CN105960398A - 5-联苯-4-杂芳基羰基氨基-戊酸衍生物作为脑啡肽酶抑制剂 - Google Patents

5-联苯-4-杂芳基羰基氨基-戊酸衍生物作为脑啡肽酶抑制剂 Download PDF

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梅丽莎·弗勒里
安妮-玛丽·博索利尔
亚当·D·休斯
丹尼尔·D·朗
唐娜·A·A·威尔顿
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Theravance Biopharma R&D IP LLC
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Abstract

在一个方面，本发明涉及具有式(I)的化合物：其中R1、R2a、R2b和R3‑R6如说明书中所定义，或其药学上可接受的盐。这些化合物具有脑啡肽酶抑制活性。在另一个方面中，本发明涉及包含这些化合物的药物组合物；使用这些化合物的方法；以及用于制备这些化合物的方法和中间物。

Description

5-联苯-4-杂芳基羰基氨基-戊酸衍生物作为脑啡肽酶抑制剂
技术领域
本发明涉及具有脑啡肽酶抑制活性的新颖化合物。本发明还涉及包含这些化合物的药物组合物；用于制备这些化合物的方法和中间物；以及使用这些化合物来治疗如高血压、心脏衰竭、肺高血压以及肾病的疾病的方法。
背景技术
脑啡肽酶(中性内肽酶，EC 3.4.24.11)(NEP)是在许多器官和组织，包括大脑、肾脏、肺脏、胃肠道、心脏以及外周脉管系统中发现的内皮膜结合Zn2+金属肽酶。NEP使如脑啡肽、循环缓激肽、血管紧张素肽以及利钠肽的多种内源性肽降解并且失活，其中后者具有数种作用，包括例如血管扩张和利钠/利尿以及抑制心脏肥大和心室纤维化。因此，NEP在血压稳态和心血管健康方面发挥重要作用。
已研究NEP抑制剂，如塞奥芬(thiorphan)、坎沙曲(candoxatril)以及坎沙曲拉(candoxatrilat)作为潜在治疗剂。还已知抑制NEP和血管紧张素-I转化酶(ACE)两者的化合物，并且其包括奥马曲拉(omapatrilat)、杰帕曲拉(gempatrilat)以及山帕曲拉(sampatrilat)。被称为血管肽酶抑制剂的这后一类化合物描述于罗伯尔(Robl)等人(1999)治疗术专利专家评论(Exp.Opin.Ther.Patents)9(12):1665-1677中。
然而，尽管有这些化合物，仍然需要具有改进的效力、不同代谢和裂解特性和/或具有改进的经口吸收的NEP抑制剂。本发明是关于所述需要。
发明内容
本发明提供已发现具有脑啡肽酶(NEP)酶抑制活性的新颖化合物。因此，预期本发明化合物适用作并且宜用作治疗如高血压和心脏衰竭的病况的治疗剂。
本发明的一个方面涉及式I化合物：
其中：
R1是H、-C1-8烷基、-CH(CH3)OC(O)-O-环己基、-(CH2)2-吗啉基或-CH2-5-甲基-[1,3]间二氧杂环戊烯-2-酮；
R2a是-C1-2烷基且R2b是-C0-2亚烷基-NH2、-C(O)NH2、-COOH、-CH2-O-C1-6烷基、-CN或吡啶；或R2a是-CH2OH且R2b是-CH2CH3、-(CH2)2CH3、-C1-2亚烷基-OH、-(CH2)2NH2、-(CH2)2-NHC(O)CH3或-CH2CH＝CH2；或R2a和R2b结合在一起以形成-O-(CH2)2-、-(CH2)2-O-CH2-、-CH2-NH-CH2-、-NH-(CH2)2-、-(CH2)-NH-(CH2)2-或-(CH2)-N[C(O)CH3]-(CH2)2-；
R3、R4以及R5独立地是H或卤基；且
R6是选自由以下组成的群组的杂环：3H-噁唑-2-酮、[1,2,4]噁二唑-5-酮、[1,2,3,5]噁三唑、[1,2,4]三唑并[1,5-α]吡啶、三唑、吡唑、咪唑、噁唑、异噁唑、异噻唑、吡啶、噁二唑和嘧啶；所述杂环在碳原子处连接；且所述杂环中的每个氮原子未经取代或经选自由以下组成的群组的R60基团取代：-OH、-(CH2)2OH、-C0-2亚烷基-O-C1-6烷基、-C1-6烷基、-CHF2和-CF3；且所述杂环中的每个碳原子未经取代或经独立地选自由以下组成的群组的R61基团取代：卤基、-OH、-C1-6烷基、-C0-2亚烷基-O-C1-6烷基、-C(O)CH3、-C(O)NH(CH3)、-C(O)N(CH3)2、-C3-6环烷基、-CF3、-CH2SO2CH3、-NH2、-CH2NH2、-CH2N(CH3)2以及经甲基或卤基取代的苯基；
其限制条件为当R2a是-CH3且R2b是-CH2-O-C1-6烷基时，则R6不为未经取代的3H-噁唑-2-酮；未经取代的[1,2,3]三唑；经选自由以下组成的群组的R60基团取代的[1,2,3]三唑：-OH、-C0-2亚烷基-O-C1-6烷基和-C1-6烷基；经选自由以下组成的群组的R61基团取代的[1,2,4]三唑：卤基和-OH；经作为-C1-6烷基的R60基团取代的吡唑；经选自由以下组成的群组的R61基团取代的吡唑：-OH、-C1-6烷基、-C0-2亚烷基-O-C1-6烷基和-C(O)CH3；或经选自由以下组成的群组的R61基团取代的异噁唑：-OH、-C1-6烷基和-C0-2亚烷基-O-C1-6烷基；
或其药学上可接受的盐。
本发明的另一个方面涉及包含药学上可接受的载剂和本发明化合物的药物组合物。此类组合物可以任选地含有其它治疗剂。
本发明化合物具有NEP酶抑制活性，并且因此预期适用作治疗剂用于治疗患有通过抑制NEP酶或通过提高其肽底物水平来治疗的疾病或病症的患者。因此，本发明的一个方面涉及一种治疗患有通过抑制NEP酶治疗的疾病或病症的患者的方法，其包含向患者投与治疗有效量的本发明化合物。本发明的另一个方面涉及一种治疗高血压、心脏衰竭或肾病的方法，其包含向患者投与治疗有效量的本发明化合物。本发明的再一个方面涉及一种在哺乳动物中抑制NEP酶的方法，其包含向哺乳动物投与NEP酶抑制量的本发明化合物。
因为本发明化合物具有NEP抑制活性，其还适用作研究工具。因此，本发明的一个方面涉及一种使用本发明化合物作为研究工具的方法，所述方法包含使用本发明化合物进行生物分析。本发明化合物还可以用于评估新颖的化合物。因此，本发明的另一个方面涉及一种在生物分析中评估测试化合物的方法，其包含：(a)用测试化合物进行生物分析以提供第一分析值；(b)用本发明化合物进行生物分析以提供第二分析值；其中步骤(a)在步骤(b)之前、之后或与步骤(b)同时进行；以及(c)比较来自步骤(a)的第一分析值与来自步骤(b)的第二分析值。示例性生物分析包括NEP酶抑制分析。本发明的再一个方面涉及一种研究包含NEP酶的生物系统或样品的方法，所述方法包含：(a)使生物系统或样品与本发明化合物接触；以及(b)测定由所述化合物对所述生物系统或样品所造成的影响。
本发明的又一个方面涉及适用于制备本发明化合物的方法和中间物。因此，本发明的另一个方面涉及制备式I化合物的方法，其包含以下步骤：使式1化合物与式2化合物偶合：
以产生式I化合物；其中P1是H或选自由以下组成的群组的氨基保护基：叔丁氧基羰基、三苯甲基、苯甲氧基羰基、9-芴基甲氧基羰基、甲酰基、三甲基硅烷基以及叔丁基二甲基硅烷基；并且其中当P1是氨基保护基时，所述方法进一步包含使式1化合物去保护；并且其中R1、R2a、R2b和R3-R6如针对式I所定义。在其它方面中，本发明涉及通过本文所描述的任何方法制备的产物，以及此类方法中所使用的新颖中间物。在本发明的一个方面中，新颖中间物具有如本文所定义的式1，或其盐。
本发明的又一个方面涉及式I化合物或其药学上可接受的盐的用途，其用于制造药剂，尤其用于制造适用于治疗高血压、心脏衰竭或肾病的药剂。本发明的另一个方面涉及本发明化合物的用途，其用于抑制哺乳动物中的NEP酶。本发明的再一个方面涉及本发明化合物作为研究工具的用途。本文公开本发明的其它方面和实施例。
具体实施方式
当描述本发明的化合物、组合物、方法以及工艺时，除非另外指明，否则以下术语具有以下含义。另外，除非使用的上下文另外明确指示，否则如本文所使用，单数形式“一(a/an)”和“所述”包括相对应的复数形式。术语“包含”、“包括”以及“具有”意图为包括性的并且意指可能存在除所列要素外的额外要素。除非另外指明，否则本文所使用的表示成分的量、特性(如分子量、反应条件等)的所有数值都应理解为在所有情况下都由术语“约”修饰。因此，本文中所阐述的数值是可以取决于本发明设法获得的所需特性而变化的近似值。至少并且不试图将等效物原则的应用限于权利要求书的范围，各数值应至少根据所报告的有效数字并且通过应用一般舍入技术来理解。
术语“烷基”意指可以是直链或支链的单价饱和烃基。除非另外定义，否则此类烷基通常含有1到10个碳原子，并且包括例如-C1-6烷基，其意谓具有1到6个碳原子的烷基，其中碳原子呈任何可接受的构型。代表性烷基包括例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、正己基等。
术语“亚烷基”意指可以是直链或支链的二价饱和烃基。除非另外定义，否则此类亚烷基通常含有0到10个碳原子，并且包括例如-C0-1亚烷基-、-C0-2亚烷基-、-C1-2亚烷基-、-C1-6亚烷基-等。代表性亚烷基包括(举例来说)亚甲基、乙烷-1,2-二基("亚乙基")、丙烷-1,2-二基、丙烷-1,3-二基、丁烷-1,4-二基、戊烷-1,5-二基等。应理解，当亚烷基术语包括零个碳，如-C0-2亚烷基-时，此类术语意图包括不存在碳原子，即，亚烷基不存在，除了连接被亚烷基术语分离的基团的共价键。
术语“环烷基”意指单价饱和碳环烃基。除非另外定义，否则此类环烷基通常含有3到10个碳原子，并且包括例如-C3-5环烷基、-C3-6环烷基和-C3-7环烷基。代表性环烷基包括例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基等。
术语“卤基”意指氟基、氯基、溴基以及碘基。
术语“杂环”意图包括具有单个环或两个稠合环的单价不饱和(芳香族)杂环以及具有单个环或多个缩合环的单价饱和和部分不饱和基团。杂环可以含有3到15个总环原子，其中1到14个是环碳原子(例如-C1-7杂环、-C3-5杂环、-C2-6杂环、-C3-12杂环、-C5-9杂环、-C1-9杂环、-C1-11杂环以及-C1-14杂环)，并且1到4个是选自氮、氧或硫的环杂原子。然而，通常杂环含有3到10个总环原子，其中1到9个是环碳原子，并且1到4个是环杂原子。示例性杂环包括例如-C1-7杂环、-C3-5杂环、-C2-6杂环、-C3-12杂环、-C5-9杂环、-C1-9杂环、-C1-11杂环和-C1-14杂环。示例性杂环包括3H-噁唑-2-酮、4H-[1,2,4]噁二唑-5-酮、[1,2,3,5]噁三唑、三唑、吡唑、噁唑、异噁唑、异噻唑、吡啶、噁二唑和嘧啶。
当杂环描述为“在碳原子处连接”时，其意思指连接点在任何可用碳环原子处。在碳原子处连接的杂环的实例是以下说明的三唑环：
术语“任选地经取代”意指所讨论的基团可以是未经取代的或其可以被取代一次或数次，如1到3次，或1到5次，或1到8次。举例来说，“任选地经”一个或两个卤基或羟基“取代”的杂环可以是未经取代的，或其可以含有一个卤基、一个羟基、两个卤基、两个羟基或一个卤基和一个羟基。一般来说，此类基团可以位于任何可用的原子上，其限制条件是不超过指定原子的正常原子价并且取代产生稳定部分。此类基团可以指定为在可用的氮原子或可用的碳原子上。
当杂环中的氮原子被描述为“经取代”时，其意思指氮上的氢原子经所选部分替换，其限制条件是不超过氮的正常原子价，并且取代产生稳定环。类似地，当杂环中的氮原子被描述为“未经取代”时，其意思指氢原子在氮上或已经在无取代的情况下满足氮的价数(例如吡啶环中的氮原子)。举例来说，三唑存在三个氮原子。所描述的第一三唑具有所有未经取代的氮原子，因为在无取代的情况下满足了两个氮原子的原子价并且一个氮原子存在氢。另一个方面，所描述的第二三唑在氮原子上经R60基团取代：
存在杂环将不经R60基团取代的情况。举例来说，吡啶存在一个氮原子，但在无取代的情况下满足氮原子的原子价：
类似地，三唑存在两个碳原子，一个形成与化合物的其余部分的连接点。第一三唑具有“未经取代的”碳原子，而第二三唑在碳原子上经R61基团取代，并且第三三唑在碳原子上经R61基团取代并且在氮原子上经R60基团取代：
当杂环中的碳原子被描述为“经取代”时，其意思指碳上的氢原子经所选部分置换，其限制条件是不超过碳的正常原子价，并且取代产生稳定环。类似地，当杂环中的碳原子被描述为“未经取代”时，其意思指氢原子在碳原子上或已经在无取代的情况下满足其原子价(例如4H-[1,2,4]噁二唑-5-酮上的氧代基)。举例来说，吡唑存在三个碳原子，一个形成与化合物的其余部分的连接点，使得其不可用于取代。第一吡唑具有两个“未经取代的”碳原子，而第二吡唑具有第一“未经取代的”碳原子和经R61基团取代的第二碳原子，第三吡唑在两个碳原子上经R61基团(其可以相同或不同；在R61a和R61b描述)取代，并且第四吡唑在两个碳原子上经R61基团取代：
存在杂环将不经R61基团取代的情况。举例来说，尽管4H-[1,2,4]噁二唑-5-酮存在两个碳原子，一个碳原子形成与化合物的其余部分的连接点并且另一个碳原子已经氧代基团取代并且因此不可用于经R61基团取代：
类似地，[1,2,3,5]噁三唑存在一个碳原子，但其形成与化合物的其余部分的连接点：
如本文所使用，短语“式的”或“具有式”或“具有结构”不意图具有限制性并且以与常用术语“包含”相同的方式使用。举例来说，如果描绘一种结构，那么应理解除非另外说明，否则包涵所有立体异构体和互变异构体形式。
术语“药学上可接受的”是指当在本发明中使用时，材料不为生物学上或在其它方面不可接受的。举例来说，术语“药学上可接受的载剂”是指可以并入组合物中并且向患者投与而不引起不可接受的生物效应或以不可接受的方式与组合物的其它组分相互作用的材料。此类药学上可接受的材料典型地符合毒理学和制造测试的所需标准，并且包括由美国食品和药物管理局(U.S.Food and Drug administration)鉴别为适合惰性成分的那些材料。
术语“药学上可接受的盐”意指由碱或酸制备的可接受投与患者(如哺乳动物)的盐(例如对给定剂量方案具有可接受的哺乳动物安全性的盐)。然而，应理解由本发明所涵盖的盐不必需为药学上可接受的盐，如不意图用于向患者投与的中间化合物的盐。药学上可接受的盐可以衍生自药学上可接受的无机碱或有机碱以及药学上可接受的无机酸或有机酸。另外，当式I化合物含有碱性部分(如胺、吡啶或咪唑)和酸性部分(如羧酸或四唑)时，可以形成两性离子，并且包括在如本文所使用的术语“盐”内。衍生自药学上可接受的无机碱的盐包括铵盐、钙盐、铜盐、正铁盐、亚铁盐、锂盐、镁盐、六价锰盐、二价锰盐、钾盐、钠盐以及锌盐等。衍生自药学上可接受的有机碱的盐包括伯胺盐、仲胺盐以及叔胺盐，包括经取代的胺、环状胺、天然存在的胺等，如精氨酸、甜菜碱、咖啡碱、胆碱、N,N'-二苯甲基乙二胺、二乙胺、2-二乙氨基乙醇、2-二甲氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基吗啉、N-乙基哌啶、还原葡糖胺、葡糖胺、组氨酸、海卓胺(hydrabamine)、异丙胺、赖氨酸、甲基还原葡糖胺、吗啉、哌嗪、哌啶、聚胺树脂、普鲁卡因(procaine)、嘌呤、可可豆碱(theobromine)、三乙胺、三甲胺、三丙胺、缓血酸胺等。衍生自药学上可接受的无机酸的盐包括以下的盐：硼酸、碳酸、氢卤酸(氢溴酸、氢氯酸、氢氟酸或氢碘酸)、硝酸、磷酸、氨基磺酸以及硫酸。衍生自药学上可接受的有机酸的盐包括以下的盐：脂肪族羟基酸(例如柠檬酸、葡萄糖酸、乙醇酸、乳酸、乳糖酸、苹果酸以及酒石酸)、脂肪族单羧酸(例如乙酸、丁酸、甲酸、丙酸以及三氟乙酸)、氨基酸(例如天冬氨酸和谷氨酸)、芳香族羧酸(例如苯甲酸、对氯苯甲酸、二苯基乙酸、龙胆酸、马尿酸以及三苯基乙酸)、芳香族羟基酸(例如邻羟基苯甲酸、对羟基苯甲酸、1-羟基萘-2-甲酸以及3-羟基萘-2-甲酸)、抗坏血酸、二羧酸(例如富马酸、马来酸、草酸以及琥珀酸)、葡萄糖醛酸、扁桃酸、粘液酸、烟碱酸、乳清酸、双羟萘酸、泛酸、磺酸(例如苯磺酸、樟脑磺酸、亚乙基二磺酸、乙磺酸、羟乙基磺酸、甲磺酸、萘磺酸、萘-1,5-二磺酸、萘-2,6-二磺酸以及对甲苯磺酸)、辛那酸(xinafoic acid)等。
术语“治疗有效量”意指在向有需要的患者投与时足以实现治疗的量，即，获得所需治疗效果所需要的药物量。举例来说，用于治疗高血压的治疗有效量是例如减轻、抑制、消除或预防高血压的症状或治疗高血压的潜在病因所需要的化合物量。在一个实施例中，治疗有效量是降低血压所需的药物量或维持正常血压所需的药物量。在另一个方面中，术语“有效量”意指足以获得所需结果(可以不必为治疗结果)的量。举例来说，当研究包含NEP酶的系统时，“有效量”可以是抑制所述酶所需的量。
如本文所使用的术语“治疗(treating/treatment)”意指治疗患者(如哺乳动物，尤其人类)中的疾病或医学病况(如高血压)，其包括以下一或多者：(a)预防疾病或医学病况出现，即，预防疾病或医学病况复发或预防性治疗易患所述疾病或医学病况的患者；(b)改善疾病或医学病况，即，消除患者中的疾病或医学病况或使所述疾病或医学病况消退；(c)抑制疾病或医学病况，即，减缓或阻止患者中疾病或医学病况的发展；或(d)减轻患者中的疾病或医学病况的症状。举例来说，术语“治疗高血压”将包括预防高血压出现、改善高血压、抑制高血压以及减轻高血压的症状(例如降低血压)。术语“患者”意图包括需要治疗或疾病预防，或目前正针对疾病预防进行治疗或治疗特定疾病或医学病况的那些哺乳动物(如人类)，以及其中对结晶化合物进行评估或用于分析的测试个体(例如动物模型)。
本文所使用的所有其它术语都意图具有相关领域的一般技术人员所理解的其普通含义。
在一个方面，本发明涉及式I化合物：
或其药学上可接受的盐。
如本文所用，术语“本发明化合物”包括由式I涵盖的所有化合物和其物质。类似地，提及给定式的化合物意图包括所有物质。另外，本发明化合物还可以含有数个碱性或酸性基团(例如，氨基或羧基)，并且因此，此类化合物可以游离碱、游离酸或各种盐形式存在。所有此类盐形式都包括在本发明的范围内。此外，本发明化合物还可以前药形式存在。因此，本领域的技术人员应认识到，除非另外指明，否则本文中提及化合物，例如提及“本发明化合物”或“式I化合物”包括式I化合物以及药学上可接受的盐和所述化合物的前药。此外，术语“或其药学上可接受的盐和/或前药”意图包括盐和前药的所有排列，如前药的药学上可接受的盐。此外，式I化合物的溶剂合物包括在本发明的范围内。
本发明化合物含有一或多个手性中心，并且因此，这些化合物可以各种立体异构形式制备和使用。在一些实施例中，为了优化本发明化合物的治疗活性，例如以治疗高血压，可能需要碳原子具有特定(R,R)、(S,S)、(S,R)或(R,S)构型或富集在具有此类构型的立体异构形式中。在其它实施例中，本发明化合物以外消旋混合物形式存在。因此，除非另外指明，否则本发明还涉及外消旋混合物、纯立体异构体(例如对映异构体和非对映异构体)、富含立体异构体的混合物等。当在本文中描绘无任何立体化学的化学结构时，应理解此类结构包涵所有可能的立体异构体。因此，举例来说，术语“式I化合物”意图包括化合物的所有可能的立体异构体。类似地，当在本文中显示或命名特定立体异构体时，所属领域的技术人员应理解，除非另外指明，否则本发明组合物中可能存在少量其它立体异构体，其限制条件是组合物整体的效用不因此类其它异构体的存在而消除。单独的立体异构体可以通过本领域中熟知的诸多方法来获得，包括使用适合手性固定相或载体的手性色谱；或通过将其化学转化为非对映异构体，通过常规手段(如色谱或再结晶)分离所述非对映异构体，接着再生初始立体异构体来获得。
另外，除非另外说明，否则在适用情况下，本发明化合物的所有顺-反或E/Z异构体(几何异构体)、互变异构形式以及拓扑异构形式都包括在本发明的范围内。举例来说，如果三唑被描绘为以下(R60是氢)：
应了解化合物还可以互变异构形式存在，如：
并且本发明涵盖所有此类形式。
本发明化合物以及用于其合成的那些化合物还可以包括经同位素标记的化合物，即，其中一或多个原子已用原子质量不同于自然界中主要所见的原子质量的原子增浓。可以并入式I化合物中的同位素的实例例如包括(但不限于)2H、3H、13C、14C、15N、18O、17O、35S、36Cl以及18F。尤其受关注的是富含氚或碳-14的式I化合物，其可以用于例如组织分布研究；富含氘(尤其在代谢位点处)的本发明化合物，其产生例如具有较大代谢稳定性的化合物；以及富含正电子发射同位素(如11C、18F、15O以及13N)的式I化合物，其可以用于例如正电子发射断层摄影(PET)研究中。
本文中用于命名本发明化合物的命名法在本文的实例中进行说明。这种命名法使用市售AutoNom软件(加利福尼亚州圣莱安德罗市的MDL(MDL,San Leandro,California))得到。
代表性实施例
以下取代基和值意图提供本发明的各种方面和实施例的代表性实例。这些代表性值意图进一步定义并且说明此类方面和实施例，并且并不意图排除其它实施例或限制本发明的范围。在这点上，除非明确指示，否则特定值或取代基是优选的表述并不意图以任何方式从本发明排除其它值或取代基。
在一个方面，本发明涉及式I化合物：
R1选自由以下组成的群组：H、-C1-8烷基、-CH(CH3)OC(O)-O-环己基、-(CH2)2-吗啉基以及-CH2-5-甲基-[1,3]间二氧杂环戊烯-2-酮。在一个实施例中，R1是H。在一个实施例中，R1是-C1-8烷基，例如-CH2CH3、-CH(CH3)2、-(CH2)3CH3以及-(CH2)5CH3。当R1是-C1-8烷基时，式I化合物可以称为烷基酯，例如乙酯。在一个实施例中，R1是-CH(CH3)OC(O)-O-环己基。
并且式I化合物可以称为沙坦西酯(cilexetil ester)。在另一个实施例中，R1是-(CH2)2-吗啉基：
并且式I化合物可以称为2-N-吗啉基乙基或吗乙酯(mofetil ester)。在又一个实施例中，R1是-CH2-5-甲基-[1,3]间二氧杂环戊烯-2-酮：
并且式I化合物可以称为美度米酯(medoxomil ester)。
R2a是-C1-2烷基且R2b是-C0-2亚烷基-NH2、-C(O)NH2、-COOH、-CH2-O-C1-6烷基、-CN或吡啶；或R2a是-CH2OH且R2b是-CH2CH3、-(CH2)2CH3、-C1-2亚烷基-OH、-(CH2)2NH2、-(CH2)2-NHC(O)CH3或-CH2CH＝CH2；或R2a和R2b结合在一起以形成-O-(CH2)2-、-(CH2)2-O-CH2-、-CH2-NH-CH2-、-NH-(CH2)2-、-(CH2)2-NH-CH2-或-(CH2)2-N(C(O)CH3)-CH2-。
在一个实施例中，R2a是-C1-2烷基且R2b是-C0-2亚烷基-NH2(例如-NH2、-CH2NH2和-(CH2)2NH2)、-C(O)NH2、-COOH、-CH2-O-C1-6烷基(例如-CH2-O-CH3或-CH2-O-CH2CH3)、-CN或吡啶。R2b吡啶基团的实例包括：
在更特定实施例中，R2a是-CH3且R2b是-NH2、-CH2NH2、-C(O)NH2、-COOH、-CH2-O-CH3、-CH2-O-CH2CH3或-CN；或R2a是-CH2CH3且R2b是-CN。
在另一实施例中，R2a是-CH2OH且R2b是-CH2CH3、-(CH2)2CH3、-C1-2亚烷基-OH(例如-(CH2)2-OH)、-(CH2)2NH2、-(CH2)2-NHC(O)CH3或-CH2CH＝CH2。
在再另一实施例中，R2a和R2b结合在一起以形成-O-(CH2)2-、-(CH2)2-O-CH2-、-CH2-N-CH2-、-N-(CH2)2-、-(CH2)-NH-(CH2)2-或-(CH2)-N[C(O)CH3]-(CH2)2-。
R3选自由H和卤基组成的群组，并且在一个实施例中，R3是H。R4选自由H和卤基组成的群组，并且在一个实施例中，R4是F。R5选自由H和卤基组成的群组，并且在一个实施例中，R5是H、Br或Cl，并且在另一实施例中，R5是Cl。在其它实施例中，R3是H，R4是F，并且R5是Cl；或R3和R4是H并且R5是Br或Cl；或R3、R4以及R5是H；或R3是Cl，R4是F，并且R5是Cl；或R3是H，R4是F，并且R5是H。
R6是选自由以下组成的群组的杂环：3H-噁唑-2-酮、[1,2,4]噁二唑-5-酮、[1,2,3,5]噁三唑、[1,2,4]三唑并[1,5-α]吡啶、三唑、吡唑、咪唑、噁唑、异噁唑、异噻唑、吡啶、噁二唑和嘧啶，其中所述杂环在碳原子处连接。然而，当R2a是-CH3且R2b是-CH2-O-C1-6烷基时，则R6不为未经取代的3H-噁唑-2-酮；未经取代的[1,2,3]三唑；经选自由以下组成的群组的R60基团取代的[1,2,3]三唑：-OH、-C0-2亚烷基-O-C1-6烷基和-C1-6烷基；经选自由以下组成的群组的R61基团取代的[1,2,4]三唑：卤基和-OH；经作为-C1-6烷基的R60基团取代的吡唑；经选自由以下组成的群组的R61基团取代的吡唑：-OH、-C1-6烷基、-C0-2亚烷基-O-C1-6烷基和-C(O)CH3；或经选自由以下组成的群组的R61基团取代的异噁唑：-OH、-C1-6烷基和-C0-2亚烷基-O-C1-6烷基。
在一个实施例中，R6是3H-噁唑-2-酮、4H-[1,2,4]噁二唑-5-酮、[1,2,3,5]噁三唑、[1,2,3]三唑、[1,2,4]三唑、吡唑、咪唑、噁唑、异噁唑、异噻唑、吡啶、噁二唑或嘧啶；且在一个具体实施例中，R6是4H-[1,2,4]噁二唑-5-酮、[1,2,3]三唑、[1,2,4]三唑、吡唑、噁唑、吡啶或嘧啶。
杂环中的每个氮原子未经取代或经选自由以下组成的群组的R60基团取代：-OH、-(CH2)2OH、-C0-2亚烷基-O-C1-6烷基(例如-OCH3或-OCH2CH3)、-C1-6烷基(例如-CH3)、-CHF2和-CF3。在一个实施例中，杂环中的氮原子是未经取代的。在另一实施例中，R60是-OH、-(CH2)2OH、-OCH3、-OCH2CH3、-CH3、-CHF2和-CF3；且在另一实施例中，杂环中的一个氮原子经R60部分取代。在一个具体实施例中，R60是-(CH2)2OH、-OCH3、-OCH2CH3或-CHF2。
杂环中的每个碳原子未经取代或经独立地选自由以下组成的群组的R61基团取代：卤基、-OH、-C1-6烷基、-C0-2亚烷基-O-C1-6烷基、-C(O)CH3、-C(O)NH(CH3)、-C(O)N(CH3)2、-C3-6环烷基(例如环丙基、环丁基、环戊基和环己基)、-CF3、-CH2SO2CH3、-NH2、-CH2NH2、-CH2N(CH3)2以及经甲基取代的苯基。在一个实施例中，杂环中的碳原子未经取代；并且在另一个实施例中，杂环中的一个碳原子经R61基团取代。在另一实施例中，R61是氯、-OH、-CH3、-CH2CH3、-(CH2)2CH3、-CH(CH3)2、-OCH3、-OCH2CH3、-CH2-OCH3、-C(O)CH3、-C(O)NH(CH3)、-C(O)N(CH3)2、环丙基、-CF3、-CH2SO2CH3、-NH2、-CH2NH2、-CH2N(CH3)2或经甲基或氟取代的苯基。在另一实施例中，杂环中的两个碳原子经可相同或不同的R61基团取代；且在一个特定实施例中，第一碳上的R61部分是氟、-OH、-CH3、-C0-2亚烷基-O-C1-6烷基、-C(O)CH3、-C3-6环烷基、-CF3、-CH2SO2CH3、-NH2或-CH2N(CH3)2，且第二碳上的R61部分是卤基、-OH、-CH3、-O-CH2CH3、-C(O)CH3、环丙基、-CF3、-CH2SO2CH3、-NH2、-CH2N(CH3)2或经甲基或卤基取代的苯基。在一个具体实施例中，R61是氯、-CH3、-C(O)CH3、环丙基或-CF3。
在一个实施例中，R6是3H-噁唑-2-酮，例如：
在一个实施例中，R6是[1,2,4]噁二唑-5-酮，例如4H-[1,2,4]噁二唑-5-酮或2H-[1,2,4]噁二唑-5-酮：
在一个实施例中，R6是[1,2,3,5]噁三唑，例如：
在一个实施例中，R6是[1,2,4]三唑并[1,5-α]吡啶，例如：
在一个具体实施例中，R6是[1,2,4]三唑并[1,5-α]吡啶环，如：
其特定实例包括：
在一个实施例中，R6是[1,2,3]三唑或[1,2,4]三唑，例如：
其特定实例包括：
在一个具体实施例中，R6是三唑环，如：
其特定实例包括：
在一个实施例中，R6是吡唑环，例如：
在一个具体实施例中，R6是吡唑环，如：
其特定实例包括：
在一个实施例中，R6是咪唑环，例如：
在一个具体实施例中，R6是咪唑环，如：
其特定实例包括：
在一个实施例中，R6是噁唑环，例如：
在一个具体实施例中，R6是噁唑环，如：
其特定实例包括：
在一个实施例中，R6是异噁唑环，例如：
在一个具体实施例中，R6是异噁唑环，如：
其特定实例包括：
在一个实施例中，R6是异噻唑环，例如：
在一个具体实施例中，R6是异噻唑环，如：
其特定实例包括：
在一个实施例中，R6是吡啶环，例如：
在一个具体实施例中，R6是吡啶环，如：
其特定实例包括：
在一个实施例中，R6是噁二唑，例如[1,2,4]噁二唑或[1,3,4]噁二唑：
在一个实施例中，R6是嘧啶环，例如：
在本发明的另一实施例中，R2a是-CH3且R2b是-C0-2亚烷基-NH2、-C(O)NH2或-COOH；或R2a是-CH2OH且R2b是-CH2CH3、-(CH2)2CH3、-C1-2亚烷基-OH、-(CH2)2NH2、-(CH2)2-NHC(O)CH3或-CH2CH＝CH2；或R2a和R2b结合在一起以形成-O-(CH2)2-、-(CH2)2-O-CH2-、-CH2-N-CH2-、-N-(CH2)2-、-(CH2)-NH-(CH2)2-或-(CH2)-N(COOH)-(CH2)2-；R6是选自由以下组成的群组的杂环：3H-噁唑-2-酮、[1,2,4]噁二唑-5-酮、[1,2,3,5]噁三唑、[1,2,4]三唑并[1,5-α]吡啶、三唑、吡唑、咪唑、噁唑、异噁唑、异噻唑、吡啶、噁二唑和嘧啶；所述杂环在碳原子处连接；且所述杂环中的每个氮原子未经取代或经选自由以下组成的群组的R60基团取代：-OH、-(CH2)2OH、-C0-2亚烷基-O-C1-6烷基、-C1-6烷基、-CHF2和-CF3；且所述杂环中的每个碳原子未经取代或经独立地选自由以下组成的群组的R61基团取代：卤基、-OH、-C1-6烷基、-C0-2亚烷基-O-C1-6烷基、-C(O)CH3、-C(O)NH(CH3)、-C(O)N(CH3)2、-C3-6环烷基、-CF3、-CH2SO2CH3、-NH2、-CH2N(CH3)2以及经甲基或卤基取代的苯基；且R1、R3、R4和R5如对于式I化合物所定义。
在本发明的再另一实施例中，R2a是-CH3且R2b是-CH2-O-C1-6烷基；R6是选自由以下组成的群组的杂环：3H-噁唑-2-酮、[1,2,4]噁二唑-5-酮、[1,2,3,5]噁三唑、[1,2,4]三唑并[1,5-α]吡啶、三唑、吡唑、咪唑、噁唑、异噁唑、异噻唑、吡啶、噁二唑和嘧啶；所述杂环在碳原子处连接；且所述杂环中的每个氮原子未经取代或经选自由以下组成的群组的R60基团取代：-OH、-(CH2)2OH、-C0-2亚烷基-O-C1-6烷基、-C1-6烷基、-CHF2和-CF3；且所述杂环中的每个碳原子未经取代或经独立地选自由以下组成的群组的R61基团取代：卤基、-OH、-C1-6烷基、-C0-2亚烷基-O-C1-6烷基、-C(O)CH3、-C(O)NH(CH3)、-C(O)N(CH3)2、-C3-6环烷基、-CF3、-CH2SO2CH3、-NH2、-CH2N(CH3)2以及经甲基或卤基取代的苯基；其限制条件为R6不为未经取代的3H-噁唑-2-酮；未经取代的[1,2,3]三唑；经选自由以下组成的群组的R60基团取代的[1,2,3]三唑：-OH、-C0-2亚烷基-O-C1-6烷基和-C1-6烷基；经选自由以下组成的群组的R61基团取代的[1,2,4]三唑：卤基和-OH；经作为-C1-6烷基的R60基团取代的吡唑；经选自由以下组成的群组的R61基团取代的吡唑：-OH、-C1-6烷基、-C0-2亚烷基-O-C1-6烷基和-C(O)CH3；或经选自由以下组成的群组的R61基团取代的异噁唑：-OH、-C1-6烷基和-C0-2亚烷基-O-C1-6烷基；且R1、R3、R4和R5如对于式I化合物所定义。
