CN105969669A - 一种复合微生物菌剂及其制备方法和应用 - Google Patents

一种复合微生物菌剂及其制备方法和应用 Download PDF

Info

Publication number
CN105969669A
CN105969669A CN201610265908.4A CN201610265908A CN105969669A CN 105969669 A CN105969669 A CN 105969669A CN 201610265908 A CN201610265908 A CN 201610265908A CN 105969669 A CN105969669 A CN 105969669A
Authority
CN
China
Prior art keywords
spore
vinegar
suspension
spore suspension
aspergillus
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201610265908.4A
Other languages
English (en)
Inventor
董晓芳
佟建明
崔耀明
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Institute of Animal Science of CAAS
Original Assignee
Institute of Animal Science of CAAS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Institute of Animal Science of CAAS filed Critical Institute of Animal Science of CAAS
Priority to CN201610265908.4A priority Critical patent/CN105969669A/zh
Publication of CN105969669A publication Critical patent/CN105969669A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明提供了一种醋糟发酵的复合微生物菌剂，所述菌剂包含混合真菌；所述混合真菌由黄孢原毛平革菌、康氏木霉、黑曲霉和无花果曲霉混合组成。本发明还提供了上述菌剂的制备方法及其在醋槽发酵中的应用。降低醋糟中的粗纤维含量，增加醋糟中容易消化的还原糖含量，增加醋糟中水解酶的活性，提高醋糟的饲用价值。

