CN106047888A - 马铃薯抗晚疫病基因Rpi‑mcq1.2和Rpi‑OM1.2及其应用 - Google Patents

马铃薯抗晚疫病基因Rpi‑mcq1.2和Rpi‑OM1.2及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及植物基因工程领域，具体涉及两个新的马铃薯抗晚疫病基因Rpi‑mcq1.2和Rpi‑OM1.2，该发明先从马铃薯野生种质Solanum mochicense克隆了Rpi‑mcq1.2的全基因，然后从马铃薯野生种质Solanum venturii中扩增到抗晚疫病基因Rpi‑Vnt1.1启动子片段，利用融合PCR技术将Rpi‑Vnt1.1启动子片段融合Rpi‑mcq1.2基因的CC‑NB‑LRR区域，得到一个新的重组基因片段Rpi‑OM1.2，经试验证实Rpi‑mcq1.2对晚疫病具有部分抗性，具有延迟发病的作用，而改造的新基因Rpi‑OM1.2具有高抗晚疫病的特点。因此，DNA重组改造的新基因Rpi‑OM1.2基因能够在马铃薯抗晚疫病中发挥重要作用。

Description

马铃薯抗晚疫病基因Rpi-mcq1.2和Rpi-OM1.2及其应用
技术领域
本发明涉及植物基因工程技术领域，具体涉及马铃薯晚疫病抗病基因Rpi-mcq1.2，Rpi-OM1.2及其在作物改良，提高对晚疫病抗性中的应用。
背景技术
植物在生长的过程中，受到多种病原物的侵害。植物病原物的种类繁多，包括病毒、细菌、真菌和线虫等。病原物侵入植物导致两种结果：(1)病原体成功的在寄主植物内繁殖，引起相关病症；(2)寄主植物产生抗病反应，杀死病原物或阻止其生长。利用抗性基因资源改良植物的抗病性，是预防病害同时又保护环境的根本出路。
植物的抗病反应是多基因参与调控的复杂过程。参与植物抗病反应的基因分为两类：(1)抗病基因，又称R(resistance)基因和(2)抗病相关基因。
根据目前人们对抗病基因功能的认识，这类基因的产物主要是作为受体，直接或间接与病原蛋白相互作用，启动植物体内的抗病信号传导路径(Tang et al.,1996；Bakeret al.,1997；Jia et al.,2000；Dangl and Jones,2001；Nimchuk et al.,2001)。抗病基因介导的抗病反应强，是很好的基因资源。但由于抗病基因的资源有限,使利用抗病基因改良植物抗性受到限制。因此，如果能够在原有抗病基因的基础上改良抗病基因，拓宽抗病谱延长抗病基因使用年限，将大大降低抗病基因的利用限制。
马铃薯在生产过程中常遭受许多病害的严重危害，由致病疫霉菌(Phytophthorainfestans(Mont.)de Bary)引起的晚疫病一直被认为是最具毁灭性的病害，它能导致马铃薯的减产、甚至绝产，曾引起1848-1850年间爱尔兰大饥荒(Goodwin et al.,1995)，引起了整个欧洲社会的动荡。晚疫病发病较轻时块茎产量损失一般在20％左右，发病严重时，产量损失一般在60％-80％，发病十分严重时植株全部死亡，块茎几乎绝收。晚疫病造成的损失严重。防治晚疫病已引起国际社会的普遍关注。马铃薯为同源四倍体作物(2n＝4X＝48)，遗传分离复杂，后代筛选烦琐，许多野生种与栽培种之间存在有性杂交不亲和现象，且病毒易通过无性繁殖逐代积累，品种退化严重。通过常规育种获得新品种耗时耗力且跟不上市场的发展步伐。在培育马铃薯品种的研究中，利用基因工程技术有较大的优势，因其可以通过块茎无性繁殖，将转基因特性传递给后代而无需经花培纯化或多代选育。
