CN106075397A - 一种治疗骨折的中药贴膏剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种治疗骨折的中药贴膏剂及其制备方法,属于中药领域。以鹿茸提取物为主要成分,利用传递体将其进行包埋,再加入川续断、骨碎补、三七的提取物,与适当辅料一起共同制成中药贴膏剂,用于骨折、骨裂的治疗。本发明中引入鹿茸提取物治疗骨折,极大地加快了骨折后骨组织的生长速度,缩短了骨折康复所需要的时间。为了促进鹿茸中有效成分的透皮吸收率,本贴膏剂引入了传递体的技术,有效地提高了鹿茸提取物中多种生长因子的透皮吸收率,极大地提高了药效,为首次将传递体引入贴膏剂型,进行临床应用。
Description
技术领域
本发明属于中药领域,尤其涉及一种利用鹿茸生长因子和川续断、骨碎补、三七等药材制成贴膏剂的方法,主要用于治疗骨折,可以加快断骨的生长速度,促进骨折的愈合。
背景技术
鹿茸作为珍贵的药材始载于《神农本草经》,是鹿科动物梅花鹿(Cervus nipponTemminck)或马鹿(Cervus elaphus linnaeus)的雄鹿未骨化密生绒毛的幼角(中国药典2015年版一部),性味甘、咸、温,具有生精补髓,养血益阴,强筋健骨,治一切虚损、耳聋的作用(《本草纲目》)。
鹿茸的生长由软骨内骨化产生,生长速度可以达到每日2cm,在动物界几乎是最快的。近年研究发现,鹿茸中含有多种生长因子,共同促进成骨细胞、神经细胞、成纤维细胞及上皮细胞的生长,其中包括胰岛素样生长因子(Insulin Like Growth Factor,IGF);表皮生长因子(Epidermal Growth Factor);神经生长因子(Nerve Growth Factor);转化生长因子(Transforming Growth Factor)等,它们是鹿茸药效作用的物质基础,在临床治疗方面有广阔的开发前景(崔昊震,尹明浩.鹿茸生长因子的研究现状[J].延边大学医学学报,2006,29(1):70-72)。鹿茸生长因子的药理作用使得它在促进骨折愈合方面有很大的应用前景,近年国内也有多篇相关研究报道(周秋丽,王丽娟,郭颖杰,等.鹿茸多肽对实验性骨折的治疗作用及机理研究[J].白求恩医科大学学报,1999,25(5):586-588.)。
川续断、骨碎补和三七是治疗骨折的常用中药。现代药理证明,川续断具有促进骨迦生成,加速胶原形成,促进骨细胞增殖的作用;骨碎补可以激活成骨细胞,提高骨密度,加速成骨细胞的早期分裂增殖,促进骨折早期断骨的生长(裴启洋,贾天柱.接骨中药研究进展.中国中医骨伤科杂志,2013(6):67-69);三七具有活血化瘀、消肿止痛的功效,可用于跌打损伤、筋断骨折、瘀血肿痛的治疗(张传辉,贾成友,李微.三七接骨凝胶膏剂的制备及体外透皮特性研究.中草药,46(5):654-664)。本发明的药物组方来源于经方的加减方。原方为《骨伤方剂学》中的“接骨膏”,精简后留下鹿茸,续断和骨碎补,加上三七活血祛瘀,共同治疗骨折,促进断骨的生长。
发明内容
本发明提供一种治疗骨折的中药贴膏剂及其制备方法,用于加快骨折后断骨的生长,促进骨折愈合,缩短骨折后康复所需时间。
本发明采取的技术方案是:是由下列方法制得的:
(1)鹿茸生长因子的提取:称取鹿茸冻干粉一定量,加入4-6倍体积的4M、pH=3的Tris盐酸-磷酸盐缓冲液,10-15℃下超声提取30分钟,减压抽滤,滤液于4℃低温放置,药渣重复上述提取步骤,第二次和第三次提取加3倍体积4M、pH=3的Tris盐酸-磷酸盐缓冲液,合并3次提取液,在冰浴下以10-30KDa超滤膜进行超滤,至剩余1/20体积,-20℃下预冷冻,在-40℃至-60℃下进行冷冻干燥,即得鹿茸生长因子提取物;
(2)传递体的制备:取步骤(1)制备的鹿茸生长因子提取物一定量称重,加入缓冲液溶解,与1-2倍量磷脂、1/6倍量辅料和10倍体积的溶剂混匀,加热旋转1-1.5小时,至形成均匀的脂质膜,即得鹿茸生长因子传递体;
(3)川续断、骨碎补和三七提取物的制备:按重量份取川续断2-4份,骨碎补1-2份,三七1-2份,加4~6倍量水共煎1小时,过滤,药渣同法煎煮2次,滤液合并,浓缩至浸膏状,加乙醇至醇度为70%,静置过夜,过滤,滤液回收溶剂至干,残渣粉碎,过100目筛,即得川续断、骨碎补和三七的提取物药粉;
(4)取步骤(2)制备的鹿茸生长因子传递体3-7份,步骤(3)制备的药粉25-30份,与贴膏剂辅料混合,搅拌均匀,涂布在10×8cm背衬布上,即得。
本发明所述步骤(2)中缓冲液包括磷酸缓冲液或醋酸-醋酸铵缓冲液。
本发明所述步骤(2)中辅料包括胆固醇或脱氧胆酸钠。
本发明所述步骤(2)中溶剂包括乙醚、石油醚、氯仿或乙醇。
本发明所述步骤(4)中贴膏剂辅料采用如下重量体积份的原料:明胶4-6份,羧甲基纤维素钠1-2份,甘油30-40份,水80-120份。
脂质体(liposome)指某些细胞质中的天然脂质小体,具有亲水和亲脂的双分子层结构,为直径介于20至1000纳米的球体。脂质体可以和细胞膜融合,并通过融合、内吞等细胞膜动作进入细胞。利用这个特点,现代药剂中常利用脂质体作为给药系统,以提高药物的生物利用度。传递体是脂质体的一种,它与普通的脂质体相比具有更好的弹性,可以通过比自己体积小的毛孔,从而克服皮肤对药物的阻碍,提高透皮吸收率。
本发明将鹿茸生长因子与川续断、骨碎补和三七等药材的提取物一起制成贴膏剂,用于外伤骨折的治疗。由于鹿茸生长因子为分子量较大的多肽类成分,皮肤透过率低,透皮吸收生物利用度低,因而采用传递体技术,先将鹿茸生长因子包裹在传递体中,再与其余药材提取物一起制成贴膏剂,极大地提高了药物的透皮吸收率,提高了药效。将传递体技术应用到中药贴膏剂中,为本发明在国内的首创。
本发明与现有技术相比,其优点在于:
(1)将传递体技术引入中药贴膏剂中,提高了贴膏剂中多肽类药物的透皮吸收率,从而可以将鹿茸生长因子用于外用膏剂中,有利于加速骨折患者的康复速度。
(2)本发明的中药配方为经方“接骨膏”基础上的加减方,新方中留下原来经方中的主药鹿茸,并将其治疗骨折的主要活性成分:鹿茸生长因子分离出来,作为活性组分加入制剂;留下了原方中的川续断和骨碎补,二者主要的作用是促进骨组织生长,是中药材中具有接骨作用的重要药材,另加入三七促进活血化瘀,使损伤部位止血消炎,有利于新骨生长,研究中采用动物活性实验筛选出各味药材的最佳配比,本制剂采用现代药物制剂新技术将中药材的活性成分提取出来,并采用适当的配比制成新的制剂,增强了促进断骨生长的药效,简化了原有方剂的组成,更加有利于工业化生产和质量控制。经过药理实验证明,本发明促进断骨生长的效果优于接骨片,真正使古老的方剂达到了疗效确切、质量可控、副作用低的现代化要求。
附图说明
图1a是未给药的对照组第二周X光检测图;
图1b是未给药的对照组第三周X光检测图;
