CN104447706A - 4-苯基-2-氨基嘧啶类化合物及其制备方法与应用 - Google Patents

4-苯基-2-氨基嘧啶类化合物及其制备方法与应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种4-苯基-2-氨基嘧啶类化合物，其结构如通式I所示：其中，X为或R0为氢、甲基或乙基；R1为氢、甲基、乙基或异丙基；R2为异丙基、甲硫甲基、取代苯基或吲哚基；化合物为R构型、S构型或消旋体。本发明的化合物结构新颖，以4-苯基-2-氨基嘧啶作为新型母核，并在苯基的间位或对位引入不同类型的氨基酸，得到了具有抑制肿瘤细胞(PC-3)生长活性的结构全新的化合物。

Description

4-苯基-2-氨基嘧啶类化合物及其制备方法与应用
技术领域
本发明涉及一种4-苯基-2-氨基嘧啶类化合物及其制备方法与应用，属于有机化合物合成及医药技术领域。
背景技术
丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶B(serine/threonine protein kinase B，PKB,亦称Akt)在细胞信号传导、促进细胞增殖和生存的过程中发挥重要作用。(参见McHardy,T.,Caldwell,J.J.,Discovery of 4-amino-1-(7H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-4-yl)piperidine–4-carboxamides as selective,orally active inhibitors of protein kinase B(Akt).J MedChem.2010,53,2239-2249)。Akt是磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol-3kinase，PI3K)/Akt信号传导通路中一个关键的中心节点。PI3K/Akt通路过度激活在实体瘤和恶性慢性白血病中常见；该通路的激活是肿瘤发生的早期事件，正常细胞暴露于致癌物质下，该通路可以很快地被激活并引起持续增殖；该通路的持续过度活化在很多肿瘤中是预后不好的标志；该通路的激活与肿瘤治疗耐药性有关，抑制该通路可增加化疗或放疗的效果。(参见Nakanishi K；Sakamoto M：Akt phosphorylation is a risk factor for early diseaserecurrence and poor prognosis in hepatocellular carcinoma.Cancer.2005,103:307-312。)因此，抑制Akt是肿瘤分子靶向治疗的一个新策略，研究新的具有Akt抑制活性的作用药物是目前亟待解决的问题。
发明内容
针对上述现有技术，本发明的目的是提供一种具有蛋白激酶B抑制活性的4-苯基-2-氨基嘧啶类化合物。
本发明的另一目的是提供该4-苯基-2-氨基嘧啶类化合物的制备方法及其用途。
为实现上述目的，本发明采用下述技术方案：
4-苯基-2-氨基嘧啶类化合物或其药用盐，其结构如通式I所示：
其中，X为或R0为氢、甲基或乙基；R1为氢、甲基、乙基或异丙基；R2为异丙基、甲硫甲基、取代苯基或吲哚基；化合物为R构型、S构型或消旋体。
优选的，所述R2为异丙基、甲硫甲基、苯基或1H-吲哚-3-基。
进一步优选的，所述4-苯基-2-氨基嘧啶类化合物或其药用盐是选自下列化合物：
2-氨基-N-〔3-(2-氨基嘧啶-4-基)苯基〕-3-(1H-吲哚-3-基)丙酰胺盐酸盐(6a)，
2-氨基-N-〔3-(2-氨基嘧啶-4-基)苯基〕-3-苯基丙酰胺盐酸盐(6b)，
2-氨基-N-〔3-(2-氨基嘧啶-4-基)苯基〕-3-(4-羟苯基)丙酰胺盐酸盐(6c)，
2-氨基-N-〔3-(2-氨基嘧啶-4-基)苯基〕-4-甲基戊酰胺盐酸盐(6d)，
(S)-2-氨基-N-〔3-(2-氨基嘧啶-4-基)苯基〕-3-(4-羟苯基)丙酰胺盐酸盐[(S)-6e]，
2-氨基-N-〔3-(2-氨基嘧啶-4-基)苯基〕-4-甲硫基丁酰胺盐酸盐(6f)，
(R)-2-氨基-N-〔3-(2-氨基嘧啶-4-基)苯基〕-3-苯基丙酰胺盐酸盐[(R)-6g]，
2-氨基-N-〔4-(2-氨基嘧啶-4-基)苯基〕-3-(1H-吲哚-3-基)丙酰胺盐酸盐(6h)，
2-氨基-N-〔4-(2-氨基嘧啶-4-基)苯基〕-3-苯基丙酰胺盐酸盐(6i)，