Description

一种复合微生物菌剂及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于有机废弃物农用资源化的微生物技术处理领域，涉及一种能促进醋糟发酵的复合微生物菌剂及其制备方法。
背景技术
醋糟是以淀粉质原料为主料固态发酵酿造食醋过程中产生的残渣。我国食醋年产量为200～250万吨，且每年以7％的速度逐年增长。按照生产1吨标准固态发酵二级食醋产生0.6～0.7吨醋糟计算，我国年产醋糟量为120～175万吨。如此丰富且成本低廉的醋糟资源目前尚未得到充分合理的利用，不仅造成资源浪费还导致环境污染。除少部分被周围村民直接用作饲料外，大部分被丢弃。而醋糟粗纤维含量高，适口性差，消化率低，直接饲喂时，营养物质利用率低，严重制约了醋糟作为饲料原料的大规模应用。
近年来，由于微生物发酵操作简单，成本低，经济环保，成为当前糟渣类资源增值利用技术研究的热点。利用真菌发酵，不仅可以降解醋糟中的纤维素成分，而且能增加水解酶活性，可以显著提高醋糟的营养价值和附加值。有学者对醋糟发酵工艺进行了探讨研究，但是效果并不理想，一是粗纤维含量下降幅度较低，下降幅度最高的仅为16.23％，其二是工艺复杂，需要进行前处理，其三是发酵时间长。
发明内容
基于上述背景技术，本发明的目的在于降低醋糟中的粗纤维含量，增加醋糟中容易消化的还原糖含量，增加醋糟中水解酶的活性，提高醋糟的饲用价值；并且建立成本低廉，操作简单，效果显著，适合大规模应用于纤维素类废弃物开发利用的混菌发酵工艺。
本发明提供了一种复合微生物菌剂，所述菌剂包含混合真菌；
所述混合真菌由黄孢原毛平革菌(ACCC 30414)、康氏木霉(CGMCC 3.2878)、黑曲霉(ACCC 30557)和无花果曲霉(NTG-23)组成；优选地，以混合真菌中的真菌数量比例计所述黄孢原毛平革菌：康氏木霉为：黑曲霉：无花果曲霉的比例为(1～4)：(1～4)：(1～4)：(1～4)；更优选地，所述黄孢原毛平革菌、康氏木霉、黑曲霉和无花果曲霉以1：1：1：1的真 菌数量比例混合组成。
本发明还提供了上述菌剂的制备方法，所述方法包括：
1)将黄孢原毛平革菌、康氏木霉于28℃分别独立地在PDA培养基上培养5～8天；
同时，将黑曲霉和无花果曲霉于28℃分别独立地在察氏培养基上培养5～8天；
2)以无菌生理盐水于无菌环境下分别将步骤1)中所述四种菌的孢子洗脱，得到分别含有黄孢原毛平革菌孢子的溶液、含有康氏木霉孢子的溶液、含有黑曲霉孢子的溶液和含有无花果曲霉孢子的溶液；
3)将步骤2)得到的四种孢子溶液分别于室温下以150rpm震荡4小时；
4)将步骤3)处理后的分别孢子溶液分别过滤，得到黄孢原毛平革菌孢子悬液、康氏木霉孢子悬液、黑曲霉孢子悬液和无花果曲霉孢子悬液；
5)将步骤4)得到的黄孢原毛平革菌孢子悬液、康氏木霉孢子悬液、黑曲霉孢子悬液和无花果曲霉孢子悬液以相应的比例混合，即得菌剂；
优选地，所述步骤5)还包括将所述黄孢原毛平革菌孢子悬液、康氏木霉孢子悬液、黑曲霉孢子悬液和无花果曲霉孢子悬液调整至以孢子/ml计的相同的浓度；更优选地，所述黄孢原毛平革菌孢子悬液、康氏木霉孢子悬液、黑曲霉孢子悬液和无花果曲霉孢子悬液以体积比1：1：1：1混匀。
在根据本发明的一个实施方案中，步骤4)中过滤是将孢子溶液通过8层纱布实现的。
在根据本发明的一个实施方案中，步骤5)中孢子悬液的浓度为1×106个孢子/ml。
在根据本发明的一个实施方案中，步骤6)所述菌剂为干燥后密封的干粉菌剂；优选为通过真空冷冻干燥处理获得。
本发明进一步提供了一种醋糟发酵的方法，所述方法包括：
a)以g：ml计将比例为3：7的醋糟与矿物元素培养液混匀，得到醋糟固体培养基；
其中，所述矿物元素培养液以去离子水为溶剂，含有2g/L、NaNO3 2g/L、KH2PO4 1.5g/L、CaCl2 0.3g/L、MgSO4·7H2O 0.3g/L、FeSO4·7H2O 0.005g/L、MnSO4·H2O 0.0016g/L、ZnSO4·7H2O 0.0014g/L、CoCl2·6H2O 0.0005g/L，并且所述矿物元素培养液通过5M NaOH和1M HCl将pH值调整为6；
b)向步骤a)所述的醋糟固体培养基中加入相当于醋糟质量的1％的 尿素，混匀；
c)向经步骤b)处理的醋糟固体培养基中加入相当于醋槽质量的0.03％的MnSO4·H2O，混匀，进行灭菌处理并冷却；
d)向经步骤c)处理的醋糟固体培养基中加入所述的菌剂，以25℃发酵培养5天。
在根据本发明的一个实施方案中，步骤d)中，菌剂的加入量为第30g醋糟对应的加入4×106个孢子的菌剂。
在根据本发明的一个实施方案中，当所述菌剂为干粉状态时，以无菌生理盐水复溶制备孢子悬液；优选地，孢子悬液的浓度为4×106个孢子/ml。
更进一步地，本发明提供了通过上述方法得到的发酵产物，所述发酵产物经真空冷冻干燥处理，冷冻干燥处理的时间为48小时；优选地，所述发酵产物经冷冻干燥后，粉碎并密封装袋。
本发明还提供了上述发酵产物在制备饲料中的应用；优选地，所述饲料选自家禽饲料、家畜饲料、水产饲料。