图1c是未给药的对照组第四周X光检测图;
图2a是接骨片组第二周X光检测图;
图2b是接骨片组第三周X光检测图;
图2c是接骨片组第四周X光检测图;
图3a是本发明贴膏剂组第二周X光检测图;
图3b是本发明贴膏剂组第三周X光检测图;
图3c是本发明贴膏剂组第四周X光检测图;
图4a是本发明贴膏剂组给药后第一周HE染色结果图;
图4b是接骨片组给药后第一周HE染色结果图;
图4c是给生理盐水组第一周HE染色结果图;
图5a是本发明贴膏剂组给药后第一周MASSON染色结果图;
图5b是接骨片组给药后第一周MASSON染色结果图;
图5c是给生理盐水组第一周MASSON染色结果图;
图6a是本发明贴膏剂组给药后第二周HE染色结果图;
图6b是接骨片组给药后第二周HE染色结果图;
图6c是给生理盐水组第二周HE染色结果图;
图7a是本发明贴膏剂组给药后第二周MASSON染色结果图;
图7b是接骨片组给药后第二周MASSON染色结果图;
图7c是给生理盐水组第二周MASSON染色结果图。
具体实施方式
实施例1
(1)鹿茸生长因子的提取:称取鹿茸冻干粉500g,加入4M的pH值为3的Tris盐酸-磷酸盐缓冲液2L,10℃下超声提取30分钟,减压抽滤,滤液于4℃低温放置;药渣重复上述提取步骤,第二次提取加Tris盐酸-磷酸盐缓冲液1.5L,第三次提取加入Tris盐酸-磷酸盐缓冲液1.5L,合并3次提取液,在冰浴下以10KDa超滤膜进行超滤,至剩余体积为250mL,-20℃下预冷冻,在-40℃下进行冷冻干燥,得到鹿茸生长因子提取物12.6g;
(2)传递体的制备:精密称取大豆磷脂12g、胆固醇2g溶解于120ml乙醚中,将鹿茸生长因子提取物12g溶解在磷酸缓冲液中,与上述试剂混匀,加热旋转1小时,至形成均匀的脂质膜,即得鹿茸生长因子传递体;
(3)取川续断200g,骨碎补100g,三七100g,加4倍体积水共煎1小时,过滤,药渣同法煎煮2次,滤液合并,浓缩至浸膏状,加乙醇至醇度为70%,静置过夜,过滤,滤液回收溶剂至干,残渣粉碎,过100目筛,即得川续断、骨碎补和三七的提取物药粉65.8g;
(4)取鹿茸生长因子传递体3ml,提取物药粉25g,明胶4g,羧甲基纤维素钠1g,甘油30ml,水80ml混匀,制成10×8cm贴膏剂20贴。
实施例2
(1)鹿茸生长因子的提取:称取鹿茸冻干粉1000g,加入4M的pH为3的Tris盐酸-磷酸盐缓冲液5L,15℃下超声提取30分钟,减压抽滤,滤液于4℃低温放置;药渣重复上述提取步骤,第二次提取加缓冲液3L,第三次提取加入缓冲液3L,合并3次提取液,在冰浴下以20KDa超滤膜进行超滤,至剩余体积为550mL,-20℃下预冷冻,在-50℃下进行冷冻干燥,得到鹿茸生长因子提取物24.9g;
(2)传递体的制备:精密称取大豆磷脂36g、脱氧胆酸钠4g溶解于240ml乙醇中,将鹿茸生长因子提取物24g溶解在缓冲液中,与上述试剂混匀,加热旋转120分钟,至形成均匀的脂质膜,即得鹿茸生长因子传递体;
(3)取川续断300g,骨碎补150g,三七150g,加5倍体积水共煎1小时,过滤,药渣同法煎煮2次,滤液合并,浓缩至浸膏状,加乙醇至醇度为70%,静置过夜,过滤,滤液回收溶剂至干,残渣粉碎,过100目筛,即得川续断、骨碎补和三七的提取物药粉135.2g;