2-氨基-N-〔4-(2-氨基嘧啶-4-基)苯基〕-3-(4-羟苯基)丙酰胺盐酸盐(6j)，
2-氨基-N-〔4-(2-氨基嘧啶-4-基)苯基〕-4-甲基戊酰胺盐酸盐(6k)，或
(S)-2-氨基-N-〔4-(2-氨基嘧啶-4-基)苯基〕-3-(1H-吲哚-3-基)丙酰胺盐酸盐[(S)-6l]。
上述优选的12个化合物名称后的括号中为其对应的代号，为了叙述方便和表达简洁，上述括号中的代号在本说明书以下内容中将被直接使用。
结构为通式(I)所示的4-苯基-2-氨基嘧啶类化合物或其药用盐的制备方法，其合成路线如下：
合成路线中，所用的试剂及反应条件如下：
(a)N,N-二甲基甲酰胺二甲基缩醛,甲苯,回流24-36h；
(b)盐酸胍,碳酸钾,无水乙醇,氮气保护回流18-24h；
(c)二碳酸二叔丁酯,二氧六环,回流24-36h；
(d)钯碳,氢气,二氯甲烷/甲醇,室温2-4h；
(e)Boc保护的氨基酸,二环己基碳二亚胺,二氯甲烷/四氢呋喃,室温反应3天；
(f)盐酸的乙酸乙酯溶液,室温搅拌0.5-1h。
具体合成步骤为：
(1)将对/间硝基苯乙酮(起始原料1)和N，N-二甲基甲酰胺二甲缩醛(DMFDMA)加入甲苯溶液中,升温至70-90℃，反应20-24h。其中对/间硝基苯乙酮、N，N-二甲基甲酰胺二甲缩醛的摩尔比为1:1.5；反应结束后，冷至室温，减压蒸除溶剂，用柱层析分离得4-(3/4-硝基苯基)-2-氨基嘧啶(中间体2)，洗脱系统为石油醚-乙酸乙酯2:1；
(2)取盐酸胍加入无水乙醇中，搅拌均匀后加入碳酸钾,室温搅拌40min，加入上述中间体2,升温至70-90℃，回流反应20-24h。其中盐酸胍、碳酸钾、中间体2的摩尔比为3:4.5:1；反应结束后，冷至室温，减压蒸除溶剂，水洗，抽滤，干燥得黄色固体，即〔4-(3/4-硝基苯基)嘧啶-2-基〕氨基甲酸叔丁酯(中间体3)。
(3)将上述中间体3加入至二氧六环溶液中，搅拌均匀后加入用二氧六环溶解的二碳酸二叔丁酯，升温至90-110℃，回流反应20-24h。其中中间体3、二碳酸二叔丁酯的摩尔比为1:3；反应结束后，减压蒸除溶剂，用柱层析分离得〔4-(3/4-硝基苯基)嘧啶-2-基〕氨基甲酸叔丁酯(中间体4)，洗脱系统为石油醚-乙酸乙酯2:1。
(4)将上述中间体4加入至二氯甲烷-甲醇混合溶液中(混合溶液中，二氯甲烷和甲醇的体积比为1:1),超声溶解后加入用甲醇洗过的与“中间体4”等质量的钯碳(Pb/C，钯质量百分含量为10％)，通氢气，室温搅拌4h，反应结束后，用硅藻土抽滤除去Pb/C，减压蒸除溶剂，甲醇洗得〔4-(4-氨基苯基)嘧啶-2-基〕氨基甲酸叔丁酯(中间体5)。
(5)取上述中间体5加入至干燥的二氯甲烷溶液中，超声溶解，加入N，N’-二环己基碳二亚胺(DCC)和用干燥的四氢呋喃(THF)溶解的Boc保护的氨基酸，室温搅拌3天，反应完毕后抽滤除去不溶物，减压蒸除溶剂，乙酸乙酯溶解，抽滤除去不溶物，滤液经柱层析(石油醚-丙酮4:1)纯化后，将其加入至饱和氯化氢的乙酸乙酯溶液，室温搅拌0.5-1.5h，反应完毕后，减压蒸除酸和溶剂，乙酸乙酯洗，乙醚洗，甲醇丙酮重结晶，得终产物6。所述Boc保护的氨基酸中氨基酸为亮氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸、酪氨酸、S构型酪氨酸，R构型苯丙氨酸或S构型色氨酸。
所述步骤(1)-(5)中，X为和(波浪线表示的是苯环接入的是间位和对位)
优选的，步骤(1)中，溶液升温至80℃，反应24h。
优选的，步骤(2)中，溶液升温至80℃，回流反应20h。
优选的，步骤(3)中，溶液升温至100℃，回流反应24h。
本发明还提供一种含有有效量的通式I化合物或其药用盐的抗肿瘤类药物组合物，特别是抗前列腺癌的药物组合物。
该种组合物可制成口服制剂和肠胃外给药制剂，可以为片剂、丸剂、胶囊剂或注射剂。
本发明还提供一种含有治疗剂量的本发明化合物或其药用盐的药物，和一种或多种药学上可接受载体和/或赋形剂的药物组合物。载体包括如生理盐水、缓冲盐水、葡萄糖、水、甘油、乙醇或它们的组合物；赋形剂可以选自磷酸钙，硬脂酸镁，滑石粉，糊精，淀粉，凝胶纤维素，甲基纤维素，羧甲基纤维素钠盐或聚乙烯吡咯烷酮。
本发明的4-苯基-2氨基嘧啶类化合物或其药用盐具有肿瘤细胞生长，可以用于制备抗肿瘤药物，尤其是6a、6c、6h,6i具有较好的肿瘤细胞生长抑制活性。
本发明的有益效果：