另一方面，本发明具有以下有益效果：
1、混菌组合：黄孢原毛平革菌、康氏木霉、黑曲霉和无花果曲霉NTG-23。
2、发酵后的变化：
(1)还原糖含量提高。
(2)羧甲基纤维素酶活性提高。
(3)木聚糖酶活性提高。
(4)纤维素含量下降。
(5)半纤维素含量下降。
(6)木质素含量下降。
(7)粗纤维含量下降。
3、发酵周期短。
4、发酵过程简单，醋糟未经前处理。
具体实施方式
下面结合实施例进一步说明本发明，应当理解，实施例仅用于进一步说明和阐释本发明，并非用于限制本发明。
除非特别指明，本发明所使用的试剂和材料均可通过商业途径获得。
除非特别指明，本发明所涉及的黄孢原毛平革菌、黑曲霉均可通过商业途径获得。其中，黄孢原毛平革菌、黑曲霉可由位于北京市海淀区中关村南大街12号的中国农业微生物菌种保藏管理中心(ACCC)购得，黄孢 原毛平革菌的保藏号为ACCC 30414，黑曲霉保藏号为ACCC 30557；康氏木霉和无花果曲霉NTG-23由位于北京市朝阳区北辰西路1号院3号的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)保藏，康氏木霉保藏号为CGMCC No.3.2878，无花果曲霉NTG-23保藏号为CGMCC No.2980(分类命名：无花果曲霉Aspergillus ficuum，保藏日期：2009年03月27日。
实施例 1培养基制备
PDA培养基配方(g/L)：马铃薯浸粉3.0，葡萄糖20.0，琼脂15.0，自然pH。
察氏培养基配方(g/L)：蔗糖30.0，琼脂12.0，NaNO3 3.0，MgSO4·7H2O 0.5，KCL 0.5，FeSO4·7H2O 0.01，K2HPO4 1.0，自然pH。
按照配方配制，经过煮沸，装入干净锥形瓶，封口膜封口，皮筋扎紧，121℃高压灭菌20min，结束后取出置于超净工作台(开紫外杀菌和通风)，冷却至40-60℃，倒入无菌的平皿中(均匀，水平，无气泡)，冷却凝结呈固态，备用。
实施例 2菌株的培养
将黄孢原毛平革菌(ACCC 30414)、康氏木霉(CGMCC 3.2878)在PDA培养基上活化两次，然后接到PDA平板培养基上28℃培养至产生大量孢子(一周左右)。
将黑曲霉(ACCC 30557)、无花果曲霉(NTG-23)在察氏培养基上活化两次，然后接到察氏平板培养基上28℃培养至产生大量孢子(一周左右)。
实施例 3制备孢子悬液
1.用无菌生理盐水(0.9％NaCl溶液)将四种菌的孢子从平板上洗脱下来，分别得到各个菌的孢子液(操作过程为无菌操作)。
2.将获得的孢子液置于250mL锥形瓶(装有玻璃珠)中，室温下150rmp摇床震荡4h，打碎分散孢子。
3.震荡后的孢子液用8层纱布过滤(用到漏斗、玻璃棒)，得到孢子悬液。
4.采用血球计数板显微镜下观察计数的方法，调整各种菌的孢子悬液至1×106个孢子/mL，备用。
孢子悬液也可通过真空冷冻干燥技术处理为干燥的孢子粉菌剂，以便于保存或包装商用。
实施例 4配制醋糟固体培养基
矿物元素培养液配方：1L水溶液含有2g,NaNO3 2g,KH2PO4 1.5g,CaCl2 0.3g,MgSO4·7H2O 0.3g,FeSO4·7H2O 0.005g,MnSO4·H2O 0.0016g,ZnSO4·7H2O 0.0014g,CoCl2·6H2O 0.0005g；
1.配制矿物元素培养液：按照上述配方配制矿物元素培养液，然后以5M NaOH和1M HCl调整其pH值为6。
2.将30g醋糟置于500mL锥形瓶中，加入70mL上述矿物元素培养液调整固体发酵培养基的初始水分含量使其达到70％；
3.向醋糟固体培养基中加入1％的尿素(尿素/醋糟)(即0.3g)，充分混匀；
4.向醋糟固体培养基中加入0.009g的MnSO4·H2O(即相当于步骤2中醋糟的质量的0.03％)，充分混匀；
5.放置高压灭菌锅中121℃灭菌20分钟，取出放在超净台里冷却。
实施例 5醋糟发酵
1.向实施例4中的醋糟培养基中加入实施例3制备的四种菌的孢子悬液(浓度1×106个孢子/mL)各1mL，充分混匀。
2.置于25℃恒温培养箱中通风保湿，培养5天。
3.培养结束后，将发酵产物置于真空冷冻干燥中，冷冻干燥48个小时，即得到干燥的发酵产物。
4.将样品粉碎，装袋保存得到成品。
步骤1中也可使用无菌去离子水将孢子粉菌剂复溶为孢子悬液，并使孢子悬液浓度调整至1×106个孢子/mL。使用中每30g醋糟对应地加入每种菌的孢子悬液1ml，或将四种菌等比例混合后的孢子悬液4ml，或者加入相应的孢子数的菌剂。
实施例 6醋糟发酵
1.向实施例4中的醋糟培养基中加入实施例3制备的四种菌的孢子悬液(浓度1×106个孢子/mL)，其中，取孢原毛平革菌0.4ml、黑曲霉1ml、黄孢原毛平革菌1ml、黑曲霉1.6ml，充分混匀。
2.置于25℃恒温培养箱中通风保湿，培养5天。
3.培养结束后，将发酵产物置于真空冷冻干燥中，冷冻干燥48个小时，即得到干燥的发酵产物。
4.将样品粉碎，装袋保存得到成品。