但转基因又面临着食品安全问题，主要是针对抗生素以及除草剂等标记基因，因此标记基因的去除已经成为近年来转基因研究的热点。目前筛选标记的去除方法主要有转座子系统(Cotsaftis O et al.,2002)、共转化系统(Sripriya R et al.,2008)、同源重组(Zubko E et al.,2000),以及位点特异性重组系统(Kopertekh L et al.,2009)。位点特异性重组系统因具有操作简便，转化周期短等特点，已逐渐成为筛选标记去除的首选工具。其中Cre/lox系统是应用最广泛、研究最深入的位点特异性重组系统。此系统于1981年在P1噬菌体中被发现(Speck N A et al.,2009)，最早应用于动物转基因研究中。1990年，Dale等首次将Cre/lox系统应用于转基因烟草中，实现了分子内特异性重组(Dale E C et al.,1990)。Zuo等(2000)成功地开发了一个化学诱导型的Cre/lox系统，此系统中，编码重组酶的cre基因在雌二醇的诱导下表达，将2个loxp位点之间的区间包括筛选标记的部分成功剪切掉，从而达到去除NPT II基因的目的。目前此系统已经成功的应用于烟草、拟南芥、番茄等多种植物的无选择标记品种培育中。
发明内容
本发明的发明人针对上述现有技术的情况，提供了两个新的马铃薯抗晚疫病基因Rpi-mcq1.2和Rpi-OM1.2，该发明先从马铃薯野生种质Solanum mochicense克隆了Rpi-mcq1.2的全基因，然后从马铃薯野生种质Solanum venturii中扩增到抗晚疫病基因Rpi-Vnt1.1启动子片段，利用融合PCR技术将Rpi-Vnt1.1启动子片段融合Rpi-mcq1.2基因的CC-NB-LRR区域，得到一个新的重组基因片段Rpi-OM1.2，经试验证实Rpi-mcq1.2对晚疫病具有部分抗性，具有延迟发病的作用，而改造的新基因Rpi-OM1.2具有高抗晚疫病的特点。因此，DNA重组改造的新基因Rpi-OM1.2基因能够在马铃薯抗晚疫病中发挥重要作用。
发明人首先从马铃薯野生种质Solanum mochicense(CGN18263)(在W.D.Smi lde,G.Brigneti,L.Jagger,S.Perkins,J.D.G.Jones,Solanum mochiquense chromosome IXcarries a novel late bl ight resistance gene Rpi-moc1,Theor Appl Genet(2005)110:252–258记载)克隆了Rpi-mcq1.2的全基因，然后从马铃薯野生种质Solanum venturii(CGN18108)(在Simon J.Foster,1Tae-Ho Park,1Mathieu Pel,2Gianinna Brigneti,1Jadwiga 3Luke Jagger,1Edwin van der Vossen,2 and Jonathan D.G.Jones1,Rpi-vnt1.1,a Tm-22 Homolog from Solanum venturii,Confers Resistance to PotatoLate Bl ight,MPMI Vol.22,No.5,2009,pp.589–600中记载)中扩增到抗晚疫病基因Rpi-Vnt1.1启动子片段，利用融合PCR技术将Rpi-Vnt1.1启动子片段融合Rpi-mcq1.2基因的CC-NB-LRR区域，得到一个新的重组基因片段Rpi-OM1.2。然后构建Rpi-mcq1.2和Rpi-OM1.2含有Cre/lox位点特异性重组系统的无选择标记载体，利用农杆菌介导的遗传转化法将Rpi-mcq1.2和Rpi-OM1.2基因的无选择标记表达载体转入马铃薯Desiree品种中，获得转基因植株。
