CN1060801C - 一种新的细菌菌种保存方法 - Google Patents

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本发明涉及一种新的细菌菌种保存方法。它使用一种特殊的棉拭子滚动沾取已培养的菌种菌苔，迅速放入已处理好的小管中，并拧紧管盖，立即放入-20℃至-30℃冰柜中保存，菌种可保存2年。

Description

一种新的细菌菌种保存方法
本发明属微生物工程技术领域，具体涉及一种新的细菌菌种保存方法。
经典的保存菌种方法常用冷冻真空干燥保存法。此法为：1．制备菌液。将待保存的新鲜纯培养物，以无菌手段研磨于脱脂牛奶中，制成浓厚菌悬液，分装于菌种管内，一般不超过菌种管球部的1／2，并做好标记。2．冷冻。将装好的菌种管放入冷冻干燥仪内，立即降温至-40℃以下，冷冻1h或过夜。3．干燥。然后将干燥仪转至抽真空状态连续3～6h，至球部菌液干燥成蜂窝状为止。4．真空封口。将干燥好的菌种管抽真空，达到所需真空度后，边抽真空边封口。5．检查，鉴定。干燥好的菌种管，用真空测定应达到所需真空度(10-1以上)。菌种外观呈蜂窝状，加入溶剂后可立即溶解。同时，还应进行细菌培养，检查存活情况，必要时再进行详细鉴定。6．保存。4℃保存，保存时间一年或数年。7．启用。将要用的菌种管取出，折断，用毛细管吸取少量盐水或肉汤，加入菌种管内待溶解后，即可转种使用。已有技术出处：1．《菌种保藏手册》，科学出版社1980，2．《卫生防疫微生物检验操作规程》，北京出版社1991。3．微生物学通报1989(4)220-224，王美芝等著L-干燥法和冷冻真空干燥法保藏放线菌效果比较。但经典的冷冻真空干燥法，在干燥过程中，需两次抽真空，使固化水分直接升华，细菌易受到损伤。其次，需要特殊仪器设备，一般实验室难于开展此工作。第三操作过程较为复杂。
本发明的技术方案如下：
1．使用菌种为35种细菌，259菌株，具体品种见表1．
2．使用培养基为常规培养基，它们是SS琼脂，泰康铠琼脂，普通营养琼脂，血琼脂，BCYE琼脂，营养肉汤。配方见表2。
3．将预定要保存的菌种，接种于相应培养基上，生长良好。
4．用特殊棉拭子滚动沾取菌苔，放入带螺盖的玻璃管中，拧紧管盖，迅速放入-20℃至-30℃冰柜中保存。菌种保存期为2年。
5．启用。从冰柜保存处取出，待温度升至室温后，直接接种于相应培养基上。
6．特殊棉拭子的制备。
将少许脱脂棉，缠绕在棉签上，然后浸泡于浸泡溶液中，浸透后取出棉拭子，50℃～60℃烘干，放入带螺盖的小玻璃管中，盖紧，灭菌备用。
浸泡溶液配方：按重量百分比，每一百份水溶液中，含结晶氯化钙0．005-0．015，硫乙醇酸钠0．05-0．15，丙酮酸钠0．005-0．015。其中水为去离子水。最佳配方为结晶氯化钙0．01，硫乙醇酸钠0．1，丙酮酸钠0．01，去离子水为99．88。
本发明有如下优点：1．适用于大量菌种保存。2．保存的细菌，直接吸附于灭菌和特殊处理的棉拭子上，无需真空干燥，立即进入干燥环境，保持细菌体内固有水分，能更好地保持细菌原有特性。3．化学药品能使保存的微小环境，呈缺氧状态，使细菌免于氧化作用。4．不需特殊保护剂。5．适于科研机关使用，更便于基层单位使用，有推广使用价值。6．减少污染。7．成本低，不需特殊设备。
本方法效果良好：在正式试验中，使用菌种35个种，菌株259菌株，经过3年观察试验，本发明以直接分离，接种相应平板上，全部试验用菌株生长良好，存活率为100％，冷冻真空干燥保存法，用直接分离，转种相应平板上，有13株菌未见生长，即使用复苏修补培养法进行增殖，仍未见生长，存活率为94．98％。两种方法保存菌种比较见表1．
本发明有附图：图1中1．棉拭子，2．玻璃管，3．螺纹管盖。
实施例：1．使用肺炎链球菌，培养肉汤按常规接种、培养。
2．将少许脱脂棉，缠绕在棉签上，浸泡在浸泡液中，浸透后取出棉拭子。浸泡液配方为：结晶氯化钙0．01％，硫乙醇酸钠0．1％，丙酮酸钠0．01％，去离子水为99．88％(配至100ml)。将浸透棉拭子50℃烘干，放入带螺盖小瓶中，紧盖，灭菌。
3．用棉拭子滚动沾取菌苔，放入小管，拧紧盖，迅速放入-20℃冰柜中保存，可保存2年。
表1    两种方法保存菌种比较(正式试验)
          本发明           已有技术
细菌名称 菌株数 保存时间(月) 存活数 存活率％ 保存时间(月) 存活数 存活率％
嗜肺军团菌
Legionell pneumophila 7   36         7      100   40        1      14.29
淋病双球菌
Neisseria onorrbeae    5    36     5    100    40    2    40．00
脑膜炎双球菌
Neisseria meingifdis   1    36     1    100    40    1    100
肺炎链球菌
Streptococci pneumi    2    36     2    100    40    1    100
化脓链球菌
Streptococci pyoges    3    36     3    100    36    3    100
金黄色葡萄球菌
Staphylococci aurs    60    36    60    100    36    60    100
腐生葡萄球菌
Staphylococci         15    36    15    100    36    15    100
sprophyticus
表皮葡萄球菌
Staphylococci         27    36    27    100    36    27    100
oidermidis
孔氏葡萄球菌
Staphylococci cohnii  10    36    10    100    36    10    100
中间型葡萄球菌
Staphylococci         13    36    13    100    36    13    100
intermedius
木糖葡萄球菌
Staphylococci zylosus  4    36     4    100    36     4    100
家畜葡萄球菌
Staphylococci oyicus  16    36    16    100    36    16    100
松鼠葡萄球菌
Staphylococci sciuri   5    36     5    100    36     5    100
铜绿色假单胞菌
Pseudomonas aruginosa  1    36     1    100    36     1    100
白色念珠菌
Candida albicans       1    36     1    100    36     1    100
单核细胞增多性李斯特
氏菌
Listeria monocytogenes 1    36     1    100    36     1    100
铜绿色假单胞菌
Pseudomonas aeruginosa 1    36     1    100    36     1    100
白色念珠菌
Candida albicans       1    36    1    100    36    1    100
霍乱弧菌
Vibro cholerae         1    36    1    100    36    0    0
溶藻性弧菌
Vibro alginolyficus    1    36    1    100    36    0    0
嗜水气单胞菌
Aeromonas hydrophila  30    36   30    100    36    30   100
枯草杆菌
Bacillus subtilis      1    36    1    100    36    1    100
小肠结肠炎耶尔森氏菌
Yercinia               2    36    2    100    36    2    100
enterocolitica
志贺氏菌属
Shigella spp           3    36    3    100    36    3    100
沙门氏菌属
Salmonella spp        14    36   14    100    36    14    100
大肠杆菌
Escherichia coli      20    36   20    100    36    20    100
肺炎克雷伯氏菌
Klebsiella pneumoniae  2    36    2    100    36    2    100
粘质沙雷氏菌
Serratia marrescens    1    36    1    100    36    1    100
奇异变形杆菌
Proteus mirabilis      2    36    2    100    36    2    100
普通变形杆菌
Proteus vulgaris       1    36    1    100    36    1    100
莫根氏菌
Morganella morganii    1    36    1    100    36    1    100
碱化普雷菲登斯菌
Providencia            1    36    1    100    36    1    100
alcalifacies
雷极普雷菲登氏菌
Procidencia rettgeri   1    36    1    100    36    1    100
蜂窝哈夫尼亚菌
Hafinia alvei          2    36    2    100    36    2    100
阴沟肠杆菌
Enterobacter cloacae 1  36    1    100  36    1    100
格高菲肠杆菌
Enterobacter gergobiae 1  36    1    100  36    1    100
柠檬酸杆菌
Cifrobacter spp    3  36    3    100  36    2    66．67
总计    259       259   100       246   94．98
表2．
培养基处方：1．SS琼脂：
  g：牛肉浸膏5，蛋白胨5，乳糖10，3号胆盐8．5，柠檬
  酸钠8．5，硫代硫酸钠8．5，柠檬酸铁1，琼脂13．5，煌
  绿0．00033，中性红0．025，蒸馏水1000ml。2．麦康铠琼脂：
  g：蛋白胨17，多价胨3，乳糖10，胆盐1．5，氯化钠5，
  中性红0．03结晶紫0．001，蒸馏水1000ml。pH 7．1。3．普通营养琼脂：
  g：pH7．6牛肉膏汤1000ml，琼脂2。4．血琼脂：
  g：pH7．6普通营养琼脂1000ml，加脱纤维羊血5-10ml。5．BCYE琼脂：
  g：N-2-乙酰氨基-2-氨基乙烷磺酸(ACES)10，酵母
  浸膏10，活性炭2，琼脂17，L-半胱氨酸盐酸盐0．4，可
  溶性焦磷酸铁0．25，蒸馏水1000ml。6．营养肉汤：
  g：牛肉浸液1000ml，蛋白胨10，氯化钠5，磷酸氢二钾2。

