CN106011015A - 一种lb固体培养基的制备方法 - Google Patents
一种lb固体培养基的制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN106011015A CN106011015A CN201610483050.9A CN201610483050A CN106011015A CN 106011015 A CN106011015 A CN 106011015A CN 201610483050 A CN201610483050 A CN 201610483050A CN 106011015 A CN106011015 A CN 106011015A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- solution
- solid medium
- culture medium
- preparation
- concentration
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明公开了一种LB固体培养基的制备方法,包括如下步骤:S1、将胰化蛋白胨、酵母提取物、氯化钠加入水中溶解,用氢氧化钠水溶液调节pH=7.1‑7.3,加入琼脂粉混匀,定容得到溶液A;S2、取S1中得到的溶液A,高压灭菌,冷却至45‑55℃,加入抗生素,摇匀得到溶液B;S3、将S2中得到的溶液B加入培养皿中,调节风速为800‑1200r/min,吹风60‑80min,用无菌封口膜封闭培养皿得到LB固体培养基。本发明避免了LB固体培养基制备过程中出现冷凝水的问题,避免细菌污染培养基,减少浪费,延长培养基的存放时间,大大增加了培养基吸收菌液的能力,缩短试验时间,提高试验效率。
Description
技术领域
本发明涉及培养基制备技术领域,尤其涉及一种LB固体培养基的制备方法。
背景技术
LB培养基是一种培养基的名称,生化分子实验中一般用该培养基来预培养菌种,使菌种成倍扩增,达到使用要求,可分为液体培养基和固体培养基。
目前,常用的制备LB固体培养基的方法为:配制培养基溶液、灭菌、铺板、凝固、倒置保存。用此方法制备的LB固体培养基,由于培养基不能完全凝固,平板倒置保存后,培养皿盖子上会出现较多的冷凝水,导致使用不便,易出现细菌污染、存放寿命很短的问题;而且固体培养基吸收菌液的能力较弱,在做实验时,吸收菌液会消耗很长时间,延误试验进程。
发明内容
基于背景技术存在的技术问题,本发明提出了一种LB固体培养基的制备方法,本发明对培养基溶液进行半风干处理,避免了出现冷凝水的问题,避免了细菌污染培养基的问题,减少浪费,延长培养基的存放时间,大大增加了培养基吸收菌液的能力,促进菌液的充分吸收,缩短试验时间,提高试验效率。
本发明提出的一种LB固体培养基的制备方法,包括如下步骤:
S1、将胰化蛋白胨、酵母提取物、氯化钠加入水中溶解,用氢氧化钠水溶液调节pH=7.1-7.3,加入琼脂粉混匀,定容得到溶液A;
S2、取S1中得到的溶液A,高压灭菌,冷却至45-55℃,加入抗生素,摇匀得到溶液B;
S3、将S2中得到的溶液B加入培养皿中,调节风速为800-1200r/min,吹风60-80min,用无菌封口膜封闭培养皿得到LB固体培养基。
优选地,S1中,溶液A中胰化蛋白胨的浓度为9-11g/l,酵母提取物的浓度为4-6g/l,氯化钠的浓度为9-11g/l,琼脂粉的浓度为14-16g/l。
优选地,S1中,氢氧化钠水溶液的浓度为0.5-1.5mol/l。
优选地,S2中,取S1中得到的溶液A,高压灭菌20-30min。
优选地,S2中,加入抗生素,摇匀的操作需在超净工作台上完成。
优选地,S3的操作需在超净工作台上完成。
优选地,S3中,直径为90mm的培养皿加入20ml溶液B。
优选地,S3中,用无菌封口膜封闭培养皿,于2-4℃保存得到LB固体培养基。
上述水均为蒸馏水。
上述胰化蛋白胨、酵母提取物、琼脂粉均可从市场上购得。
上述抗生素不规定其种类和用量,根据具体需培养细菌的种类确定抗生素的种类和用量。
上述定容为本领域技术人员常用技术手段。
本发明通过对培养基溶液进行半风干处理,避免了出现冷凝水的问题,使得试验操作更加方便,同时配合使用无菌封口膜,封闭培养皿,避免了细菌污染培养基的问题,增加了培养基的有效使用率,减少浪费,并能延长培养基的存放时间,培养皿正放或反放均可,方便培养基的转移运输和存放;同时半风干的培养基,可以增加培养基吸收菌液的能力,促进菌液的充分吸收,缩短试验时间,提高试验效率。
