CN106053661A - 一种舒肝丸中川楝子的含量测定方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种舒肝丸中川楝子的含量测定方法。该方法采用UPLC‑MS/MS法测定舒肝丸中川楝子的含量，方法灵敏，准确，可用于舒肝丸的质量控制。

Description

一种舒肝丸中川楝子的含量测定方法

技术领域

本发明涉及到一种舒肝丸中川楝子的含量测定方法，属中药技术领域，具体的，涉及一种UPLC-MS/MS法测定舒肝丸中川楝子含量的测定方法。

背景技术

舒肝丸为理气剂，具有舒肝和胃，理气止痛之功效。主治肝郁气滞，胸肋胀满，胃脘疼痛，嘈杂呕吐，嗳气泛酸。该药物由川楝子、醋延胡索、片姜黄、白芍(酒炒)、沉香、枳壳(炒)、木香、砂仁、陈皮、豆蔻仁、茯苓、姜厚朴、朱砂组成，药效明确。舒肝丸(大蜜丸)标准最早收录在《中国药典》1985年版，2000年版中增加水蜜丸规格，2005年版增加水丸规格，并对标准进行修订，检验内容同现行标准，2010年版第二增补本中增加小蜜丸规格，检验内容同《中国药典》2005年版，未作修定。该药物现行标准为《中国药典》2015年版，记载了该药物的组方、制法及质量控制方法。该药物所含药味多，《中国药典》2015年版中的含量测定项中，样品经过复杂的处理过程后，仅对白芍中芍药苷进行了含量测定，舒肝丸处方中川楝子并未进行含量测定。

发明内容

本发明的目的在于提供了一种测定舒肝丸中川楝子的含量测定方法，本发明采用超高效液相色谱-质谱联用(UPLC-MS/MS)法测定舒肝丸中川楝子的含量，该方法如下：

一种舒肝丸中川楝子的含量测定方法，该方法采用超高效液相色谱质谱联用法，其特征在于该含量测定方法如下：

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相为乙腈-0.01％至0.02％甲酸溶液，体积比为31∶69；流速为0.35ml/min；采用三重串联四极杆质谱检测器，电喷雾离子化负离子模式下选择质荷比573离子进行检测；理论板数按川楝素峰计算应不低于6000-8000。

对照品溶液的制备 取川楝素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.001-1μg的溶液，即得。

供试品溶液的制备 取舒肝丸水丸或水蜜丸适量，研细，取0.8g；或取小蜜丸、大蜜丸适量，剪碎，取1g；或取浓缩丸适量，研细，取0.4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

本发明含量测定方法中，流动相优选为乙腈-0.01％甲酸溶液，体积比为31∶69。

本发明含量测定方法中，理论板数优选为按川楝素峰计算应不低于8000。

本发明含量测定方法中，对照品溶液的制备优选为取川楝素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含1μg的溶液，即得。

本发明含量测定方法还优选为：

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相为乙腈-0.01％甲酸溶液，体积比为31∶69；流速：0.35ml/min；采用三重串联四极杆质谱检测器，电喷雾离子化负离子模式下选择质荷比573离子进行检测；理论板数按川楝素峰计算应不低于8000。

对照品溶液的制备 取川楝素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含1μg的溶液，即得。

供试品溶液的制备 取舒肝丸水丸或水蜜丸适量，研细，取0.8g；或取小蜜丸、大蜜丸适量，剪碎，取1g；或取浓缩丸适量，研细，取0.4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

《中国药典》2010年版第一增补本中川楝素的含量测定方法采用单级四极杆质谱检测器，“舒肝丸”中除川楝子另有12味药材，若采用单级四极杆质谱检测器，其他药味可能对测定结果产生影响，而采用多反应检测可以较好地排除其他因素对川楝素的干扰，从而得到制剂中川楝素的准确含量。

为了验证测定含量方法的稳定性、准确性、专属性及系统适应性，对方法进行了以下方法学验证实验，以确保该含量测定方法可以作为舒肝丸的质量控制。

1 仪器与试药

Waters公司XEVO TQ-S超高效液相色谱质谱联用仪，Millipore公司Milli-Q超纯水机。川楝素对照品(中检院，批号：111842-201102)，甲醇、乙腈均为色谱纯。

2、色谱条件与系统适用性试验

色谱柱为ACQUITY UPLC BEH C18(2.1×50mm，1.7μm)，流动相为乙腈-0.01％甲酸水，体积比为36∶64；流速：0.35ml/min。

采用三重串联四级杆质谱检测器，电喷雾离子化(ESI)负离子模式进行检测，毛细管电压2.8kV，去溶剂气温度500℃。

川楝素质谱条件如下表：

3、对照品溶液的制备

精密称取川楝素对照品适量，加甲醇溶解制成每1ml含川楝素为1ng、5ng、20ng、40ng、80ng、160ng、1000ng的溶液，即得。

4、供试品溶液的制备

取舒肝丸约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

5 线性范围考察

分别精密吸取对照品溶液(1.115ng/ml，5.575ng/ml，22.3ng/ml，44.6ng/ml，89.2ng/ml，178.4ng/ml，1115ng/ml)各1μl注入液相色谱质谱联用仪，按上述条件测定峰面积，以川楝素峰面积积分值为纵坐标，以进样浓度(ng/mL)为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程为Y＝778.74X+629.44(r＝0.9999)。结果表明，川楝素在1.115～1115ng/ml范围内，线性关系良好。