本发明的化合物结构新颖，以4-苯基-2-氨基嘧啶作为新型母核，并在苯基的间位或对位引入不同类型的氨基酸，得到了具有抑制肿瘤细胞(PC-3)生长活性的结构全新的化合物。
具体实施方式
结合实施例对本发明作进一步的说明，应该说明的是，下述说明仅是为了解释本发明，并不对其内容进行限定。实施例中采用的条件可以根据现有的设备条件做进一步调整，未注明的实施条件通常为常规实验中的条件。
实施例1：化合物6a的制备
(1)E-3-二甲胺基-1-(3-硝基苯基)-2-丙烯-1-酮(中间体2a)的制备
取间硝基苯乙酮(10mmol,2.20g)，置于100ml干燥的二颈瓶中，加入甲苯10ml，N，N-二甲基甲酰胺二甲缩醛(DMFDMA)(15mmol，1.99ml),升温至80℃，反应24h。TLC检测，停止反应，冷至室温，减压蒸除溶剂，用柱层析分离得中间体2a，洗脱系统为石油醚-乙酸乙酯2:1。
E-3-二甲胺基-1-(3-硝基苯基)-2-丙烯-1-酮(2a).黄色固体，产率：85.6％.1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm):8.616(s,1H),8.365(d,J＝7.2Hz,1H),8.336(d,J＝7.2Hz,1H),7.848(d,J＝12.6Hz,1H),7.753(t,J＝7.8Hz,1H),5.937(d,J＝12.6Hz,1H),3.192(s,3H),2.976(s,3H).MS(ESI)m/z:221.3[M+H]+.
(2)4-(3-硝基苯基)-2-氨基嘧啶(中间体3a)的制备
取盐酸胍(34.06mmol,3.35g),无水乙醇20ml置于250ml干燥的二颈瓶中，搅拌均匀后加入碳酸钾(51.09mmol,7.06g),室温搅拌40min，加入中间体2a(11.35mmol,2.50g),升温至80℃，回流反应20h。TLC检测反应完毕，冷至室温，减压蒸除溶剂，水洗，抽滤，干燥得黄色固体。
4-(3-硝基苯基)-2-氨基嘧啶(3a)..黄色固体，产率：98.7％.1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm):8.923(s,1H),8.509(d,J＝7.8Hz,1H),8.415(d,J＝4.8Hz,1H),8.362(d,J＝8.4Hz,1H),7.824(t,J＝8.4Hz,1H),7.301(d,J＝5.4Hz,1H),6.898(s,2H).MS(ESI)m/z:217.4[M+H]+.
(3)〔4-(3-硝基苯基)嘧啶-2-基〕氨基甲酸叔丁酯(中间体4a)的制备
将中间体3a(5mmol，1.08g)置于100ml圆底烧瓶中，加入二氧六环30ml,搅拌均匀后加入用二氧六环溶解的二碳酸二叔丁酯(15mmol，3.27g)20ml，升温至100℃，回流反应24h。停止反应，冷至室温，减压蒸除溶剂，用柱层析分离得中间体4，洗脱系统为石油醚-乙酸乙酯2:1。
〔4-(3-硝基苯基)嘧啶-2-基〕氨基甲酸叔丁酯(4a)..白色固体，产率：51.7％.1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm):10.225(s,1H),9.039(s,1H),8.752(d,J＝5.4Hz,1H),8.647(d,J＝7.2Hz,1H),8.410(d,J＝7.8Hz,1H),7.873(d,J＝5.4Hz,1H),7.862(d,J＝8.4Hz,1H),1.498(s,9H).MS(ESI)m/z:317.5[M+H]+.
(4)〔4-(3-氨基苯基)嘧啶-2-基〕氨基甲酸叔丁酯(中间体5a)的制备
将中间体4a(5mmol，1.58g)置于100ml二颈瓶中，加入二氯甲烷20ml,甲醇20ml，超声溶解后加入用甲醇洗过的等量Pb/C(1.58g)，通氢气，室温搅拌4h，TLC检测反应完毕，用硅藻土抽滤除去Pb/C，减压蒸除溶剂，甲醇洗，纯化未完全做下一步。
〔4-(3-氨基苯基)嘧啶-2-基〕氨基甲酸叔丁酯(5a).白色固体，产率：54.8％.1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm):9.977(s,1H),8.598(d,J＝5.4Hz,1H),7.494(d,J＝4.8Hz,1H),7.394(s,1H),7.366(d,J＝7.8Hz,1H),7.210(t,J＝7.8Hz,1H),(d,J＝6.6Hz,1H),1.484(s,9H).MS(ESI)m/z:287.4[M+H]+.
