CN106045918A - 具有Akt抑制活性的取代嘧啶类衍生物及其制备方法与应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种新的具有Akt抑制活性的取代嘧啶类衍生物、它们的制备方法以及包括它们和它们盐的药物组合物，以及所述取代嘧啶类衍生物和它们的盐在制备用于预防和/或治疗肿瘤的药物中的用途。该化合物的结构式为式(I)或式(II)所示：

Description

具有Akt抑制活性的取代嘧啶类衍生物及其制备方法与应用
技术领域
本发明属于有机化合物合成及医药应用技术领域，具体涉及一类具有Akt抑制活性的取代嘧啶类衍生物及其制备方法与应用。
背景技术
肿瘤以其难治愈、复发率高的特点成为威胁人类健康的严重疾病。目前，肿瘤的发生机制，以及抗肿瘤药物的开发，成为当今医药行业研究的热点课题。磷酯酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,PKB,也称Akt)信号通路与细胞的生长、增殖、存活和凋亡密切相关，研究发现，该通路在多种肿瘤如卵巢癌、肺癌、乳腺癌、直肠癌等癌细胞中异常活化，通过抑制该通路的激活，能够有效抑制肿瘤的生长。Akt作为该通路的中心蛋白，成为抑制该通路激活的重要靶点。
Akt于1991年被发现，因为它与蛋白激酶A和蛋白激酶C的高度同源性，所以被称为蛋白激酶B，属于AGC激酶家族。它有三种亚型：Akt1(PKBα)、Akt2(PKBβ)、Akt3(PKBγ)。Akt1(PKBα)分布广泛，Akt2(PKBβ)存在于胰岛素敏感的器官中，Akt3(PKBγ)在大脑和睾丸中表达。它们由三种独立的基因编码，这三种基因有超过85％的序列相似性，因此这三种蛋白质产物有相似的结构，在氨基酸水平有超过80％的同源性。每一种亚型都含有三个功能域：N末端的PH域、激酶催化域、C末端调节域。对不同亚型的生物学研究表明，Akt1主要控制细胞的生长和增殖，Akt2除控制细胞的生存增殖分化外，还参与胰岛素的糖代谢，Akt3与维持大脑的正常体积有关。在肿瘤细胞中，由于基因及表观遗传方面的改变，Akt的表达大大增加，导致细胞抗凋亡，最终发展成肿瘤。因此，抑制Akt是治疗肿瘤的一个新策略。目前，进入临床研究的有哌立福新、MK2206、AZD5363、GDC0068、GSK2110183、GSK2141795等化合物。
因此，发现新的具有Akt抑制活性的化合物，对于抗肿瘤药物的研发具有十分重要的意义。
发明内容
针对上述现有技术的不足，本发明的目的是提供一类具有Akt抑制活性的取代嘧啶类衍生物及其制备方法与应用，该化合物具有结构新颖，对Akt的抑制活性效果突出，安全性高，制备成本低廉等优势，可以作为治疗肿瘤的很有前景的药物。
为实现上述目的，本发明采用下述技术方案：
一种式(I)或式(II)所示的化合物或其药学上可接受的盐，
其中，R1为取代苯基、苯甲酰氨基或对氯苯甲酰氨基；R2为氯、甲氨基或乙氨基；R3为取代苯基、苄基或吲哚-3-亚甲基；R4为氨基、羟甲基或N-异丙基-氨甲基；R5为氢、醛基或醛基O-甲基肟，R6为氯或氨基。
优选的，R1为对氟苯基、对氯苯基、对溴苯基、2,4-二氯苯基、2,6-二氯苯基、苯甲酰氨基或对氯苯甲酰氨基；R2为氯、甲氨基或乙氨基；R3为苯基、对氟苯基、对氯苯基、对溴苯基、2,4-二氯苯基、苄基或吲哚-3-亚甲基；R4为氨基、羟甲基或N-异丙基-氨甲基；R5为氢、醛基或醛基O-甲基肟，R6为氯或氨基。
上述化合物的实例如下：
1-(4-(6-氯嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(4-氟苯基)乙酮(La1)；
1-(4-(6-氯嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(4-氯苯基)乙酮(La2)；
1-(4-(6-氯嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(4-溴苯基)乙酮(La3)；
1-(4-(6-氯嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(2,4-二氯苯基)乙酮(La4)；
1-(4-(6-氯嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氯苯基)乙酮(La5)；
2-(4-氟苯基)-1-(4-(6-(甲胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)乙酮(La6)；
2-(4-氯苯基)-1-(4-(6-(甲胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)乙酮(La7)；
2-(4-溴苯基)-1-(4-(6-(甲胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)乙酮(La8)；
2-(2,4-二氯苯基)-1-(4-(6-(甲胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)乙酮(La9)；
2-(2,6-二氯苯基)-1-(4-(6-(甲胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)乙酮(La10)；
2-(4-氟苯基)-1-(4-(6-(乙胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)乙酮(La11)；
2-(4-氯苯基)-1-(4-(6-(乙胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)乙酮(La12)；
2-(4-溴苯基)-1-(4-(6-(乙胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)乙酮(La13)；
2-(2,4-二氯苯基)-1-(4-(6-(乙胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)乙酮(La14)；
2-(2,6-二氯苯基)-1-(4-(6-(乙胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)乙酮(La15)；
N-(2-(4-(6-氯嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-氧乙基)苯甲酰胺(La16)；
N-(2-(4-(6-(甲氨基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-氧乙基)苯甲酰胺(La17)；
N-(2-(4-(6-(乙氨基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-氧乙基)苯甲酰胺(La18)；
N-(2-(4-(6-氯嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-氧乙基)-4-氯苯甲酰胺(La19)；
N-(2-(4-(6-(甲氨基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-氧乙基)-4-氯苯甲酰胺(La20)；
N-(2-(4-(6-(乙氨基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-氧乙基)-4-氯苯甲酰胺(La21)；
4-氯-6-(4-(2-(4-氟苯基)-3-(异丙氨基)丙酰基)哌嗪-1-基)嘧啶(Lj1)；
4-氯-6-(4-(2-(4-氯苯基)-3-(异丙氨基)丙酰基)哌嗪-1-基)嘧啶(Lj2)；
4-氯-6-(4-(2-(4-溴苯基)-3-(异丙氨基)丙酰基)哌嗪-1-基)嘧啶(Lj3)；
4-氯-6-(4-(2-(2,4-二氯苯基)-3-(异丙氨基)丙酰基)哌嗪-1-基)嘧啶(Lj4)；
1-(4-(6-氯嘧啶-4-基)-3-羟基-2-苯基丙-1-酮(Lj5)；
4-(4-(L-色氨酸)哌嗪-1-基)-6-氯嘧啶(Lj6)；
4-(4-(L-苯丙氨酸)哌嗪-1-基)-6-氯嘧啶(Lj7)；
4-氨基-6-(4-(2-(4-氟苯基)-3-(异丙氨基)丙酰基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-甲醛(Lj8)；
4-氨基-6-(4-(2-(4-氯苯基)-3-(异丙氨基)丙酰基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-甲醛(Lj9)；
4-氨基-6-(4-(2-(4-溴苯基)-3-(异丙氨基)丙酰基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-甲醛(Lj10)；
4-氨基-6-(4-(2-(2,4-二氯苯基)-3-(异丙氨基)丙酰基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-甲醛(Lj11)；
4-氨基-6-(4-(2-(4-氯苯基)乙酰基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-甲醛(Lj12)；
4-(4-(L-色氨酸)哌嗪-1-基)-6-氨基嘧啶-5-甲醛(Lj13)；
4-(4-(L-苯丙氨酸)哌嗪-1-基)-6-氨基嘧啶-5-甲醛(Lj14)；
4-氨基-6-(4-(2-(4-氟苯基)-3-(异丙氨基)丙酰基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-甲醛O-甲基肟(Lj15)；
4-氨基-6-(4-(2-(4-氯苯基)-3-(异丙氨基)丙酰基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-甲醛O-甲基肟(Lj16)；
4-氨基-6-(4-(2-(4-溴苯基)-3-(异丙氨基)丙酰基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-甲醛O-甲基肟(Lj17)；
4-氨基-6-(4-(2-(2,4-二氯苯基)-3-(异丙氨基)丙酰基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-甲醛O-甲基肟(Lj18)；
4-氨基-6-(4-(2-(4-氯苯基)乙酰基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-甲醛O-甲基肟(Lj19)；
4-(4-(L-色氨酸)哌嗪-1-基)-6-氨基嘧啶-5-甲醛O-甲基肟(Lj20)；
4-(4-(L-苯丙氨酸)哌嗪-1-基)-6-氨基嘧啶-5-甲醛O-甲基肟(Lj21)。
上述优选的42个化合物名称后的括号中为其相应的代号，为叙述方便和表达简洁，上述括号中的代号在本说明书以下内容中将被直接应用。
本发明另外提供了制备式(I)和式(II)化合物的方法，它们可以如下面详述地得到。
