CN105996055A - 用于口服诱导对膳食蛋白的耐受性的非消化性寡糖 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了含有部分水解的蛋白和非消化性寡糖的婴儿营养品，用于诱导对天然膳食蛋白的口服耐受性。

Description

用于口服诱导对膳食蛋白的耐受性的非消化性寡糖
本申请是申请日为2011年6月1日，题为“用于口服诱导对膳食蛋白的耐受性的非消化性寡糖”的中国专利申请201180027538.6的分案申请。
技术领域
本发明涉及包含非消化性寡糖和蛋白部分水解物的肠道组合物，其能够诱导对膳食中的天然蛋白，特别是乳类蛋白(milk protein)的口服免疫耐受性。
背景技术
在通常的营养获取过程中，膳食蛋白经由胃肠道呈递给免疫系统，而不会产生针对所摄营养物质的免疫反应。这种无应答性被称作口服免疫耐受性或口服耐受性。口服免疫耐受性的诱导对于婴儿尤其重要，婴儿在出生后首次接触膳食蛋白质，并且需要对其进行适应。如果在婴儿体内没有建立起口服免疫耐受性，则会发生食物过敏。食物过敏症患者所需食谱中应避免特定的食物蛋白。
针对患有牛奶蛋白过敏症的婴儿，市场上售有包含被广泛水解的蛋白(蛋白广泛水解物)或甚至仅含有游离氨基酸做为氮源的婴儿配方奶粉，在这些配方奶粉中不存在变应原性蛋白或肽。
当婴儿的父母一方或双方患有特应性疾病，或婴儿的一个或多个兄弟姐妹患有特应性疾病时，其对膳食蛋白产生过敏的风险较高。对于此类群体，除了优选母乳喂养以外，市场上还售有包含蛋白部分水解物(被部分水解的蛋白)的低变应原性配方奶粉。这些部分水解蛋白的变应原性降低。现已证明此方法可有效地防止改良配方奶粉中存在的天然蛋白质的致敏作用。通常，蛋白的水解程度低于用于已患有过敏症的婴儿的广泛水解蛋白。这些配方的优势在于其不仅通过防止对所述蛋白的致敏而降低了产生变态反应的风险，而且还口服诱导了对完整蛋白质的免疫耐受性。这样做的优点在于过后可在食谱中引入所述天然蛋白，而产生过敏反应的风险则降低了。
EP 1 557 096中披露了包含低变应原性酪蛋白水解物和乳酸细菌益生菌株的婴儿食品。为了诱导耐受性，首选乳清蛋白部分水解物。
EP 2 044 851中披露了包含水解程度介于15％和25％之间的部分水解乳类蛋白的营养组合物并且其每100ml中含有50至1000ng TGF-β，初级预防用于针对膳食蛋白的变态反应以及预防特应性疾病在年轻哺乳动物中的发展。
EP 0 629 350中披露了非变应原性乳清蛋白水解物的应用，据说其可以诱导牛奶蛋白耐受性。
EP 0 827 697中披露了乳清的应用，其经过酶水解制备用于在易感哺乳动物中诱导对牛奶的口服耐受性的组合物。该乳清的变应原性蛋白的免疫检测水平比未水解乳清低≥100倍。
WO 00/42863中披露了用于在具有蛋白过敏症风险的婴儿中诱导蛋白耐受性的低变应原性组合物，其包含广泛水解的非变应原性蛋白作为基本成分和/或游离氨基酸作为基本成分，所述组合物包含至少一种变应原性蛋白的耐受原性肽做为活性成分。
然而，现有技术中的低变应原性组合物通常仅仅通过避免潜在变应原的出现来发挥其作用，因此其仅起到了二级预防作用和/或其需要特殊成分比如益生菌或生长因子的存在。
然而具有产生食物过敏症的风险或患有食物过敏症的个体仍需要改善免疫耐受性诱导作用的营养物质。
因此，本发明的根本技术问题是提供能够克服上述缺点的组合物、方法及方式，特别是使针对人体膳食蛋白的口服耐受性得到改善，特别是使针对人体膳食蛋白的初级过敏预防作用得到改善，特别是在具有产生食物过敏症风险的人体内。
发明内容
本发明的发明人发现当通过饮食伴随服用非消化性寡糖时，乳类蛋白部分水解物诱导口服免疫耐受性的能力得到了显著的协同性提高。人们发现在使用完整乳清蛋白进行皮内刺激后，用完整乳清蛋白敏化的小鼠出现了皮肤急性变态反应。当使用广泛或部分水解乳清蛋白进行皮内刺激后，该反应得到减轻。如果在敏化之前通过口服乳清蛋白部分水解物或完整乳清蛋白对这些敏化小鼠进行预处理，则可观察到对完整皮内乳清蛋白的急性皮肤反应有了显著降低。当以口服乳清蛋白广泛水解物作为预处理时，则没有观察到反应的降低。
令人惊讶的是观察到，如果在使用乳清蛋白部分水解物进行预处理的过程中也用非消化性寡糖对小鼠进行预处理的话，则可以进一步协同性地降低急性皮肤反应。本发明，特别是非消化性寡糖用以加强蛋白部分水解物的作用的用途，甚至可完全消除急性皮肤反应。在使用单独含有非消化性寡糖(以下也称作NDO)的膳食进行预处理或使用乳清蛋白广泛水解物和含有NDO的膳食进行预处理后，则没有观察到这种由于非消化性寡糖的存在而产生的对口服免疫耐受性诱导作用的加强和改善。因此，本发明提供了包含蛋白部分水解物(特别是乳清蛋白部分水解物)和非消化性寡糖(特别是低聚半乳糖、低聚果糖和/或糖醛酸寡糖)的组合物，其优选用于增强对膳食蛋白耐受性的诱导，尤其是增强对乳类蛋白、更特别的是对乳清蛋白耐受性的诱导，且其优选用于人体。将本发明的组合物用于婴儿尤其有益，优选用于具有发生食物过敏症风险的婴儿。
此外，根据本发明还确定了乳清蛋白β-乳球蛋白中特定肽的特定序列，如果作为预处理让用完整乳清蛋白敏化的老鼠服用这些肽，这些肽可诱导对完整乳清蛋白的口服免疫耐受性。在预处理时伴随使用非消化性寡糖可以协同增强这种作用。
发明详述
因此，本发明解决其技术问题尤其通过提供了以下教导：将非消化性寡糖用于增强本发明的蛋白部分水解物对膳食蛋白口服耐受性的诱导作用，优选地，所述蛋白部分水解物的特征在于其所包含的肽中至少3wt％的肽的尺寸为5kDa或更高，且至少50wt.％的肽的尺寸小于5kDa。
本发明解决所述技术问题还通过提供了以下教导：将非消化性寡糖用于增强本发明的蛋白部分水解物对膳食蛋白的初级过敏预防作用的用途，优选所述蛋白部分水解物的特征在于其所包含的肽中至少3wt.％的肽的分子量为5kDa或更高，且至少50wt.％的肽的分子量小于5kDa。
优选地，用于增强蛋白部分水解物的口服耐受性诱导作用或用于增强蛋白部分水解物的初级过敏预防作用的非消化性寡糖与蛋白部分水解物一同包含于本发明的肠道组合物中。
因此，本发明解决其技术问题还通过提供本发明的包含至少一种非消化性寡糖和至少一种蛋白部分水解物的肠道组合物，该组合物用于对膳食蛋白的口服耐受性的诱导，优选用于增强对膳食蛋白的口服耐受性的诱导，优选地，所述蛋白部分水解物的特征在于其所包含的肽中至少3wt.％的肽的分子量为5kDa或更高，且其中至少50wt.％的肽的分子量小于5kDa。
本发明解决其技术问题还通过提供包含至少一种非消化性寡糖和至少一种蛋白部分水解物的肠道组合物，该组合物优选用于预防食物过敏症或炎症性肠道疾病，所述蛋白部分水解物的特征在于其所包含的肽中至少3wt.％的肽的分子量为5kDa或更高，且其中至少50wt.％的肽的分子量小于5kDa。
本发明解决所述技术问题还通过提供了包含非消化性寡糖和至少一种蛋白部分水解物的肠道组合物，其中蛋白部分水解物为乳清蛋白部分水解物且其中所述非消化性寡糖为低聚半乳糖、低聚果糖和半乳糖醛酸寡糖的混合物，用于诱导对膳食蛋白的口服耐受性或用于预防食物过敏症或炎症性肠道疾病。
本发明还特别通过提供肠道组合物解决其技术问题，其中所述蛋白部分水解物为乳清蛋白部分水解物，并且其中所述非消化性寡糖为低聚半乳糖、低聚果糖和半乳糖醛酸寡糖的混合物。
本发明解决其根本问题还通过提供制备优选口服耐受性诱导作用增强的肠道组合物的方法，其中将至少一种本发明的蛋白部分水解物，优选将所含肽中至少3wt.％的肽的分子量为5kDa或更高且至少50wt.％的肽的分子量小于5kDa的蛋白部分水解物，和至少一种非消化性寡糖混合在一起，并获得优选口服耐受性诱导作用增强的肠道组合物。本发明还涉及制备优选口服耐受性诱导作用增强的肠道组合物的方法，其中将至少一种β-乳球蛋白肽和至少一种非消化性寡糖混合在一起，并获得优选口服耐受性诱导作用增强的肠道组合物。
在本发明的一个优选实施方式中，还提出了喂养受试对象特别是婴儿的方法，优选为治疗特别是预防过敏症(优选食物过敏症)和/或特应性疾病(包括特应性湿疹和/或哮喘和/或鼻炎和/或皮炎)的方法，所述方法包括给有此需要的受试对象，特别是婴儿，尤其是具有发生此类疾病的风险的婴儿施用本发明的肠道组合物。
