CN105993940A - 一种利用水杨酸诱导三七茎或叶片愈伤组织生长的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种利用水杨酸诱导三七茎或叶片愈伤组织生长的方法，取田间一年生三七小苗，取茎及叶片切下，清洗，用70％的乙醇浸泡，再用10％次氯酸钠溶液浸泡，用无菌水冲洗，将三七茎剪成1‑2cm小段、叶片剪成0.5‑1.5cm2大小，放入含水杨酸和生长素2,4‑D或水杨酸和激动素KT的MS培养基中，光照培养。本发明添加合适的植物激素的培养基有效保证了愈伤组织的顺利诱导，诱导率高，耗时短，有效提高三七愈伤组织的产量，为建立三七组织培养体系、快速繁育三七组培苗奠定基础，是一个提高三七组培苗产量的有效途径。
Description
技术领域
本发明涉及愈伤组织诱导技术领域，具体涉及一种利用水杨酸诱导三七茎或叶片愈伤组织生长的方法。
背景技术
三七为补血第一药材，但是其生产周期长，若以常规方式育种或育苗，周期较长。组织培养是一项在人工培养基上离体培养植物的器官、细胞或原生质体并使其生长、增殖、分化以及再生植株的技术，愈伤组织的形成是植物通过组织培养的方式诱导成苗的关键步骤。目前常见的用于三七愈伤组织培养的培养基大都存在诱导愈伤组织的形成率低等现状。
发明内容
本发明的目的在于提供一种利用水杨酸诱导三七茎或叶片愈伤组织生长的方法，诱导率高且步骤简单。
为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：
一种利用水杨酸诱导三七茎或叶片愈伤组织生长的方法，包括以下步骤：
1)取田间一年生三七小苗，取茎及叶片切下，清洗；
2)将步骤1)三七茎及或叶片用70％的乙醇浸泡90s，用无菌水清洗3-4遍，再用10％次氯酸钠溶液浸泡10min，用无菌水冲洗3-4次；
3)将步骤2)处理后的三七茎剪成1-2cm小段、叶片剪成0.5-1.5cm2大小，放入含水杨酸和生长素2,4-D或水杨酸和激动素KT的MS培养基中，光照培养；
优选地，所述步骤3)中水杨酸的浓度为0.1mg/L-3mg/L，生长素2,4-D的浓度为1mg/L-4mg/L，激动素KT的浓度为1mg/L-4mg/L。
优选地，所述步骤3)中MS培养基的pH值为5.8。
优选地，所述步骤3)中光照培养温度为20-25℃，光照时间12h/d，光照强度2000-2500Lx。
本发明有益效果：本发明以一年生三七小苗的茎、叶为外植体进行愈伤组织的诱导培养，取材方便，不受季节限制，并且添加合适的植物激素的培养基有效保证了愈伤组织的顺利诱导，诱导率高，耗时短，有效提高三七愈伤组织的产量，为建立三七组织培养体系、快速繁育三七组培苗奠定基础，是一个提高三七组培苗产量的有效途径。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1：实施例1中三七茎的愈伤组织形成情况；
图2：实施例2中三七叶片的愈伤组织形成情况；
图3：实施例3中三七茎的愈伤组织形成情况；
图4：实施例4中三七茎的愈伤组织形成情况；
图5：实施例5中三七茎的愈伤组织形成情况；
图6：实施例6中三七叶片的愈伤组织形成情况；
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1：
一种利用水杨酸诱导三七茎或叶片愈伤组织生长的方法，包括以下步骤：
1)取田间一年生三七小苗，取茎切下，清洗；
2)将步骤1)三七茎用70％的乙醇浸泡90s，用无菌水清洗3-4遍，再用10％次氯酸钠溶液浸泡10min，用无菌水冲洗3-4次；
3)将步骤2)处理后的三七茎剪成1.5cm小段，放入含0.1mg/L水杨酸和2mg/L激动素KT的MS培养基中，光照培养，光照培养温度为24℃，光照时间12h/d，光照强度2200Lx。
实验结果见图1，可以看出三七茎上有愈伤组织形成，本实施例方法对于三七茎的愈伤组织形成率为75％。
实施例2：
一种利用水杨酸诱导三七茎或叶片愈伤组织生长的方法，包括以下步骤：
1)取田间一年生三七小苗，取叶片切下，清洗；
2)将步骤1)三七叶片用70％的乙醇浸泡90s，用无菌水清洗3-4遍，再用10％次氯酸钠溶液浸泡10min，用无菌水冲洗3-4次；
3)将步骤2)处理后的三七叶片剪成1.0cm2大小，放入含1mg/L水杨酸和2mg/L激动素KT的MS培养基中，光照培养，光照培养温度为22℃，光照时间12h/d，光照强度2200Lx.