具体实施方式
下面,通过具体实施例对本发明的技术方案进行详细说明。
实施例1
一种LB固体培养基的制备方法,包括如下步骤:
S1、将胰化蛋白胨、酵母提取物、氯化钠加入水中溶解,用氢氧化钠水溶液调节pH=7.2,加入琼脂粉混匀,定容得到溶液A;
S2、取S1中得到的溶液A,高压灭菌,冷却至50℃,加入抗生素,摇匀得到溶液B;
S3、将S2中得到的溶液B加入培养皿中,调节风速为1000r/min,吹风70min,用无菌封口膜封闭培养皿得到LB固体培养基。
实施例2
一种LB固体培养基的制备方法,包括如下步骤:
S1、将胰化蛋白胨、酵母提取物、氯化钠加入水中溶解,用浓度为0.5mol/l氢氧化钠水溶液调节pH=7.3,加入琼脂粉混匀,定容得到溶液A,其中,溶液A中胰化蛋白胨的浓度为9g/l,酵母提取物的浓度为6g/l,氯化钠的浓度为9g/l,琼脂粉的浓度为16g/l;
S2、取S1中得到的溶液A,高压灭菌20min,冷却至55℃,转移至超净工作台上,加入抗生素,摇匀得到溶液B;
S3、在超净工作台上,将S2中得到的溶液B加入培养皿中,调节风速为800r/min,吹风80min,用无菌封口膜封闭培养皿,于2℃保存得到LB固体培养基。
实施例3
一种LB固体培养基的制备方法,包括如下步骤:
S1、将胰化蛋白胨、酵母提取物、氯化钠加入水中溶解,用浓度为1.5mol/l氢氧化钠水溶液调节pH=7.1,加入琼脂粉混匀,定容得到溶液A,其中,溶液A中胰化蛋白胨的浓度为11g/l,酵母提取物的浓度为4g/l,氯化钠的浓度为11g/l,琼脂粉的浓度为14g/l;
S2、取S1中得到的溶液A,高压灭菌30min,冷却至45℃,转移至超净工作台上,加入抗生素,摇匀得到溶液B;
S3、在超净工作台上,将S2中得到的溶液B加入培养皿中,调节风速为1200r/min,吹风60min,用无菌封口膜封闭培养皿,于4℃保存得到LB固体培养基。
实施例4
一种LB固体培养基的制备方法,包括如下步骤:
S1、将胰化蛋白胨、酵母提取物、氯化钠加入水中溶解,用浓度为0.8mol/l氢氧化钠水溶液调节pH=7.25,加入琼脂粉混匀,定容得到溶液A,其中,溶液A中胰化蛋白胨的浓度为9.5g/l,酵母提取物的浓度为5.5g/l,氯化钠的浓度为9.5g/l,琼脂粉的浓度为15.5g/l;
S2、取S1中得到的溶液A,高压灭菌23min,冷却至52℃,转移至超净工作台上,加入抗生素,摇匀得到溶液B;
S3、在超净工作台上,将S2中得到的溶液B加入培养皿中,调节风速为900r/min,吹风75min,用无菌封口膜封闭培养皿,于2℃保存得到LB固体培养基。
实施例5
一种LB固体培养基的制备方法,包括如下步骤:
S1、将胰化蛋白胨、酵母提取物、氯化钠加入水中溶解,用浓度为1.2mol/l氢氧化钠水溶液调节pH=7.15,加入琼脂粉混匀,定容得到溶液A,其中,溶液A中胰化蛋白胨的浓度为10.5g/l,酵母提取物的浓度为4.5g/l,氯化钠的浓度为10.5g/l,琼脂粉的浓度为14.5g/l;
S2、取S1中得到的溶液A,高压灭菌27min,冷却至48℃,转移至超净工作台上,加入抗生素,摇匀得到溶液B;
S3、在超净工作台上,将S2中得到的溶液B加入培养皿中,调节风速为1100r/min,吹风65min,用无菌封口膜封闭培养皿,于3℃保存得到LB固体培养基。
实施例6
一种LB固体培养基的制备方法,包括如下步骤:
S1、将胰化蛋白胨、酵母提取物、氯化钠加入水中溶解,用浓度为1mol/l氢氧化钠水溶液调节pH=7.2,加入琼脂粉混匀,定容得到溶液A,其中,溶液A中胰化蛋白胨的浓度为10g/l,酵母提取物的浓度为5g/l,氯化钠的浓度为10g/l,琼脂粉的浓度为15g/l;
S2、取S1中得到的溶液A,高压灭菌25min,冷却至50℃,转移至超净工作台上,加入抗生素,摇匀得到溶液B;
S3、在超净工作台上,将S2中得到的溶液B加入培养皿中,调节风速为1000r/min,吹风70min,用无菌封口膜封闭培养皿,于4℃保存得到LB固体培养基。
试验例1
以实施例6得到的LB固体培养基为实验组,以常规方法制备得到的LB固体培养基为对照组,试验组和对照组添加的抗生素相同,分别用实验组和对照组吸收菌液,记录吸收的菌液量和吸收菌液所需时间,结果如下表:
组别 | 直径为90mm培养皿培养基吸收的菌液量(ml) | 吸收1ml菌液所需时间 |
试验组 | 1 | 6s |
对照组 | 0.1 | 20min |
备注:直径为90mm培养皿培养基中含有20mlLB固体培养基。
由上表可以看出,本发明制备得到的LB固体培养基具有良好的吸收菌液的能力,且吸收菌液所需时间短,均远高于对照组。
以上所述,仅为本发明较佳的具体实施方式,但本发明的保护范围并不局限于此,任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内,根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变,都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (8)
1.一种LB固体培养基的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
S1、将胰化蛋白胨、酵母提取物、氯化钠加入水中溶解,用氢氧化钠水溶液调节pH=7.1-7.3,加入琼脂粉混匀,定容得到溶液A;
S2、取S1中得到的溶液A,高压灭菌,冷却至45-55℃,加入抗生素,摇匀得到溶液B;
S3、将S2中得到的溶液B加入培养皿中,调节风速为800-1200r/min,吹风60-80min,用无菌封口膜封闭培养皿得到LB固体培养基。
2.根据权利要求1所述LB固体培养基的制备方法,其特征在于,S1中,溶液A中胰化蛋白胨的浓度为9-11g/l,酵母提取物的浓度为4-6g/l,氯化钠的浓度为9-11g/l,琼脂粉的浓度为14-16g/l。
3.根据权利要求1或2所述LB固体培养基的制备方法,其特征在于,S1中,氢氧化钠水溶液的浓度为0.5-1.5mol/l。
4.根据权利要求1-3任一项所述LB固体培养基的制备方法,其特征在于,S2中,取S1中得到的溶液A,高压灭菌20-30min。
5.根据权利要求1-4任一项所述LB固体培养基的制备方法,其特征在于,S2中,加入抗生素,摇匀的操作需在超净工作台上完成。
6.根据权利要求1-5任一项所述LB固体培养基的制备方法,其特征在于,S3的操作需在超净工作台上完成。
7.根据权利要求1-6任一项所述LB固体培养基的制备方法,其特征在于,S3中,直径为90mm的培养皿加入20ml溶液B。
8.根据权利要求1-7任一项所述LB固体培养基的制备方法,其特征在于,S3中,用无菌封口膜封闭培养皿,于2-4℃保存得到LB固体培养基。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201610483050.9A CN106011015A (zh) | 2016-06-24 | 2016-06-24 | 一种lb固体培养基的制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201610483050.9A CN106011015A (zh) | 2016-06-24 | 2016-06-24 | 一种lb固体培养基的制备方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN106011015A true CN106011015A (zh) | 2016-10-12 |
Family
ID=57085293
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201610483050.9A Pending CN106011015A (zh) | 2016-06-24 | 2016-06-24 | 一种lb固体培养基的制备方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN106011015A (zh) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN106754625A (zh) * | 2016-12-21 | 2017-05-31 | 王乾 | 一种新型细胞培养液制备方法 |
CN110904085A (zh) * | 2019-12-26 | 2020-03-24 | 常州千红生化制药股份有限公司 | 一种发酵法制备门冬酰胺酶 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1487994A (zh) * | 2001-01-29 | 2004-04-07 | ɭ����ҵ��ʽ���� | 固体培养基及其生产方法 |