(4)取鹿茸生长因子传递体10ml,提取物药粉56g,明胶10g,羧甲基纤维素钠3g,甘油70ml,水200ml混匀,制成10×8cm贴膏剂40贴。
实施例3
(1)鹿茸生长因子的提取:称取鹿茸冻干粉1500g,加入4M的pH为3的Tris盐酸-磷酸盐缓冲液6L,15℃下超声提取30分钟,减压抽滤,滤液于4℃低温放置,药渣重复上述提取步骤,第二次提取加缓冲液4.5L,第三次提取加入缓冲液4.5L,合并3次提取液,在冰浴下以30KDa超滤膜进行超滤,至剩余体积为750mL,-20℃下预冷冻,在-60℃下进行冷冻干燥,得到鹿茸生长因子提取物38.2g;
(2)传递体的制备:精密称取大豆磷脂72g、胆固醇6g溶解于360ml乙醚中,将鹿茸生长因子提取物36g溶解在缓冲液中,与上述试剂混匀,加热旋转1.5小时,至形成均匀的脂质膜,即得鹿茸生长因子传递体;
(3)取川续断400g,骨碎补200g,三七200g,加6倍体积水共煎1小时,过滤,药渣同法煎煮2次,滤液合并,浓缩至浸膏状,加乙醇至醇度为70%,静置过夜,过滤,滤液回收溶剂至干,残渣粉碎,过100目筛,即得川续断、骨碎补和三七的提取物药粉138.3g;
(4)取鹿茸生长因子取传递体28ml,中药粉120g,明胶24g,羧甲基纤维素钠8g,甘油160ml,水480ml,制成10×8cm贴膏剂80贴。
实验例1本发明对骨折小鼠的促进断骨生长实验研究结果如下:
取ICR小鼠25只,用水合氯醛麻醉成功后,手术将小鼠右后肢剪断再缝合,造成小鼠后腿骨折模型,之后分成对照组、接骨片组和贴膏剂组,分别给药四周,在第2、3、4周分别照X光检测小鼠断骨的生长,结果表明贴膏剂组的断骨生长速度明显优于对照组和接骨片组,第2周对照组和接骨片组的动物骨迦还没有开始形成,而贴膏剂组骨迦开始形成;第3周贴膏剂组的动物骨迦成熟度较其它两组要高,接骨片组骨迦少于贴膏剂组,对照组仅有少量骨迦形成;第4周贴膏剂组动物骨折部位基本愈合,而接骨片组有少量骨迦没有脱落,对照组的动物还有大量骨迦没有脱落。部分动物X光检测结果如图1a~c、图2a~c、图3a~c所示;
实验结果表明,本发明贴膏剂对小鼠骨折愈合有明显促进作用,效果优于接骨片。
实验例2本发明对骨折小鼠的促进断骨生长的病理研究结果如下:
取ICR小鼠25只,用水合氯醛麻醉成功后,手术将小鼠右后肢剪断再缝合,造成小鼠后腿骨折模型,之后分成对照组、接骨片组和贴膏剂组,分别给药四周,在第1、2周分别取骨组织切片,检测骨组织的生长情况,结果表明贴膏剂组的情况明显优于对照组和接骨片组。
通过HE和Masson染色可知,第一周总体表现为骨痂中心区尚存胶原纤维,未完全形成软骨连接,靠近骨折断端的软骨细胞相对成熟,骨折断端骨板边缘骨小梁形成。给药组的愈合情况比生理盐水组好,贴膏剂组效果最好,效果优于接骨片组。具体表现为贴膏剂组骨折区域胶原纤维增生填充并软骨化,靠近骨板的软骨骨化形成骨性连接,即骨小梁形成;接骨片组均有不同程度的骨折断端处成片密集杂乱排列的纤维组织增生,断骨端骨板外少量骨小梁形成;生理盐水组骨折中心区胶原纤维增生,血管丰富,少量胶原纤维软骨化。实验结果如图4a~c、图5a~c、图6a~c、图7a~c所示;
病理实验结果表明,本发明贴膏剂组骨折恢复情况优于接骨片组和生理盐水组。
实验例3川续断、骨碎补和三七的配比研究。
1实验方法
1.1实验动物
6周龄、体重30.0±2.0g的健康ICR小鼠48只,雌雄各半,由白求恩医科大学实验动物部提供,整个实验过程都遵守动物保护和应用委员会的相关指导文件,小鼠取回后要对其进行称量体重并用苦味酸标记。