式(I)所示的化合物的制备方法包括：使式C所示的化合物与式D1、D2或D3所示的化合物反应，得到式(I)所示的化合物；
其中，R1、R2具有如前所述的定义；X为F、Cl、Br、2,4-Cl或2,6-Cl。
上述式C所示的化合物的制备方法为：以4,6-二氯嘧啶(A1)为起始原料，与甲胺或乙胺反应，得到中间体化合物A2、A3，中间体A再与1-叔丁氧羰基哌嗪反应，得到中间体化合物B，将中间体化合B溶于HCl二氧六环溶液，室温反应，即得式C所示的化合物。
式(II)所示的化合物的制备方法包括：使式G1、G2或C1所示的化合物与式H1、H2、H3、H4或H5所示的化合物反应，得到式(II)所示的化合物；
其中，R3、R4、R5、R6具有如前所述的定义；X为F、Cl、Br或2,4-Cl。
式(I)和式(II)化合物的具体合成路线如下：
试剂及条件：(1a)甲胺溶液，异丙醇，室温；(1b)乙胺溶液，异丙醇，室温；(2a)1-叔丁氧羰基哌嗪，三乙胺，甲醇，50℃；(2b)1-叔丁氧羰基哌嗪，三乙胺，DMF，100℃；(2c)1-叔丁氧羰基哌嗪，1,8-二氮杂二环十一碳-7-烯(DBU)，碳酸钾，DMF，100℃；(3)HCl二氧六环溶液，室温；(4)甘氨酸盐酸盐，三乙胺，O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸酯(HBTU)，DMF，室温；(5)氢氧化锂，水：甲醇：四氢呋喃(1：1：3)，室温；(6)HBTU，N,N-二异丙基乙胺(DIPEA)；(7)氨气，甲苯，室温；(8)甲氧胺盐酸盐，冰醋酸，水，室温；(9)1-叔丁氧羰基哌嗪，三乙胺，甲醇，70℃；(10)HCl二氧六环溶液，室温；(11)二碳酸二叔丁酯，水，室温；(12)HBTU，DIPEA，DMF，室温；(13)HCl二氧六环溶液，室温。
具体合成步骤如下：
(1)将4,6-二氯嘧啶(A1)溶解在异丙醇中，慢慢滴入甲胺溶液，室温反应2h，减压蒸除溶剂，析出固体，加入适量水搅拌过滤，滤饼用水洗，真空干燥，得中间体A2，其中起始原料和甲胺溶液的摩尔比为1；8.25；
(2)将4,6-二氯嘧啶(A1)溶解在异丙醇中，慢慢滴入乙胺溶液，室温反应2h，减压蒸除溶剂，析出固体，加入适量水搅拌过滤，滤饼用水洗，真空干燥，得中间体A3，其中起始原料和乙胺溶液的摩尔比为1；8.25；
(3)将中间体A1和1-叔丁氧羰基哌嗪溶于甲醇中，加入三乙胺,升温至50℃回流，反应4h。减压蒸除溶剂，加入适量水搅拌过滤，滤饼用水润洗，真空干燥得中间体B1，其中中间体A1、1-叔丁氧羰基哌嗪、三乙胺的摩尔比为1：1.26：1.26。
(4)将中间体A2和1-叔丁氧羰基哌嗪溶于DMF中，加入三乙胺，加热到100℃，反应过夜，再加入三乙胺，继续反应48h，将反应液倒入30倍量水中，析出固体，过滤，滤饼用水多次润洗，真空干燥得中间体B2，其中中间体A2、1-叔丁氧羰基哌嗪、三乙胺的摩尔比为1：1.1：2.2。
(5)将中间体A3溶于DMF中，加入1-叔丁氧羰基哌嗪，碳酸钾，DBU，加热到100℃，反应72h，将反应液倒入30倍量水中，析出固体，过滤，滤饼用水反复润洗，真空干燥得中间体B3，其中中间体A3、1-叔丁氧羰基哌嗪、碳酸钾、DBU的摩尔比为1：1.2：1：1。
(6)中间体C的制备：将中间体B溶于HCl二氧六环溶液，室温反应24h，析出固体，过滤，滤饼用乙酸乙酯润洗，真空干燥得中间体C。所述中间体C中，R2为氯、甲氨基、乙氨基。
(7)中间体D3的制备：将对氯苯甲酸溶于DMF中，加入O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸酯(HBTU)，搅拌，加入甘氨酸乙酯盐酸盐，滴加三乙胺，室温反应过夜，将反应液倒入30倍量水中，析出固体，过滤，一次用10％稀盐酸溶液，饱和碳酸氢钠溶液，清水洗涤滤饼，真空干燥得固体，将所得固体溶于THF:MeOH:H2O(3:1:1)溶液中，加入氢氧化锂，室温反应过夜。减压蒸除溶剂，加入适量乙酸乙酯和水萃取，分出水相，水相用10％盐酸溶液酸化至pH＝1，再用乙酸乙酯萃取，有机层用饱和食盐水洗，无水硫酸镁干燥，过滤，减压蒸除溶剂得中间体D3，其中对氯苯甲酸、甘氨酸盐酸盐、三乙胺、HBTU、氢氧化锂的摩尔比为1：1.1：3：1.2：2。
(8)将中间体D溶于DMF中，加入O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸酯(HBTU)，搅拌，加入中间体C，N,N-二异丙基乙胺(DIPEA)，室温反应过夜，将反应液倒入30倍量水中，析出固体，过滤，滤饼用水润洗，真空干燥，再用乙酸乙酯重结晶，得目标产物La。上述反应中，中间体D、中间体C、HBTU、DIPEA的摩尔比为1：1：1.13：5。所述目标化合物La中R1为对氟苯基、对氯苯基、对溴苯基、2，4-二氯苯基、2，6-二氯苯基、苯甲酰氨基、对氯苯甲酰氨基，R2为氯、甲氨基、乙氨基。
(9)将4,6-二氯嘧啶-5-甲醛溶于甲苯中，通入氨气30min，室温搅拌过夜，过滤得固体，柱层析纯化(洗脱剂为乙酸乙酯：石油醚＝1:3)，得中间体E1。
(10)将中间体E1溶于冰醋酸和水的混合溶液中，加入甲氧胺盐酸盐，25℃反应过夜。TLC监测反应完成后，向反应液中加入适量水，用同体积乙酸乙酯萃取，有机层依次水洗3次，10％氢氧化钠溶液洗，饱和食盐水洗，无水硫酸镁干燥，过滤，减压蒸除溶剂，柱层析纯化(洗脱剂石油醚：乙酸乙酯＝3:1)，得中间体E2，其中中间体E1、甲氧胺盐酸盐的摩尔比为1：1.8。
(11)将中间体E1、E2分别溶于甲醇中，加入1-叔丁氧羰基哌嗪，N,N-二异丙基乙胺(DIPEA)，加热至60℃～70℃，回流反应3～4h，TLC监测反应结束，降至室温，减压蒸除溶剂，加水搅拌过滤，滤饼用水润洗，真空干燥，得中间体F1、F2。其中，中间体E、1-叔丁氧羰基哌嗪、N,N-二异丙基乙胺的摩尔比为1：1.1：2。
(12)中间体G的制备：将中间体F溶于HCl二氧六环溶液，室温反应24h，析出固体，过滤，滤饼用乙酸乙酯润洗，真空干燥得中间体G。
(13)中间体H的制备：分别将对氯苯甘氨酸、L-苯丙氨酸、L-色氨酸分别溶于水中，加入碳酸钾，二碳酸二叔丁酯，室温反应过夜，TLC监测反应结束，反应液用10％盐酸溶液酸化至pH＝1，再用乙酸乙酯萃取，有机层用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸除溶剂得中间体I1、I2、I3。上述反应中，(对氯苯甘氨酸或L-苯丙氨酸或L-色氨酸)、碳酸钾、二碳酸二叔丁酯的摩尔比为1：1：1.1。
(14)将中间体H溶于DMF中，加入O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸酯(HBTU)，加入中间体G或C1，N,N-二异丙基乙胺(DIPEA)，室温反应过夜，倒入30倍量水中，析出固体，过滤，用水润洗滤饼，真空干燥，柱层析纯化(洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯＝3:1～乙酸乙酯)得白色固体，将白色固体溶于HCl二氧六环溶液中，反应24h，TLC监测反应结束，减压蒸除溶剂，加乙酸乙酯润洗，过滤，真空干燥得目标化合物Lj。上述反应中，中间体G或C1、中间体H、HBTU、DIPEA的摩尔比为1：1：1.13：5。所述Lj中，R3为取代苯基，苄基，吲哚-3-亚甲基；R4为氨基，羟甲基，N-异丙基-氨甲基；R5为氢，醛基，醛基O-甲基肟，R6为氯、氨基。
本发明还提供上述化合物或其药学上可接受的盐在制备预防和/或治疗肿瘤的药物中的用途。
本发明还提供一种药物组合物，该药物组合物包含上述的化合物或其药学上可接受的盐。
优选的，所述药物组合物还包含一种或多种药学上可接受的载体、赋形剂和/或稀释剂。
优选的，所述药物组合物包含一种或多种药学上或食品学上可接受的辅料。所用的辅料可为固态或液态。固态形式的制剂包括粉剂、片剂、分散颗粒、胶囊、药丸及栓剂。粉剂及片剂可包含约5％至约95％的活性成分。适当的固体辅料可以是碳酸镁、硬脂酸镁、滑石粉、糖或者乳糖。片剂、粉剂、药丸及胶囊为适于口服用的固态剂型。液态形式的制剂包括溶液、悬浮液及乳液，其实施例为非经肠注射用水溶液或水-丙二醇溶液，或添加甜味剂及造影剂的口服溶液。此外，还可制成注射用小水针、注射用冻干粉针、大输液或小输液。
优选的，所述药物组合物为固体口服制剂、液体口服制剂或注射剂。
进一步优选的，所述药物组合物为片剂、分散片、肠溶片、咀嚼片、口崩片、胶囊、糖衣剂、颗粒剂、干粉剂、口服溶液剂、注射用小水针、注射用冻干粉针、大输液或小输液。
本发明的化合物是以发明人前期研究发现的具有Akt1激酶抑制活性的化合物作为先导化合物，对其进行结构改造，通过去除吡咯环，在嘧啶4上引入取代氨基、氯，同时将苯环换用不同的卤素取代，得到系列化合物，将得到的系列化合物进行分子对接，对接结果显示同样能与Akt蛋白Glu228、Ala230形成氢键作用。但是活性结果显示，La系列化合物对Akt1激酶的抑制活性较差。通过查阅文献，表明Akt1蛋白中存在Acid hole结构，为了增强化合物与蛋白的作用，我们在羰基α位引入极性取代基，使其能与Glu234形成氢键作用。同时，通过对蛋白结构分析，我们发现，在靠近嘧啶5位的地方存在一个有Thr211和Thr291残基亲水性口袋，为此我们在嘧啶5为引入醛基、醛基甲氧肟取代基，探讨其对化合物活性的影响。通过分子对接表明，本发明的化合物Lj9、化合物Lj17能与Glu234、Glu228、Ala230、Thr291形成氢键作用，活性结果显示，当嘧啶5为引入醛基、醛基O-甲基肟取代时，对Akt1激酶的抑制活性明显提高。
本发明的有益效果：
(1)本发明的化合物结构新颖，对Akt的抑制活性效果突出，安全性高，为抗肿瘤药物的开发提供了新的化合物来源。
(2)本发明化合物的合成中用到的中间体4，6-二氯嘧啶，1-叔丁氧羰基哌嗪，4，6-二氯嘧啶-5-甲醛，O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸酯(HBTU)，甲氧胺盐酸盐及其他试剂均可从试剂公司购得，价格便宜。化合物合成中，对反应仪器要求较低，操作简单，反应条件温和，除个别反应需要用油浴锅加热外，大部分反应都在室温下进行，后处理方便，如由4，6-二氯嘧啶(A1)生成中间体A2、A3的反应中，我们加入过量的胺，确保原料完全反应，由于反应产物在水中溶解性较小，而未反应的胺易溶于水，所以后处理时，只需减压蒸除反应溶剂，然后加水搅拌过滤，滤饼用水润洗，就可以得到比较纯的中间体A2、A3，产率也较高，同样的，由中间体A生成中间体B和中间体E生成中间体F的反应中，1-叔丁氧羰基哌嗪易溶于水，而产物水溶性较差，同样可以用此方法处理。
具体实施方式
结合实施例对本发明作进一步的说明，应该说明的是，下述说明仅是为了解释本发明，并不对其内容进行限定。
实施例中未详细描述的方法、试剂等，均为所属领域常规方法、试剂。
实施例1：目标化合物La1～La21的制备
(1)4-取代-6-氯嘧啶的(中间体A)的制备
将4,6-二氯嘧啶(20.14mmol，3.0g)(A1)溶解在20ml异丙醇中，慢慢滴入10ml氨水或甲胺或乙胺，室温反应2h，减压蒸除溶剂，析出固体，加入20ml水搅拌过滤，滤饼用水洗，真空干燥，得中间体A2或A3.