因此，本发明的基础包括非消化性寡糖可以用于改善(即增强)蛋白部分水解物的口服耐受性诱导作用这一惊人且有利的发现。特别地，本发明教导了使用非消化性寡糖来改善(即增强)蛋白部分水解物的口服耐受性诱导作用，并从而改善(即加强)蛋白部分水解物的初级过敏预防作用(即预防初级过敏的作用)。
本发明具有的特别优势在于其产生了口服耐受性和初级过敏预防作用，该作用至少与使用完整乳清蛋白诱导耐受性和预防过敏的作用同样好且有效，然而，使用本发明的NDO和蛋白部分水解物的组合时，引发变态反应的风险要低得多。
在本发明的背景下，增强即表示增加或提高，特别是从一个给定的可测基础值到一个远远高于基础值的可测值的显著提高。
在本发明的背景下，依照本发明的实施例1在测定蛋白口服耐受性的给定小鼠模型中测定蛋白部分水解物所诱导的口服耐受性的增强。因此，当非诱导口服耐受性的即发型高反应性(ITH)数值为100％时，可用作基础值的蛋白部分水解物诱导的口服耐受性的状态可用35到90％的ITH数值来表示。
所述诱导口服耐受性显著增强的特征在于，当以非诱导口服耐受性的ITH值为100％时，其ITH数值为0到30％，优选0到25％，优选0到20％，优选0到10％，更优选为0％。因此，诱导口服耐受性的增强优选表示降低了诱导口服耐受性基础值的至少15％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％，优选100％，该基础值表示为在上述小鼠模型中所测量的即发型高反应性。
ITH的相对数值可通过以下计算公式转换为口服耐受性数值：100减去ITH等于耐受性数值。因此，最优选地，蛋白部分水解物所诱导的口服耐受性的增强导致完全耐受，这表示对膳食蛋白60到100％耐受，优选90到100％耐受，优选95到100％耐受，最优选100％耐受。
在本发明的背景下，依照本申请实施例1在给定小鼠模型中测定蛋白部分水解物的初级过敏预防作用的增强，以确定对蛋白的口服耐受性。因此，当以完全形成过敏状态(fully developed allergy state)的即发型高反应性(ITH)数值为100％时，可用作基础值的蛋白部分水解产物的初级过敏预防作用的状态可用35到90％的ITH数值来表示。所述初级过敏预防作用(primary allergy-prventing effect)显著增强的特征在于，当以完全形成过敏状态的ITH值为100％时，其ITH数值为0到30％，优选0到25％，优选0到20％，优选0到10％，最优选0％。因此，初级过敏预防作用的增强优选表示降低了由蛋白部分水解物所产生的初级过敏预防作用的基础值的至少15％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％且优选100％，所述基础值表示为在上述小鼠模型中所测得的即发型高反应性。因此，最优选地，蛋白部分水解物的初级过敏预防作用的增强导致初级过敏的完全防止，这表示对膳食蛋白90到100％耐受，优选95到100％耐受，最优选100％耐受。
在本发明的背景下，基于初级过敏预防作用的初级过敏预防措施是指目的为部分地，优选完全地防止过敏症状在危险甚至高危个体中的发生(development)和爆发的预防治疗。在本发明的背景下，初级过敏预防作用是一种免疫系统调节作用。初级过敏预防作用不包括由在膳食中避免致敏食物成分所产生的二级过敏预防作用(secondary allergy-preventing effect)。
在本发明的背景下，术语“5kDa或更高”意为“至少5kDa”。在本发明的背景下，术语“低于5kDa”意为上限达到但不包括5kDa。
在本发明的背景下，术语“口服耐受性(oral tolerance)”优选表示口服免疫耐受性。
本发明在一个优选实施方式中还涉及包含非消化性寡糖和至少一种蛋白部分水解物的肠道组合物，其中所述蛋白部分水解物为乳清蛋白部分水解物，优选β-乳球蛋白部分水解物，并且其中所述非消化性寡糖为低聚半乳糖、低聚果糖和半乳糖醛酸寡糖的混合物。所述肠道组合物优选用于诱导对膳食蛋白的口服耐受性或预防食物过敏症或炎症性肠道疾病，或兼用于两种目的。
在优选的实施方式中，所述肠道组合物所包含的乳清蛋白部分水解物包含至少一种特定的哺乳动物乳类蛋白肽，优选为特定的乳清蛋白肽，更优选为特定的β-乳球蛋白肽。乳清蛋白部分水解物可为天然或合成的，即可包含天然或合成肽。优选地，所述乳清蛋白部分水解物包含至少一种特定的β-乳球蛋白肽，其由β-乳球蛋白氨基酸序列的12到38个氨基酸组成，更优选由15到36个氨基酸组成，甚至更优选由18到34个氨基酸组成，最优选由18个氨基酸组成。所述特定的β-乳球蛋白肽的尺寸优选低于5kDa，特别是0.1到4.9kDa，优选为0.5到4.9kDa，更优选为2到4.9kDa，最优选为大约2.4kDa。不期望受理论限制，尺寸较小的肽被认为会产生较低的口服耐受诱导作用，原因是耐受性诱导表位被以欠佳的方式提呈给T细胞。另一方面，由于与肥大细胞上的两个IgE分子交联的几率随尺寸的增大而升高，较大尺寸会增加发生变态反应的风险。
所述至少一种β-乳球蛋白肽优选包含选自由SEQ ID NO 1、SEQ ID NO 2、SEQ IDNO 3和SEQ ID NO 4组成的组的序列，尤其是氨基酸序列。最优选地，所述肠道组合物包含含有2种、3种或优选4种肽的混合物，所述肽包含SEQ ID NOs 1至4。所述肽中的每一种均可优选在其C-末端、其N-末端或两端独立地被可以为任意氨基酸的1到10个氨基酸，优选1到8个氨基酸，更优选1到5个氨基酸取代。所述特定的β-乳球蛋白肽的分子低于5kDa，尤其为0.1到4.9kDa，优选为0.5到4.9kDa，更优选为2到4.9kDa，最优选为约2.4kDa。
在另一优选实施方式中，用于本发明的乳清蛋白部分水解物由上述特定的β-乳球蛋白肽组成。
因此，本发明在一个优选实施方式中还涉及了包含非消化性寡糖和至少一种β-乳球蛋白肽的肠道组合物，其中所述非消化性寡糖为低聚半乳糖、低聚果糖和半乳糖醛酸寡糖的混合物，而所述β-乳球蛋白肽包含选自由SEQ ID NO 1、SEQ ID NO 2、SEQ ID NO 3和SEQ ID NO 4组成的组的序列，其中所述肽的分子量优选小于5kDa，用于预防食物过敏症或炎症性肠道疾病的。此外，本发明在一个优选实施方式中还涉及了包含非消化性寡糖和至少一种β-乳球蛋白肽的肠道组合物，其中所述非消化性寡糖为低聚半乳糖、低聚果糖和半乳糖醛酸寡糖的混合物，而所述β-乳球蛋白肽包含选自由SEQ ID NO 1、SEQ ID NO 2、SEQID NO 3和SEQ ID NO 4组成的组的序列，其中所述肽的分子量优选小于5kDa，用于诱导对膳食蛋白口服耐受性。
令人惊讶的是，发现当将SEQ ID NOs 1到4的肽的混合物作为预处理进行给药时，对完整乳清蛋白敏化的小鼠显示对完整皮内乳清蛋白的急性皮肤反应得到了显著的降低。进一步观察到当在用肽混合物进行预处理的过程中还用非消化性寡糖对小鼠进行预处理时，则急性皮肤反应得到了进一步的协同性降低。
优选地，所述肠道组合物中至少一种特定的肽以每100ml至少100mg的浓度存在，更优选每100ml至少120mg，尤其是每100ml至少150mg。
本发明的蛋白部分水解物
本发明的组合物包含蛋白部分水解物，在下文中也称为“部分水解蛋白”。优选地，本发明的组合物不含完整的未水解蛋白。完整的未水解蛋白的过敏原性太高且可能引发不利的变态反应。在优选的实施方式中，本发明组合物可在蛋白部分水解物之外进一步包含广泛水解的蛋白(也称为蛋白广泛水解物)和/或游离氨基酸。广泛水解蛋白和/或游离氨基酸不会引发变态反应，但也不具备诱导口服耐受性的特性。
优选地，蛋白部分水解物源自哺乳动物乳汁，更优选牛奶。在本发明中优选排除使用人乳蛋白。优选地，所述蛋白部分水解物包含或为哺乳动物乳类蛋白部分水解物。蛋白部分水解物包含或为乳清蛋白部分水解物。更优选地，所述蛋白部分水解物包含或为β-乳球蛋白部分水解物和/或α-乳白蛋白部分水解物。在本发明的另一实施方式中，所述蛋白部分水解物包含或为豌豆、大豆和/或稻蛋白部分水解物。更优选地，所述蛋白部分水解物包含或为酪蛋白部分水解物。
