CN105998090A - 从灵芝类食用菌中提取的抗肿瘤活性物质及其提取方法和应用 - Google Patents

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黄纪国
张帆
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Abstract

本发明涉及抗肿瘤活性物质，尤其涉及从灵芝类食用菌中提取的抗肿瘤活性物质，所述活性物质包括重量比为10‑80∶10‑80∶10‑80的活性物质A、活性物质B和活性物质C，所述活性物质A从包括灵芝类食用菌的起始原料中采用酯类溶剂提取得到，所述活性物质B从包括灵芝类食用菌的起始原料中采用醇类溶剂提取得到，所述活性物质C从灵芝类食用菌的起始原料中采用水提取得到。本发明提供一种从灵芝类食用菌如皱盖假芝和赤芝中提取的抗肿瘤活性物质，经过肿瘤细胞实验显示，该抗肿瘤活性物质对于乳腺癌细胞、肺癌细胞、脑癌细胞等多种肿瘤细胞具有显著的抑制作用，并能诱导肿瘤细胞的凋亡，是一种具有极大药用价值的活性物质，具有很好的经济价值和药用价值。

Description

从灵芝类食用菌中提取的抗肿瘤活性物质及其提取方法和应 用
技术领域
本发明涉及抗肿瘤活性物质，尤其涉及从灵芝中提取的抗肿瘤活性物质。
背景技术
灵芝Ganodermataceae Dook是药用和保健食用真菌中的名贵品种，自古以来被奉为仙草，《神农本草经》将灵芝列为上品，久服灵芝轻身不老、延年益寿。现代医学证实，灵芝有增强人体免疫力，增强血液的循环和血液的携氧能力，保护胃粘膜等功效。
皱盖假芝(Amauroderma rude(Berk.)Torrend)别名皱盖乌芝,灵芝科假芝属真菌，分布于热带及亚热带地区如澳大利亚、南非等地，在我国主要分布于华南及西南地区，子实体一年生。其幼嫩子实体损伤伤口处会分泌血一样的液体，故又名血芝。
发明内容
在第一方面，本发明提供一种从灵芝类食用菌中提取的抗肿瘤性质突出的活性物质。
一种从灵芝类食用菌中提取的抗肿瘤活性物质，所述活性物质包括重量比为10-80∶10-80∶10-80的活性物质A、活性物质B和活性物质C，所述活性物质A从包括灵芝类食用菌的起始原料中采用酯类溶剂提取得到，所述活性物质B从包括灵芝类食用菌的起始原料中采用醇类溶剂提取得到，所述活性物质C从灵芝类食用菌的起始原料中采用水提取得到。
在一个优选的实施例中，所述酯类溶剂包括乙酸乙酯、石油醚，氯仿。
在一个优选的实施例中，所述醇类溶剂包括乙醇、甲醇。
在一个优选的实施例中，所述活性物质A的起始原料为灵芝类食用菌的子实体。
在一个优选的实施例中，所述活性物质B的起始原料为提取活性物质A过程中得到的滤渣A或灵芝类食用菌子实体。
在一个优选的实施例中，所述活性物质C的起始原料为提取活性物质B过程中得到的滤渣B或灵芝类食用菌子实体。
在一个优选的实施例中，所述灵芝包括皱盖假芝、赤芝，优选皱盖假芝。
在第二方面，本发明提供一种从灵芝类食用菌中提取抗肿瘤性质突出的活性物质的方法。
一种从灵芝类食用菌中提取抗肿瘤活性物质的方法，所述方法包括：
活性物质A的提取：将灵芝类食用菌子实体和酯类溶剂混合，提取抽滤，得到滤液A和滤渣A，将滤液A干燥得到活性物质A；
活性物质B的提取：将上述滤渣A或灵芝类食用菌子实体与醇类溶剂混合，提取抽滤，得到滤液B和滤渣B，将滤液B干燥得到活性物质B；
活性物质C的提取：将滤渣B或灵芝类食用菌子实体与水混合，提取抽滤，得到滤液C和滤渣C，将滤液C干燥得到活性物质C；
抗肿瘤活性物质的获得：将活性物质A、活性物质B、活性物质C按照重量比10-80∶10-80∶10-80混合，得到抗肿瘤活性物质。
在一个优选的实施例中，所述酯类溶剂包括乙酸乙酯、石油醚，氯仿。
在一个优选的实施例中，所述醇类溶剂包括乙醇、甲醇。