4-甲氨基-6-氯嘧啶(A2)，白色晶体，产率62％。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.28(s,1H),7.68(s,1H),6.50(s,1H),2.82(s,3H).MS(ESI)m/z:144[M+H]+.
4-乙氨基-6-氯嘧啶(A3)，白色晶体，产率92％。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.25(s,1H),7.71(s,1H),6.47(s,1H),3.14(s,2H),1.13(t,J＝7.2Hz,3H).MS(ESI)m/z:158[M+H]+.
(2)4-(6-氯嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(中间体B1)的制备
将4,6-二氯嘧啶(A1)(12.75mmol，1.9g)和1-叔丁氧羰基哌嗪(16.13mmol，3.0g)溶于20ml甲醇中，加入2.3ml三乙胺(16.13mmol),升温至50℃回流，反应4h。减压蒸除溶剂，加入20ml水搅拌过滤，滤饼用水润洗，真空干燥得白色固体。产率83％。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.35(s,1H),6.96(s,1H),3.65(s,4H),3.41(t,J＝5.6Hz,4H),1.42(s,9H).
(3)4-(6-(甲氨基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(中间体B2)的制备
将4-甲氨基-6-氯嘧啶(A2)(8.29mmol，1.19g)和1-叔丁氧羰基哌嗪(9.12mmol，1.70g)溶于10mlDMF中，加入1.27ml三乙胺(9.12mmol)，加热到100℃，反应过夜，再加入1.27ml三乙胺(9.12mmol)，继续反应48h，将反应液倒入30倍量水中，析出褐色固体，过滤，滤饼用水多次润洗，真空干燥得褐色固体。产率44％。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):7.98(s,1H),6.68(s,1H),5.54(s,1H),3.46-3.45(m,4H),3.38-3.36(m,4H),2.72(d,J＝4.8Hz,3H),1.41(s,9H).MS(ESI)m/z:294.5[M+H]+.
(4)4-(6-(乙氨基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(中间体B3)的制备
将4-乙氨基-6-氯嘧啶(A3)(3.81mmol，0.6g)溶于7mlDMF中，加入1-叔丁氧羰基哌嗪(4.57mmol，0.85g)，碳酸钾(3.81mmol，0.53g)，DBU(3.81mmol,0.57ml)，加热到100℃，反应72h，将反应液倒入30倍量水中，析出褐色固体，过滤，滤饼用水反复润洗，真空干燥得褐色固体。产率62％。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):7.99(s,1H),6.69(t,J＝5.2Hz,1H),5.56(s,1H),3.45-3.43(m,4H),3.37-3.36(m,4H),3.20(m,2H),1.42(s,9H),1.09(t,J＝7.2Hz,3H).
(5)6-(哌嗪-1-基)嘧啶-4-取代盐酸盐(中间体C)的制备
将4-(6-取代-嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(中间体B)(12.4mmol，3.47g)溶于30ml 4mol/L HCl二氧六环溶液，室温反应24h，析出固体，过滤，滤饼用乙酸乙酯润洗，真空干燥得中间体C。
6-(哌嗪-1-基)嘧啶-4-氯盐酸盐(C1).白色固体，产率96％。
N-甲基-6-(哌嗪-1-基)嘧啶-4-胺盐酸盐(C2).褐色固体，产率99％。
N-乙基-6-(哌嗪-1-基)嘧啶-4-胺盐酸盐(C3)，褐色固体，97％。
(6)(4-氯苯甲酰基)甘氨酸(中间体D3)的合成
将对氯苯甲酸(3.19mmol，500mg)溶于5mlDMF中，加入O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸酯(HBTU)(3.83mmol,1.45g)，搅拌2min，加入甘氨酸乙酯盐酸盐(3.51mmol，491mg)，滴加1.33ml三乙胺(9.58mmol)，室温反应过夜，将反应液倒入30倍量水中，析出固体，过滤，分别用10％稀盐酸溶液，饱和碳酸氢钠溶液，清水洗涤滤饼，真空干燥得米黄色固体，产率70％。
将(4-氯苯甲酰基)甘氨酸乙酯(2.21mmol，0.535g)溶于15ml THF:MeOH:H2O(3:1:1)溶液中，加入氢氧化锂(4.43mmol，0.106g)，室温反应过夜。减压蒸除溶剂，分别加入20ml乙酸乙酯和水萃取，分出水相，水相用10％盐酸溶液酸化至pH＝1，再用20ml乙酸乙酯萃取，有机层用饱和食盐水洗，无水硫酸镁干燥，过滤，减压蒸除溶剂得白色固体，产率85％。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):12.64(br,1H),8.93(t,J＝6Hz,1H),7.88(d,J＝8.4Hz,2H),7.58(d,J＝8.4Hz,2H),3.91(d,J＝6Hz,2H).
(7)目标化合物La的制备
将取代苯乙酸或(取代苯甲酰基)甘氨酸(中间体D)(0.4mmol)溶于2mlDMF中，加入O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸酯(HBTU)(0.45mmol,171mg)，搅拌，加入6-(哌嗪-1-基)嘧啶-4-取代盐酸盐(中间体C)(0.4mmol，100mg)，N,N-二异丙基乙胺(2mmol，0.35ml)，室温反应过夜，将反应液倒入30倍量水中，析出固体，过滤，滤饼用水润洗，真空干燥，再用乙酸乙酯重结晶，得目标产物La.
所述目标化合物La具体如下：
1-(4-(6-氯嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(4-氟苯基)乙酮(La1)，白色固体，产率56％,mp:151-154℃。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.36(s,1H),7.27(d,J＝6Hz,1H),7.26(d,J＝6Hz,1H),7.13(t,J＝12.8Hz,2H),6.98(s,1H),3.77(s,2H),3.64-3.56(m,8H).13C-NM R(100MHz,DMSO)δ(ppm):169.56,162.56,161.41(d,J＝241Hz),159.58,158.38,132.39(d,J＝3Hz),131.49(d,J＝8Hz,2C),115.41(d,J＝21Hz,2C),102.37,44.98,44.01,43.79,41.10,38.86.
1-(4-(6-氯嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(4-氯苯基)乙酮(La2)，白色固体，产率53％,mp:167-168℃。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.36(s,1H),7.37(d,J＝8.4Hz,2H),7.26(d,J＝8.4Hz,2H),6.98(s,1H),3.78(s,2H),3.64-3.56(m,8H).13C-NMR(100MHz,DMSO)δ(ppm):169.35,162.56,159.58,158.39,135.31,131.59(2C),131.52,128.62(2C),102.38,44.97,44.00,43.77,41.11,39.02
1-(4-(6-氯嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(4-溴苯基)乙酮(La3)，白色固体，产率47％,mp:183-184℃。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.36(s,1H),7.50(d,J＝8.4Hz,2H),7.20(d,J＝8.4Hz,2H),6.98(s,1H),3.76(s,2H),3.64-3.56(m,8H).13C-NMR(100MHz,DMSO)δ(ppm):169.28,162.55,159.58,158.39,135.74,131.99(2C),131.54(2C),120.00,102.38,44.97,44.00,43.77,41.11,39.09.
