CN106038417B - 金纽扣花提取物及其制备方法、及其在护肤品中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种金纽扣花提取物的制备方法，包括：将a重量份的金纽扣花干燥，加入到6a～10a重量份的有机溶剂浸泡后进行萃取得到萃取液，将萃取液经过抽滤后，减压浓缩得到a重量份的金纽扣花悬混液；在a重量份的金纽扣花悬混液加入4a～6a重量份去离子水，离心后依次通过至少两种孔径的滤膜后得到截留液，将截留液减压浓缩、冷冻干燥，得到b重量份的金纽扣花粉末；将b重量份的金纽扣花粉末加入到4b～6b重量份的溶解溶剂中，加热溶解后得到金纽扣花提取物。本发明还公开了金纽扣花提取物及其在护肤品中的应用。本发明提供的金纽扣花提取物的制备方法安全可靠、简单有效，将金纽扣花提取物应用在护肤品中，能够起到降低皮肤黑色素即美白的功效。

Description

金纽扣花提取物及其制备方法、及其在护肤品中的应用
技术领域
本发明涉及天然产物提取技术及护肤用品领域，尤其涉及金纽扣花提取物及其制备方法、及其在护肤品中的应用。
背景技术
人类皮肤的颜色取决于黑色素的含量与分布，当大量黑色素在人体沉积分布不均匀时，就会形成雀斑、黄褐斑。酪氨酸酶广泛存在于人体中，是产生黑色素的关键酶。黑色素的形成过程为：人体皮肤黑色素细胞中的酪氨酸在酪氨酸酶的催化作用下被氧化生成多巴和多巴醌，经重排后进一步氧化生成多巴色素、5，6-二羟基吲哚、吲哚醌，最终合成黑色素。目前常用美白剂化妆品的主要机理是通过抑制酪氨酸酶活性或阻断酪氨酸氧化生成黑色素，从而减少黑色素的生成而达到皮肤美白的效果。随着人们生活水平的不断提高以及东方女性对美白的追求，现今的美白护肤品市场发展十分迅速，美白剂的开发研究也不断推出。
现有的针对美白作用研究开发的护肤品很多是通过化学成分合成制得，或多或少都对皮肤造成伤害，更严重的甚至对皮肤造成不可修复的损伤。因此开发天然的美白护肤品已经成为当前医药和化妆品行业的主要研究方向之一，具有非常好的发展前景。
金纽扣，又名千日菊，为菊科金钮扣属Spilanthes Jacq的植物，分布于热带和亚热带地区，其中我国西南部至台湾产金钮扣S.acmella(L.)Murr.等2种。金钮扣的叶子与头花(头状花序)含有一种止痛剂的成分，可以用来缓解牙齿的疼痛，因此又被称为牙痛草。金钮扣含金纽扣醇，有促进唾液分泌的作用。在喀麦隆，金钮扣被用于治疗蛇咬伤以及治疗关节炎、风湿病；在德国，金钮扣提取物用于治疗疼痛或擦伤。在中国专利文献CN103340799A中公开了金纽扣提取物在制备口腔护理用品中的应用，金纽扣提取物应用于口腔护理用品中可以缓解口腔干燥症状、抑制牙龈炎症、缓解牙齿疼痛。但是目前关于金纽扣提取物具有美白的活性功效及其在化妆品或护肤品中的应用还没有相关文献报道。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明的目的在于提供一种金纽扣花提取物的制备方法安全可靠、简单有效，将金纽扣花提取物应用在护肤品中，能够起到降低皮肤黑色素即美白的功效。
为达到上述目的，本发明采用以下技术方案：
本发明公开了一种金纽扣花提取物的制备方法，包括以下步骤：
S1：将a重量份的金纽扣花干燥，加入到6a～10a重量份的有机溶剂浸泡后进行萃取得到萃取液，将所述萃取液经过抽滤后，减压浓缩得到a重量份的金纽扣花悬混液；
S2：在a重量份的所述金纽扣花悬混液加入4a～6a重量份去离子水，离心后依次通过至少两种孔径的滤膜后得到截留液，将所述截留液减压浓缩、冷冻干燥，得到b重量份的金纽扣花粉末；
