CN105993950B - 一种罗汉果组织块茎生根培养技术 - Google Patents

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Abstract

本发明提供的一种罗汉果组织块茎生根培养技术，包括使用常规方法制作罗汉果组培苗；组织块茎扦插在滤纸上，滤纸延伸到液体培养基溶液中；组织块茎扦插于固体培养基中培养60～80d，即可移栽至土地中。使用该发明提供的方法处理的罗汉果组织块茎能够实现快速生根，得到的罗汉果幼苗的根须长达5cm以上，其移栽成活率达到90％以上。

Description

一种罗汉果组织块茎生根培养技术
技术领域
本发明属于植物组织培养技术领域，尤其涉及一种罗汉果组织块茎生根培养技术。
背景技术
罗汉果(学名：Siraitiagrosvenorii)是葫芦科多年生藤本植物。其叶心形，雌雄异株，夏季开花，秋天结果。中医以其果实入药，含有罗汉果甜苷、多种氨基酸和维生素等药用成分，主治肺热痰火咳嗽、咽喉炎、扁桃体炎、急性胃炎、便秘等。因为罗汉果是雌雄异株，又花期不遇，加之花粉粘重且着生于花药不易被昆虫触及的地方，所以很难像普通的风媒花或虫媒花那样传粉，因此自然条件下，结果的机率极低(目前人工栽培仍然必须人工授粉)。同时，罗汉果种子实生苗有70％左右为雄株，且要等到2～3年之后，开花时才能判定，生产上基本无实用价值。但是，罗汉果的习性是，到了秋季分枝藤蔓会向下垂，并迅速伸长，一经着地就会膨大变作指头大小的块茎(俗称“薯块”、“薯仔”)，可以顽强地越冬，来年萌发成为独立的新植株。这是罗汉果自然繁殖的重要方式。在人工栽培之后，演化成了人工压蔓，小“块茎”依然是罗汉果最重要的种源。然而，这些传统块茎容易传播病毒及其它病虫害，又难以大批量生产，无法满足现代规模化种植的需求。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明提供了一种罗汉果组织块茎生根培养技术。
本发明通过以下技术方案得以实现。
本发明提供的一种罗汉果组织块茎生根培养技术，包括以下步骤：
1)使用常规方法制作罗汉果组培苗，并取中间健壮部分，分切成带腋芽单节茎段，并进行灭菌处理，得到组织块茎；
2)将组织块茎扦插在滤纸上，滤纸延伸到液体培养基溶液中；所述的滤纸到液体培养基溶液的高度不超过4cm；先黑暗培养3d，然后在光照强度1000～1200Lx。光照时间10～12h/d，培养温度为23～25℃，培养时间15～20天；
3)将组织块茎扦插于固体培养基中培养60～80d，即可移栽至土地中。
进一步的，所述的液体培养基溶液包含：MS+BA0.5～0.7mg/L、IAA0.1～0.2mg/L、蔗糖30g/L、硝酸铵1～4g/L、芒果泥5～10g/L。
进一步的，所述的液体培养基的pH值为5.7～6.0。
进一步的，所述的固体培养基包括MS+BA1～2mg/L、AD0.5～1mg/L、蔗糖30g/L、硝酸铵1～4g/L、芒果泥20～30g/L、香蕉泥30～45g/L、灰炭土0.5～1g/L、卡拉胶5～10g/L。
进一步的，所述的固体培养基的pH值为6.2～6.4。
进一步的，所述的步骤3)的光照强度1200～1400Lx。光照时间13～15h/d，培养温度为27～29℃。
本发明的有益效果在于：使用该方法处理的罗汉果组织块茎能够实现快速生根，得到的罗汉果幼苗的根须长达5cm以上，其移栽成活率达到90％以上。
具体实施方式
下面进一步描述本发明的技术方案，但要求保护的范围并不局限于所述。
实施例一
本发明提供的一种罗汉果组织块茎生根培养技术，包括以下步骤：
1、使用常规方法制作罗汉果组培苗，并取中间健壮部分，分切成带腋芽单节茎段，并进行灭菌处理，得到组织块茎；具体方法为：
1)使用常规方法制作罗汉果组培苗，并取中间健壮部分，分切成带腋芽单节茎段；
2)用浓度为3％的肥皂水浸泡5min，捞起后使用无菌水冲洗一次；
3)再用浓度为0.05％的柠檬酸溶液浸泡5min，捞起后使用无菌水冲洗一次；
4)再用浓度50～60％的酒精溶液浸泡15s，捞起后使用无菌水冲洗一次；
5)再使用浓度为0.1％的高锰酸钾溶液浸泡3min，捞起后使用无菌水冲洗一次，得到灭菌的罗汉果外植体。