抗病性检测显示晚疫病菌HLJ菌株在接种48小时后就能够成功在Desiree上定植扩展；Rpi-mcq1.2的转基因植株对HLJ菌株具有部分抗性，较野生型晚发病24小时，在接种72h后才定植扩展；而DNA重组的新基因Rpi-OM1.2的转基因植株对晚疫病菌HLJ菌株具有完全抗性，病原菌完全不能在转基因马铃薯上定植，菌丝没有扩展。说明Rpi-OM1.2的基因改造能够使其马铃薯对晚疫病菌的抗性显著增强，使部分抗性增强为完全抗性。为检测转基因植株的抗病谱，我们进行了8个不同晚疫病菌株的接种实验，Desiree对其中六个菌株均表现出易感性；Rpi-mcq1.2的转基因植株只对其中五个表现为易感性，并能在接种过程中清楚观察到发病延迟的现象；而改造的新基因Rpi-OM1.2对其中7个菌株均表现出高抗病性，使菌丝不能扩展，对另外一个菌株表现出中抗。这些结果均说明Rpi-mcq1.2对晚疫病具有部分抗性，具有延迟发病的作用，而改造的新基因Rpi-OM1.2具有高抗晚疫病的特点。
本发明所采用的Rpi-mcq1.2是一个具有部分抗性的抗病基因，只对极少数马铃薯晚疫病菌株具有部分抗性，而Rpi-Vnt1.1是一个已克隆的马铃薯晚疫病抗病基因，但已被部分晚疫病菌打败。本发明的发明人首次将Rpi-Vnt1.1启动子片段融合Rpi-mcq1.2基因的CC-NB-LRR区域，形成一个新的马铃薯晚疫病抗病基因Rpi-OM1.2，并获得了如上所述的有益效果。
其中，发明人提供的马铃薯晚疫病抗病基因Rpi-mcq1.2，其核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示，编码的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；
在上述基础上，发明人进一步提供了一个利用融合PCR技术将高抗晚疫病基因Rpi-Vnt1.1启动子融合到Rpi-mcq1.2基因的CC-NB-LRR区域，得到改良抗病基因Rpi-OM1.2的完整的DNA片段，利用其改良马铃薯抵御病害的能力，改造后获得的马铃薯晚疫病抗病基因Rpi-OM1.2，其基因序列如SEQ ID NO.3所示，编码的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。
获得这两个抗病基因片段之后，将其与载体连接，转入马铃薯，产生转基因植物。Rpi-mcq1.2的遗传转化马铃薯相较于野生型的马铃薯具有延迟发病的作用，而且抗病谱略有拓宽。Rpi-OM1.2基因表达的遗传转化马铃薯相对于Rpi-mcq1.2的遗传转化马铃薯和未转基因马铃薯对马铃薯晚疫病菌的抗性增强，抗病谱拓宽，对检测的9个晚疫病菌株中的8个均表现出高抗病性。可见Rpi-mcq1.2为一个弱的抗病基因，能够显著延迟晚疫病的发病，使感病品系的抗病性提高；Rpi-OM1.2基因稳定表达之后可以提高植物对由马铃薯晚疫病菌所引起的病害产生抗病反应，获得高抗病植株。证明Rpi-mcq1.2、Rpi-OM1.2基因能够在马铃薯抗晚疫病中发挥重要作用。
更进一步的，发明人利用β-雌二醇诱导pX6载体中的Cre/lox位点特异性重组系统将筛选标记NPTⅡ基因去掉，形成无选择标记的Rpi-OM1.2马铃薯，能够让转基因食品更容易让公众接受。其所涉及的无选择标记表达载体pX6-GFP,获得的马铃薯重组表达载体为pX6-mcq1.2和pX6-OM1.2，其插入了如SEQ ID NO.1或3所示序列。
具体实验过程中所采用的引物如下：
Rpi-mcq1.2的扩增所述引物1，5′-ATGCTCGAGGCCACATATCTGACTCCAAA-3′，序列如序列表SEQ ID NO.5，以及引物2，5′-ATGACTAGTTCACAAGCCACAAATACATC-3′，序列如序列表SEQ ID NO.6；