1-(4-(6-氯嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(2,4-二氯苯基)乙酮(La4)，白色固体，产率69％,mp:166-167℃。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.37(s,1H),7.59(d,J＝1.6Hz,1H),7.38(dd,J1＝8.4Hz,J2＝2Hz,1H),7.34(d,J＝8.4Hz,1H),7.00(s,1H),3.88(s,2H),3.75-3.57(m,8H).13C-NMR(100MHz,DMSO)δ(ppm):168.08,162.58,159.60,158.40,135.23,134.10,133.75,132.45,128.81,127.53,102.39,44.83,44.02,43.86,41.21,37.30.
1-(4-(6-氯嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氯苯基)乙酮(La5)，白色固体，产率76％,mp:198-200℃。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.38(s,1H),7.46(d,J＝8Hz,2H),7.32(dd,J1＝7.6Hz,J2＝0.8Hz,1H),7.02(s,1H),4.05(s,2H),3.77(s,4H),3.67(s,2H),3.59-3.56(m,8H).13C-NMR(100MHz,DMSO)δ(ppm):167.01,162.61,159.61,158.41,135.89(2C),133.46,129.66,128.45(2C),102.43,44.79,44.11,43.91,41.28,36.01.
2-(4-氟苯基)-1-(4-(6-(甲胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)乙酮(La6)，褐色固体，产率24％,m p:172-173℃。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):7.99(s,1H),7.27(d,J＝5.6Hz,1H),7.26(d,J＝5.6Hz,1H),7.12(t,J＝9.2Hz,2H),6.68(q,J＝4Hz,1H),5.54(s,1H),3.75(s,2H),3.57-3.54(m,4H),3.45(s,4H),2.73(d,J＝4.8Hz,3H).13C-NMR(100MHz,DMSO)δ(ppm):169.45,164.26,162.38,161.39(d,J＝241Hz),157.60,132.48(d,J＝3Hz),131.46(d,J＝8Hz,2C),115.42(d,J＝21Hz,2C),45.23,44.00,43.73,41.26,38.91,28.04.
2-(4-氯苯基)-1-(4-(6-(甲胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)乙酮(La7)，褐色固体，产率54％,m p:174-175℃。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.00(s,1H),7.34(d,J＝8.4Hz,2H),7.26(d,J＝8.4Hz,2H),6.69(q,J＝4Hz,1H),5.55(s,1H),3.77(s,2H),3.57-3.53(m,4H),3.346(s,4H),2.73(d,J＝4.8Hz,3H).13C-NMR(100MHz,DMSO)δ(ppm):169.22,164.29,162.39,157.61,135.40,131.55(2C),131.49,128.62(2C),45.23,44.00,43.73,41.29,39.08,28.04.
2-(4-溴苯基)-1-(4-(6-(甲胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)乙酮(La8)，褐色固体，产率55％,m p:183-184℃。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):7.99(s,1H),7.50(d,J＝8.4Hz,2H),7.21(d,J＝8.4Hz,2H),6.67(q,J＝4Hz,1H),5.54(s,1H),3.75(s,2H),3.56-3.53(m,4H),3.45(s,4H),2.72(d,J＝4.4Hz,3H).13C-NMR(100MHz,DMSO)δ(ppm):169.15,164.29,162.39,157.61,135.82,131.95(2C),131.54(2C),119.97,45.23,44.00,43.73,41.29,39.15,28.05.
2-(2,4-二氯苯基)-1-(4-(6-(甲胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)乙酮(La9)，类白色固体，产率63％,mp:199-200℃。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.00(s,1H),7.59(d,J＝2Hz,1H),7.37(dd,J1＝8.4Hz,J2＝2Hz,1H),7.35(d,J＝8.4Hz,1H),6.69(q,J＝4Hz,1H),5.57(s,1H),3.86(s,2H),3.66-3.48(m,8H),2.73(d,J＝4.8Hz,3H).13C-NMR(100MHz,DMSO)δ(ppm):167.96,164.30,162.41,157.63,135.21,134.17,133.74,132.42,128.80,127.52,45.08,44.01,43.81,41.40,37.32,28.05.
2-(2,6-二氯苯基)-1-(4-(6-(甲胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)乙酮(La10)，类白色固体，产率70％,mp:231-233℃。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.02(s,1H),7.46(d,J＝8Hz,2H),7.32(dd,J1＝7.6Hz,J2＝0.8Hz,1H),6.70(d,J＝4.8Hz,1H),5.58(s,1H),4.04(s,2H),3.73-3.72(m,2H),3.62(m,2H),3.55-3.54(m,2H),3.50-3.48(m,2H),2.74(d,J＝4.8Hz,3H).13C-NMR(100MHz,DMSO)δ(ppm):166.86,164.32,162.42,157.64,135.89(2C),133.53,129.64,128.45(2C),45.05,44.12,43.89,41.49,40.20,36.02,28.05.
2-(4-氟苯基)-1-(4-(6-(乙胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)乙酮(La11)，褐色固体，产率41％,mp:162-164℃。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):7.99(s,1H),7.27(s,2H),7.14(t,J＝8.4Hz,2H),6.71(s,1H),5.56(s,1H),3.75(s,2H),3.53(d,J＝14Hz,4H),3.43(s,4H),3.20(m,2H),1.09(t,J＝6.4Hz,3H).13C-NMR(100MHz,DMSO)δ(ppm):169.46,163.54,162.36,161.40(d,J＝241Hz),157.71,132.48(d,J＝3Hz),131.45(d,J＝8Hz,2C),115.41(d,J＝21Hz,2C),45.22,44.02,43.74,41.26,38.92,35.53,15.11.
2-(4-氯苯基)-1-(4-(6-(乙胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)乙酮(La12)，褐色固体，产率90％,mp:171-173℃。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):7.99(s,1H),7.36(d,J＝8.4Hz,2H),7.26(d,J＝8.4Hz,2H),6.70(t,J＝5.6Hz,1H),5.56(s,1H),3.76(s,2H),3.57-3.52(m,4H),3.45-3.43(m,4H),3.20(m,2H),1.09(t,J＝7.2Hz,3H).13C-NMR(100MHz,DMSO)δ(ppm):169.21,163.54,162.35,157.71,135.39,131.55(2C),131.49,128.62(2C),45.22,44.01,43.74,41.28,39.08,35.53,15.11.
2-(4-溴苯基)-1-(4-(6-(乙胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)乙酮(La13)，褐色固体，产率81％,mp:178-179℃。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):7.99(s,1H),7.50(d,J＝8.4Hz,2H),7.20(d,J＝8.4Hz,2H),6.70(t,J＝5.2Hz,1H),5.56(s,1H),3.75(s,2H),3.57-3.52(m,4H),3.45-3.43(m,4H),3.20(m,2H),1.09(t,J＝7.2Hz,3H).13C-NMR(100MHz,DMSO)δ(ppm):169.14,163.54,162.35,157.71,135.83,131.95(2C),131.54(2C),119.97,45.22,44.01,43.74,41.28,39.15,35.53,15.11.
2-(2,4-二氯苯基)-1-(4-(6-(乙胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)乙酮(La14)，褐色固体，产率96％,mp:224-226℃。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.01(s,1H),7.58(d,J＝2Hz,1H),7.37(dd,J1＝8Hz,J2＝2Hz,1H),7.34(d,J＝8.4Hz,1H),6.72(t,J＝5.6Hz,1H),5.59(s,1H),3.86(s,2H),3.64-3.62(m,2H),3.55(m,4H),3.47-3.46(m,2H),3.19(m,2H),1.09(t,J＝6.4Hz,3H).13C-NMR(100MHz,DMSO)δ(ppm):167.96,163.56,162.35,157.73,135.21,134.18,133.75,132.42,128.80,127.53,45.07,44.02,43.81,41.40,37.32,35.53,15.12.
2-(2,6-二氯苯基)-1-(4-(6-(乙胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)乙酮(La15)，褐色固体，产率61％,mp:183-185℃。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.02(s,1H),7.46(d,J＝8Hz,2H),7.32(dd,J1＝7.6Hz,J2＝1.2Hz,1H),6.72(t,J＝5.6Hz,1H),5.60(s,1H),4.04(s,2H),3.73(m,2H),3.60(m,2H),3.56(m,2H),3.47(m,2H),3.22(m,2H),1.10(t,J＝7.2Hz,3H).13C-NMR(100MHz,DMSO)δ(ppm):166.85,163.57,162.37,157.74,135.89(2C),133.53,129.63,128.44(2C),45.05,44.13,43.89,41.48,36.02,35.55,15.13.
N-(2-(4-(6-氯嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-氧乙基)苯甲酰胺(La16)，淡黄色固体，产率58％,mp:200-202℃。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.60(t,J＝5.6Hz,1H),8.38(s,1H),7.88(d,J＝7.2Hz,2H),7.55(t,J＝7.2Hz,1H),7.48(t,J＝7.6Hz,2H),7.01(s,1H),4.19(d,J＝5.6Hz,2H),3.75-3.57(m,8H).13C-NMR(101MHz,DMSO)δ(ppm):167.85,166.81,162.57,159.60,158.41,134.57,131.78,128.79(2C),127.70(2C),102.40,43.84(2C),41.45(2C),41.25.