6)得到的灭菌的罗汉果外植体用滤纸包裹，并对滤纸喷洒MS+BA0.6mg/L+IAA0.2mg/L+蔗糖30g/L的溶液喷洒，使得滤纸足够湿润。
2、将组织块茎扦插在滤纸上，滤纸延伸到液体培养基溶液中；所述的滤纸到液体培养基溶液的高度不超过4cm；先黑暗培养3d，然后在光照强度1000Lx。光照时间10h/d，培养温度为23℃，培养时间15天；所述的液体培养基溶液包含：MS+BA0.5mg/L、IAA0.1mg/L、蔗糖30g/L、硝酸铵1g/L、芒果泥5g/L，pH值为5.7。
3、将组织块茎扦插于固体培养基，光照强度1200Lx。光照时间13h/d，培养温度为27℃，培养60d，即可移栽至土地中，所述的固体培养基包括MS+BA1mg/L、AD0.5mg/L、蔗糖30g/L、硝酸铵1g/L、芒果泥20g/L、香蕉泥30g/L、灰炭土0.5g/L、卡拉胶5g/L；pH值为6.2。
实施例二
本发明提供的一种罗汉果组织块茎生根培养技术，包括以下步骤：
1、使用常规方法制作罗汉果组培苗，并取中间健壮部分，分切成带腋芽单节茎段，并进行灭菌处理，得到组织块茎；具体方法为：
1)使用常规方法制作罗汉果组培苗，并取中间健壮部分，分切成带腋芽单节茎段；
2)用浓度为3％的肥皂水浸泡5min，捞起后使用无菌水冲洗一次；
3)再用浓度为0.05％的柠檬酸溶液浸泡5min，捞起后使用无菌水冲洗一次；
4)再用浓度50～60％的酒精溶液浸泡15s，捞起后使用无菌水冲洗一次；
5)再使用浓度为0.1％的高锰酸钾溶液浸泡3min，捞起后使用无菌水冲洗一次，得到灭菌的罗汉果外植体。
6)得到的灭菌的罗汉果外植体用滤纸包裹，并对滤纸喷洒MS+BA0.6mg/L+IAA0.2mg/L+蔗糖30g/L的溶液喷洒，使得滤纸足够湿润。
2、将组织块茎扦插在滤纸上，滤纸延伸到液体培养基溶液中；所述的滤纸到液体培养基溶液的高度不超过4cm；先黑暗培养3d，然后在光照强度1200Lx。光照时间12h/d，培养温度为25℃，培养时间15～20天；所述的液体培养基溶液包含：MS+BA0.7mg/L、IAA0.2mg/L、蔗糖30g/L、硝酸铵4g/L、芒果泥10g/L；pH值为6.0。
3、将组织块茎扦插于固体培养基，光照强度1400Lx。光照时间15h/d，培养温度为29℃，培养80d，即可移栽至土地中；所述的固体培养基包括MS+BA2mg/L、AD1mg/L、蔗糖30g/L、硝酸铵4g/L、芒果泥30g/L、香蕉泥45g/L、灰炭土1g/L、卡拉胶10g/L；pH值为6.4。
实施例三
本发明提供的一种罗汉果组织块茎生根培养技术，包括以下步骤：
1、使用常规方法制作罗汉果组培苗，并取中间健壮部分，分切成带腋芽单节茎段，并进行灭菌处理，得到组织块茎；具体方法为：
1)使用常规方法制作罗汉果组培苗，并取中间健壮部分，分切成带腋芽单节茎段；
2)用浓度为3％的肥皂水浸泡5min，捞起后使用无菌水冲洗一次；
3)再用浓度为0.05％的柠檬酸溶液浸泡5min，捞起后使用无菌水冲洗一次；
4)再用浓度50～60％的酒精溶液浸泡15s，捞起后使用无菌水冲洗一次；
5)再使用浓度为0.1％的高锰酸钾溶液浸泡3min，捞起后使用无菌水冲洗一次，得到灭菌的罗汉果外植体。
6)得到的灭菌的罗汉果外植体用滤纸包裹，并对滤纸喷洒MS+BA0.6mg/L+IAA0.2mg/L+蔗糖30g/L的溶液喷洒，使得滤纸足够湿润。
2、将组织块茎扦插在滤纸上，滤纸延伸到液体培养基溶液中；所述的滤纸到液体培养基溶液的高度不超过4cm；先黑暗培养3d，然后在光照强度1100Lx。光照时间11h/d，培养温度为24℃，培养时间15～20天；所述的液体培养基溶液包含：MS+BA0.6mg/L、IAA0.15mg/L、蔗糖30g/L、硝酸铵3g/L、芒果泥8g/L。
3、将组织块茎扦插于固体培养基，光照强度1300Lx。光照时间14h/d，培养温度为28℃，培养70d，即可移栽至土地中；所述的固体培养基包括MS+BA1.5mg/L、AD0.8mg/L、蔗糖30g/L、硝酸铵2g/L、芒果泥20～30g/L、香蕉泥40g/L、灰炭土0.8g/L、卡拉胶8g/L；pH值为6.3。