Rpi-OM1.2基因片段利用融合PCR技术将高抗晚疫病基因Rpi-Vnt1.1启动子融合Rpi-mcq1.2基因的CC-NB-LRR区域，其通过特殊设计的引物扩增马铃薯抗病基因Rpi-Vnt1.1的启动子和Rpi-mcq1.2基因的CC-NB-LRR区，其中所述的引物包括Rpi-vnt1.1启动子区引物3，5′-CGGAATTCACTAGTGATTAGTTATACAC-3′其序列如序列表SEQ ID NO.7所示，和引物4，5′-CTGCTGTAAGAAGAATTTCAGCCATCTTTTGTTAGCTGGTATTTCG1-3′，其序列如序列表SEQID NO.8所示；Rpi-mcq1.2的CC-NB-LRR区引物5，5′-CGAAATACCAGCTAACAAAAGATGGCTGAAATTCTTCTTACAACAG-3′其序列如序列表SEQ ID NO.9所示，引物6，5′-CGGAATTCTCACAAGCCACAAATACATC-3′，其序列如序列表SEQ ID NO.10；
在利用In-Fusion的方法构建Rpi-OM1.2基因的无选择标记载体时，其中所述的引物包括引物7，5′-TTATAGATCTTCGACGAATTCACTAGTGATTAGTTA-3′，其序列如序列表SEQ IDNO.11。引物8，5′-GTGTGGGCAATGAAACCTACCTTTGCAACCAAACAA-3′，其序列如序列表SEQ IDNO.12，利用转基因技术，将两个抗病基因的无选择标记表达载体转入马铃薯品种Desiree中即可。
除此之外，发明人还进一步要求保护马铃薯晚疫病抗病基因Rpi-mcq1.2、Rpi-OM1.2在作物改良提高对马铃薯晚疫病抗性中的应用，所述的作物为茄科作物。
综上所述，本发明的发明人，通过实现本发明的内容，可以达到以下效果：
(1)获得马铃薯晚疫病抗病基因Rpi-mcq1.2，并且成功验证了其功能
(2)获得马铃薯晚疫病抗病基因Rpi-OM1.2，并且成功验证了其功能；
(3)利用基因功能研究，最终发现转基因植株可以赋予植物对由致病疫霉所引起的病害产生抗病反应，获得抗病性提高、抗病谱拓宽的植株。
(4)利用β-雌二醇诱导的标记基因剔除的方法，获得无选择标记的抗病植株，可以被更加广泛的认同和接受。
附图说明
图1.Rpi-OM1.2转基因株系的抗病性检测结果示意图，
A:qRT-PCR检测转基因株系Rpi-OM1.2的表达量，结果显示Rpi-OM1.2的表达量较Rpi-mcq1.2有微弱提高；其中Desiree为野生型；
B：转基因株系接种马铃薯晚疫病HLJ菌株，结果显示相较于野生型和Rpi-mcq1.2转基因株系，HLJ菌株几乎不能在Rpi-OM1.2转基因马铃薯中定植扩展，说明Rpi-OM1.2能够提高植物抗病性，其中Desiree为非转基因马铃薯感病品种，PX6-1.2为Rpi-mcq1.2转基因株系，Line4与Line85为Rpi-OM1.2的转基因株系；
C：各马铃薯株系接种HLJ菌株后各时间点的菌丝生长量变化，结果显示Rpi-mcq1.2的转化株系对HLJ感病菌丝生长量在48h后急剧增加，但比野生型增加慢，Rpi-OM1.2的转化株系菌丝不生长；
图2为转基因植株的抗病性检测结果示意图，
A：Rpi-mcq1.2和Rpi-OM1.2表达的植株接种马铃薯晚疫病菌5天后的病情指数统计，共进行三次生物重复，每次分别进行三组实验重复，结果显Rpi-OM1.2基因对接种的八个菌株中的七个具有很高的抗性，其中Desiree为野生型；
B：Rpi-OM1.2表达的植株接种马铃薯晚疫病5天后的发病情况，说明Rpi-OM1.2的确提高了马铃薯对晚疫病的抗性，拓宽了抗病谱；
图3.无选择标记植株的获得与检测检测结果示意图，
A：标记基因的PCR检测，说明无选择标记的Rpi-OM1.2马铃薯成功获得。其中NPTⅡ为标记基因，Line4与Line85为Rpi-OM1.2的转基因株系；
B：无选择标记植株生长参数的检测，测量其茎粗，株高，开花率均显示与野生型无明显差异，说明Rpi-OM1.2基因不影响马铃薯的正常生长；
图4为图1的彩色示意图；
图5为图2的彩色示意图.