用于部分水解以获得本发明的蛋白部分水解物的蛋白可以是含有蛋白质，优选乳类蛋白的任何组合物，且尤其优选乳类蛋白的溶液或分散液。优选地，用于部分水解的蛋白为乳清蛋白、酸性乳清蛋白、甜乳清蛋白、乳清蛋白浓缩物、乳清蛋白分离物、脱矿质化乳清粉或酪蛋白酸盐。
用于部分水解的水解酶可以来源于例如动物或植物(胃蛋白酶、糜蛋白酶、胰蛋白酶、肠粘膜提取物、胰腺提取物、凝乳酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、无花果蛋白酶)，细菌或真菌(来源于枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)、米曲霉(Aspergillus orysae)、温特曲霉(Aspergillus)的丝氨酸蛋白酶和金属蛋白酶和来源于Aspergillus orizae、温特曲霉、米黑毛霉(Mucor miehei)、微小毛霉(Mucor pusillus)、栗疫菌(Endothia parasitica)的酸性蛋白酶)或是它们的组合物。
在水解过程中，溶液或悬液中蛋白的浓度优选为重量的约5-20％(wt％)，并可在引入蛋白酶之前用巴斯德法将其消毒。酶/蛋白的比例可以为0.1-10％重量/重量，并且优选为约0.25到4％。
水解可在约35℃到65℃之间的温度进行30分钟到10小时，优选进行30分钟到4小时，pH值在2.5到11的范围内，优选在4.5到7.0、8.0和8.5的范围。如有需要，可用例如柠檬酸、食品级HCl或NaOH、NH4OH、KOH、Ca(OH)2以2N的浓度单独或以混合物调整并调控溶液的pH值。
可用快速冷却中止酶水解过程。
然后，可在约70到110℃的温度对蛋白水解物进行约0.1到10分钟的热处理，以将残留的酶即蛋白酶灭活。
通过离心和过滤净化所得的蛋白水解物溶液，以分别除去不溶的和完整的蛋白，并回收清液。可以工业规模使用由不同材料(矿物、聚砜)制成的不同类型的膜(螺旋状、管状、扁平状、箭纤维状(allow fibbers))。根据酶的类型、水解条件和过滤法即所用膜类型的不同，在此步骤可获得所需的蛋白部分水解物的肽尺寸分布。
如有需要，可将回收的水解物清夜通过蒸发浓缩直到干固体含量为例如10-50％，用于随后的处理，或喷雾干燥。
本发明组合物优选包含蛋白水解程度为5到25％，更优选为7.5到21％，最优选为10到20％的蛋白部分水解物。以现有潜在肽键的总数为100％，将水解程度定义为已经由酶促水解断裂的肽键的百分数。具有上述水解程度的蛋白提供足够的链长为2到30的肽。
以下如果不做另外说明，肽的wt％值(相对量)是基于与总的蛋白部分水解物的干重有关的肽干重。
肽的大小和分子量分布可以用本领域技术人员已知的常规方法测定，例如HPLC或尺寸排阻色谱(SEC)，特别是高效尺寸排阻色谱。González-Tello et al,1994,Enzymatichydrolysis of whey proteins II.Molecular weight range.Biotech.Bioeng,44,529-532中公开了适合的方法。
在本发明的优选实施方式中，所述蛋白部分水解物的特征在于其所含肽中至少3wt％的肽的尺寸为5kDa或更高，优选至少3.5wt％的肽的尺寸为5kDa或更高，优选至少4wt％，更优选至少4.5wt％的肽的尺寸为5kDa或更高。本发明的蛋白部分水解物的进一步特征在于其中至少50wt％，优选至少55wt％，优选至少60wt％，优选至少70wt％的肽的尺寸小于5kDa。
更优选地，所述蛋白部分水解物所含肽中至少0.5wt％，优选至少1wt.％，优选至少1.5wt％且最优选至少2wt％的肽的尺寸大于20kDa。更优选地，所述蛋白部分水解物所含肽中至少0.5wt％，优选至少1wt.％，优选至少1.5wt％，优选至少2wt％至最高3.5wt％，优选最高3.0wt％的肽的尺寸大于20kDa。
在更加优选的实施方式中，所述蛋白部分水解物所含肽中至少5wt％，优选5到10wt％，优选6到10wt％的肽的尺寸为至少3kDa。
优选地，本发明的蛋白部分水解物的特征在于其中尺寸为2到<5kDa的肽的相对量与尺寸为至少5kDa的肽的相对量之间的比例为(5至1):1,优选为(4至1):1，优选(3至1):1，优选(2至1):1，优选1:1。
在本发明的更优选的实施方式中，所述蛋白部分水解物所含肽中至少0.5wt％，优选至少0.6wt％，特别是0.5到3.0wt％，优选0.5到2.0wt％，优选0.5到1.0wt％的肽的尺寸为10到20kDa。
优选地，本发明的蛋白部分水解物的特征在于其中尺寸为5到10kDa的肽的相对量与尺寸大于20kDa的肽的相对量之间的比例为(5至1):(1至5),优选为(3至1):(1至3)，更优选为(2至1):(1至2)，特别是1:1。
在更优选的实施方式中，本发明的蛋白部分水解物的特征尤其在于其肽的分子尺寸分布，其中尺寸大于20kDa的肽的重量相对量高于尺寸为10到20kDa的肽的相对量，尤其是高至少2倍。因此，在本发明的优选实施方式中，所述蛋白部分水解物的特征在于其中尺寸为10到20kDa的肽的相对量与尺寸大于20kDa的肽的相对量的比例为1:(1.1到3),优选为1:(1.1到2.5)，优选为1:(1.5到2)。
在本发明的更优选的实施方式中，本发明的蛋白部分水解物的特征在于其中尺寸为10到20kDa的肽的相对量低于尺寸大于20kDa的肽的相对量，且低于尺寸为5到10kDa的肽的相对量。因此，在特别优选的实施方式中，所述蛋白部分水解物的特征在于其特殊的肽分布，特别是尺寸至少为5kDa的肽的分布，特别是在所述分布中尺寸大于20kDa的肽和尺寸为5到10kDa的肽的量均高于尺寸为10到20kDa的肽的相对量，并且优选其中至少50wt％、最优选至少60wt％的肽的尺寸小于5kDa。
在优选的实施方式中，所述蛋白部分水解物的特征在于水解物中所含肽具备以下尺寸分布：其中60至90wt％的肽的尺寸<1kDa,5至20wt％的肽的尺寸为1到<2kDa,2至15wt％的肽的尺寸为2到<5kDa,0.6至3wt％的肽的尺寸为5到<10kDa,0.5至2wt％的肽的尺寸为10到20kDa且1至3wt％的肽的尺寸>20kDa。
在优选的实施方式中,所述蛋白部分水解物的特征在于水解物中所含肽具有以下尺寸分布:85至90wt％的肽的尺寸<1kDa,6至10wt％的肽的尺寸为1到<2kDa,2至6wt％的肽的尺寸为2到<5kDa,0.6至3wt％的肽的尺寸为5到<10kDa,0.5至2wt％的肽的尺寸为10到20kDa且1至3wt％的肽的尺寸>20kDa。
在优选的实施方式中，所述蛋白部分水解物的特征在于水解物中所含肽具有以下尺寸分布:85wt.％为<1kDa,8wt.％为1到<2kDa,4wt.％为2到<5kDa,1wt.％为5到<10kDa,0.6wt.％为10到20kDa和1.4wt.％为>20kDa。
在更优选的实施方式中，本发明的蛋白部分水解物为乳清蛋白部分水解物，更优选为β-乳球蛋白部分水解物。所述乳清蛋白部分水解物可包含或由上述天然肽组成。此外，所述蛋白部分水解物可包含或由特定的和/或合成肽组成。优选地，所述肽为来自哺乳动物乳类蛋白，优选来自乳清蛋白，最优选来自β-乳球蛋白的特定肽。
所述特定的β-乳球蛋白肽的分子量优选低于5kDa，尤其为0.1至4.9kDa，优选为0.5至4.9kDa，更优选为2至4.9kDa，最优选为大约2.4kDa。优选地，所述特定β-乳球蛋白肽由12至38个β-乳球蛋白肽氨基酸序列的氨基酸组成，更优选由15至36个氨基酸组成，甚至更优选由18至34个氨基酸组成，最优选由18个氨基酸组成。在特别优选的实施方式中，所述特定的β-乳球蛋白肽包含选自由SEQ ID NO 1、SEQ ID NO 2、SEQ ID NO 3和SEQ ID NO 4组成的组的序列。这些肽中的每一种肽在其C-末端、N-末端或两端都可以独立地被可为任意氨基酸的1到10个氨基酸，优选1到8个氨基酸，更优选1到5个氨基酸取代。所述特定β-乳球蛋白肽的分子量优选低于5kDa，尤其为0.1至4.9kDa，优选为0.5至4.9kDa，更优选为2至4.9kDa，最优选为大约2.4kDa。
