在癌症肿瘤的动物模型中进行功效测试。在Clin.Cancer Res.7,724-733(2001)中描述了测定NSCLC的异种移植小鼠模型中肿瘤生长抑制的方法并且其与上述用于结肠癌的具体方法类似。

对雌性HRLN nu/nu小鼠皮下注射在0.1mL的磷酸盐缓冲盐水中的1×10⁷个MV-522细胞。当肿瘤测量值为5x5mm时开始治疗。每周两次对小鼠称重并通过卡尺测量肿瘤。对动物实施安乐死，并在67天后或动物死亡时收获并测量肿瘤。基于动物存活率和肿瘤生长测量药物功效。

转基因小鼠中胆囊恶性腺瘤的生长抑制

本发明的化合物抑制患者的癌性肿瘤的生长。在癌症肿瘤的动物模型中进行功效测试。在Mol.Cancer Ther.6,1709-1717(2007)中描述了转基因小鼠中胆囊恶性腺瘤。

过表达鼠ErbB-2的纯合的BK5.ErbB-2转基因小鼠和非转基因的同窝小鼠接受对照AIN76A饮食或包含测试化合物的实验饮食一个月。转基因小鼠以90％的发生率发展胆囊恶性腺瘤。使用超声波图像分析和组织学评价测定化合物对胆囊肿瘤逆转为较温和的表型以及抑制肿瘤进展的影响。

偶氮甲烷处理的大鼠中结肠癌的抑制

本发明的化合物在患者中具有抗结肠癌效果。在癌症肿瘤的动物模型中进行功效测试。在Mol.Cancer Ther.5,1530-1538(2006)中描述了偶氮甲烷处理的大鼠的结肠癌。

对雄性F344大鼠(Charles River Breeding Laboratories)给予掺混于饮食中的测试化合物。在启动氧化偶氮甲烷诱发的结肠癌后测定测试化合物的功效。根据体重将大鼠随机分配至不同组并在笼子中饲养。每周两次对偶氮甲烷处理的动物以15mg/kg体重进行皮下注射(s.c.)。用正常盐水注射媒介物处理组。在第二次注射偶氮甲烷或盐水后两周时，将大鼠放置在对照饮食和包含测试化合物的饮食上，每两周测量体重直至结束(在最后一次氧化偶氮甲烷处理后52周)。解剖器官并在解剖显微镜下检查。

将直径>0.4cm的结肠肿瘤固定在10％中性缓冲的福尔马林中用于组织病理学评价。评估测试化合物对结肠细胞增殖的影响。通过免疫组织化学测定增殖细胞核抗原(PCNA)表达。将石蜡包埋的结肠切片并安装在载玻片上。添加1h的以1：200稀释的PCNA抗体(PharMingen,San Diego,CA)。洗涤切片，随后用第二抗兔IgG孵育(30min)。洗涤后，添加亲和素生物素复合试剂(Vector Laboratories,Burlingame,CA)。洗涤切片，添加3,3″-二氨基联苯胺，并用苏木精复染切片。基于每个腺管中的阳性细胞(棕色核)的数量计算增殖指数。

使用尿液PGE-M的患者选择

本发明的化合物抑制COX-2活性。尿液PGE-M可用作患有COX-2依赖性恶性肿瘤的患者中异常COX-2过表达的诊断标记物。因此，由于可将具有升高的PGE-M水平的患者作为用本发明的化合物治疗的目标，尿液PGE-M水平可用于患者选择。通常使用液相色谱/串联质谱的方法测量尿液PGE-M水平，所述方法如在Murphey,L.J.et al.:“Quantification ofmajor urinary metabolite of PGE2by a liquid chromatographic/massspectrometric assay:Determination of cyclooxygenase specific PGE2synthesis inhealthy humans and those with lung cancer”Anal.Biochem.2004,334,266-75以及美国专利申请2012/0016002A1中所述，其全部内容通过引用并入本文。可选地，也可以使用从诸如Cayman Chemical(Item Number 514531)的供应商可商购获得的ELISA试剂盒，遵循随附的技术文献中概述的方案测量尿液PGE-M水平，随附的技术文献的全部内容通过引用并入于此。

尿液PGE-M LCMS方案：简言之，用稀释的盐酸水溶液将0.75mL尿液酸化至pH值为3并随后通过用甲基肟盐酸盐处理将内源性PGE-M转化为O-甲基肟衍生物。用乙酸乙酯萃取甲基肟化的PGE-M，将其施加于C-18Sep-Pak并用乙酸乙酯洗脱。随后添加[²H₆]-O-甲基肟PGE-M内标。在与Thermo Finnigan Surveyor MS泵(Thermo Finnigan,San Jose,Calif.)连接的Zorbax Eclipse XDB-C18柱上进行液相色谱分析。对于内源性PGE-M，在选择的反应监测(SRM)模式中监测代表[M-OCH₃+H₂O]^-和类似的离子的主要产物离子m/z 336，代表氘代内标(M-OC[²H]₃+H₂O)]^-的m/z 339。利用m/z 336和m/z 339离子的质量色谱峰面积的比率对内源性PGE-M进行定量。使用来自SIGMA Company(St.Louis,Mo.)的测试试剂盒测量尿肌酸酐水平。在相同批次或相邻批次中分析各个病案-对照对的尿样以消除批间变异性。识别相对于对照尿液具有升高的PGE-M水平的个体并施用本文所述的治疗。