步骤1中也可使用无菌去离子水将孢子粉菌剂复溶为孢子悬液，并使孢子悬液浓度调整至1×106个孢子/mL。使用中每30g醋糟对应地将四种菌以相应比例混合后的孢子悬液4ml，或者加入相应的孢子数的菌剂。
实施例 7醋糟发酵
1.向实施例4中的醋糟培养基中加入实施例3制备的四种菌的孢子悬液(浓度1×106个孢子/mL)其中，取孢原毛平革菌1ml、黑曲霉0.4ml、黄孢原毛平革菌1.6ml、黑曲霉1ml，充分混匀。
2.置于25℃恒温培养箱中通风保湿，培养5天。
3.培养结束后，将发酵产物置于真空冷冻干燥中，冷冻干燥48个小时，即得到干燥的发酵产物。
4.将样品粉碎，装袋保存得到成品。
步骤1中也可使用无菌去离子水将孢子粉菌剂复溶为孢子悬液，并使孢子悬液浓度调整至1×106个孢子/mL。使用中每30g醋糟对应地将四种菌以相应比例混合后的孢子悬液4ml，或者加入相应的孢子数的菌剂。
实施例 8醋糟发酵
1.向实施例4中的醋糟培养基中加入实施例3制备的四种菌的孢子悬液(浓度1×106个孢子/mL)其中，取孢原毛平革菌1ml、黑曲霉1.6ml、黄孢原毛平革菌0.4ml、黑曲霉1ml，充分混匀。
2.置于25℃恒温培养箱中通风保湿，培养5天。
3.培养结束后，将发酵产物置于真空冷冻干燥中，冷冻干燥48个小时， 即得到干燥的发酵产物。
4.将样品粉碎，装袋保存得到成品。
步骤1中也可使用无菌去离子水将孢子粉菌剂复溶为孢子悬液，并使孢子悬液浓度调整至1×106个孢子/mL。使用中每30g醋糟对应地将四种菌以相应比例混合后的孢子悬液4ml，或者加入相应的孢子数的菌剂。
实施例 9醋糟发酵
1.向实施例4中的醋糟培养基中加入实施例3制备的四种菌的孢子悬液(浓度1×106个孢子/mL)其中，取孢原毛平革菌1.6ml、黑曲霉1.2ml、黄孢原毛平革菌0.8ml、黑曲霉0.4ml，充分混匀。
2.置于25℃恒温培养箱中通风保湿，培养5天。
3.培养结束后，将发酵产物置于真空冷冻干燥中，冷冻干燥48个小时，即得到干燥的发酵产物。
4.将样品粉碎，装袋保存得到成品。
步骤1中也可使用无菌去离子水将孢子粉菌剂复溶为孢子悬液，并使孢子悬液浓度调整至1×106个孢子/mL。使用中每30g醋糟对应地将四种菌以相应比例混合后的孢子悬液4ml，或者加入相应的孢子数的菌剂。
实施例 10发酵产物检测
(一)直接使用四种菌等比例混合后进行发酵得到的发酵产物(如表1所示)
1.还原糖产量达到35.57mg/gds，比空白组高出108.01％。
2.木聚糖酶活性达到439.07U/gds，比单菌发酵的最高值高出432.08％。
3.羧甲基纤维素酶活性达到8.15U/gds，比单菌发酵的最高值高出243.88％。
4.纤维素含量降低了17.11％。
5.半纤维素含量降低了68.61％。
6.木质素含量降低了14.44％。
表1四种菌发酵醋糟前后成分比较表
(二)对发酵后的醋糟进行检测
检测方法：
1、还原糖含量测定
采用DNS(Miller,1959)方法测定，以葡萄糖为标准物。
2、羧甲基纤维素酶活性和木聚糖酶活性测定
采用DNS法测定羧甲基纤维素酶活性(Feng,et al.2011)；采用DNS法测定木聚糖酶活性(Latif,et al.2006)。
3、纤维素、半纤维素和木质素含量测定
使用滤袋(ANKOM)测定发酵产物中中性洗涤纤维(NDF)、酸性洗涤纤维(ADF)、酸性洗涤木质素(ADL)和灰分含量。纤维素、半纤维素和木质素含量由计算得出，即纤维素＝ADF－ADL；半纤维素＝NDF－ADF；木质素＝ADL－灰分(El-Zoghbi 1994；Van Soest,et al.1991)。
4、粗纤维含量测定
采用国家标准《饲料中粗纤维的含量测定-过滤法》(GB/T 6434-2006)测定。
(三)检测结果：
实施例5发酵后的醋糟的检测结果(详见表2)如下：
1.还原糖含量提高170.00％。
2.羧甲基纤维素酶活性提高418.99％。
3.木聚糖酶活性提高507.45％。
4.纤维素含量下降19.43％。
5.半纤维素含量下降68.97％。
6.木质素含量下降19.64％。
7.粗纤维含量下降29.02％。
表2醋糟混菌发酵条件优化前后成分比较表
发酵条件优化前 发酵条件优化后 提高或下降百分比
还原糖 17.10mg/g 46.17mg/g 提高170.00％
羧甲基纤维素酶活性 2.37U 12.30U 提高418.99％
木聚糖酶活性 82.52U 501.27U 提高507.45％
纤维素 39.27％ 31.64％ 下降19.43％
半纤维素 14.05％ 4.36％ 下降68.97％
木质素 19.60％ 15.75％ 下降19.64％
粗纤维 38.80％ 27.54％ 下降29.02％
采用实施例6～9的菌剂进行发酵，也获得了与实施例10相当的效果，发酵后，还原糖含量、羧甲基纤维素酶活性、木聚糖酶活性均显著提高，同时，醋糟中纤维素含量、半纤维素含量下降、木质素含量下降以及粗纤维含量均下降。
尽管本发明已进行了一定程度的描述，明显地，在不脱离本发明的精神和范围的条件下，可进行各个条件的适当变化。可以理解，本发明不限于所述实施方案，而归于权利要求的范围，其包括所述每个因素的等同替换。

