CN106038646A - 一种松果菊提取物的制备方法及其应用 - Google Patents

一种松果菊提取物的制备方法及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种松果菊提取物的制备方法及其应用。其制备方法包括以下步骤：（1）将紫花松果菊地上部分置于匀浆机中，加入乙醇水溶液，匀浆处理3min；（2）超声波提取；（3）大孔吸附树脂纯化。本发明具有操作简单、得率高、污染少、耗能小等优点。经药效学评价，所得提取物具有明显的抗肿瘤效果，为开发应用新一代天然来源的抗肿瘤药物开拓了新径。

Description

一种松果菊提取物的制备方法及其应用
技术领域
本发明涉及一种松果菊提取物的制备方法及其应用。
背景技术
紫花松果菊是菊科松果属植物。松果菊属植物主要用于促进机体的免疫功能以及对抗各种感染，所含松果菊苷有抗菌、抗病毒、抗脂质过氧化等作用；菊苣酸能够增强免疫功能、抗发炎，并具有抑制透明质酸酶，保护胶原蛋白Ⅲ的作用。
松果菊的治疗用途十分广泛，可以治疗各种炎症和感染，最近的研究表明松果菊提取物还有抗氧化、抗衰老、调控细胞凋亡等作用，其疗效得到了越来越多的临床肯定，是国际市场需求量最大的植物药之一。现有国内提取松果菊提取物的报道并不多见，因此，本发明对松果菊提取物的制备方法及其在抗肿瘤方面的研究十分必要，可以为其后续研究提供支持。
发明内容
为满足临床需要，扩大用药品种，更好地治疗癌症，本发明提供了一种松果菊提取物的制备方法及其在抗肿瘤药物中的应用。
为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案：
（1）原料预处理：将紫花松果菊地上部分置于功率为185W的匀浆机中，加入原料1~2倍的70~80%乙醇水溶液，匀浆处理3min；
（2）超声提取：将处理后的物料置于频率为40KHz的超声装置中，加入原料3~5倍的70~80%的乙醇溶液，于70~80℃提取1~2h，趁热抽滤，滤渣反复提取2次，合并提取液，减压浓缩，得浓缩液；
（3）大孔树脂富集：将所得浓缩液加入大孔吸附树脂柱，先用2~3BV的蒸馏水洗脱除杂，再以4~6BV的60~70%的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩、干燥，即得松果菊提取物。
步骤（3）中所述的大孔吸附树脂类型为D-101、AB-8、HPD300中的任意一种。
本发明制得的提取物在抗肿瘤药物中的应用。
本发明制得的提取物的进行抗肿瘤活性实验表明：该提取物具有较强的抗肿瘤活性，在天然新药开发中具有良好的应用前景。
松果菊提取物采用MTT法（四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法）进行抗肿瘤活性测试。
试验用细胞株：
HeLa：人子宫颈癌细胞株；HEC-1：人脑神经胶质瘤细胞株；HLE：人肝癌细胞株；MM1-CB和HMV-1：人黑色素瘤细胞株。
方法：（1）0.25%胰酶消化对数生长期细胞，10%NBS的RPMI 1640调细胞浓度50000个/ml。96孔板100ul/孔。设溶剂对照，每组3平行孔。37℃，5%CO 2 、95%空气的培养箱中预培养24h，弃上清。
（2）加药物5个10倍稀释的浓度（溶剂为有二甲亚砜和水)，为10 -4 mol/L。
（3）细胞连续培养48h，每孔加入10μl 5mg/ml的 MTT溶液（以无血清培养基配制），继续培养4h。
（4）吸去上清。加入200μl DMSO，轻轻振荡以使甲臜完全溶解。570nm处用酶标仪测定OD值。
（5）计算抑制率(%)=（对照OD-药物OD）/对照OD*100%
实验结果：松果菊提取物的抑制率以相对于对照（添加DMSO）的结果如下表1。
表1 松果菊提取物的肿瘤细胞增值抑制率%
松果菊提取物浓度（µ M） HeLa HEC-1 HLE MM1-CB HMV-1
100 76 74 57 90 86
10 51 28 19 53 43
1 32 16 8 18 21
由表1的结果可知，松果菊提取物具有良好的抑制肿瘤细胞生长的活性，其可在制备抗肿瘤药物中得到应用。
本发明所述松果菊提取物在制备抗肿瘤药物时，可按照常规的制剂方法以松果菊提取物为药物活性成分，添加适宜的药物载体，制成各种药物剂型，如片剂、胶囊、滴丸、注射剂、缓控释剂等等。
下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
具体实施方式：
实施例1：
将500g的紫花松果菊地上部分置于功率为185W的匀浆机中，加入原料1倍的70%乙醇水溶液，匀浆处理3min；将处理后的物料置于频率为40KHz的超声装置中，加入原料3倍的70%的乙醇溶液，于70℃提取1h，趁热抽滤，滤渣反复提取2次，合并提取液，减压浓缩，得浓缩液；将所得浓缩液加入D-101大孔吸附树脂柱，先用2BV的蒸馏水洗脱除杂，再以4BV的60%的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩、干燥，即得松果菊提取物12.6g。
实施例2：
将500g的紫花松果菊地上部分置于功率为185W的匀浆机中，加入原料2倍的80%乙醇水溶液，匀浆处理3min；将处理后的物料置于频率为40KHz的超声装置中，加入原料4倍的80%的乙醇溶液，于75℃提取2h，趁热抽滤，滤渣反复提取2次，合并提取液，减压浓缩，得浓缩液；将所得浓缩液加入AB-8大孔吸附树脂柱，先用2BV的蒸馏水洗脱除杂，再以5BV的65%的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩、干燥，即得松果菊提取物16.1g。
实施例3：
将500g的紫花松果菊地上部分置于功率为185W的匀浆机中，加入原料1倍的75%乙醇水溶液，匀浆处理3min；将处理后的物料置于频率为40KHz的超声装置中，加入原料4倍的75%的乙醇溶液，于80℃提取2h，趁热抽滤，滤渣反复提取2次，合并提取液，减压浓缩，得浓缩液；将所得浓缩液加入HPD300大孔吸附树脂柱，先用3BV的蒸馏水洗脱除杂，再以6BV的70%的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩、干燥，即得松果菊提取物14.4g。
实施例4：
本发明药物颗粒剂
将松果菊提取物加入乙醇作黏合剂，加入淀粉作填充剂，制成颗粒。
实施例5：
本发明药物片剂
将松果菊提取物，加入淀粉、糊精、硬脂酸镁等，混合制成湿粒，压片，每片含松果菊提取物200mg。

Claims (3)

1.一种松果菊提取物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）原料预处理：将紫花松果菊地上部分置于功率为185W的匀浆机中，加入原料1~2倍的70~80%乙醇水溶液，匀浆处理3min；
（2）超声提取：将处理后的物料置于频率为40KHz的超声装置中，加入原料3~5倍的70~80%的乙醇溶液，于70~80℃提取1~2h，趁热抽滤，滤渣反复提取2次，合并提取液，减压浓缩，得浓缩液；
（3）大孔树脂富集：将所得浓缩液加入大孔吸附树脂柱，先用2~3BV的蒸馏水洗脱除杂，再以4~6BV的60~70%的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩、干燥，即得松果菊提取物。
2.根据权利要求1所述的一种松果菊提取物的制备方法，其特征在于，步骤（3）中所述的大孔吸附树脂类型为D-101、AB-8、HPD300中的任意一种。
3.根据权利要求1所述方法制得的松果菊提取物在制备具有抗肿瘤作用的药物中的应用。
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