另外，所关注的特定式I化合物包括以下实例中所阐述的那些以及其药学上可接受的盐。
一般合成程序
本发明化合物可以使用以下一般方法、实例中所阐述的程序由易于获得的起始物质制备，或通过使用本领域的一般技术人员已知的其它方法、试剂以及起始物质来制备。尽管以下程序可以说明本发明的特定实施例，但应理解本发明的其它实施例可以使用相同或类似方法，或通过使用本领域的一般技术人员已知的其它方法、试剂以及起始物质来类似地制备。还应了解，当给出典型或优选的工艺条件(例如反应温度、时间、反应物的摩尔比、溶剂、压力等)时，除非另外说明，否则还可以使用其它工艺条件。在一些情况下，在室温下进行反应，并且未进行实际温度测量。应理解，室温可以用来意指在通常与实验室环境中环境温度相关的范围内的温度，并且将通常在约18℃到约30℃范围内。在其它情况下，在室温下进行反应，并且实际测量并且记录温度。虽然最佳反应条件将通常取决于所使用的各种反应参数(如特定反应物、溶剂以及数量)而变化，但本领域的一般技术人员可以使用常规最佳化程序容易地确定适合反应条件。
另外，如本领域的技术人员将显而易见，常规保护基对防止某些官能团经历非所需反应来说是必要或需要的。针对特定官能团选择适合保护基，以及针对此类官能团的保护和去保护选择适合条件和试剂是本领域中熟知的。必要时，可以使用除本文所描述的程序中所说明的那些保护基之外的保护基。举例来说，诸多保护基和其引入和去除描述于T.W.格林(T.W.Greene)和G.M.伍兹(G.M.Wuts)，有机合成中的保护基(Protecting Groupsin Organic Synthesis)，第四版，威立(Wiley),纽约(New York),2006以及其中所列举的参考文献中。
羧基保护基适用于防止羧基处的非所需反应，并且实例包括(但不限于)甲基、乙基、叔丁基、苯甲基(Bn)、对甲氧基苯甲基(PMB)、9-芴基甲基(Fm)、三甲基硅烷基(TMS)、叔丁基二甲基硅烷基(TBDMS)、二苯基甲基(二苯甲基，DPM)等。氨基保护基适用于防止氨基处的非所需反应，并且实例包括(但不限于)叔丁氧基羰基(BOC)、三苯甲基(Tr)、苯甲氧基羰基(Cbz)、9-芴基甲氧基羰基(Fmoc)、甲酰基、三甲基硅烷基(TMS)、叔丁基二甲基硅烷基(TBDMS)等。羟基保护基适用于防止羟基处的非所需反应，并且实例包括(但不限于)C1-6烷基；硅烷基，包括三C1-6烷基硅烷基，如三甲基硅烷基(TMS)、三乙基硅烷基(TES)以及叔丁基二甲基硅烷基(TBDMS)；酯(酰基)，包括C1-6烷酰基，如甲酰基、乙酰基以及特戊酰基，和芳香族酰基，如苯甲酰基；芳基甲基，如苯甲基(Bn)、对甲氧基苯甲基(PMB)、9-芴基甲基(Fm)以及二苯基甲基(二苯甲基，DPM)等。
标准去保护技术和试剂用于去除保护基，并且可以取决于所使用的基团而变化。举例来说，BOC氨基保护基可以使用酸性试剂，如DCM中的TFA或1,4-二噁烷中的HCl去除，而Cbz氨基保护基可以通过采用催化氢化条件，如H2(1atm)和10％于醇溶剂中的Pd/C(“H2/Pd/C”)去除。
用于这些流程的适合碱包括(借助于说明而非限制)碳酸钾、碳酸钙、碳酸钠、三乙胺(Et3N)、吡啶、1,8-二氮杂双环-[5.4.0]十一-7-烯(DBU)、N,N-二异丙基乙胺(DIPEA)、4-甲基吗啉、氢氧化钠、氢氧化钾、叔丁醇钾以及金属氢化物。
用于这些流程的适合惰性稀释剂或溶剂包括(借助于说明而非限制)四氢呋喃(THF)、乙腈(MeCN)、N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、N,N-二甲基乙酰胺(DMA)、二甲亚砜(DMSO)、甲苯、二氯甲烷(DCM)、氯仿(CHCl3)、四氯化碳(CCl4)、1,4-二噁烷、甲醇、乙醇、水、乙醚、丙酮等。
适合羧酸/胺偶合剂包括苯并三唑-1-基氧基三(二甲氨基)鏻六氟磷酸酯(BOP)、苯并三唑-1-基氧基三吡咯烷基鏻六氟磷酸酯(PyBOP)、N,N,N',N'-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)脲六氟磷酸酯(HATU)、1,3-二环己基碳化二亚胺(DCC)、N-(3-二甲基氨基丙基)-N'-乙基碳化二亚胺(EDC)、羰基二咪唑(CDI)、1-羟基苯并三唑(HOBt)等。偶合反应在碱(如DIPEA)存在下于惰性稀释剂中进行，并且在常规酰胺键形成条件下进行。
所有反应通常在约-78℃到100℃范围内的温度下(例如在室温下)进行。反应可以通过使用薄层色谱法(TLC)、高效液相色谱法(HPLC)和/或LCMS监测直到完成。反应可以在几分钟内完成，或可以耗时几小时，通常1-2小时并且长达48小时。在完成后，所得混合物或反应产物可以经进一步处理以获得所需产物。举例来说，所得混合物或反应产物可以经受一或多种以下程序：浓缩或分配(例如在EtOAc与水之间，或在5％于EtOAc中的THF与1M磷酸之间)；萃取(例如用EtOAc、CHCl3、DCM、氯仿)；洗涤(例如用NaCl饱和水溶液、NaHCO3饱和水溶液、Na2CO3(5％)、CHCl3或1M NaOH)；干燥(例如经MgSO4、经Na2SO4或在真空中)；过滤；结晶(例如从EtOAc和己烷)；浓缩(例如在真空中)；和/或纯化(例如硅胶色谱、快速色谱、制备型HPLC、反相HPLC或结晶)。
借助于说明，式I化合物以及其盐可以如流程I和II中所示制备。
流程I
流程I是式1化合物(R1、R2a、R2b和R3-R5如针对式I所定义并且P1是H或适合的氨基保护基)与式2化合物(R6如针对式I所定义)之间的偶合反应。当P1是氨基保护基时，所述方法进一步包含在偶合步骤之前或就地与偶合步骤一起使化合物去保护。示例性偶合试剂包括HATU和HOBt与EDC。一般来说，此反应在碱(如DIPEA或4-甲基吗啉)和惰性稀释剂或溶剂(如DMF或DMA)存在下进行。各种胺起始物质(化合物1)的制备说明于实例中。羧酸起始物质(化合物2)一般市售可得或可以使用所属领域中已知的程序来制备。
流程II
流程II是转酯化反应。一般来说，此反应涉及使式3的酯化合物(R2a、R2b和R3-R6如针对式I所定义)与所需式4醇化合物(R1如针对式I所定义)和适合的酸催化剂(例如盐酸)反应。由酸(式I化合物)制备式3化合物在所属领域中已知或在本文中描述。HO-R1醇市售可得或可以通过所属领域中已知或本文中描述的技术制备。示例性HO-R1基团包括：
本文中描述的某些中间物被认为是新颖的，并且相应地，此类化合物作为本发明的其它方面提供，包括例如式5化合物或其盐：
其中R1和R3-R5如针对式I所定义；R2a是-C1-2烷基且R2b是-C0-2亚烷基-NH2、-C(O)NH2、-COOH、-CN或吡啶；或R2a是-CH2OH且R2b是-CH2CH3、-(CH2)2CH3、-C1-2亚烷基-OH、-(CH2)2NH2、-(CH2)2-NHC(O)CH3或-CH2CH＝CH2；或R2a和R2b结合在一起以形成-O-(CH2)2-、-(CH2)2-O-CH2-、-CH2-NH-CH2-、-NH-(CH2)2-、-(CH2)-NH-(CH2)2-或-(CH2)-N[C(O)CH3]-(CH2)2-；且P1是H或选自由以下组成的群组的氨基保护基：叔丁氧基羰基、三苯甲基、苯甲氧基羰基、9-芴基甲氧基羰基、甲酰基、三甲基硅烷基和叔丁基二甲基硅烷基；或其盐。
关于用于制备本发明的代表性化合物或其中间物的特定反应条件和其它程序的其它细节描述于下文所阐述的实例中。
效用
本发明化合物具有脑啡肽酶(NEP)抑制活性，即，化合物能够抑制酶催化活性。在另一个实施例中，化合物并未展现血管紧张素转化酶的显著抑制活性。化合物抑制NEP活性的能力的一个量度是抑制常数(pKi)。pKi值是解离常数(Ki)的以10为底的负对数，其通常以摩尔单位报告。备受关注的本发明化合物是NEP的pKi大于或等于7.0的那些，并且甚至更尤其是pKi大于或等于8.0的那些；并且在再一个实施例中，所关注的化合物的pKi在大于或等于9.0范围内。此类值可以通过在本领域中是熟知的技术以及本文所描述的分析中测定。
化合物抑制NEP活性的能力的另一个量度是表观抑制常数(IC50)，其是导致通过NEP酶的底物转化的半数最大抑制的化合物的摩尔浓度。pIC50值是IC50的以10为底的负对数。备受关注的本发明化合物包括展现NEP的pIC50大于或等于约7.0的那些。在另一个实施例中，所关注的化合物针对NEP的pIC50在约7.0到10.0范围内。
应注意，在一些情形下，本发明化合物可以具有较弱NEP抑制活性。在此类情形下，本领域的技术人员应认识到，这些化合物作为研究工具仍具有效用。
测定本发明化合物的特性(如NEP抑制活性)的示例性分析描述于实例中，并且包括(借助于说明而非限制)测量NEP抑制的分析(描述于分析1中)。适用的第二分析包括测量ACE抑制(也描述于分析1中)和氨基肽酶P(APP)抑制(描述于苏睿德(Sulpizio)等人(2005)药理学与实验疗法杂志(JPET)315:1306-1313中)的分析。评定麻醉大鼠中的ACE和NEP的体内抑制效能的药效动力学分析描述于分析2中(还参见西摩(Seymour)等人(1985)高血压(Hypertension)7(增刊I):I-35-I-42和维格(Wigle)等人(1992)加拿大生理学药学期刊(Can.J.Physiol.Pharmacol.)70:1525-1528)中，其中ACE抑制测量为血管紧张素I加压响应的抑制百分比，并且NEP抑制测量为增加的泌尿环状鸟苷3',5'-单磷酸(cGMP)的排出量。
许多体内分析可以用于进一步确定本发明化合物的效用。清醒的自发性高血压大鼠(SHR)模型是肾素依赖性高血压模型，并且描述于分析3中。还参见因滕甘(Intengan)等人(1999)循环(Circulation)100(22):2267-2275和拜达尔(Badyal)等人(2003)印度药理学杂志(Indian Journal of Pharmacology)35:349-362。清醒的乙酸去氧皮质酮-盐(DOCA-盐)大鼠模型是体积依赖性高血压模型，其适用于测量NEP活性，并且描述于分析4中。还参见特拉帕尼(Trapani)等人(1989)心血管药理杂志(J.Cardiovasc.Pharmacol.)14:419-424,因滕甘等人(1999)高血压34(4):907-913以及拜达尔等人(2003)同前文献)。DOCA-盐模型尤其适用于评估测试化合物降低血压的能力，以及测量测试化合物预防或延迟血压升高的能力。Dahl盐敏感(DSS)高血压大鼠模型是对膳食盐(NaCl)敏感的高血压模型，并且描述于分析5中。还参见拉普(Rapp)(1982)高血压4:753-763。描述于例如加藤(Kato)等人(2008)心血管药理杂志51(1):18-23中的肺动脉高血压的大鼠野百合碱模型是用于治疗肺动脉高血压的临床功效的可靠预测因子。心脏衰竭动物模型包括用于心脏衰竭的DSS大鼠模型和主动脉-下腔静脉瘘管模型(AV分流)，后者描述于例如诺林(Norling)等人(1996)美国肾脏病学会杂志(J.Amer.Soc.Nephrol.)7:1038-1044中。其它动物模型(如热板、闪尾(tail-flick)以及福尔马林(formalin)测试)以及神经痛的脊神经结扎(SNL)模型可以用于测量本发明化合物的止痛特性。参见例如马尔伯格(Malmberg)等人(1999)神经科学实验室指南(Current Protocols in Neuroscience)8.9.1-8.9.15。化合物的其它特性和效用可以使用所属领域的技术人员熟知的各种体外和体内分析表明。
取决于预期投与途径，口服生物可用性，以及作为脑啡肽酶抑制剂的效能可以是重要特征。一种测量口服生物可用性的方式是通过大鼠PO盒分析，其中F％是实际上进入血流中的口服药物剂量的量的量度；示例性分析描述在分析6中。在此分析中测试并且F％<10％的化合物可能被不佳地吸收。类似地，在此分析中测试并且F％>10％的化合物可能被较好地吸收。因此，F％>10％的本发明化合物作为经口投与药物备受关注。
本发明化合物预期在上文所列的分析中的任一者或具有类似性质的分析中抑制NEP酶。因此，前述分析适用于测定本发明化合物的治疗效用，例如其作为抗高血压剂或止泻剂的效用。本发明化合物的其它特性和效用可以使用本领域的技术人员熟知的其它体外和体内分析表明。式I化合物可以是活性药物以及前药。因此，当论述本发明化合物的活性时，应理解，任何此类前药可以在分析中不展现预期活性，但预期在代谢后展现所需活性。
预期本发明化合物适用于治疗和/或预防响应于NEP抑制的医学病况。因此预期，患有通过抑制NEP酶或通过提高其肽底物水平治疗的疾病或病症的患者可以通过投与治疗有效量的本发明化合物来治疗。举例来说，预期化合物通过抑制NEP来增强由NEP代谢的内源性肽的生物学效应，所述内源性肽如利钠肽、铃蟾素、舒缓素、降血钙素、内皮素、脑啡肽、神经降压素、P物质以及血管活性肠肽。因此，预期这些化合物对例如肾系统、中央神经系统、生殖系统以及胃肠系统具有其它生理作用。
心血管疾病
预期本发明化合物通过增强血管活性肽(如利钠肽和缓激肽)的效应而适用于治疗和/或预防医学病况(如心血管疾病)。参见例如罗克斯(Roques)等人(1993)药理学评论(Pharmacol.Rev.)45:87-146和登普西(Dempsey)等人(2009)美国病理学杂志(Amer.J.ofPathology)174(3):782-796。备受关注的心血管疾病包括高血压和心脏衰竭。高血压包括(以说明的方式而非限制)：原发性高血压，也称为本质性高血压或特发性高血压；继发性高血压；伴随有肾病的高血压；伴随有或不伴随有肾病的重度高血压；肺高血压，包括肺动脉高血压；以及顽固性高血压。心脏衰竭包括(以说明的方式而非限制)：充血性心脏衰竭；急性心脏衰竭；慢性心脏衰竭，例如伴随有左心室射血分数降低的心脏衰竭(也称为收缩性心脏衰竭)或伴随有左心室射血分数保持的心脏衰竭(也称为舒张性心脏衰竭)；以及急性和慢性代偿失调性心脏衰竭。因此，本发明的一个实施例涉及一种用于治疗高血压，尤其原发性高血压或肺动脉高血压的方法，其包含向患者投与治疗有效量的本发明化合物。
对于治疗原发性高血压来说，治疗有效量通常是足以降低患者血压的量。这将包括轻度到中度高血压以及重度高血压。当用于治疗高血压时，化合物可以与其它治疗剂组合投与，所述其它治疗剂如醛固酮拮抗剂、醛固酮合成酶抑制剂、血管紧张素转化酶抑制剂以及双重作用血管紧张素转化酶/脑啡肽酶抑制剂、血管紧张素转化酶2(ACE2)活化剂和刺激剂、血管紧张素-II疫苗、抗糖尿病剂、抗脂质剂、抗血栓形成剂、AT1受体拮抗剂以及双重作用AT1受体拮抗剂/脑啡肽酶抑制剂、β1-肾上腺素受体拮抗剂、双重作用β-肾上腺素受体拮抗剂/α1-受体拮抗剂、钙通道阻断剂、利尿剂、内皮素受体拮抗剂、内皮素转化酶抑制剂、脑啡肽酶抑制剂、利钠肽以及其类似物、利钠肽清除受体拮抗剂、氧化氮供体、非甾族消炎剂、磷酸二酯酶抑制剂(尤其PDE-V抑制剂)、前列腺素受体激动剂、肾素抑制剂、可溶性鸟苷酸环化酶刺激剂和活化剂以及其组合。在本发明的一个特定实施例中，本发明化合物与AT1受体拮抗剂、钙通道阻断剂、利尿剂或其组合组合，并且用于治疗原发性高血压。在本发明的另一个特定实施例中，本发明化合物与AT1受体拮抗剂组合，并且用于治疗伴随有肾病的高血压。当用于治疗顽固性高血压时，所述化合物可以与如醛固酮合成酶抑制剂的其它治疗剂组合投与。
对于治疗肺动脉高血压来说，治疗有效量通常是足以降低肺血管阻力的量。疗法的其它目标是改良患者的运动能力。举例来说，在临床环境中，治疗有效量可以是改善患者舒适步行6分钟的时间段(涵盖约20-40米的距离)的能力的量。当用于治疗肺动脉高血压时，化合物可以与其它治疗剂组合投与，所述其它治疗剂如α-肾上腺素受体拮抗剂、β1-肾上腺素受体拮抗剂、β2-肾上腺素受体激动剂、血管紧张素转化酶抑制剂、抗凝剂、钙通道阻断剂、利尿剂、内皮素受体拮抗剂、PDE-V抑制剂、前列腺素类似物、选择性血清素再吸收抑制剂以及其组合。在本发明的一个特定实施例中，本发明化合物与PDE-V抑制剂或选择性血清素再吸收抑制剂组合，并且用于治疗肺动脉高血压。
本发明的另一个实施例涉及一种用于治疗心脏衰竭，尤其充血性心脏衰竭(包括收缩性和舒张性充血性心脏衰竭)的方法，其包含向患者投与治疗有效量的本发明化合物。通常，治疗有效量是足以降低血压和/或改善肾功能的量。在临床环境中，治疗有效量可以是足以改善心脏血流动力学，例如降低楔压、右心房压、填充压以及血管阻力的量。在一个实施例中，化合物以静脉内剂型投与。当用于治疗心脏衰竭时，化合物可以与其它治疗剂组合投与，所述其它治疗剂如腺苷受体拮抗剂、晚期糖基化终产物裂解剂、醛固酮拮抗剂、AT1受体拮抗剂、β1-肾上腺素受体拮抗剂、双重作用β-肾上腺素受体拮抗剂/α1-受体拮抗剂、凝乳酶抑制剂、地高辛(digoxin)、利尿剂、内皮素转化酶(ECE)抑制剂、内皮素受体拮抗剂、利钠肽以及其类似物、利钠肽清除受体拮抗剂、氧化氮供体、前列腺素类似物、PDE-V抑制剂、可溶性鸟苷酸环化酶活化剂和刺激剂以及血管加压素受体拮抗剂。在本发明的一个特定实施例中，本发明化合物与醛固酮拮抗剂、β1-肾上腺素受体拮抗剂、AT1受体拮抗剂或利尿剂组合，并且用于治疗充血性心脏衰竭。
腹泻
预期本发明化合物作为NEP抑制剂抑制内源性脑啡肽的降解，并且因此，此类化合物还可以适用于治疗腹泻，包括传染性和分泌性/水性腹泻。参见例如鲍默(Baumer)等人(1992)消化道(Gut)33:753-758；法新(Farthing)(2006)消化病(Digestive Diseases)24:47-58；以及马尔赛-科利亚多(-Collado)(1987)欧洲药理学杂志(Eur.J.Pharmacol.)144(2):125-132。当用于治疗腹泻时，本发明化合物可以与一或多种额外止泻剂组合。
肾病
预期本发明化合物通过增强血管活性肽(如利钠肽和缓激肽)的效应来增强肾功能(参见陈(Chen)等人(1999)循环100:2443-2448；利普金(Lipkin)等人(1997)国际肾脏杂志(Kidney Int.)52:792-801；以及杜绍(Dussaule)等人(1993)临床科学(Clin.Sci.)84:31-39)，并且适用于治疗和/或预防肾病。备受关注的肾病包括糖尿病性肾病、慢性肾病、蛋白尿，并且尤其包括急性肾脏损伤(例如由心血管手术、化学疗法或在医学成像中使用造影染料引起)或急性肾衰竭(参见夏克卡(Sharkovska)等人(2011)临床实验室(Clin.Lab.)57:507-515和纽万兹(Newaz)等人(2010)肾衰竭(Renal Failure)32:384-390)。当用于治疗肾病时，化合物可以与其它治疗剂组合投与，所述其它治疗剂如血管紧张素转化酶抑制剂、AT1受体拮抗剂以及利尿剂。
预防性疗法
还预期本发明化合物通过增强利钠肽的效应而适用于预防性疗法，这是由于所述利钠肽的抗肥厚性和抗纤维化性效应(参见波特(Potter)等人(2009)实验药理学手册(Handbook of Experimental Pharmacology)191:341-366)，所述预防性疗法例如在心肌梗塞之后预防心机能不全的进展、在血管成形术之后预防动脉再狭窄、在血管手术之后预防血管壁变厚、预防动脉粥样硬化并且预防糖尿病性血管病。
青光眼
预期本发明化合物通过增强利钠肽的效应而适用于治疗青光眼。参见例如底斯霍斯特(Diestelhorst)等人(1989)国际眼科(International Ophthalmology)12:99-101。当用于治疗青光眼时，本发明化合物可以与一或多种额外抗青光眼剂组合。
疼痛缓解
预期本发明化合物作为NEP抑制剂抑制内源性脑啡肽的降解，并且因此，此类化合物还可以适用作镇痛剂。参见例如罗克斯等人(1980)自然(Nature)288:286-288和珊瓦拉(Thanawala)等人(2008)当代药物目标(Current Drug Targets)9:887-894。当用于治疗疼痛时，本发明化合物可以与一或多种额外止痛药物组合，所述止痛药物如氨基肽酶N或二肽基肽酶III抑制剂、非甾族消炎剂、单胺再吸收抑制剂、肌肉松弛剂、NMDA受体拮抗剂、类鸦片受体激动剂、5-HT1D血清素受体激动剂以及三环抗抑郁剂。
其它效用
还预期本发明化合物由于其NEP抑制特性而适用作止咳剂，以及适用于治疗伴随有肝硬化的门静脉血压过高(参见桑索内(Sansoe)等人(2005)肝病学杂志(J.Hepatol.)43:791-798)、癌症(参见维塞利(Vesely)(2005)研究医学杂志(J.Investigative Med.)53:360-365)、抑郁症(参见诺布尔(Noble)等人(2007)治疗靶标专家评论(Exp.Opin.Ther.Targets)11:145-159)、月经异常、早产、子痫前症、子宫内膜异位症、生殖障碍(例如男性和女性不孕症、多囊性卵巢综合症、着床失败)以及男性和女性性功能障碍，包括男性勃起功能障碍和女性性兴奋障碍。更确切地说，预期本发明化合物适用于治疗女性性功能障碍(参见普芮德(Pryde)等人(2006)药物化学杂志(J.Med.Chem.)49:4409-4424)，其常被定义为女性患者对性表现很难或者不能满意。这涵盖各种不同女性性功能障碍，包括(借助于说明而非限制)减退性性欲障碍、性兴奋障碍、性高潮障碍以及性疼痛障碍。当用于治疗此类病症，尤其女性性功能障碍时，本发明化合物可以与一或多种以下第二药剂组合：PDE-V抑制剂、多巴胺激动剂、雌激素受体激动剂和/或拮抗剂、雄激素以及雌激素。还预期本发明化合物由于其NEP抑制特性而具有消炎特性，并且预期其具有如此效用，尤其在与他汀类(statin)组合使用时。
近期研究表明，NEP在胰岛素缺陷型糖尿病和膳食诱导型肥胖症中起调控神经功能的作用。寇佩(Coppey)等人(2011)神经药理学(Neuropharmacology)60:259-266。因此，还预期本发明化合物由于其NEP抑制特性而适用于针对由糖尿病或膳食诱导型肥胖症造成的神经损伤来提供保护。
本发明化合物每剂投与量或每天投与总量可以预先确定，或其可以基于个别患者，通过考虑诸多因素而加以确定，所述因素包括患者病况的性质和严重程度；所治疗的病况；患者的年龄、重量以及一般健康状况；患者对活性剂的耐受性；投与途径；药理学考虑因素，如所投与的化合物和任何第二药剂的活性、功效、药代动力学以及毒理学概况等。治疗患有疾病或医学病况(如高血压)的患者可以预先确定的剂量或由治疗医师确定的剂量开始，并且将持续预防、改善、抑制或缓解疾病或医学病况的症状所必需的时间段。经历此类治疗的患者将通常受常规监测，以确定疗法的有效性。举例来说，在治疗高血压中，血压测量值可以用于确定治疗的有效性。本文所描述的其它疾病和病况的类似指示为人所熟知，并且容易由治疗医师获得。由医师连续监测将保证在任何给定时间投与最佳量的本发明化合物，以及促进确定治疗的持续时间。因为第二药剂的选择、剂量以及疗法持续时间还可能需要调节，所以当还投与第二药剂时，此监测特别有价值。以此方式，可以在治疗过程中调节治疗方案和给药时程，以投与展现所需有效性的最低量的活性剂，并且此外，投与仅持续只要成功治疗疾病或医学病况所必需的时间长度即可。
研究工具
因为本发明化合物具有NEP酶抑制活性，所以此类化合物还适用作用于调查或研究具有NEP酶的生物系统或样品的研究工具，例如以研究NEP酶或其肽底物在其中发挥作用的疾病。具有NEP酶的任何适合生物系统或样品都可以用于此类研究中，此类研究可以在体外或体内进行。适用于此类研究的代表性生物系统或样品包括(但不限于)细胞、细胞提取物、质膜、组织样品、分离器官、哺乳动物(如小鼠、大鼠、天竺鼠、兔、狗、猪、人类等)等，其中哺乳动物备受关注。在本发明的一个特定实施例中，哺乳动物中的NEP酶活性通过投与NEP抑制量的本发明化合物而受到抑制。本发明化合物还可以通过使用此类化合物进行生物分析来用作研究工具。
当用作研究工具时，通常使包含NEP酶的生物系统或样品与NEP酶抑制量的本发明化合物接触。在将生物系统或样品暴露于化合物之后，使用常规程序和设备(如通过在结合分析中测量受体结合或在功能性分析中测量配体介导的变化)来测定抑制NEP酶的效应。暴露包涵使细胞或组织与化合物接触，例如通过i.p.、p.o、i.v.、s.c.或吸入投与等向哺乳动物投与化合物。这一测定步骤可以涉及测量响应(定量分析)或可以涉及进行观察(定性分析)。测量响应涉及例如，使用常规程序和设备(如酶活性分析)以及在功能性分析中测量酶底物或产物介导的变化，来测定化合物对生物系统或样品的作用。分析结果可以用于确定实现所需结果所必需的化合物的活性程度以及量，即，NEP酶抑制量。通常，确定步骤将涉及测定抑制NEP酶的效应。
另外，本发明化合物可以用作用于评估其它化合物的研究工具，并且因此还适用于筛选分析以发现例如具有NEP抑制活性的新颖化合物。以此方式，本发明化合物在分析中用作标准样品，以比较用测试化合物和本发明化合物所获得的结果以鉴别具有大致相等或优越活性的那些测试化合物(如果存在)。举例来说，将一种测试化合物或一组测试化合物的pKi数据与本发明化合物的pKi数据进行比较，以鉴别具有所需特性的那些测试化合物，例如pKi值约等于或优于本发明化合物的测试化合物(如果存在)。本发明的这一方面包括产生比较数据(使用适当分析)与分析测试数据作为单独实施例来鉴别所关注的测试化合物。因此，可以在生物分析中通过包含以下步骤的方法评估测试化合物：(a)用测试化合物进行生物分析以提供第一分析值；(b)用本发明化合物进行生物分析以提供第二分析值；其中步骤(a)在步骤(b)之前、之后或与步骤(b)同时进行；以及(c)比较来自步骤(a)的第一分析值与来自步骤(b)的第二分析值。示例性生物分析包括NEP酶抑制分析。
本发明的再另一个方面涉及一种研究包含NEP酶的生物系统或样品的方法，所述方法包含：(a)使生物系统或样品与本发明化合物接触；以及(b)测定由所述化合物对所述生物系统或样品所造成的影响。
药物组合物和调配物
本发明化合物通常以药物组合物或调配物形式向患者投与。此类药物组合物可以通过任何可接受的投与途径向患者投与，包括(但不限于)经口、经直肠、经阴道、经鼻、吸入、表面(包括经皮)、经眼以及肠胃外的投与模式。此外，本发明化合物可以每天多次剂量(例如每日两次、三次或四次)，以单次日剂量或以单次周剂量(例如经口)投与。应理解，适用于特定投与模式的本发明化合物的任何形式(即，游离碱、游离酸、药学上可接受的盐、溶剂合物等)都可以用于本文所论述的药物组合物中。
因此，在一个实施例中，本发明涉及一种包含药学上可接受的载剂和本发明化合物的药物组合物。必要时，组合物可以含有其它治疗剂和/或调配剂。当论述组合物时，“本发明化合物”在本文中还可以被称为“活性剂”，以将其与调配物的其它组分(如载剂)进行区分。因此，应理解术语“活性剂”包括式I化合物以及所述化合物的药学上可接受的盐、溶剂合物以及前药。
本发明的药物组合物通常含有治疗有效量的本发明化合物。然而，本领域的技术人员应认识到，药物组合物可以含有大于治疗有效量(如呈大剂量组合物形式)或小于治疗有效量(即，经设计用于多次投与以达成治疗有效量的个别单位剂量)。通常，组合物将含有约0.01wt％到95wt％的活性剂，包括约0.01wt％到30wt％，如约0.01wt％到10wt％，其中实际量取决于调配物本身、投与途径、给药频率等。在一个实施例中，适用于口服剂型的组合物例如可以含有约5wt％到70wt％或约10wt％到60wt％的活性剂。
任何常规的载剂或赋形剂都可以用于本发明的药物组合物中。特定载剂或赋形剂或载剂或赋形剂的组合的选择将取决于正用于治疗特定患者的投与模式或医学病况或疾病病况的类型。在这点上，针对特定投与模式制备适合组合物完全处于医药领域的技术人员的范围内。另外，此类组合物中所使用的载剂或赋形剂是市售的。借助于进一步说明，常规调配物技术描述于雷明顿：医药科学和实践(Remington:The Science and Practice ofPharmacy),第20版,利平科特威廉姆斯和怀特(Lippincott Williams&White),巴尔的摩(Baltimore),马里兰州(Maryland)(2000)；以及H.C.安塞尔(H.C.Ansel)等人,药物剂型和药物递送系统(Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems),第7版,利平科特威廉姆斯和怀特,巴尔的摩,马里兰州(1999)中。
可以用作药学上可接受的载剂的材料的代表性实例包括(但不限于)以下：糖，如乳糖、葡萄糖以及蔗糖；淀粉，如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素，如微晶纤维素和其衍生物，如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素以及乙酸纤维素；粉末状黄蓍胶；麦芽；明胶；滑石；赋形剂，如可可豆油和栓剂蜡；油，如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油以及大豆油；二醇，如丙二醇；多元醇，如甘油、山梨糖醇、甘露糖醇以及聚乙二醇；酯，如油酸乙酯和月桂酸乙酯；琼脂；缓冲剂，如氢氧化镁和氢氧化铝；海藻酸；无热原质水；等渗盐水；林格氏溶液(Ringer's solution)；乙醇；磷酸盐缓冲溶液；压缩推进剂气体，如氯氟碳化物和氢氟碳化物；以及在药物组合物中采用的其它无毒相容物质。
通常通过将活性剂与药学上可接受的载剂和一或多种任选的成分充分并且紧密地混合或掺合来制备药物组合物。所得均匀掺合的混合物可以接着使用常规程序和设备来成形或装入片剂、胶囊、丸剂、罐、筒、分配器等中。
在一个实施例中，药物组合物适用于经口投与。适合用于经口投与的组合物可以呈以下形式：胶囊、片剂、丸剂、口含片、扁囊剂、糖衣药丸、散剂、颗粒剂；在水性或非水性液体中的溶液或悬浮液；水包油或油包水液体乳剂；酏剂或糖浆等；各含有预定量的活性剂。
当意图以固体剂型(胶囊、片剂、丸剂等)用于经口投与时，组合物将通常包含活性剂和一或多种药学上可接受的载剂，如柠檬酸钠或磷酸二钙。固体剂型还可以包含：填充剂或增量剂，如淀粉、微晶纤维素、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇和/或硅酸；粘合剂，如羧甲基纤维素、海藻酸盐、明胶、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和/或阿拉伯胶；保湿剂，如甘油；崩解剂，如琼脂-琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸盐和/或碳酸钠；延迟溶解剂，如石蜡；吸收促进剂，如季铵化合物；湿润剂，如鲸蜡醇和/或单硬脂酸甘油酯；吸附剂，如高岭土和/或膨润土；润滑剂，如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠和/或其混合物；着色剂；以及缓冲剂。
释放剂、湿润剂、包衣剂、甜味剂、调味剂以及芳香剂、防腐剂以及抗氧化剂也可以存在于药物组合物中。用于片剂、胶囊、丸剂等的示例性包衣剂包括用于肠溶包衣的那些，如邻苯二甲酸乙酸纤维素、聚邻苯二甲酸乙酸乙烯酯、邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素、甲基丙烯酸-甲基丙烯酸酯共聚物、偏苯三甲酸乙酸纤维素、羧甲基乙基纤维素、琥珀酸乙酸羟丙基甲基纤维素等。药学上可接受的抗氧化剂的实例包括：水溶性抗氧化剂，如抗坏血酸、半胱氨酸盐酸盐、硫酸氢钠、偏硫酸氢钠、亚硫酸钠等；油溶性抗氧化剂，如棕榈酸抗坏血酸酯、丁基化羟基茴香醚、丁基化羟基甲苯、卵磷脂、没食子酸丙酯、α-生育酚等；以及金属螯合剂，如柠檬酸、乙二胺四乙酸、山梨糖醇、酒石酸、磷酸等。
组合物还可以使用例如不同比例的羟丙基甲基纤维素或其它聚合物基质、脂质体和/或微球体来加以调配，以提供活性剂的缓慢或控制释放。另外，本发明的药物组合物可以含有乳浊剂，并且可以经调配以使得其仅在或优先在胃肠道的某些部分中释放活性剂，任选地以延迟方式释放。可以使用的包埋组合物的实例包括聚合物质和蜡。活性剂还可以呈微囊封形式，任选地与一或多种上文所描述的赋形剂一起。