Claims (10)

1.一种醋糟发酵的复合微生物菌剂，其特征在于，所述菌剂包含混合真菌；
所述混合真菌由黄孢原毛平革菌(ACCC 30414)、康氏木霉(CGMCC3.2878)、黑曲霉(ACCC 30557)和无花果曲霉(NTG-23)组成；优选地，以混合真菌中的真菌数量比例计所述黄孢原毛平革菌：康氏木霉为：黑曲霉：无花果曲霉的比例为(1～4)：(1～4)：(1～4)：(1～4)；更优选地，所述黄孢原毛平革菌、康氏木霉、黑曲霉和无花果曲霉以1：1：1：1的真菌数量比例混合组成。
2.如权利要求1所述的菌剂的制备方法，其特征在于，所述方法包括：
1)将黄孢原毛平革菌、康氏木霉于28℃分别独立地在PDA培养基上培养5～8天；
同时，将黑曲霉和无花果曲霉于28℃分别独立地在察氏培养基上培养5～8天；
2)以无菌生理盐水于无菌环境下分别将步骤1)中所述四种菌的孢子洗脱，得到分别含有黄孢原毛平革菌孢子的溶液、含有康氏木霉孢子的溶液、含有黑曲霉孢子的溶液和含有无花果曲霉孢子的溶液；
3)将步骤2)得到的四种孢子溶液分别于室温下以150rpm震荡4小时；
4)将步骤3)处理后的孢子溶液分别过滤，得到黄孢原毛平革菌孢子悬液、康氏木霉孢子悬液、黑曲霉孢子悬液和无花果曲霉孢子悬液；
5)将步骤4)得到的黄孢原毛平革菌孢子悬液、康氏木霉孢子悬液、黑曲霉孢子悬液和无花果曲霉孢子悬液以相应的比例混合，即得菌剂；
优选地，所述步骤5)还包括将所述黄孢原毛平革菌孢子悬液、康氏木霉孢子悬液、黑曲霉孢子悬液和无花果曲霉孢子悬液调整至以孢子/ml计的相同的浓度；更优选地，所述黄孢原毛平革菌孢子悬液、康氏木霉孢子悬液、黑曲霉孢子悬液和无花果曲霉孢子悬液以体积比1：1：1：1混匀。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤4)中过滤是将孢子溶液通过8层纱布实现的。
4.如权利要求2或3所述的方法，其特征在于，步骤5)中孢子悬液的浓度为1×106个孢子/ml。
5.如权利要求2～4中任一项所述的方法，其特征在于，步骤5)所述菌剂为干燥后密封的干粉菌剂；优选为通过真空冷冻干燥处理获得。
6.一种醋糟发酵的方法，其特征在于，所述方法包括：
a)以g：ml计将比例为3：7的醋糟与矿物元素培养液混匀，得到醋糟固体培养基；
其中，所述矿物元素培养液以去离子水为溶剂，含有2g/L、NaNO3 2g/L、KH2PO4 1.5g/L、CaCl2 0.3g/L、MgSO4·7H2O 0.3g/L、FeSO4·7H2O 0.005g/L、MnSO4·H2O 0.0016g/L、ZnSO4·7H2O 0.0014g/L、CoCl2·6H2O 0.0005g/L，并且所述矿物元素培养液通过5M NaOH和1MHCl将pH值调整的为6；
b)向步骤a)所述的醋糟固体培养基中加入相当于醋糟质量的1％的尿素，混匀；
c)向经步骤b)处理的醋糟固体培养基中加入相当于醋槽质量的0.03％的MnSO4·H2O，混匀，进行灭菌处理并冷却；
d)向经步骤c)处理的醋糟固体培养基中加入如权利要求1所述的菌剂，以25℃发酵培养5天。
7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤d)中，菌剂的加入量为第30g醋糟对应的加入4×106个孢子的菌剂。
8.如权利要求6或7所述的方法，其特征在于，当所述菌剂为干粉状态时，以无菌生理盐水复溶制备孢子悬液；优选地，孢子悬液的浓度为4×106个孢子/ml。
9.一种根据权利要求6～8中任一项所述的方法得到的发酵产物，其特征在于，所述发酵产物经真空冷冻干燥处理，冷冻干燥处理的时间为48小时；优选地，所述发酵产物经冷冻干燥后，粉碎并密封装袋。
10.如权利要求9所述的发酵产物在制备饲料中的应用；优选地，所述饲料选自家禽饲料、家畜饲料、水产饲料。
CN201610265908.4A 2016-04-26 2016-04-26 一种复合微生物菌剂及其制备方法和应用 Pending CN105969669A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610265908.4A CN105969669A (zh) 2016-04-26 2016-04-26 一种复合微生物菌剂及其制备方法和应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610265908.4A CN105969669A (zh) 2016-04-26 2016-04-26 一种复合微生物菌剂及其制备方法和应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN105969669A true CN105969669A (zh) 2016-09-28