(5)2-氨基-N-〔3-(2-氨基嘧啶-4-基)苯基〕-3-取代丙酰胺盐酸盐(化合物6a)的制备
取中间体5a(1mmol，0.28g)置于50ml干燥的圆底烧瓶中，加入干燥的二氯甲烷10ml,超声溶解，加入DCC(1.5mmol，0.31g)，加入用干燥的THF(10ml)溶解的Boc保护的氨基酸(2mmol)，室温搅拌3天，反应完毕后抽滤除去不溶物，减压蒸除溶剂，乙酸乙酯20ml溶解，抽滤除去不溶物，滤液用柱层析(石油醚/丙酮4:1)纯化后，置于50ml圆底烧瓶中，加入氯化氢的乙酸乙酯溶液15ml，室温搅拌0.5-1.5h，停止反应，减压蒸除酸和溶剂，乙酸乙酯洗，乙醚洗，甲醇丙酮重结晶，得终产物，产率为44％。
上述Boc保护的氨基酸中氨基酸为色氨酸。
2-氨基-N-〔3-(2-氨基嘧啶-4-基)苯基〕-3-(1H-吲哚-3-基)丙酰胺盐酸盐(6a):黄色粉末，熔点：287～291℃。1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm):11.253(s,1H),11.07(s,1H),8.48(d,J＝6.0Hz,1H),8.45(s,3H),8.39(s,1H),7.89(d,J＝7.8Hz,1H),7.84(d,J＝7.8Hz,1H),7.73(d,J＝7.8Hz,1H),7.55(t,J＝7.8Hz,1H),7.35(d,J＝6.6Hz,2H),7.29(d,J＝2.8Hz,1H),7.06(t,J＝7.8Hz,1H),6.95(t,J＝7.8Hz,1H),4.31(m,1H),3.39(dd,J＝15.0,6.6Hz,1H),3.32(dd,J＝14.4,7.2Hz,1H).MS(ESI)m/z:373.2[M+H]+.
实施例2：化合物6b的制备
制备方法同实施例1，区别在于，步骤(5)中，Boc保护的氨基酸中氨基酸为苯丙氨酸化合物6b的产率为45％。
2-氨基-N-〔3-(2-氨基嘧啶-4-基)苯基〕-3-苯基丙酰胺盐酸盐(6b):白色粉末，熔点：223～226℃。1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm):11.289(s,1H),8.53(s,3H),8.50(d,J＝6.0Hz,1H),8.409(s,1H),7.89(d,J＝7.8Hz,1H),7.82(d,J＝8.4Hz,1H),7.55(d,J＝7.8Hz,1H),7.36(s,3H),7.32(d,J＝7.8Hz,2H),7.26(d,J＝7.2Hz,1H),4.36(m,1H),3.25(dd,J＝13.8,7.8Hz,1H),3.16(dd,J＝13.8,7.8Hz,1H).MS(ESI)m/z:334.2[M+H]+.
实施例3：化合物6c的制备
制备方法同实施例1，区别在于，步骤(5)中，Boc保护的氨基酸中氨基酸为酪氨酸,化合物6c的产率为42％。
2-氨基-N-〔3-(2-氨基嘧啶-4-基)苯基〕-3-(4-羟苯基)丙酰胺盐酸盐(6c):白色粉末，熔点：298～302℃。1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm):11.38(s,1H),8.54(s,1H),8.48(s,1H),8.41(s,3H),7.91(d,J＝7.2Hz,1H),7.87(d,J＝7.8Hz,1H),7.56(t,J＝7.8Hz,1H),7.44(d,J＝6.0Hz,1H),7.15(d,J＝8.4Hz,2H),6.72(d,J＝7.2Hz,2H),4.31(m,1H),3.17(dd,J＝6.6,4.8Hz,1H),3.10(dd,J＝6.6,4.8Hz,1H).MS(ESI)m/z:350.6[M+H]+.
实施例4：化合物6d的制备
制备方法同实施例1，区别在于，步骤(5)中，Boc保护的氨基酸中氨基酸为亮氨酸(请具体给出化合物6d氨基酸的种类)，产率为43％。
2-氨基-N-〔3-(2-氨基嘧啶-4-基)苯基〕-4-甲基戊酰胺盐酸盐(6d):白色粉末，熔点：221～224℃。1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm):11.13(s,1H),8.45(d,J＝6.6Hz,1H),8.44(s,3H),8.43(s,1H),7.88(3H,t,J＝7.8),7.55(t,J＝7.8Hz,1H),7.31(d,J＝4.8Hz,1H),4.06(m,1H),1.70(m,3H),0.95(m,6H).MS(ESI)m/z:300.4[M+H]+.
实施例5：化合物6e的制备
制备方法同实施例1，区别在于，步骤(5)中，Boc保护的氨基酸中氨基酸为S构型酪氨酸,化合物6e的产率为42％。
(S)-2-氨基-N-〔3-(2-氨基嘧啶-4-基)苯基〕-3-(4-羟苯基)丙酰胺盐酸盐[(S)-6e]:白色粉末，熔点：298～302℃。1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm):10.921(s,1H),8.334(s,3H),8.326(d,J＝5.4Hz,1H)，8.219(s,1H),7.763(d,J＝7.8Hz,1H)，7.743(d,J＝9.0Hz,1H)，7.465(t,J＝7.8Hz,1H)，7.112(d,J＝8.4Hz,2H)，7.025(d,J＝4.8Hz,1H)，6.712(d,J＝8.4Hz,2H)，6.674(s,1H),5.259(s,1H),4.130(m,1H),3.128(dd,J＝13.8,6.6Hz,1H),3.030(dd,J＝13.8,6.6Hz,1H).MS(ESI)m/z:350.5[M+H]+.