在一个优选的实施例中，所述灵芝类食用菌子实体为粉碎后的灵芝类食用菌子实体，所述粉碎优选为脱水粉碎，进一步优选为低于室温下的脱水粉碎。
在一个优选的实施例中，所述酯类溶剂的加入量为2-10倍子实体体积。
在一个优选的实施例中，所述醇类溶剂的加入量为2-10倍滤渣A或灵芝类食用菌子实体体积。
在一个优选的实施例中，所述水的加入体积为5-30倍的滤渣B或灵芝类食用菌子实体体积。
在一个优选的实施例中，所述活性物质A的提取为浸提1-3次，每次1-2小时，在浸提过程中或者浸提后超声，超声时间为1-4小时，浸提抽滤后合并滤液再干燥。
在一个优选的实施例中，所述活性物质B的提取为浸提1-3次，每次1-2小时，在浸提过程中或者浸提后超声，超声时间为1-4小时，浸提抽滤后合并滤液再干燥。
在一个优选的实施例中，所述活性物质C的提取为浸提1-4次，每次1-4小时，在浸提过程中或者浸提后超声，超声次数为1-4次，超声时间为每次1-4小时，浸提抽滤后合并滤液再干燥。
在一个优选的实施例中，所述干燥为冷冻干燥。
在一个优选的实施例中，所述灵芝包括皱盖假芝、赤芝，优选皱盖假芝。
在第三方面，本发明提供一种从灵芝类食用菌中通过上述方法提取得到的抗肿瘤活性物质。
在一个优选的实施例中，所述灵芝包括皱盖假芝、赤芝，优选皱盖假芝。
在第四方面，本发明提供一种上述从灵芝类食用菌中提取的抗肿瘤活性物质用于制备抗肿瘤药物的应用。
在一个优选的实施例中，所述灵芝包括皱盖假芝、赤芝，优选皱盖假芝。
在一个优选的实施例中，所述肿瘤包括如乳腺癌、肺癌、脑癌等。
本发明提供一种从灵芝类食用菌中提取的抗肿瘤活性物质，例如皱盖假芝、赤芝，经过肿瘤细胞实验显示，该抗肿瘤活性物质对于乳腺癌细胞、肺癌细胞、脑癌细胞等多种肿瘤细胞具有显著的抑制作用，并能诱导肿瘤细胞的凋亡，是一种具有极大药用价值的活性物质，具有很好的经济价值和药用价值。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明进行进一步说明。
本说明书中公开的所有特征，或公开的所有方法或过程中的步骤，除了互相排斥的特征和/或步骤以外，均可以以任何方式组合。
本说明书中公开的任一特征，除非特别叙述，均可被其他等效或具有类似目的的替代特征加以替换。即，除非特别叙述，每个特征只是一系列等效或类似特征中的一个例子而已。
抗肿瘤活性物质提取方法
在一个优选的实施例中，提供一种从灵芝类食用菌中提取抗肿瘤性质突出的活性物质的方法，所述方法包括：
(1)活性物质A的提取：将灵芝类食用菌子实体和酯类溶剂混合，提取抽滤，得到滤液A和滤渣A，将滤液A干燥得到活性物质A；
其中，所述酯类溶剂包括乙酸乙酯、石油醚、氯仿；
其中，所述灵芝类食用菌子实体优选为粉碎后的灵芝类食用菌子实体，例如脱水粉碎后的灵芝类食用菌子实体，粉碎优选在低于室温下进行；
其中，所述酯类溶剂的加入量为2-10倍子实体体积；
(2)活性物质B的提取：将上述滤渣A或灵芝类食用菌子实体与醇类溶剂混合，提取抽滤，得到滤液B和滤渣B，将滤液B干燥得到活性物质B；
其中，所述醇类溶剂包括乙醇、甲醇；
其中，所述醇类溶剂的加入量为2-10倍滤渣A或灵芝类食用菌子实体体积；
(3)活性物质C的提取：将滤渣B或灵芝类食用菌子实体与水混合，提取抽滤，得到滤液C和滤渣C，将滤液C干燥得到活性物质C；
其中，所述水的加入体积为5-30倍的滤渣B或灵芝类食用菌子实体体积；
(4)抗肿瘤活性物质的获得：将活性物质A、活性物质B、活性物质C按照重量比10-80∶10-80∶10-80混合，得到抗肿瘤活性物质。
在另一个优选的示例性实施例中，提供一种从灵芝类食用菌中提取抗肿瘤性质突出的活性物质的方法，所述方法包括：