-
2016
- 2016-06-24 CN CN201610483050.9A patent/CN106011015A/zh active Pending
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1487994A (zh) * | 2001-01-29 | 2004-04-07 | ɭ����ҵ��ʽ���� | 固体培养基及其生产方法 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
万云洋,董海良: "《环境地质微生物学实验指导》", 31 October 2014, 石油工业出版社 * |
豆丁网: "LB培养基的配制方法", 《豆丁网》 * |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN106754625A (zh) * | 2016-12-21 | 2017-05-31 | 王乾 | 一种新型细胞培养液制备方法 |
CN110904085A (zh) * | 2019-12-26 | 2020-03-24 | 常州千红生化制药股份有限公司 | 一种发酵法制备门冬酰胺酶 |
CN110904085B (zh) * | 2019-12-26 | 2021-04-16 | 常州千红生化制药股份有限公司 | 一种发酵法制备门冬酰胺酶的方法 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN101787344B (zh) | 一种气囊鼓动式固态发酵方法及装置 | |
CN104541975B (zh) | 一种真姬菇液体菌种的快速制备方法及使用方法 | |
CN104371925B (zh) | 一种固态菌剂的制备方法 | |
CN106011015A (zh) | 一种lb固体培养基的制备方法 | |
CN105558347A (zh) | 用热带假丝酵母、枯草芽孢杆菌和植物乳杆菌组合固态发酵木薯渣的方法 | |
CN104004803A (zh) | 利用侧孢短芽孢杆菌发酵生产抗菌肽的方法 | |
CN108977361B (zh) | 凝胶型菌剂及其制备方法 | |
CN103070287A (zh) | 副干酪乳杆菌发酵饲料及其制备方法、发酵设备和用途 | |
CN107653204A (zh) | 一种用于填埋垃圾处理的复合微生物菌剂及其制备方法 | |
CN111514714A (zh) | 一种养殖场用环保型生物除臭剂及其制备方法 | |
CN101736027A (zh) | 一种制备重组人源铜锌超氧化物歧化酶的发酵工艺 | |
CN207672050U (zh) | 微生物发酵用全封闭灭菌罐装置 | |
CN103146673B (zh) | 一种生产微生物乳酸链球菌素的方法 | |
CN102703357B (zh) | 聚天冬氨酸作为农用芽孢杆菌喷雾干燥保护剂的应用 | |
CN104998622A (zh) | 一种能清除空气中细菌的阳离子化骨架聚合物及其制备方法 | |
CN111363671B (zh) | 一种肠道厌氧微生物培养瓶及其制备方法 | |
CN114480305A (zh) | 一种噬菌体粉剂及其制备和应用 | |
CN104004677B (zh) | 一种利用酒精工业黄水生产地衣芽孢杆菌制剂的方法 | |
CN107619839A (zh) | 一种降低呕吐毒素发酵麸皮及其生产方法和应用 | |
CN103255126A (zh) | 一种固体状em的制备方法 | |
CN109133354B (zh) | 一种用于废水处理的藻基生态抑菌方法 | |
CN207727075U (zh) | 一种乳糖胆盐发酵管 | |
CN111359425A (zh) | 一种降解甲醛的生物材料及其制作和使用方法 | |
CN107574076A (zh) | 一种起泡型奶酒的生产方法 | |
CN213490886U (zh) | 一种微生物发酵用全封闭灭菌罐装置 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20161012 |