如同写入本文一样通过引用并入所有提及的文献。当介绍本发明的元素或其示例性实施方案时，冠词“一个/种(a)”、“一个/种(an)”、“所述(the)”和“所述(said)”意指存在一个/种或多个/种元素。术语“包含(comprising)”、“包括(including)”和“具有(having)”是包含性的并且意指可以存在列出的元素之外的其他元素。尽管相对于具体实施方案描述了本发明，但是不应将这些实施方案的细节解释为限制。

Claims

1.式(I)的化合物或药物可接受的盐，或者式(I)的化合物或盐的溶剂化物：

其中：

Z选自CF₃、OCF₃和C₂F₅；

R¹、R²、R³和R⁴各自独立地选自H、烷基、芳烷基、环烷基、环烯基、卤素、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烷硫基、卤代烷硫基、五氟硫烷基、羟基烷基、三烷基甲硅烷基、炔基和烯基；

–X–选自O、NH、S、

–L–为C_1-8亚烷基，其中至少一个–CH₂–基团任选地被独立地选自CH(R⁶)和C(R⁶)₂的基团替代，或–L–选自CH₂CH₂OCH₂CH₂、CH₂CH₂SCH₂CH₂、CH₂CH₂S-SCH₂CH₂、CH₂CH₂N(R⁷)CH₂CH₂、CH₂OCH₂CH₂、CH₂SCH₂CH₂、CH₂S-SCH₂CH₂、CH₂N(R⁷)CH₂CH₂、CH₂CH₂N(R⁷)CH₂和

R⁵选自H、烷基、环烷基、环烯基、芳基、芳烷基和杂环基；

R⁶独立地选自烷基、环烷基、环烯基、芳基、芳烷基、杂环基、羧基、羧基亚烷基和硝基氧基C_1-3亚烷基，条件是当–X–为O或NH且–L–为C_1-6亚烷基时，至少一个–CH₂–基团必须被独立地选自CH(R⁶)和C(R⁶)₂的基团替代；以及

R⁷选自H、烷基、环烷基、环烯基、芳基、芳烷基、杂环基、羧基、羧基亚烷基和酰基。

2.如权利要求1所述的化合物，其中：

Z为CF₃或CF₂CF₃；

R¹为H或甲基；

R²选自Cl、Br、甲基、三氟甲氧基和五氟硫烷基；

R³选自H、甲基和叔丁基；

R⁴选自H、Cl、甲基和乙基；

X选自O、NH、

R⁵为H或甲基；

R⁶选自甲基和硝基氧基C_1-3亚烷基，条件是当–X–为O或NH和–L–为C_1-6亚烷基时，至少一个–CH₂–基团必须被独立地选自CH(R⁶)和C(R⁶)₂的基团替代；以及

R⁷为甲基或酰基。

3.如权利要求1所述的化合物，其中：

R¹选自H、烷基和卤素；

R²选自烷基、卤素、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烷硫基、卤代烷硫基和五氟硫烷基；

R³选自H、烷基、环烷基、卤素、卤代烷基、羟基烷基和三烷基甲硅烷基；

R⁴选自H、烷基、卤素、炔基和烯基；

–X–选自O、NH、S、

R⁵选自H、烷基和环烷基；以及

R⁷选自H、烷基、环烷基、芳基、芳烷基、杂环基和酰基。

4.如权利要求3所述的式(III)的化合物，

其中：

R¹选自H、甲基、Cl和F；

R²选自Cl、Br、甲基、三氟甲氧基、五氟硫烷基、OCH₃、OCH₂CH₃、OCF₂H、SCH₃、SCH₂CH₃、SCF₃、SCF₂H、CF₃和CF₂CF₃；

R³选自H、甲基、叔丁基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、CH(CH₃)CH₃CH₂、CH₂CH(CH₃)₂、C(CH₃)₂CH₂OH、Cl、F、Br、CF₃和Si(CH₃)₃；

R⁴选自H、Cl、甲基、乙基、C≡CH、CH＝CH₂和Br；

–L–为C_1-6亚烷基，其中至少一个–CH₂–基团必须被独立地选自CH(R⁶)和C(R⁶)₂的基团替代，或–L–选自CH₂CH₂OCH₂CH₂、CH₂CH₂SCH₂CH₂、CH₂CH₂S-SCH₂CH₂、CH₂CH₂N(R⁷)CH₂CH₂和