然而，在本发明的进一步的实施方式中也预见到，所述特定的β-乳球蛋白肽并非乳清蛋白部分水解物的一部分，而特别来说是所使用的唯一蛋白质来源或者它们与除乳清蛋白部分水解物以外的成分(如游离氨基酸或广泛水解蛋白)一起使用。通常，蛋白广泛水解物中每100g蛋白质中的游离氨基酸含量大于10g。优选地，本文所用的术语“蛋白”包括肽与游离氨基酸。
在本发明的优选实施方式中，所述肠道组合物优选包含基于总组合物的干重的至少7wt％，更优选至少8wt％，优选至少9wt％，优选7到40wt％，更优选7到20wt％，特别是优选7到15wt％的蛋白部分水解物。
在本发明的优选实施方式中，所述肠道组合物优选包含基于总组合物的干重的最多40wt％，优选最多20wt％且最优选最多15wt％，优选8至15wt％，优选8至20wt％，优选8至40wt％或优选9至15wt％，优选9至20wt％或9至40wt％的蛋白部分水解物。
本发明的蛋白部分水解物的特征在于具有至少一个上述特征或同时具有上述特征中大多数或全部。
本发明的广泛水解蛋白涉及已水解且其中少于3wt％的肽的尺寸大于5kDa的蛋白。通常，广泛水解蛋白已经通过蛋白酶水解和随后在截断值为5或3kDa的膜上过滤而进行的超滤步骤而获得。
实施例1和WO0141581中第13页第13行至第16页第1行披露了获得蛋白部分水解物的合适来源与方法。
在本发明的背景下，所有以所示组合物整体的百分比(％)的形式给出的相对量加起来为所示组合物整体的100％。
在本发明的背景下，术语“含有”、“包含”和“包括”以及它们的词形变化在一个优选实施方式中以其非限制性含义使用，意指包括该术语后面的项目，但不排除未特别提及的项目。在本发明的背景下，术语“含有”、“包含”和“包括”以及它们的词形变化在另一个优选实施方式中以其限制性含义使用，意指包括该术语后面的项目，且排除了未特别提及的项目，因而与术语“由……组成”及其词形变化的含义相同。
在提及本发明中特别是组合物或方法的要素时，不定冠词“a”或“an”并不排除存在多于一个该要素的可能性，除非上下文清楚地要求有一个且只有一个该要素。因此不定冠词“a”或“an”一般意指“至少一个”。
本发明的非消化性寡糖
本发明的组合物包含非消化性寡糖。有利且最优选的是，所述非消化性寡糖溶于水(依据L.Prosky et al,J.Assoc.Anal.Chem 71:1017-1023,1988中所披露的方法)，且优选聚合度(DP)为2到200的寡糖。非消化性寡糖的平均DP优选低于200，更优选低于100，甚至更优选低于60，最优选低于40。非消化性寡糖在肠中并没有被人上消化道(小肠和胃)中存在的消化酶作用而消化。非消化性寡糖通过人肠道微生物群来进行发酵的。例如，葡萄糖、果糖、半乳糖、蔗糖、乳糖、麦芽糖和麦芽糊精均被认为是可消化的。寡糖原料可包括单糖比如葡萄糖、果糖、岩藻糖、半乳糖、鼠李糖、木糖、葡萄糖醛酸和GalNac等，但在本发明中这些并非寡糖的一部分。
本发明的组合物和方法中包含的非消化性寡糖优选包括非消化性寡糖的混合物。所述非消化性寡糖优选选自由低聚果糖如菊糖、非消化性糊精、低聚半乳糖如低聚反式半乳糖、低聚木糖、低聚阿拉伯糖、低聚阿拉伯半乳糖、低聚葡萄糖如低聚龙胆糖和环糊精、低聚葡萄甘露糖、低聚半乳甘露糖、低聚甘露糖、壳寡糖、糖醛酸寡糖、唾液酸寡糖如3-SL、6-SL、LSTa、LSTb、LSTc、DSLNT、S-LNH、DS-LNH和低聚岩藻糖如(未)硫酸化的岩藻多糖OS、2-FL、3-FL、LNFP I、LNFP II、LNFP III、LNFP V、LNnFPI、LNDH及其混合物所组成的组，更优选地为低聚果糖如菊糖、低聚半乳糖如β-连接的低聚反式半乳糖、糖醛酸寡糖和低聚岩藻糖及其混合物，甚至更优选地为低聚反式半乳糖、菊糖和/或糖醛酸寡糖，最优选地为低聚反式半乳糖。当非消化性寡糖为混合物时，则用各参数的平均值来定义本发明。
本发明优选提供了具有两种不同的非消化性寡糖，即非消化性寡糖A和非消化性寡糖B的组合物。非消化性寡糖A和非消化性寡糖B优选含有不同类型的糖苷键、不同的聚合度和/或不同的单糖组成。
根据本发明的优选实施方式，非消化性寡糖A中特定单糖的百分比比非消化性寡糖B中同一单糖的百分比至少高40％，优选至少高50％，更优选至少高75％，甚至更优选至少高90％。非消化性寡糖中单糖百分比的简单计算方式可以为用非消化性寡糖中各单糖单位例如葡萄糖的数目除以该非消化性寡糖中单糖单位总数，并乘以100。如果非消化性寡糖为非消化性寡糖混合物，就必须考虑非消化性寡糖混合物中各单独单糖单位的贡献。非消化性寡糖混合物中单糖百分比的简单测定方式可以为使混合物完全水解并测定各单糖的百分数。优选地，非消化性寡糖A包含至少40％(数量)的半乳糖，优选至少67％，更优选至少75％的半乳糖。优选地，非消化性寡糖B包含至少30％(数量)的果糖，更优选至少67％，甚至更优选至少80％的果糖。
根据本发明的优选实施方式，非消化性寡糖A的平均DP比非消化性寡糖B的平均DP低至少5个单糖单位，优选至少10个单糖单位，甚至更优选至少15个单糖单位。优选地，非消化性寡糖A的平均DP为2-10，更优选为3-5。优选地，非消化性寡糖B的平均DP低于200，更优选11-60，甚至更优选20-30。可以优选包含有聚合度增高的非消化性寡糖。DP不同的非消化性寡糖A和B可以具有相同或不同的单糖组成。优选地，非消化性寡糖A和B具有不同的单糖组成和不同的DP。
优选地，非消化性寡糖A和B累计重量中至少80wt％，更优选至少95％，最优选至少98％的DP低于60，更优选低于40，最优选低于20。DP较低可以有利地降低非消化性寡糖的粘稠度且增加其可发酵性。非消化性寡糖A和B累计重量中优选至少50wt.％，优选至少75wt.％的DP为2-8。在本发明更优选的实施方式中，非消化性寡糖A中至少一种糖苷键占非消化性寡糖A中总糖苷键的百分比比寡糖B中同一糖苷键的百分比高出或低出至少40％，优选至少50％，甚至更优选至少75％。本发明中使用的术语“糖苷键”是指通过脱水反应而形成于两个环状单糖环之间的C-O-C键。糖苷键优选具有较高的多样性。糖苷键的区别在于它们共价结合于单糖单位中不同编号位置的碳原子，和/或在于它们形成α或β键。非消化性寡糖中出现的不同糖苷键的例子有β(1,3)、α(1,4)、β(2,1)、α(1,2)和β(1,4)键。优选地，非消化性寡糖A中的糖苷键包含至少40％的β(1,4)和/或β(1,6)糖苷键，更优选至少75％。非消化性寡糖B中的糖苷键优选包含至少40％的β(2,1)糖苷键，更优选至少75％。优选地，非消化性寡糖A和B的单糖单位组成和糖苷键类型不同。优选地，非消化性寡糖A和B的糖苷键类型和DP不同。最优选地，非消化性寡糖A和B的糖苷键类型、单糖组成和DP都不相同。
非消化性寡糖，特别是非消化性寡糖A和B的总单糖单位中优选至少60％，更优选至少75％，甚至更优选90％，最优选98％为选自由半乳糖(gal),果糖(fru)和葡萄糖(glu)组成的组中的单糖。
非消化性寡糖A优选为选自由β-低聚半乳糖、α-低聚半乳糖和半乳聚糖组成的组中的单糖。依据更优选的实施方式，非消化性寡糖A为β-低聚半乳糖。β-低聚半乳糖有时也被称为低聚反式半乳糖。优选地，非消化性寡糖A包含带有β(1,4)、β(1,3)和/或β(1,6)糖苷键和末端葡萄糖的低聚半乳糖。现有可用的低聚反式半乳糖为例如商品名为GOS(Borculo Domo Ingredients,Zwolle,Netherlands)，Bi2muno(Clasado),Cup-oligo(Nissin Sugar)和Oligomate55(Yakult)的产品。
