CN106011015A - 一种lb固体培养基的制备方法 - Google Patents

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    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
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Abstract

本发明公开了一种LB固体培养基的制备方法，包括如下步骤：S1、将胰化蛋白胨、酵母提取物、氯化钠加入水中溶解，用氢氧化钠水溶液调节pH＝7.1‑7.3，加入琼脂粉混匀，定容得到溶液A；S2、取S1中得到的溶液A，高压灭菌，冷却至45‑55℃，加入抗生素，摇匀得到溶液B；S3、将S2中得到的溶液B加入培养皿中，调节风速为800‑1200r/min，吹风60‑80min，用无菌封口膜封闭培养皿得到LB固体培养基。本发明避免了LB固体培养基制备过程中出现冷凝水的问题，避免细菌污染培养基，减少浪费，延长培养基的存放时间，大大增加了培养基吸收菌液的能力，缩短试验时间，提高试验效率。

Description

一种LB固体培养基的制备方法
技术领域
本发明涉及培养基制备技术领域，尤其涉及一种LB固体培养基的制备方法。
背景技术
LB培养基是一种培养基的名称，生化分子实验中一般用该培养基来预培养菌种，使菌种成倍扩增，达到使用要求，可分为液体培养基和固体培养基。
目前，常用的制备LB固体培养基的方法为：配制培养基溶液、灭菌、铺板、凝固、倒置保存。用此方法制备的LB固体培养基，由于培养基不能完全凝固，平板倒置保存后，培养皿盖子上会出现较多的冷凝水，导致使用不便，易出现细菌污染、存放寿命很短的问题；而且固体培养基吸收菌液的能力较弱，在做实验时，吸收菌液会消耗很长时间，延误试验进程。
发明内容
基于背景技术存在的技术问题，本发明提出了一种LB固体培养基的制备方法，本发明对培养基溶液进行半风干处理，避免了出现冷凝水的问题，避免了细菌污染培养基的问题，减少浪费，延长培养基的存放时间，大大增加了培养基吸收菌液的能力，促进菌液的充分吸收，缩短试验时间，提高试验效率。
本发明提出的一种LB固体培养基的制备方法，包括如下步骤：
S1、将胰化蛋白胨、酵母提取物、氯化钠加入水中溶解，用氢氧化钠水溶液调节pH＝7.1-7.3，加入琼脂粉混匀，定容得到溶液A；
S2、取S1中得到的溶液A，高压灭菌，冷却至45-55℃，加入抗生素，摇匀得到溶液B；
S3、将S2中得到的溶液B加入培养皿中，调节风速为800-1200r/min，吹风60-80min，用无菌封口膜封闭培养皿得到LB固体培养基。
优选地，S1中，溶液A中胰化蛋白胨的浓度为9-11g/l，酵母提取物的浓度为4-6g/l，氯化钠的浓度为9-11g/l，琼脂粉的浓度为14-16g/l。
优选地，S1中，氢氧化钠水溶液的浓度为0.5-1.5mol/l。
优选地，S2中，取S1中得到的溶液A，高压灭菌20-30min。
优选地，S2中，加入抗生素，摇匀的操作需在超净工作台上完成。
优选地，S3的操作需在超净工作台上完成。
优选地，S3中，直径为90mm的培养皿加入20ml溶液B。
优选地，S3中，用无菌封口膜封闭培养皿，于2-4℃保存得到LB固体培养基。
上述水均为蒸馏水。
上述胰化蛋白胨、酵母提取物、琼脂粉均可从市场上购得。
上述抗生素不规定其种类和用量，根据具体需培养细菌的种类确定抗生素的种类和用量。
上述定容为本领域技术人员常用技术手段。
本发明通过对培养基溶液进行半风干处理，避免了出现冷凝水的问题，使得试验操作更加方便，同时配合使用无菌封口膜，封闭培养皿，避免了细菌污染培养基的问题，增加了培养基的有效使用率，减少浪费，并能延长培养基的存放时间，培养皿正放或反放均可，方便培养基的转移运输和存放；同时半风干的培养基，可以增加培养基吸收菌液的能力，促进菌液的充分吸收，缩短试验时间，提高试验效率。
具体实施方式
下面，通过具体实施例对本发明的技术方案进行详细说明。
实施例1
一种LB固体培养基的制备方法，包括如下步骤：
S1、将胰化蛋白胨、酵母提取物、氯化钠加入水中溶解，用氢氧化钠水溶液调节pH＝7.2，加入琼脂粉混匀，定容得到溶液A；
S2、取S1中得到的溶液A，高压灭菌，冷却至50℃，加入抗生素，摇匀得到溶液B；
S3、将S2中得到的溶液B加入培养皿中，调节风速为1000r/min，吹风70min，用无菌封口膜封闭培养皿得到LB固体培养基。
实施例2
一种LB固体培养基的制备方法，包括如下步骤：
S1、将胰化蛋白胨、酵母提取物、氯化钠加入水中溶解，用浓度为0.5mol/l氢氧化钠水溶液调节pH＝7.3，加入琼脂粉混匀，定容得到溶液A，其中，溶液A中胰化蛋白胨的浓度为9g/l，酵母提取物的浓度为6g/l，氯化钠的浓度为9g/l，琼脂粉的浓度为16g/l；
S2、取S1中得到的溶液A，高压灭菌20min，冷却至55℃，转移至超净工作台上，加入抗生素，摇匀得到溶液B；
S3、在超净工作台上，将S2中得到的溶液B加入培养皿中，调节风速为800r/min，吹风80min，用无菌封口膜封闭培养皿，于2℃保存得到LB固体培养基。
实施例3
一种LB固体培养基的制备方法，包括如下步骤：
S1、将胰化蛋白胨、酵母提取物、氯化钠加入水中溶解，用浓度为1.5mol/l氢氧化钠水溶液调节pH＝7.1，加入琼脂粉混匀，定容得到溶液A，其中，溶液A中胰化蛋白胨的浓度为11g/l，酵母提取物的浓度为4g/l，氯化钠的浓度为11g/l，琼脂粉的浓度为14g/l；
S2、取S1中得到的溶液A，高压灭菌30min，冷却至45℃，转移至超净工作台上，加入抗生素，摇匀得到溶液B；
S3、在超净工作台上，将S2中得到的溶液B加入培养皿中，调节风速为1200r/min，吹风60min，用无菌封口膜封闭培养皿，于4℃保存得到LB固体培养基。
实施例4
一种LB固体培养基的制备方法，包括如下步骤：
S1、将胰化蛋白胨、酵母提取物、氯化钠加入水中溶解，用浓度为0.8mol/l氢氧化钠水溶液调节pH＝7.25，加入琼脂粉混匀，定容得到溶液A，其中，溶液A中胰化蛋白胨的浓度为9.5g/l，酵母提取物的浓度为5.5g/l，氯化钠的浓度为9.5g/l，琼脂粉的浓度为15.5g/l；
S2、取S1中得到的溶液A，高压灭菌23min，冷却至52℃，转移至超净工作台上，加入抗生素，摇匀得到溶液B；
S3、在超净工作台上，将S2中得到的溶液B加入培养皿中，调节风速为900r/min，吹风75min，用无菌封口膜封闭培养皿，于2℃保存得到LB固体培养基。
实施例5
一种LB固体培养基的制备方法，包括如下步骤：
S1、将胰化蛋白胨、酵母提取物、氯化钠加入水中溶解，用浓度为1.2mol/l氢氧化钠水溶液调节pH＝7.15，加入琼脂粉混匀，定容得到溶液A，其中，溶液A中胰化蛋白胨的浓度为10.5g/l，酵母提取物的浓度为4.5g/l，氯化钠的浓度为10.5g/l，琼脂粉的浓度为14.5g/l；
S2、取S1中得到的溶液A，高压灭菌27min，冷却至48℃，转移至超净工作台上，加入抗生素，摇匀得到溶液B；
S3、在超净工作台上，将S2中得到的溶液B加入培养皿中，调节风速为1100r/min，吹风65min，用无菌封口膜封闭培养皿，于3℃保存得到LB固体培养基。
实施例6
一种LB固体培养基的制备方法，包括如下步骤：
S1、将胰化蛋白胨、酵母提取物、氯化钠加入水中溶解，用浓度为1mol/l氢氧化钠水溶液调节pH＝7.2，加入琼脂粉混匀，定容得到溶液A，其中，溶液A中胰化蛋白胨的浓度为10g/l，酵母提取物的浓度为5g/l，氯化钠的浓度为10g/l，琼脂粉的浓度为15g/l；
S2、取S1中得到的溶液A，高压灭菌25min，冷却至50℃，转移至超净工作台上，加入抗生素，摇匀得到溶液B；
S3、在超净工作台上，将S2中得到的溶液B加入培养皿中，调节风速为1000r/min，吹风70min，用无菌封口膜封闭培养皿，于4℃保存得到LB固体培养基。
试验例1
以实施例6得到的LB固体培养基为实验组，以常规方法制备得到的LB固体培养基为对照组，试验组和对照组添加的抗生素相同，分别用实验组和对照组吸收菌液，记录吸收的菌液量和吸收菌液所需时间，结果如下表：
组别 直径为90mm培养皿培养基吸收的菌液量(ml) 吸收1ml菌液所需时间
试验组 1 6s
对照组 0.1 20min
备注：直径为90mm培养皿培养基中含有20mlLB固体培养基。
由上表可以看出，本发明制备得到的LB固体培养基具有良好的吸收菌液的能力，且吸收菌液所需时间短，均远高于对照组。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (8)