具体实施方式
以下实施例中进一步定义本发明，根据以上的描述和这些实施例，本领域技术人员可以确定本发明的基本特征，并且在不偏离本发明精神和范围的情况下，可以对本发明作出各种改变和修改，以使其适用各种用途和条件。除特殊注明外，本发明所采用的均为本领域现有技术；
实施例1：Rpi-mcq1.2基因的分离克隆和重组基因Rpi-OM1.2的获得
发明人为克隆抗晚疫病基因Rpi-mcq1.2，设计扩增引物1，5′-ATGCTCGAGGCCACATATCTGACTCCAAA-3′，序列如序列表SEQ ID NO.5，以及引物2，5′-ATGACTAGTTCACAAGCCACAAATACATC-3′，序列如序列表SEQ ID NO.6。
以马铃薯野生种质Solanum mochicense(CGN18263)DNA为模板进行PCR扩增。
反应程序如下：预变性94℃53min，变性94℃30s，退火55℃30s，延伸72℃180s，反应35个循环，后延伸72℃7min。
PCR结束后，用康为公司的DNA回收试剂盒回收并纯化扩增片段，然后将纯化的DNA片段连接至载体pUC-T(康为世纪)，获得TA克隆载体pUC-mcq1.2，转化E.coli DH5ɑ感受态细胞，挑选阳性克隆提质粒，测序由华大基因完成，获得长度为5449bp的Rpi-mcq1.2片段，具有序列表SEQ ID NO.1的DNA序列，其编码的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
发明人根据数据库Rpi-vnt1.1基因序列设计引物，以马铃薯野生种质Solanumventurii(CGN18108)的全基因组为模版，扩增Rpi-Vnt1.1的启动子片段，所用引物包括引物3，5′-CGGAATTCACTAGTGATTAGTTATACAC-3′其序列如序列表SEQ ID NO.7所示，和引物4，5′-CTGCTGTAAGAAGAATTTCAGCCATCTTTTGTTAGCTGGTATTTCG1-3′，其序列如序列表SEQ IDNO.8所示。
然后以构建的Rpi-mcq1.2的TA克隆载体pUC-mcq1.2为模版，设计引物扩增Rpi-mcq1.2的CC-NB-LRR区，包括引物5，5′-CGAAATACCAGCTAACAAAAGATGGCTGAAATTCTTCTTACAACAG-3′其序列如序列表SEQ ID NO.9所示，引物6，5′-CGGAATTCTCACAAGCCACAAATACATC-3′，其序列如序列表SEQ ID NO.10。
一次扩增分别得到存在重叠区域的Rpi-Vnt1.1启动子和Rpi-mcq1.2基因的CC-NB-LRR区域，反应程序如下：预变性94℃53min，变性94℃30s，退火55℃30s，延伸72℃90s，反应35个循环，后延伸72℃7min；
再利用引物1和引物4进行第二次扩增，反应程序如下：预变性94℃53min，变性94℃30s，退火55℃30s，延伸72℃180s，反应12个循环，后延伸72℃7min；得到包含Rpi-Vnt1.1启动子和Rpi-mcq1.2基因的CC-NB-LRR区域的改良基因Rpi-OM1.2。
PCR结束后，用康为公司的DNA回收试剂盒回收并纯化扩增片段，然后将纯化的DNA片段连接至载体pUC-T(康为世纪)，获得PUC-OM1.2载体，转化E.coli DH5ɑ感受态细胞，挑选阳性克隆提质粒，测序由华大基因完成，获得长度为4217bp的Rpi-OM1.2片段，具有序列表SEQ ID NO.3的DNA序列，其编码的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。
实施例2：Rpi-mcq1.2和Rpi-OM1.2基因无选择标记载体的构建和功能验证
将pUC-mcq1.2和pX6-GFP载体同时用NEB公司Xho1和Spe1双酶切进行线性化，反应体系如下：载体10uL，buf4 5uL，Spe1和Xho1 1uL，ddH2O 33uL,37℃酶切5小时。将pX6载体和Rpi-mcq1.2片段(5449bp)用康为公司的DNA回收试剂盒回收并纯化扩增片段，然后利用TaKaRa公司T4连接酶，进行连接，反应体系如下：载体1uL，buf4 1uL，T4连接酶0.3uL，Rpi-mcq1.2片段7.7uL，16℃连接过夜。热激转化E.coli DH5α感受态细胞。将鉴定好的重组子扩大培养后提取质粒，质粒测序后与原序列比对，连入的片段为全长DNA并且没有碱基突变和缺失，证明Rpi-mcq1.2无选择标记的双元表达载体pX6-mcq1.2构建成功。