实施例6：化合物6f的制备
制备方法同实施例1，区别在于，步骤(5)中，Boc保护的氨基酸中氨基酸为甲硫氨酸，化合物6f的产率为48％。
2-氨基-N-〔3-(2-氨基嘧啶-4-基)苯基〕-4-甲硫基丁酰胺盐酸盐(6f):黄色粉末，熔点：270～274℃。1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm):11.37(s,1H),8.58(s,3H),8.50(m,2H),7.90(d,J＝6.6Hz,1H),7.90(d,J＝7.8Hz,1H),7.57(t,J＝7.8Hz,1H),7.39(d,J＝4.2Hz,1H),4.18(m,1H),2.63(m,2H),2.15(m,2H),2.0(s,3H).MS(ESI)m/z:318.2[M+H]+.
实施例7：化合物6g的制备
制备方法同实施例1，区别在于，步骤(5)中，Boc保护的氨基酸中氨基酸为R构型苯丙氨酸，化合物6g的产率为46％。
(R)-2-氨基-N-〔3-(2-氨基嘧啶-4-基)苯基〕-3-苯基丙酰胺盐酸盐[(R)-6g]:黄色粉末，熔点：223～226℃。1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm):11.21(s,1H),8.57(s,3H),8.33(d,J＝4.2Hz,1H),8.26(s,1H),7.74(t,J＝7.8Hz,1H),7.45(t,J＝7.8Hz,1H),7.36(d,J＝6.6Hz,1H),7.31(t,J＝6.6Hz,2H),7.26(d,J＝6.6Hz,1H),7.01(d,J＝4.2,Hz,1H),6.72(s,2H),4.35(s,1H),3.16-3.23(m,2H).MS(ESI)m/z:334.6[M+H]+.
实施例8：化合物6h的制备
(1)E-3-二甲胺基-1-(4-硝基苯基)-2-丙烯-1-酮(中间体2b)的制备
取对硝基苯乙酮(10mmol,2.20g)，置于100ml干燥的二颈瓶中，加入甲苯10ml，N，N-二甲基甲酰胺二甲缩醛(DMFDMA)(15mmol，1.99ml),升温至80℃，反应24h。TLC检测，停止反应，冷至室温，减压蒸除溶剂，用柱层析分离得中间体2b，洗脱系统为石油醚-乙酸乙酯2:1。
E-3-二甲胺基-1-(4-硝基苯基)-2-丙烯-1-酮(2b),黄色固体，产率：87.8％.1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm):8.277(d,J＝9.0Hz,2H),8.120(d,J＝8.4Hz,2H),7.817(d,J＝11.4Hz,1H),5.889(d,J＝12.6Hz,1H),3.187(s,3H),2.961(s,3H).MS(ESI)m/z:221.1[M+H]+.
(2)4-(4-硝基苯基)-2-氨基嘧啶(中间体3b)的制备
取盐酸胍(34.06mmol,3.35g),无水乙醇20ml置于250ml干燥的二颈瓶中，搅拌均匀后加入碳酸钾(51.09mmol,7.06g),室温搅拌40min，加入中间体2b(11.35mmol,2.50g),升温至80℃，回流反应20h。TLC检测反应完毕，冷至室温，减压蒸除溶剂，水洗，抽滤，干燥得黄色固体。
4-(4-硝基苯基)-2-氨基嘧啶(3b).黄色固体，产率：97.3％.1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm):8.422(d,J＝4.8Hz,1H),8.364(d,J＝9.0Hz,2H),8.333(d,J＝9.0Hz,2H),7.267(d,J＝4.8Hz,1H),6.872(s,2H).MS(ESI)m/z:217.4[M+H]+.
(3)〔4-(4-硝基苯基)嘧啶-2-基〕氨基甲酸叔丁酯(中间体4b)的制备
将中间体3b(5mmol，1.08g)置于100ml圆底烧瓶中，加入二氧六环30ml,搅拌均匀后加入用二氧六环溶解的二碳酸二叔丁酯(15mmol，3.27g)20ml，升温至100℃，回流反应24h。停止反应，冷至室温，减压蒸除溶剂，用柱层析分离得中间体4b，洗脱系统为石油醚-乙酸乙酯2:1。
〔4-(4-硝基苯基)嘧啶-2-基〕氨基甲酸叔丁酯(4b)..白色固体，产率：53.2％.1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm):10.232(s,1H),8.767((d,J＝4.8Hz,1H),8.475(d,J＝9.0Hz,2H),8.410(d,J＝9.0Hz,2H),7.840(d,J＝5.4Hz,1H),1.498(s,9H).MS(ESI)m/z:317.5[M+H]+.