用于经口投与的适合液体剂型包括(借助于说明)药学上可接受的乳液、微乳液、溶液、悬浮液、糖浆以及酏剂。液体剂型通常包含活性剂和惰性稀释剂(如水或其它溶剂)、增溶剂以及乳化剂，如乙醇、异丙醇、碳酸乙盐、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苯甲酯、丙二醇、1,3-丁二醇、油(例如棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油以及芝麻油)、甘油、四氢呋喃醇、聚乙二醇以及脱水山梨糖醇的脂肪酸酯以及其混合物。悬浮液可以含有悬浮剂，如乙氧基化异硬脂基醇、聚氧化乙烯山梨糖醇以及脱水山梨糖醇酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝、膨润土、琼脂-琼脂以及黄蓍胶以及其混合物。
当意图用于经口投与时，本发明的药物组合物可以单位剂型包装。术语“单位剂型”是指适合于向患者给药的物理离散单元，即，各单元单独含有或与一或多个额外单元组合含有经计算可产生所需治疗效果的预定量的活性剂。举例来说，此类单位剂型可以是胶囊、片剂、丸剂等。
在另一个实施例中，本发明组合物适用于吸入投与，并且将通常呈气雾剂或散剂形式。通常使用熟知递送装置(如喷雾器、干粉或定量剂量吸入器)投与此类组合物。喷雾器装置产生高速气流，以使组合物以薄雾形式喷出而携载入患者的呼吸道中。一种示例性喷雾器调配物包含溶解于载剂中以形成溶液或经微粉化并且与载剂组合以形成含有可吸入尺寸的微粉化粒子的悬浮液的活性剂。干粉吸入器投与呈自由流动粉末形式的活性剂，其在吸气期间分散在患者的气流中。一种示例性干粉调配物包含与赋形剂(如乳糖、淀粉、甘露糖醇、右旋糖、聚乳酸、聚乳酸交酯-共-乙交酯以及其组合)干式掺合的活性剂。定量剂量吸入器使用压缩推进剂气体排出所测量的量的活性剂。一种示例性定量剂量调配物包含活性剂于液化推进剂(如氯氟碳化物或氢氟烷烃)中的溶液或悬浮液。此类调配物的任选的组分包括共溶剂，如乙醇或戊烷；以及表面活性剂，如脱水山梨糖醇三油酸酯、油酸、卵磷脂、甘油以及月桂基硫酸钠。此类组合物通常通过向含有活性剂、乙醇(如果存在)以及表面活性剂(如果存在)的适合容器中添加经冷却或经加压的氢氟烷烃来制备。为了制备悬浮液，将活性剂微粉化，并且接着与推进剂组合。或者，悬浮液调配物可以通过喷雾干燥活性剂的微粉化粒子上的表面活性剂包衣来制备。接着将调配物装入气雾剂罐中，其形成吸入器的一部分。
本发明化合物还可以肠胃外(例如通过皮下、静脉内、肌肉内或腹膜内注射)投与。对于此类投与来说，活性剂以无菌溶液、悬浮液或乳液形式提供。用于制备此类调配物的示例性溶剂包括水、盐水、低分子量醇(如丙二醇)、聚乙二醇、油、明胶、脂肪酸酯(如油酸乙酯)等。肠胃外调配物还可以含有一或多种抗氧化剂、增溶剂、稳定剂、防腐剂、湿润剂、乳化剂以及分散剂。表面活性剂、额外稳定剂或pH调节剂(酸、碱或缓冲剂)以及抗氧化剂尤其适用于为调配物提供稳定性以例如使化合物中可能存在的酯和酰胺键的水解或硫醇的二聚减到最少或避免水解。可以通过使用无菌可注射介质、灭菌剂、过滤、照射或加热来使这些调配物无菌。在一个特定实施例中，肠胃外调配物包含环糊精水溶液作为药学上可接受的载剂。适合环糊精包括含有在1,4位置处通过如在淀粉酶、β-环糊精或环庚直链淀粉中的键连接的六个或更多个α-D-吡喃葡萄糖单元的环状分子。示例性环糊精包括环糊精衍生物，如羟丙基环糊精和磺丁基醚环糊精，如羟丙基-β-环糊精和磺丁基醚β-环糊精。用于此类调配物的示例性缓冲剂包括基于羧酸的缓冲剂，如柠檬酸盐、乳酸盐以及马来酸盐缓冲溶液。
本发明化合物还可以使用已知经皮递送系统和赋形剂来经皮投与。举例来说，化合物可以与渗透增强剂(如丙二醇、聚乙二醇单月桂酸酯、氮杂环-2-酮等)混合，并且并入贴片或类似递送系统中。必要时，可以在此类经皮组合物中使用额外赋形剂，包括胶凝剂、乳化剂以及缓冲剂。
第二药剂
本发明化合物可以适用于单独治疗疾病，或可以与一或多种额外治疗剂组合以获得所需治疗效果。因此，在一个实施例中，本发明的药物组合物含有与本发明化合物共同投与的其它药物。举例来说，组合物可以进一步包含一或多种药物(也称为“第二药剂”)。此类治疗剂在本领域中是熟知的，并且包括腺苷受体拮抗剂、α-肾上腺素受体拮抗剂、β1-肾上腺素受体拮抗剂、β2-肾上腺素受体激动剂、双重作用β-肾上腺素受体拮抗剂/α1-受体拮抗剂、晚期糖基化终产物裂解剂、醛固酮拮抗剂、醛固酮合成酶抑制剂、氨基肽酶N抑制剂、雄激素、血管紧张素转化酶抑制剂以及双重作用血管紧张素转化酶/脑啡肽酶抑制剂、血管紧张素转化酶2活化剂和刺激剂、血管紧张素-II疫苗、抗凝剂、抗糖尿病剂、止泻剂、抗青光眼剂、抗脂质剂、止痛剂、抗血栓形成剂、AT1受体拮抗剂以及双重作用AT1受体拮抗剂/脑啡肽酶抑制剂以及多功能血管紧张素受体阻断剂、缓激肽受体拮抗剂、钙通道阻断剂、凝乳酶抑制剂、地高辛、利尿剂、多巴胺激动剂、内皮素转化酶抑制剂、内皮素受体拮抗剂、HMG-CoA还原酶抑制剂、雌激素、雌激素受体激动剂和/或拮抗剂、单胺再吸收抑制剂、肌肉松弛剂、利钠肽和其类似物、利钠肽清除受体拮抗剂、脑啡肽酶抑制剂、氧化氮供体、非甾族消炎剂、N-甲基d-天冬氨酸受体拮抗剂、类鸦片受体激动剂、磷酸二酯酶抑制剂、前列腺素类似物、前列腺素受体激动剂、肾素抑制剂、选择性血清素再吸收抑制剂、钠通道阻断剂、可溶性鸟苷酸环化酶刺激剂和活化剂、三环抗抑郁剂、血管加压素受体拮抗剂以及其组合。这些药剂的特定实例详述于本文中。
因此，在本发明的另一个方面，药物组合物包含本发明化合物、第二活性剂以及药学上可接受的载剂。第三、第四等活性剂也可以包括在组合物中。在组合疗法中，本发明化合物的投与量以及第二药剂的量可以小于单药疗法中通常投与的量。
本发明化合物可以与第二活性剂物理混合以形成含有两种药剂的组合物；或各药剂可以存在于独立并且不同的组合物中，所述组合物同时或在独立的时间向患者投与。举例来说，可以使用常规程序和设备将本发明化合物与第二活性剂组合，以形成包含本发明化合物和第二活性剂的活性剂的组合。另外，活性剂可以与药学上可接受的载剂组合，以形成包含本发明化合物、第二活性剂以及药学上可接受的载剂的药物组合物。在这个实施例中，通常混合或掺合组合物的组分以产生物理混合物。接着使用本文所描述的任何途径以治疗有效量投与所述物理混合物。
或者，活性剂可以在向患者投与之前保持为独立并且不同的。在这个实施例中，药剂在投与之前不以物理方式混合在一起，而以独立组合物形式同时或在独立的时间投与。此类组合物可以分开包装或可以一起包装在试剂盒中。当在独立的时间投与时，第二药剂将通常在投与本发明化合物之后24小时以内投与，在从与投与本发明化合物同时到给药后约24小时的范围内的任何时间。这也称为依次投与。因此，本发明化合物与另一种活性剂可以使用两种片剂同时或依次经口投与，各活性剂对应于一种片剂，其中依次可以意味着在投与本发明化合物后立即投与，或在某一预定时间后(例如一小时后或三小时后)投与。还预期第二药剂可以在投与本发明化合物之后超过24小时投与。或者，可以通过不同投与途径投与组合，即，一种经口投与而另一种通过吸入投与。
在一个实施例中，试剂盒包含第一剂型，其包含本发明化合物；以及至少一种额外剂型，其包含本文所阐述的第二药剂中的一或多者，其量足以进行本发明的方法。第一剂型和第二(或第三等)剂型一起包含用于治疗或预防患者的疾病或医学病况的治疗有效量的活性剂。
当包括第二药剂时，其以治疗有效量存在以使得当与本发明化合物共同投与时，其通常投与的量产生治疗学上有益的效果。第二药剂可以呈药学上可接受的盐、溶剂合物、光学纯立体异构体等形式。第二药剂还可以呈前药形式，例如具有已经酯化的羧酸基的化合物。因此，本文中所列的第二药剂意图包括所有此类形式，并且是市售的或可以使用常规程序和试剂制备。
在一个实施例中，本发明化合物与腺苷受体拮抗剂组合投与，所述腺苷受体拮抗剂的代表性实例包括(但不限于)那昔茶碱(naxifylline)、罗咯茶碱(rolofylline)、SLV-320、茶碱(theophylline)以及托纳普茶碱(tonapofylline)。
在一个实施例中，本发明化合物与α-肾上腺素受体拮抗剂组合投与，所述α-肾上腺素受体拮抗剂的代表性实例包括(但不限于)多沙唑嗪(doxazosin)、哌唑嗪(prazosin)、坦索洛新(tamsulosin)以及特拉唑嗪(terazosin)。
本发明化合物还可以与β1-肾上腺素受体拮抗剂(“β1-阻断剂”)组合投与。代表性β1-阻断剂包括(但不限于)醋丁洛尔(acebutolol)、阿普洛尔(alprenolol)、氨磺洛尔(amosulalol)、阿罗洛尔(arotinolol)、阿替洛尔(atenolol)、苯呋洛尔(befunolol)、倍他洛尔(betaxolol)、贝凡洛尔(bevantolol)、比索洛尔(bisoprolol)、波吲洛尔(bopindolol)、布新洛尔(bucindolol)、布库洛尔(bucumolol)、布非洛尔(bufetolol)、丁呋洛尔(bufuralol)、布尼洛尔(bunitrolol)、布拉洛尔(bupranolol)、巴布里丁(bubridine)、丁非洛尔(butofilolol)、卡拉洛尔(carazolol)、卡替洛尔(carteolol)、卡维地洛(carvedilol)、塞利洛尔(celiprolol)、塞他洛尔(cetamolol)、氯拉洛尔(cloranolol)、地来洛尔(dilevalol)、依泮洛尔(epanolol)、艾司洛尔(esmolol)、茚诺洛尔(indenolol)、拉贝洛尔(labetolol)、左布诺洛尔(levobunolol)、甲吲洛尔(mepindolol)、美替洛尔(metipranolol)、美托洛尔(metoprolol)(如琥珀酸美托洛尔和酒石酸美托洛尔)、莫普洛尔(moprolol)、纳多洛尔(nadolol)、萘肟洛尔(nadoxolol)、奈必洛尔(nebivalol)、尼普地洛(nipradilol)、氧烯洛尔(oxprenolol)、喷布洛尔(penbutolol)、培布洛尔(perbutolol)、品多洛尔(pindolol)、普拉洛尔(practolol)、丙萘洛尔(pronethalol)、普萘洛尔(propranolol)、索他洛尔(sotalol)、硫氧洛尔(sufinalol)、塔林多尔(talindol)、特他洛尔(tertatolol)、替利洛尔(tilisolol)、噻吗洛尔(timolol)、托利洛尔(toliprolol)、希苯洛尔(xibenolol)以及其组合。在一个特定实施例中，β1-拮抗剂选自阿替洛尔、比索洛尔、美托洛尔、普萘洛尔、索他洛尔以及其组合。通常，β1-阻断剂的投与量将足以提供每剂量约2-900mg。
在一个实施例中，本发明化合物与β2-肾上腺素受体激动剂组合投与，所述β2-肾上腺素受体激动剂的代表性实例包括(但不限于)沙丁胺醇(albuterol)、比托特罗(bitolterol)、非诺特罗(fenoterol)、福莫特罗(formoterol)、茚达特罗(indacaterol)、异他林(isoetharine)、左旋沙丁胺醇(levalbuterol)、间羟异丙肾上腺素(metaproterenol)、吡布特罗(pirbuterol)、羟甲叔丁肾上腺素(salbutamol)、沙甲胺醇(salmefamol)、沙美特罗(salmeterol)、特布他林(terbutaline)、维兰特罗(vilanterol)等。通常，β2-肾上腺素受体激动剂的投与量将足以提供每剂量约0.05-500μg。
在一个实施例中，本发明化合物与晚期糖基化终产物(AGE)裂解剂组合投与，所述晚期糖基化终产物裂解剂的实例包括(借助于说明而非限制)阿拉格布(alagebrium)(或ALT-711)和TRC4149。
在另一个实施例中，本发明化合物与醛固酮拮抗剂组合投与，所述醛固酮拮抗剂的代表性实例包括(但不限于)依普利酮(eplerenone)、螺内酯(spironolactone)以及其组合。通常，醛固酮拮抗剂的投与量将足以提供每天约5-300mg。
在一个实施例中，本发明化合物与氨基肽酶N或二肽基肽酶III抑制剂组合投与，所述氨基肽酶N或二肽基肽酶III抑制剂的实例包括(借助于说明而非限制)苯丁抑制素(bestatin)和PC18(2-氨基-4-甲磺酰基丁硫醇、甲硫氨酸硫醇)。
本发明化合物还可以与血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂组合投与。代表性ACE抑制剂包括(但不限于)阿克普利(accupril)、阿拉普利(alacepril)、贝那普利(benazepril)、贝那普利拉(benazeprilat)、卡托普利(captopril)、西那普利(ceranapril)、西拉普利(cilazapril)、地拉普利(delapril)、依那普利(enalapril)、依那普利拉(enalaprilat)、福辛普利(fosinopril)、福辛普利拉(fosinoprilat)、咪达普利(imidapril)、赖诺普利(lisinopril)、莫西普利(moexipril)、蒙诺普利(monopril)、莫维普利(moveltipril)、喷托普利(pentopril)、培哚普利(perindopril)、喹那普利(quinapril)、喹那普利拉(quinaprilat)、雷米普利(ramipril)、雷米普利拉(ramiprilat)、乙酸沙拉新(saralasinacetate)、螺普利(spirapril)、替莫普利(temocapril)、群多普利(trandolapril)、佐芬普利(zofenopril)以及其组合。
在一个特定实施例中，ACE抑制剂选自：贝那普利、卡托普利、依那普利、赖诺普利、雷米普利以及其组合。通常，ACE抑制剂的投与量将足以提供每天约1-150mg。在另一个实施例中，本发明化合物与双重作用血管紧张素转化酶/脑啡肽酶(ACE/NEP)抑制剂组合投与，所述ACE/NEP抑制剂的实例包括(但不限于)：AVE-0848((4S,7S,12bR)-7-[3-甲基-2(S)-磺酰基丁酰氨基]-6-氧代-1,2,3,4,6,7,8,12b-八氢吡啶并[2,1-a][2]-苯并氮杂卓-4-甲酸)；AVE-7688(艾尔帕曲(ilepatril))和其母体化合物；BMS-182657(2-[2-氧代-3(S)-[3-苯基-2(S)-磺酰基丙酰氨基]-2,3,4,5-四氢-1H-1-苯并氮杂卓-1-基]乙酸)；CGS-35601(N-[1-[4-甲基-2(S)-磺酰基戊酰氨基]环戊基-羰基]-L-色氨酸)；法西多曲(fasidotril)；法西多利拉(fasidotrilate)；依那普利拉；ER-32935((3R,6S,9aR)-6-[3(S)-甲基-2(S)-磺酰基戊酰氨基]-5-氧代全氢噻唑并[3,2-a]氮杂卓-3-甲酸)；杰帕曲拉；MDL-101264((4S,7S,12bR)-7-[2(S)-(2-吗啉基乙酰基巯基)-3-苯基丙酰氨基]-6-氧代-1,2,3,4,6,7,8,12b-八氢吡啶并[2,1-a][2]苯并氮杂卓-4-甲酸)；MDL-101287([4S-[4α,7α(R*),12bβ]]-7-[2-(羧甲基)-3-苯基丙酰氨基]-6-氧代-1,2,3,4,6,7,8,12b-八氢吡啶并[2,1-a][2]苯并氮杂卓-4-甲酸)；奥马曲拉；RB-105(N-[2(S)-(巯基甲基)-3(R)-苯基丁基]-L-丙氨酸)；山帕曲拉；SA-898((2R,4R)-N-[2-(2-羟基苯基)-3-(3-巯基丙酰基)噻唑啶-4-基羰基]-L-苯丙氨酸)；Sch-50690(N-[1(S)-羧基-2-[N2-(甲磺酰基)-L-赖氨酰基氨基]乙基]-L-缬氨酰基-L-酪氨酸)；并且还可以包括其组合。在一个特定实施例中，ACE/NEP抑制剂选自：AVE-7688、依那普利拉、法西多曲、法西多利拉、奥马曲拉、山帕曲拉以及其组合。
在一个实施例中，本发明化合物与血管紧张素转化酶2(ACE2)活化剂或刺激剂组合投与。
在一个实施例中，本发明化合物与血管紧张素-II疫苗组合投与，所述血管紧张素-II疫苗的实例包括(但不限于)ATR12181和CYT006-AngQb。
在一个实施例中，本发明化合物与抗凝剂组合投与，所述抗凝剂的代表性实例包括(但不限于)：香豆素(coumarin)，如华法林(warfarin)；肝素；以及直接凝血酶抑制剂，如阿加曲班(argatroban)、比伐卢定(bivalirudin)、达比加群(dabigatran)以及来匹卢定(lepirudin)。
在又一个实施例中，本发明化合物与抗糖尿病剂组合投与。代表性抗糖尿病剂包括可注射药物以及口服有效药物以及其组合。可注射药物的实例包括(但不限于)胰岛素和胰岛素衍生物。口服有效药物的实例包括(但不限于)：双胍(biguanide)，如二甲双胍(metformin)；升糖素拮抗剂；α-葡糖苷酶抑制剂，如阿卡波糖(acarbose)和米格列醇(miglitol)；二肽基肽酶IV抑制剂(DPP-IV抑制剂)，如阿格列汀(alogliptin)、地那列汀(denagliptin)、利拉利汀(linagliptin)、沙格列汀(saxagliptin)、西他列汀(sitagliptin)以及维格列汀(vildagliptin)；美格替奈(meglitinide)；如瑞格列奈(repaglinide)；噁二唑烷二酮、磺酰脲，如氯磺丙脲(chlorpropamide)、格列美脲(glimepiride)、格列吡嗪(glipizide)、格列本脲(glyburide)以及妥拉磺脲(tolazamide)；噻唑烷二酮，如吡格列酮(pioglitazone)和罗格列酮(rosiglitazone)；以及其组合。
在另一个实施例中，本发明化合物与止泻治疗组合投与。代表性治疗选项包括(但不限于)经口复水溶液(ORS)、洛哌丁胺(loperamide)、苯乙哌啶(diphenoxylate)以及次水杨酸铋。
在又一个实施例中，本发明化合物与抗青光眼剂组合投与。代表性抗青光眼剂包括(但不限于)：α-肾上腺素激动剂，如溴莫尼定(brimonidine)；β1-肾上腺素受体拮抗剂；局部β1-阻断剂，如倍他洛尔、左布诺洛尔以及噻吗洛尔；碳酸酐酶抑制剂，如乙酰唑胺(acetazolamide)、布林佐胺(brinzolamide)或多佐胺(dorzolamide)；胆碱能激动剂，如西维美林(cevimeline)和DMXB-假木贼碱(DMXB-anabaseine)；肾上腺素化合物；缩瞳剂(miotic)，如匹鲁卡品(pilocarpine)；以及前列腺素类似物。
在又一个实施例中，本发明化合物与抗脂质剂组合投与。代表性抗脂质剂包括(但不限于)：胆固醇酯转移蛋白抑制剂(CETP)，如安塞曲匹(anacetrapib)、达塞曲匹(dalcetrapib)以及托塞曲匹(torcetrapib)；他汀类，如阿托伐他汀(atorvastatin)、氟伐他汀(fluvastatin)、洛伐他汀(lovastatin)、普伐他汀(pravastatin)、罗素他汀(rosuvastatin)以及辛伐他汀(simvastatin)；以及其组合。
在一个实施例中，本发明化合物与抗血栓形成剂组合投与。代表性抗血栓形成剂包括(但不限于)：阿司匹林(aspirin)；抗血小板剂，如氯吡格雷(clopidogrel)、普拉格雷(prasugrel)以及噻氯匹定(ticlopidine)；肝素以及其组合。
在一个实施例中，本发明化合物与AT1受体拮抗剂(也称为血管紧张素II 1型受体阻断剂(ARB))组合。代表性ARB包括(但不限于)阿比沙坦(abitesartan)、阿齐沙坦(azilsartan)(例如阿齐沙坦酯(azilsartan medoxomil))、本洛沙坦(benzyllosartan)、坎地沙坦(candesartan)、坎地沙坦西酯(candesartan cilexetil)、依利沙坦(elisartan)、恩布沙坦(embusartan)、依诺他索沙坦(enoltasosartan)、依普罗沙坦(eprosartan)、EXP3174、范沙坦(fonsartan)、福拉沙坦(forasartan)、格洛沙坦(glycyllosartan)、厄贝沙坦(irbesartan)、伊索特林(isoteoline)、洛沙坦(losartan)、美度米(medoxomil)、米法沙坦(milfasartan)、奥美沙坦(olmesartan)(例如奥美沙坦酯(olmesartan medoxomil))、奥普米沙坦(opomisartan)、普拉沙坦(pratosartan)、利匹沙坦(ripisartan)、沙普立沙坦(saprisartan)、沙拉新(saralasin)、萨美新(sarmesin)、TAK-591、他索沙坦(tasosartan)、替米沙坦(telmisartan)、缬沙坦(valsartan)、佐拉沙坦(zolasartan)以及其组合。在一个特定实施例中，ARB选自阿齐沙坦酯、坎地沙坦西酯、依普罗沙坦、厄贝沙坦、洛沙坦、奥美沙坦酯、沙普立沙坦、他索沙坦、替米沙坦、缬沙坦以及其组合。示例性盐和/或前药包括坎地沙坦西酯、甲磺酸依普罗沙坦、洛沙坦钾盐以及奥美沙坦酯。通常，ARB将以足以提供每剂量约4-600mg的量投与，其中示例性日剂量在每天20-320mg范围内。
本发明化合物还可以与双重作用药剂(如AT1受体拮抗剂/脑啡肽酶抑制剂(ARB/NEP)抑制剂)组合投与，所述双重作用药剂的实例包括(但不限于)由阿莱格雷蒂(Allegretti)等人于2008年4月23日提交的美国公开案第2008/0269305号和第2009/0023228号中所描述的化合物，如化合物4'-{2-乙氧基-4-乙基-5-[((S)-2-巯基-4-甲基戊酰基氨基)-甲基]咪唑-1-基甲基}-3'-氟联苯-2-甲酸。
本发明化合物还可以与如库尔茨(Kurtz)和克莱因(Klein)(2009)高血压研究(Hypertension Research)32:826-834中所描述的多功能血管紧张素受体阻断剂组合投与。
在一个实施例中，本发明化合物与缓激肽受体拮抗剂(例如艾替班特(icatibant)(HOE-140))组合投与。预期这一组合疗法可以提供预防血管性水肿或较高缓激肽水平的其它非所需后果的优点。
在一个实施例中，本发明化合物与钙通道阻断剂组合投与。代表性钙通道阻断剂包括(但不限于)氨氯地平(amlodipine)、阿尼帕米(anipamil)、阿拉尼平(aranipine)、巴尼地平(barnidipine)、苄环烷(bencyclane)、贝尼地平(benidipine)、苄普地尔(bepridil)、克仑硫卓(clentiazem)、西尼地平(cilnidipine)、桂利嗪(cinnarizine)、地尔硫卓(diltiazem)、依福地平(efonidipine)、依高地平(elgodipine)、依他苯酮(etafenone)、非洛地平(felodipine)、芬地林(fendiline)、氟桂利嗪(flunarizine)、加洛帕米(gallopamil)、伊拉地平(isradipine)、拉西地平(lacidipine)、乐卡地平(lercanidipine)、利多氟嗪(lidoflazine)、洛美利嗪(lomerizine)、马尼地平(manidipine)、米贝地尔(mibefradil)、尼卡地平(nicardipine)、硝苯地平(nifedipine)、尼古地平(niguldipine)、尼鲁地平(niludipine)、尼伐地平(nilvadipine)、尼莫地平(nimodipine)、尼索地平(nisoldipine)、尼群地平(nitrendipine)、尼伐尔地平(nivaldipine)、哌克昔林(perhexiline)、普尼拉明(prenylamine)、里奥斯定(ryosidine)、司莫地尔(semotiadil)、特罗地林(terodiline)、泰尔帕米(tiapamil)、维拉帕米(verapamil)以及其组合。在一个特定实施例中，钙通道阻断剂选自氨氯地平、苄普地尔、地尔硫卓、非洛地平、伊拉地平、拉西地平、尼卡地平、硝苯地平、尼古地平、尼鲁地平、尼莫地平、尼索地平、里奥斯定、维拉帕米以及其组合。通常，钙通道阻断剂将以足以提供每剂量约2-500mg的量投与。
在一个实施例中，本发明化合物与凝乳酶抑制剂组合投与，所述凝乳酶抑制剂如TPC-806和2-(5-甲酰氨基-6-氧代-2-苯基-1,6-二氢嘧啶-1-基)-N-[{3,4-二氧代-1-苯基-7-(2-吡啶氧基)}-2-庚基]乙酰胺(NK3201)。
在一个实施例中，本发明化合物与利尿剂组合投与。代表性利尿剂包括(但不限于)：碳酸酐酶抑制剂，如乙酰唑胺(acetazolamide)和双氯非那胺(dichlorphenamide)；髓袢利尿剂(loop diuretics)，其包括磺酰胺衍生物(如乙酰唑胺、安布赛特(ambuside)、阿佐塞米(azosernide)、布美他尼(bumetanide)、布他唑胺(butazolamide)、氯米非那胺(chloraminophenamide)、氯非那胺(clofenamide)、氯帕胺(clopamide)、氯索隆(clorexolone)、二磺法胺(disulfamide)、依索唑胺(ethoxolamide)、呋塞米(furosemide)、美夫西特(mefruside)、醋甲唑胺(methazolamide)、吡咯他尼(piretanide)、托拉塞米(torsemide)、曲帕胺(tripamide)以及希帕胺(xipamide))以及非磺酰胺利尿剂(如依他尼酸(ethacrynic acid))和其它苯氧基乙酸化合物(如替尼酸(tienilic acid)、茚达立酮(indacrinone)以及喹卡酯(quincarbate))；渗透性利尿剂，如甘露糖醇；保钾利尿剂(potassium-sparing diuretics)，其包括醛固酮拮抗剂(如螺内酯)以及Na+通道抑制剂(如氨氯吡脒(amiloride)和氨苯喋啶(triamterene))；噻嗪和噻嗪类的利尿剂，如阿尔噻嗪(althiazide)、苄氟甲噻嗪(bendroflumethiazide)、苄氢氯噻嗪(benzylhydrochlorothiazide)、苄噻嗪(benzthiazide)、布噻嗪(buthiazide)、氯噻酮(chlorthalidone)、氯噻嗪(chlorothiazide)、环戊噻嗪(cyclopenthiazide)、环噻嗪(cyclothiazide)、依匹噻嗪(epithiazide)、乙噻嗪(ethiazide)、芬喹唑(fenquizone)、氟甲噻嗪(flumethiazide)、氢氯噻嗪(hydrochlorothiazide)、氢氟噻嗪(hydroflumethiazide)、吲达帕胺(indapamide)、甲氯噻嗪(methylclothiazide)、美替克仑(meticrane)、美托拉宗(metolazone)、对氟噻嗪(paraflutizide)、多噻嗪(polythiazide)、喹乙唑酮(quinethazone)、四氯噻嗪(teclothiazide)以及三氯噻嗪(trichloromethiazide)以及其组合。在一个特定实施例中，利尿剂选自氨氯吡脒、布美他尼、氯噻嗪、氯噻酮、双氯非那胺、依他尼酸、呋塞米、氢氯噻嗪、氢氟噻嗪、吲达帕胺、甲氯噻嗪、美托拉宗、托拉塞米、氨苯喋啶以及其组合。利尿剂将以足以提供每天约5-50mg(更通常每天6-25mg)的量投与，其中常见剂量为每天6.25mg、12.5mg或25mg。
本发明化合物还可以与内皮素转化酶(ECE)抑制剂组合投与，所述ECE抑制剂的实例包括(但不限于)膦酰二肽(phosphoramidon)、CGS 26303以及其组合。
在一个特定实施例中，本发明化合物与内皮素受体拮抗剂组合投与。代表性内皮素受体拮抗剂包括(但不限于)：影响内皮素A受体的选择性内皮素受体拮抗剂，如阿伏生坦(avosentan)、安立生坦(ambrisentan)、阿曲生坦(atrasentan)、BQ-123、克拉生坦(clazosentan)、达卢生坦(darusentan)、西他塞坦(sitaxentan)以及齐泊替坦(zibotentan)；以及影响内皮素A与B受体的双重内皮素受体拮抗剂，如波生坦(bosentan)、马西替坦(macitentan)、替唑生坦(tezosentan)。
在又一个实施例中，本发明化合物与一或多种HMG-CoA还原酶抑制剂(也称为他汀类)组合投与。代表性他汀类包括(但不限于)阿托伐他汀、氟伐他汀、洛伐他汀、匹伐他汀(pitavastatin)、普伐他汀、罗素他汀以及辛伐他汀。
在一个实施例中，本发明化合物与单胺再吸收抑制剂组合投与，所述单胺再吸收抑制剂的实例包括(借助于说明而非限制)去甲肾上腺素再吸收抑制剂，如阿托莫西汀(atomoxetine)、丁胺苯丙酮(buproprion)以及丁胺苯丙酮代谢物羟基丁胺苯丙酮、麦普替林(maprotiline)、瑞波西汀(reboxetine)以及维洛沙嗪(viloxazine)；选择性血清素再吸收抑制剂(SSRI)，如西酞普兰(citalopram)和西酞普兰代谢物去甲西酞普兰(desmethylcitalopram)、达泊西汀(dapoxetine)、依地普兰(escitalopram)(例如草酸依地普兰)、氟西汀(fluoxetine)和氟西汀去甲基代谢物去甲氟西汀(norfluoxetine)、氟伏沙明(fluvoxamine)(例如马来酸氟伏沙明)、帕罗西汀(paroxetine)、舍曲林(sertraline)和舍曲林代谢物去甲舍曲林(demethylsertraline)；双重血清素-去甲肾上腺素再吸收抑制剂(SNRI)，如比西发定(bicifadine)、度洛西汀(duloxetine)、米那普仑(milnacipran)、奈法唑酮(nefazodone)以及文拉法辛(venlafaxine)以及其组合。
在另一个实施例中，本发明化合物与肌肉弛缓剂组合投与，所述肌肉弛缓剂的实例包括(但不限于)：肌安宁(carisoprodol)、氯唑沙宗(chlorzoxazone)、环苯扎平(cyclobenzaprine)、二氟尼柳(diflunisal)、美他沙酮(metaxalone)、美索巴莫(methocarbamol)以及其组合。
在一个实施例中，本发明化合物与利钠肽或类似物组合投与，所述利钠肽或类似物的实例包括(但不限于)：卡培立肽(carperitide)、CD-NP(奈尔治疗公司(NileTherapeutics))、CU-NP、奈西立肽(nesiritide)、PL-3994(帕拉汀技术公司(PalatinTechnologies,Inc.))、乌拉立肽(ularitide)、森德立肽(cenderitide)以及在小川(Ogawa)等人(2004)生物化学杂志(J.Biol.Chem.)279:28625-31中所描述的化合物。这些化合物也称为利钠肽受体-A(NPR-A)激动剂。在另一个实施例中，本发明化合物与利钠肽清除受体(NPR-C)拮抗剂组合投与，所述NPR-C拮抗剂如SC-46542、cANF(4-23)以及AP-811(维尔(Veale)(2000)生物有机化学与医药化学通讯(Bioorg Med Chem Lett)10:1949-52)。举例来说，当与NEP抑制剂塞奥芬组合时，AP-811已显示协同作用(韦格纳(Wegner)(1995)临床实验高血压(Clin.Exper.Hypert.)17:861-876)。