非消化性寡糖B优选为低聚果糖。在其他背景下，低聚果糖fructo-oligosaccharide也可以被称为如果糖多聚体(fructopolysaccharides)、寡果糖(oligofructose)、聚果糖(polyfructose)、多果聚糖(polyfructan)、菊糖(inulin)、果糖胶(levan)和果聚糖(fructan)，并且可以用来指含β-连接的果糖单位的寡糖，该果糖单位优选由β(2,1)和/或β(2,6)糖苷键连接，且DP优选介于2和200之间。优选地，低聚果糖包含末端β(2,1)糖苷键连接的葡萄糖。优选地，低聚果糖含有至少7个β-连接的果糖单位。在进一步优选的实施方式中，菊糖被用作非消化性寡糖B。菊糖是低聚果糖的一种，其糖苷键中至少75％为β(2,1)连接。典型地，菊糖的平均链长介于8和60个单糖单位之间。适用于本发明组合物的低聚果糖可商购，例如商品名为HP(Orafti)的产品。其他合适的来源有raftilose(Orafti)、fibrulose和fibruline(Cosucra)以及Frutafit和frutalose(Sensus)。
作为非消化性寡糖A，最优选平均DP小于10、优选小于6的低聚反式半乳糖；作为非消化性寡糖B，最优选平均DP大于7，优选大于11，甚至更优选大于20的低聚果糖。
如果本发明的肠道组合物包含非消化性寡糖A和B，非消化性寡糖A和非消化性寡糖B之间的重量比优选为1/99至99/1，更优选为1/19至19/1，甚至更优选为1至19/1。当非消化性寡糖A的DP低而非消化性寡糖B的DP相对较高时，这样的重量比尤其具有优势。优选地，寡糖A为低聚反式半乳糖，且寡糖B为低聚果糖。
因此，根据本发明的一个实施方式，组合物包含非消化性寡糖A和B，其中非消化性寡糖A和B的区别在于：
i)对于基于寡糖A的总单糖单位的寡糖A的至少一种单糖的百分比，所述单糖比寡糖B中同一单糖的百分比高出至少40数量％；和/或
ii)对于基于寡糖A的总糖苷键的寡糖A的至少一种糖苷键的百分比，所述糖苷键比寡糖B中同一糖苷键的百分比高出至少40％；和/或
iii)对于寡糖A的聚合度，寡糖A的聚合度比寡糖B的聚合度低至少5个单糖单位。
在更优选的实施方式中，本发明的组合物进一步包含非消化性寡糖C。所述非消化性寡糖C包含糖醛酸寡糖。本发明中所用的术语糖醛酸寡糖是指这样的寡糖：在所述寡糖中存在的单糖单位中至少50数量％是选自由古罗糖醛酸、甘露糖醛酸、半乳糖醛酸、艾杜糖醛酸、核糖醛酸(riburonic acid)和葡萄糖醛酸组成的组中的一种。在优选实施方式中，所述糖醛酸寡糖包含基于糖醛酸寡糖中总糖醛酸单位至少50数量％的半乳糖醛酸。本发明中使用的糖醛酸寡糖优选通过果胶、果胶酸盐、藻酸盐、软骨素、透明质酸、肝素、乙酰肝素、细菌碳水化合物、和/或唾液酸聚糖的降解而制备，更优选通过果胶和/或藻酸盐的降解而制备，甚至更优选通过果胶的降解而制备，最优选通过多聚半乳糖醛酸。优选地，降解的果胶通过水解和/或β-去除水果和/或植物果胶而制备的，更优选通过苹果、柑橘和/或甜菜果胶而制备，甚至更优选通过经至少一种裂解酶降解苹果、柑橘和/或甜菜果胶而制备。优选地，非消化性寡糖为半乳糖醛酸寡糖。
优选地，本发明组合物包含基于所述组合物中糖醛酸寡糖总重的25wt.％和100wt.％之间，更优选介于50wt.％和100wt.％之间的DP为2到250的糖醛酸寡糖，更优选基于所述组合物中糖醛酸寡糖总重，DP为2到100，DP甚至更优选DP为2到50，最优选DP为2到20。
在优选实施方式中，所述糖醛酸寡糖中至少一个末端己糖醛酸单位具有双键。该双键有效地保护了肠上皮细胞，使其不被病原菌附着。这对婴儿来说是有利的。优选地，末端己糖醛酸单位之一包含C4-C5双键。位于末端己糖醛酸单位的双键可以通过例如裂解酶对果胶的酶促水解而获得。
糖醛酸寡糖可以由此衍生。糖醛酸寡糖可以被甲氧基化和/或酰胺化。在一个实施方式中，糖醛酸寡糖的特征在于其甲氧基化的程度高于20％，优选高于50％，甚至更优选高于70％。本文所用的“甲氧基化程度”(也被称为DE或“酯化度”)的意思是指糖醛酸寡糖中包含的游离羧酸基团已经被酯化比如甲基化的程度。
优选地，本发明肠道组合物包含非消化性寡糖低聚反式半乳糖、低聚果糖和果胶降解产物。
低聚反式半乳糖:低聚果糖:果胶降解产物的重量比优选为(20至2):1:(1至3)，更优选为(12至7):1:(1至2)。
优选地，本发明涉及下述肠道组合物，其中非消化性寡糖选自由低聚果糖、低聚半乳糖和糖醛酸寡糖组成的组，其中糖醛酸寡糖优选为半乳糖醛酸寡糖。
本发明肠道组合物优选包含基于所述组合物干重0.05至20wt.％的总非消化性寡糖，更优选0.5至15wt.％，甚至更优选1至10wt.％，最优选2.0至10wt.％的总非消化性寡糖。
基于100ml，本发明的肠道组合物基于100ml所述组合物优选包含0.01至2.5wt.％的总非消化性寡糖，更优选包含0.05至1.5wt.％，甚至更优选包含0.25至1.5wt.％的总非消化性寡糖。
肠道组合物
本发明涉及非消化性寡糖用于增强蛋白部分水解物诱导的对膳食蛋白的口服耐受性，优选在本发明的肠道组合物中，所述蛋白部分水解物的特征在于其所含肽中至少3wt％的肽的尺寸为5kDa或更高，且至少50wt.％的肽的尺寸小于5kDa。
本发明涉及非消化性寡糖用于增强蛋白部分水解物对膳食蛋白的初级过敏预防作用，在本发明的肠道组合物中，所述蛋白部分水解物的特征在于其所含肽中至少3wt％的肽的尺寸为5kDa或更高，且至少50wt.％的肽的尺寸小于5kDa。
本发明涉及包含优选根据本发明的非消化性寡糖和至少一种蛋白部分水解物的肠道组合物，其中所述蛋白部分水解物为乳清蛋白部分水解物，且其中所述非消化性寡糖为低聚半乳糖、低聚果糖和半乳糖醛酸寡糖的混合物。优选地，所述肠道组合物的蛋白部分水解物的特点在于其所含肽中至少3wt％的肽的尺寸为5kDa或更高，且至少50wt.％的肽的尺寸小于5kDa。
本发明的肠道组合物优选为营养组合物。优选地，所述肠道组合物用于口服。
如以上所说明的，本发明的肠道组合物包含蛋白部分水解物和非消化性寡糖。
在优选实施方式中，本发明的肠道组合物包含：a)基于组合物干重的至少5wt.％的乳清蛋白部分水解物或至少5wt.％的所述至少一种β-乳球蛋白肽；和b)基于组合物干重至少1wt％的低聚半乳糖、低聚果糖和半乳糖醛酸寡糖之和，其中优选低聚半乳糖:低聚果糖:半乳糖醛酸寡糖的重量比为(20-4):(0.5-2):1。
此外，本发明所述的肠道组合物还可进一步包含脂类(也称为脂类组分)，特别是脂肪。
本肠的肠道组合物优选包含作为脂类的植物脂类和/或海洋生物油类，如藻类油类、细菌油类、动物油类、植物油类或鱼油类。
在更优选的实施方式中，本发明的肠道组合物除非消化性寡糖之外还包含其他碳水化合物组分，如消化性碳水化合物，优选乳糖。
在本发明的更优选实施方式中，所述肠道组合物除蛋白部分水解物以外还包含其他蛋白组分，如未水解的蛋白，或优选蛋白广泛水解物。
因此，在本发明的优选实施方式中，本发明的肠道组合物包含包括蛋白部分水解物在内的蛋白组分，包括非消化性寡糖在内的碳水化合物组分，脂质组分，和任选的液态溶剂，如水。
本发明的组合物优选包含基于总蛋白干重的至少50wt.％的动物性乳类来源的蛋白组分，更优选至少90wt.％。优选地，本发明的组合物包含均基于总蛋白干重的至少50wt.％牛奶来源性蛋白，更优选至少90wt.％。优选地，本发明的组合物包含源于糖巨肽(glycomacropeptide)d1浓度降低的酸乳清和/或甜乳清的蛋白。通常，分子量为8000Da的糖巨肽(GMP)是源自酪蛋白的乳清蛋白，其含有κ-酪蛋白中第106-169个氨基酸残基，并且通过肾素(凝乳酶)的水解作用从κ-酪蛋白中释放出来。优选地，本发明的肠道组合物包含源自β-酪蛋白、β-乳球蛋白和/或α-乳白蛋白的蛋白质。在本发明的另一实施方式中，所述蛋白为豌豆、大豆和/或稻蛋白。
优选地，本发明的肠道组合物包含乳清蛋白部分水解物和酪蛋白部分水解物。酪蛋白部分水解物和乳清蛋白部分水解物优选以酪蛋白:乳清的重量比为10:90到90:10存在，更优选为20:80到80:20。
本发明的肠道组合物优选包含酪蛋白水解物和乳清蛋白水解物两者，这是因为牛酪蛋白的氨基酸组成与人乳蛋白的氨基酸组成更为近似，并且乳清蛋白更加易于消化并以更高的比例存在于人乳中.