S3：将b重量份的所述金纽扣花粉末加入到4b～6b重量份的溶解溶剂中，加热溶解后得到金纽扣花提取物。
优选地，步骤S1中的浸泡步骤的时间为30min以上，所述有机溶剂为乙醇水溶液、甲醇水溶液、丙醇水溶液中的一种，其中所述有机溶剂中的水的质量百分比为40～60％。
优选地，步骤S1中的萃取步骤具体为低温萃取1～30min；优选地，其中所述低温萃取具体为双频超声波萃取或超高压萃取；所述双频超声波萃取的双频超声波的频率分别为20～30KHz和40～60KHz，温度为10～30℃；所述超高压萃取的萃取压力为300～500MPa，时间为1～5min。
优选地，步骤S2中的离心步骤的转速为6000～8000rpm，时间为10～15min。
优选地，步骤S2中依次通过至少两种孔径的滤膜的步骤具体是：依次通过微滤膜和超滤膜。
优选地，所述微滤膜的孔径为0.4～0.5μm，通过所述微滤膜步骤的工艺条件为：温度40～50℃，压力0.2～0.6MPa；所述超滤膜的分子量为7500～8500KD，经过所述超滤膜步骤的工艺条件为：温度40～50℃，压力1～2MPa。
优选地，步骤S3中的所述溶解溶剂为丙二醇、1,3-丁二醇和1,2-戊二醇的混合物，优选地，丙二醇、1,3-丁二醇和1,2-戊二醇的混合比例为1:8:1。
本发明还公开了一种通过上述的制备方法制得的金纽扣花提取物。
本发明另外还公开了一种上述的金纽扣花提取物在制备护肤品中的应用。
优选地，所述护肤品包括基质和所述金纽扣花提取物，其中所述金纽扣花提取物占所述护肤品的重量的1～10％；优选地，所述护肤品的剂型为溶液、乳液或霜。
与现有技术相比，本发明的有益效果在于：本发明的金纽扣花提取物的制备方法安全可靠、简单有效，将金纽扣花干燥浸泡后进行萃取，萃取液经抽滤后减压浓缩，加入去离子水分散、离心，依次通过至少两种孔径的滤膜进行有效成分富集，收集截留液浓缩、真空干燥并溶解即得到金纽扣花提取物；经试验验证，该金纽扣花提取物能够有效抑制酪氨酸酶活性及黑色素的合成，可作为美白活性原料用于美白护肤品中，达到改善皮肤色素沉淀和美白肌肤的效果，且由于是天然产物所制备，具有较高的安全性。其中步骤S1中对抽滤后的萃取液进行减压浓缩至与原料重量为1:1，以得到与金纽扣花原料相等质量的金纽扣花悬混液，一方面确保了溶剂被去除，另一方面也避免在后续步骤S2中通过滤膜时容易造成堵塞膜孔径。
在进一步的方案中，步骤S1中的萃取步骤采用低温萃取工艺，低温有助于保留金纽扣花中完整的化学成分结构，从而使得产品的化学活性得到保证。
在更进一步的方案中，步骤S2中依次通过至少两种孔径的滤膜具体为依次通过微滤膜和超滤膜，通过微滤膜有助于去除色素、淀粉杂质等，使得产品的稳定性进一步提高；再通过超滤膜，可使得产品的稳定性进一步提高。
具体实施方式
下面对照结合优选的实施方式对本发明作进一步说明。
本发明的优选实施例中公开了一种金纽扣花提取物的制备方法，包括以下步骤：
S1：将a重量份的金纽扣花干燥，加入到6a～10a重量份的有机溶剂浸泡后进行萃取得到萃取液，将所述萃取液经过抽滤后，减压浓缩得到a重量份的金纽扣花悬混液；
S2：在a重量份的所述金纽扣花悬混液加入4a～6a重量份去离子水，离心后依次通过至少两种孔径的滤膜后得到截留液，将所述截留液减压浓缩、冷冻干燥，得到b重量份的金纽扣花粉末；
S3：将b重量份的所述金纽扣花粉末加入到4b～6b重量份的溶解溶剂中，加热溶解后得到金纽扣花提取物。
在进一步的实施例中，步骤S1中的浸泡步骤的时间为30min以上，所述有机溶剂为乙醇水溶液、甲醇水溶液、丙醇水溶液中的一种，其中所述有机溶剂中的水的质量百分比为40～60％。