Claims (1)

1.一种罗汉果组织块茎生根培养方法，其特征在于包括以下步骤：
1)使用常规方法制作罗汉果组培苗，并取中间健壮部分，分切成带腋芽单节茎段，并进行灭菌处理，得到组织块茎；具体方法为：
(1)用浓度为3％的肥皂水浸泡5min，捞起后使用无菌水冲洗一次；
(2)再用浓度为0.05％的柠檬酸溶液浸泡5min，捞起后使用无菌水冲洗一次；
(3)再用浓度50～60％的酒精溶液浸泡15s，捞起后使用无菌水冲洗一次；
(4)再使用浓度为0.1％的高锰酸钾溶液浸泡3min，捞起后使用无菌水冲洗一次，得到灭菌的罗汉果外植体。
(5)得到的灭菌的罗汉果外植体用滤纸包裹，并对滤纸喷洒MS+BA0.6mg/L+IAA0.2mg/L+蔗糖30g/L的溶液喷洒，使得滤纸足够湿润；
2)将组织块茎扦插在滤纸上，滤纸延伸到液体培养基溶液中；所述的滤纸到液体培养基溶液的高度不超过4cm；先黑暗培养3d，然后在光照强度1000～1200Lx；光照时间10～12h/d，培养温度为23～25℃，培养时间15～20天；
3)将组织块茎扦插于固体培养基中培养60～80d，即可移栽至土地中；
所述的液体培养基的pH值为5.7～6.0；
所述的固体培养基的pH值为6.2～6.4；
所述的步骤3)的光照强度1200～1400Lx，光照时间13～15h/d，培养温度为27～29℃；
所述的液体培养基溶液包含：MS+BA0.5～0.7mg/L、IAA0.1～0.2mg/L、蔗糖30g/L、硝酸铵1～4g/L、芒果泥5～10g/L；
所述的固体培养基包括MS+BA1～2mg/L、AD0.5～1mg/L、蔗糖30g/L、硝酸铵1～4g/L、芒果泥20～30g/L、香蕉泥30～45g/L、灰炭土0.5～1g/L、卡拉胶5～10g/L。
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