本发明的肠道组合物优选包含基于总热量的5到25％的蛋白,优选7至25％，优选5至20％，优选5至16％，优选5至12％的蛋白。总热量数值可以根据可消化的碳水化合物、脂肪和蛋白的量来计算。
基于100ml，本发明的肠道组合物优选包含基于100ml本发明的组合物0.5至2.5wt.％的蛋白质，更优选0.05至1.5wt.％，甚至更优选1至3wt.％。
本发明中所用的术语“蛋白”指的是蛋白、肽和游离氨基酸的总和。
本发明的肠道组合物中，每100ml即食组合物优选包含0.5到6.0g蛋白，更优选1.0到3.0g，甚至更优选1.0到2.5g蛋白。
本发明的肠道组合物优选包含基于总组合物干重至少7.0wt.％的蛋白，更优选至少8.0wt.％，最优选至少9.0wt.％或至少10.0wt.％的蛋白。
优选地，本发明的肠道组合物包含基于总组合物干重最多40wt.％的蛋白，更优选最多15wt％，优选最多20wt％的蛋白。
基于本发明肠道组合物干重的蛋白wt.％可以依据Kjeldahl法通过测量总氮量来计算，优选对于酪蛋白，所用换算因数为6.38，对于酪蛋白以外的其他蛋白，则使用6.25作为换算因数。
本发明的肠道组合物优选包含基于本发明肠道组合物总蛋白干重至少50wt.％，优选至少80wt.％，尤其是90wt.％，更优选100％的本发明蛋白部分水解物。
本发明肠道组合物中每100g蛋白优选包少于10g,更优选少于7g的游离氨基酸。相对较低的氨基酸含量可以产生低渗透压，并可因此防止胃肠道/消化系统的紊乱，如腹泻。低游离氨基酸含量还进一步具有减少苦味的作用；游离氨基酸赋予配方奶粉苦味。此外，与肽相比，肠道对游离氨基酸的吸收较差。因此，优选限制本发明肠道组合物中游离氨基酸的量。
本发明肠道组合物优选还包含脂质组分和蛋白组分且优选包含消化性碳水化合物组分，所述脂质优选为脂肪，其优选提供了30到60％的总热量，所述蛋白组分优选提供5到20％，更优选5到15％的总热量，而消化性碳水化合物成分优选提供25到75％的总热量。优选地，本发明的组合物所包含的脂质组分提供35到50％的总热量，蛋白组分提供6到12％的总热量，而消化性碳水化合物组分则提供40到60％的总热量。热量总量由来源于蛋白、脂质和消化性碳水化合物的热量总和决定。
本发明的组合物不是人母乳。优选地，本发明的肠道组合物不包含活的或死的益生菌，特别是双歧杆菌或乳酸菌。优选地，本发明的肠道组合物不包含生长因子和/或细胞因子。优选地，本发明的肠道组合物不含TGF，特别是TGF-β。
本发明中的组合物优选包含其他组分，如维他命和/或矿物质，其优选符合有关婴儿配方奶粉的国际规定。
在一个实施方式中，本发明的肠道组合物为干形式，例如粉末，其经水溶液优选用水重溶后适合用来制备液态组合物。优选地，所述肠道组合物为粉末，优选用水重溶。
为了满足婴儿对热量的需求，在本发明的肠道组合物中，每100ml液体优选包含50到200卡路里，更优选每100ml液体包含60到90卡路里，甚至更优选每100ml液体包含60到75卡路里。这种热量密度确保了水与热量消耗之间的比例为最佳。本发明的组合物的渗透压优选介于150和420mOsmol/l之间，更优选介于260和320mOsmol/l之间。低渗透压的目的在于降低胃肠压力。压力可诱发脂肪细胞的形成。
优选地，本发明的肠道组合物为液体形式，优选用Brookfield粘度计在20℃且剪切率为100s-1的条件下所测得的粘稠度低于35mPa.s，更优选低于6mPa.s。适合地，本发明的肠道组合物的形式为粉末状，优选可用水将其重溶从而形成液体或浓缩液形式，浓缩液应在水中稀释。当本发明的肠道组合物为液体形式时，优选的日服用体积为每天约80到2500ml，更优选每天约450到1000ml。
应用
本发明所述的肠道组合物优选用于婴儿，即为婴儿营养组合物。因此，优选在生命的头三年给受试对象服用本发明的肠道组合物。优选地，本发明的组合物为婴儿配方奶粉或后续配方奶粉(follow-on-formula)，或为幼儿奶粉，以用于年长于婴儿的人群。
在本发明所述用途的一个实施方式中，所述肠道优选营养组合物用于喂养或将该组合物用于喂养年龄在0到36个月的受试对象。本发明的肠道组合物被有利地施用于0到24个月的人，更优选0到18个月的人，最优选0到12个月的人。
优选地，本发明的肠道组合物用于预防食物过敏症。
优选地，本发明的肠道优选营养组合物提供人体日常所需的营养，组合物特别用于施用于人尤其是哺喂给人，尤其是包括较大幼儿(toddler)在内的婴幼儿，优选具有发生过敏特别是具有产生过敏症状的风险的人群。
在本发明中，术语“耐受性”应理解为特定的免疫无应答状态。体液(抗体)和细胞介导(淋巴细胞)的免疫应答途径都可被耐受性诱导抑制。口服耐受性的破坏被认为是食物过敏的根本原因。口服免疫耐受性是指预先通过口服途径施用抗原而产生的对针对该抗原的细胞和/或体液免疫反应的特异抑制，其很可能已演变为对食物蛋白的超敏反应的预防。由于口服免疫耐受性是受外源性抗原驱使的持续的天然免疫事件，其具有极大的免疫学意义。由于持续接触粘膜的抗原具有进入内部环境的特权，它们代表了在异体组分和自体组分之间的界限。口服免疫耐受性已演变为将通过自然途径获得进入身体的途径的外部物质当作内部组分，而不会产生危险信号，且所述外部物质随后成为自体的一部分。口服免疫耐受性的失效可归咎于几种基于免疫学疾病的发病和发展，所述疾病包括食物过敏症和炎症性肠道疾病，特别是克罗恩病和溃疡性结肠炎。
在本发明中诱导或获得了耐受性，在此过程中可以通过操控免疫系统产生针对外部抗原的耐受性。获得或诱导的耐受性指的是免疫系统对外界抗原的适应，其特征在于淋巴组织对给定抗原的特异无反应性，而在其他条件下，该抗原则极有可能诱导细胞介导的免疫或体液免疫。
本发明的肠道组合物优选用于诱导优选人特别是婴儿的口服耐受性，优选用于诱导免疫耐受性，最优选用于诱导口服免疫耐受性。
因此，在本发明的优选实施方式中，用于诱导口服耐受性的本发明的肠道组合物尤其可用于预防，优选初级预防食物过敏，优选牛奶过敏和/或特应性疾病的发展，如特应性湿疹、过敏性鼻炎、特应性皮炎或哮喘。
本发明的肠道组合物优选用于诱导耐受性，优选用于诱导人体口服耐受性，特别是针对具有产生过敏症的风险，尤其是具有产生食物过敏症的风险，尤其是食物过敏症的症状的婴儿。
在进一步优选的实施方式中，本发明的肠道组合物为低致敏性肠道组合物。
在本发明具有优选的实施方式中，本发明的肠道组合物优选用于预防或治疗炎症性肠道疾病。
经本文鉴定适合并经设计用于本发明的用途的所有组合物和物质均应被认为也适合并经设计用于治疗方法或喂养受试对象的方法，特别是有需要的人类受试对象。
进一步优选的实施方式为从属权利要求的主体。
下面还将通过非限制性实施例进一步说明本发明。
实施例1：在蛋白过敏症小鼠模型中，非消化性寡糖协同增强了部分水解蛋白诱导针对蛋白的口服耐受性的能力。
乳清获自国际DMV(费赫尔，荷兰)。乳清蛋白部分水解物(pWH)由达能专业营养研究中心(Danone Research Centre for Specialised Nutrition)按照以下具体条件通过酶促水解产生。
将19.5kg温度为12℃的脱矿质水(以下称为“demi水”)放入容器中，并将其与4.1kg脱矿质乳清(Deminal,Friesland Foods Domo)和1.41kg的lactalis Nutri-whey800(DMV Campina)混合30分钟。
将溶液于78℃热处理2分钟。热处理后，将产物冷却至60℃。
将15.6g Ca(OH)2、1.84g Mg(OH)2、16.1g KOH和15.25g NaOH溶解于235ml脱矿质水中以得到碱性溶液。在水解池中装入12kg经过热处理的乳清溶液并搅拌。将温度保持在58℃。用所述碱性溶液将水解池中的pH值调节至7.75。
将16.8g碱性蛋白酶(Alcalase)和3.8g风味蛋白酶(Flavourzyme)混合并快速加入到发酵罐中。用所述碱性溶液将pH值调节至7.75。进行水解180分钟。
用快速降温结束酶解过程并将溶液冷冻。用尺寸排阻高压液相色谱法分析所得肽以进一步鉴定pWH。
尺寸分布如下：85wt.％为<1kD，8wt.％为1到<2kDa，4wt.％为2到<5kDa，1wt.％为5到<10kDa，0.6wt.％为10到20kDa，1.4wt.％为>20kDa。
3到4周大的无病原体雌性C3H/HeOuJ小鼠购自Charles River实验室(马斯特里赫特,荷兰)，并饲以不含牛奶蛋白的标准小鼠食物(AIN-93G soy,Special Diets Services,Witham,Essex,UK)。
