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一种罗汉果外植体生芽培养方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供的一种罗汉果外植体生芽培养技术，属于组织培养技术，包括制作罗汉果组培苗、外植体扦插在在滤纸。与现有技术相比，本发明的技术能够快速诱导罗汉果组织块径的形成，同时芽苞长至0.5～1cm，根系初步冒出，该方法可以实现95％的成功率，整个方法简单易操作，并且可实现大批量生产。

Description

一种罗汉果外植体生芽培养方法
技术领域
本发明属于组织培养方法领域，尤其涉及一种罗汉果外植体生芽培养方法。
背景技术
罗汉果（学名：Siraitiagrosvenorii）是葫芦科多年生藤本植物。其叶心形，雌雄异株，夏季开花，秋天结果。中医以其果实入药，含有罗汉果甜苷、多种氨基酸和维生素等药用成分，主治肺热痰火咳嗽、咽喉炎、扁桃体炎、急性胃炎、便秘等。因为罗汉果是雌雄异株，又花期不遇，加之花粉粘重且着生于花药不易被昆虫触及的地方，所以很难像普通的风媒花或虫媒花那样传粉，因此自然条件下，结果的机率极低(目前人工栽培仍然必须人工授粉)。同时，罗汉果种子实生苗有70％左右为雄株，且要等到2～3年之后，开花时才能判定，生产上基本无实用价值。但是，罗汉果的习性是，到了秋季分枝藤蔓会向下垂，并迅速伸长，一经着地就会膨大变作指头大小的块茎(俗称“薯块”、“薯仔”)，可以顽强地越冬，来年萌发成为独立的新植株。这是罗汉果自然繁殖的重要方式。在人工栽培之后，演化成了人工压蔓，小“块茎”依然是罗汉果最重要的种源。然而，这些传统块茎容易传播病毒及其它病虫害，又难以大批量生产，无法满足现代规模化种植的需求。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明提供了一种罗汉果外植体生芽培养方法。
本发明通过以下技术方案得以实现。
本发明提供的一种罗汉果外植体生芽培养方法，包括以下步骤：
1）使用常规方法制作罗汉果组培苗，并取中间健壮部分，分切成带腋芽单节茎段，并进行灭菌处理，得到外植体；
2）将外植体扦插在在滤纸上，滤纸延伸到培养基溶液中；所述的滤纸到培养基的溶液的高度不超过4cm；先黑暗培养3d，然后在光照长度1000~1200Lx。光照时间10~12h/d，培养温度为23~25℃；
所述的培养基溶液包含：MS+BA0.5~0.7mg/L、IAA0.1~0.2mg/L、蔗糖30g/L、硝酸铵1~4g/L、芒果泥5~10g/L。
进一步的，所述的培养基溶液包含：MS+BA0.6mg/L、IAA0.2mg/L、蔗糖30g/L、硝酸铵3g/L、芒果泥8g/L。
进一步的，在将外植体扦插在在滤纸前，对滤纸喷洒以下溶液：MS+BA0.5~0.7mg/L、IAA0.1~0.2mg/L、蔗糖30g/L、香蕉泥40~50g/ L，硝酸铵1~4g/L、芒果泥5~10g/L、灰炭0.5~1g/L。
进一步的，所述的滤纸厚度不小于1cm。
本发明的有益效果在于：与现有技术相比，本发明的技术能够快速诱导罗汉果组织块径的形成，同时芽苞长至0.5~1cm，根系初步冒出，该方法可以实现95%的成功率，整个方法简单易操作，并且可实现大批量生产。
具体实施方式
下面进一步描述本发明的技术方案，但要求保护的范围并不局限于所述。
实施例一
本发明提供的一种罗汉果外植体生芽培养方法，包括以下步骤：
1）使用常规方法制作罗汉果组培苗，并取中间健壮部分，分切成带腋芽单节茎段，并进行灭菌处理，得到外植体；
2）准备滤纸，厚度不低于1cm，然后在滤纸上喷洒以下溶液：MS+BA0.5mg/L、IAA0.1mg/L、蔗糖30g/L、香蕉泥40g/ L，硝酸铵1g/L、芒果泥5g/L、灰炭0.5g/L。
3）将外植体扦插在在滤纸上，滤纸延伸到培养基溶液中；所述的滤纸到培养基的溶液的高度不超过4cm；先黑暗培养3d，然后在光照长度1000Lx。光照时间10h/d，培养温度为23℃；
所述的培养基溶液包含：MS+BA0.5mg/L、IAA0.1mg/L、蔗糖30g/L、硝酸铵1g/L、芒果泥5g/L。
上述中，灭菌处理处理的具体步骤为：
1）使用常规方法制作罗汉果组培苗，并取中间健壮部分，分切成带腋芽单节茎段；
2）用浓度为3%的肥皂水浸泡5min，捞起后使用无菌水冲洗一次;
3）再用浓度为0.05%的柠檬酸溶液浸泡5min，捞起后使用无菌水冲洗一次;
4）再用浓度50~60%的酒精溶液浸泡15s，捞起后使用无菌水冲洗一次;
5)再使用浓度为0.1%的高锰酸钾溶液浸泡3min，捞起后使用无菌水冲洗一次，得到灭菌的罗汉果外植体。
6）得到的灭菌的罗汉果外植体用滤纸包裹，并对滤纸喷洒MS+BA0.6mg/L+IAA0.2mg/L+蔗糖30g/L的溶液喷洒，使得滤纸足够湿润。
实施例二
本发明提供的一种罗汉果外植体生芽培养方法，包括以下步骤：
1）使用常规方法制作罗汉果组培苗，并取中间健壮部分，分切成带腋芽单节茎段，并进行灭菌处理，得到外植体；
2）准备滤纸，厚度不低于1cm，然后在滤纸上喷洒以下溶液：MS+BA0.7mg/L、IAA0.2mg/L、蔗糖30g/L、香蕉泥40~50g/ L，硝酸铵4g/L、芒果泥10g/L、灰炭1g/L。
3）将外植体扦插在在滤纸上，滤纸延伸到培养基溶液中；所述的滤纸到培养基的溶液的高度不超过4cm；先黑暗培养3d，然后在光照长度1200Lx。光照时间12h/d，培养温度为25℃；
所述的培养基溶液包含：MS+BA0.7mg/L、IAA0.2mg/L、蔗糖30g/L、硝酸铵4g/L、芒果泥10g/L。
上述中，灭菌处理处理的具体步骤为：
1）使用常规方法制作罗汉果组培苗，并取中间健壮部分，分切成带腋芽单节茎段；
2）用浓度为3%的肥皂水浸泡5min，捞起后使用无菌水冲洗一次;
3）再用浓度为0.05%的柠檬酸溶液浸泡5min，捞起后使用无菌水冲洗一次;
4）再用浓度50~60%的酒精溶液浸泡15s，捞起后使用无菌水冲洗一次;
5)再使用浓度为0.1%的高锰酸钾溶液浸泡3min，捞起后使用无菌水冲洗一次，得到灭菌的罗汉果外植体。
6）得到的灭菌的罗汉果外植体用滤纸包裹，并对滤纸喷洒MS+BA0.6mg/L+IAA0.2mg/L+蔗糖30g/L的溶液喷洒，使得滤纸足够湿润。
实施例三
本发明提供的一种罗汉果外植体生芽培养方法，包括以下步骤：
1）使用常规方法制作罗汉果组培苗，并取中间健壮部分，分切成带腋芽单节茎段，并进行灭菌处理，得到外植体；
2）准备滤纸，厚度不低于1cm，然后在滤纸上喷洒以下溶液：MS+BA0.5~0.7mg/L、IAA0.1~0.2mg/L、蔗糖30g/L、香蕉泥40~50g/ L，硝酸铵1~4g/L、芒果泥5~10g/L、灰炭0.5~1g/L。
3）将外植体扦插在在滤纸上，滤纸延伸到培养基溶液中；所述的滤纸到培养基的溶液的高度不超过4cm；先黑暗培养3d，然后在光照长度1000~1200Lx。光照时间10~12h/d，培养温度为23~25℃；
所述的培养基溶液包含：MS+BA0.6mg/L、IAA0.2mg/L、蔗糖30g/L、硝酸铵3g/L、芒果泥8g/L。
上述中，灭菌处理处理的具体步骤为：
1）使用常规方法制作罗汉果组培苗，并取中间健壮部分，分切成带腋芽单节茎段；
2）用浓度为3%的肥皂水浸泡5min，捞起后使用无菌水冲洗一次;
3）再用浓度为0.05%的柠檬酸溶液浸泡5min，捞起后使用无菌水冲洗一次;
4）再用浓度50~60%的酒精溶液浸泡15s，捞起后使用无菌水冲洗一次;
5)再使用浓度为0.1%的高锰酸钾溶液浸泡3min，捞起后使用无菌水冲洗一次，得到灭菌的罗汉果外植体。
6）得到的灭菌的罗汉果外植体用滤纸包裹，并对滤纸喷洒MS+BA0.6mg/L+IAA0.2mg/L+蔗糖30g/L的溶液喷洒，使得滤纸足够湿润。