N-(2-(4-(6-(甲氨基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-氧乙基)苯甲酰胺(La17)，淡褐色固体，产率60％,mp:204-206℃。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.59(t,J＝5.6Hz,1H),8.02(s,1H),7.88(d,J＝7.6Hz,2H),7.55(t,J＝7.2Hz,1H),7.48(t,J＝7.6Hz,2H),6.72(d,J＝4.8Hz,1H),5.58(s,1H),4.19(d,J＝5.2Hz,2H),3.58-3.51(m,8H),2.74(d,J＝4.8Hz,3H).13C-NMR(101MHz,DMSO)δ(ppm):167.74,166.81,164.18,162.37,157.51,134.60,131.78,128.80(2C),127.71(2C),43.99(2C),43.77(2C),41.45,28.07
N-(2-(4-(6-(乙氨基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-氧乙基)苯甲酰胺(La18)，褐色固体，产率52％,mp:202-204℃。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.59(t,J＝5.6Hz,1H),8.02(s,1H),7.88(d,J＝7.2Hz,2H),7.55(t,J＝7.2Hz,1H),7.48(t,J＝7.6Hz,2H),6.75(t,J＝5.2Hz,1H),5.60(s,1H),4.18(d,J＝5.6Hz,2H),3.58-3.48(m,8H),3.21(m,2H),1.10(t,J＝7.2Hz,3H).13C-NMR(101MHz,DMSO)δ(ppm):167.73,166.80,163.42,162.31,157.60,134.60,131.78,128.80(2C),127.71(2C),44.01(2C),43.78(2C),41.44,35.56,15.11.
N-(2-(4-(6-氯嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-氧乙基)-4-氯苯甲酰胺(La19)，黄色固体，产率69％,mp:177-179℃。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.73(t,J＝5.6Hz,1H),8.38(s,1H),7.90(d,J＝8.6Hz,2H),7.56(d,J＝8.6Hz,2H),7.01(s,1H),4.19(d,J＝5.7Hz,2H),3.75-3.57(m,8H).13C-NMR(101MHz,DMSO)δ(ppm):167.73,165.84,162.58,159.62,158.42,136.62,133.33,129.68(2C),128.91(2C),102.41,43.84(2C),41.47(2C),41.25.
N-(2-(4-(6-(甲氨基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-氧乙基)-4-氯苯甲酰胺(La20)，褐色固体，产率55％,mp:224-227℃。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.70(t,J＝5.6Hz,1H),8.02(s,1H),7.90(d,J＝8.6Hz,2H),7.56(d,J＝8.5Hz,2H),6.69(d,J＝4.8Hz,1H),5.58(s,1H),4.18(d,J＝5.7Hz,2H),3.58-3.51(m,8H),2.74(d,J＝4.6Hz,3H).13C-NMR(101MHz,DMSO)δ(ppm):167.60,165.82,164.24,162.38,157.56,136.61,133.34,129.67(2C),128.90(2C),43.98(2C),43.76(2C),41.47,28.06.
N-(2-(4-(6-(乙氨基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-氧乙基)-4-氯苯甲酰胺(La21)，淡黄色固体，产率45％,mp:208-210℃。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.71(t,J＝5.6Hz,1H),8.01(s,1H),7.90(d,J＝8.6Hz,2H),7.56(d,J＝8.6Hz,2H),6.72(t,J＝5.3Hz,1H),5.59(s,1H),4.18(d,J＝5.7Hz,2H),3.57-3.48(m,8H),3.26–3.16(m,2H),1.10(t,J＝7.1Hz,3H).13C-NMR(101MHz,DMSO)δ(ppm):167.58,165.80,163.57,162.35,157.73,136.59,133.35,129.66(2C),128.89(2C),43.99(2C),43.75(2C),41.46,35.53,15.12.
实施例2目标化合物Lj1～Lj21的制备
(1)4-氨基-6-氯嘧啶-5-甲醛(中间体E1)的制备
将4,6-二氯嘧啶-5-甲醛(16.95mmol，3g)溶于20ml甲苯中，通入氨气30min，室温搅拌过夜，过滤得黄色固体，柱层析纯化(洗脱剂为乙酸乙酯：石油醚＝1:3)，得白色固体，产率60％。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):10.25(s,1H),8.72(br,1H),8.56(br,1H),8.40(s,1H).
(2)4-氨基-6-氯嘧啶-5-甲醛O-甲基肟(中间体E2)的制备
将4-氨基-6-氯嘧啶-5-甲醛(F1)(7.62mmol，1.2g)溶于25ml冰醋酸和4ml水的混合溶液中，加入甲氧胺盐酸盐(13.71mmol，1.14g)，25℃反应过夜。TLC监测反应完成后，向反应液中加入20ml水，用50ml乙酸乙酯萃取，有机层依次水洗3次，10％氢氧化钠溶液洗，饱和食盐水洗，无水硫酸镁干燥，过滤，减压蒸除溶剂，柱层析纯化(洗脱剂石油醚：乙酸乙酯＝3:1)，得白色固体，产率99％。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.49(s,2H),8.26(s,1H),7.80(s,1H),3.98(s,3H).
(3)4-(6-氨基-5-取代嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(中间体F)的制备
将4-氨基-6-氯嘧啶-5-甲醛(F1)，4-氨基-6-氯嘧啶-5-甲醛O-甲基肟(F2)(9.65mmol)分别溶于20ml甲醇中，加入1-叔丁氧羰基哌嗪(10.61mmol，1.98g)，N,N-二异丙基乙胺(19.29mmol，3.4ml)，加热至60℃～70℃，回流反应3～4h，TLC监测反应结束，降至室温，减压蒸除溶剂，加20ml水搅拌过滤，滤饼用水润洗，真空干燥，得中间体F。
4-(6-氨基-5-醛基嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯，白色固体(中间体F1)，产率77％.1H-N MR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):9.76(s,1H),8.28(br,1H),8.08(s,1H),7.83(br,1H),3.61-3.58(m,4H),3.44(m,4H),1.42(s,9H).
4-(6-氨基-5-((甲氧亚胺基)甲基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯，白色固体(中间体F2)，产率72％.1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):8.20(s,1H),8.12(s,1H),3.96(s,3H),3.55-3.53(m,4H),3.35-3.33(m,4H),1.48(s,9H).
(4)4-氨基-6-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-取代盐酸盐(中间体G)的制备
将4-(6-氨基-5-取代嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(中间体G)(4.45mmol)溶于10ml4m ol/LHCl二氧六环溶液中，室温搅拌过夜，析出白色固体，过滤，滤饼用乙酸乙酯润洗，真空干燥得白色固体。
4-氨基-6-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-甲醛盐酸盐(中间体G1),白色固体，产率89％。
4-氨基-6-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-甲醛O-甲基肟盐酸盐(中间体G2)，白色固体，产率89％。
(5)中间体H1、H2、H3的制备
将对氯苯甘氨酸、L-苯丙氨酸、L-色氨酸(2.45mmol，500mg)分别溶于10ml水中，加入碳酸钾(2.45mmol，338.37mg)，二碳酸二叔丁酯(2.69mmol，587.76mg)，室温反应过夜，TLC监测反应完全。反应液用10％盐酸溶液酸化至pH＝1，用20ml乙酸乙酯萃取，有机层用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸除溶剂得中间体H1、H2、H3。
2-((叔丁氧羰基)氨基)-2-(4-氯苯基)乙酸(中间体H1),白色固体，产率78％。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):12.88(br,1H),7.64(d,J＝8Hz,1H),7.41(s,4H),5.12(d,J＝8.4Hz,1H)1.38(s,9H).
(叔丁氧羰基)-L-苯丙氨酸(中间体H2),无色油状物，产率99％。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):12.58(br,1H),7.30-7.18(m,5H),7.11(d,J＝8.4Hz,1H),4.12-4.06(m,1H),3.03-2.99(m,1H),2.85-2.79(m,1H),1.32(s,9H)。
(叔丁氧羰基)-L-色氨酸(中间体H3)，白色固体，产率80％。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):12.53(s,1H),10.83(s,1H),7.51(d,J＝8Hz,1H),7.32(d,J＝8Hz,1H),7.14(s,1H),7.06(t,J＝7.6Hz,1H),6.98(t,J＝7.6Hz,2H),4.17-4.12(m,1H),3.15-3.10(m,1H),3.00-2.94(m,1H),1.33(s,9H)。
(6)目标化合物Lj的制备
将中间体H(0.357mmol)溶于3mlDMF中，加入O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸酯(H BTU)(0.403mmol,153mg)，4-氨基-6-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-取代盐酸盐(中间体G)或6-(哌嗪-1-基)嘧啶-4-氯盐酸盐(中间体C1)(0.357mmol)，N,N-二异丙基乙胺(1.78mmol，0.31ml)，室温反应过夜，倒入30倍量水中，析出固体，过滤，用水润洗滤饼，真空干燥，柱层析纯化(洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯＝3:1～乙酸乙酯)得产物，将产物溶于10ml4mol/LHCl二氧六环溶液，反应24h，TLC监测反应结束，减压蒸除溶剂，加乙酸乙酯润洗，过滤，真空干燥得目标化合物Lj。
4-氯-6-(4-(2-(4-氟苯基)-3-(异丙氨基)丙酰基)哌嗪-1-基)嘧啶盐酸盐，黄绿色固体(Lj1)，产率16％。1H-NMR(400MHz,D2O)δ(ppm):8.16(s,1H),7.26(dd,J＝8.4,5.2Hz,2H),7.07(t,J＝8.7Hz,2H),6.67(s,1H),4.35(dd,J＝8.3,5.0Hz,1H),3.88–3.71(m,2H),3.56–3.32(m,7H),3.22(dd,J＝12.7,4.8Hz,1H),2.88(s,1H),1.22(dd,J＝6.4,4.2Hz,6H).13C-NMR(101MHz,D2O)δ(ppm):170.54,162.46(J＝245Hz),161.58,155.03,154.68,130.23(J＝3Hz),129.89(J＝9Hz,2C),116.62(J＝22Hz,2C),102.64,51.65,47.06,45.06,44.01,43.37,43.25,41.24,18.00,17.89.MS(ESI)m/z:406[M+H]+.