对小鼠饲以对照组饲料(下表1)并在第0、7、14、21和28天用含有匀浆于PBS(0.5ml,Cambrex Bio Science,韦尔维耶，比利时)中且混合有作为佐剂的10μg霍乱毒素(Quadratech Diagnostics,埃普瑟姆，英国)的乳清蛋白(每只动物20mg)的钝头针口服敏化。未敏化小鼠则只接受霍乱毒素。在使用乳清蛋白敏化之前，用作为对照的PBS或50mgpWH对小鼠进行口服预处理(从第-7天到第-2天，每天进行)。为了研究包含非消化性寡糖的饲料对pWH诱导口服耐受性的影响，小鼠被饲以饲料(包含总和为2wt.％的反式半乳糖寡糖(来源为Vivinal-GOS)、低聚长链果糖(FOS,来源为RaftilinHP)和半乳糖醛酸寡糖(AOS,果胶溶解产物)的AING-93G soy)(下表1)。
表1：小鼠饲料
从第-7天到第-2天，反式半乳糖寡糖、低聚长链果糖RaftilinHP和半乳糖醛酸寡糖以9:1:1wt.的比例存在于饲料中(AIN-93G soy,Special Diets Services,Witham,Essex,UK)，并在用乳清蛋白敏化之前组合有或没有pWH预处理。
在末次敏化后一星期测量在皮内乳清蛋白刺激后产生的急性过敏性皮肤反应(在1小时出现耳朵肿胀)。在用10μg乳清蛋白在耳廓内进行皮内刺激后1小时，测定乳清敏化的小鼠中的急性过敏原特异性耳肿胀。作为阴性对照，用乳清蛋白在耳内对未敏化小鼠进行刺激。用数码千分尺(Mitutoyo,费内达尔，荷兰)两次测量耳朵厚度。用未敏化小鼠中由于局部注射而造成的非特异性耳肿胀校正过敏原诱导的耳朵增厚，以计算过敏原特异性净耳肿胀。耳肿胀表示为Δμm。
结果：
结果显示于表2中。与未敏化小鼠相比，用乳清进行的皮内耳刺激在1小时在乳清敏化的动物中诱导产生了明显的耳肿胀(120.9±12.4μm对比25.42±6.8μm；p<0.01)。用敏化能力有限的pWH进行预处理则显著降低了急性耳肿胀反应(83.58±5.6μm)。与食用对照饲料相比，在敏化前用非消化性寡糖(NDO)混合物喂养小鼠5天没有明显影响针对乳清蛋白的急性过敏性皮肤反应(112.1±8.8μm)。有趣的是，在食用也含有非消化性寡糖的饲料的pWH预处理小鼠中，急性皮肤反应被彻底消除了(22.08±6.3μm)。这种作用具有协同作用，比根据基于单独使用pWH或NDO的叠加效果所预想的效果要高出许多。
表2:根据即发型高反应性(ITH)耳肿胀测定的，用乳清蛋白部分水解物(pWH)、非消化性寡糖(NDO)、或二者的口服预处理对针对乳清蛋白的过敏反应的影响。
小鼠处理组 ΔITHμm±S.E. 相对ITH 相对耐受性
未敏化对照组 25.42±6.8 0％ 100％
无预处理组 120.9±12.4 100％ 0％
eWH预处理组 134.6±12.6 >100％ 0％
乳清蛋白预处理组 54.33*±6.1 30％ 70％
pWH预处理组(基础值) 83.58*±5.6 61％ 39％
NDO预处理组 112.1±8.8 91％ 9％
pWH+NDO预处理组 22.08*±6.3 0％ 100％
*与无预处理组比较P<0.05。
实施例2:
在含有部分水解乳清、GOS(低聚半乳糖)、FOS(低聚果糖)、AOS(酸类寡糖，即半乳糖醛酸寡糖)的婴儿配方奶粉中，每100ml即饮奶中含有：
66kcal
1.5g蛋白质等同物(如实施例1中所述的部分水解乳清蛋白，所用Kjeldahl因子为6.25)
7.2g消化性碳水化合物(主要为乳糖)
3.4g脂肪(植物脂肪、鱼油)
0.8g非消化性寡糖
0.612g低聚半乳糖
0.068g低聚长链果糖
0.12g果胶裂解产物(AOS)
所包含的还有矿物质、微量元素、维他命和其他符合用于婴儿配方奶粉的国际准则的微营养物。
实施例3
除包括了额外一组外，重复实施例1中的实验，在所述额外组中用eWH预处理的同时还食用了含有NDO的饲料。结果显示于下表3中，并且再次证明了实施例1中所显示的实验，结果表明用pWH和NDO进行预处理时所诱导的耐受性最高。这些实验进一步表明用eWH+NDO进行预处理不能获得口服耐受性诱导作用。
表3:用即发型高反应性(ITH)耳肿胀测定的，用部分水解乳清蛋白(pWH)、非消化性寡糖(NDO)或二者或用广泛水解乳清蛋白(eWH)或用完整乳清蛋白进行口服预处理对针对乳清蛋白的过敏反应的影响。
小鼠处理组 ΔITHμm±S.E. 相对ITH 相对耐受性
未敏化对照组 36.7±5.7 0％ 100％
无预处理组 121.1±18.9 100％ 0％
eWH预处理组 88.79±6.8 62％ 38％
乳清蛋白预处理组 39.25*±5.3 3％ 97％
pWH预处理组(基础值) 67.15*±10.7 36％ 64％
NDO预处理组 109.1±13.1 86％ 14％
pWH+NDO预处理组 32.58*±8.1 0％ 100％
eWH+NDO预处理组 114.5±14.4 92％ 8％
*与无预处理组相比P<0.05。**与无预处理组相比P<0.01。
实施例4：非消化性寡糖协同性地增强了特定乳清蛋白肽在蛋白过敏症小鼠模型中诱导针对蛋白的口服耐受性的能力。
肽由合成产生，且使用T细胞系的试验进行预筛。从JPT Peptide Technologies(柏林，德国)获得了25个长度为18个氨基酸且其中12个氨基酸与β-LG的B变体相重叠的合成肽和6个β-LG的A变体的合成肽。
将用艾伯斯坦-巴尔病毒(EBV)转化后的B细胞培养在补充有10％热灭活的FBS和2％Pen/Strep的RPMI 1640-GlutaMAXTM-I中。用之前Schade et al 2000,JAllerg.Clin.Immunol.106:1155-62中所描述的方法生成牛奶特异性T细胞系(TCL)。将TCL培养在含有2％HS、2％Pen/Strep、1％Glut、50IU/ml IL-2和50IU/ml IL-4的Yssel’s培养基中，并且每两星期用牛奶重新刺激以将维持培养。为了进行重新刺激，将自体的经EBV转化后的B细胞与50μg/ml牛奶蛋白混合物一起预孵育过夜。接着，对B细胞进行辐射并将其加入到TCL中。
用Ruiter et al,2006Clin Exp Allergy 36:303-10之前所描述的方式测试肽特异性T细胞的增殖。简言之，将受过辐射的转化有EBV的B细胞(4x104个/孔)一式三份置于装有50μg/ml主要过敏原或10μg/ml合成肽(2或3种肽的混合物或是单个肽)的96孔U形板中预孵育过夜。乳清蛋白(prolacta)获自Lactalis(拉瓦勒，法国)。酪蛋白酸盐购自FrieslandCampina Domo(阿默斯福特，荷兰)。对于牛奶蛋白混合物，将prolacta和酪蛋白酸盐以1:1的比例混合。另外，将α-乳白蛋白(α-LAC)和β-乳球蛋白(β-LG)当作对照进行测试。接着，将4x104个T细胞加入到孔中并培养24小时。次日加入氚标记的胸腺嘧啶(1μCi/孔)。18小时后，玻璃纤维滤纸上收获细胞，并且用Microbeta2平板计数器(Perkin Elmer,Waltham,MA,USA)测定[3H]-TdR的掺入量。掺入量以每分钟计数(cpm)表示，并且减去EBV B细胞的背景增殖。所有试验均在含有2％Pen/Strep和1％Glut的Yssel’s培养基中进行，并且温育在37℃含5％CO2的加湿空气中进行。每个TCL至少测试3次。
选择具有最高T细胞反应性的肽在动物模型中进行进一步测试。这9种肽衍生自β-乳球蛋白。
这次实验使用了3到4周龄的无病原体雌性C3H/HeOuJ小鼠(Charles River实验室,马斯垂克，荷兰)。小鼠被饲以不含牛奶蛋白的标准小鼠食物(AIN-93G soy,SpecialDiets Services,Wijk bij Duurstede,荷兰)。
AIN-93G对照饲料中混合有非消化性寡糖(2％w/w)。按照实施例1中的方式使用相同的非消化性寡糖。
从JPT Peptide Technologies(柏林，德国)获得长度为18个氨基酸的β-乳球蛋白合成肽(表4)。乳清蛋白购自国际DMV(费赫尔，荷兰)。霍乱毒素(CT)获得自QuadratechDiagnostics(埃普瑟姆，英国)。磷酸盐缓冲液(PBS)从Cambrex Bio Science(韦尔维耶，比利时)获得。
表4：肽的序列信息
在实验前不久，将肽悬浮在PBS中。所述肽被组合成3种混合物，即混合物1包含肽1-4，混合物2包含肽5-7，而混合物3包含肽8和9。每种肽在混合物中的终浓度为8mg/ml。在敏化前一星期(从第-7天到第-2天)，用装有0.5ml肽混合物或PBS的钝头针对小鼠(每组n＝6)进行口服处理。在这一星期中(第-7天到第0天)，小鼠食用标准的AIN-93G(对照)饲料或益生元饲料。这星期过后所有小鼠均食用对照饲料。在第0、7、14、21和28天用含20mg乳清和10μg CT的0.5ml PBS对小鼠进行口服敏化。未敏化的小鼠用含10μg CT的0.5ml PBS进行处理。末次敏化后5天，用含10μg乳清的20μl PBS在小鼠耳廓进行皮内刺激。在刺激前和刺激后1小时，用数码千分尺(Mitutoyo,费嫩达尔，荷兰)测量耳朵厚度。耳朵厚度(耳肿胀)的不同是急性变态反应的指标，并表示为Δμm。