(4)〔4-(4-氨基苯基)嘧啶-2-基〕氨基甲酸叔丁酯(中间体5b)的制备
将中间体4b(5mmol，1.58g)置于100ml二颈瓶中，加入二氯甲烷20ml,甲醇20ml，超声溶解后加入用甲醇洗过的等量Pb/C(1.58g)，通氢气，室温搅拌4h，TLC检测反应完毕，用硅藻土抽滤除去Pb/C，减压蒸除溶剂，甲醇洗，纯化未完全做下一步。
〔4-(4-氨基苯基)嘧啶-2-基〕氨基甲酸叔丁酯(5b).淡黄色固体，产率：61.2％.MS(ESI)m/z:287.4[M+H]+.
(5)2-氨基-N-〔4-(2-氨基嘧啶-4-基)苯基〕-3-取代丙酰胺盐酸盐(化合物6a)的制备
取中间体5b(1mmol，0.28g)置于50ml干燥的圆底烧瓶中，加入干燥的二氯甲烷10ml,超声溶解，加入DCC(1.5mmol，0.31g)，加入用干燥的THF(10ml)溶解的Boc保护的氨基酸(2mmol)，室温搅拌3天，反应完毕后抽滤除去不溶物，减压蒸除溶剂，乙酸乙酯20ml溶解，抽滤除去不溶物，滤液用柱层析(石油醚/丙酮4:1)纯化后，置于50ml圆底烧瓶中，加入氯化氢的乙酸乙酯溶液15ml，室温搅拌0.5-1.5h，停止反应，减压蒸除酸和溶剂，乙酸乙酯洗，乙醚洗，甲醇丙酮重结晶，得终产物,产率为42％
2-氨基-N-〔4-(2-氨基嘧啶-4-基)苯基〕-3-(1H-吲哚-3-基)丙酰胺盐酸盐(6h):黄色粉末，熔点：304～307℃。1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm):11.40(s,1H),11.05(s,1H),8.43(s,1H),8.40(s,3H),8.21(d,J＝8.4Hz,2H),7.83(d,J＝8.4Hz,2H),7.71(d,J＝7.8Hz,1H),7.46(d,J＝6.0Hz,1H),7.35(d,J＝7.8Hz,1H),7.28(d,J＝1.8Hz,1H),7.06(t,J＝7.8Hz,1H),6.94(t,J＝7.2Hz,1H),4.33(m,1H),3.39(m,1H),3.30(m,1H).MS(ESI)m/z:373.4[M+H]+.
实施例9：化合物6i的制备
制备方法同实施例8，区别在于，步骤(5)中，Boc保护的氨基酸中氨基酸为苯丙氨酸，化合物6f的产率为50％。
2-氨基-N-〔4-(2-氨基嘧啶-4-基)苯基〕-3-苯基丙酰胺盐酸盐(6i):黄色粉末，熔点：306～308℃。1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm):11.479(s,1H),8.49(s,3H),8.45(d,J＝6.0Hz,1H),8.21(d,J＝9.0Hz,2H),7.83(d,J＝8.4Hz,2H),7.48(d,J＝6.6Hz,1H),7.35(d,J＝6.6Hz,2H),7.32(d,J＝7.2Hz,2H),7.26(t,J＝7.2Hz,1H),4.40(m,1H),3.25(dd,J＝13.8,7.8Hz,1H),3.15(dd,J＝13.8,7.8Hz,1H).MS(ESI)m/z:334.5[M+H]+.
实施例10：化合物6j的制备
制备方法同实施例8，区别在于，步骤(5)中，Boc保护的氨基酸中氨基酸为酪氨酸，化合物6f的产率为46％。
2-氨基-N-〔4-(2-氨基嘧啶-4-基)苯基〕-3-(4-羟苯基)丙酰胺盐酸盐(6j):淡黄色粉末，熔点：>360℃。1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm):10.66(s,1H),9.38(s,1H),8.30(m,4H),8.07(d,J＝8.4Hz,2H),7.66(d,J＝9.0Hz,2H),7.09(d,J＝6.0Hz,1H),7.07(d,J＝7.8Hz,2H),6.70(d,J＝8.4Hz,2H),6.63(s,4H),4.11(m,1H),3.08(dd,J＝13.2,5.4Hz,1H),2.98(dd,J＝13.8,6.6Hz,1H).MS(ESI)m/z:350.6[M+H]+.
实施例11：化合物6k的制备
制备方法同实施例8，区别在于，步骤(5)中，Boc保护的氨基酸中氨基酸为亮氨酸，化合物6f的产率为49％。
2-氨基-N-〔4-(2-氨基嘧啶-4-基)苯基〕-4-甲基戊酰胺盐酸盐(6k):白色粉末，熔点：282～286℃。1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm):11.63(s,1H),8.54(s,3H),8.53(s,1H),8.48(d,J＝6.6Hz,1H),8.25(d,J＝8.4Hz,2H),7.94(d,J＝8.4Hz,2H),7.53(d,J＝6.0Hz,1H),4.18(m,1H),1.72(m,3H),0.94(m,6H).MS(ESI)m/z:300.4[M+H]+.