根据测序片段通过infus ion方法设计引物，其中所述的引物包括引物7，5′-TTATAGATCTTCGACGAATTCACTAGTGATTAGTTA-3′，其序列如序列表SEQ ID NO.11。引物8，5′-GTGTGGGCAATGAAACCTACCTTTGCAACCAAACAA-3′，其序列如序列表SEQ ID NO.12。
利用测序成功的TA克隆载体PUC-OM1.2为模版，扩增带有融合接头的Rpi-OM1.2基因；反应程序如下：预变性94℃53min，变性94℃30s，退火55℃30s，延伸72℃180s，反应35个循环，后延伸72℃7min；用康为公司的DNA回收试剂盒回收Rpi-OM1.2片段。
将pX6-GFP载体用NEB公司Spe1和Xho1双酶切进行线性化，反应体系如下：载体10uL，buf4 5uL，Spe1和Xho1 1uL，ddH2O 33uL,37℃酶切5小时。然后通过infusion酶将Rpi-OM1.2胶回收片段与线性化的pX6载体融合，得到无选择标记的双元表达载体，反应体系如下：胶回收片段4uL，线性化载体4uL，In-Fusionase 2uL，50℃重组15min，立即置于冰上。热激转化E.coli DH5 α感受态细胞。将鉴定好的重组子扩大培养后提取质粒，质粒测序后与原序列比对，连入的片段为全长cDNA并且没有碱基突变和缺失，证明Rpi-OM1.2无选择标记的双元表达载体pX6-OM1.2构建成功。
采用农杆菌介导的遗传转化方法将表达载体导入马铃薯Desiree品种中。获得的遗传转化植株分别被命名为Rpi-mcq1.2和Rpi-OM1.2，结果共获得Rpi-mcq1.2转基因植株60株，其中阳性转基因植株29株，转化效率达到48％；获得Rpi-OM1.2转基因植株51株，其中阳性转基因植株33株，转化效率达到65％。利用叶片离体接种的方法，对转基因株系接种马铃薯晚疫病菌HLJ菌株，方法如下：马铃薯晚疫病菌在黑麦培养基上倒置培养14天，向培养好的平板中加入10ML灭菌的ddH2O，用涂布器轻轻刮取孢子囊，收集悬浮液至离心管中，放入四度冰箱饥饿处理3h；期间取长势一致的马铃薯叶片，铺在湿润的滤纸上，叶背面向上；将处理好的孢子悬浮液调节浓度至5*10^4个每毫升，每20uL一滴，滴到铺好的马铃薯叶片上，每个叶片6滴。结果发现野生型完全感病；Rpi-mcq1.2转基因株系具有部分抗性，但比野生型晚发病一天，菌丝扩展较慢，最终发病后的菌丝生长量与野生型无显著差异；而Rpi-OM1.2的转基因植株对HLJ菌株完全抗病，菌丝不扩展。说明Rpi-OM1.2能够显著提高马铃薯对晚疫病的抗性(如图1所示)
实施例3：转基因植株的抗性检测
选择叶龄一致的马铃薯株系进行抗病检测，同样采用叶片离体接种的方法，共接种8个国内爆发过的马铃薯晚疫病菌菌株，已野生型和Rpi-mcq1.2转基因植株为对照，接种五天后统计病情指数(如表1所示)。结果显示Rpi-OM1.2的转基因植株对其中7个菌株都表现出高抗，对另外一个菌株表现出中抗；而野生型和Rpi-mcq1.2仅对其中3个表现出部分抗性，其余均感病(如图2所示)。说明Rpi-OM1.2能够显著提高马铃薯对晚疫病的抗病性，拓宽抗病谱。
表1Ppi-OM1.2表达植株接种马铃薯晚疫病5天后的病情指数
实施例4：无选择标记转基因再生植株的获得
在PCR检测阳性的line4和line85株系进行β-雌二醇诱导，每株系分化出苗后分别用引物9，5′-CTATGACTGGGCACAACAGACAATC-3′,其序列如SEQ ID NO：13所示和引物10，5′-GCGATAGAAGGCGATGCGCT-3′其序列如SEQ ID NO：14所示。进行PCR检测，检测筛选标记cre基因，在11株的二次分化植株中，未扩增出NPTⅡ基因条带。这表明经β-雌二醇诱导后，成功获得无选择标记的Rpi-OM1.2转基因植株(如图3，A)。大田种植后，在生长期测量其生长参数，茎粗，株高，开花率均显示与野生型无明显差异(如图3，B)，说明Rpi-OM1.2基因不仅能够提高马铃薯对晚疫病的抗病性，还不影响其生长农艺性状。

Claims (5)

1.一种马铃薯晚疫病抗病基因Rpi-mcq1.2，其特征在于：其基因序列如SEQ ID NO.1所示。
2.一种马铃薯抗晚疫病基因Rpi-OM1.2,其特征在于：其基因序列如SEQ ID NO.3所示。
3.马铃薯晚疫病抗病基因Rpi-mcq1.2和Rpi-OM1.2在抗晚疫病中的应用。
4.马铃薯重组表达载体pX6-mcq1.2和pX6-OM1.2，其特征在于：pX6-mcq1.2插入了如SEQ ID NO.1所示序列；pX6-OM1.2插入了如SEQ ID NO.3所示序列。
5.马铃薯重组表达载体pX6-mcq1.2和pX6-OM1.2在抗晚疫病中的应用。
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