CN105998021A - 甲基莲心碱防治皮肤光老化的应用 - Google Patents

甲基莲心碱防治皮肤光老化的应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了甲基莲心碱防治皮肤光老化的应用，甲基莲心碱是从天然植物中提取出的一种具有抗氧化性的生物碱。在构建皮肤光老化动物和细胞模型的基础上，本发明通过扫描和透视电镜、HE、马松染色、MTT、生化法等验证甲基莲心碱在防治皮肤光老化的功效，结果表明甲基莲心碱能够改善光老化皮肤的皱纹和色素沉着，增加光老化皮肤的胶原蛋白，减少皮肤组织和细胞的氧化损伤，可用于防治皮肤光老化的药物及化妆品的制备，表明了甲基莲心碱防治皮肤光老化作用可用于日常需防治光老化损伤的人群。因此，可以用于防治光老化损伤的药物和/或化妆品的制备。

Description

甲基莲心碱防治皮肤光老化的应用
技术领域
本发明属于皮肤光老化防治技术领域，具体涉及甲基莲心碱防治皮肤光老化的应用。
背景技术
由日光中的紫外线导致的不同于自然老化的皮肤衰老过程称为光老化。表现为皱纹、皮肤粗糙、干燥、松弛、皮肤色素沉着、毛细血管扩张，甚至可以发展为良性或恶性肿瘤。随着全球臭氧层的破坏和紫外线辐射量的增加，光老化出现泛发趋势，皮肤肿瘤的发病率也逐年上升。如何切断光老化的发生和发展，保护皮肤组织受损已经成为相关领域的研究热点之一。
研究表明，能穿过大气层达到地球的日光紫外线只有UVA和UVB两种。其中UVB被认为是太阳光中引起光老化及非黑素皮肤癌等皮肤损伤的最主要的紫外线。以往研究已成功建立了UVB对角质形成细胞氧化损伤的模型，并进行了主要集中在免疫抑制、DNA损伤、细胞凋亡、炎症等方面的基础研究。目前对光老化的治疗多采用化学剥脱和激光治疗，维甲酸类、抗氧化剂、雌激素类等药物也常应用于局部预防和治疗光老化，但因效果不满意及副作用较大使其临床广泛应用受到限制。祖国传统医学中有关美容护理已有上千年的历史。故从天然植物中寻找疗效好、安全性高且副作用小的抗皮肤光老化的制剂已成为目前光老化治疗领域的一个热点。
临床中对光老化的治疗多采用化学剥脱和激光治疗，维甲酸类、抗氧化剂、雌激素类等药物也常应用于局部预防和治疗光老化，但因效果不满意及副作用较大使其临床广泛应用受到限制。
甲基莲心碱(neferine,Nef)是从睡莲科植物莲成熟种子的绿色胚芽中提取出的一种双苄基异喹啉类生物碱。研究表明它具有扩血管、降压、抗心律失常、抗血小板聚集、抗血栓形成等作用。其药理作用主要通过调控钙离子和钾离子通道而实现。2006年SRai发现甲基莲心碱是一种有效的植物来源的抗氧化剂，可有效清除氧自由基，其抗氧化性损伤的功能受到了重视。
但是，目前尚未有关于甲基莲心碱防治皮肤光老化方面的相关报道。
发明内容
本发明的目的在于提供甲基莲心碱防治皮肤光老化的应用。
本发明是通过以下技术方案来实现：
本发明公开了甲基莲心碱在制备防治皮肤光老化的药物和/或化妆品中的应用。
所述的药物和/或化妆品为减轻氧化损伤的药物和/或化妆品。
所述的药物和/或化妆品为降低UV辐射后皮肤成纤维细胞和角质形成细胞内的ROS表达水平的药物和/或化妆品。
所述的药物和/或化妆品为减轻氧化应激损伤的药物和/或化妆品。
所述的药物和/或化妆品为增强成纤维细胞内SOD活力的药物和/或化妆品。
所述的药物和/或化妆品为降低成纤维细胞和角质形成细胞内MDA含量的药物和/或化妆品。
所述的药物和/或化妆品为降低光老化患者皮肤成纤维细胞的脂质过氧化作用的药物和/或化妆品。