在进一步的实施例中，步骤S1中的萃取步骤具体为低温萃取1～30min；优选地，其中所述低温萃取具体为双频超声波萃取或超高压萃取；所述双频超声波萃取的双频超声波的频率分别为20～30KHz和40～60KHz，温度为10～30℃；所述超高压萃取的萃取压力为300～500MPa，时间为1～5min。
在进一步的实施例中，步骤S2中的离心步骤的转速为6000～8000rpm，时间为10～15min。
在进一步的实施例中，步骤S2中依次通过至少两种孔径的滤膜的步骤具体是：依次通过微滤膜和超滤膜。
在进一步的实施例中，所述微滤膜的孔径为0.4～0.5μm，通过所述微滤膜步骤的工艺条件为：温度40～50℃，压力0.2～0.6MPa；所述超滤膜的分子量为7500～8500KD，通过所述超滤膜步骤的工艺条件为：温度40～50℃，压力1～2MPa。
在进一步的实施例中，步骤S3中的所述溶解溶剂为丙二醇、1,3-丁二醇和1,2-戊二醇的混合物，优选地，丙二醇、1,3-丁二醇和1,2-戊二醇的混合比例为1:8:1。
本发明的优选实施例还公开了一种通过上述制备方法制得的金纽扣花提取物。
本发明的优选实施例还另外公开了一种上述金纽扣花提取物在制备护肤品中的应用；在进一步的实施例中，所述护肤品包括基质和所述金纽扣花提取物，其中所述金纽扣花提取物占所述护肤品的重量的1～10％；优选地，所述护肤品的剂型为溶液、乳液或霜。
下述结合具体实施例对本发明优选实施例中的金纽扣花提取物的制备方法作进一步说明。
实施例1：制备金纽扣花提取物A
称取c重量份的金纽扣花，干燥，加入8c重量份的50％质量百分比的乙醇水溶液浸泡40min后进行双频超声波萃取，萃取条件为25KHz、49KHz，温度为20℃，萃取时间为20min；萃取液经过抽滤后，减压浓缩得到c重量份(与原料重量比例1:1)的金纽扣花悬混液；该步骤中得到与金纽扣花原料相等质量的金纽扣花悬混液，一方面确保了溶剂被去除(即如果金纽扣花悬混液的质量大于金纽扣花原料，则在金纽扣花悬混液中还有溶剂未被去除)，另一方面也防止在后续步骤中通过滤膜时造成堵塞膜孔径(即如果金纽扣花悬混液的质量小于金纽扣花原料，可能使得后续步骤中通过滤膜过滤时溶液浓度过大，容易导致堵塞膜孔径)；
在c重量份金纽扣花悬混液中加入4c重量份的去离子水，6000rpm转速下离心10min后依次通过孔径为0.45μm的微滤膜和分子量为8000KD的超滤膜，收集超滤膜截留液；其中微滤膜操作温度为50℃，压力为0.28MPa；超滤膜操作温度为45℃，压力为1.6MPa；再将超滤膜截留液经减压浓缩、冷冻干燥后，得到d重量份的金纽扣花粉末；
在d重量份的金纽扣花粉末中加入再加入4d重量份的混合比例为1:8:1的丙二醇、1,3-丁二醇和1,2-戊二醇的混合物，加热搅拌溶解后得到金纽扣花提取物A。
实施例2：制备金纽扣花提取物B
称取e重量份的金纽扣花，干燥，加入10e重量份的60％质量百分比的丙酮水溶液浸泡30min后进行超高压萃取，萃取压力为400MPa，时间为2min；萃取液经过抽滤后，减压浓缩得到e重量份(与原料重量比例1:1)的金纽扣花悬混液；
在e重量份金纽扣花悬混液中加入4e重量份的去离子水，7500rpm转速下离心10min后依次通过孔径为0.45μm的微滤膜和分子量为8000KD的超滤膜，收集超滤膜截留液；其中微滤膜操作温度为50℃，压力为0.4MPa；超滤膜操作温度为50℃，压力为2MPa；再将超滤膜截留液经减压浓缩、冷冻干燥后，得到f重量份的金纽扣花粉末；
在f重量份的金纽扣花粉末中加入再加入4f重量份的混合比例为1:8:1的丙二醇、1,3-丁二醇和1,2-戊二醇的混合物，加热搅拌溶解后得到金纽扣花提取物B。