实验结果见图2，可以看出三七叶片上有愈伤组织形成，本实施例方法对于三七叶片的愈伤组织形成率为33.3％。
实施例3：
一种利用水杨酸诱导三七茎或叶片愈伤组织生长的方法，包括以下步骤：
1)取田间一年生三七小苗，取茎切下，清洗；
2)将步骤1)三七茎用70％的乙醇浸泡90s，用无菌水清洗3-4遍，再用10％次氯酸钠溶液浸泡10min，用无菌水冲洗3-4次；
3)将步骤2)处理后的三七茎剪成1cm小段，放入含0.1mg/L水杨酸和2mg/L生长素2,4-D的MS培养基中，光照培养，光照培养温度为20℃，光照时间12h/d，光照强度2000Lx。
实验结果见图3，可以看出三七茎茎上有愈伤组织形成，本实施例方法对于三七茎的愈伤组织形成率为60.0％。
实施例4：
一种利用水杨酸诱导三七茎或叶片愈伤组织生长的方法，包括以下步骤：
1)取田间一年生三七小苗，取茎切下，清洗；
2)将步骤1)三七茎用70％的乙醇浸泡90s，用无菌水清洗3-4遍，再用10％次氯酸钠溶液浸泡10min，用无菌水冲洗3-4次；
3)将步骤2)处理后的三七茎剪成2cm小段，放入含3mg/L水杨酸和4mg/L生长素2,4-D的MS培养基中，光照培养，光照培养温度为20℃，光照时间12h/d，光照强度2000Lx。
实验结果见图4，可以看出三七茎上有愈伤组织形成，本实施例方法对于三七茎的愈伤组织形成率为20.0％。
实施例5：
一种利用水杨酸诱导三七茎或叶片愈伤组织生长的方法，包括以下步骤：
1)取田间一年生三七小苗，取茎切下，清洗；
2)将步骤1)三七茎用70％的乙醇浸泡90s，用无菌水清洗3-4遍，再用10％次氯酸钠溶液浸泡10min，用无菌水冲洗3-4次；
3)将步骤2)处理后的三七茎剪成1cm小段，放入含0.1mg/L水杨酸和1mg/L生长素2,4-D的MS培养基中，光照培养，光照培养温度为25℃，光照时间12h/d，光照强度2500Lx。
实验结果见图5，可以看出三七茎上有愈伤组织形成，本实施例方法对于三七茎的愈伤组织形成率为45.0％。
实施例6：
一种利用水杨酸诱导三七茎或叶片愈伤组织生长的方法，包括以下步骤：
1)取田间一年生三七小苗，取叶片切下，清洗；
2)将步骤1)三七叶片用70％的乙醇浸泡90s，用无菌水清洗3-4遍，再用10％次氯酸钠溶液浸泡10min，用无菌水冲洗3-4次；
3)将步骤2)处理后的三七叶片剪成1.5cm2大小，放入含3mg/L水杨酸和4mg/L激动素KT的MS培养基中，光照培养，光照培养温度为25℃，光照时间12h/d，光照强度2500Lx。
实验结果见图6，可以看出三七叶片上有愈伤组织形成，本实施例方法对于三七叶的愈伤组织形成率为55.0％。
需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。在没有更多限制的情况下，由语句“包括一个……”限定的要素，并不排除在包括所述要素的过程、方法、物品或者设备中还存在另外的相同要素。
以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。
Claims (4)
1.一种利用水杨酸诱导三七茎或叶片愈伤组织生长的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)取田间一年生三七小苗，取茎或叶片切下，清洗；
2)将步骤1)三七茎或叶片用70％的乙醇浸泡90s，用无菌水清洗3-4遍，再用10％次氯酸钠溶液浸泡10min，用无菌水冲洗3-4次；
3)将步骤2)处理后的三七茎剪成1-2cm小段、叶片剪成0.5-1.5cm2大小，放入含水杨酸和生长素2,4-D或水杨酸和激动素KT的MS培养基中，光照培养。
2.如权利要求1所述的利用水杨酸诱导三七茎或叶片愈伤组织生长的方法，其特征在于，所述步骤3)中水杨酸的浓度为0.1mg/L-3mg/L，生长素2,4-D的浓度为1mg/L-4mg/L，激动素KT的浓度为1mg/L-4mg/L。
3.如权利要求1所述的利用水杨酸诱导三七茎或叶片愈伤组织生长的方法，其特征在于，所述步骤3)中MS培养基的pH值为5.8。
4.如权利要求1所述的利用水杨酸诱导三七茎或叶片愈伤组织生长的方法，其特征在于，所述步骤3)中光照培养温度为20-25℃，光照时间12h/d，光照强度2000-2500Lx。
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