(1)活性物质A的提取：将灵芝类食用菌子实体作为起始原料(例如低于室温下粉碎后的灵芝类食用菌子实体)和2-10倍子实体体积量的酯类溶剂(包括乙酸乙酯、石油醚，氯仿)混合，浸提1-3次，每次1-2小时，在浸提过程中或者浸提后超声，超声时间为1-4小时，浸提抽滤后得到滤液A和滤渣A，合并滤液A再干燥(例如冷冻干燥)得到活性物质A；
(2)活性物质B的提取：将上述滤渣A或灵芝类食用菌子实体作为起始原料与2-10倍起始原料体积量的醇类溶剂(包括乙醇、甲醇)混合，浸提1-3次，每次1-2小时，在浸提过程中或者浸提后超声，超声时间为1-4小时，浸提抽滤得到滤液B和滤渣B，合并滤液B再干燥(例如冷冻干燥)得到活性物质B；
(3)活性物质C的提取：将滤渣B或灵芝类食用菌子实体作为起始原料与5-30倍的起始原料体积量的水混合，浸提1-4次，每次1-4小时，在浸提过程中或者浸提后超声，超声次数为1-4次，超声时间为每次1-4小时，浸提抽滤得到滤液C和滤渣C，将滤液C合并再干燥(例如冷冻干燥)得到活性物质C；
(4)抗肿瘤活性物质的获得：将上述得到的活性物质A、活性物质B、活性物质C按照重量比10-80∶10-80∶10-80混合，得到抗肿瘤活性物质。
在本发明所述的提取方法中，方法中的步骤(1)、(2)、(3)、(4)仅为了表述方便，并没有任何顺序限制的意义。
在本发明所述的提取方法中，“混合”是指将两种或两种以上物质相接触，例如加入到同一个容器中相接触，加入方式对混合没有限制，例如向溶剂中加入起始原料或者子实体，或者向起始原料或者子实体中加入溶剂。
在本发明所述的提取方法中，活性物质B的提取的起始原料优选自滤渣A。
在本发明所述的提取方法中，活性物质C的提取的起始原料优选自滤渣B。
本发明所述的提取方法适用于皱盖假芝、赤芝等所有的灵芝类品种。
抗肿瘤活性物质
在一个优选的实施例中，提供一种从灵芝类食用菌中提取抗肿瘤性质突出的活性物质，所述活性物质是一种混合物质，包括重量比为10-80∶10-80∶10-80的活性物质A、活性物质B和活性物质C，所述活性物质A从包括灵芝类食用菌的起始原料(例如灵芝类食用菌的子实体)中采用酯类溶剂(包括乙酸乙酯、石油醚，氯仿)提取得到，所述活性物质B从包括灵芝类食用菌的起始原料(提取活性物质A过程中得到的滤渣A或灵芝类食用菌子实体)中采用醇类溶剂(乙醇、甲醇)提取得到，所述活性物质C从灵芝类食用菌的起始原料(提取活性物质B过程中得到的滤渣B或灵芝类食用菌子实体)中采用水提取得到。
其中，上述包括灵芝类食用菌的起始原料包括灵芝类食用菌子实体或者灵芝类食用菌残渣，例如提取活性物质A时产生的滤渣，或提取活性物质B时产生的滤渣。
在另一个优选的实施例中，提供一种从灵芝类食用菌中提取的抗肿瘤活性物质，该活性物质采用上述任一种提取方法提取得到。
在另一个优选的实施例中，提供一种从灵芝类食用菌中提取的抗肿瘤活性物质，所述活性物质是一种混合物质，包括重量比为10-80∶10-80∶10-80的活性物质A、活性物质B和活性物质C，所述活性物质A选自本发明中任一所述活性物质A的提取方法提取得到，所述活性物质B选自本发明中任一所述活性物质B的提取方法提取得到，所述活性物质C本发明中任一所述活性物质C的提取方法提取得到。
在另一个优选的实施例中，提供一种从灵芝类食用菌中提取的抗肿瘤活性物质，所述活性物质是一种混合物质，包括重量份为10-80∶10-80∶10-80的活性物质A、活性物质B和活性物质C。
本发明所述的抗肿瘤活性物质可以从包括皱盖假芝、赤芝等所有的灵芝品种中提取得到。
抗肿瘤活性物质的应用和抗肿瘤药物
本发明中所述的抗肿瘤活性物质，或者本发明所述的提取方法得到的抗肿瘤活性物质，经实验证实，对于包括如乳腺癌、肺癌、脑癌等多种肿瘤细胞具有突出的抑制作用和诱导凋亡，可以用于制备抗肿瘤药物。
基于此，本发明还可以提供一种抗肿瘤药物或保健食品，包括本发明中所述的抗肿瘤活性物质或者本发明中所述的提取方法得到的抗肿瘤活性物质。
进一步地，本发明的抗肿瘤活性药物或保健食品，还包括药学上可接受的载体。