Family

ID=56993177

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610265908.4A Pending CN105969669A (zh) 2016-04-26 2016-04-26 一种复合微生物菌剂及其制备方法和应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN105969669A (zh)

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107083332A (zh) * 2017-03-02 2017-08-22 天水弘旭食品有限公司 一种黑曲霉zm‑8菌株混合菌剂及醋糟生产蛋白饲料的方法
CN107619793A (zh) * 2017-11-08 2018-01-23 青岛农业大学 一种从无花果中筛选的曲霉
CN107712416A (zh) * 2017-11-18 2018-02-23 林州亚太兴牧科技有限公司 一种蛋鸡生物发酵饲料及其制备方法
CN108383611A (zh) * 2018-04-19 2018-08-10 赵建平 一种有机花卉肥的制备方法
CN108813109A (zh) * 2018-09-10 2018-11-16 黑龙江八农垦大学 一种复合真菌发酵秸秆饲料及其制备方法
CN115725085A (zh) * 2022-11-29 2023-03-03 无锡马盛环境能源科技有限公司 一种微生物协同分离纯化木质素的方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101993860A (zh) * 2009-08-14 2011-03-30 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 一种以醋糟为原料固体发酵生产植酸酶的培养基及方法
CN102174398A (zh) * 2010-12-14 2011-09-07 北京沃土天地生物科技有限公司 用于玉米秸秆还田的复合微生物菌剂及其制备方法和用途