所述的药物和/或化妆品为增强成纤维细胞内GSH-px活力的药物和/或化妆品。
所述的药物和/或化妆品中甲基莲心碱的含量不低于0.1mg/ml。
与现有技术相比，本发明具有以下有益的技术效果：
本发明提供了甲基莲心碱在制备防治皮肤光老化的药物和/或化妆品中的应用，甲基莲心碱是从天然植物中提取出的一种具有抗氧化性的生物碱。在构建皮肤光老化动物和细胞模型的基础上，本发明通过扫描和透视电镜、HE、马松染色、MTT、生化法等验证甲基莲心碱在防治皮肤光老化的功效，结果表明甲基莲心碱能够改善光老化皮肤的皱纹和色素沉着，增加光老化皮肤的胶原蛋白，减少皮肤组织和细胞的氧化损伤，可用于防治皮肤光老化的药物及化妆品的制备，表明了甲基莲心碱防治皮肤光老化作用可用于日常需防治光老化损伤的人群。因此，可以用于防治光老化损伤的药物和/或化妆品的制备。
附图说明
图1为光老化动物模型结果；其中，(a)为正常对照；(b)为模型组；(c)为溶媒对照组；(d)为甲基莲心碱组；
图2为光老化动物皮肤组织透射电镜结果；其中，(a)为正常对照；(b)为模型组；(c)为溶媒对照组；(d)为甲基莲心碱组；
图3为光老化动物皮肤HE结果；其中，(a)为正常对照；(b)为模型组；(c)为溶媒对照组；(d)为甲基莲心碱组；
图4为光老化动物皮肤胶原蛋白染色结果。(a)为正常对照；(b)为模型组；(c)为溶媒对照组；(d)为甲基莲心碱组；
图5为甲基莲心碱作用成纤维细胞活性的MTT检测结果；
图6为甲基莲心碱作用角质形成细胞活性的MTT检测结果；
图7为预防组甲基莲心碱作用成纤维细胞ROS结果；
图8为预防组甲基莲心碱作用角质形成细胞ROS结果；
图9为治疗组甲基莲心碱作用成纤维细胞ROS结果；其中，(a)为正常对照；(b)为模型组；(c)为甲基莲心碱组；
图10为预防组甲基莲心碱作用成纤维细胞SOD结果；
图11为预防组甲基莲心碱作用角质形成细胞SOD结果；
图12为预防组甲基莲心碱作用成纤维细胞GPx结果；
图13为预防组甲基莲心碱作用角质形成细胞GPx结果；
图14为预防组甲基莲心碱作用成纤维细胞MDA结果；
图15为预防组甲基莲心碱作用角质形成细胞MDA结果；
图16为治疗组甲基莲心碱作用成纤维细胞SOD结果；
图17为治疗组甲基莲心碱作用成纤维细胞GPx结果；
图18为治疗组甲基莲心碱作用成纤维细胞MDA结果。
具体实施方式
下面结合具体的实施例对本发明做进一步的详细说明，所述是对本发明的解释而不是限定。
本发明通过在在构建皮肤光老化动物和细胞模型的基础上，通过扫描和透视电镜、HE、马松染色、MTT、生化法等验证甲基莲心碱在防治皮肤光老化的功效，结果表明甲基莲心碱能够改善光老化皮肤的皱纹和色素沉着，增加光老化皮肤的胶原蛋白，减少皮肤组织和细胞的氧化损伤，可用于防治皮肤光老化的药物及化妆品的制备。
相关实验及结果如下：
1、甲基莲心碱对于光老化皮肤治疗作用的动物试验
1.1 光老化动物实验模型的建立
清洁级裸鼠72只，鼠龄6-8周，雌雄各半，体重20-25g，按同窝、同性别、同条件下饲养。随机分为六组(每组12只)：A组:正常对照组，外用三蒸水，不照射UVA和UVB；B组:UVA和UVB照射组，外用三蒸水，照射UVA和UVB；C组:溶媒对照组：外用溶媒30分钟后照射UVA和UVB；D组:药物组，外用甲基莲心碱(0.1％)30分钟后照射UVA和UVB。采用波长范围290-320nm、峰值297nm，40W的UVB和波长范围350nm-400nm、峰值365nm，40W的UVA灯管作为紫外线光源，照射高度为50cm。选择裸鼠背部皮肤2x2cm2范围，除正常对照组仅外用三蒸水外，其余3组按上述分组情况外用三蒸水、溶媒或甲基莲心碱后进行紫外线照射实验，每周照射5次(周六、周日休息)，第一周照射剂量为1600J/cm2，第二周照射剂量为3200J/cm2，并维持该剂量共12周。