Claims (3)

1.一种罗汉果外植体生芽培养方法，其特征在于包括以下步骤：
1)使用常规方法制作罗汉果组培苗，并取中间健壮部分，分切成带腋芽单节茎段，并进行灭菌处理，得到外植体；
(1)用浓度为 3％的肥皂水浸泡 5min，捞起后使用无菌水冲洗一次；
(2)再用浓度为 0.05％的柠檬酸溶液浸泡 5min，捞起后使用无菌水冲洗一次；
(3)再用浓度 50～60％的酒精溶液浸泡 15s，捞起后使用无菌水冲洗 一次；
(4)再使用浓度为 0.1％的高锰酸钾溶液浸泡 3min，捞起后使用无菌水冲洗一次，得到灭菌的罗汉果外植体；
(5) 得 到 的 灭 菌 的 罗 汉 果 外 植 体 用 滤 纸 包 裹 ， 并 对 滤 纸 喷洒MS+BA0.6mg/L+IAA0.2mg/L+蔗糖 30g/L 的溶液喷洒，使得滤纸足够湿润；
2)将外植体扦插在滤纸上，滤纸延伸到培养基溶液中；所述滤纸到培养基溶液的高度不超过 4cm；先黑暗培养 3d，然后在光照长度 1000～1200Lx，光照时间10～12h/d，培养温度为 23～25℃；
所述的培养基溶液由以下原料组成：MS+BA0.5～0.7mg/L、IAA0.1～0.2mg/L、蔗糖30g/L、硝酸铵 1～4g/L、芒果泥 5～10g/L；在将外植体扦插在在滤纸前，对滤纸喷洒以下溶液：MS+BA0.5～0.7mg/L、IAA0.1～0.2m。
2. 如权利要求 1 所述的罗汉果外植体生芽培养方法，其特征在于：所述的培养基溶液由以下原料组成：MS+BA0.6mg/L、IAA0.2mg/L、蔗糖 30g/L、硝酸铵 3g/L、芒果泥 8g/L。
3. 如权利要求 1 所述的罗汉果外植体生芽培养方法，其特征在于：所述的滤纸厚度不小于 1cm。
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