实施例12：化合物6l的制备
制备方法同实施例8，区别在于，步骤(5)中，Boc保护的氨基酸中氨基酸为S构型色氨酸，化合物6f的产率为45％。
(S)-2-氨基-N-〔4-(2-氨基嘧啶-4-基)苯基〕-3-(1H-吲哚-3-基)丙酰胺盐酸盐[(S)-6l]:黄色粉末，熔点：300～303℃。1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm):11.62(s,1H),11.08(s,1H),8.46(s,3H),8.45(d,J＝6.6Hz,1H),8.21(d,J＝7.8Hz,2H),7.86(d,J＝8.4Hz,2H),7.73(d,J＝7.8Hz,1H),7.48(d,J＝6.0Hz,1H),7.34(d,J＝7.8Hz,1H),7.31(s,1H),7.06(t,J＝7.8Hz,1H),6.93(t,J＝7.2Hz,1H),4.40(d,J＝6.0Hz,1H),3.35-3.40(m,2H).MS(ESI)m/z:373.4[M+H]+.
实施例13：抗肿瘤活性实验
1.实验材料：
(1)实验试剂及药品：
阳性对照药GSK690693(美国Selleck公司)、RPMI-1640干粉培养基(美国Gibco公司)、胎牛血清FBS(上海索来宝生物科技有限公司)、MTT(美国Sigma公司)(1×PBS溶解，5mg/ml)、DMSO(AR,中国医药集团上海化学试剂有限公司)、NaCl、KCl、Na2HPO4·12H2O、KH2PO4、NaHCO3、HCl、NaOH(国产分析纯产品)、PBS缓冲液(g/L)：NaCl 8.0，KCl 0.2，Na2HPO4·12H2O 3.58，KH2PO40.2，pH7.2～7.4。RPMI-1640培养液(g/L)：RPMI-164010.6，NaHCO32.2，Hepes freeacid 1.0，pH 7.0～7.2。本发明实施例1-12制备的化合物6a-6l均溶于DMSO，配制成2×104μmol/L的母液冷藏。
(2)实验主要仪器：
96孔细胞培养板：北京COSTAR公司、二氧化碳培养箱：美国Forma Scientific公司、电子分析天平(ER-182A型)：日本A&D公司、超净工作台(ZHJH-1209型)：上海智城分析仪器制造有限公司、电热恒温水浴箱：上海医疗仪器三厂生产、酶联免疫检测仪(MK3Multiskan)：上海Thermo Labsystem分析仪器有限公司生产、台式离心机：上海安亭科学仪器厂、64R低温高速离心机：Allegra 64R，美国Beckman公司、超低温冰箱：MDF-382E，日本SANYO公司、漩涡混合器：江苏海门其林医用仪器厂。
2.实验方法：
用四甲基偶氮唑兰微量酶标比色法(MTT法)测定了化合物对Akt1高表达的前列腺癌PC-3细胞的生长抑制活性。取对数生长期PC-3细胞，1×PBS洗涤后用10％FBS RPM1640培养基调整细胞数为6×104个/ml，每孔100μl接种于96孔培养板中，并将铺好的96孔板置于37℃、5％CO2恒温培养箱内培养24小时后加入不同浓度的测试样品，置于37℃，5％CO2恒温培养箱内培养72h；终止培养前每孔加入10μl用PBS缓冲液配制的5mg/ml MTT溶液，37℃孵育4h。孵育完毕后，2500rpm离心20min。扣除全部培养基，每孔加DMSO 200μl，振荡待甲瓒产物充分溶解。置于酶联免疫检测仪上测570nm处吸光度(OD值)，按公式计算细胞抑制率。再计算IC50值。
计算半数抑制浓度IC50值。结果见表1。
表1化合物抗肿瘤细胞增殖的实验结果
由表1可以看出,体外活性测试结果表明，化合物6a、6c、6h及6i具有较好的细胞抑制活性,可用于制备抗前列腺癌的药物。

Claims (10)

1.4-苯基-2-氨基嘧啶类化合物或其药用盐，其结构如通式I所示：
其中，X为R0为氢、甲基或乙基；R1为氢、甲基、乙基或异丙基；R2为异丙基、甲硫甲基、取代苯基或吲哚基；化合物为R构型、S构型或消旋体。
2.如权利要求1所述的4-苯基-2-氨基嘧啶类化合物或其药用盐，其特征在于，所述R2为异丙基、甲硫甲基、苯基或1H-吲哚-3-基。
3.如权利要求1所述的4-苯基-2-氨基嘧啶类化合物或其药用盐，其特征在于，所述4-苯基-2-氨基嘧啶类化合物是选自下列化合物：
2-氨基-N-〔3-(2-氨基嘧啶-4-基)苯基〕-3-(1H-吲哚-3-基)丙酰胺盐酸盐，
2-氨基-N-〔3-(2-氨基嘧啶-4-基)苯基〕-3-苯基丙酰胺盐酸盐，