1.2 甲基莲心碱预防光老化的作用
观察皮肤外观状态变化，隔周记录皮肤外观状态并进行评分；收集光老化皮肤病理组织并分别HE染色和马松三色染色，观察皮肤结构和真皮内胶原纤维含量的变化；电镜观察皮肤超微结构变化。
结果如下所示：
皮肤外观变化如图1所示，甲基莲心碱组较正常对照组皮肤红斑和皱纹减少。图中，正常对照组(a)皮肤色泽正常，光滑，富有弹性，而UVA+UVB照射组(b)和溶媒对照组(c)皮肤出现干燥、深皱纹形成、红斑、色素加深、皮肤萎缩等表现，而甲基莲心碱预处理(d)皮肤后皱纹明显减轻，没有粗大的皱纹，红斑及色素沉着也明显减轻。
皮肤组织透射电镜结果如图2所示，甲基莲心碱组皮肤基底膜的损伤较模型组减轻。图中，正常对照组(a)皮肤结构基本正常，基底膜完整连续；UVA+UVB照射组(b)和溶媒对照组(c)皮肤结构被破坏，基底膜紊乱、不规则、甚至断裂；甲基莲心碱组(d)皮肤基底膜清晰可见，连续且完整。
皮肤组织HE染色结果如图3所示，甲基莲心碱组皮肤结构比较完整，损伤较模型组减轻。图中，正常对照组(a)表皮结构完整，细胞分层清晰，皮肤厚度正常，具有明显的表皮突及真皮乳头，真皮层可见波浪状纤维组织，排列有序，分布均匀，疏密有致，细胞成分及数量适中；UVA+UVB照射组(b)和溶媒对照组(c)表皮组织变厚，结构不完整，分层不清，表皮突及真皮乳头不明显，纤维组织扭曲、破坏，真皮组织排列紊乱，分布不均；甲基莲心碱组(d)皮肤表皮结构比较完整，细胞分层比较清晰，皮肤厚薄不甚均一，有表皮突及真皮乳头，真皮层可见波浪状纤维组织，排列有序，分布较为均匀，细胞成分及数量适中。
皮肤组织马松染色结果如图4所示，甲基莲心碱组皮肤内胶原结构基本完整。图中，正常对照组(a)表皮结构完整，较薄，真皮层可见波浪状的胶原纤维组织，胶原纤维的粗细及分布均匀；UVA+UVB照射组(b)和溶媒对照组(c)表皮增厚，乳头层变平，真皮层内胶原纤维增粗，或有断裂，排列紊乱；甲基莲心碱组(d)表皮层增厚不明显，真皮内胶原纤维呈波浪状，较连续。
2、甲基莲心碱对人皮肤成纤维细胞及角质形成细胞治疗或预防作用试验
2.1 细胞培养
人皮肤成纤维细胞或角质形成细胞在37℃、5％CO2、饱和湿度条件下培养在含10％胎牛血清的DMEM培养基中，培养基中加入双抗青霉素100U/mL、链霉素100μg/mL。细胞融合至80％-90％时用0.25％胰酶消化传代。将传代至3-12代且处于对数生长期的细胞培养在无血清培养基24小时后用于实验。
2.2 甲基莲心碱的配制
称取甲基莲心碱10mg，溶解于200μL的DMSO中，加入无酚红的高糖DMEM培养基125mL充分溶解，配制成浓度128μM的母液，过滤除菌后-20℃避光保存。正式实验时根据预实验初步确定的浓度范围，将母液倍比稀释，配制浓度分别为12.8μM、6.4μM、3.2μM、1.6μM、0.8μM、0.4μM、0.2μM、0.1μM、0.05μM、0.025μM的甲基莲心碱溶液，分装于无菌离心管中，现配现用。
2.3 MTT法检测细胞增殖活性及药物最适浓度