在另一个实施例中，本发明化合物与脑啡肽酶(NEP)抑制剂组合投与。代表性NEP抑制剂包括(但不限于)：AHU-377；坎沙曲；坎沙曲拉；右卡多曲(dexecadotril)((+)-N-[2(R)-(乙酰基巯基甲基)-3-苯基丙酰基]甘氨酸苯甲酯)；CGS-24128(3-[3-(联苯-4-基)-2-(膦酰基甲基氨基)丙酰氨基]丙酸)；CGS-24592((S)-3-[3-(联苯-4-基)-2-(膦酰基甲基氨基)丙酰氨基]丙酸)；CGS-25155(N-[9(R)-(乙酰基巯基甲基)-10-氧代-1-氮杂环癸-2(S)-基羰基]-4(R)-羟基-L-脯氨酸苯甲酯)；赫普沃斯(Hepworth)等人的WO 2006/027680中所描述的3-(1-氨甲酰基环己基)丙酸衍生物(辉瑞公司(Pfizer Inc.))；JMV-390-1(2(R)-苯甲基-3-(N-羟基氨甲酰基)丙酰基-L-异亮氨酰基-L-亮氨酸)；依卡曲尔(ecadotril)；膦酰二肽；反向塞奥芬(retrothiorphan)；RU-42827(2-(巯基甲基)-N-(4-吡啶基)苯丙酰胺)；RU-44004(N-(4-吗啉基)-3-苯基-2-(磺酰基甲基)丙酰胺)；SCH-32615((S)-N-[N-(1-羧基-2-苯乙基)-L-苯丙氨酰基]-β-丙氨酸)和其前药SCH-34826((S)-N-[N-[1-[[(2,2-二甲基-1,3-二氧环戊-4-基)甲氧基]羰基]-2-苯乙基]-L-苯丙氨酰基]-β-丙氨酸)；萨洛芬(sialorphin)；SCH-42495(N-[2(S)-(乙酰基磺酰基甲基)-3-(2-甲基苯基)丙酰基]-L-甲硫氨酸乙酯)；司皮诺芬(spinorphin)；SQ-28132(N-[2-(巯基甲基)-1-氧代-3-苯丙基]亮氨酸)；SQ-28603(N-[2-(巯基甲基)-1-氧代-3-苯丙基]-β-丙氨酸)；SQ-29072(7-[[2-(巯基甲基)-1-氧代-3-苯丙基]氨基]庚酸)；塞奥芬和其前药消旋卡多曲(racecadotril)；UK-69578(顺-4-[[[1-[2-羧基-3-(2-甲氧基乙氧基)丙基]环戊基]羰基]氨基]环己甲酸)；UK-447,841(2-{1-[3-(4-氯苯基)丙基氨甲酰基]-环戊基甲基}-4-甲氧基丁酸)；UK-505,749((R)-2-甲基-3-{1-[3-(2-甲基苯并噻唑-6-基)丙基氨甲酰基]环戊基}丙酸)；5-联苯-4-基-4-(3-羧基丙酰基氨基)-2-甲基戊酸以及5-联苯-4-基-4-(3-羧基丙酰基氨基)-2-甲基戊酸乙酯(WO 2007/056546)；卡德(Khder)等人的WO 2007/106708中所描述的达鲁曲(daglutril)[(3S,2'R)-3-{1-[2'-(乙氧基羰基)-4'-苯基丁基]-环戊-1-羰基氨基}-2,3,4,5-四氢-2-氧代-1H-1-苯并氮杂卓-1-乙酸](诺华股份公司(Novartis AG))；以及其组合。在一个特定实施例中，NEP抑制剂选自AHU-377、坎沙曲、坎沙曲拉、CGS-24128、膦酰二肽、SCH-32615、SCH-34826、SQ-28603、塞奥芬以及其组合。在一个特定实施例中，NEP抑制剂是如达鲁曲或CGS-26303([N-[2-(联苯-4-基)-1(S)-(1H-四唑-5-基)乙基]氨基]甲基膦酸)的化合物，其作为内皮素转化酶(ECE)和NEP的抑制剂都具有活性。还可以使用其它双重作用ECE/NEP化合物。NEP抑制剂将以足以提供每天约20-800mg的量投与，其中典型日剂量在每天50-700mg，更通常每天100-600mg或100-300mg范围内。
在一个实施例中，本发明化合物与氧化氮供体组合投与，所述氧化氮供体的实例包括(但不限于)尼可地尔(nicorandil)；有机硝酸酯，如季戊四醇四硝酸酯；以及斯德酮亚胺(sydnonimine)，如林西多明(linsidomine)和吗多明(molsidomine)。
在又一个实施例中，本发明化合物与非甾族消炎剂(NSAID)组合投与。代表性NSAID包括(但不限于)：阿西美辛(acemetacin)、乙酰水杨酸(acetyl salicylic acid)、阿氯芬酸(alclofenac)、阿明洛芬(alminoprofen)、氨芬酸(amfenac)、氨普立糖(amiprilose)、阿洛普令(aloxiprin)、阿尼罗酸(anirolac)、阿帕宗(apazone)、阿扎丙宗(azapropazone)、贝诺酯(benorilate)、苯噁洛芬(benoxaprofen)、苯哌隆(bezpiperylon)、溴哌莫(broperamole)、布氯酸(bucloxic acid)、卡洛芬(carprofen)、环氯茚酸(clidanac)、双氯芬酸(diclofenac)、二氟尼柳、地弗他酮(diftalone)、依诺利康(enolicam)、依托度酸(etodolac)、依托昔布(etoricoxib)、芬布芬(fenbufen)、芬氯酸(fenclofenac)、芬克洛酸(fenclozic acid)、非诺洛芬(fenoprofen)、芬替酸(fentiazac)、非普拉宗(feprazone)、氟芬那酸(flufenamic acid)、氟苯柳(flufenisal)、氟洛芬(fluprofen)、氟比洛芬(flurbiprofen)、呋罗芬酸(furofenac)、异丁芬酸(ibufenac)、布洛芬(ibuprofen)、吲哚美辛(indomethacin)、吲哚洛芬(indoprofen)、伊索克酸(isoxepac)、伊索昔康(isoxicam)、酮洛芬(ketoprofen)、酮洛酸(ketorolac)、洛非咪唑(lofemizole)、氯诺昔康(lornoxicam)、甲氯芬那酸酯(meclofenamate)、甲氯芬那酸(meclofenamic acid)、甲芬那酸(mefenamic acid)、美洛昔康(meloxicam)、美沙拉嗪(mesalamine)、咪洛芬(miroprofen)、莫非布宗(mofebutazone)、萘丁美酮(nabumetone)、萘普生(naproxen)、尼氟酸(niflumic acid)、奥沙普嗪(oxaprozin)、噁平酸(oxpinac)、羟布宗(oxyphenbutazone)、苯基丁氮酮(phenylbutazone)、吡罗昔康(piroxicam)、吡洛芬(pirprofen)、普拉洛芬(pranoprofen)、双水杨酸酯(salsalate)、舒多昔康(sudoxicam)、柳氮磺胺吡啶(sulfasalazine)、舒林酸(sulindac)、舒洛芬(suprofen)、替诺昔康(tenoxicam)、硫平酸(tiopinac)、噻洛芬酸(tiaprofenic acid)、硫噁洛芬(tioxaprofen)、托芬那酸(tolfenamic acid)、托美丁(tolmetin)、三氟米酯(triflumidate)、齐多美辛(zidometacin)、佐美酸(zomepirac)以及其组合。在一个特定实施例中，NSAID选自依托度酸、氟比洛芬、布洛芬、吲哚美辛、酮洛芬、酮咯酸、美洛昔康、萘普生、奥沙普嗪、吡罗昔康以及其组合。
在一个实施例中，本发明化合物与N-甲基d-天冬氨酸(NMDA)受体拮抗剂组合投与，所述NMDA受体拮抗剂的实例包括(借助于说明而非限制)金刚烷胺(amantadine)、右甲吗喃(dextromethorphan)、右丙氧芬(dextropropoxyphene)、氯胺酮(ketamine)、凯托米酮(ketobemidone)、美金刚(memantine)、美沙酮(methadone)等。
在再一个实施例中，本发明化合物与类鸦片受体激动剂(也称为类鸦片镇痛剂)组合投与。代表性类鸦片受体激动剂包括(但不限于)：丁丙诺啡(buprenorphine)、布托啡诺(butorphanol)、可待因(codeine)、二氢可待因(dihydrocodeine)、芬太尼(fentanyl)、氢可酮(hydrocodone)、氢吗啡酮(hydromorphone)、左洛啡烷(levallorphan)、左啡诺(levorphanol)、哌替啶(meperidine)、美沙酮、吗啡(morphine)、纳布啡(nalbuphine)、纳美芬(nalmefene)、纳洛芬(nalorphine)、纳洛酮(naloxone)、纳曲酮(naltrexone)、纳洛芬、氧可酮(oxycodone)、氧吗啡酮(oxymorphone)、戊唑星(pentazocine)、丙氧吩(propoxyphene)、曲马多(tramadol)以及其组合。在某些实施例中，类鸦片受体激动剂选自可待因、二氢可待因、氢可酮、氢吗啡酮、吗啡、氧可酮、氧吗啡酮、曲马多以及其组合。
在一个特定实施例中，本发明化合物与磷酸二酯酶(PDE)抑制剂(尤其PDE-V抑制剂)组合投与。代表性PDE-V抑制剂包括(但不限于)阿伐那非(avanafil)、罗地那非(lodenafil)、米罗地那非(mirodenafil)、西地那非(sildenafil)他达拉非(tadalafil)伐地那非(vardenafil)以及乌地那非(udenafil)。
在另一个实施例中，本发明化合物与前列腺素类似物(也称为前列腺素或前列环素类似物)组合投与。代表性前列腺素类似物包括(但不限于)贝前列素钠(beraprostsodium)、比马前列素(bimatoprost)、依前列醇(epoprostenol)、伊洛前列素(iloprost)、拉坦前列素(latanoprost)、他氟前列素(tafluprost)、曲伏前列素(travoprost)以及曲前列环素(treprostinil)，其中比马前列素、拉坦前列素以及他氟前列素备受关注。
在又一个实施例中，本发明化合物与前列腺素受体激动剂组合投与，所述前列腺素受体激动剂的实例包括(但不限于)比马前列素、拉坦前列素、曲伏前列素等。
本发明化合物还可以与肾素抑制剂组合投与，所述肾素抑制剂的实例包括(但不限于)阿利吉仑(aliskiren)、依那吉仑(enalkiren)、瑞米吉仑(remikiren)以及其组合。
在另一个实施例中，本发明化合物与选择性血清素再吸收抑制剂(SSRI)组合投与。代表性SSRI包括(但不限于)：西酞普兰和西酞普兰代谢物去甲西酞普兰、达泊西汀、依地普兰(例如草酸依地普兰)、氟西汀和氟西汀去甲基代谢物去甲氟西汀、氟伏沙明(例如马来酸氟伏沙明)、帕罗西汀、舍曲林和舍曲林代谢物去甲舍曲林以及其组合。
在一个实施例中，本发明化合物与5-HT1D血清素受体激动剂组合投与，所述5-HT1D血清素受体激动剂的实例包括(借助于说明而非限制)曲普坦(triptan)，如阿莫曲普坦(almotriptan)、阿维曲普坦(avitriptan)、依来曲普坦(eletriptan)、夫罗曲普坦(frovatriptan)、那拉曲普坦(naratriptan)、利扎曲普坦(rizatriptan)、舒马曲普坦(sumatriptan)以及佐米曲普坦(zolmitriptan)。
在一个实施例中，本发明化合物与钠通道阻断剂组合投与，所述钠通道阻断剂的实例包括(借助于说明而非限制)卡马西平(carbamazepine)、磷苯妥英(fosphenytoin)、拉莫三嗪(lamotrignine)、利多卡因(lidocaine)、美西律(mexiletine)、奥卡西平(oxcarbazepine)、苯妥英(phenytoin)以及其组合。
在一个实施例中，本发明化合物与可溶性鸟苷酸环化酶刺激剂或活化剂组合投与，所述可溶性鸟苷酸环化酶刺激剂或活化剂的实例包括(但不限于)阿他瓜特(ataciguat)、瑞司瓜特(riociguat)以及其组合。
在一个实施例中，本发明化合物与三环抗抑郁剂(TCA)组合投与，所述TCA的实例包括(借助于说明而非限制)阿米替林(amitriptyline)、氧阿米替林(amitriptylinoxide)、布替林(butriptyline)、氯米帕明(clomipramine)、地美替林(demexiptiline)、地昔帕明(desipramine)、二苯西平(dibenzepin)、二甲他林(dimetacrine)、度硫平(dosulepin)、多塞平(doxepin)、丙咪嗪(imipramine)、氧米帕明(imipraminoxide)、洛非帕明(lofepramine)、美利曲辛(melitracen)、美他帕明(metapramine)、硝沙西平(nitroxazepine)、去甲替林(nortriptyline)、诺昔替林(noxiptiline)、哌泊非嗪(pipofezine)、丙吡西平(propizepine)、普罗替林(protriptyline)、奎纽帕明(quinupramine)以及其组合。
在一个实施例中，本发明化合物与血管加压素受体拮抗剂组合投与，所述血管加压素受体拮抗剂的实例包括(借助于说明而非限制)考尼伐坦(conivaptan)和托伐普坦(tolvaptan)。
组合的第二治疗剂还可以有助于使用本发明化合物的其它组合疗法。举例来说，本发明化合物可以与利尿剂和ARB、或钙通道阻断剂和ARB、或利尿剂和ACE抑制剂、或钙通道阻断剂和他汀类组合。特定实例包括ACE抑制剂依那普利(呈马来酸盐形式)与利尿剂氢氯噻嗪的组合，其以商标出售；或钙通道阻断剂氨氯地平(呈苯磺酸盐形式)与ARB奥美沙坦(呈美度米前药形式)的组合；或钙通道阻断剂与他汀类的组合，所有还可以与本发明化合物一起使用。其它治疗剂(如α2-肾上腺素受体激动剂和血管加压素受体拮抗剂)还可以有助于组合疗法。示例性α2-肾上腺素受体激动剂包括氯压定(clonidine)、右旋美托咪啶(dexmedetomidine)以及胍法新(guanfacine)。
以下调配物说明本发明的代表性药物组合物。
用于经口投与的示例性硬明胶胶囊
充分掺合本发明化合物(50g)、440g喷雾干燥的乳糖以及10g硬脂酸镁。接着将所得组合物装入硬明胶胶囊中(每胶囊500mg组合物)。或者，将本发明化合物(20mg)与淀粉(89mg)、微晶纤维素(89mg)以及硬脂酸镁(2mg)充分掺合。接着使混合物穿过45号目美国筛，并且装入硬明胶胶囊中(每胶囊200mg组合物)。
或者，充分掺合本发明化合物(30g)、第二药剂(20g)、440g喷雾干燥的乳糖以及10g硬脂酸镁，并且如上文所描述进行处理。
用于经口投与的示例性明胶胶囊调配物
将本发明化合物(100mg)与聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯(50mg)和淀粉粉末(250mg)充分掺合。接着将混合物装入明胶胶囊中(每胶囊400mg组合物)。或者，将本发明化合物(70mg)和第二药剂(30mg)与聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯(50mg)和淀粉粉末(250mg)充分掺合，并且将所得混合物装入明胶胶囊中(每胶囊400mg组合物)。
或者，将本发明化合物(40mg)与微晶纤维素(艾维素(Avicel)PH 103；259.2mg)和硬脂酸镁(0.8mg)充分掺合。接着将混合物装入明胶胶囊(1号尺寸，白色，不透明)中(每胶囊300mg组合物)。
用于经口投与的示例性片剂调配物
使本发明化合物(10mg)、淀粉(45mg)以及微晶纤维素(35mg)穿过20号目美国筛，并且充分混合。因此生产的颗粒在50℃-60℃下干燥，并且穿过16号目美国筛。将聚乙烯吡咯烷酮溶液(4mg于无菌水中的10％溶液)与羧甲基淀粉钠(4.5mg)、硬脂酸镁(0.5mg)以及滑石(1mg)混合，并且接着使这一混合物穿过16号目美国筛。接着向颗粒中添加羧甲基淀粉钠、硬脂酸镁以及滑石。在混合之后，在压片机上压缩混合物以得到重量是100mg的片剂。
或者，将本发明化合物(250mg)与微晶纤维素(400mg)、烟雾状二氧化硅(10mg)以及硬脂酸(5mg)充分掺合。接着压缩混合物以形成片剂(每片剂665mg组合物)。
或者，将本发明化合物(400mg)与玉米淀粉(50mg)、交联羧甲纤维素钠(25mg)、乳糖(120mg)以及硬脂酸镁(5mg)充分掺合。接着压缩混合物以形成单刻痕片剂(每片剂600mg组合物)。
或者，用明胶水溶液(20mg)将本发明化合物(100mg)与玉米淀粉(100mg)充分掺合。干燥混合物，并且研磨成细粉末。接着将微晶纤维素(50mg)和硬脂酸镁(5mg)与明胶调配物混合，粒化，并且压缩所得混合物以形成片剂(每片剂100mg本发明化合物)。
用于经口投与的示例性悬浮液调配物
混合下列成分以形成每10mL悬浮液含有100mg本发明化合物的悬浮液：
用于经口投与的示例性液体调配物
适合液体调配物是一种含有基于羧酸的缓冲剂(如柠檬酸盐、乳酸盐以及马来酸盐缓冲溶液)的调配物。举例来说，将本发明化合物(其可以与DMSO预混)与100mM柠檬酸铵缓冲剂掺合并且将pH调节到pH 5，或与100mM柠檬酸溶液掺合并且将pH调节到pH 2。此类溶液还可以包括增溶性赋形剂(如环糊精)，例如溶液可以包括10wt％羟丙基-β-环糊精。
其它适合调配物包括含有或不含有环糊精的5％NaHCO3溶液。
用于注射投与的示例性可注射调配物
将本发明化合物(0.2g)与0.4M乙酸钠缓冲溶液(2.0mL)掺合。视需要使用0.5N盐酸水溶液或0.5N氢氧化钠水溶液将所得溶液的pH调节到pH 4，并且接着添加足够注射用水以提供20mL的总体积。接着经由无菌过滤器(0.22微米)过滤混合物，以提供适合于注射投与的无菌溶液。
用于吸入投与的示例性组合物
将本发明化合物(0.2mg)微粉化，并且接着与乳糖(25mg)掺合。接着将这一掺合的混合物装入明胶吸入筒中。举例来说，使用干粉吸入器来投与所述筒的内容物。
或者，将微粉化的本发明化合物(10g)分散在通过将卵磷脂(0.2g)溶解于去矿物质水(200ml)中所制备的溶液中。喷雾干燥所得悬浮液，并且接着经微粉化以形成包含平均直径小于约1.5μm的粒子的微粉化组合物。接着将微粉化组合物装入含有加压的1,1,1,2-四氟乙烷的定量剂量的吸入器筒中，当用所述吸入器投与时，1,1,1,2-四氟乙烷的量足以提供每剂量约10μg到约500μg本发明化合物。
或者，将本发明化合物(25mg)溶解于柠檬酸盐缓冲(pH 5)的等渗盐水(125mL)中。搅拌混合物并且进行超声处理直到化合物溶解。检查溶液的pH，并且必要时通过缓慢添加1N NaOH水溶液来将pH调节到pH 5。使用每剂量提供约10μg到约500μg本发明化合物的喷雾器装置来投与溶液。
实例
提供以下制备和实例以说明本发明的特定实施例。然而，除非特定指明，否则这些特定实施例并不意图以任何方式限制本发明的范围。
除非另外指明，否则以下缩写具有以下含义，并且本文所使用但未定义的任何其它缩写都具有其一般接受的标准含义：
AcOH 乙酸
BOC 叔丁氧基羰基(-C(O)OC(CH3)3)
(BOC)2O 二碳酸二叔丁酯
Bn 苯甲基
CDI N,N"-羰基二咪唑
CPME 环戊基甲基醚
DBU 1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一-7-烯
DCC 1,3-二环己基碳化二亚胺
DCM 二氯甲烷或氯化甲烷
DIAD 偶氮二甲酸二异丙酯
DIPE 二异丙醚
DIPEA N,N-二异丙基乙胺
DMAP 4-二甲氨基吡啶
DMF N,N-二甲基甲酰胺
EDC 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺
EDTA 乙二胺四乙酸
Et3N 三乙胺
EtOH 乙醇
Et2O 乙醚
EtOAc 乙酸乙酯
HATU N,N,N',N'-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)脲六氟磷酸酯
HOBt 1-羟基苯并三唑
MeCN 乙腈
MeOH 甲醇
NaHMDS 双(三甲基硅烷基)酰胺钠
Pd/C 钯/碳
Pd(dppf)2Cl2 1,1-双(二苯基膦基)二茂铁氯化钯
Pd(PPh3)4 四(三苯基膦)钯(0)
PE 石油醚
PPh3 三苯膦
TFA 三氟乙酸
THF 四氢呋喃
除非另外提及，否则所有材料(如试剂、起始物质以及溶剂)都购自商业供应商(如西格玛-奥德里奇(Sigma-Aldrich)、福鲁卡里德尔-德哈恩(Fluka Riedel-de )等)，并且不经进一步纯化即使用。
除非另外提及，否则反应在氮气气氛下进行。通过薄层色谱法(TLC)、分析型高效液相色谱法(anal.HPLC)以及质谱分析监测反应进程，其细节在特定实例中给出。通常，用于分析型HPLC的溶剂如下：溶剂A是98％H2O/2％MeCN/1.0mL/L TFA；溶剂B是90％MeCN/10％H2O/1.0mL/L TFA。
如例如在各制备中具体描述来处理反应；通常通过萃取和其它纯化方法(如温度依赖性和溶剂依赖性结晶以及沉淀)来纯化反应混合物。另外，通过制备型HPLC来常规纯化反应混合物，通常使用Microsorb C18和Microsorb BDS柱填充物和常规洗脱液。通常通过液相色谱质谱(LCMS)来测量反应进程。通过核欧佛豪瑟效应光谱法(Nuclear Overhausereffect spectroscopy，NOE)进行异构体表征。通过质谱和1H-NMR光谱法常规进行反应产物的表征。对于NMR测量来说，样品溶解于氘化溶剂(CD3OD、CDCl3或DMSO-d6)中，并且在标准观测条件下用瓦里安双子座(Varian Gemini)2000仪器(400MHz)获得1H-NMR光谱。通常用应用生物系统公司(Applied Biosystems)(加利福尼亚州福斯特市(Foster City,CA))型号API 150EX仪器或安捷伦(Agilent)(加利福尼亚州帕洛阿尔托市(Palo Alto,CA))型号1200LC/MSD仪器，使用电喷雾电离法(ESMS)来进行化合物的质谱鉴别。
应理解，制备和实例中描述的许多化合物可以互变异构体形式存在，且打算涵盖两种形式。举例来说，(2R,4R)-2-氨基-5-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基)-2-甲基-4-[(3H-[1,2,3]三唑-4-羰基)氨基]戊酸和(2S,4R)-2-氨基-5-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基)-2-甲基-4-[(3H-[1,2,3]三唑-4-羰基)氨基]戊酸描绘在实例1中(异构体a和b)，但应理解，这些化合物可以互变异构体形式存在，例如作为(2R,4R)-2-氨基-5-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基)-2-甲基-4-[(1H-[1,2,3]三唑-4-羰基)氨基]戊酸和(2S,4R)-2-氨基-5-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基)-2-甲基-4-[(1H-[1,2,3]三唑-4-羰基)氨基]戊酸。
制备1：(3S,5R)-5-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基甲基)-3-羟基甲基-3-甲基吡咯烷-2- 酮
将(R)-2-氨基-3-(4-溴苯基)丙酸(3300g，13.5mol，1.0当量)于MeCN(46.2L)中的溶液进料到已用惰性氮气气氛净化和维持的反应烧瓶中。在-10℃下分数批添加NaOH(1081g，27.0mol，2.0当量)于水(46.2L)中的溶液。向其中添加二碳酸二叔丁酯(2948g，13.51mol，1.0当量)于MeCN(6.6L)中的溶液。在室温下搅拌所得溶液过夜，接着在真空中浓缩。所得溶液用45L水/冰稀释。用HCl(1mol/L)将溶液pH值调节到2。用DCM(3×50L)萃取所得溶液且合并有机层。所得混合物用NaCl饱和水溶液(50L)洗涤，接着经MgSO4干燥且在真空中浓缩，得到呈白色固体状的化合物1(3720g)。
将化合物1(530g，1.54mol，1.0当量)于二噁烷(9.54L)中的溶液与(5-氯-2-氟苯基)硼酸(348g，2.0mol，1.3当量)、Na2CO3(228g，2.2mol，1.4当量)于水(1.1L)中的溶液以及Pd(PPh3)4(8.9g，7.7mmol，0.01当量)组合在已用惰性氮气气氛净化和维持的反应烧瓶中。在油浴中加热所得溶液到回流后维持2.5小时，接着用水/冰浴冷却到室温。用EtOAc(15L)稀释所得溶液，用1N HCl(5L)和NaCl饱和水溶液(4×5L)洗涤。合并的有机物接着经MgSO4干燥且在真空中浓缩。接着用PE(2×1L)洗涤残余物，得到呈棕色油状物的化合物2(510g)。
将化合物2(510g，1.3mol，1.0当量)于DCM(5L)中的溶液与2,2-二甲基-1,3-二噁烷-4,6-二酮(205g，1.4mol，1.1当量)和4-二甲氨基吡啶(237g，1.9mol，1.5当量)组合在已用惰性氮气气氛净化和维持的反应烧瓶中。在-10℃下在搅拌下逐滴添加DCC(294g，1.4mol，1.1当量)于DCM(600mL)中的溶液。将所得溶液在室温下搅拌过夜。过滤固体且用1NHCl(2L)和NaCl饱和水溶液(3L)洗涤滤液。合并的有机物经MgSO4干燥。过滤固体，得到作为滤液的化合物3，其不经进一步纯化即直接用于下一步骤。
将化合物3于DCM中的溶液(7L，粗物质)与AcOH(600mL)组合于已用惰性氮气气氛净化和维持的反应烧瓶中。在-5℃下分数批添加NaBH4(88.8g，2.4mol，1.8当量)。在-5℃下搅拌所得溶液3小时。接着通过逐滴添加NaCl饱和水溶液(1L)淬灭反应物。所得溶液用NaCl饱和水溶液(2L)稀释，且所得混合物用水(2×2L)、NaHCO3(1L)和NaCl饱和水溶液(2L)洗涤。合并的有机物经MgSO4干燥且在真空中浓缩，得到呈黄色油状物的化合物4(520g)。
将化合物4(520g，1.0mol，1.0当量)于丙酮/DMF(1:1)(5.2L)中的溶液与Na2CO3(163g，1.5mol，1.5当量)和碘代甲烷(219g，1.5mol，1.5当量)组合于已用惰性氮气气氛净化和维持的反应烧瓶中。在室温下搅拌所得溶液过夜，接着用水(15L)稀释。搅拌1小时后，通过过滤收集固体。将残余物溶解于DCM(5L)中。合并的有机物经MgSO4干燥且在真空中浓缩，得到呈黄色固体状的化合物5(520g)。
将化合物5(520g，1.0mol，1.0当量)于CPME(2.6L)中的溶液置于已用惰性氮气气氛净化和维持的反应烧瓶中。在-5℃下添加4N HCl于CPME(2.6L)中的溶液。在室温下搅拌所得溶液过夜，接着在真空中浓缩到所述体积的一半(得到化合物6)。通过过滤收集固体，接着用EtOAc与DIPE的1:2混合物洗涤，得到呈灰白色固体状的化合物7(220g)。
将化合物7(218g，602.5mmol，1.0当量)于THF(4L)中的溶液和N-甲基吗啉(170g，1.7mol，2.8当量)放入已用惰性氮气气氛净化和维持的反应烧瓶中。在-5℃下在搅拌下逐滴添加氯甲酸2-甲基丙酯(164.4g，1.2mol，2.0当量)。在-5℃下搅拌所得溶液20分钟。接着在-5℃下在搅拌下逐滴添加NaBH4(91.5g，2.4mol，4.0当量)于水(400mL)中的溶液。在室温下再搅拌所得溶液1小时。接着通过逐滴添加1N HCl(2.6L)淬灭反应物，且搅拌所得混合物1小时，且接着在真空中浓缩。接着再搅拌残余混合物1小时，且接着通过过滤收集固体。固体用水洗涤，溶解于THF中，经Na2SO4干燥，且在真空中浓缩，得到呈白色固体状的标题化合物(170g)。
制备2：(2S,4R)-4-氨基-2-(苯甲氧基羰基氨基甲基)-5-(5'-氯-2'-氟联苯-4- 基)-2-甲基戊酸
将(3S,5R)-5-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基甲基)-3-羟基甲基-3-甲基吡咯烷-2-酮(200mg，575μmol)与戴斯-马丁高碘烷(Dess-Martin periodinane)(317mg，748μmol)和DCM(10mL)组合，且搅拌过夜。添加NaHCO3饱和水溶液，过滤固体，且滤液用DCM萃取。在真空中蒸发溶剂，且残余物通过正相色谱(0-60％EtOAc/己烷)纯化，得到化合物1(200mg)。
向化合物1(200mg，578μmol)于MeOH(15mL)中的溶液中添加乙酸铵(446mg，5.8mmol)，且在60℃下搅拌溶液2小时。将混合物冷却到0℃，且添加氰基硼氢化钠(58.2mg，925μmol)，且搅拌过夜。反应物用NH4OH饱和水溶液淬灭，且用DCM(30mL)萃取。有机萃取物在真空中浓缩，且残余物通过反相色谱纯化，得到化合物2(90mg，经2个步骤45％产率)。
含化合物2(90mg，259μmol)的DCM(3mL)依序与氯甲酸苯甲酯(44.5μL，311μmol)和Et3N(109μL，778μmol)组合。将混合物搅拌10分钟，且通过正相色谱(0-60％EtOAc/己烷)纯化，得到作为主要产物的化合物3(15mg，12％产率)。
将化合物3(15mg，31μmol)溶解于THF(3mL)中。从反应烧瓶移除空气，且所述反应烧瓶接着用氮气净化。使溶液冷却到0℃，且添加双(三甲基硅烷基)酰胺钠(1.1当量)。将混合物从0℃到室温搅拌10分钟，且接着添加(BOC)2O(8.0μL，34μmol)。将混合物搅拌15分钟，得到化合物4，其直接用于下一步骤。
将粗化合物4溶解于NaOH(12.4μL，186μmol)、水(10mL)和THF(10mL)中，且将混合物搅拌5小时。添加EtOAc(25mL)，且添加浓HCl，直到溶液在pH 5下。有机层经萃取，经MgSO4干燥，过滤且蒸发到干燥。产物通过正相色谱(50-100％EtOAc/己烷)纯化，得到化合物5(14mg，经2个步骤75％产率)。
将化合物5(14mg，23μmol)溶解于MeCN(1mL)和含4N HCl的二噁烷(0.4mL)中，且搅拌20分钟。蒸发溶剂，得到呈盐酸盐形式的标题化合物(11mg)，其不经进一步纯化即使用。
制备3：(2S,4R)-4-叔丁氧基羰基氨基-5-(5'-氯-2'-氟-联苯-4-基)-2-二烯丙基 氨基甲基-2-甲基戊酸烯丙酯
向(3S,5R)-5-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基甲基)-3-羟基甲基-3-甲基吡咯烷-2-酮(2.0g，5.8mmol)于DCM(100mL)中的溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(3.3g，7.5mmol)，且在室温下搅拌所述溶液1.5小时。混合物接着用1M NaOH(2×50mL)、水(50mL)和NaCl饱和水溶液(50mL)洗涤。合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并且真空浓缩。残余物通过正相色谱(0-60％EtOAc/己烷)纯化，得到呈白色泡沫状的化合物1(0.64g，32％产率)。
向化合物1(90.5mg，262μmol)于DCM(920μL)和MeOH(460μL)中的溶液中添加AcOH(460μL)。添加二烯丙基胺(99％；CAS号124-02-7；161μL，1.3mmol)，且在室温下搅拌溶液1小时。添加氰基硼氢化钠(99mg，1.60mmol)，且将溶液加热到40℃，且在此温度下搅拌过夜。接着在真空中浓缩混合物，且残余物通过反相柱色谱纯化。将所需洗脱份合并且冻干，得到化合物6(25mg，22％产率)。
将化合物6(25mg，59μmol)于THF(6.0mL)中的溶液冷却到0℃，且添加NaHMDS(64μL，64μmol)。在此温度下搅拌10分钟后，添加(BOC)2O(15μL，64μmol)。使溶液升温到室温，并且搅拌3小时。在此时间之后，通过LC/MS观察到完全转化。将水(6.0mL)添加到溶液中，紧接着添加NaOH(23μL，351μmol)。产物通过反相柱色谱(30-90％；15mL)纯化，且将所需洗脱份合并且冻干，得到化合物7(14.5mg，45％产率)。
将化合物7(14.5mg，27μmol)和K2CO3(4.0mg，29μmol)于DMF(270μL)中的溶液冷却到0℃，且添加烯丙基溴(2.5μL，29μmol)。使溶液升温到室温，且在此温度下搅拌过夜。浓缩溶液，得到标题化合物，其不经进一步纯化即使用。
制备4：(2S,4R)-4-氨基-2-氨甲酰基-5-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基)-2-甲基戊酸