2-氨基-N-〔3-(2-氨基嘧啶-4-基)苯基〕-3-(4-羟苯基)丙酰胺盐酸盐，
2-氨基-N-〔3-(2-氨基嘧啶-4-基)苯基〕-4-甲基戊酰胺盐酸盐，
(S)-2-氨基-N-〔3-(2-氨基嘧啶-4-基)苯基〕-3-(4-羟苯基)丙酰胺盐酸盐，
2-氨基-N-〔3-(2-氨基嘧啶-4-基)苯基〕-4-甲硫基丁酰胺盐酸盐，
(R)-2-氨基-N-〔3-(2-氨基嘧啶-4-基)苯基〕-3-苯基丙酰胺盐酸盐，
2-氨基-N-〔4-(2-氨基嘧啶-4-基)苯基〕-3-(1H-吲哚-3-基)丙酰胺盐酸盐，
2-氨基-N-〔4-(2-氨基嘧啶-4-基)苯基〕-3-苯基丙酰胺盐酸盐，
2-氨基-N-〔4-(2-氨基嘧啶-4-基)苯基〕-3-(4-羟苯基)丙酰胺盐酸盐，
2-氨基-N-〔4-(2-氨基嘧啶-4-基)苯基〕-4-甲基戊酰胺盐酸盐，或
(S)-2-氨基-N-〔4-(2-氨基嘧啶-4-基)苯基〕-3-(1H-吲哚-3-基)丙酰胺盐酸盐。
4.权利要求1至3任一项所述的4-苯基-2-氨基嘧啶类化合物或其药用盐的制备方法，其特征在于，步骤如下：
(1)将对/间硝基苯乙酮和N，N-二甲基甲酰胺二甲缩醛加入甲苯溶液中,升温至70-90℃，反应20-24h；其中对/间硝基苯乙酮、N，N-二甲基甲酰胺二甲缩醛的摩尔比为1:1.5；反应结束后，冷至室温，除去溶剂，用柱层析分离，得4-(3/4-硝基苯基)-2-氨基嘧啶；
(2)取盐酸胍加入无水乙醇中，搅拌均匀后加入碳酸钾,室温搅拌，加入步骤(1)制备的4-(3/4-硝基苯基)-2-氨基嘧啶,升温至70-90℃，回流反应20-24h；其中盐酸胍、碳酸钾、4-(3/4-硝基苯基)-2-氨基嘧啶的摩尔比为3:4.5:1；反应结束后，冷至室温，除去溶剂，水洗，抽滤，干燥得黄色固体，得〔4-(3/4-硝基苯基)嘧啶-2-基〕氨基甲酸叔丁酯；
(3)将步骤(2)制得的〔4-(3/4-硝基苯基)嘧啶-2-基〕氨基甲酸叔丁酯加入至二氧六环溶液中，搅拌均匀后加入用二氧六环溶解的二碳酸二叔丁酯，升温至90-110℃，回流反应20-24h；其中〔4-(3/4-硝基苯基)嘧啶-2-基〕氨基甲酸叔丁酯、二碳酸二叔丁酯的摩尔比为1:3；反应结束后，除去溶剂，用柱层析分离，得〔4-(3/4-硝基苯基)嘧啶-2-基〕氨基甲酸叔丁酯；
(4)将步骤(3)制得的〔4-(3/4-硝基苯基)嘧啶-2-基〕氨基甲酸叔丁酯加入至二氯甲烷-甲醇混合溶液中,溶解后加入用甲醇洗过的等量钯碳，通氢气，室温搅拌，反应结束后，除去Pb/C，除去溶剂，甲醇洗得〔4-(4-氨基苯基)嘧啶-2-基〕氨基甲酸叔丁酯；
(5)将步骤(4)制得的〔4-(4-氨基苯基)嘧啶-2-基〕氨基甲酸叔丁酯加入至干燥的二氯甲烷溶液中，超声溶解，加入二环己基碳二亚胺和用干燥的四氢呋喃溶解的Boc保护的氨基酸，室温搅拌，反应完毕后抽滤除去不溶物，除去溶剂，乙酸乙酯溶解，除去不溶物，滤液经柱层析纯化后，将其加入至饱和氯化氢的乙酸乙酯溶液，室温搅拌0.5-1.5h，反应完毕后，除去酸和溶剂，乙酸乙酯洗，乙醚洗，甲醇丙酮重结晶，即得。
5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)、步骤(3)中，柱层析分离所用的洗脱系统均为石油醚-乙酸乙酯2:1；步骤(5)中，柱层析的洗脱系统为石油醚-丙酮4:1。
6.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(4)中，二氯甲烷-甲醇混合溶液中，二氯甲烷和甲醇的体积比为1:1。
7.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述Boc保护的氨基酸中氨基酸为亮氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸、酪氨酸、S构型亮氨酸，R构型苯丙氨酸或S构型色氨酸。
8.权利要求1至3任一项所述的4-苯基-2-氨基嘧啶类化合物或其药用盐在制备抗肿瘤药物中的应用。
9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述抗肿瘤药物为抗前列腺癌的药物。
10.一种药物组合物，其特征在于，其含有有效量的权利要求1至3任一项所述的4-苯基-2-氨基嘧啶类化合物或其药用盐。
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