人皮肤成纤维细胞或角质形成细胞以1×104/孔的浓度接种在96孔板中，于37℃、5％CO2、饱和湿度条件下培养24小时后加入含不同浓度Nef的DMEM溶液100μL，每个浓度组设5个复孔，孵育24小时，然后向每孔加入50μL MTT溶液(5mg/ml，即0.5％MTT)，继续培养4h后吸去孔内培养液，加入DMSO150μL/孔，振荡5分钟。用酶联免疫检测仪在OD490nm处测量各孔的吸光值，空白试剂孔调零，重复测量三次，记录数据，以三次平均值计算结果。根据细胞活性检测结果选择出三组合适的药物浓度用于后续实验。
如图5、6所示，以含不同浓度(0,0.025,0.05,0.1,0.2,0.4,0.8,1.6,3.2,6.4,12.8μM)Nef的DMEM培养成纤维细胞及角质形成细胞24小时，通过MTT试验来分析Nef对成纤维细胞的细胞及角质形成细胞毒性。图5中，不同浓度甲基莲心碱处理靶细胞，与对照组相比*P<0.05，con：未加甲基莲心碱；图6中，不同浓度甲基莲心碱处理靶细胞，与对照组相比*P<0.05，con：未加甲基莲心碱；结果显示Nef浓度在小于等于3.2μM时细胞活性随Nef浓度的增大而呈逐渐上升趋势，在3.2μM时细胞活性达到最高，而在6.4μM及12.8μM时细胞活性显著下降(p<0.05)。结果表明Nef在低浓度时具有促进细胞增殖的作用，当浓度增加到一定程度时产生细胞毒性，导致细胞凋亡。我们选用0.2、0.4、0.8μM的Nef进行预防组实验，0.4、0.8、1.6μM的Nef进行治疗组实验。
2.4 实验分组
预防组：根据MTT实验确定三个最适浓度后将成纤维细胞或角质形成细胞分为三大组。空白对照组：未经任何处理；模型组：成纤维细胞接受UVA照射，角质形成细胞接受UVB照射；药物组：以不同浓度Nef预处理细胞2h后成纤维细胞接受UVA照射，角质形成细胞接受UVB照射。
治疗组：方法及分组基本同上，模型组成纤维细胞接受UVA+UVB照射后以不同浓度Nef处理细胞2h。
2.5 紫外线照射
预防组：人皮肤成纤维细胞及角质形成细胞接种至100mm×20mm大小培养皿中，生长至80％-90％融合时弃去培养皿内培养液，PBS清洗2遍后换以少量不含胎牛血清的DMEM覆盖细胞，药物组用不同浓度的甲基莲心碱预处理2小时，PBS清洗2遍。模型组及药物组放置在紫外线灯箱内，UVA和UVB灯管距离台面25cm，对照组同时放置在灯箱外相似环境下，照射完后弃去培养液，三组细胞换以不含胎牛血清的DMEM培养基，继续培养24小时后收集细胞用于氧化损伤指标的检测。
治疗组：方法基本同上，其中药物组接受UVA+UVB辐射后，弃去培养液，立即换以含不同浓度的甲基莲心碱的培养基处理2小时，弃去培养液，再换以不含胎牛血清的DMEM培养基，继续培养24小时后收集细胞用于氧化损伤指标的检测。
2.6 Nef在光老化中抗氧化损伤作用的指标检测
2.6.1 细胞内ROS活力检测
预防组：人皮肤成纤维细胞或角质形成细胞通过DCFH-DA(2,7-diacetyldichlorofluorescein diacetate)法测定细胞内ROS水平。细胞分组处理完毕后继续培养24小时，PBS清洗2遍后加入DCFH-DA于培养基孵育30分钟，用0.25％胰酶消化制成细胞悬液，1000g离心10分钟收集细胞，用PBS洗涤2遍，再次离心并收集细胞。将收集好的细胞用PBS重悬，用荧光显微镜(2030Multilabel Reader Victor X5,PerkinElmer)观察。荧光最佳激发波长502nm，最佳发射波长530nm，测定荧光强度。