1.2小鼠胫骨骨折模型的建立
将小鼠在自制固定板上固定,用10%水合氯醛进行腹腔注射麻醉(4ml/kg),待小鼠完全麻醉后,小鼠左后肢内侧备皮,80%酒精对术区进行消毒清洗,消毒后沿左腿部内侧近端到跟骨结节约10mm处做一纵行5-7mm处切口。钝性剥离胫骨周围软组织和肌肉,显露胫骨将其横行剪断然后缝合伤口,缝合后清理创面,用医用纱布进行外固定,造模后未出现死亡,所有小鼠均给予常规青霉素(1.87mg/30g)肌肉注射3天,给予青霉素的同时也给予相应的药物。造模成功的小鼠随机分为11组,动物分笼饲养,每笼8只,清洁环境下饲养,室温21℃~23℃,湿度30%~40%,自由饮水,标准饲料喂养,定期紫外线消毒与排风。
1.3给药途径的确定
生理盐水和接骨片灌胃给药(每天给药一次);贴膏剂组按照贴膏剂的给药方式给药(隔日给药)。
1.4实验分组(单位:mg/30g)
按照正交法设计三七、续断、骨碎补的用量,分组如下。
表1动物实验分组
1.5X光检查
给药7,14,21,28d,各组取小鼠拍摄X光片。将小鼠用10%的水和氯醛腹腔注射麻醉(4ml/kg)后固定,使用Kodak小动物活体成像系统拍摄X光片,根据骨枷形成的大小、骨折线的清晰度、骨髓腔是否通畅来确定小鼠骨折愈合的程度。
1.6HE和MASSON染色
给药后7d和14d,取骨折处的胫骨进行HE和Masson染色。分离术侧桡骨标本后,仔细剥离周围肌肉及软组织得骨折处胫骨及骨痂标本,将标本组织立即泡于10%福尔马林固定液中固定24h,常规石蜡包埋、切片,制成5μm切片。切好的石蜡切片置于电热恒温干燥箱中60℃烘烤3h,置于光学显微镜下进行观察。
1.7血清中ALP和血钙含量检测
将给药7d,14d,28d的小鼠处死前取出小鼠一侧眼球,使球后动静脉断裂出血,试管盛血,将所取血液以5000r/min离心15min,取上层血清于Eppendorf管中,-27摄氏度低温冰箱中保存待测,将所取上层血清采用Unicel DXC 800全自动生化仪测定血清中ALP和血钙的含量。碱性磷酸酶在骨形成中至关重要,其增加能够体现骨重建的活跃性改变,作为成骨细胞活动性增加的指征。ALP可以分解有机磷酸化合物,产生大量无机磷酸盐离子,促使其与钙离子结合成磷酸钙而沉淀于骨组织内,成骨细胞分泌的ALP能够渗透入血,因此血清ALP检测也被作为观察骨折愈合的指标之一。
2实验结果
2.1X光检测结果
采用十分制评分系统。由于第一周不能看见明显的骨痂和骨髓腔的变化,所以只考虑骨折线的情况;第二、三周的骨髓腔都未通畅,没有明显差距,没有比较意义,所以考虑骨痂大小和骨折线的变化情况;第四周可综合考虑骨痂大小,骨折线的清晰度和骨髓腔的通畅情况。通过分析比较第一、二、三和四周的综合情况,可得出最佳实验方案为B3C2A2,即:川续断2-4份,骨碎补1-2份,三七1-2份,为药效最佳的配比。
表2第三周X光实验结果
2.2组织切片实验结果
第一周实验结果表明给药组的愈合情况比生理盐水组好,贴膏剂第6组效果最好,且比其他膏剂和接骨片组效果都明显。第二周组织切片结果表明骨痂内纤维组织明显减少,大部分被软骨细胞取代,形成明显的软骨连接,个别形成骨小梁连接。第5、6组愈合情况最好,骨折区域不见胶原纤维增生和软骨形成,编织骨交织成网,骨小梁连接形成;生理盐水组依然可见骨痂内纤维组织,尚未形成骨小梁连接。接骨片组均可见骨折区域胶原纤维增生填充并软骨化,软骨骨性连接形成。综上所述,第六组A2B3C1的愈合状况最好。