将(3R,5R)-5-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基甲基)-3-甲基-2-氧代吡咯烷-3-甲酸(60mg，166μmol)和HATU(69.4mg，182μmol)溶解于DMF(3mL)中，且在室温下搅拌20分钟。接着添加0.5M氨于二噁烷(1.2当量)和DIPEA(87μL，498μmol)中的溶液。在室温下搅拌混合物15分钟，此时LCMS指示所需化合物的质量。混合物接着在真空中浓缩，且残余物通过反相色谱纯化，得到化合物1(50mg，84％产率)。
将化合物1(50mg，139μmol)溶解于THF(6mL)中。从反应烧瓶移除空气，且所述反应烧瓶接着用氮气净化。使溶液冷却到0℃，且添加双(三甲基硅烷基)酰胺钠(443μL，443μmol)。将混合物从0℃到室温搅拌10分钟。接着添加(BOC)2O(103mL，443μmol)，且在室温下搅拌混合物1小时，此时LCMS指示所需化合物的质量，得到呈盐酸盐形式的化合物2(63.9mg)，其不经纯化即直接用于下一步骤。
将粗化合物2(63.9mg，139μmol)溶解于10N NaOH水溶液中以达到pH约12。在室温下搅拌混合物过夜，此时LCMS指示所需化合物的质量。接着在真空中浓缩混合物。添加EtOAc，紧接着添加1N HCl水溶液以达到pH 5。有机层经萃取，经MgSO4干燥，过滤且蒸发。残余物通过正相柱色谱纯化，得到化合物3(32mg，48％产率)。
将化合物3(32mg，0.1mmol)溶解于MeCN(3mL)中。添加4N HCl于二噁烷(250μL，1.0mmol)中的溶液，且在室温下搅拌混合物10分钟，此时LCMS指示所需化合物的质量。在真空中浓缩混合物，得到呈盐酸盐形式的标题化合物，其不经纯化即使用。
制备5：2-[(R)-2-氨基-3-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基)丙基]-2-甲基丙二酸
将(3R,5R)-5-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基甲基)-3-甲基-2-氧代吡咯烷-3-甲酸(600mg，1.7mmol)和HATU(694mg，1.8mmol)溶解于DMF(3mL)中，且在室温下搅拌20分钟。接着添加0.5M氨于二噁烷(4mL，2.0mmol)和DIPEA(869μL，5.0mmol)中的溶液，且在室温下搅拌混合物45分钟，此时LCMS指示所需化合物的质量。在真空中浓缩混合物，且残余物通过反相色谱纯化，得到化合物1(365mg，61％产率)。
将化合物1(365mg，1.0mmol)溶解于THF(6mL)中。从反应烧瓶移除空气，且所述反应烧瓶接着用氮气净化。使溶液冷却到0℃，且接着添加双(三甲基硅烷基)酰胺钠(2.2mL，2.2mmol)。将混合物从0℃到室温搅拌10分钟。接着添加(BOC)2O(517μL，2.2mmol)，且在室温下搅拌混合物1小时，此时LCMS指示所需化合物的质量，得到呈盐酸盐形式的化合物2，其不经纯化即直接用于下一步骤。
将粗化合物2(466mg，1.0mmol)溶解于10N NaOH水溶液(809μL，8.1mmol)中以达到pH约12。在室温下搅拌混合物过夜。LC/MS指示呈约50:50比率的化合物3和4的质量。在真空中浓缩混合物。添加EtOAc，紧接着添加1N HCl水溶液以达到pH 4-5。分离有机层，经MgSO4干燥，过滤且蒸发。残余物通过正相柱色谱纯化，得到化合物3(100mg，20％产率)和化合物4(329mg，68％产率)。
将化合物4(15mg，31μmol)溶解于MeCN(1.5mL)中。添加4N HCl于二噁烷(117μL，469μmol)中的溶液，且在室温下搅拌混合物10分钟，此时LCMS指示所需化合物的质量。在真空中浓缩混合物，得到呈盐酸盐形式的标题化合物，其不经进一步纯化即使用。
制备6：5-氧代-4,5-二氢-[1,2,4]噁二唑-3-甲酸
向氮基乙酸甲酯(9g，106mmol)于MeOH(100mL)和水(100ml)中的溶液中添加NH2OH·HCl(11g，159mmol)和Na2CO3(11g，106mmol)。在室温下搅拌混合物2小时。在真空中移除有机溶剂，且用DCM(8×100mL)萃取水层。合并的有机层经MgSO4干燥，过滤并且浓缩，得到呈白色固体状的化合物1(5.7g)。LC-MS:[M+H]+:119。
将CDI(9.4g，58mmol)和DBU(8.7g，58mmol)添加到化合物1(5.7g，48mmol)于1,4-二噁烷(50mL)中的溶液中，且在80℃下搅拌所得混合物2小时。反应物用HCl淬灭，浓缩且用DCM(8×100mL)萃取。合并的有机层经浓缩且通过正相柱色谱(DCM:MeOH＝80:1)纯化，得到呈黄色油状物的化合物2(3g)。LC-MS:[M+H]+:145。
将LiOH(0.5g，20.8mmol)添加到化合物2(3g，20.8mmol)于水(30mL)中的溶液中，且在室温下搅拌所得混合物3小时。混合物用EtOAc(2×20mL)洗涤，且接着用1M HCl酸化到pH＝3，且浓缩。残余物接着从AcOH再结晶，得到呈白色固体状的标题化合物(2g)。LC-MS:[M+H]+:131。
制备7：(2S,4R)-4-叔丁氧基羰基氨基-5-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基)-2-羟基甲基- 2-甲基戊酸乙酯
将(2S,4R)-5-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基)-2-羟基甲基-2-甲基-4-甲基氨基-戊酸(1.0g，2.2mmol)与HOBt(1.0g，6.7mmol)、EDC(1.5mL，6.7mmol)和EtOH(5.2mL，89mmol)组合，且在室温下搅拌10分钟。添加4-甲基吗啉(982μL，8.9mmol)，且将溶液搅拌过夜。在真空中移除溶剂，且残余物通过正相柱色谱(0-60％EtOAc/己烷)纯化，得到标题化合物(380mg，35％产率)。
制备8：(2S,4R)-4-氨基-5-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基)-2-甲氧基甲基-2-甲基戊酸 乙酯
将(2S,4R)-4-叔丁氧基羰基氨基-5-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基)-2-羟基甲基-2-甲基戊酸乙酯(415mg，840μmol)和硫酸氢四丁基铵(57mg，168μmol)溶解于DCM(3mL)和10NNaOH(588μL，5.9mmol)中。添加硫酸二甲酯(424mg，3.4mmol)，且密封反应烧瓶且剧烈搅拌过夜。混合物用DCM和水萃取，通过正相柱色谱(0-60EtOAc:己烷)纯化，且在减压下浓缩，得到化合物1(220mg，52％产率)。
将化合物1(88mg，173μmol)溶解于MeCN(1mL)和含4N HCl的二噁烷(0.3mL)中，且在室温下搅拌10分钟，接着在减压下浓缩，得到呈盐酸盐形式的标题化合物(34mg)。
制备9：(2S,4R)-4-叔丁氧基羰基氨基-5-(-3'-氯联苯-4-基)-2-羟基甲基-2-甲 基戊酸乙酯
在0℃下向[(S)-1-(4-溴-苯甲基)-2-(2,2-二甲基-4,6-二氧代-[1,3]二噁烷-5-基)乙基]氨基甲酸叔丁酯(44g，96mmol)和K2CO3(17.3g，125mmol)于DMF(320mL)中的混合物中逐滴添加CH3I(27.4g，193mmol)。在室温下搅拌混合物4小时，用水(1L)稀释，且用EtOAc(3×200mL)萃取。合并的有机层用NaCl饱和水溶液(1L)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗产物，所述粗产物进一步通过用Et2O(100mL)洗涤来纯化，得到呈白色固体状的化合物1(37g)。LC-MS:[M-Boc+H]+:370,372。
在60℃下搅拌化合物1(15g，31.9mmol)、3-氯苯基硼酸(5.5g，35.1mmol)、KF(3.7g，63.8mmol)和Pd(dppf)Cl2(700mg，950μmol)于1,4-二噁烷(150mL)和水(150mL)中的混合物过夜。在蒸发溶剂之后，混合物用EtOAc(3×200mL)萃取。合并的有机层用NaCl饱和水溶液(0.7L)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗产物，所述粗产物进一步通过正相柱色谱(PE:EtOAc＝8:1)纯化，得到呈白色固体状的化合物2(9g)。LC-MS:[M-Boc+H]+:402。
钐粉末(72g，480mmol)用氩气冲洗20分钟。添加无水THF(250mL)，并且用氩气向所得悬浮液鼓泡15分钟。添加碘(97g，384mmol)，并且再次用氩气冲洗烧瓶10分钟。烧瓶以铝箔覆盖且在70℃下加热过夜，得到蓝色溶液。将新鲜制备的SmI2溶液冷却到室温且直接使用。
将化合物2(8g，16mmol)于无水THF(200mL)和水(100mL)中的溶液密封且脱气。SmI2溶液(1.6L)经由套管添加到冷却的溶液中，且在室温下搅拌2小时。浓缩混合物，且添加10％柠檬酸(60mL)。混合物用EtOAc(4×100mL)萃取，且合并的有机层用Na2SO4干燥，浓缩，且通过正相柱色谱(PE:EtOAc＝2:1与1％AcOH)纯化，得到呈白色固体状的化合物3(3.2g)。LC-MS:[M-Boc+H]+:348。
向化合物3(3.2g，7.1mmol)和Ag2O(2.5g，10mmol)于MeCN(100mL)中的溶液中添加乙基碘(2.2g，14mmol)。在室温下搅拌混合物2小时。过滤混合物，且滤液经浓缩且通过硅胶色谱(PE:EtOAc＝2:1)纯化，得到呈白色固体状的标题化合物(3.7g)。LC-MS:[M-Boc+H]+:376。1H NMR(400MHz,DMSO):7.67(1H,s),7.61-7.59(3H,m),7.50-7.46(1H,m),7.41-7.39(1H,m),7.25(2H,d,J＝8.0Hz),6.56(1H,d,J＝12Hz),4.74-4.71(1H,m),4.01-3.95(2H,m),3.75-3.65(1H,m),3.42-3.32(2H,m),2.65-2.62(2H,m),1.75-1.55(2H,m),1.27(9H,s),1.13(3H,t,J＝7.5Hz),1.11(3H,s)。
制备10：(2S,4R)-5-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基)-2-羟基甲基-2-甲基-4-甲基氨基 戊酸
化合物1如本文中所述制备。
在60℃下搅拌化合物1(10.5g，22.3mmol)、5-氯-2-氟苯基硼酸(4.3g，24.6mmol)、KF(2.6g，44.7mmol)和Pd(dppf)Cl2(490mg，670μmol)于1,4-二噁烷(100mL)和水(100mL)中的混合物过夜。浓缩混合物，用水(100mL)稀释，且用EtOAc(2×100mL)萃取。合并的有机层用NaCl饱和水溶液(0.5L)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗产物，所述粗产物进一步通过正相柱色谱(PE:EtOAc＝8:1)纯化，得到呈白色固体状的化合物2(9.5g)。
钐粉末(60g，400mmol)用氩气冲洗。添加无水THF(1.6L)，且所得悬浮液用氩气鼓泡。添加碘(81g，320mmol)，且烧瓶再用氩气冲洗。烧瓶接着在66℃下加热过夜，得到蓝色溶液。将新鲜制备的SmI2溶液冷却到室温且直接使用。
将化合物2(8g，15.4mmol)于无水THF(200mL)和水(100mL)中的溶液密封，且用氩气冲洗，接着冷却到-30℃。将SmI2溶液(1.6L)添加到冷却的溶液中，且在室温下搅拌1.5小时。浓缩混合物，且添加10％柠檬酸(500mL)。混合物用EtOAc(2×300mL)萃取，经Na2SO4干燥且过滤。浓缩有机层，且残余物通过柱色谱(DCM:EtOAc＝5:1)纯化，得到呈白色固体状的标题化合物(3.6g)。LC-MS:[M+Na]+:488。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.42(dt,J＝5.8,2.9Hz,2H),7.36(dd,J＝7.0,2.1Hz,1H),7.26(s,1H),7.22(t,J＝3.4Hz,1H),7.06(dd,J＝9.8,8.8Hz,1H),6.79(d,J＝10.4Hz,1H),4.06(dd,J＝17.5,9.2Hz,2H),3.47(d,J＝11.5Hz,1H),2.68(m,2H),2.15(m,2H),1.28(m,12H)。
制备11：(2S,4R)-4-氨基-5-(-3'-氯联苯-4-基)-2-乙氧基甲基-2-甲基戊酸乙酯
将(2S，4R)-4-叔丁氧基羰基氨基-5-(-3'-氯联苯-4-基)-2-羟基甲基-2-甲基戊酸乙酯(1.4g，3.0mmol)与10N NaOH(2.1mL，21.2mmol)、DCM(16mL)和硫酸氢四丁基铵(206mg，607μmol)组合，紧接着与硫酸二乙酯(1.9g，12.2mmol)组合。给反应烧瓶加盖，且剧烈搅拌过夜。物质用DCM和水萃取。混合物在减压下浓缩且通过正相柱色谱(0-100％EtOAc/己烷)纯化，得到化合物1(450mg，29％产率)。
将化合物1(290mg，575μmol)溶解于MeCN(4mL)和含4N HCl的二噁烷(2mL)中，且搅拌10分钟。接着在减压下浓缩溶液，得到呈盐酸盐形式的标题化合物。
制备12：(2S,4R)-4-叔丁氧基羰基氨基-5-(5'-氯-2'-氟-联苯-4-基)-2-乙氧基 甲基-2-甲基戊酸
向(3S,5R)-5-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基甲基)-3-羟基甲基-3-甲基吡咯烷-2-酮(4.0g，11.5mmol)于丙酮(80mL)中的溶液中添加NaOH(23mL，115mmol)和硫酸二乙酯(2.2g，13.8mmol)。在室温下搅拌混合物3天。混合物接着用水(80mL)和EtOAc(50mL)稀释，且水层用EtOAc(3×50mL)萃取。合并的有机相经Na2SO4干燥，过滤，浓缩。残余物通过柱色谱(PE:EtOAc＝1:1.5)纯化，得到呈黄色油状物的化合物1(1.9g)。LC-MS:[M+H]+:376。
将化合物1(1.6g，4.3mmol)溶解于THF(15mL)中，且用氮气净化，紧接着冷却到0℃。添加NaHMDS(6.4mL，6.4mmol)，且所得混合物从0℃到室温搅拌30分钟。添加(BOC)2O(1.4g，6.4mmol)，且搅拌混合物30分钟；含有化合物2的所得溶液不经任何进一步处理即使用。LC-MS:[M+Na]+:498。
将化合物2的粗溶液与NaOH(4.2mL，42mmol)组合且在室温下搅拌过夜。添加EtOAc(50mL)，且混合物用1N HCl酸化到pH 5。层经萃取(2×30mL)，经Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到呈无色泡沫状的标题化合物(1.7g)。LC-MS:[M+Na]+:516。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.39(m,3H),7.24(m,3H),7.03(m,2H),3.91(s,1H),3.74(d,J＝9.3Hz,1H),3.52(m,3H),2.71(ddd,J＝21.9,13.3,6.8Hz,2H),2.04(dd,J＝15.5,10.7Hz,1H),1.85(d,J＝13.0Hz,1H),1.23(m,15H)。
制备13：[(S)-1-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基甲基)-2-(2,2-二甲基-4,6-二氧代-[1, 3]二噁烷-5-基)-乙基]氨基甲酸叔丁酯
向0-5℃(R)-2-叔丁氧基羰基氨基-3-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基)-丙酸(25.0g，63.5mmol)、米氏酸(Meldrum's acid)(10.1g，69.8mmol，1.1当量)和DMAP(11.6g，95mmol，1.5当量)于DCM(250mL)中的溶液中逐滴添加DCC(14.4g，69.8mmol，1.1当量)于DCM(25mL)中的溶液。在0-5℃下搅拌混合物过夜。将所得悬浮液过滤，且滤液用1.0M HCl(200mL)和NaCl饱和水溶液(150mL)洗涤，接着经Na2SO4干燥，且过滤，得到粗琥珀色溶液。
将AcOH(22mL，380mmol，6当量)添加到粗溶液中，接着经三分钟分三份添加NaBH4(4.3g，114mmol，1.8当量)，且在室温下搅拌所得混合物三小时。反应物接着用逐滴添加的NaCl饱和水溶液(100mL)淬灭，且有机层依序用NaCl饱和水溶液(200mL)、水(2×200mL)、NaHCO3饱和水溶液(200mL)和NaCl饱和水溶液(200mL)洗涤，随后经Na2SO4干燥，过滤，且在真空中浓缩，得到呈黄色油状物的标题化合物。
制备14：(R)-4-氨基-5-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基)-2-乙基-2-羟基甲基戊酸(异构 体a和b)
将[(S)-1-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基甲基)-2-(2,2-二甲基-4,6-二氧代-[1,3]二噁烷-5-基)-乙基]氨基甲酸叔丁酯(300mg，594μmol，1.0当量)溶解于DMF(3mL)中，且将所得溶液冷却到0℃。添加碳酸钾(164mg，654μmol，1.1当量)，且在0℃下搅拌混合物15分钟，接着添加碘乙烷(102mg，694μmol，1.2当量)，且在室温下搅拌混合物过夜。将混合物接着加热到50℃后持续4小时，且当完成(如通过LC/MS分析所测定)时，反应物用水(20mL)淬灭。添加EtOAc(20mL)，且分离各相。用EtOAc(20mL)萃取水相。合并有机相，且经Na2SO4干燥，且在真空中浓缩，得到粗化合物1(300mg)。所述物质不经进一步纯化即用于下一步骤。LCMS(ESI):计算值C28H33ClFNO6＝534；观测值M+H＝534.0。保留时间：4.15分钟。(LC/MS方法2)。
将化合物1(300mg，594μmol，1.0当量)溶解于含4M HCl(10mL)的对二噁烷中，且在室温下搅拌30分钟，且当反应完成(如通过LC/MS分析所测定)时，将溶液在真空中浓缩到接近干燥。粗物质用水(2mL)处理，且接着在真空中浓缩。所得油状物在真空中与甲苯(2×15mL)共沸，得到粗化合物2(160mg)。LCMS(ESI):计算值C20H19ClFNO3＝375；观测值M+H＝375.9。保留时间：3.19分钟。(LC/MS方法2)。
将化合物2(160mg，427μmol，1.0当量)溶解于THF(5mL)中，且添加N-甲基吗啉(210μL，854μmol，2.0当量)。将所得混合物冷却到0℃后持续15分钟，接着逐滴添加氯甲酸异丁酯(210μL，1900μmol，4.4当量)，且在0℃下搅拌溶液15分钟。分三份添加NaBH4(65mg，1.7mmol，4.0当量)于水(2mL)中的溶液，在每次添加中间允许一分钟。在0℃下搅拌混合物十分钟，且当完成(如通过LC/MS分析所测定)时，反应物用NaHCO3饱和水溶液(5mL)淬灭且允许升温到室温。添加EtOAc，且分离各相。水相用另一份EtOAc萃取，且合并的有机相经Na2SO4干燥且浓缩。粗物质通过柱色谱(100％EtOAc，硅胶柱)纯化，得到两种异构体：化合物3a(50mg)(较晚洗脱)和化合物3b(55mg)(较早洗脱)。LCMS(ESI):计算值C20H21ClFNO2＝361；观测值M+H＝362.1。保留时间：5.24分钟。(LC/MS方法1)。
将化合物3a(50mg，140μmol，1.0当量)溶解于THF(2.0mL)中。将溶液冷却到-40℃，接着添加NaHMDS(1.0M，400μL，400μmol，2.9当量)，且在-40℃下搅拌所得混合物几分钟。接着添加二碳酸二叔丁酯(85mg，390μmol，2.8当量)，且在室温下搅拌所得溶液15小时，且当完成(如通过LC/MS分析所测定)时，反应物用几滴水淬灭，且浓缩，得到粗化合物4a(100mg)。LCMS(ESI):计算值C30H37ClFNO6＝562；观测值M+H＝561.9。保留时间：4.71分钟。(LC/MS方法2)。
将化合物4a(100mg，152μmol，1.0当量)溶解于1:1THF/H2O溶液(4mL)中。添加NaOH(150mg，3750μmol，24.7当量)，紧接着添加几滴MeOH。在室温下搅拌混合物过夜，且浓缩到干燥，得到粗化合物5a。LCMS(ESI):计算值C25H31ClFNO5＝479；观测值M+H＝479.9。保留时间：4.36分钟。(LC/MS方法2)。
将化合物5a溶解于含4M HCl(5mL)的1,4-二噁烷中，且在室温下搅拌两小时，且当完成(如通过LC/MS分析所测定)时，混合物在真空中浓缩且用水(1mL)处理。混合物再次在真空中浓缩且通过蒸发与甲苯共沸干燥，得到粗标题化合物(异构体a；85mg盐酸盐)，其不经进一步纯化即使用。LCMS(ESI):计算值C20H23ClFNO3＝379；观测值M+H＝380.1。保留时间：2.68分钟。(LC/MS方法2)。
将化合物3b(55mg，152μmol，1.0当量)溶解于THF(2.0mL)中。将溶液冷却到-40℃，接着添加NaHMDS(1.0M，380μL，380μmol，2.5当量)，且在-40℃下搅拌所得混合物几分钟。接着添加(BOC)2O(84mg，380μmol，2.0当量)，且在室温下搅拌所得溶液15小时，且当完成(如通过LC/MS分析所测定)时，反应物用几滴水淬灭，且浓缩，得到粗化合物4b(100mg)。LCMS(ESI):计算值C30H37ClFNO6＝562；观测值M+H＝562.4。保留时间：4.75分钟。(LC/MS方法2)。
将化合物4b(100mg，152μmol，1.0当量)溶解于1:1THF/H2O溶液(4mL)中。添加NaOH(150mg，3750μmol，24.7当量)，紧接着添加几滴MeOH。在室温下搅拌混合物过夜，且浓缩到干燥，得到粗化合物5b(产率未计算)。LCMS(ESI):计算值C25H31ClFNO5＝479；观测值M+H＝479.8min。保留时间：4.30分钟。(LC/MS方法2)。
将化合物5b溶解于含4M HCl(5mL)的1,4-二噁烷中，且在室温下搅拌两小时，且当反应完成(如通过LC/MS分析所测定)时，混合物在真空中浓缩且用水(1mL)处理。混合物再次在真空中浓缩且通过蒸发与甲苯共沸干燥，得到粗标题化合物(异构体b；85mg盐酸盐)，其不经进一步纯化即使用。LCMS(ESI):计算值C20H23ClFNO3＝379；观测值M+H＝380.2。保留时间：2.67分钟。(LC/MS方法2)。
LC/MS方法1：流动速率：1.5mL/min；缓冲液A：0.1％TFA/H2O；缓冲液B 0.1％TFA/MeCN；梯度洗脱从5％-100％B经9.6分钟，接着100％B持续1.0分钟，在254nm下检测。LC/MS方法2：流动速率：1.5mL/min；缓冲液A：0.1％TFA/H2O；缓冲液B 0.1％TFA/MeCN；梯度洗脱从5％-100％B经3.6分钟，接着100％B持续1.0分钟，在254nm下检测。
制备型HPLC：缓冲液A：0.1％TFA/H2O，缓冲液B：0.1％TFA/MeCN。
制备15：(R)-4-氨基-5-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基)-2-羟基甲基-2-丙基戊酸(异构 体a和b)
将[(S)-1-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基甲基)-2-(2,2-二甲基-4,6-二氧代-[1,3]二噁烷-5-基)-乙基]氨基甲酸叔丁酯(600mg，1190μmol，1.0当量)溶解于DMF(5mL)中，且将所得溶液冷却到0℃。添加碳酸钾(328mg，2380μmol，2.0当量)，且在0℃下搅拌混合物十分钟，接着添加烯丙基溴(120μL，1390μmol，1.2当量)，且在0℃下搅拌混合物30分钟，接着允许在室温下搅拌过夜，且当完成(如通过LC/MS分析所测定)时，反应物用NaCl饱和水溶液(10mL)淬灭。添加EtOAc(20mL)，且分离各相。用EtOAc(10mL)萃取水相。合并有机相，且经Na2SO4干燥，且在真空中浓缩，得到粗化合物1(720mg)。所述物质不经进一步纯化即用于下一步骤。LCMS(ESI):计算值C29H33ClFNO6＝545.9；观测值M+H＝546.0。保留时间：4.18分钟。(LC/MS方法2)。
将化合物1(720mg，1190μmol，1.0当量)溶解于含4M HCl(5mL)的1,4-二噁烷中，且在室温下搅拌一小时，且当反应完成(如通过LC/MS分析所测定)时，将混合物在真空中浓缩到接近干燥。粗物质用水(2mL)处理，且接着在真空中浓缩。所得油状物在真空中与甲苯(2×15mL)汽提，得到粗化合物2(530mg)。LCMS(ESI):计算值C21H19ClFNO3＝387；观测值M+H＝388.1。保留时间：3.34分钟。(LC/MS方法2)。
将化合物2(530mg，1370μmol，1.0当量)溶解于THF(5mL)中，且添加N-甲基吗啉(680μL，6200μmol，4.5当量)。将所得混合物冷却到0℃后持续15分钟，接着逐滴添加氯甲酸异丁酯(360μL，2740μmol，2.0当量)，且在0℃下搅拌溶液15分钟。分三份添加NaBH4(144mg，5.5mmol，4.0当量)于水(2mL)中的溶液，在每次添加中间允许一分钟。在0℃下搅拌混合物十分钟，且当完成(如通过LC/MS分析所测定)时，反应物用NaHCO3饱和水溶液(5mL)淬灭且允许升温到室温。添加EtOAc，且分离各相。水相用另一份EtOAc萃取，且合并的有机相经Na2SO4干燥且浓缩。粗物质通过柱色谱(100％EtOAc，硅胶柱)纯化，得到两种异构体：化合物3a(150mg)(较晚洗脱)和化合物3b(150mg)(较早洗脱)。LCMS(ESI):计算值C21H21ClFNO2＝373；观测值M+H＝374.0。保留时间：3.29分钟。(LC/MS方法2)。
将化合物3a(70mg，187μmol，1.0当量)溶解于1:1EtOAc:MeOH溶液(2mL)中。添加10％Pd/C(4.8mg)，且在氢气(1atm)下搅拌混合物。在30分钟之后，LC/MS分析揭露起始物质和所需产物的混合物。再添加10％Pd/C(1.7mg)和MeOH。在1.5小时之后，LC/MS分析展示反应完成。混合物经由垫过滤，且所述垫用另外的MeOH和EtOAc洗涤。合并的溶液在真空中干燥，得到化合物4(44mg)。LCMS(ESI):计算值C21H23ClFNO2＝375；观测值M+H＝376.3。保留时间：3.42分钟。(LC/MS方法2)。
将化合物4(40mg，110μmol，1.0当量)溶解于THF(2.0mL)中。将溶液冷却到-40℃，接着添加NaHMDS(1.0M，270μL，270μmol，2.0当量)，且在-40℃下搅拌所得混合物15分钟。添加(BOC)2O(59mg，273μmol，2.0当量)，且在室温下搅拌所得溶液15小时，且当完成(如通过LC/MS分析所测定)时，反应物用水(2mL)淬灭且用DCM萃取。浓缩有机相，得到粗化合物5(60mg)。LCMS(ESI):计算值C31H39ClFNO6＝576；观测值M+H＝576.3。保留时间：4.81分钟。(LC/MS方法2)。
将化合物5(60mg，228μmol，1.0当量)溶解于1:1THF/H2O溶液(2mL)中。添加NaOH(104mg，2.6mmol，11.4当量)，紧接着添加几滴MeOH。在室温下搅拌混合物过夜，且pH用1NHCl调节到约2。混合物用DCM(2×15mL)萃取，且丢弃水相。将合并的有机物浓缩到干燥，获得粗化合物8a(50mg)。LCMS(ESI):计算值C26H33ClFNO5＝494；观测值M+H＝493.8min。保留时间：4.46分钟。(LC/MS方法2)。
将化合物8a溶解于含4M HCl(5mL)的1,4-二噁烷中，且在室温下搅拌30分钟，且当反应完成(如通过LC/MS分析所测定)时，将混合物在真空中浓缩，得到粗标题化合物(异构体a；40mg盐酸盐)，其不经进一步纯化即使用。LCMS(ESI):计算值C21H25ClFNO3＝393；观测值M+H＝394.0。保留时间：2.79分钟。(LC/MS方法2)。
将化合物3b(150mg，400μmol，1.0当量)溶解于THF(4.0mL)中。将溶液冷却到-40℃，接着添加NaHMDS(1.0M，1L，800μmol，2.5当量)，且在-40℃下搅拌所得混合物15分钟。添加(BOC)2O(218mg，1mol，2.5当量)，且在室温下搅拌所得溶液15小时，且当完成(如通过LC/MS分析所测定)时，反应物用水(2mL)淬灭且用DCM萃取。浓缩有机相，得到粗化合物6(150mg)。LCMS(ESI):计算值C31H37ClFNO6＝574；观测值M+H＝574.2。保留时间：4.75分钟。(LC/MS方法2)。
将化合物6(50mg，87μmol，1.0当量)溶解于1:1THF/H2O溶液(2mL)中。添加NaOH(9mg，218μmol，2.5当量)，紧接着添加几滴MeOH。在室温下搅拌混合物过夜，且pH用1N HCl调节到约2。混合物用DCM萃取，且丢弃水相。将有机物浓缩到干燥，得到粗化合物7(70mg)。LCMS(ESI):计算值C26H31ClFNO5＝491；观测值M+H＝492.2min。保留时间：3.64分钟。(LC/MS方法2)。
将化合物7(70mg，187μmol，1.0当量)溶解于EtOAc(2mL)和十滴MeOH中。添加10％Pd/C(5mg)，且在氢气下在一个大气压下搅拌混合物。在三小时之后，LC/MS分析展示反应完成。混合物经由垫过滤，且所述垫用EtOAc(20mL)洗涤。合并的溶液在真空中干燥，得到化合物8b(70mg)。LCMS(ESI):计算值C26H33ClFNO5＝493；观测值M+H＝494.0。保留时间：4.42分钟。(LC/MS方法2)。
将化合物8b溶解于含4M HCl(4mL)的1,4-二噁烷中，且在室温下搅拌三小时，且当反应完成(如通过LC/MS分析所测定)时，将混合物在真空中浓缩，得到粗标题化合物(异构体b；60mg盐酸盐)，其不经进一步纯化即使用。LCMS(ESI):计算值C21H25ClFNO3＝393；观测值M+H＝394.0。保留时间：2.74分钟。(LC/MS方法2)。
LC/MS方法1：流动速率：1.5mL/min；缓冲液A：0.1％TFA/H2O；缓冲液B 0.1％TFA/MeCN；梯度洗脱从5％-100％B经9.6分钟，接着100％B持续1.0分钟，在254nm下检测。LC/MS方法2：流动速率：1.5mL/min；缓冲液A：0.1％TFA/H2O；缓冲液B 0.1％TFA/MeCN；梯度洗脱从5％-100％B经3.6分钟，接着100％B持续1.0分钟，在254nm下检测。
制备型HPLC：缓冲液A：0.1％TFA/H2O，缓冲液B：0.1％TFA/MeCN。
制备16：3-[(R)-2-氨基-3-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基)-丙基]-3-羟基甲基-二氢- 呋喃-2-酮(异构体a和b)
化合物3a和3b如本文中所述制备。