4-氯-6-(4-(2-(4-氯苯基)-3-(异丙氨基)丙酰基)哌嗪-1-基)嘧啶盐酸盐，黄绿色固体(Lj2)，产率11％。1H-NMR(400MHz,D2O)δ(ppm):8.22(s,1H),7.36(d,J＝8.4Hz,2H),7.22(d,J＝8.5Hz,2H),6.74(s,1H),4.33(dd,J＝8.4,4.9Hz,1H),3.92–3.74(m,2H),3.56–3.32(m,7H),3.22(dd,J＝12.7,4.9Hz,1H),2.97-2.93(m,1H),1.21(dd,J＝6.5,4.3Hz,6H).13C-NMR(101MHz,D2O)δ(ppm):170.37,161.65,154.88,154.35,134.19,132.88,129.80(2C),129.45(2C),102.73,51.65,46.90,45.22,43.97,43.42,43.16,41.17,17.96,17.85.MS(ESI)m/z:422[M+H]+.
4-氯-6-(4-(2-(4-溴苯基)-3-(异丙氨基)丙酰基)哌嗪-1-基)嘧啶盐酸盐，白色固体(Lj3)，产率39％。1H-NMR(400MHz,D2O)δ(ppm):8.22(s,1H),7.48(d,J＝8.4Hz,2H),7.15(d,J＝8.5Hz,2H),6.75(s,1H),4.31(dd,J＝8.5,4.8Hz,1H),3.90–3.73(m,2H),3.56–3.32(m,7H),3.21(dd,J＝12.7,4.8Hz,1H),2.94(s,1H),1.21(dd,J＝6.5,4.2H z,6H).13C-NMR(101MHz,D2O)δ(ppm):170.22,161.48,154.28,154.16,133.40,132.76(2C),129.72(2C),122.29,102.72,51.65,46.81,45.28,43.92,43.54,43.25,41.12,17.97,17.83.MS(ESI)m/z:466[M+H]+.
4-氯-6-(4-(2-(2,4-二氯苯基)-3-(异丙氨基)丙酰基)哌嗪-1-基)嘧啶盐酸盐，棕色固体(Lj4),产率40％。1H-NMR(400MHz,D2O)δ(ppm):8.24(s,1H),7.56(d,J＝1.9Hz,1H),7.27(dd,J＝8.4,1.9Hz,1H),7.12(d,J＝8.4Hz,1H),6.77(s,1H),4.63(dd,J＝9.2,3.6Hz,1H),3.94–3.77(m,2H),3.58–3.36(m,7H),3.16(dd,J＝12.6,3.7Hz,1H),3.02(s,1H),1.24(dd,J＝6.3,4.5Hz,6H).13C-NMR(101MHz,D2O)δ(ppm):169.93,161.55,154.45,153.62,135.12,133.80,130.49,130.12,129.55,128.55,102.72,51.76,45.14,43.77,43.48,43.08,42.54,41.19,18.00,17.83.MS(ESI)m/z:456[M+H]+.
1-(4-(6-氯嘧啶-4-基)-3-羟基-2-苯基丙-1-酮，无色油状物(Lj5)，产率46％。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.32(s,1H),7.32(d,J＝4.3Hz,4H),7.24(td,J＝8.3,3.9Hz,1H),6.91(s,1H),4.74(t,J＝5.3Hz,1H),4.15(dd,J＝7.9,5.6Hz,1H),4.04–3.94(m,1H),3.72–3.56(m,5H),3.55–3.40(m,3H),3.18(s,1H).13C-NMR(101MHz,DMSO)δ(ppm):170.86,162.53,159.56,158.34,138.07,129.04(2C),128.56(2C),127.41,102.35,64.78,50.59,44.71,43.96,43.77,41.23.MS(ESI)m/z:347[M+H]+.
4-(4-(L-色氨酸)哌嗪-1-基)-6-氯嘧啶盐酸盐，褐色固体(Lj6)，产率49％。[α]D 25:+44.10°(c1,MeOH)。1H-NMR(400MHz,D2O)δ(ppm):8.17(s,1H),7.39–7.34(m,1H),7.24–7.16(m,2H),7.00(m,2H),6.50(s,1H),4.62(dd,J＝10.7,5.2Hz,1H),3.51(m,1H),3.25(m,6H),2.77(ddd,J＝10.5,5.7,4.0Hz,1H),2.64(s,1H),2.18(s,1H).13C-NMR(101MHz,D2O)δ(ppm):168.88,160.55,152.53,150.55,135.65,126.68,125.22,122.09,119.61,117.83,111.80,106.32,102.67,62.45,50.40,43.60,42.51,40.72,27.11.MS(ESI)m/z:385[M+H]+.
4-(4-(L-苯丙氨酸)哌嗪-1-基)-6-氯嘧啶盐酸盐，白色固体(Lj7)，产率57％。[α]D 25:+21.60°(c 1,MeOH)。1H-NMR(400MHz,D2O)δ(ppm):8.27(s,1H),7.30(t,J＝7.5Hz,2H),7.25–7.18(m,3H),6.76(s,1H),3.75-3.71(m,2H),3.59–3.34(m,5H),3.22(dd,J＝13.3,5.6Hz,1H),3.06-2.96(m,2H),2.81(s,1H).13C-NMR(101MHz,D2O)δ(ppm):168.14,161.52,154.94,154.43,133.45,129.67(2C),129.21(2C),128.15,102.82,50.90,44.06,43.21,42.88,41.13,37.10.MS(ESI)m/z:346[M+H]+.
4-氨基-6-(4-(2-(4-氟苯基)-3-(异丙氨基)丙酰基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-甲醛盐酸盐，白色固体(Lj8)，产率93％。1H-NMR(400MHz,D2O)δ(ppm):8.01(s,1H),7.26(dd,J＝8.7,5.2Hz,2H),7.09(t,J＝8.8Hz,2H),4.34(dd,J＝8.4,5.0Hz,1H),3.86-3.80(m,1H),3.79–3.69(m,1H),3.61–3.32(m,7H),3.22(dd,J＝12.7,5.0Hz,1H),2.95–2.83(m,1H),1.21(dd,J＝6.5,4.1Hz,6H).13C-NMR(101MHz,D2O)δ(ppm):174.65,170.58,162.45(J＝245Hz),160.32,154.47,148.28,130.19(J＝3Hz),129.87(J＝8Hz,2C),116.60(J＝22Hz,2C),80.95,51.61,47.03,45.05,44.01,43.24,43.17,41.27,17.95,17.86.MS(ESI)m/z:387[M+H-CO]+.
4-氨基-6-(4-(2-(4-氯苯基)-3-(异丙氨基)丙酰基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-甲醛盐酸盐，淡黄色固体(Lj9)，产率79％。1H-NMR(400MHz,D2O)δ(ppm):8.00(s,1H),7.35(d,J＝8.4Hz,2H),7.21(d,J＝8.4Hz,2H),4.31(dd,J＝8.4,4.9Hz,1H),3.89–3.80(m,1H),3.71(m,1H),3.55–3.31(m,7H),3.20(dd,J＝12.7,4.7Hz,1H),2.96–2.86(m,1H),1.20(dd,J＝6.4,4.1Hz,6H).13C-NMR(101MHz,D2O)δ(ppm):174.65,170.37,160.29,154.43,148.26,134.13,132.91,129.76(2C),129.45(2C),80.91,51.64,46.88,45.20,43.97,43.26,42.96,41.13,17.96,17.84.MS(ESI)m/z:403[M+H-CO]+.
4-氨基-6-(4-(2-(4-溴苯基)-3-(异丙氨基)丙酰基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-甲醛盐酸盐，白色固体(Lj10)，产率92％。1H-NMR(400MHz,D2O)δ(ppm):8.01(s,1H),7.50(d,J＝8.4Hz,2H),7.15(d,J＝8.4Hz,2H),4.31(dd,J＝8.5,4.9Hz,1H),3.89–3.81(m,1H),3.71(m,1H),3.44(m,7H),3.21(dd,J＝12.7,4.8Hz,1H),2.98–2.89(m,1H),1.21(dd,J＝6.5,4.0Hz,6H).13C-NMR(101MHz,D2O)δ(ppm):174.64,170.29,160.29,154.42,148.27,133.43,132.75(2C),129.72(2C),122.28,80.90,51.64,46.81,45.27,43.97,43.28,42.92,41.11,17.97,17.84.MS(ESI)m/z:447[M+H-CO]+.
4-氨基-6-(4-(2-(2,4-二氯苯基)-3-(异丙氨基)丙酰基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-甲醛盐酸盐，白色固体(Lj11)，产率88％。1H-NMR(400MHz,D2O)δ(ppm):8.02(s,1H),7.57(d,J＝2.1Hz,1H),7.28(dd,J＝8.4,2.1Hz,1H),7.11(d,J＝8.5Hz,1H),4.61(dd,J＝9.3,3.8Hz,1H),3.91–3.83(m,1H),3.74(m,1H),3.58-3.36(m,7H),3.15(dd,J＝12.7,3.6Hz,1H),3.03–2.92(m,1H),1.23(dd,J＝6.5,4.3Hz,6H).13C-NMR(101MHz,D2O)δ(ppm):174.66,169.97,160.33,154.45,148.30,135.11,133.81,130.55,130.13,129.57,128.55,80.92,51.77,45.16,43.83,43.26,42.86,42.55,41.23,18.02,17.85.MS(ESI)m/z:437[M+H-CO]+.