结果如图7、8所示，图7中，control:空白对照组，UVA：UVA照射组(即模型组)，UVA+Nef(0.2μM)、UVA+Nef(0.4μM)、UVA+Nef(0.8μM)为不同浓度甲基莲心碱处理组，与对照组相比*P<0.05，与模型组相比#P<0.05。图8中，control:空白对照组，UVB：UVB照射组(即模型组)，Nef(0.2μM)、Nef(0.4μM)、Nef(0.8μM)为不同浓度甲基莲心碱处理组，与对照组相比*P<0.05，与模型组相比#P<0.05成纤维细胞和角质形成细胞分别接受到UVA和UVB照射后细胞内ROS水平与对照组相比明显增高。而接受Nef处理的成纤维细胞和角质形成细胞内ROS水平与模型组相比明显下降，差异具有统计学意义(p<0.05)。结果说明甲基莲心碱可以显著的降低UV辐射后人皮肤成纤维细胞和角质形成细胞内ROS的水平，提示甲基莲心碱可能通过减轻氧化损伤从而达到抗光老化作用。
治疗组：人皮肤成纤维细胞分组处理完毕后方法基本同上，用荧光显微镜观察各组细胞荧光强度。
结果如图9所示，图中，正常对照组(a)中人皮肤成纤维细胞在荧光显微镜下几乎没有观察到高荧光的ROS表达。模型组(b)大部分细胞含有高荧光的ROS，与对照组相比，细胞的荧光水平显著升高。药物组(c)少部分细胞表达出较高的荧光，与模型组相比，表达高荧光的细胞数量及荧光强度明显减少。结果表明，甲基莲心碱干预紫外线辐射后人皮肤成纤维细胞，与仅接受紫外线辐射的细胞相比，细胞内ROS的表达水平明显下降，ROS的生成被明显抑制。
2.6.2 细胞内抗氧化酶活力测定
预防组：人皮肤成纤维细胞或角质形成细胞内SOD和GPx活力分别通过南京建成生物工程研究所的SOD测定试剂盒(WST-1法，A001-3)和GSH-px测定试剂盒(A005)测定。细胞分组处理完毕后继续培养24小时，用0.25％胰酶消化制成细胞悬液后1000rmp离心10分钟，弃去上清液后用1ml PBS重悬，1000rmp离心10分钟收集细胞，用超声破碎仪破碎细胞制成细胞匀浆。按说明书严格操作，用酶标仪分别在450nm和412nm处测定吸光值，计算SOD和GPx活力水平。
治疗组：人皮肤成纤维细胞分组处理完毕后方法同上。
2.6.3 细胞内MDA含量测定
预防组：人皮肤成纤维细胞或角质形成细胞内MDA含量通过南京建成生物工程研究所的MDA测试盒(TBA法，A003-2)测定。细胞分组处理完毕后继续培养24小时，用0.25％胰酶消化制成细胞悬液后1000rmp离心10分钟，弃去上清液后用1ml PBS重悬，1000rmp离心10分钟收集细胞，用0.4ml生理盐水重悬细胞制成细胞悬液。按说明书严格操作，用酶标仪在512nm处测定各管吸光值，计算细胞内MDA含量。
治疗组：人皮肤成纤维细胞分组处理完毕后方法同上。
2.6.4 蛋白质浓度测定
预防组：人皮肤成纤维细胞或角质形成细胞内BCA通过南京建成生物工程研究所的BCA试剂盒测定。细胞分组处理完毕后继续培养24小时，用0.25％胰酶消化成细胞悬液后1000rmp离心10分钟，弃去上清液后用PBS重悬，1000rmp离心10分钟后收集细胞，用超声破碎仪破碎细胞制成细胞匀浆。严格按说明书操作，用酶标仪在560nm处测定吸光值，计算蛋白浓度。
治疗组：人皮肤成纤维细胞分组处理完毕后方法同上。
预防组氧化损伤指标结果：人皮肤成纤维细胞和角质形成细胞接受Nef预处理2小时后分别接受UVA和UVB照射，辐射完继续培养24小时后收集细胞用于抗氧化指标SOD、GPx的检测分析。结果分析如下：