本发明提供的抗肿瘤活性物质或者提取方法得到的抗肿瘤活性物质或抗肿瘤药物或保健食品，可以用于包括人或非人的哺乳动物。
本发明提供的抗肿瘤药物或保健食品，可以采用口服或者注射等方式使用。
实施例
实施例1：
抗肿瘤活性物质提取方法：
1、将100克皱盖假芝子实体在20℃以下中进行脱水粉碎；
2、加入皱盖假芝子实体7倍体积的乙酸乙酯浸提3次，每次3小时，并使用超声波震荡2小时，抽滤后得到滤液A和滤渣A，合并滤A液，将滤液A浓缩冷冻干燥，获得2.85克粉末的活性物质A；
3、向乙酸乙酯提取后的滤渣A中加入该滤渣7倍体积的90％体积浓度乙醇，浸提4次，每次2小时，并使用超声波震荡1.5小时，抽滤后得到滤液B和滤渣B，合并滤液B，将滤液B浓缩冷冻干燥，获得2.23克粉末的活性物质B；
4、向乙醇提取后的滤渣B中加入该滤渣20倍体积的水，超声提取4次，每次2.5小时，过滤后得到滤液C，合并滤液C，将滤液C浓缩冷冻干燥，获得2.65克粉末的活性物质C；
5、取2.2克粉末的活性物质A，1.8克粉末的活性物质B和1.5克粉末的活性物质C混合均匀，得到皱盖假芝子实体的抗肿瘤活性物质AR。
实施例2实施例1得到的抗肿瘤活性物质和赤芝的抗肿瘤活性物质对乳腺癌细胞的抑制作用试验
实施例1提取得到的皱盖假芝子实体的抗肿瘤活性物质AR为样品1。采用与实施例1的方法相同的方法对市售的赤芝进行抗肿瘤活性物质的提取，提取得到市售的赤芝的抗肿瘤活性物质，作为样品2。
采用市售的RPMI-1640培养基分别对样品1(实施例1得到的皱盖假芝子实体的抗肿瘤活性物质)和市售的赤芝的抗肿瘤活性物质(样品2)进行稀释成不同浓度，得到不同浓度的样品1溶液和样品2溶液，分别加入乳腺癌细胞(1×105/孔)，每个浓度3个重复，作用48小时后，MTT法(3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐检测法)检测抑制率，抑制率＝(对照组吸光值-样品组吸光值)/对照组吸光值*100％。不同浓度的样品1溶液和样品2溶液的抑制率结果如表1所示。
表1：不同浓度的两个样品的浓度对乳腺癌细胞的抑制率
表1结果表明，本发明的皱盖假芝和赤芝中提取的抗肿瘤活性物质对乳腺癌细胞具有显著的抑制作用，即使在低浓度条件下，仍然表现出明显的抑制效果，特别是皱盖假芝中提取的抗肿瘤活性物质具有更高的抑制率。
实施例3实施例1得到的抗肿瘤活性物质对肝癌细胞(HepG2)的抑制作用试验
实施例1提取得到的皱盖假芝子实体的抗肿瘤活性物质AR为样品1。采用与实施例1的方法相同的方法对市售的赤芝进行抗肿瘤活性物质的提取，提取得到市售的赤芝的抗肿瘤活性物质，作为样品2。
采用市售的RPMI-1640培养基分别对样品1(实施例1得到的皱盖假芝子实体的抗肿瘤活性物质)和市售的赤芝的抗肿瘤活性物质(样品2)进行稀释成不同浓度，得到不同浓度的样品1溶液和样品2溶液，分别加入肝癌细胞(1×105/孔)，每个浓度3个重复，作用48小时后，MTT法(3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐检测法)检测抑制率，抑制率＝(对照组吸光值-样品组吸光值)/对照组吸光值*100％。不同浓度的样品1溶液和样品2溶液的抑制率结果如表2所示。
表2：不同浓度的两个样品对肝癌细胞的抑制率
表2结果表明，本发明的皱盖假芝和赤芝中提取的抗肿瘤活性物质对肝癌细胞具有显著的抑制作用，即使在低浓度条件下，仍然表现出明显的抑制效果，特别是皱盖假芝中提取的抗肿瘤活性物质具有更高的抑制率。
以上所述，仅为本发明的较佳的具体实施例，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围内。

Claims (10)