4-氨基-6-(4-(2-(4-氯苯基)乙酰基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-甲醛盐酸盐，白色固体(Lj12)，产率57％。1H-NMR(400MHz,D2O)δ(ppm):8.02(s,1H),7.44(d,J＝8.5Hz,2H),7.37(d,J＝8.6Hz,2H),5.47(s,1H),3.83(m,1H),3.78–3.70(m,1H),3.56–3.41(m,4H),3.29(ddd,J＝13.5,6.1,3.9Hz,1H),3.01–2.92(m,1H).13C-NMR(101MHz,D2O)δ(pp m):176.61,166.43,160.37,154.47,148.29,136.21,130.08(2C),129.92(2C),129.44,81.02,54.54,43.84,43.19,42.88,41.53.MS(ESI)m/z:347[M+H-CO]+.
4-(4-(L-色氨酸)哌嗪-1-基)-6-氨基嘧啶-5-甲醛盐酸盐，灰白色固体(Lj13)，产率94％。[α]D 25:+29.20°(c 1,MeOH)。1H-NMR(400MHz,D2O)δ(ppm):7.93(s,1H),7.40(d,J＝7.6Hz,1H),7.28–7.21(m,2H),7.09–6.99(m,2H),4.63(dd,J＝10.6,5.2Hz,1H),3.54(d d,J＝14.1,7.0Hz,2H),3.35(dd,J＝13.9,5.1Hz,2H),3.21(m,4H),2.83–2.72(m,1H),2.65(s,1H),2.27(s,1H).13C-NMR(101MHz,D2O)δ(ppm):174.66,168.88,159.60,154.22,148.02,135.81,126.72,125.16,122.09,119.62,117.82,111.85,106.31,80.87,61.68,50.42,43.82,42.53,41.95,40.78,27.09.MS(ESI)m/z:366[M+H-CO]+.
4-(4-(L-苯丙氨酸)哌嗪-1-基)-6-氨基嘧啶-5-甲醛盐酸盐，白色固体(Lj14)，产率72％。[α]D 25:+23.90°(c 1,MeOH)。1H-NMR(400MHz,D2O)δ(ppm):8.04(s,1H),7.28(t,J＝7.3Hz,2H),7.21(t,J＝7.5Hz,3H),4.66(dd,J＝9.7,5.8Hz,1H),3.72–3.61(m,2H),3.49–3.31(m,4H),3.19(dd,J＝13.3,5.7Hz,1H),3.04–2.90(m,2H),2.79(s,1H).13C-NMR(101MHz,D2O)δ(ppm):168.10,160.13,154.44,148.28,133.39,129.62,129.16,128.11,81.00,50.86,44.05,42.99,42.70,41.15,37.04.MS(ESI)m/z:327[M+H-CO]+.
4-氨基-6-(4-(2-(4-氟苯基)-3-(异丙氨基)丙酰基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-甲醛O-甲基肟盐酸盐，淡黄色固体(Lj15)，产率55％。1H-NMR(400MHz,D2O)δ(ppm):8.01(s,1H),7.86(s,1H),7.24(dd,J＝8.7,5.2Hz,2H),7.08(t,J＝8.8Hz,2H),4.32(dd,J＝8.3,5.0Hz,1H),3.85(s,3H),3.78–3.69(m,1H),3.63–3.32(m,8H),3.21(dd,J＝12.7,5.1Hz,1H),2.94–2.84(m,1H),1.20(dd,J＝6.5,3.9Hz,6H).13C-NMR(101MHz,D2O)δ(p pm):170.63,162.48(J＝245Hz),161.92,153.15,146.76,145.21,130.23(J＝4Hz),129.83(J＝8Hz,2C),116.63(J＝22Hz,2C),88.07,62.28,51.60,48.13,47.69,46.99,44.99,44.40,41.87,17.94,17.85.MS(ESI)m/z:444[M+H]+.
4-氨基-6-(4-(2-(4-氯苯基)-3-(异丙氨基)丙酰基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-甲醛O-甲基肟盐酸盐，白色固体(Lj16)，产率87％。1H-NMR(400MHz,D2O)δ(ppm):8.01(s,1H),7.84(s,1H),7.35(d,J＝8.2Hz,2H),7.19(d,J＝8.3Hz,2H),4.31(dd,J＝8.0,4.7Hz,1H),3.86(s,3H),3.73-3.69(m,1H),3.59-3.56(m,2H),350-3.34(m,6H),3.19(dd,J＝12.6,4.6Hz,1H),2.92–2.83(m,1H),1.20(dd,J＝6.2,3.8Hz,6H).13C-NMR(101MHz,D2O)δ(ppm):170.42,161.96,153.16,146.82,145.14,134.22,132.96,129.80(2C),129.38(2C),88.05,62.29,51.63,48.11,47.51,46.85,45.13,44.25,41.81,17.94,17.82.MS(ESI)m/z:460[M+H]+.
4-氨基-6-(4-(2-(4-溴苯基)-3-(异丙氨基)丙酰基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-甲醛O-甲基肟盐酸盐，白色固体(Lj17)，产率70％。1H-NMR(400MHz,D2O)δ(ppm):8.01(s,1H),7.83(s,1H),7.50(d,J＝8.4Hz,2H),7.13(d,J＝8.5Hz,2H),4.30(dd,J＝8.5,4.9Hz,1H),3.86(s,3H),3.74–3.66(m,1H),3.61–3.32(m,8H),3.19(dd,J＝12.7,4.9Hz,1H),2.91–2.82(m,1H),1.20(dd,J＝6.5,3.9Hz,6H).13C-NMR(101MHz,D2O)δ(ppm):170.34,162.01,153.24,146.95,145.14,133.48,132.79(2C),129.65(2C),122.38,88.11,62.30,51.63,48.17,47.45,46.79,45.22,44.23,41.83,17.95,17.82.MS(ESI)m/z:504[M+H]+.
4-氨基-6-(4-(2-(2,4-二氯苯基)-3-(异丙氨基)丙酰基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-甲醛O-甲基肟盐酸盐，黄色固体(Lj18)，产率55％。1H-NMR(400MHz,D2O)δ(ppm):8.07(s,1H),7.90(s,1H),7.61(d,J＝1.7Hz,1H),7.31(dd,J＝8.4,2.1Hz,1H),7.13(d,J＝8.4Hz,1H),4.64(dd,J＝9.2,3.7Hz,1H),3.91(s,3H),3.81–3.73(m,1H),3.69–3.38(m,7H),3.26(dt,J＝9.2,4.3Hz,1H),3.17(dd,J＝12.8,3.8Hz,1H),3.00–2.91(m,1H),1.27(dd,J＝6.3,4.1Hz,6H).13C-NMR(101MHz,D2O)δ(ppm):170.09,162.07,153.30,147.01,145.23,135.24,133.85,130.69,130.26,129.72,128.61,88.17,62.39,51.84,48.08,47.51,45.20,44.17,42.63,42.01,18.08,17.91.MS(ESI)m/z:494[M+H]+.
4-氨基-6-(4-(2-(4-氯苯基)乙酰基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-甲醛O-甲基肟盐酸盐，淡黄色固体(L j19)，产率62％。1H-NMR(400MHz,D2O)δ(ppm):8.03(s,1H),7.85(s,1H),7.44(d,J＝8.5Hz,2H),7.35(d,J＝8.6Hz,2H),5.48(s,1H),3.86(s,3H),3.78–3.69(m,1H),3.64–3.41(m,5H),3.34(dt,J＝9.5,4.4Hz,1H),2.97–2.88(m,1H).13C-NMR(101M Hz,D2O)δ(ppm):166.50,162.04,153.18,146.84,145.12,136.29,130.11,129.87,129.49,88.27,62.32,54.49,47.93,47.55,44.15,42.19.MS(ESI)m/z:404[M+H]+.
4-(4-(L-色氨酸)哌嗪-1-基)-6-氨基嘧啶-5-甲醛O-甲基肟盐酸盐，灰白色固体(Lj20)，产率56％。[α]D 25:+34.70°(c 1,MeOH)。1H-NMR(400MHz,D2O)δ(ppm):7.92(s,1H),7.51(s,1H),7.35(dd,J＝17.7,8.0Hz,2H),7.23(s,1H),7.11–6.99(m,2H),4.63(dd,J＝10.6,5.1Hz,1H),3.89(s,3H),3.53-3.45(m,2H),3.33(dd,J＝13.9,5.2Hz,1H),3.24–3.12(m,5H),2.82–2.72(m,1H),2.69-2.61(m,1H).13C-NMR(101MHz,D2O)δ(ppm):168.71,161.18,152.95,146.53,144.94,135.79,126.75,125.22,122.23,119.69,117.86,111.96,106.41,87.94,62.33,50.30,47.22,47.01,44.58,41.85,27.15.MS(ESI)m/z:423[M+H]+.
4-(4-(L-苯丙氨酸)哌嗪-1-基)-6-氨基嘧啶-5-甲醛O-甲基肟盐酸盐，黄色固体(Lj21)，产率58％。[α]D 25:+17.70°(c 1,MeOH)。1H-NMR(400MHz,D2O)δ(ppm):8.06(s,1H),7.86(s,1H),7.31(d,J＝7.4Hz,2H),7.21(d,J＝6.5Hz,3H),3.89(s,3H),3.56–3.31(m,7H),3.19(dd,J＝13.2,5.7Hz,1H),3.04–2.96(m,2H),2.68–2.60(m,1H).13C-NMR(101MHz,D2O)δ(ppm):168.00,161.79,153.28,146.88,145.25,133.46,129.69(2C),129.25(2C),128.21,88.35,62.35,50.81,47.87,47.68,44.80,42.06,37.05.MS(ESI)m/z:384[M+H]+.