将化合物3a(异构体a；36mg，96μmol，1.0当量)溶解于THF(2.0mL)中。将溶液冷却到0℃，接着添加NaHMDS(1.0M，250μL，250μmol，2.5当量)。在0℃下搅拌所得混合物几分钟，接着添加(BOC)2O(53mg，458μmol，2.0当量)，且在室温下搅拌所得溶液15小时，且当完成(如通过LC/MS分析所测定)时，反应物用0.5N HCl(10mL)淬灭且用EtOAc(10mL)萃取。浓缩有机相，得到粗化合物4a(异构体a；40mg)。LCMS(ESI):计算值C31H37ClFNO6＝573；观测值M+H＝574.2。保留时间：4.76分钟。
将化合物4a(异构体a；40mg，70μmol，1.0当量)溶解于3:1 1,4-二噁烷/水溶液(4mL)中。添加2,6-二甲基吡啶(16μL，137μmol，2.0当量)、四氧化锇(2.5％于叔丁醇中，10mg，0.7μmol，0.01当量)和高碘酸钠(3mg，140μmol，2.0当量)，且在室温下搅拌所得混合物过夜，且当反应完成(如通过LC/MS分析所测定)时，添加水，且混合物用DCM萃取，且丢弃水相。将有机物浓缩到干燥，且通过硅胶色谱(0-30％EtOAc/己烷，25g CombiFlash柱，15分钟)纯化，得到纯化合物5a(异构体a；45mg)。LCMS(ESI):计算值C30H35ClFNO7＝575；观测值M+H＝576.0。保留时间：4.38分钟。
将化合物5a(异构体a；45mg，78μmol，1.0当量)溶解于DCM(3mL)和MeOH(1mL)中，且冷却到0℃。添加NaBH4(3mg，80μmol，1.0当量)，且在0℃下搅拌混合物五分钟，且当完成(如通过LC/MS分析所测定)时，反应物用NaHCO3饱和水溶液(5mL)淬灭，且允许升温到室温。添加DCM(10mL)，且分离各相。水相用另一份DCM萃取，且合并的有机相经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物6a(异构体a；47mg)。LCMS(ESI):计算值C30H37ClFNO7＝577；观测值M+H＝578.1。保留时间：4.29分钟。
将化合物6a(异构体a；47mg，78μmol，1.0当量)溶解于含4M HCl的1,4-二噁烷(2mL)中，且在室温下搅拌3小时，且当反应完成(如通过LC/MS分析所测定)时，将混合物在真空中浓缩，得到粗标题化合物(异构体a 30mg)，其不经进一步纯化即使用。LCMS(ESI):计算值C20H21ClFNO3＝377；观测值M+H＝378.3。保留时间：2.59分钟。
将化合物3b(异构体b；250mg，670μmol，1.0当量)溶解于THF(6.7mL)中。将溶液冷却到-40℃，接着添加NaHMDS(1.0M，1675μL，1675μmol，2.0当量)。将所得混合物在-40℃下搅拌20分钟，接着添加(BOC)2O(365mg，1675μmol，2.0当量)，且在室温下搅拌所得溶液15小时，且当完成(如通过LC/MS分析所测定)时，反应物用0.5N HCl(10mL)淬灭且用EtOAc(10mL)萃取。将有机相浓缩且通过硅胶色谱(0-35％EtOAc/己烷)纯化，得到化合物4b(异构体b；315mg)。LCMS(ESI):计算值C31H37ClFNO6＝573；观测值M+H＝574.3。保留时间：4.76分钟。
将化合物4b(异构体b；315mg，548μmol，1.0当量)溶解于3:1 1,4-二噁烷/水溶液(7mL)中。添加2,6-二甲基吡啶(118μL，1097μmol，2.0当量)、四氧化锇(2.5％于叔丁醇中，56mg，5.5μmol，0.01当量)和高碘酸钠(233mg，1097μmol，2.0当量)，且在室温下搅拌所得混合物三天，且当反应完成(如通过LC/MS分析所测定)时，添加水，且混合物用DCM萃取，且丢弃水相。将有机物浓缩到干燥，且通过硅胶色谱(0-35％EtOAc/己烷，25g CombiFlash柱，40分钟)纯化，得到纯化合物5b(异构体b；243mg)。LCMS(ESI):计算值C30H35ClFNO7＝575；观测值M+H＝576.0。保留时间：4.43分钟。
将化合物5b(异构体b；60mg，104μmol，1.0当量)溶解于DCM(5mL)和MeOH(1mL)中，且冷却到0℃后持续15分钟。添加NaBH4(4mg，105μmol，1.0当量)，且搅拌混合物，且当完成(如通过LC/MS分析所测定)时，反应物用水淬灭且允许升温到室温，接着用DCM(3×10mL)萃取，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物6b(异构体b；60mg)。LCMS(ESI):计算值C30H37ClFNO7＝577；观测值M+H＝578.0。保留时间：4.28分钟。
将化合物6b(异构体b；30mg，52μmol，1.0当量)溶解于含4M HCl的1,4-二噁烷(2mL)中，且在室温下搅拌3小时，且当反应完成(如通过LC/MS分析所测定)时，将混合物在真空中浓缩，得到粗标题化合物(异构体b)，其不经进一步纯化即使用。LCMS(ESI):计算值C20H21ClFNO3＝377；观测值M+H＝378.3。保留时间：2.59分钟。
LC/MS方法：流动速率：1.5mL/min；缓冲液A：0.1％TFA/H2O；缓冲液B 0.1％TFA/MeCN；梯度洗脱从5％-100％B经3.6分钟，接着100％B持续1.0分钟，在254nm下检测。
制备17：(R)-4-氨基-2-(2-叠氮基-乙基)-5-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基)-2-羟基甲 基戊酸
化合物6b如本文中所述制备。
将化合物6b(33mg，57μmol，1.0当量)溶解于DCM(1mL)中，且在0℃下在氮气下冷却十分钟。添加Et3N(16μL，114μmol，2.0当量)和甲磺酰氯(7μL，86μmol，1.5当量)，且当反应完成(如通过LC/MS分析所测定)时，混合物用DCM(15mL)和NaHCO3饱和水溶液(10mL)稀释。分离各相，且有机相经Na2SO4干燥且在真空中浓缩，得到粗化合物7(40mg)，其不经进一步纯化即用于下一步骤。LCMS(ESI):计算值C31H39ClFNO9S＝655；观测值M+H＝656.1。保留时间：4.31分钟。(LC/MS方法2)。
将化合物7(40mg，61μmol，1.0当量)溶解于DMF(2mL)中。添加叠氮化钠(40mg，610μmol，10.0当量)，且在55℃下搅拌所得混合物5小时，且当反应完成(如通过LC/MS分析所测定)时，混合物用EtOAc(15mL)和水(10mL)稀释。分离各相，且有机相用NaCl饱和水溶液萃取，经Na2SO4干燥，且在真空中浓缩，得到粗化合物8(30mg)。LCMS(ESI):计算值C30H36ClFN4O6＝602；观测值M+H＝603.1。保留时间：4.61分钟。(LC/MS方法2)。
将化合物8(30mg，50μmol，1.0当量)溶解于1:1MeOH/THF溶液(1.0mL)中。添加NaOH(50mg，1250μmol，25.0当量)，且在室温下搅拌所得溶液3小时，且当反应完成(如通过LC/MS分析所测定)时，混合物用DCM(10mL)和水(10mL)稀释。pH用3N HCl调节到约3，接着分离各相，且水相用DCM(10mL)萃取。合并的有机相经Na2SO4干燥，过滤，且浓缩，得到粗化合物9(25mg)。LCMS(ESI):计算值C30H38ClFN4O7＝620；观测值M+H＝621.1。保留时间：4.28分钟。(LC/MS方法2)。
将化合物9(25mg)溶解于含4M HCl的1,4-二噁烷(2mL)中，在室温下搅拌两小时，且当反应完成(如通过LC/MS分析所测定)时，将混合物浓缩到干燥，得到粗产物，其通过制备型HPLC纯化，得到标题化合物(10mg)。LCMS(ESI):计算值C20H22ClFN4O3＝420；观测值M+H＝421.0。保留时间：4.45分钟。(LC/MS方法1)。
LC/MS方法1：流动速率：1.5mL/min；缓冲液A：0.1％TFA/H2O；缓冲液B 0.1％TFA/MeCN；梯度洗脱从5％-100％B经9.6分钟，接着100％B持续1.0分钟，在254nm下检测。
LC/MS方法2：流动速率：1.5mL/min；缓冲液A：0.1％TFA/H2O；缓冲液B 0.1％TFA/MeCN；梯度洗脱从5％-100％B经3.6分钟，接着100％B持续1.0分钟，在254nm下检测。
制备18：2-[(R)-2-氨基-3-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基)-丙基]-2-羟甲基戊-4-烯酸 (异构体a和b)
化合物4a(异构体a)和4b(异构体b)如本文中所述制备。
将化合物4a(异构体a；100mg，228μmol，1.0当量)溶解于1:1THF/H2O(4mL)中。添加NaOH(175mg，4.4mmol，25.0当量)，紧接着添加几滴MeOH。在室温下搅拌混合物过夜，且浓缩到干燥，获得粗化合物5a(异构体a)。LCMS(ESI):计算值C26H31ClFNO5＝491；观测值M+H＝492.2min。保留时间：3.57分钟。
将化合物5a溶解于含4M HCl的1,4-二噁烷(5mL)中，在室温下搅拌30分钟，且当反应完成(如通过LC/MS分析所测定)时，将混合物在真空中浓缩且用水(1mL)处理。混合物再次在真空中浓缩且通过蒸发与甲苯共沸干燥，得到粗标题化合物(异构体a；85mg)，其不经进一步纯化即使用。LCMS(ESI):计算值C21H23ClFNO3＝391；观测值M+H＝391.9。保留时间：2.74分钟。
将化合物4b(异构体b；100mg，228μmol，1.0当量)溶解于1:1THF/H2O(4mL)中。添加NaOH(175mg，4.4mmol，25.0当量)，紧接着添加几滴MeOH。在室温下搅拌混合物过夜，且浓缩到干燥，获得粗化合物5b(异构体b)。LCMS(ESI):计算值C26H31ClFNO5＝491；观测值M+H＝492.2min。保留时间：3.61分钟。
将化合物5b溶解于含4M HCl的1,4-二噁烷(5mL)中，在室温下搅拌30分钟，且当反应完成(如通过LC/MS分析所测定)时，将混合物在真空中浓缩且用水(1mL)处理。混合物再次在真空中浓缩且通过蒸发与甲苯共沸干燥，得到粗标题化合物(异构体b；60mg)，其不经进一步纯化即使用。LCMS(ESI):计算值C21H23ClFNO3＝391；观测值M+H＝392.0。保留时间：4.37分钟。
LC/MS方法：流动速率：1.5mL/min；缓冲液A：0.1％TFA/H2O；缓冲液B 0.1％TFA/MeCN；梯度洗脱从5％-100％B经3.6分钟，接着100％B持续1.0分钟，在254nm下检测。
制备19：3-[(R)-2-氨基-3-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基)丙基]四氢呋喃-3-甲酸(异 构体a和b)
化合物6a和6b如本文中所述制备。
将化合物6a(47mg)溶解于含4M HCl的1,4-二噁烷(2mL)中，且在室温下搅拌三小时。将混合物在真空中浓缩，接着用NaHCO3饱和水溶液(5mL)处理，且搅拌两小时。混合物用DCM萃取；分离各相，且水相用DCM萃取且接着丢弃。合并的有机物在真空中干燥，得到粗化合物7a(30mg)，其不经进一步纯化即用于下一步骤。LCMS(ESI):计算值C20H21ClFNO3＝377；观测值M+H＝378.1。保留时间：2.76分钟。(LC/MS方法2)。
将化合物6b溶解于含4M HCl的1,4-二噁烷(2mL)中，且在室温下搅拌三小时。将混合物在真空中浓缩，接着用NaHCO3饱和水溶液(5mL)处理，且搅拌两小时。混合物用DCM(20mL)萃取；分离各相，且水相用DCM(20mL)萃取且接着丢弃。合并的有机物经Na2SO4干燥，且在真空中干燥，得到粗化合物7b(50mg)，其不经进一步纯化即用于下一步骤。LCMS(ESI):计算值C20H21ClFNO3＝377；观测值M+H＝378.1。保留时间：2.56分钟。(LC/MS方法2)。
将化合物7a(50mg，132μmol，1.0当量)溶解于THF(2mL)中。添加PPh3(87mg，330μmol，2.5当量)和DIAD(65μL，330μmol，2.5当量)，且在室温下搅拌所得混合物15小时，且当反应完成(如通过LC/MS分析所测定)时，将混合物在真空中浓缩且通过制备型HPLC(10-30％MeCN/H2O与0.1％TFA，40毫升/分钟，40分钟)纯化，得到纯化合物8a(15mg)。LCMS(ESI):计算值C20H19ClFNO2＝359；观测值M+H＝360.0。保留时间：5.26分钟。(LC/MS方法1)。
将化合物7b(50mg，132μmol，1.0当量)溶解于THF(2mL)中。添加PPh3(87mg，330μmol，2.5当量)和DIAD(65μL，330μmol，2.5当量)，且在室温下搅拌所得混合物15小时，且当反应完成(如通过LC/MS分析所测定)时，将混合物在真空中浓缩且通过制备型HPLC(10-30％MeCN/H2O与0.1％TFA，40毫升/分钟，40分钟)纯化，得到纯化合物8b(15mg)。LCMS(ESI):计算值C20H19ClFNO2＝359；观测值M+H＝360.0。保留时间：5.26分钟。(LC/MS方法1)。
将化合物8a(15mg，42μmol，1.0当量)溶解于THF(2mL)中。将溶液冷却到0℃，接着添加NaHMDS(1.0M，40μL，40μmol，1.5当量)，且在0℃下搅拌所得混合物15分钟。添加(BOC)2O(9mg，40μmol，1.0当量)，且在室温下搅拌所得溶液15小时，且当反应完成(如通过LC/MS分析所测定)时，混合物用EtOAc(10mL)稀释且用NaHCO3饱和水溶液萃取。有机相经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物9a。LCMS(ESI):计算值C25H27ClFNO4＝459；观测值M+H＝459.9。保留时间：4.06分钟。(LC/MS方法2)。
将化合物8b(15mg，42μmol，1.0当量)溶解于THF(2mL)中。将溶液冷却到0℃，接着添加NaHMDS(1.0M，40μL，40μmol，1.5当量)，且在0℃下搅拌所得混合物15分钟。添加(BOC)2O(9mg，40μmol，1.0当量)，且在室温下搅拌所得溶液15小时，且当反应完成(如通过LC/MS分析所测定)时，混合物用EtOAc(10mL)稀释且用NaHCO3饱和水溶液萃取。有机相经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物9b。LCMS(ESI):计算值C25H27ClFNO4＝459；观测值M+H＝459.9。保留时间：4.06分钟。(LC/MS方法2)。
将化合物9a(42μmol，1.0当量)溶解于THF(1mL)中。添加6N NaOH溶液(1mL，6mmol)以及几滴MeOH。在室温下搅拌溶液过夜，且当反应完成(如通过LC/MS分析所测定)时，将混合物浓缩到干燥，得到粗化合物10a(19mg)。LCMS(ESI):计算值C25H29ClFNO5＝477；观测值M+H＝477.9。保留时间：3.59分钟。(LC/MS方法2)。
将化合物9b(42μmol，1.0当量)溶解于THF(1mL)中。添加6N NaOH溶液(1mL，6mmol)以及几滴MeOH。在室温下搅拌溶液过夜，且当反应完成(如通过LC/MS分析所测定)时，将混合物浓缩到干燥，获得粗化合物10b(19mg)。LCMS(ESI):计算值C25H29ClFNO5＝477；观测值M+H＝477.9。保留时间：3.59分钟。(LC/MS方法2)。
将化合物10a(19mg)溶解于含4M HCl的1,4-二噁烷(2mL)中，在室温下搅拌两小时，且当反应完成(如通过LC/MS分析所测定)时，将混合物浓缩到干燥，得到粗标题化合物(异构体a；盐酸盐；10mg)，其不经进一步纯化即使用。LCMS(ESI):计算值C20H21ClFNO3＝377；观测值M+H＝378.0。保留时间：2.61分钟。(LC/MS方法2)。
将化合物10b(19mg)溶解于含4M HCl的1,4-二噁烷(2mL)中，在室温下搅拌两小时，且当反应完成(如通过LC/MS分析所测定)时，将混合物浓缩到干燥，得到粗标题化合物(异构体b；盐酸盐；10mg)，其不经进一步纯化即使用。LCMS(ESI):计算值C20H21ClFNO3＝377；观测值M+H＝378.0。保留时间：2.61分钟。(LC/MS方法2)。
LC/MS方法1：流动速率：1.5mL/min；缓冲液A：0.1％TFA/H2O；缓冲液B 0.1％TFA/MeCN；梯度洗脱从5％-100％B经9.6分钟，接着100％B持续1.0分钟，在254nm下检测。
LC/MS方法2：流动速率：1.5mL/min；缓冲液A：0.1％TFA/H2O；缓冲液B 0.1％TFA/MeCN；梯度洗脱从5％-100％B经3.6分钟，接着100％B持续1.0分钟，在254nm下检测。
制备20：3-[(R)-2-氨基-3-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基)丙基]吡咯烷-1,3-二甲酸1- 苯甲酯(异构体a和b)
化合物6a如本文中所述制备。
将化合物6a(85mg，147μmol，1.0当量)溶解于DCM(3mL)中，且在氮气下冷却到0℃后持续十分钟。添加Et3N(20μL，144μmol，1.0当量)和甲磺酰氯(12μL，155μmol，1.1当量)，且当反应完成(如通过LC/MS分析所测定)时，混合物用DCM(15mL)和NaHCO3饱和水溶液(10mL)稀释。分离各相，且水相用另外的DCM(15mL)萃取，接着丢弃。有机相经Na2SO4干燥且在真空中浓缩，得到粗化合物7a(123mg)，其不经进一步纯化即用于下一步骤。LCMS(ESI):计算值C31H39ClFNO9S＝655；观测值M+H＝656.0。保留时间：4.33分钟。
将化合物7a(123mg，147μmol，1.0当量)溶解于DMF(2mL)中。添加叠氮化钠(96mg，1480μmol，10.0当量)，且在55℃下在氮气下搅拌所得混合物两小时。接着将混合物冷却到室温且用EtOAc(20mL)和水(10mL)稀释。分离各相，且有机相用水(2×10mL)萃取，经Na2SO4干燥，且在真空中浓缩，得到粗化合物8a(83mg)。LCMS(ESI):计算值C30H36ClFN4O6＝602；观测值M+H＝602.8。保留时间：4.62分钟。
将化合物8a溶解于含4M HCl的1,4-二噁烷(2mL)中，在室温下搅拌两小时。在真空中浓缩混合物，获得呈盐酸盐形式的粗化合物9a(40mg)，其不经进一步纯化即用于下一步骤。LCMS(ESI):计算值C20H20ClFN4O2＝402；观测值M+H＝403.4。保留时间：3.24分钟。
将化合物9a(40mg，100μmol，1.0当量)溶解于DCM(2mL)中，且在氮气下冷却到0℃。添加Et3N(15μL，100μmol，1.0当量)和甲磺酰氯(10μL，100μmol，1.0当量)，且当反应完成(如通过LC/MS分析所测定)时，混合物用DCM(10mL)和NaHCO3饱和水溶液(5mL)稀释。分离各相，且有机相经Na2SO4干燥且在真空中浓缩，得到粗化合物10a(53mg)，其不经进一步纯化即用于下一步骤。LCMS(ESI):计算值C21H22ClFN4O4S＝480；观测值M+H＝480.9。保留时间：3.50分钟。
将化合物10a(53mg)溶解于EtOAc(2mL)和MeOH(0.5mL)的混合物中。还添加几滴AcOH。添加Pd/C(5％w/w，10mg)，且在1个大气压的氢气下搅拌所得混合物四小时。添加Et3N(2滴)，且混合物用氮气净化且搅拌一小时，接着经由垫过滤。所述垫用MeOH(20mL)洗涤，且将合并的滤液在真空中浓缩，溶解于甲苯(10mL)中，再一次在真空中浓缩，接着通过制备型HPLC(30-60％MeCN/水与0.1％TFA)纯化，得到化合物11a(35mg)。LCMS(ESI):计算值C20H20ClFN2O＝358；观测值M+H＝359.1。保留时间：2.64分钟。
将化合物11a(15mg，40μmol，1.0当量)溶解于THF(2.0mL)中。将溶液冷却到0℃后持续十分钟，接着添加Et3N(9μL，120μmol，3当量)和苯甲氧基羰基氯(6mg，35μmol，0.9当量)，且在室温下搅拌所得混合物一小时，且当完成(如通过LC/MS分析所测定)时，反应物用NaHCO3饱和水溶液(10mL)淬灭且用EtOAc(20mL)萃取。有机相用NaCl饱和水溶液洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物12a(17mg)。LCMS(ESI):计算值C28H26ClFN2O3＝492；观测值M+H＝493.2。保留时间：3.78分钟。
将化合物12a(17mg，35μmol，1.0当量)溶解于THF(0.5mL)中。将溶液冷却到-40℃，添加NaHMDS(1.0M，50μL，50μmol，1.4当量)，紧接着添加(BOC)2O(11mg，50μmol，1.4当量)。在室温下搅拌所得溶液，且LC/MS分析揭露所需产物和水解内酰胺的混合物。反应物用两滴水淬灭且浓缩，得到粗化合物13a。LCMS(ESI):计算值C33H34ClFN2O5＝592；观测值M+H＝493.2(M+H-Boc)。保留时间：3.89分钟。
将化合物13a(35μmol，1.0当量)溶解于THF(0.5mL)中。添加4N NaOH(50μL，200μmol，5.7当量)，紧接着添加几滴MeOH。在室温下搅拌混合物20分钟，且当反应完成(如通过LC/MS分析所测定)时，pH用柠檬酸水溶液调节到4，且混合物用DCM(2×10mL)萃取。分离各相，且水层用DCM(10mL)再萃取一次。合并的有机物经Na2SO4干燥，过滤，且浓缩，获得粗化合物14a(16mg)。LCMS(ESI):计算值C33H36ClFN2O6＝610；观测值M+H＝611.4min。保留时间：3.54分钟。
将化合物14a溶解于含4M HCl的1,4-二噁烷(1mL)中，且在室温下搅拌，且当反应完成(如通过LC/MS分析所测定)时，将混合物在真空中浓缩，获得粗标题化合物(异构体a；14mg)，其不经进一步纯化即使用。LCMS(ESI):计算值C28H28ClFN2O4＝510；观测值M+H＝511.0。保留时间：2.66分钟。
化合物6b如本文中所述制备。
将化合物6b(400mg，693μmol，1.0当量)溶解于含4M HCL的对二噁烷(10mL)中，且在室温下搅拌三小时。将混合物在真空中浓缩，接着溶解于1∶1DCM∶NaHCO3饱和水溶液中，且搅拌过夜。有机相经分离且经Na2SO4干燥，接着在真空中浓缩，得到粗化合物7b(251mg)，其不经进一步纯化即用于下一步骤。LCMS(ESI):计算值C20H21ClFNO3＝377；观测值M+H＝378.2。保留时间：2.82分钟。
将化合物7b(250mg，663μmol，1.0当量)溶解于DCM(10mL)中，且在氮气下冷却到0℃后持续十分钟。添加Et3N(190μL，1360μmol，2.0当量)和甲磺酰氯(110μL，1330μmol，2.0当量)，且当反应完成(如通过LC/MS分析所测定)时，混合物用DCM(10mL)和NaHCO3饱和水溶液(5mL)稀释。分离各相，且有机相经Na2SO4干燥且在真空中浓缩，得到粗化合物8b(380mg)，其不经进一步纯化即用于下一步骤。LCMS(ESI):计算值C22H25ClFNO7S2＝533；观测值M+H＝534.1。保留时间：3.34分钟。
将化合物8b(380mg，700μmol，1.0当量)溶解于DMF(5mL)中。添加叠氮化钠(463mg，7120μmol，10.0当量)，且在55℃下在氮气下搅拌所得混合物四小时。接着将混合物冷却到室温且用EtOAc(20mL)和水(10mL)稀释。分离各相，且有机相经Na2SO4干燥，且在真空中浓缩。LCMS(ESI):计算值C20H20ClFN2O＝480；观测值M+H＝481.8。保留时间：3.54分钟。(LC/MS方法2)。将残余物溶解于EtOAc(4mL)和MeOH(1.0mL)的混合物中。还添加几滴AcOH。添加Pd/C(5％w/w，30mg)，且在氢气(1atm)下搅拌所得混合物四小时。添加Et3N(2滴)，且混合物用氮气净化且搅拌一小时，接着经由垫过滤。所述垫用MeOH洗涤，且将合并的滤液在真空中浓缩，溶解于甲苯中，再一次在真空中浓缩，接着通过制备型HPLC(30-60％MeCN/水与0.1％TFA)纯化，得到化合物9b(150mg)。LCMS(ESI):计算值C20H20ClFN2O＝358；观测值M+H＝359.0。保留时间：2.62分钟。
将化合物9b(150mg，420μmol，1.0当量)溶解于THF(4.0mL)中。将溶液冷却到0℃，接着添加Et3N(90μL，630μmol，1.5当量)和苯甲氧基羰基氯(76μL，500μmol，1.2当量)，且在室温下搅拌所得混合物一小时，且当完成(如通过LC/MS分析所测定)时，反应物用NaHCO3饱和水溶液(10mL)淬灭且用EtOAc(20mL)萃取。有机相用NaCl饱和水溶液洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，且浓缩，得到粗化合物10b(180mg)。LCMS(ESI):计算值C28H26ClFN2O3＝492；观测值M+H＝493.1。保留时间：3.80分钟。
将化合物10b(180mg，366μmol，1.0当量)溶解于THF(5mL)中。将溶液冷却到-10℃，添加NaHMDS(1.0M，730μL，730μmol，2.0当量)，紧接着添加(BOC)2O(160mg，730μmol，2.0当量)，且在室温下搅拌所得溶液三小时。添加NaOH(100mg，2.5mmol，6.8当量)和一滴水，且在室温下搅拌混合物十五小时，且当反应完成(如通过LC/MS分析所测定)时，混合物用水(5mL)稀释且用HCl酸化到pH约5。溶液用DCM萃取，且有机相经Na2SO4干燥，过滤，且浓缩，得到化合物11b(200mg)。LCMS(ESI):计算值C33H36ClFN2O6＝610；观测值M+H＝611.3。保留时间：4.01分钟。
将化合物11b(200mg，366μmol，1.0当量)溶解于含4M HCl的1,4-二噁烷(4mL)中，且在室温下搅拌两小时，且当反应完成(如通过LC/MS分析所测定)时，在真空中浓缩混合物，得到呈盐酸盐形式的粗标题化合物(异构体b；170mg)，其不经进一步纯化即使用。LCMS(ESI):计算值C28H28ClFN2O4＝510；观测值M+H＝511.3。保留时间：3.08分钟。
LC/MS方法：流动速率：1.5mL/min；缓冲液A：0.1％TFA/H2O；缓冲液B 0.1％TFA/MeCN；梯度洗脱从5％-100％B经3.6分钟，接着100％B持续1.0分钟，在254nm下检测。
制备21：1-乙酰基-3-[(R)-2-氨基-3-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基)丙基]吡咯烷-3- 甲酸(异构体a和b)
化合物11a如本文中所述制备。
将化合物11a(10mg，28μmol，1.0当量)溶解于DCM(2.0mL)中。将溶液冷却到0℃，接着添加Et3N(6μL，42μmol，1.5当量)和乙酸酐(3μL，31μmol，1.2当量)，且在室温下搅拌所得混合物15分钟，且当完成(如通过LC/MS分析所测定)时，反应物用NaHCO3饱和水溶液(2mL)淬灭且用DCM(15mL)萃取。有机相经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物12a(15mg)。LCMS(ESI):计算值C22H22ClFN2O2＝400；观测值M+H＝401.2。保留时间：3.07分钟。
将化合物12a(15mg，110μmol，1.0当量)溶解于THF(2.0mL)中。将溶液冷却到0℃，添加NaHMDS(1.0M，150μL，150μmol，1.4当量)，且在0℃下搅拌所得混合物15分钟，接着添加(BOC)2O(22mg，100μmol，0.9当量)，且在室温下搅拌所得溶液，且LC/MS分析揭露所需产物和水解内酰胺的混合物。反应物用两滴水淬灭且浓缩，得到粗化合物13a(20mg)。LCMS(ESI):计算值C27H30ClFN2O4＝500；观测值M+H＝501.2。保留时间：3.75分钟。
将化合物13a(20mg，40μmol，1.0当量)溶解于1:1THF/H2O(2mL)中。添加NaOH(50mg，1250μmol，31当量)，紧接着添加几滴MeOH。在室温下搅拌混合物一小时，且当反应完成(如通过LC/MS分析所测定)时，混合物用水(10mL)和DCM(10mL)稀释，接着pH用3N HCl调节到约3。分离各相，且水层用DCM(10mL)再萃取一次。合并的有机物经Na2SO4干燥，过滤，且浓缩，获得粗化合物14a(15mg)。LCMS(ESI):计算值C27H32ClFN2O5＝518；观测值M+H＝519.1min。保留时间：3.29分钟。
将化合物14a溶解于含4M HCl的1,4-二噁烷(1mL)中，且在室温下搅拌，且当反应完成(如通过LC/MS分析所测定)时，在真空中浓缩混合物，得到粗标题化合物(异构体a；10mg)，其不经进一步纯化即使用。LCMS(ESI):计算值C22H24ClFN2O3＝418；观测值M+H＝419.1。保留时间：2.41分钟。
化合物9b如本文中所述制备。
将化合物9b(45mg，125μmol，1.0当量)溶解于DCM(2.0mL)中。将溶液冷却到0℃，接着添加Et3N(25μL，150μmol，1.2当量)和乙酸酐(25μL，190μmol，1.5当量)，且在室温下搅拌所得混合物15分钟，且当完成(如通过LC/MS分析所测定)时，反应物用NaHCO3饱和水溶液(2mL)淬灭且用DCM(15mL)萃取。有机相经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物10b(45mg)。LCMS(ESI):计算值C22H22ClFN2O2＝400；观测值M+H＝401.3。保留时间：3.04分钟。
将化合物10b(45mg，110μmol，1.0当量)溶解于THF(2.0mL)中。将溶液冷却到0℃，接着添加NaHMDS(1.0M，150μL，150μmol，1.5当量)，且在0℃下搅拌所得混合物15分钟，接着添加(BOC)2O(22mg，100μmol，0.9当量)，且在室温下搅拌所得溶液30分钟，且LC/MS分析揭露所需产物和水解内酰胺的混合物。反应物用两滴水淬灭且浓缩，得到粗化合物11b。LCMS(ESI):计算值C27H30ClFN2O4＝500；观测值M+H＝501.2。保留时间：3.71分钟。
将化合物11b(110μmol，1.0当量)溶解于1:1THF/H2O(2mL)中。添加NaOH(50mg，1250μmol，31当量)，紧接着添加几滴MeOH。在室温下搅拌混合物一小时，且当反应完成(如通过LC/MS分析所测定)时，混合物用水(10mL)和DCM(10mL)稀释，接着pH用3N HCl调节到3。分离各相，且水层用DCM(10mL)再萃取一次。合并的有机物经Na2SO4干燥，过滤，且浓缩，得到粗化合物12b(40mg)。LCMS(ESI):计算值C27H32ClFN2O5＝518；观测值M+H＝519.1min。保留时间：3.32分钟。
将化合物12b(40mg，77μmol，1.0当量)溶解于含4M HCl的1,4-二噁烷(4mL)中，且在室温下搅拌两小时，且当反应完成(如通过LC/MS分析所测定)时，在真空中浓缩混合物，得到呈盐酸盐形式的粗标题化合物(异构体b；40mg)，其不经进一步纯化即使用。LCMS(ESI):计算值C22H24ClFN2O3＝418；观测值M+H＝419.1。保留时间：2.47分钟。