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101993860A (zh) * 2009-08-14 2011-03-30 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 一种以醋糟为原料固体发酵生产植酸酶的培养基及方法
CN102174398A (zh) * 2010-12-14 2011-09-07 北京沃土天地生物科技有限公司 用于玉米秸秆还田的复合微生物菌剂及其制备方法和用途

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
崔耀明: "山西老陈醋醋糟混菌发酵菌种筛选及其发酵条件优化", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库工程科技I辑》 *
段钢: "《酶制剂在大宗生化品生产中的应用》", 31 January 2014 *

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107083332A (zh) * 2017-03-02 2017-08-22 天水弘旭食品有限公司 一种黑曲霉zm‑8菌株混合菌剂及醋糟生产蛋白饲料的方法
CN107619793A (zh) * 2017-11-08 2018-01-23 青岛农业大学 一种从无花果中筛选的曲霉
CN107712416A (zh) * 2017-11-18 2018-02-23 林州亚太兴牧科技有限公司 一种蛋鸡生物发酵饲料及其制备方法
CN108383611A (zh) * 2018-04-19 2018-08-10 赵建平 一种有机花卉肥的制备方法
CN108813109A (zh) * 2018-09-10 2018-11-16 黑龙江八农垦大学 一种复合真菌发酵秸秆饲料及其制备方法
CN115725085A (zh) * 2022-11-29 2023-03-03 无锡马盛环境能源科技有限公司 一种微生物协同分离纯化木质素的方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN105969669A (zh) 一种复合微生物菌剂及其制备方法和应用
CN103113167B (zh) 一种复合型微生物有机肥及其制备方法
CN106222114B (zh) 高效降解豆粕抗原蛋白的芽孢杆菌及菌酶混合发酵的方法
CN102987140B (zh) 一种利用有益菌和植物纤维生产反刍动物新型饲料的方法
CN102783561B (zh) 一种节粮型生物秸秆饲料的制备方法
CN103910547B (zh) 食用菌培养基及其制备方法和食用菌培养方法
CN103098981B (zh) 一种提高柑橘渣饲料蛋白水平的脱水固态组合菌剂及其制作方法
CN101914445B (zh) 土著益生微生物固体菌剂及其制备方法和应用
CN102972635A (zh) 一种利用益生菌和杂粕生产微生物饲料添加剂的方法
CN103396973B (zh) 一种通过微生物发酵餐厨垃圾生产菌体蛋白饲料的方法
CN111718879B (zh) 一种发酵罗汉果渣及其制备方法与应用
CN102174423B (zh) 一种降解秸秆的地衣芽孢杆菌ch15及其菌剂
CN106119171A (zh) 一种作物秸秆饲料发酵的微生物配方及其发酵工艺
CN102286413B (zh) 一种苏云金杆菌液态发酵培养基的制备方法
CN105053537A (zh) 一种以橘皮渣为原料的高蛋白饲料的生产方法及饲料
CN102488087A (zh) 一种茶籽饼粕的生物脱毒方法
CN106173204A (zh) 一种以柠檬酸玉米淀粉渣和菌丝渣为基料发酵制备高蛋白饲料的方法
CN108208347A (zh) 一种降低棉秆中纤维含量的酶菌混合物和方法
CN103420712B (zh) 一种毛木耳栽培料配伍及此栽培料的制作方法
CN103555592A (zh) 米曲霉菌株及其孢子粉的制备方法
CN104962492A (zh) 一种解淀粉芽孢杆菌及其固态菌剂的制备方法与应用
CN104872379B (zh) 一种在玉米-豆粕型日粮中添加鱼溶浆的发酵物及其发酵方法
CN102943049B (zh) 一种固体发酵生产白地霉培养物的工艺
CN103750011B (zh) 一种含有纤维素酶的乳仔猪专用复合酶及其制备方法
CN108077559A (zh) 一种微生物发酵饲料及其制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20160928

RJ01 Rejection of invention patent application after publication