R⁶独立地选自烷基、环烷基、芳基、芳烷基、杂环基、羧基、羧基亚烷基和硝基氧基C_1-3亚烷基；以及

R⁷选自H、烷基、环烷基和酰基。

5.如权利要求4所述的化合物，其中：

R¹为H或甲基；

R²选自Cl、Br、甲基、三氟甲氧基和五氟硫烷基；

R³选自H、甲基和叔丁基；以及

R⁴选自H、Cl、甲基和乙基。

6.如权利要求5所述的化合物，其中：

–L–为C_2-3亚烷基，其中至少一个–CH₂–基团被CH(R⁶)替代；以及

R⁶为硝基氧基甲基。

7.如权利要求6所述的化合物，独立地选自：

(S)-1,3-双(硝基氧基)丙-2-基6-氯-8-甲基-2-(三氟甲基)-2H-色烯-3-羧酸酯；

(S)-1,3-双(硝基氧基)丙-2-基6-溴-8-甲基-2-(三氟甲基)-2H-色烯-3-羧酸酯；

(S)-1,3-双(硝基氧基)丙-2-基8-乙基-6-(三氟甲氧基)-2-(三氟甲基)-2H-色烯-3-羧酸酯；

(S)-1,3-双(硝基氧基)丙-2-基6-(五氟硫烷基)-8-甲基-2-(三氟甲基)-2H-色烯-3-羧酸酯；

(S)-1,3-双(硝基氧基)丙-2-基6-(五氟硫烷基)-8-乙基-2-(三氟甲基)-2H-色烯-3-羧酸酯；以及

(S)-1,3-双(硝基氧基)丙-2-基7-(叔丁基)-6-氯-2-(三氟甲基)-2H-色烯-3-羧酸酯。

8.如权利要求5所述的化合物，其中：

–L–为

9.如权利要求8所述的化合物，独立地选自：

(S)-(3S,3aR,6R,6aS)-6-(硝基氧基)六氢呋喃并[3,2-b]呋喃-3-基6-氯-8-甲基-2-(三氟甲基)-2H-色烯-3-羧酸酯；

(S)-(3S,3aR,6R,6aS)-6-(硝基氧基)六氢呋喃并[3,2-b]呋喃-3-基6-溴-8-甲基-2-(三氟甲基)-2H-色烯-3-羧酸酯；

(S)-(3S,3aR,6R,6aS)-6-(硝基氧基)六氢呋喃并[3,2-b]呋喃-3-基8-乙基-6-(三氟甲氧基)-2-(三氟甲基)-2H-色烯-3-羧酸酯；

(S)-(3S,3aR,6R,6aS)-6-(硝基氧基)六氢呋喃并[3,2-b]呋喃-3-基6-(五氟硫烷基)-8-甲基-2-(三氟甲基)-2H-色烯-3-羧酸酯；

(S)-(3S,3aR,6R,6aS)-6-(硝基氧基)六氢呋喃并[3,2-b]呋喃-3-基6-(五氟硫烷基)-8-乙基-2-(三氟甲基)-2H-色烯-3-羧酸酯；以及

(S)-(3S,3aR,6R,6aS)-6-(硝基氧基)六氢呋喃并[3,2-b]呋喃-3-基7-(叔丁基)-6-氯-2-(三氟甲基)-2H-色烯-3-羧酸酯。

10.药物组合物，其包含治疗有效量的权利要求1所述的化合物和药物可接受的载体。

11.如权利要求10所述的药物组合物，进一步包含治疗有效量的选自以下的活性药物成分：抗炎药物、细胞抑制药物、细胞毒性药物、抗增殖剂和血管生成抑制剂。

12.治疗、预防或改善疾病病况的方法，其包括向有此需要的哺乳动物个体施用治疗有效量的权利要求1所述的化合物，其中所述疾病病况选自恶性肿瘤、光化性角化病、囊性纤维化和痤疮。

13.如权利要求12所述的方法，其中所述疾病病况选自非小细胞肺癌、皮肤癌、肝癌、结肠直肠癌(包括转移性结肠直肠癌和FAP)、胶质母细胞瘤(和其他CNS相关的恶性肿瘤)、鳞状细胞癌、膀胱癌、乳腺癌、胆道癌、子宫颈癌、前列腺癌、小细胞肺癌、卵巢癌、胰腺癌、头颈癌和胃肠癌。

14.如权利要求13所述的方法，其中所述病况是非小细胞肺癌。

15.如权利要求13所述的方法，其中所述病况是转移性结肠直肠癌。

16.愈合伤口的方法，其包括向有此需要的哺乳动物个体施用治疗有效量的权利要求1所述的化合物。

17.治疗、预防或改善疾病病况的方法，其包括向有此需要的哺乳动物个体施用治疗有效量的权利要求1所述的化合物，其中所述疾病病况具有COX-2过表达。