实施例3：制备金纽扣花提取物C
称取i重量份的金纽扣花，干燥，加入6i重量份的60％质量百分比的甲醇水溶液浸泡30min后进行双频超声波萃取，萃取条件为20KHz、45KHz，温度为30℃，萃取时间为20min；萃取液经过抽滤后，减压浓缩得到i重量份(与原料重量比例1:1)的金纽扣花悬混液；
在i重量份金纽扣花悬混液中加入6i重量份的去离子水，6000rpm转速下离心15min后依次通过孔径为0.45μm的微滤膜和分子量为8000KD的超滤膜，收集超滤膜截留液；其中微滤膜操作温度为40℃，压力为0.5MPa；超滤膜操作温度为45℃，压力为2MPa；再将超滤膜截留液经减压浓缩、冷冻干燥后，得到j重量份的金纽扣花粉末；
在j重量份的金纽扣花粉末中加入再加入6j重量份的混合比例为1:8:1的丙二醇、1,3-丁二醇和1,2-戊二醇的混合物，加热搅拌溶解后得到金纽扣花提取物C。
下述对上述具体实施例的制备方法制备得到的金纽扣花提取物的抑制酪氨酸酶活性的效果进行测试。
实施例4：体外抑制酪氨酸酶活性测试
分别将实施例1、2、3制备得到的金纽扣花提取物溶于二甲亚砜中，配成质量百分比1％的样品溶液，进行下面试验。同时以熊果苷作为对照样品。
配制pH＝6.8，0.1M的磷酸盐缓冲溶液。取1.770mLPBS，先后加入30μL质量百分比为1％的金纽扣花提取物A、B、C样品溶液与0.2mL(100U)的酪氨酸酶溶液，混匀。30℃水浴10分钟，然后加入1mL质量百分比0.1％的L-DOPA溶液，水浴20分钟后，475nm下测定吸光度。同时熊果苷也采用上述方法进行测试。金纽扣花提取物A、B、C及熊果苷的酪氨酸酶抑制率如表1。
表1金纽扣花提取物A、B、C及熊果苷的酪氨酸酶抑制率
从表1中可以看出，本发明的金纽扣花提取物能有效地抑制体外酪氨酸酶活性，而且优于目前常用的熊果苷美白剂。
实施例5：B16细胞酪氨酸酶活性抑制评价
用胰蛋白酶消化对数期的单层细胞，将细胞收集至细胞培养液中；离心，弃上清。用培养液重新悬浮细胞，计数。调整细胞悬液的浓度至2.5×103～50×103个/mL。96孔板，于二氧化碳细胞培养箱中孵育24h。将实施例1、2、3分别制得的金纽扣花提取物A、B、C以一定浓度稀释，加入细胞中，继续培养48h。PBS洗涤1遍。每孔加入0.5％质量百分比的脱胆酸钠溶液100μL，震荡10min，0℃。30min后升温至37℃，加入0.1％质量百分比L-DOPA溶液10L。孵育20min后，475nm下测定吸光度。金纽扣花提取物A、B、C以及熊果苷对酪氨酸酶活性的抑制率结果如表2。
表2金纽扣花提取物A、B、C以及熊果苷对酪氨酸酶活性的抑制率
从表2中可以看出，本发明的金纽扣花提取物能有效地抑制B16细胞酪氨酸酶活性，且在同等浓度下，明显优于目前常用的熊果苷美白剂。
下述结合具体实施例对本发明优选实施例中的金纽扣花提取物在护肤品中的应用及其美白效果的测试作进一步说明。
实施例6：人体美白测试
将实施例3制得的金纽扣花提取物C按质量百分比5％的添加量加到常用的无美白效果的乳膏中，作为测试样品。
选择年龄为18岁～50岁无皮肤病及过敏史的健康志愿者作为测试对象，志愿者数目8人，男女各4人。利用德国CK Mexamter MX18测试皮肤红色素和黑色素含量。
测试环境：室温20±2℃以下，相对湿度(RH)50±5％以下；
测试方法：被测试者在测定前30min进入测试环境中安静待测，在测定前10min将被检部位露出。根据测试要求，选取被测试者的面部左右脸颊和右臂前腕屈侧区适当的面积作为被验区。化妆品涂敷前，将Mexamter MX18的探头垂直地置于皮肤上，3s～5s后待测定值稳定后读取被测部位的黑色素和红色素数值。根据标准程序分别测定护肤品涂敷后即时、4周、8周后的黑色素和红色素数值；各被验部位的黑红色素取5次测定，取其平均值。实验结果如表3所示。