LC/MS方法：流动速率：1.5mL/min；缓冲液A：0.1％TFA/H2O；缓冲液B 0.1％TFA/MeCN；梯度洗脱从5％-100％B经3.6分钟，接着100％B持续1.0分钟，在254nm下检测。
制备22：[(R)-3-乙酰氨基-1-(4-溴苯甲基)-3-叔丁基氨甲酰基丁基]氨基甲酸叔 丁酯
在0℃下将4-甲基吗啉(645μL，5.9mmol)和氯甲酸异丁酯(0.8mL，6.1mmol)添加到经搅拌的(R)-4-(4-溴苯基)-3-叔丁氧基羰基氨基丁酸(2g，5.6mmol)于THF(31.0mL)中的溶液中，形成白色沉淀。向此混合物中添加Et3N(934μL，6.7mmol)和N,O-二甲基羟胺盐酸盐(654mg，6.7mmol)于DMF(2.3mL)中的溶液，其已经过滤。在0℃下搅拌所得混合物2小时。接着过滤混合物且浓缩。残余物用EtOAc(30mL)稀释且用NaHCO3饱和水溶液(10mL)和NaCl饱和水溶液(10mL)洗涤。有机层经Na2SO4干燥，过滤，且在真空中浓缩，得到澄清油状物。这一粗残余物通过快速色谱(EtOAc:己烷，0-50％)纯化，得到呈白色晶体状的化合物1(1.3g)。
在0℃下将甲基锂(2.7mL，2.7mmol)(1-2M于Et2O中)添加到经搅拌的化合物1(550mg，1.4mmol)于Et2O(15mL)中的溶液中。反应在3小时之后确定完成，且用NH4Cl饱和水溶液(4mL)淬灭。添加Et2O(60mL)，且混合物用1M HCl水溶液(15mL)和NaCl饱和水溶液(15mL)洗涤。将有机层干燥，过滤，且在真空中浓缩，得到呈白色固体状的化合物2(474mg，97％产率)。
在室温下在氮气大气压下将叔丁基异氰(208μL，1.8mmol)添加到经搅拌的乙酸铵(212mg，2.8mmol)和化合物2(327mg，918μmol)于2,2,2-三氟乙醇(2mL，918μmol)中的溶液中。在14小时之后测定反应完成。添加水(10mL)且混合物用EtOAc(2×10mL)萃取。合并有机层，且用NaCl饱和水溶液(10mL)洗涤，经MgSO4干燥，过滤，且在真空中浓缩，得到呈白色固体状的标题化合物(444mg，97％产率)。
制备23：(R)-4-((5'-氯-2'-氟-[1,1'-联苯]-4-基)甲基)-1,2,3-氧杂噻唑烷-3- 甲酸叔丁酯2,2-二氧化物
将(4R)-4-((5'-氯-2'-氟-[1,1'-联苯]-4-基)甲基)-1,2,3-氧杂噻唑烷-3-甲酸叔丁酯2-氧化物(3.0g，7.0mmol)溶解于MeCN中，得到澄清溶液。将溶液冷却到0℃，紧接着添加一水合氯化钌(III)(16mg，70μmol)和高碘酸钠(2.3g，10.6mmol)。添加水(20mL)，且在0℃下剧烈搅拌混合物1小时，得到粘稠浆料(分析展示10％转化)。接着在5℃下搅拌混合物过夜(观察到几乎完全转化)。再添加水(20mL)，且在室温下搅拌混合物1小时。过滤混合物且干燥，得到粗产物(3g；纯度95％)。将粗物质在DCM(50mL)中搅拌2小时。过滤出较深的细粒固体，且将滤液浓缩到干燥，得到呈灰白色固体状的标题化合物(2g)。
实例1(2R,4R)-2-氨基-5-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基)-2-甲基-4-[(3H-[1,2,3]三 唑-4-羰基)氨基]戊酸(异构体a)和(2S,4R)-2-氨基-5-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基)-2-甲基- 4-[(3H-[1,2,3]三唑-4-羰基)氨基]戊酸(异构体b)
将[(R)-3-乙酰氨基-1-(4-溴苯甲基)-3-叔丁基氨甲酰基丁基]氨基甲酸叔丁酯(160mg，321μmol)和5-氯-2-氟苯基硼酸(61.6mg，353μmol)溶解在水(0.8mL)和EtOH(4mL)中。将混合物脱气且用氮气净化(3×)。添加Pd(PPh3)4(37.1mg，32μmol)，且将混合物再脱气且用氮气净化(3×)。给反应烧瓶加盖，且在90℃下加热1小时。接着过滤混合物，且滤液在真空中浓缩且通过快速色谱(预吸附在二氧化硅上；EtOAc:己烷40-70％)纯化，得到呈白色固体状的化合物1(103mg)。
将化合物1(103mg，188μmol)悬浮于6N HCl(2mL，12mmol)中且在120℃下搅拌72小时。LCMS指示BOC基团已裂解，且产物混合物主要由充分去保护的化合物2、内酰胺(主要产物)和分子内亚胺(质量405)组成。在真空中浓缩混合物，且残余物与6N NaOH(2mL)和EtOH(2mL)混合。在120℃下3小时后，测定反应完成，且在真空中浓缩混合物，得到化合物2。
将HATU(79mg，207μmol)添加到经搅拌的1H-1,2,3-三唑-4-甲酸(23mg，207μmol)于DMF(1.3mL)中的溶液中且搅拌10分钟。添加DIPEA(49mg，376μmol)，且在5分钟之后，添加预先溶解于DMF和DIPEA(1.3mL，2当量)中的化合物2(66mg，188μmol)。在90分钟之后，LCMS指示主要产物。接着在真空中浓缩混合物。产物测定为异构体与其它杂质的混合物。产物通过制备型HPLC纯化，得到呈TFA盐形式的标题异构体a(2.75分钟保留时间；1.1mg)和b(2.68分钟保留时间；3.1mg)。
实例2：(2S,4R)-2-氨基甲基-5-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基)-2-甲基-4-[(3H-[1,2, 3]三唑-4-羰基)氨基]戊酸
将3H-[1,2,3]三唑-4-甲酸(2.1mg，18μmol)与HATU(7.0mg，18μmol)于DMF(0.5mL)中搅拌10分钟。添加DIPEA(4.8μL)，且搅拌混合物1分钟。接着将这添加到预先溶解的(2S,4R)-4-氨基-2-(苯甲氧基羰基氨基甲基)-5-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基)-2-甲基戊酸(11mg，22μmol)、DMF(1mL)和DIPEA(9.6μL，55μmol)的溶液中。搅拌所得混合物30分钟。在减压下部分浓缩混合物。残余物通过反相色谱纯化，得到化合物1(8mg，73％产率)。
将化合物1(8mg，13μmol)与Pd/C(2.9mg，5.4μmol)组合，且溶解于EtOAc(2mL)和AcOH(1mL)中。溶液在真空中脱气且添加氢气，确保溶液不暴露于空气。将溶液搅拌2小时。移除氢气，且反应烧瓶用氮气净化。过滤出固体，且产物通过反相纯化，得到呈TFA盐形式的标题化合物(5mg，81％产率；纯度95％)。MS m/z[M+H]+C22H23ClFN5O3的计算值,460.15；实验值460。
实例3：(2S,4R)-2-氨基甲基-5-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基)-4-[(1-二氟甲基-1H- 吡唑-3-羰基)氨基]-2-甲基戊酸
向(2S,4R)-4-叔丁氧基羰基氨基-5-(5'-氯-2'-氟-联苯-4-基)-2-二烯丙基氨基甲基-2-甲基戊酸烯丙酯(16mg，27μmol)于二噁烷(270μL)中的溶液中添加HCl(135μL，540μmol)。在室温下搅拌所得溶液2小时，且接着在真空中浓缩。在室温下搅拌含有HATU(12mg，32μmol)和1-(二氟甲基)-1H-吡唑-3-甲酸(5.3mg，32μmol)于DMF(270μL)中的溶液的小瓶30分钟。将粗物质添加于DMF(270μL)中，紧接着添加DIPEA(14μL，81μmol)。在室温下搅拌所得溶液1小时，且接着在真空中浓缩。粗物质通过柱色谱(0-100％EtOAc/己烷)纯化，得到化合物1(5.9mg，35％产率)。
向化合物1(5.9mg，9.4μmol)于脱气的DCM(25μL)和AcOH(5.4μL，94μmol)中的溶液中添加Pd(PPh3)4(325μg，0.3μmol)和1,3-二甲基巴比妥酸(13mg，84μmol)。在35℃下搅拌溶液18小时。溶液在真空中浓缩且通过制备型HPLC纯化，得到呈TFA盐形式的标题化合物(3.0mg，51％产率；纯度100％)。MS m/z[M+H]+C24H24ClF3N4O3的计算值,509.15；实验值509.2。
实例4
根据本文所述的程序，且替换适当起始物质和试剂，将这些化合物制备为TFA盐：
1.(2S,4R)-4-[(5-乙酰基-2H-吡唑-3-羰基)-氨基]-2-氨基甲基-5-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基)-2-甲基戊酸
2.(2S,4R)-2-氨基甲基-5-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基)-2-甲基-4-[(5-甲基-噁唑-2-羰基)氨基]戊酸
实例5：(2S,4R)-2-氨甲酰基-5-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基)-2-甲基-4-[(1H-[1,2, 3]三唑-4-羰基)氨基]戊酸
将3H-[1,2,3]三唑-4-甲酸(6.3mg，56μmol)和HATU(21.2mg，56μmol)溶解于DMF(2mL)中，且在室温下搅拌15分钟。添加(2S,4R)-4-氨基-2-氨甲酰基-5-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基)-2-甲基戊酸(25.3mg，67μmol)和DIPEA(29μL，167μmol)，且在室温下搅拌混合物15分钟，此时LCMS指示所需化合物的质量。在真空中浓缩混合物，且残余物通过制备型HPLC纯化，得到呈TFA盐形式的标题化合物(7.4mg，28％产率；纯度99％)。MS m/z[M+H]+C22H21ClFN5O4的计算值,474.13；实验值475.2。
实例6：2-{(R)-3-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基)-2-[(1H-[1,2,3]三唑-4-羰基)氨基] 丙基}-2-甲基丙二酸
将1H-1,2,3-三唑-4-甲酸(3.3mg，29μmol)和HATU(10.5mg，28μmol)溶解于DMF(2.0mL)中，且在室温下搅拌15分钟。添加2-[(R)-2-氨基-3-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基)丙基]-2-甲基丙二酸(12.0mg，32μmol)和DIPEA(9.2μL，53μmol)，且在室温下搅拌所得混合物15分钟，此时LCMS指示所需化合物的质量。在真空中浓缩混合物，且残余物通过制备型HPLC纯化，得到呈TFA盐形式的标题化合物(5mg)。MS m/z[M+H]+C22H20ClFN4O5的计算值,475.11；实验值475。
实例7：(2S,4R)-5-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基)-2-甲氧基甲基-2-甲基-4-[(5-氧 代-4,5-二氢-[1,2,4]噁二唑-3-羰基)氨基]戊酸
将5-氧代-4,5-二氢-[1,2,4]噁二唑-3-甲酸(18.3mg，141μmol)、HATU(46.8mg，123μmol)、DIPEA(46.0μL，264μmol)、DMF(0.5mL)和(2S,4R)-4-氨基-5-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基)-2-甲氧基甲基-2-甲基戊酸乙酯(35.8mg，88μmol)组合，且搅拌过夜，接着在真空中浓缩，且残余物通过正相色谱(0-100％EtOAc/己烷)纯化。接着，将粗物质(13mg)溶解于THF(1mL)和NaOH(172μL，172μmol)中，且搅拌过夜。溶液用AcOH酸化，且通过反相色谱纯化，得到标题化合物(1mg；纯度95％)。MS m/z[M+H]+C23H23ClFN3O6的计算值,492.13；实验值492。
实例8
根据本文所述的程序，且替换适当起始物质和试剂，将这些化合物制备为母体化合物：
1.(2S,4R)-5-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基)-2-甲氧基甲基-2-甲基-4-[(5-甲基噁唑-2-羰基)氨基]戊酸
2.(2S,4R)-5-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基)-4-[(2-环丙基噁唑-4-羰基)氨基]-2-甲氧基甲基-2-甲基戊酸
3.(2S,4R)-5-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基)-4-[(5-氯吡啶-2-羰基)氨基]-2-甲氧基甲基-2-甲基戊酸
4.(2S,4R)-5-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基)-2-甲氧基甲基-2-甲基-4-[(嘧啶-2-羰基)氨基]戊酸
5.(2S,4R)-5-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基)-2-甲氧基甲基-2-甲基-4-[(5-三氟甲基吡啶-2-羰基)氨基]戊酸
6.(2S,4R)-5-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基)-2-甲氧基甲基-2-甲基-4-[(噁唑-2-羰基)氨基]戊酸
7.(2S,4R)-5-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基)-2-甲氧基甲基-2-甲基-4-[(1H-[1,2,4]三唑-3-羰基)氨基]戊酸
8.(2S,4R)-5-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基)-4-[(1-乙氧基-1H-[1,2,3]三唑-4-羰基)氨基]-2-甲氧基甲基-2-甲基戊酸
9.(2S,4R)-5-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基)-2-甲氧基甲基-4-[(1-甲氧基-1H-[1,2,3]三唑-4-羰基)氨基]-2-甲基戊酸
10.(2S,4R)-5-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基)-4-{[1-(2-羟乙基)-1H-[1,2,3]三唑-4-羰基]氨基}-2-甲氧基甲基-2-甲基戊酸
实例9：(2S,4R)-5-(3'-氯联苯-4-基)-2-乙氧基甲基-2-甲基-4-[(5-氧代-4,5- 二氢-[1,2,4]噁二唑-3-羰基)氨基]戊酸
将5-氧代-4,5-二氢-[1,2,4]噁二唑-3-甲酸(37.0mg，284μmol)、HATU(95mg，249μmol)、DIPEA(93μL，533μmol)和(2S,4R)-4-氨基-5-(3'-氯联苯-4-基)-2-乙氧基甲基-2-甲基戊酸乙酯(71.8mg，178μmol)组合，且搅拌过夜，接着在真空中浓缩，且残余物通过正相色谱纯化。接着，将物质(39.9mg)溶解于THF(1mL)和NaOH(387μL，387μmol)中，且在40℃下搅拌过夜。溶液用AcOH酸化，且通过反相色谱纯化，得到标题化合物(5mg；纯度95％)。MS m/z[M+H]+C24H26ClN3O6的计算值,488.15；实验值488。
实例10：(2S,4R)-5-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基)-4-[(2-环丙基噁唑-4-羰基)氨 基]-2-乙氧基甲基-2-甲基戊酸
将(2S,4R)-4-叔丁氧基羰基氨基-5-(5'-氯-2'-氟-联苯-4-基)-2-乙氧基甲基-2-甲基戊酸(220mg，445μmol)溶解于MeCN(5mL)中。添加含4N HCl的二噁烷(4mL)，且将所得混合物搅拌10分钟，接着在减压下浓缩，得到化合物1，其直接用于下一步骤。
将2-环丙基-噁唑-4-甲酸(6.48mg，42μmol)与HATU(16.1mg，42μmol)混合于DMF(0.5mL)中，且搅拌10分钟。添加DIPEA(1当量)，且搅拌混合物1分钟。将含化合物1(20mg，51μmol)的DMF(0.5mL)与DIPEA(22.2μL，127μmol)组合，且添加到混合物中，且搅拌30分钟。在减压下蒸发一半溶剂，且残余物通过制备型HPLC纯化，得到呈盐酸盐形式的标题化合物(4.1mg；纯度100％)。MS m/z[M+H]+C28H30ClFN2O5的计算值,529.18；实验值530.2。
实例11
根据本文所述的程序，且替换适当起始物质和试剂，将这些化合物制备为母体化合物或TFA盐：
1.(2S,4R)-5-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基)-2-乙氧基甲基-2-甲基-4-[(噁唑-2-羰基)氨基]戊酸
2.(2S,4R)-5-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基)-4-[(5-氯吡啶-2-羰基)氨基]-2-乙氧基甲基-2-甲基戊酸
3.(2S,4R)-5-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基)-2-乙氧基甲基-2-甲基-4-[(嘧啶-2-羰基)氨基]戊酸
4.(2S,4R)-5-(5'-氯-2'氟联苯-4-基)-2-乙氧基甲基-2-甲基-4-[(5-甲基-2H-[1,2,3]三唑-4-羰基)氨基]戊酸
实例12：(R)-5-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基)-2-氰基-2-甲基-4-[(3H-[1,2,3]三唑- 4-羰基)氨基]戊酸(异构体a和b)
向2-氰基丙酸乙酯(13μL，0.1mmol)、(R)-4-((5'-氯-2'-氟-[1,1'-联苯]-4-基)甲基)-1,2,3-氧杂噻唑烷-3-甲酸叔丁酯2,2-二氧化物(46mg，105μmol)和溴化四丁基铵(3.2mg，10.0μmol)于二甲苯(0.5mL)中的溶液中添加Cs2CO3(49mg，150μmol)。在室温下搅拌所得混合物过夜。添加1N HCl(0.5mL)，且在室温下搅拌溶液10分钟。添加DCM(1.5mL)，分离各层，且水层用DCM(2×1.5mL)萃取。合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并且浓缩。粗产物通过柱色谱(0-30％EtOAc/己烷经20分钟)纯化，得到呈透明油状物的化合物1(33.8mg，69％产率)。
向化合物1(33.8mg，69μmol)于EtOH(690μL)中的溶液中添加NaOH(553μL，553μmol)。在室温下搅拌溶液2小时，且接着在真空中浓缩，得到化合物2，其不经进一步纯化即使用。
在室温下搅拌化合物2(31.8mg，69μmol)于HCl(345μL，1.4mmol)中的溶液1小时。在BOC基团已裂解后，在真空中浓缩反应混合物。在室温下搅拌3H-[1,2,3]三唑-4-甲酸(9.4mg，83μmol)和HATU(31.5mg，83μmol)于DMF(690μL)中的溶液30分钟。此后，添加粗胺于DMF(690μL)中的溶液，紧接着添加DIPEA(36μL，207μmol)。在室温下搅拌2小时后，在真空中浓缩溶液。粗残余物通过制备型HPLC纯化，得到标题化合物异构体a(1.6mg；纯度82％)和异构体b(0.7mg；纯度100％)。MS m/z[M+H]+C22H19ClFN5O3的计算值,456.12；实验值456.2。
实例13：(R)-5-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基)-2-氰基-2-甲基-4-[(3H-[1,2,3]三唑- 4-羰基)氨基]戊酸乙酯(异构体a、b和c)
化合物1如本文中所述制备。
在室温下搅拌化合物1(18.1mg，37μmol)于HCl(185μL，740μmol)中的溶液30分钟。此后，LCMS指示boc基团已裂解，因此在真空中浓缩溶液。在室温下搅拌3H-[1,2,3]三唑-4-甲酸(5.0mg，44μmol)和HATU(17mg，44μmol)于DMF(370μL)中的溶液30分钟。此后，添加粗胺于DMF(370μL)中的溶液，紧接着添加DIPEA(19μL，111μmol)。在室温下搅拌所得混合物1小时，且接着在真空中浓缩。粗残余物通过制备型HPLC纯化，得到具有相同质量的3种产物(其中2种为非对映异构体)：异构体a(3.5mg；纯度97％)、异构体b(1.2mg；纯度100％)和异构体c(1.1mg；纯度100％)。MS m/z[M+H]+C24H23ClFN5O33的计算值,484.15；实验值484.2。
实例14：(R)-5-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基)-2-乙基-2-羟基甲基-4-[(3H-[1,2,3] 三唑-4-羰基)氨基]戊酸(异构体a和b)
将(R)-4-氨基-5-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基)-2-乙基-2-羟基甲基戊酸(异构体a；85mg，190μmol，1.0当量)和DIPEA(250μL，1.4mmol，7.5当量)溶解于DMF(800μL)中。将1H-1,2,3-三唑-4-甲酸(32mg，290μmol，1.5当量)、HATU(70mg，184μmol，1.0当量)和DIPEA(100μL，572μmol，7.5当量)溶解于DMF(500μL)中，且在室温下搅拌15分钟。接着，将溶液组合，且在室温下搅拌所得混合物20分钟，且当反应完成(如通过LC/MS分析所测定)时，将混合物在真空中浓缩，且通过制备型HPLC纯化，得到标题化合物(异构体a；21.9mg)。LCMS(ESI):计算值C23H24ClFN4O4＝474；观测值M+H＝475.1。保留时间：4.75分钟。
将(R)-4-氨基-5-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基)-2-乙基-2-羟基甲基戊酸(异构体b；85mg，190μmol，1.0当量)和DIPEA(250μL，1430μmol，7.5当量)溶解于DMF(800μL)中。将1H-1,2,3-三唑-4-甲酸(32mg，290μmol，1.5当量)、HATU(70mg，184μmol，1.0当量)和DIPEA(100μL，572μmol，7.5当量)溶解于DMF(500μL)中，且在室温下搅拌15分钟。接着，将溶液组合，且在室温下搅拌所得混合物20分钟，且当反应完成(如通过LC/MS分析所测定)时，将混合物在真空中浓缩且通过制备型HPLC纯化，得到标题化合物(异构体b；37.8mg)。LCMS(ESI):计算值C23H24ClFN4O4＝474；观测值M+H＝475.0。保留时间：4.72分钟。
LC/MS方法：流动速率：1.5mL/min；缓冲液A：0.1％TFA/H2O；缓冲液B 0.1％TFA/MeCN；梯度洗脱从5％-100％B经9.6分钟，接着100％B持续1.0分钟，在254nm下检测。
实例15：(R)-5-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基)-2-羟基甲基-2-丙基-4-[(3H-[1,2,3] 三唑-4-羰基)氨基]戊酸(异构体a和b)
将(R)-4-氨基-5-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基)-2-羟基甲基-2-丙基戊酸(异构体a；40mg，90μmol，1.0当量)和DIPEA(40μL，228μmol，2.5当量)溶解于DMF(200μL)中。将1H-1,2,3-三唑-4-甲酸(17mg，150μmol，1.5当量)、HATU(45mg，120μmol，1.5当量)和DIPEA(40μL，228μmol，2.5当量)溶解于DMF(600μL)中，且在室温下搅拌几分钟。接着，将溶液组合，且在室温下搅拌所得混合物，直到LC/MS分析揭露起始物质的消耗。将混合物在真空中浓缩且通过制备型HPLC纯化，得到标题化合物(异构体a；15.7mg)。LCMS(ESI):计算值C24H26ClFN4O4＝488；观测值M+H＝489.2。保留时间：5.03分钟。
将(R)-4-氨基-5-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基)-2-羟基甲基-2-丙基戊酸(异构体b；60mg，140μmol，1.0当量)和DIPEA(40μL，228μmol，1.6当量)溶解于DMF(300μL)中。将1H-1,2,3-三唑-4-甲酸(24mg，210μmol，1.5当量)、HATU(57mg，150μmol，1.0当量)和DIPEA(80μL，456μmol，3.2当量)溶解于DMF(900μL)中，且在室温下搅拌几分钟。接着，将溶液组合，且在室温下搅拌所得混合物，且当反应完成(如通过LC/MS分析所测定)时，将混合物在真空中浓缩且通过制备型HPLC纯化，得到标题化合物(异构体b；33.7mg)。LCMS(ESI):计算值C24H26ClFN4O4＝488；观测值M+H＝489.2。保留时间：4.98分钟。
LC/MS方法：流动速率：1.5mL/min；缓冲液A：0.1％TFA/H2O；缓冲液B 0.1％TFA/MeCN；梯度洗脱从5％-100％B经9.6分钟，接着100％B持续1.0分钟，在254nm下检测。
实例16：(R)-5-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基)-2-(2-羟乙基)-2-羟基甲基-4-[(3H- [1,2,3]三唑-4-羰基)氨基]戊酸(异构体a和b)
将3-[(R)-2-氨基-3-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基)-丙基]-3-羟基甲基-二氢-呋喃-2-酮(异构体a；10mg，30μmol，1.0当量)和DIPEA(30μL，170μmol，5.6当量)溶解于DMF(200μL)中。将1H-1,2,3-三唑-4-甲酸(10mg，90μmol，3.0当量)、DIPEA(60μL，340μmol，11.2当量)和HATU(15mg，40μmol，1.3当量)溶解于DMF(600μL)中，且在室温下搅拌几分钟。接着，将溶液组合，且在室温下搅拌所得混合物，且当反应完成(如通过LC/MS分析所测定)时，将EtOAc和水添加到混合物中，接着，将有机物分离且在真空中浓缩。将粗残余物溶解于1:1MeOH和水性2N NaOH的溶液(4mL)中，且在室温下搅拌30分钟，且当反应完成(如通过LC/MS分析所测定)时，将混合物在真空中浓缩且通过制备型HPLC纯化，得到标题化合物(异构体a；3mg)。LCMS(ESI):计算值C23H24ClFN4O5＝490；观测值M+H＝491.2。保留时间：2.04分钟。
将3-[(R)-2-氨基-3-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基)-丙基]-3-羟基甲基-二氢-呋喃-2-酮(异构体b；30mg，52μmol，1.0当量)和DIPEA(50μL，291μmol，5.6当量)溶解于DMF(200μL)中。将1H-1,2,3-三唑-4-甲酸(17mg，156μmol，3.0当量)、DIPEA(100μL，582μmol，11.2当量)和HATU(25mg，68μmol，1.3当量)溶解于DMF(600μL)中，且在室温下搅拌几分钟。接着，将溶液组合，且在室温下搅拌所得混合物；当反应完成(如通过LC/MS分析所测定)时，将EtOAc和水添加到混合物中。将有机层分离，在真空中浓缩且通过制备型HPLC纯化，得到标题化合物(异构体b；3.9mg)。LCMS(ESI):计算值C23H24ClFN4O5＝490；观测值M+H＝491.2。保留时间：1.99分钟。
LC/MS方法：流动速率：1.5mL/min；缓冲液A：0.1％TFA/H2O；缓冲液B 0.1％TFA/MeCN；梯度洗脱从5％-100％B经3.6分钟，接着100％B持续1.0分钟，在254nm下检测。
实例17：(R)-2-(2-氨基-乙基)-5-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基)-2-羟基甲基-4- [(3H-[1,2,3]三唑-4-羰基)氨基]戊酸
将(R)-4-氨基-2-(2-叠氮基乙基)-5-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基)-2-羟基甲基戊酸(9mg，21μmol，1.0当量)和DIPEA(15μL，86μmol，4.0当量)溶解于DMF(0.2mL)中。将1H-1,2,3-三唑-4-甲酸(10mg，80μmol，4当量)和DIPEA(30μL，172μmol，8.1当量)溶解于DMF(0.5mL)中。接着，将溶液组合，且在室温下搅拌所得混合物20分钟；LC/MS分析揭露单酰基化和双酰基化产物的混合物。将混合物浓缩成油状物，且溶解于2N NaOH(2mL)和MeOH(1mL)的混合物中，且在60℃下搅拌30分钟；当反应完成(如通过LC/MS分析所测定)时，将混合物在真空中浓缩且用HCl水溶液酸化到pH约3，且用EtOAc萃取。有机相经Na2SO4干燥，过滤，且在真空中浓缩，得到粗化合物1(10mg)。LCMS(ESI):计算值C23H27ClFN7O4＝515；观测值M+H＝516.2。保留时间：4.93分钟。
将化合物1(10mg)溶解于EtOAc和异丙醇的混合物中。添加Pd/C，且在1个大气压的氢气下搅拌所得混合物，且当反应完成(如通过LC/MS分析所测定)时，将溶液过滤且浓缩，接着通过制备型HPLC纯化，得到标题化合物(3.1mg)。LCMS(ESI):计算值C23H25ClFN3O2＝489；观测值M+H＝490.3。保留时间：3.87分钟。
LC/MS方法：流动速率：1.5mL/min；缓冲液A：0.1％TFA/H2O；缓冲液B 0.1％TFA/MeCN；梯度洗脱从5％-100％B经9.6分钟，接着100％B持续1.0分钟，在254nm下检测。
实例18：(R)-2-(2-乙酰基氨基乙基)-5-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基)-2-羟基甲基- 4-[(3H-[1,2,3]三唑-4-羰基)氨基]戊酸
将(R)-4-氨基-2-(2-叠氮基乙基)-5-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基)-2-羟基甲基戊酸(20mg，40μmol，1.0当量)和DIPEA(50μL，290μmol，7.2当量)溶解于DMF(200μL)中。将1H-1,2,3-三唑-4-甲酸(20mg，180μmol，4.5当量)、DIPEA(50μL，290μmol，7.2当量)和HATU(45mg，120μmol，3.0当量)溶解于DMF(500μL)中，且在室温下搅拌几分钟。接着，将溶液组合，且在室温下搅拌所得混合物；当反应完成(如通过LC/MS分析所测定)时，将EtOAc和水添加到混合物中；接着，将有机物分离，浓缩且溶解于EtOAc(5mL)和MeOH(1mL)以及几滴AcOH中。添加Pd/C(10mg)，且将所得混合物在1个大气压下氢化两小时，且当反应完成(如通过LC/MS分析所测定)时，接着将混合物浓缩且通过制备型HPLC纯化。在0℃下所得产物用含乙酸酐(1.4μL)的THF(50μL)和Et3N(50μL)处理。五分钟内的LC/MS分析展示双酰基化产物。反应物用HCl水溶液淬灭，且在室温下搅拌过夜，且当反应完成(如通过LC/MS分析所测定)时，混合物通过制备型HPLC纯化，得到标题化合物(1.5mg)。LCMS(ESI):计算值C25H27ClFN5O5＝531；观测值M+H＝532.0。保留时间：2.20分钟。