1.从灵芝类食用菌中提取的抗肿瘤活性物质，其特征在于，所述活性物质包括重量比为10-80∶10-80∶10-80的活性物质A、活性物质B和活性物质C，所述活性物质A从包括灵芝类食用菌的起始原料中采用酯类溶剂提取得到，所述活性物质B从包括灵芝类食用菌的起始原料中采用醇类溶剂提取得到，所述活性物质C从灵芝类食用菌的起始原料中采用水提取得到。
2.根据权利要求1所述的从灵芝类食用菌中提取的抗肿瘤活性物质，其特征在于，所述酯类溶剂包括乙酸乙酯、石油醚、氯仿；所述醇类溶剂包括乙醇、甲醇。
3.根据权利要求1所述的从灵芝类食用菌中提取的抗肿瘤活性物质，其特征在于，所述活性物质A的起始原料为灵芝类食用菌的子实体，所述活性物质B的起始原料为提取活性物质A过程中得到的滤渣A或灵芝类食用菌子实体；所述活性物质C的起始原料为提取活性物质B过程中得到的滤渣B或灵芝类食用菌子实体；所述灵芝类食用菌包括皱盖假芝、赤芝。
4.从灵芝类食用菌中提取抗肿瘤活性物质的方法，其特征在于，所述方法包括：活性物质A的提取：将灵芝类食用菌子实体和酯类溶剂混合，提取抽滤，得到滤液A和滤渣A，将滤液A干燥得到活性物质A；
活性物质B的提取：将上述滤渣A或灵芝类食用菌子实体与醇类溶剂混合，提取抽滤，得到滤液B和滤渣B，将滤液B干燥得到活性物质B；
活性物质C的提取：将滤渣B或灵芝类食用菌子实体与水混合，提取抽滤，得到滤液C和滤渣C，将滤液C干燥得到活性物质C；
抗肿瘤活性物质的获得：将活性物质A、活性物质B、活性物质C按照重量比10-80∶10-80∶10-80混合，得到抗肿瘤活性物质。
5.根据权利要求4所述的从灵芝类食用菌中提取抗肿瘤活性物质的方法，其特征在于，所述方法包括：所述酯类溶剂包括乙酸乙酯、石油醚，氯仿；所述醇类溶剂包括乙醇、甲醇。
6.根据权利要求4所述的从灵芝类食用菌中提取抗肿瘤活性物质的方法，其特征在于，所述方法包括：所述灵芝类食用菌子实体为粉碎后的灵芝类食用菌子实体，所述粉碎优选为脱水粉碎，进一步优选为低于室温下的脱水粉碎。
7.根据权利要求4所述的从灵芝类食用菌中提取抗肿瘤活性物质的方法，其特征在于，所述方法包括：所述酯类溶剂的加入量为2-10倍子实体体积；所述醇类溶剂的加入量为2-10倍滤渣A或灵芝类食用菌子实体体积；所述水的加入体积为5-30倍的滤渣B或灵芝类食用菌子实体体积。
8.根据权利要求4所述的从灵芝类食用菌中提取抗肿瘤活性物质的方法，其特征在于，所述方法包括：
所述活性物质A的提取为浸提1-3次，每次1-2小时，在浸提过程中或者浸提后超声，超声时间为1-4小时，浸提抽滤后合并滤液再干燥；
所述活性物质B的提取为浸提1-3次，每次1-2小时，在浸提过程中或者浸提后超声，超声时间为1-4小时，浸提抽滤后合并滤液再干燥；
所述活性物质C的提取为浸提1-4次，每次1-4小时，在浸提过程中或者浸提后超声，超声次数为1-4次，超声时间为每次1-4小时，浸提抽滤后合并滤液再干燥；
所述灵芝类食用菌包括皱盖假芝、赤芝，优选皱盖假芝。
9.根据权利要求4-8中任一权利要求所述的方法提取得到的抗肿瘤活性物质。
10.一种根据权利要求1-9中任一权利要求的提取的抗肿瘤活性物质用于制备抗肿瘤药物的应用。
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CN115869343A (zh) * 2022-11-15 2023-03-31 青岛农业大学 一种山东灵芝胞外醇沉物在制备抗肿瘤药物中的应用

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CN1947732A (zh) * 2006-10-31 2007-04-18 广东省微生物研究所 食用菌活性物质的原态提取方法

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