Claims (2)

1．一种新的细菌菌种保存方法，其特征在于本方法按如下步骤进行：
(1)将预定要保存的菌种，接种于相应培养基上，生长良好；
(2)将少许脱脂棉，缠绕在棉签上，然后浸泡含结晶氯化钙0．005-0．015份、硫乙醇酸钠0．05-0．15份、丙酮酸钠0．005-0．015份的去离子水浸泡溶液中(重量百分比，即在每一百份浸泡溶液中)，浸透后取出棉拭子，于50～60℃烘干，放入带螺盖的玻璃管中，拧紧盖，灭菌备用，
(3)用经过(2)处理的棉拭子滚动沾取菌苔，放入带螺盖的玻璃管中，拧紧管盖；
(4)迅速放入-20℃至-30℃冰柜中保存；
(5)启用时，从冰柜取出，待温度升至室温后，直接接种于相应培养基上。
2．根据权利要求1所述的一种新的细菌菌种保存方法，其特征在于步骤中的按重量百分比，每一百份浸泡溶液中含结晶氯化钙0．01份，含硫乙醇酸钠0．1份，含丙酮酸钠0．01份。
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Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1123561A (zh) * 1993-05-14 1996-05-29 美国3M公司 用于快速计数大肠杆菌类细菌的培养基
CN1096819A (zh) * 1993-06-23 1994-12-28 铜陵市卫生防疫站 一种长效保存空肠弯曲菌群培养基及制备方法
CN1117080A (zh) * 1995-01-11 1996-02-21 刘波 苏云金芽胞杆菌培养基

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