2.3血清中ALP和血钙含量检测
采用综合加权评分法,其基本思想是兼顾各项指标,综合起来评出分数,以各号试验得分的多少评价试验结果的好坏,即化多指标为单指标进行分析,其做法可先把各号试验的每个指标分别转换为分数,然后根据各项指标的重要程度,综合加权评分,得出最佳实验结果是B3A2C2,和x光得到的最佳组合剂量一样。
Claims (10)
1.一种治疗骨折的中药贴膏剂,其特征在于是由下列方法制得的:
(1)鹿茸生长因子的提取:称取鹿茸冻干粉一定量,加入4-6倍体积的4M、pH=3的Tris盐酸-磷酸盐缓冲液,10-15℃下超声提取30分钟,减压抽滤,滤液于4℃低温放置,药渣重复上述提取步骤,第二次和第三次提取加3倍体积4M、pH=3的Tris盐酸-磷酸盐缓冲液,合并3次提取液,在冰浴下以10-30KDa超滤膜进行超滤,至剩余1/20体积,-20℃下预冷冻,在-40℃至-60℃下进行冷冻干燥,即得鹿茸生长因子提取物;
(2)传递体的制备:取步骤(1)制备的鹿茸生长因子提取物一定量称重,加入缓冲液溶解,与1-2倍量磷脂、1/6倍量辅料和10倍体积的溶剂混匀,加热旋转1-1.5小时,至形成均匀的脂质膜,即得鹿茸生长因子传递体;
(3)川续断、骨碎补和三七提取物的制备:按重量份取川续断2-4份,骨碎补1-2份,三七1-2份,加4~6倍量水共煎1小时,过滤,药渣同法煎煮2次,滤液合并,浓缩至浸膏状,加乙醇至醇度为70%,静置过夜,过滤,滤液回收溶剂至干,残渣粉碎,过100目筛,即得川续断、骨碎补和三七的提取物药粉;
(4)取步骤(2)制备的鹿茸生长因子传递体3-7份,步骤(3)制备的药粉25-30份,与贴膏剂辅料混合,搅拌均匀,涂布在10×8cm背衬布上,即得。
2.根据权利要求1所述的一种治疗骨折的中药贴膏剂,其特征在于:所述步骤(2)中缓冲液包括磷酸缓冲液或醋酸-醋酸铵缓冲液。
3.根据权利要求1所述的一种治疗骨折的中药贴膏剂,其特征在于:所述步骤(2)中辅料包括胆固醇或脱氧胆酸钠。
4.根据权利要求1所述的一种治疗骨折的中药贴膏剂,其特征在于:所述步骤(2)中溶剂包括乙醚、石油醚、氯仿或乙醇。
5.根据权利要求1所述的一种治疗骨折的中药贴膏剂,其特征在于:所述步骤(4)中贴膏剂辅料采用如下重量体积份的原料:明胶4-6份,羧甲基纤维素钠1-2份,甘油30-40份,水80-120份。
6.如权利要求1所述的一种治疗骨折的中药贴膏剂的制备方法,其特征在于包括下列步骤:
(1)鹿茸生长因子的提取:称取鹿茸冻干粉一定量,加入4-6倍体积的4M、pH=3的Tris盐酸-磷酸盐缓冲液,10-15℃下超声提取30分钟,减压抽滤,滤液于4℃低温放置,药渣重复上述提取步骤,第二次和第三次提取加3倍体积4M、pH=3的Tris盐酸-磷酸盐缓冲液,合并3次提取液,在冰浴下以10-30KDa超滤膜进行超滤,至剩余1/20体积,-20℃下预冷冻,在-40℃至-60℃下进行冷冻干燥,即得鹿茸生长因子提取物;
(2)传递体的制备:取步骤(1)制备的鹿茸生长因子提取物一定量称重,加入缓冲液溶解,与1-2倍量磷脂、1/6倍量辅料和10倍体积的溶剂混匀,加热旋转1-1.5小时,至形成均匀的脂质膜,即得鹿茸生长因子传递体;