实施例3：化合物的生物活性(Akt1激酶的抑制活性)测定
化合物对Akt1激酶的抑制活性采用时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)的方法进行测定。
(1)待测药物溶液的配置：用万分之一天平精密称取化合物，用生化级DMSO将化合物配制成浓度为2×10^4μmol/L，作为储备液，使用前，将储备液用生化级DMSO稀释到200μmol/L，再用激酶缓冲溶液将其浓度稀释至2.5μmol/L作为待测液，低温保存，待测液需随用随配，活性实验中DMSO的浓度不得高于0.5％。
(2)工作液的配制：
①1×激酶缓冲溶液：用移液枪移取三蒸水2590.5μL，加入5×激酶缓冲液660μL，DTT溶液33μL，MgCl2溶液16.5μL，混匀后插入冰中保存。
②Akt1激酶工作液：用移液枪移取1×激酶缓冲液149.72μL，激酶Akt1母液0.28μL，混匀，插入冰中保存。
③底物工作溶液：用移液枪移取1×激酶缓冲液146.25μL，加入底物母液3.75μL，混匀，插入冰中保存。
④ATP工作溶液：用移液枪移取1×激酶缓冲液147.99μL，加入ATP母液2.01μL，混匀，插入冰中保存。
(3)检测溶液的配制：用移液枪移取检测缓冲液295.50μL，加入链酶亲和素XL665母液4.50μL，混匀，插入冰中保存。(使用前20分钟配制)
试验中设定测试组(S)、背景组(C)、空白组(B)。测试组为待测化合物，按4μL/孔将待测化合物溶液加入到384孔板中，然后加入ATP溶液2μL/孔；背景组不加化合物，加4μL1×激酶缓冲液代替，其他与测试组相同；空白组中不加化合物和Akt1，用6μL1×激酶缓冲液代替，其他与测试组相同。将上述各组于37℃孵育40min，加入检测液(10μL/孔)，37℃孵育2h。使用PerkinElmer公司的EnSpire多标记微孔板检测仪检测，激发波长为330nm，发射波长为620nm和665nm。检测结果用Ratio值表示，计算抑制率。
其中S表示测试组，C表示背景组，B表示空白组。
本发明化合物的活性试验数据如表1所示：
表1化合物的活性试验数据
活性数据实验结果显示，本发明的6-哌嗪基-取代嘧啶类衍生物对Akt1激酶均有一定的抑制活性。Lj系列中，当R3为对氯苯基或对溴苯基时活性优于苄基和吲哚-3-亚甲基，嘧啶4位氨基取代好于氯取代，R4为N-异丙基-氨甲基时活性较氨基要好，嘧啶5位取代对活性影响很大，为醛基甲氧肟时最好。化合物Lj9、Lj16、Lj17有明显的Akt1抑制活性，在1μM浓度下对Akt1激酶抑制率分别为79％、82％、98％。H-89是最早发现的具有Akt抑制活性的化合物，它对Akt的半数抑制浓度为2.2μM，本发明的化合物Lj9、Lj16、Lj17的抑制活性均优于H-89。

Claims (10)

1.一种式(I)或式(II)所示的化合物或其药学上可接受的盐，
其中，R1为取代苯基、苯甲酰氨基或对氯苯甲酰氨基；R2为氯、甲氨基或乙氨基；R3为取代苯基、苄基或吲哚-3-亚甲基；R4为氨基、羟甲基或N-异丙基-氨甲基；R5为氢、醛基或醛基O-甲基肟，R6为氯或氨基。
2.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述R1为对氟苯基、对氯苯基、对溴苯基、2,4-二氯苯基、2,6-二氯苯基、苯甲酰氨基或对氯苯甲酰氨基；R2为氯、甲氨基或乙氨基；R3为苯基、对氟苯基、对氯苯基、对溴苯基、2,4-二氯苯基、苄基或吲哚-3-亚甲基；R4为氨基、羟甲基或N-异丙基-氨甲基；R5为氢、醛基或醛基O-甲基肟，R6为氯或氨基。
3.根据权利要求1或2所述的化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，其是选自下列化合物：
1-(4-(6-氯嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(4-氟苯基)乙酮；
1-(4-(6-氯嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(4-氯苯基)乙酮；
1-(4-(6-氯嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(4-溴苯基)乙酮；
1-(4-(6-氯嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(2,4-二氯苯基)乙酮；
1-(4-(6-氯嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氯苯基)乙酮；
2-(4-氟苯基)-1-(4-(6-(甲胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)乙酮；
2-(4-氯苯基)-1-(4-(6-(甲胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)乙酮；
2-(4-溴苯基)-1-(4-(6-(甲胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)乙酮；
2-(2,4-二氯苯基)-1-(4-(6-(甲胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)乙酮；
2-(2,6-二氯苯基)-1-(4-(6-(甲胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)乙酮；
2-(4-氟苯基)-1-(4-(6-(乙胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)乙酮；
2-(4-氯苯基)-1-(4-(6-(乙胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)乙酮；
2-(4-溴苯基)-1-(4-(6-(乙胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)乙酮；
2-(2,4-二氯苯基)-1-(4-(6-(乙胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)乙酮；
2-(2,6-二氯苯基)-1-(4-(6-(乙胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)乙酮；
N-(2-(4-(6-氯嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-氧乙基)苯甲酰胺；
N-(2-(4-(6-(甲氨基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-氧乙基)苯甲酰胺；
N-(2-(4-(6-(乙氨基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-氧乙基)苯甲酰胺；
N-(2-(4-(6-氯嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-氧乙基)-4-氯苯甲酰胺；
N-(2-(4-(6-(甲氨基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-氧乙基)-4-氯苯甲酰胺；
N-(2-(4-(6-(乙氨基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-氧乙基)-4-氯苯甲酰胺；
4-氯-6-(4-(2-(4-氟苯基)-3-(异丙氨基)丙酰基)哌嗪-1-基)嘧啶；
4-氯-6-(4-(2-(4-氯苯基)-3-(异丙氨基)丙酰基)哌嗪-1-基)嘧啶；
4-氯-6-(4-(2-(4-溴苯基)-3-(异丙氨基)丙酰基)哌嗪-1-基)嘧啶；
4-氯-6-(4-(2-(2,4-二氯苯基)-3-(异丙氨基)丙酰基)哌嗪-1-基)嘧啶；
1-(4-(6-氯嘧啶-4-基)-3-羟基-2-苯基丙-1-酮；
4-(4-(L-色氨酸)哌嗪-1-基)-6-氯嘧啶；
4-(4-(L-苯丙氨酸)哌嗪-1-基)-6-氯嘧啶；
4-氨基-6-(4-(2-(4-氟苯基)-3-(异丙氨基)丙酰基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-甲醛；
4-氨基-6-(4-(2-(4-氯苯基)-3-(异丙氨基)丙酰基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-甲醛；
4-氨基-6-(4-(2-(4-溴苯基)-3-(异丙氨基)丙酰基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-甲醛；
4-氨基-6-(4-(2-(2,4-二氯苯基)-3-(异丙氨基)丙酰基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-甲醛；
4-氨基-6-(4-(2-(4-氯苯基)乙酰基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-甲醛；
4-(4-(L-色氨酸)哌嗪-1-基)-6-氨基嘧啶-5-甲醛；
4-(4-(L-苯丙氨酸)哌嗪-1-基)-6-氨基嘧啶-5-甲醛；
4-氨基-6-(4-(2-(4-氟苯基)-3-(异丙氨基)丙酰基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-甲醛O-甲基肟；
4-氨基-6-(4-(2-(4-氯苯基)-3-(异丙氨基)丙酰基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-甲醛O-甲基肟；
4-氨基-6-(4-(2-(4-溴苯基)-3-(异丙氨基)丙酰基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-甲醛O-甲基肟；
4-氨基-6-(4-(2-(2,4-二氯苯基)-3-(异丙氨基)丙酰基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-甲醛O-甲基肟；
4-氨基-6-(4-(2-(4-氯苯基)乙酰基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-甲醛O-甲基肟；
4-(4-(L-色氨酸)哌嗪-1-基)-6-氨基嘧啶-5-甲醛O-甲基肟；
4-(4-(L-苯丙氨酸)哌嗪-1-基)-6-氨基嘧啶-5-甲醛O-甲基肟。
4.权利要求1-3中的任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备Akt抑制剂中的用途。
5.权利要求1-3中的任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备预防和治疗肿瘤的药物中的用途。
6.一种权利要求1-3中的任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐的制备方法，其特征在于，式(I)所示的化合物的制备方法包括：使式C所示的化合物与式D1、D2或D3所示的化合物反应，得到式(I)所示的化合物；
其中，R1、R2具有如权利要求1所述的定义；X为F、Cl、Br、2,4-Cl或2,6-Cl；
式(II)所示的化合物的制备方法包括：使式G1、G2或C1所示的化合物与式H1、H2、H3、H4或H5所示的化合物反应，得到式(II)所示的化合物；
其中，R3、R4、R5、R6具有如权利要求1所述的定义；X为F、Cl、Br或2,4-Cl。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，式C所示的化合物的制备方法为：以4,6-二氯嘧啶(A1)为起始原料，与甲胺或乙胺反应，得到中间体化合物A2或A3，中间体A再与1-叔丁氧羰基哌嗪反应，得到中间体化合物B，将中间体化合B溶于HCl二氧六环溶液，室温反应，即得式C所示的化合物。
8.一种药物组合物，其包含权利要求1-3中任一项所述的的化合物或其药学上可接受的盐。
9.根据权利要求8所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物还包括一种或多种药学上可接受的载体、赋形剂和/或稀释剂。
10.根据权利要求8或9所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物为固体口服制剂、液体口服制剂或注射剂。
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