1)SOD的活力如图10、11所示，图10中，control:空白对照组，UVA：UVA照射组(即模型组)，UVA+Nef(0.2μM)、UVA+Nef(0.4μM)、UVA+Nef(0.8μM)为不同浓度甲基莲心碱处理组，与对照组相比*P<0.05，与模型组相比#P<0.05。图11中，control:空白对照组，UVB：UVB照射组(即模型组)，Nef(0.2μM)、Nef(0.4μM)、Nef(0.8μM)为不同浓度甲基莲心碱处理组，与对照组相比*P<0.05，与模型组相比#P<0.05。被UV照射后的成纤维细胞和角质形成细胞与未被UV照射的细胞相比，SOD的活力下降，且具有显著性差异(p<0.05)。而经Nef预处理后的成纤维细胞和角质形成细胞内SOD的活力与UVA/UVB组相比呈浓度依赖性增高，其中人皮肤成纤维细胞0.2、0.4、0.8μM浓度的甲基莲心碱与模型组相比差异具有统计学意义(p<0.05)，角质形成细胞0.4、0.8μM浓度的甲基莲心碱与模型组相比差异具有统计学意义(p<0.05)。
2)GSH-px活力如图12、13所示，图12中，control:空白对照组，UVA：UVA照射组(即模型组)，UVA+Nef(0.2μM)、UVA+Nef(0.4μM)、UVA+Nef(0.8μM)为不同浓度甲基莲心碱处理组，与对照组相比*P<0.05，与模型组相比#P<0.05。图13中，control:空白对照组，UVB：UVB照射组(即模型组)，Nef(0.2μM)、Nef(0.4μM)、Nef(0.8μM)为不同浓度甲基莲心碱处理组，与对照组相比*P<0.05，与模型组相比#P<0.05。可以看出与对照组相比，被UV照射后的成纤维细胞和角质形成细胞内GSH-px的活力显著下降(p<0.05)。以0.2、0.4、0.8μM浓度的Nef处理成纤维细胞和角质形成细胞后，与UVR组相比，GSH-px的活力呈浓度依赖性增高，其中人皮肤成纤维细胞0.4、0.8μM浓度的Nef组与模型组相比差异具有统计学意义(p<0.05)，角质形成细胞三个浓度均具有显著性差异(p<0.05)。
3)MDA含量如图14、15所示，图14中，control:空白对照组，UVA：UVA照射组(即模型组)，UVA+Nef(0.2μM)、UVA+Nef(0.4μM)、UVA+Nef(0.8μM)为不同浓度甲基莲心碱处理组，与对照组相比*P<0.05，与模型组相比#P<0.05。图15中，control:空白对照组，UVB：UVB照射组(即模型组)，Nef(0.2μM)、Nef(0.4μM)、Nef(0.8μM)为不同浓度甲基莲心碱处理组，与对照组相比*P<0.05，与模型组相比#P<0.05。结果显示，经UV照射后，成纤维细胞和角质形成细胞内MDA的含量比对照组显著增高(p<0.05)。而经过不同浓度的Nef处理照射后的成纤维细胞和角质形成细胞内MDA的含量显著下降，其中人皮肤成纤维细胞0.2、0.4、0.8μM浓度的甲基莲心碱与模型组相比差异具有统计学意义(p<0.05)，角质形成细胞0.4、0.8μM浓度的甲基莲心碱与模型组相比差异具有统计学意义(p<0.05)。
治疗组氧化损伤指标结果：
人皮肤成纤维细胞接受UVA和UVB照射后Nef处理2小时，继续培养24小时后收集细胞用于抗氧化指标SOD、GPx的检测分析。结果分析如下：
1)SOD的活力如图16所示，图16中，control:空白对照组，UVR：UVA+UVB照射组(即模型组)，0.4μM Nef、0.8μM Nef、1.6μM Nef为不同浓度甲基莲心碱处理组，与对照组相比*P<0.05，与模型组相比#P<0.05。结果显示，被UV照射后的成纤维细胞与未被UV照射的细胞相比，SOD的活力下降，且具有显著性差异(p<0.05)。而经Nef预处理后的成纤维细胞内SOD的活力与模型组相比呈浓度依赖性增高，其中0.4、0.8、1.6μM浓度的甲基莲心碱与模型组相比差异均具有统计学意义(p<0.05)。