表3人体美白测试结果
本测试以皮肤黑色素和红色素含量表示皮肤的颜色，黑色素和红色素含量越少皮肤颜色越浅，即越白。从表3中可以看出，金纽扣花提取物添加到常用无美白效果的乳膏中，具有明显的美白效果。
以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干等同替代或明显变型，而且性能或用途相同，都应当视为属于本发明的保护范围。

Claims (11)

1.一种金纽扣花提取物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1：将a重量份的金纽扣花干燥，加入到6a～10a重量份的有机溶剂浸泡后进行萃取得到萃取液，将所述萃取液经过抽滤后，减压浓缩得到a重量份的金纽扣花悬混液，其中浸泡步骤的时间为30min以上，所述有机溶剂为乙醇水溶液、甲醇水溶液、丙醇水溶液中的一种，所述有机溶剂中的水的质量百分比为40～60％；
S2：在a重量份的所述金纽扣花悬混液加入4a～6a重量份去离子水，离心后依次通过微滤膜和超滤膜，收集超滤膜截留液，将所述截留液减压浓缩、冷冻干燥，得到b重量份的金纽扣花粉末，其中所述微滤膜的孔径为0.4～0.5μm，所述超滤膜的分子量为7500～8500KD；
S3：将b重量份的所述金纽扣花粉末加入到4b～6b重量份的溶解溶剂中，加热溶解后得到金纽扣花提取物。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S1中的萃取步骤具体为低温萃取1～30min。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，其中所述低温萃取具体为双频超声波萃取或超高压萃取；所述双频超声波萃取的双频超声波的频率分别为20～30KHz和40～60KHz，温度为10～30℃；所述超高压萃取的萃取压力为300～500MPa，时间为1～5min。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S2中的离心步骤的转速为6000～8000rpm，时间为10～15min。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，通过所述微滤膜步骤的工艺条件为：温度40～50℃，压力0.2～0.6MPa；通过所述超滤膜步骤的工艺条件为：温度40～50℃，压力1～2MPa。
6.根据权利要求1至5任一项所述的制备方法，其特征在于，步骤S3中的所述溶解溶剂为丙二醇、1,3-丁二醇和1,2-戊二醇的混合物。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，丙二醇、1,3-丁二醇和1,2-戊二醇的混合比例为1:8:1。
8.根据权利要求1至7任一项所述的制备方法制得的金纽扣花提取物。
9.根据权利要求8所述的金纽扣花提取物在制备护肤品中的应用。
10.根据权利要求9所述的金纽扣花提取物在制备护肤品中的应用，其特征在于，所述护肤品包括基质和所述金纽扣花提取物，其中所述金纽扣花提取物占所述护肤品的重量的1～10％。
11.根据权利要求9所述的金纽扣花提取物在制备护肤品中的应用，其特征在于，所述护肤品的剂型为溶液、乳液或霜。
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