表1标准曲线测定结果

6 重复性试验

取同一批样品(批号1204071)，研细，取0.5g、1.0g、1.5g各三份，精密称定，按正文方法进行测定。结果表明，本方法重复性良好(结果见表2)。

表2重复性试验结果

7 回收率试验

取已知含量的样品(批号20151877，川楝素：0.0083mg/g)9份，每份约0.5g，精密称定，每三份为一组，分别加入用甲醇配制的低、中、高三个浓度的混合对照品溶液，按供试品溶液制备项下方法制备供试品溶液。按拟定的色谱条件测定，计算回收率。结果见表3，表明本方法回收率较好。

表3回收率试验的结果

8 样品测定

对全部135批样品进行测定，典型样品色谱图见图1，

表4样品测定结果

附图说明

图1：川楝素负离子模式扫描一级质谱图。

图2：川楝素负离子模式扫描二级质谱图。

图3：川楝素对照品溶液总离子流图。

图4：舒肝丸的总离子流图。

具体实施方式

实施例1

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相为乙腈-0.01％甲酸溶液，体积比为31∶69；流速：0.35ml/min；采用三重串联四极杆质谱检测器，电喷雾离子化负离子模式下选择质荷比573离子进行检测；理论板数按川楝素峰计算应不低于8000；

对照品溶液的制备 取川楝素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含1μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备 取舒肝丸水丸或水蜜丸适量，研细，取0.8g；或取小蜜丸、大蜜丸适量，剪碎，取1g；或取浓缩丸适量，研细，取0.4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

实施例2

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相为乙腈-0.02％甲酸溶液，体积比为31∶69；流速：0.35ml/min；采用三重串联四极杆质谱检测器，电喷雾离子化负离子模式下选择质荷比573离子进行检测；理论板数按川楝素峰计算应不低于6000；

对照品溶液的制备 取川楝素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含1μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备 取舒肝丸水丸或水蜜丸适量，研细，取0.8g；或取小蜜丸、大蜜丸适量，剪碎，取1g；或取浓缩丸适量，研细，取0.4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

实施例3

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相为乙腈-0.01％甲酸溶液，体积比为31∶69；流速：0.35ml/min；采用三重串联四极杆质谱检测器，电喷雾离子化负离子模式下选择质荷比573离子进行检测；理论板数按川楝素峰计算应不低于8000；

对照品溶液的制备 取川楝素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.001μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备 取舒肝丸水丸或水蜜丸适量，研细，取0.8g；或取小蜜丸、大蜜丸适量，剪碎，取1g；或取浓缩丸适量，研细，取0.4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

实施例4

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相为乙腈-0.15％甲酸溶液，体积比为31∶69；流速：0.35ml/min；采用三重串联四极杆质谱检测器，电喷雾离子化负离子模式下选择质荷比573离子进行检测；理论板数按川楝素峰计算应不低于7000；

对照品溶液的制备 取川楝素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.05μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备 取舒肝丸水丸或水蜜丸适量，研细，取0.8g；或取小蜜丸、大蜜丸适量，剪碎，取1g；或取浓缩丸适量，研细，取0.4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

上述实施例均按照药典要求进行方法学验证，结果显示方法准确可靠、灵敏、专属，各项指标均符合质量控制的要求。

Claims (5)

1.一种舒肝丸中川楝子的含量测定方法，该方法采用超高效液相色谱-质谱联用色谱法，其特征在于该含量测定方法如下：

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相为乙腈-0.01％至0.02％甲酸溶液，体积比为31∶69；流速为0.35ml/min；采用三重串联四极杆质谱检测器，电喷雾离子化负离子模式下选择质荷比573离子进行检测；理论板数按川楝素峰计算应不低于6000-8000；

对照品溶液的制备 取川楝素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.001-1μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备 取舒肝丸水丸或水蜜丸适量，研细，取0.8g；或取小蜜丸、大蜜丸适量，剪碎，取1g；或取浓缩丸适量，研细，取0.4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各2μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

2.根据权利要求1所述含量测定方法，其特征在于所述流动相为乙腈-0.01％甲酸溶液，体积比为31∶69。

3.根据权利要求1所述含量测定方法，其特征在于所述理论板数为按川楝素峰计算应不低于8000。

4.根据权利要求1所述含量测定方法，其特征在于所述对照品溶液的制备为取川楝素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含1μg的溶液，即得。

5.根据权利要求1-4所述含量测定方法，其特征在于该含量测定方法如下：

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相为乙腈-0.01％甲酸溶液，体积比为31∶69；流速：0.35ml/min；采用三重串联四极杆质谱检测器，电喷雾离子化负离子模式下选择质荷比573离子进行检测；理论板数按川楝素峰计算应不低于8000；

对照品溶液的制备 取川楝素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含1μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备 取舒肝丸水丸或水蜜丸适量，研细，取0.8g；或取小蜜丸、大蜜丸适量，剪碎，取1g；或取浓缩丸适量，研细，取0.4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1μl，注入液相色谱仪，测定，即得。