2)GSH-px活力如图17所示，图17中，control:空白对照组，UVR：UVA+UVB照射组(即模型组)，0.4μM Nef、0.8μM Nef、1.6μM Nef为不同浓度甲基莲心碱处理组，与对照组相比*P<0.05，与模型组相比#P<0.05。结果显示，与对照组相比，被UV照射后的成纤维细胞内GSH-px的活力显著下降(p<0.05)。以0.4、0.8、1.6μM浓度的Nef处理成纤维细胞后，与UVR组相比，GSH-px的活力呈浓度依赖性增高，其中0.4、0.8μM浓度的Nef组与模型组相比差异具有统计学意义(p<0.05)。
3)MDA含量如图18所示，图18中，control:空白对照组，UVR：UVA+UVB照射组(即模型组)，0.4μM Nef、0.8μM Nef、1.6μM Nef为不同浓度甲基莲心碱处理组，与对照组相比*P<0.05，与模型组相比#P<0.05。结果显示，经UV照射后，成纤维细胞内MDA的含量比对照组显著增高(p<0.05)。而经过不同浓度的Nef处理照射后的成纤维细胞和角质形成细胞内MDA的含量显著下降，其中0.4、0.8、1.6μM浓度的甲基莲心碱与模型组相比差异均具有统计学意义(p<0.05)。
上述结果说明甲基莲心碱可能通过增加抗氧化酶的活性使ROS的清除增加，减轻氧化应激损伤，增强细胞的抗氧化能力。同时，甲基莲心碱可以显著降低光老化人皮肤成纤维细胞的脂质过氧化作用，保护细胞膜的稳定，减轻细胞损伤。

Claims (9)

1.甲基莲心碱在制备防治皮肤光老化的药物和/或化妆品中的应用。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的药物和/或化妆品为减轻氧化损伤的药物和/或化妆品。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的药物和/或化妆品为降低UV辐射后皮肤成纤维细胞和角质形成细胞内的ROS表达水平的药物和/或化妆品。
4.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的药物和/或化妆品为减轻氧化应激损伤的药物和/或化妆品。
5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述的药物和/或化妆品为增强成纤维细胞内SOD活力的药物和/或化妆品。
6.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述的药物和/或化妆品为降低成纤维细胞和角质形成细胞内MDA含量的药物和/或化妆品。
7.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的药物和/或化妆品为降低光老化患者皮肤成纤维细胞的脂质过氧化作用的药物和/或化妆品。
8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述的药物和/或化妆品为增强成纤维细胞内GSH-px活力的药物和/或化妆品。
9.如权利要求1～8中任意一项所述的应用，其特征在于，所述的药物和/或化妆品中甲基莲心碱的含量不低于0.1mg/ml。
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