(3)川续断、骨碎补和三七提取物的制备:按重量份取川续断2-4份,骨碎补1-2份,三七1-2份,加4~6倍量水共煎1小时,过滤,药渣同法煎煮2次,滤液合并,浓缩至浸膏状,加乙醇至醇度为70%,静置过夜,过滤,滤液回收溶剂至干,残渣粉碎,过100目筛,即得川续断、骨碎补和三七的提取物药粉;
(4)取步骤(2)制备的鹿茸生长因子传递体3-7份,步骤(3)制备的药粉25-30份,与贴膏剂辅料混合,搅拌均匀,涂布在10×8cm背衬布上。
7.根据权利要求6所述的一种治疗骨折的中药贴膏剂的制备方法,其特征在于:所述步骤(2)中缓冲液包括磷酸缓冲液或醋酸-醋酸铵缓冲液。
8.根据权利要求6所述的一种治疗骨折的中药贴膏剂的制备方法,其特征在于:所述步骤(2)中辅料包括胆固醇或脱氧胆酸钠。
9.根据权利要求6所述的一种治疗骨折的中药贴膏剂的制备方法,其特征在于:所述步骤(2)中溶剂包括乙醚、石油醚、氯仿或乙醇。
10.根据权利要求6所述的一种治疗骨折的中药贴膏剂的制备方法,其特征在于:所述步骤(4)中贴膏剂辅料采用如下重量体积份的原料:明胶4-6份,羧甲基纤维素钠1-2份,甘油30-40份,水80-120份。
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CN106822871A (zh) * | 2017-04-14 | 2017-06-13 | 上海新肌生物科技有限公司 | 一种对颧骨髌骨有平衡断续作用靶向生长素配方及制备工艺 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101744842A (zh) * | 2008-12-01 | 2010-06-23 | 马德林 | 脂质体中药贴膜 |
CN103275211A (zh) * | 2013-06-17 | 2013-09-04 | 吉林大学 | 从鹿茸冻干粉中提取igf-1的方法 |
CN103877157A (zh) * | 2014-04-21 | 2014-06-25 | 张超 | 一种接骨中药及其制作方法 |
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Patent Citations (3)
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---|---|---|---|---|
CN101744842A (zh) * | 2008-12-01 | 2010-06-23 | 马德林 | 脂质体中药贴膜 |
CN103275211A (zh) * | 2013-06-17 | 2013-09-04 | 吉林大学 | 从鹿茸冻干粉中提取igf-1的方法 |
CN103877157A (zh) * | 2014-04-21 | 2014-06-25 | 张超 | 一种接骨中药及其制作方法 |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN106822871A (zh) * | 2017-04-14 | 2017-06-13 | 上海新肌生物科技有限公司 | 一种对颧骨髌骨有平衡断续作用靶向生长素配方及制备工艺 |
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