结果显示于表5中。
表5：用即发型高反应性(ITH)耳肿胀所测定的，用肽混合物、非消化性寡糖(NDO)或二者进行口服预处理对针对乳清蛋白的变态反应的影响。
小鼠处理组 ΔITHμm±S.E. 相对ITH 相对耐受性
未敏化对照组CT 44±4.9 0％ 100％
无预处理组 189.4±4.6 100％ 0％
肽混合物1预处理组 124.2±10.1 55％ 45％
肽混合物2预处理组 153.8±13.3 76％ 24％
肽混合物3预处理组 109.7±9.6 45％ 55％
NDO预处理组 172.1±11.5 88％ 22％
NDO+肽混合物1预处理组 73±6.3* 20％ 80％
NDO+肽混合物2预处理组 159.2±11.3 79％ 21％
NDO+肽混合物3预处理组 97.4±15.3 37％ 63％
*与无预处理组相比P<0.05。
从表5的结果可以看出，与未敏化小鼠相比，在经乳清敏化的动物中，用乳清进行皮内耳刺激在1小时时诱导出现了明显的耳肿胀(p<0.01)。耳肿胀为变态反应，而当先前的饲料中含有益生元或肽混合物时，此反应略有减轻。
经肽混合物1预治疗的小鼠的变态反应具有统计学显著性减少，这预示着诱导耐受性的能力。当此前饲料中还含有益生元时，这种免疫耐受性的诱导被协同性地增强，即比根据基于单独使用肽混合物1或NDO的叠加效果所预想的效果要高出许多。肽混合物2和3则未表现出与NDO的协同作用。

Claims (30)

1.肠道组合物，其包含两种不同的非消化性寡糖和至少一种蛋白部分水解物，其中所述蛋白部分水解物为乳清蛋白部分水解物，并且其中所述两种不同的非消化性寡糖为β-低聚半乳糖和低聚果糖。
2.肠道组合物在制备用于诱导对膳食蛋白的口服耐受性或用于预防食物过敏症或炎症性肠道疾病的药物中的用途，其中，所述肠道组合物包含两种不同的非消化性寡糖和至少一种蛋白部分水解物，其中所述蛋白部分水解物为乳清蛋白部分水解物，并且其中所述两种不同的非消化性寡糖为β-低聚半乳糖和低聚果糖。
3.根据权利要求1所述的肠道组合物或者根据权利要求2所述的用途，其中所述组合物不含活的或死的益生菌。
4.根据权利要求1或3所述的肠道组合物或者根据权利要求2或3所述的用途，其中所述乳清蛋白部分水解物是β-乳球蛋白部分水解物。
5.如权利要求1、3至4中任一项所述的肠道组合物或者根据权利要求2至4中任一项所述的用途，其中所述乳清蛋白部分水解物包含天然肽或合成肽。
6.如权利要求1、3至5中任一项所述的肠道组合物或者根据权利要求2至5任一项所述的用途，其中所述乳清蛋白部分水解物包含至少一种β-乳球蛋白肽，所述β-乳球蛋白肽包含选自如下的序列：SEQ ID NO 1、SEQ ID NO 2、SEQ ID NO 3和SEQ ID NO 4，其中，所述肽的分子量优选小于5kDa。
7.肠道组合物在制备用于预防食物过敏症或炎症性肠道疾病的药物中的用途，其中所述肠道组合物包含两种不同的非消化性寡糖和至少一种β-乳球蛋白肽，其中所述两种不同的非消化性寡糖为β-低聚半乳糖和低聚果糖，所述β-乳球蛋白肽包含选自如下的序列：SEQID NO 1、SEQ ID NO 2、SEQ ID NO 3和SEQ ID NO 4，其中，所述肽的分子量优选小于5kDa。
8.肠道组合物在制备用于诱导对膳食蛋白的口服耐受性的药物中的用途，其包含两种不同的非消化性寡糖和至少一种β-乳球蛋白肽，其中所述两种不同的非消化性寡糖为β-低聚半乳糖和低聚果糖，所述β-乳球蛋白肽包含选自如下的序列：SEQ ID NO 1、SEQ ID NO2、SEQ ID NO 3和SEQ ID NO 4，其中，所述肽的分子量优选小于5kDa。
9.如权利要求5至6中任一项所述的肠道组合物或者根据权利要求5至7中任一项所述的用途，其中所述至少一种β-乳球蛋白肽可在其C-末端、其N-末端或所述两个末端各自独立地被1至10个氨基酸取代。
10.如权利要求1、3至5中任一项所述的肠道组合物或者根据权利要求2至5中任一项所述的用途，其中所述乳清蛋白部分水解物的特性在于，其所含肽中至少3wt％的肽的尺寸为5kDa或更高，且至少50wt％的肽的尺寸小于5kDa。
11.如权利要求1、3至5和10中任一项所述的肠道组合物或者根据权利要求2至5和10中任一项所述的用途，其中所述乳清蛋白部分水解物中肽的尺寸分布为60至90％<1kDa，5至20％为1至<2kDa，2至16％为2至<5kDa，0.6至3％为5至<10kDa，0.5至2％为10至20kDa且1至3％>20kDa(基于蛋白部分水解物中存在的肽的干重)。
12.如权利要求1、3至5、10至11中任一项所述的肠道组合物或者根据权利要求2至5、10至11任一项所述的用途，其中所述乳清蛋白部分水解物的特性在于，尺寸为2至<5kDa的肽的相对量(wt％)与尺寸为至少5kDa的肽的相对量之间的比例为(5至1):1。
13.如权利要求1、3至6、9至11中任一项所述的肠道组合物或者根据权利要求2至11任一项所述的用途，其中所述组合物包含蛋白组分、脂类组分和消化性碳水化合物，并且其中存在的所述蛋白组分的含量为基于所述组合物总热量的5％至25％。
14.如权利要求1、3至6、9至12中任一项所述的肠道组合物或者根据权利要求2至12任一项所述的用途，其中所述组合物包含基于组合物总干重的0.05至20wt％的非消化性寡糖。
15.如权利要求1、3至6、9至13中任一项所述的肠道组合物或者根据权利要求2至13任一项所述的用途，其包含：
基于所述组合物干重，至少5wt％的乳清蛋白部分水解物或基于所述组合物干重的至少5wt.％的至少一种β-乳球蛋白肽。
16.如权利要求1、3至6、9至13中任一项所述的肠道组合物或者根据权利要求2至13任一项所述的用途，其中β-低聚半乳糖和低聚果糖的重量比为1:1至19:1。
17.如权利要求1、3至6、9至16中任一项所述的肠道组合物或者根据权利要求2至16任一项所述的用途，其为婴儿配方奶粉或后续配方奶粉。
18.用于制备如权利要求1、3至6、9至17中任一项所述的口服耐受性诱导作用增强的肠道组合物的方法，其中将至少一种乳清蛋白部分水解物或至少一种β-乳球蛋白肽和非消化性寡糖混合在一起，获得口服耐受性诱导作用增强的组合物。
19.肠道组合物，其包含非消化性寡糖和至少一种蛋白部分水解物，其中所述蛋白部分水解物为乳清蛋白部分水解物，并且其中所述非消化性寡糖包括非消化性寡糖的混合物。
20.肠道组合物，其包含非消化性寡糖和至少一种蛋白部分水解物，其中所述蛋白部分水解物为乳清蛋白部分水解物，并且其中所述非消化性寡糖包括具有不同类型的糖苷键的两种非消化性寡糖。
21.肠道组合物，其包含非消化性寡糖和至少一种蛋白部分水解物，其中所述蛋白部分水解物为乳清蛋白部分水解物，并且其中所述非消化性寡糖包括具有不同聚合度的两种非消化性寡糖。
22.肠道组合物，其包含非消化性寡糖和至少一种蛋白部分水解物，其中所述蛋白部分水解物为乳清蛋白部分水解物，并且其中所述非消化性寡糖包括具有不同单糖组成的两种非消化性寡糖。
23.肠道组合物，其包含非消化性寡糖和至少一种蛋白部分水解物，其中所述蛋白部分水解物为乳清蛋白部分水解物，并且其中所述非消化性寡糖包括两种非消化性寡糖，所述两种非消化性寡糖区别在于，一种非消化性寡糖中至少一种单糖基于该非消化性寡糖的总单糖单元的百分比，所述单糖比其在另一种非消化性寡糖中的百分比高至少40(数量)％。
24.肠道组合物，其包含非消化性寡糖和至少一种蛋白部分水解物，其中所述蛋白部分水解物为乳清蛋白部分水解物，并且其中所述非消化性寡糖包括两种非消化性寡糖，所述两种非消化性寡糖区别在于，一种非消化性寡糖中至少一种糖苷键基于该非消化性寡糖的总糖苷键的百分比，所述糖苷键比其在另一种非消化性寡糖中的百分比高至少40％。
25.肠道组合物，其包含非消化性寡糖和至少一种蛋白部分水解物，其中所述蛋白部分水解物为乳清蛋白部分水解物，并且其中所述非消化性寡糖包括两种非消化性寡糖，所述两种非消化性寡糖区别在于聚合度，一种非消化性寡糖的聚合度比另一种非消化性寡糖的聚合度低至少5个单糖单元。
26.肠道组合物，其包含非消化性寡糖和至少一种蛋白部分水解物，其中所述蛋白部分水解物为乳清蛋白部分水解物，并且其中所述非消化性寡糖的聚合度为2-200。
27.如权利要求19-26中任一项所述的肠道组合物在制备用于预防食物过敏的药物中的用途。
28.如权利要求19-26中任一项所述的肠道组合物在制备用于诱导口服耐受的药物中的用途。
29.如权利要求19-26中任一项所述的肠道组合物在制备用于预防牛奶过敏的药物中的用途。
30.如权利要求19-26中任一项所述的肠道组合物在制备用于预防特应性疾病的发展的药物中的用途。
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