1.一种LB固体培养基的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1、将胰化蛋白胨、酵母提取物、氯化钠加入水中溶解，用氢氧化钠水溶液调节pH＝7.1-7.3，加入琼脂粉混匀，定容得到溶液A；
S2、取S1中得到的溶液A，高压灭菌，冷却至45-55℃，加入抗生素，摇匀得到溶液B；
S3、将S2中得到的溶液B加入培养皿中，调节风速为800-1200r/min，吹风60-80min，用无菌封口膜封闭培养皿得到LB固体培养基。
2.根据权利要求1所述LB固体培养基的制备方法，其特征在于，S1中，溶液A中胰化蛋白胨的浓度为9-11g/l，酵母提取物的浓度为4-6g/l，氯化钠的浓度为9-11g/l，琼脂粉的浓度为14-16g/l。
3.根据权利要求1或2所述LB固体培养基的制备方法，其特征在于，S1中，氢氧化钠水溶液的浓度为0.5-1.5mol/l。
4.根据权利要求1-3任一项所述LB固体培养基的制备方法，其特征在于，S2中，取S1中得到的溶液A，高压灭菌20-30min。
5.根据权利要求1-4任一项所述LB固体培养基的制备方法，其特征在于，S2中，加入抗生素，摇匀的操作需在超净工作台上完成。
6.根据权利要求1-5任一项所述LB固体培养基的制备方法，其特征在于，S3的操作需在超净工作台上完成。
7.根据权利要求1-6任一项所述LB固体培养基的制备方法，其特征在于，S3中，直径为90mm的培养皿加入20ml溶液B。
8.根据权利要求1-7任一项所述LB固体培养基的制备方法，其特征在于，S3中，用无菌封口膜封闭培养皿，于2-4℃保存得到LB固体培养基。
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