LC/MS方法：流动速率：1.5mL/min；缓冲液A：0.1％TFA/H2O；缓冲液B 0.1％TFA/MeCN；梯度洗脱从5％-100％B经3.6分钟，接着100％B持续1.0分钟，在254nm下检测。
实例19：2-{(R)-3-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基)-2-[(3H-[1,2,3]三唑-4-羰基)氨 基]丙基}-2-羟甲基戊-4-烯酸(异构体a和b)
将2-[(R)-2-氨基-3-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基)丙基]-2-羟甲基戊-4-烯酸(异构体a；85mg)溶解于DMF中。将1H-1,2,3-三唑-4-甲酸(2当量)、DIPEA(2当量)和HATU(1当量)也溶解于DMF中，且在室温下搅拌几分钟。接着，将溶液组合，且在室温下搅拌所得混合物，且当反应完成(如通过LC/MS分析所测定)时，将混合物在真空中浓缩，且通过制备型HPLC纯化，得到标题化合物(异构体a；21.9mg)。LCMS(ESI):计算值C24H24ClFN4O4＝486；观测值M+H＝487.1。保留时间：4.87分钟。
将2-[(R)-2-氨基-3-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基)丙基]-2-羟甲基戊-4-烯酸(异构体b；60mg)溶解于DMF(200μL)中。将1H-1,2,3-三唑-4-甲酸(35mg，310μmol，2.0当量)、DIPEA(200μL，1.2mmol，7.6当量)和HATU(60mg，158μmol，1.1当量)也溶解于DMF(200μL)中，且在室温下搅拌几分钟。接着，将溶液组合，且在室温下搅拌所得混合物，且当反应完成(如通过LC/MS分析所测定)时，将混合物在真空中浓缩且通过制备型HPLC纯化，得到标题化合物(异构体b；24.3mg)。LCMS(ESI):计算值C24H24ClFN4O4＝486；观测值M+H＝487.1。保留时间：4.92分钟。
LC/MS方法：流动速率：1.5mL/min；缓冲液A：0.1％TFA/H2O；缓冲液B 0.1％TFA/MeCN；梯度洗脱从5％-100％B经3.6分钟，接着100％B持续1.0分钟，在254nm下检测。
实例20：3-{(R)-3-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基)-2-[(3H-[1,2,3]三唑-4-羰基)氨 基]丙基}四氢呋喃-3-甲酸(异构体a和b)
将3-[(R)-2-氨基-3-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基)丙基]四氢呋喃-3-甲酸(异构体a；10mg，24μmol，1.0当量)和DIPEA(20μL，100μmol，4.0当量)溶解于DMF(100μL)中。将1H-1,2,3-三唑-4-甲酸(10mg，88μmol，3.7当量)、HATU(15mg，39μmol，1.6当量)和DIPEA(40μL，200μmol，8.0当量)溶解于DMF(0.5mL)中，且在室温下搅拌十分钟，接着将两种溶液组合，且在室温下搅拌，且当反应完成(如通过LC/MS分析所测定)时，将EtOAc和水添加到混合物中；接着，将有机物分离，浓缩且通过制备型HPLC纯化，得到标题化合物(异构体a；7.8mg)。LCMS(ESI):计算值C23H22ClFN4O4＝472；观测值M+H＝473.0。保留时间：4.73分钟。
将3-[(R)-2-氨基-3-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基)丙基]四氢呋喃-3-甲酸(异构体b；10mg，24μmol，1.0当量)和DIPEA(20μL，100μmol，4.0当量)溶解于DMF(100μL)中。将1H-1,2,3-三唑-4-甲酸(10mg，88μmol，3.7当量)、HATU(15mg，39μmol，1.6当量)和DIPEA(40μL，200μmol，8.0当量)溶解于DMF(0.5mL)中，且在室温下搅拌十分钟，接着将两种溶液组合，且在室温下搅拌。当反应完成(如通过LC/MS分析所测定)时，将EtOAc和水添加到混合物中；接着，将有机物分离，浓缩且通过制备型HPLC纯化，得到标题化合物(异构体b；2.9mg)。LCMS(ESI):计算值C23H22ClFN4O4＝472；观测值M+H＝472.9。保留时间：4.77分钟。
LC/MS方法：流动速率：1.5mL/min；缓冲液A：0.1％TFA/H2O；缓冲液B 0.1％TFA/MeCN；梯度洗脱从5％-100％B经9.6分钟，接着100％B持续1.0分钟，在254nm下检测。
实例21：3-{(R)-3-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基)-2-[(3H-[1,2,3]三唑-4-羰基)氨 基]丙基}吡咯烷-3-甲酸(异构体a和b)
将3-[(R)-2-氨基-3-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基)-丙基]吡咯烷-1,3-二甲酸1-苯甲酯(异构体a；14mg，35μmol，1.0当量)溶解于DMF中。将1H-1,2,3-三唑-4-甲酸(2当量)、DIPEA(2当量)和HATU(1当量)也溶解于DMF中，且在室温下搅拌几分钟。接着，将溶液组合，且在室温下搅拌所得混合物，且当反应完成(如通过LC/MS分析所测定)时，将混合物在真空中浓缩，得到粗化合物1a。LCMS(ESI):计算值C31H29ClFN5O5＝605；观测值M+H＝606.1。保留时间：5.82分钟。(LC/MS方法1)
将3-[(R)-2-氨基-3-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基)-丙基]吡咯烷-1,3-二甲酸1-苯甲酯(异构体b；170mg，320μmol，1.0当量)和DIPEA(200μL，1150μmol，3.6当量)溶解于DMF(1mL)中。将1H-1,2,3-三唑-4-甲酸(100mg，880μmol，2.8当量)、DIPEA(200μL，1150μmol，3.6当量)和HATU(200mg，530μmol，1.6当量)溶解于DMF(3mL)中，且在室温下搅拌几分钟。接着，将溶液组合，且在室温下搅拌所得混合物，且当反应完成(如通过LC/MS分析所测定)时，将混合物在真空中浓缩，得到粗化合物1b。LCMS(ESI):计算值C31H27ClFN5O4＝605；观测值M+H＝606.2。保留时间：5.73分钟。(LC/MS方法1)。
将化合物1a溶解于1:16M水性HCl/对二噁烷(1mL)中，且在100℃下搅拌，且当反应完成(如通过LC/MS分析所测定)时，将混合物在真空中浓缩且通过制备型HPLC纯化，得到标题化合物(异构体a；6.9mg)。LCMS(ESI):计算值C23H23ClFN5O3＝471；观测值M+H＝472.1。保留时间：4.14分钟。(LC/MS方法1)
将化合物1b溶解于1:16M水性HCl/对二噁烷(6mL)中，且在100℃下搅拌一小时，且当反应完成(如通过LC/MS分析所测定)时，将混合物在真空中浓缩且通过制备型HPLC纯化，得到标题化合物(异构体b；34mg)。LCMS(ESI):计算值C23H23ClFN5O3＝471；观测值M+H＝472.3。保留时间：2.06分钟。(LC/MS方法2)。
LC/MS方法1：流动速率：1.5mL/min；缓冲液A：0.1％TFA/H2O；缓冲液B 0.1％TFA/MeCN；梯度洗脱从5％-100％B经9.6分钟，接着100％B持续1.0分钟，在254nm下检测。
LC/MS方法2：流动速率：1.5mL/min；缓冲液A：0.1％TFA/H2O；缓冲液B 0.1％TFA/MeCN；梯度洗脱从5％-100％B经3.6分钟，接着100％B持续1.0分钟，在254nm下检测。
实例22：1-乙酰基-3-{(R)-3-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基)-2-[(3H-[1,2,3]三唑-4- 羰基)氨基]丙基}吡咯烷-3-甲酸(异构体a和b)
将1-乙酰基-3-[(R)-2-氨基-3-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基)丙基]吡咯烷-3-甲酸(异构体a；10mg)溶解于DMF中。将1H-1,2,3-三唑-4-甲酸(2当量)、DIPEA(2当量)和HATU(1当量)也溶解于DMF中，且在室温下搅拌几分钟。接着，将溶液组合，且在室温下搅拌所得混合物，直到反应完成(如通过LCMS可见)。将混合物在真空中浓缩且通过制备型HPLC纯化，得到标题化合物(异构体a；4.1mg)。LCMS(ESI):计算值C25H25ClFN5O4＝513；观测值M+H＝514.3。保留时间：2.24分钟。
将1-乙酰基-3-[(R)-2-氨基-3-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基)丙基]吡咯烷-3-甲酸(异构体b；40mg，88μmol，1.0当量)和DIPEA(50μL，170μmol，2.0当量)溶解于DMF(0.2mL)中。将1H-1,2,3-三唑-4-甲酸(30mg，260μmol，3.0当量)、DIPEA(90μL，340μmol，4.0当量)和HATU(65mg，170μmol，1.9当量)溶解于DMF(0.6mL)中，且在室温下搅拌30分钟。接着，将溶液组合，且在室温下搅拌所得混合物十分钟。将混合物与过量的含2N NaOH的MeOH一起搅拌20分钟，且浓缩到干燥。其接着用HCl酸化到pH约3，且用EtOAc萃取。将有机相在真空中浓缩，且通过制备型HPLC纯化，得到标题化合物(异构体b；30mg)。LCMS(ESI):计算值C25H25ClFN5O4＝513；观测值M+H＝514.3。保留时间：2.24分钟。
LC/MS方法：流动速率：1.5mL/min；缓冲液A：0.1％TFA/H2O；缓冲液B 0.1％TFA/MeCN；梯度洗脱从5％-100％B经3.6分钟，接着100％B持续1.0分钟，在254nm下检测。
实例23：(R)-5-(5'-氯-2'-氟联苯-4-基)-2-氰基-2-乙基-4-[(3H-[1,2,3]三唑- 4-羰基)氨基]戊酸(异构体a和b)
向2-氰基丁酸乙酯(141μL，1.0mmol)、(R)-4-((5'-氯-2'-氟-[1,1'-联苯]-4-基)甲基)-1,2,3-氧杂噻唑烷-3-甲酸叔丁酯2,2-二氧化物(464mg，1.1mmol)和溴化四丁基铵(32mg，100μmol)于二甲苯(5.0mL)中的溶液中添加Cs2CO3(489mg，1.5mmol)。在室温下搅拌所得混合物过夜。添加1N HCl(5.0mL)，且在室温下搅拌溶液10分钟。添加DCM(7.5mL)，且分离各层，且水层用DCM(2×7.5mL)萃取。合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并且浓缩。粗产物通过柱色谱(0-30％EtOAc/己烷经20分钟)纯化，得到呈透明油状物的化合物1(20.8mg)。
向化合物1(20.8mg，41μmol)于EtOH(410μL)中的溶液中添加NaOH(331μL，331μmol)。在室温下搅拌溶液2小时，且接着在真空中浓缩，得到化合物2，其不经进一步纯化即使用。
将化合物2(19.9mg，42μmol)于HCl(209μL，838μmol)中的溶液在室温下搅拌1小时，接着在真空中浓缩。在室温下搅拌3H-[1,2,3]三唑-4-甲酸(5.7mg，50μmol)和HATU(19mg，50μmol)于DMF(420μL)中的溶液30分钟。此后，依序添加粗胺于DMF(0.2mL)中的溶液和DIPEA(22μL，126μmol)。在室温下搅拌过夜后，在真空中浓缩溶液。将粗残余物溶解于50％AcOH水溶液(1.5mL)中且通过制备型HPLC纯化。通过制备型HPLC分离2种非对映异构体，得到标题化合物异构体a(2.3mg；纯度100％)和异构体b(3.7mg；纯度100％)。MS m/z[M+H]+C23H21ClFN5O3的计算值,470.13；实验值470.2。
分析1
针对抑制剂对人类和大鼠NEP以及人类ACE的效能的体外定量分析
使用如下文所描述的体外分析测定化合物对人类和大鼠脑啡肽酶(EC3.4.24.11；NEP)以及人类血管紧张素转化酶(ACE)的抑制活性。
从大鼠肾脏提取NEP活性
由成年史泊格多利(Sprague Dawley)大鼠的肾脏制备大鼠NEP。在冷磷酸盐缓冲盐水(PBS)中洗涤整个肾脏，并且在冰冷裂解缓冲液(1％Triton X-114，150mM NaCl，50mM三(羟基甲基)氨基甲烷(Tris)pH 7.5；波迪尔(Bordier)(1981)生物化学杂志256:1604-1607)中以每克肾脏使用5mL缓冲液的比率进行培育。使用宝创(polytron)手持式组织研磨机在冰上使样品均匀化。在3℃下于旋桶式转子(swinging bucket rotor)中以1000×g将匀浆离心5分钟。离心块在20mL冰冷裂解缓冲液中再悬浮，并且在冰上培育30分钟。接着使样品(15-20mL)在25mL冰冷垫缓冲液(6％w/v蔗糖，50mM pH 7.5Tris，150mM NaCl，0.06％，Triton X-114)上分层，加热到37℃后持续3-5分钟，并且在室温下于旋桶式转子中以1000×g离心3分钟。吸出上两层，留下含有富集的膜部分的粘稠油状沉淀物。添加甘油到50％的浓度，并且将样品储存在-20℃下。使用BCA检测系统，以牛血清白蛋白(BSA)作为标准样品定量蛋白质浓度。
酶抑制分析
重组人类NEP和重组人类ACE是市售获得(明尼苏达州明尼阿波利斯市的安迪生物公司(R&D Systems,Minneapolis,MN)，目录号分别为1182-ZN和929-ZN)。荧光肽底物Mca-D-Arg-Arg-Leu-Dap-(Dnp)-OH(梅代罗斯(Medeiros)等人(1997)巴西医学生物学研究杂志(Braz.J.Med.Biol.Res.)30:1157-62；多肽(Anaspec),加利福尼亚州圣何塞(San Jose,CA))和Abz-Phe-Arg-Lys(Dnp)-Pro-OH(阿罗约(Araujo)等人(2000)生物化学(Biochemistry)39:8519-8525；加利福尼亚州托兰斯市巴亨公司(Bachem,Torrance,CA))分别用于NEP和ACE分析。
在384孔白色不透明培养板中，在37℃下，在分析缓冲液(NEP：50mM HEPES，pH7.5，100mM NaCl，0.01％聚乙二醇脱水山梨糖醇单月桂酸酯(Tween-20)，10μM ZnSO4；ACE：50mM HEPES，pH 7.5，100mM NaCl，0.01％Tween-20，1μM ZnSO4)中使用浓度为10μM的荧光肽底物进行分析。各别酶的使用浓度可使1μM底物在37℃下20分钟之后发生定量蛋白分解。
在10μM到20pM的浓度范围内分析测试化合物。将测试化合物添加到酶中，并且在37℃下培育30分钟，之后通过添加底物开始反应。在37℃下培育20分钟之后，通过添加冰醋酸到最终浓度为3.6％(v/v)来终止反应。
在荧光计上用分别设定为320nm和405nm的激发和发射波长读取培养板。通过使用以下方程式对数据进行非线性回归来获得抑制常数(加利福尼亚州圣地亚哥市的格拉夫帕德软件公司(GraphPad Software,Inc.,San Diego,CA))：
v＝v0/[1+(I/K′)]
其中v是反应速率，v0是不受抑制的反应速率，I是抑制剂浓度，并且K′是表观抑制常数。
在这一分析中测试本发明化合物，并且发现其对人类NEP具有如下pKi值。在一些情况下，前药化合物在这一体外分析中不抑制酶，或前药(术语“前药”打算意指药物的非活性或活性显著较小前体，其在生理条件下在体内转化成其活性形式，例如通过正常代谢过程；此类化合物可能未必在NEP处具有药理学活性，但可经口或肠胃外投与并且其后在体内代谢以形成在NEP处具药理学活性的化合物)由于预期无活性而不经测试(n.d.)。
分析2
麻醉大鼠中ACE和NEP活性的药效动力学(PD)分析
用120mg/kg硫仲丁比妥钠(i.p.)麻醉雄性史泊格多利的血压正常的大鼠。在麻醉后，插入颈静脉、颈动脉(PE 50导管)以及膀胱(展开PE 50导管)导管，进行气管切开术(铁氟龙(Teflon)针头，尺寸14规格)以促进自发呼吸。接着使动物有60分钟稳定时间段，并且期间保持连续地输注5mL/kg/h盐水(0.9％)，以使其保持含水并且确保尿液产量。在整个实验中通过使用加热垫来维持体温。在60分钟稳定时间段结束时，以15分钟为间隔向动物静脉内(i.v.)给药两个剂量的AngI(1.0μg/kg，针对ACE抑制剂活性)。在15分钟后第二给药AngI时，用媒剂或测试化合物处理动物。五分钟后，另外用大丸剂i.v.注入心房利钠肽(ANP；30μg/kg)来处理动物。在ANP处理之后立即开始尿液收集(进入预先称重的艾本德(eppendorf)导管中)，并且持续60分钟。在尿液收集30和60分钟时，用AngI再次刺激动物。使用诺托寇德系统(Notocord system)(密歇根州卡拉马祖市(Kalamazoo,MI))来进行血压测量。尿液样品冷冻在-20℃下直到用于cGMP分析。使用市售试剂盒(密歇根州安阿伯市的分析设计公司(Assay Designs,Ann Arbor,Michigan)，目录号901-013)通过酶免疫分析测定尿液cGMP浓度。以重力方式测定尿液体积。泌尿cGMP排出量被计算为尿液排出量和尿液cGMP浓度的乘积。通过量化对AngI加压响应的抑制％来评定ACE抑制。通过量化ANP诱发的泌尿cGMP排出量升高的增强来评定NEP抑制。
分析3
清醒的SHR高血压模型中抗高血压剂作用的体内评估
一旦到达测试地点，用自由获取食物和水的方式来使自发性高血压大鼠(SHR，年龄14-20周)适应环境，最少48小时。为便于血压记录，以手术方式将小型啮齿动物无线电发射器(遥测单元；DSI模型TA11PA-C40或C50-PXT，美国数据科学公司(Data Science Inc.,USA))植入这些动物。将与发射器连接的导管端部插入髂分叉上的降主动脉中，并且用组织粘着剂确保其就位。使发射器保持在腹膜内并且固定到腹壁，同时用不可吸收的缝合线缝合腹部切口。用缝合线和缝合钉缝合外层皮肤。用适当的手术后护理使动物恢复。实验当天，将动物笼子中的动物放置在遥测接收器单元顶部以使其适应测试环境和基线记录。进行至少2小时基线测量后，接着用媒剂或测试化合物向动物给药，并且之后进行给药24小时后血压测量。研究期间使用诺托寇德软件(密歇根州卡拉马祖市)连续记录数据，并且存储为电子数字信号。所测量的参数是血压(收缩性、舒张性以及平均动脉压力)和心率。
分析4
清醒的DOCA-盐大鼠高血压模型中抗高血压剂作用的体内评估
一旦到达测试地点，使CD大鼠(雄性，成年，200-300克，美国查尔斯河实验室(Charles River Laboratory,USA))适应环境，最少48小时，之后给予其高盐膳食。高盐膳食(食品中8％，或饮用水中1％NaCl)开始一周后，皮下植入乙酸去氧皮质酮(DOCA)丸粒(100mg，90天释放时间，佛罗里达州拉索塔市的美国创新研究公司(Innovative Researchof America,Sarasota,FL))，并且进行单侧肾切除术。此时，还以手术方式将小型啮齿动物无线电发射器植入动物以便于血压测量(细节参见分析3)。用适当的手术后护理使动物恢复。研究设计、数据记录以及所测量的参数类似于针对分析3所描述的研究设计、数据记录以及所测量的参数。
分析5
清醒的Dahl/SS大鼠高血压模型中抗高血压剂作用的体内评估
一旦到达测试地点，使雄性Dahl盐敏感大鼠(Dahl/SS，年龄6-7周，来自美国查尔斯河实验室)适应环境至少48小时，之后给予其8％NaCl的高盐膳食(TD.92012，美国哈兰公司(Harlan,USA))，接着以手术方式植入小型啮齿动物无线电发射器以便于血压测量(细节参见分析3)。用适当的手术后护理使动物恢复。在距离高盐膳食开始约4到5周时，预期这些动物将变得高血压。在确认高血压水平后，这些动物用于研究，同时持续高盐膳食以保持其高血压水平。研究设计、数据记录以及所测量的参数类似于分析3中所描述的研究设计、数据记录以及所测量的参数。
分析6
大鼠PO盒分析
口服生物可用性或F％是口服剂量中实际上到达全身循环的药物百分比的量度。由于不完全的调配物溶解，归因于化合物不可溶性或不稳定性沿着GI的不完全吸收，或肠道中或肠壁上的代谢，可能出现化合物损失。到达肝门静脉的剂量部分接着也必须在到达全身循环之前通过肝脏。化合物代谢或“首过排除”可在初次通过肝脏期间发生，且这是化合物损失的另一潜在来源。口服生物可用性计算为在口服剂量之后药物暴露与在静脉内剂量(其中全部剂量直接递送到全身循环)之后的药物暴露的剂量标准化比率。
每个盒研究以多达5种不同化合物的10mM DMSO储备溶液开始。通常，选择化合物，使得同一盒中给药的两种化合物不具有在彼此5Da内的分子量。这简化了后续生物分析。将适当体积的每种DMSO储备液添加到媒剂(5％碳酸氢钠、5％右旋糖于H2O中)的体积中，使得每种化合物的最终浓度是0.25mg/ml。静脉内给药溶液在给药之前经无菌过滤(0.2μm)。
从哈兰实验室(Harlan Laboratories，印第安纳州印第安纳波利斯(Indianapolis,IN))获得预插管8到10周龄雄性史泊格-多利大鼠(每种途径每盒3只)。大鼠接受给药溶液的单次经口管饲或单次静脉内(经由外侧尾部静脉)剂量(2mL/kg)。最后一剂为0.5mg/kg。经由颈静脉套管在给药后3分钟、15分钟、30分钟、1小时、2小时、4小时、6小时和24小时收集连续血液样品。手动或使用自动血液取样器进行取样。将样品收集到含有EDTA作为抗凝血剂的微量采血管中，且通过冷冻离心处理成血浆。
用3倍体积的含有适合内标的MeCN萃取血浆样品。将萃取物于3倍体积的含有1％甲酸的水中复原且经由HPLC耦联的MS/MS分析。使用Phoenix软件(法沙特公司(PharsightCorp.)，密苏里州圣路易斯(St.Louis,MO))分析血浆浓度-时间数据以计算药效动力学参数。
当在这一分析中测试时，本发明备受关注的化合物为F％>10％的化合物。这些包括以下化合物：
实例
9
11-4
14a
14b
15a
15b
20a
20b
虽然本发明已参考其特定方面或实施例进行描述，但所属领域的技术人员应理解，可以进行各种变化或可以代入等效物，而不偏离本发明的真实精神和范围。另外，在可应用的专利条款和法规所准许的程度上，本文中所引用的所有公开案、专利以及专利申请案在此以全文引用的方式并入，引用程度如同将各文献单独地以引用的方式并入本文中一般。

Claims (27)

1.一种式I化合物，
其中：
R1是H、-C1-8烷基、-CH(CH3)OC(O)-O-环己基、-(CH2)2-吗啉基或-CH2-5-甲基-[1,3]间二氧杂环戊烯-2-酮；
R2a是-C1-2烷基且R2b是-C0-2亚烷基-NH2、-C(O)NH2、-COOH、-CH2-O-C1-6烷基、-CN或吡啶；或R2a是-CH2OH且R2b是-CH2CH3、-(CH2)2CH3、-C1-2亚烷基-OH、-(CH2)2NH2、-(CH2)2-NHC(O)CH3或-CH2CH＝CH2；或R2a和R2b结合在一起以形成-O-(CH2)2-、-(CH2)2-O-CH2-、-CH2-NH-CH2-、-NH-(CH2)2-、-(CH2)-NH-(CH2)2-或-(CH2)-N[C(O)CH3]-(CH2)2-；
R3、R4以及R5独立地是H或卤基；
R6是选自由以下组成的群组的杂环：3H-噁唑-2-酮、[1,2,4]噁二唑-5-酮、[1,2,3,5]噁三唑、[1,2,4]三唑并[1,5-α]吡啶、三唑、吡唑、咪唑、噁唑、异噁唑、异噻唑、吡啶、噁二唑和嘧啶；所述杂环在碳原子处连接；且所述杂环中的每个氮原子未经取代或经选自由以下组成的群组的R60基团取代：-OH、-(CH2)2OH、-C0-2亚烷基-O-C1-6烷基、-C1-6烷基、-CHF2和-CF3；且所述杂环中的每个碳原子未经取代或经独立地选自由以下组成的群组的R61基团取代：卤基、-OH、-C1-6烷基、-C0-2亚烷基-O-C1-6烷基、-C(O)CH3、-C(O)NH(CH3)、-C(O)N(CH3)2、-C3-6环烷基、-CF3、-CH2SO2CH3、-NH2、-CH2NH2、-CH2N(CH3)2以及经甲基或卤基取代的苯基；
其限制条件为当R2a是-CH3且R2b是-CH2-O-C1-6烷基时，则R6不为未经取代的3H-噁唑-2-酮；未经取代的[1,2,3]三唑；经选自由以下组成的群组的R60基团取代的[1,2,3]三唑：-OH、-C0-2亚烷基-O-C1-6烷基和-C1-6烷基；经选自由以下组成的群组的R61基团取代的[1,2,4]三唑：卤基和-OH；经作为-C1-6烷基的R60基团取代的吡唑；经选自由以下组成的群组的R61基团取代的吡唑：-OH、-C1-6烷基、-C0-2亚烷基-O-C1-6烷基和-C(O)CH3；或经选自由以下组成的群组的R61基团取代的异噁唑：-OH、-C1-6烷基和-C0-2亚烷基-O-C1-6烷基；
或其药学上可接受的盐。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中R1是H、-CH2CH3、-CH(CH3)2、-(CH2)3CH3或-(CH2)5CH3。
3.根据权利要求2所述的化合物，其中R1是H或-CH2CH3。
4.根据权利要求1所述的化合物，其中R2a是-C1-2烷基且R2b是-NH2、-CH2NH2、-C(O)NH2、-COOH、-CH2-O-CH3、-CH2-O-CH2CH3或-CN；或R2a是-CH2OH且R2b是-CH2CH3、-(CH2)2CH3、-(CH2)2-OH、-(CH2)2NH2、-(CH2)2-NHC(O)CH3或-CH2CH＝CH2；或R2a和R2b结合在一起以形成-O-(CH2)2-、-(CH2)2-O-CH2-、-CH2-NH-CH2-、-NH-(CH2)2-、-(CH2)-NH-(CH2)2-或-(CH2)-N[C(O)CH3]-(CH2)2-。
5.根据权利要求4所述的化合物，其中R2a是-CH3且R2b是-NH2、-CH2NH2、-C(O)NH2、-COOH、-CH2-O-CH3、-CH2-O-CH2CH3或-CN；或R2a是-CH2CH3且R2b是-CN；或R2a是-CH2OH且R2b是-CH2CH3、-(CH2)2CH3、-(CH2)2-OH、-(CH2)2NH2、-(CH2)2-NHC(O)CH3或-CH2CH＝CH2；或R2a和R2b结合在一起以形成-(CH2)2-O-CH2-、-(CH2)-NH-(CH2)2-或-(CH2)-N[C(O)CH3]-(CH2)2-。
6.根据权利要求1所述的化合物，其中R3是H。
7.根据权利要求1所述的化合物，其中R4是F。
8.根据权利要求1所述的化合物，其中R5是Cl。
9.根据权利要求1所述的化合物，其中R3是H，R4是F，并且R5是Cl；或R3和R4是H并且R5是Br或Cl；或R3、R4以及R5是H；或R3是Cl，R4是F，并且R5是Cl；或R3是H，R4是F，并且R5是H。
10.根据权利要求9所述的化合物，其中R3是H，R4是F，并且R5是Cl；或R3和R4是H并且R5是Cl。
11.根据权利要求1所述的化合物，其中R6是3H-噁唑-2-酮、4H-[1,2,4]噁二唑-5-酮、[1,2,3,5]噁三唑、[1,2,4]三唑并[1,5-α]吡啶、[1,2,3]三唑、[1,2,4]三唑、吡唑、咪唑、噁唑、异噁唑、异噻唑、吡啶、噁二唑或嘧啶。
12.根据权利要求11所述的化合物，其中R6是4H-[1,2,4]噁二唑-5-酮、[1,2,3]三唑、[1,2,4]三唑、吡唑、噁唑、吡啶或嘧啶。
13.根据权利要求1所述的化合物，其中所述杂环中的所述氮原子是未经取代的。
14.根据权利要求1所述的化合物，其中R60是-OH、-(CH2)2OH、-OCH3、-OCH2CH3、-CH3、-CHF2或-CF3。
15.根据权利要求14所述的化合物，其中R60是-(CH2)2OH、-OCH3、-OCH2CH3或-CHF2。
16.根据权利要求1所述的化合物，其中所述杂环中的所述碳原子是未经取代的。
17.根据权利要求1所述的化合物，其中R61是氯、-OH、-CH3、-CH2CH3、-(CH2)2CH3、-CH(CH3)2、-OCH3、-OCH2CH3、-CH2-OCH3、-C(O)CH3、-C(O)NH(CH3)、-C(O)N(CH3)2、环丙基、-CF3、-CH2SO2CH3、-NH2、-CH2NH2、-CH2N(CH3)2或经甲基或卤基取代的苯基。
18.根据权利要求17所述的化合物，其中R61是氯、-CH3、-C(O)CH3、环丙基或-CF3。
19.根据权利要求1所述的化合物，其中所述杂环中的第一碳原子经选自由以下组成的群组的R61基团取代：氟、-OH、-CH3、-C0-2亚烷基-O-C1-6烷基、-C(O)CH3、-C3-6环烷基、-CF3、-CH2SO2CH3、-NH2和-CH2N(CH3)2；且所述杂环中的第二碳原子经选自由以下组成的群组的R61基团取代：卤基、-OH、-C1-6烷基、-O-CH2CH3、-C(O)CH3、环丙基、-CF3、-CH2SO2CH3、-NH2和-CH2N(CH3)2。
20.一种用于制备根据权利要求1所述的化合物的方法，其包含以下步骤：使式1化合物与式2化合物偶合：
以产生式I化合物；其中P1是H或选自叔丁氧基羰基、三苯甲基、苯甲氧基羰基、9-芴基甲氧基羰基、甲酰基、三甲基硅烷基和叔丁基二甲基硅烷基的氨基保护基；并且其中当P1是氨基保护基时，所述方法进一步包含使所述式1化合物去保护。
21.一种式5化合物，
其中：
R1是H、-C1-8烷基、-CH(CH3)OC(O)-O-环己基、-(CH2)2-吗啉基或-CH2-5-甲基-[1,3]间二氧杂环戊烯-2-酮；
R2a是-C1-2烷基且R2b是-C0-2亚烷基-NH2、-C(O)NH2、-COOH、-CN或吡啶；或R2a是-CH2OH且R2b是-CH2CH3、-(CH2)2CH3、-C1-2亚烷基-OH、-(CH2)2NH2、-(CH2)2-NHC(O)CH3或-CH2CH＝CH2；或R2a和R2b结合在一起以形成-O-(CH2)2-、-(CH2)2-O-CH2-、-CH2-NH-CH2-、-NH-(CH2)2-、-(CH2)-NH-(CH2)2-或-(CH2)-N[C(O)CH3]-(CH2)2-；
P1是H或选自由以下组成的群组的氨基保护基：叔丁氧基羰基、三苯甲基、苯甲氧基羰基、9-芴基甲氧基羰基、甲酰基、三甲基硅烷基和叔丁基二甲基硅烷基；或其盐。
22.一种药物组合物，其包含药学上可接受的载剂和根据权利要求1所述的化合物。
23.根据权利要求22所述的药物组合物，其进一步包含选自由以下组成的群组的治疗剂：腺苷受体拮抗剂、α-肾上腺素受体拮抗剂、β1-肾上腺素受体拮抗剂、β2-肾上腺素受体激动剂、双重作用β-肾上腺素受体拮抗剂/α1-受体拮抗剂、晚期糖基化终产物裂解剂、醛固酮拮抗剂、醛固酮合成酶抑制剂、氨基肽酶N抑制剂、雄激素、血管紧张素转化酶抑制剂以及双重作用血管紧张素转化酶/脑啡肽酶抑制剂、血管紧张素转化酶2活化剂和刺激剂、血管紧张素-II疫苗、抗凝剂、抗糖尿病剂、止泻剂、抗青光眼剂、抗脂质剂、止痛剂、抗血栓形成剂、AT1受体拮抗剂以及双重作用AT1受体拮抗剂/脑啡肽酶抑制剂以及多功能血管紧张素受体阻断剂、缓激肽受体拮抗剂、钙通道阻断剂、凝乳酶抑制剂、地高辛(digoxin)、利尿剂、多巴胺(dopamine)激动剂、内皮素转化酶抑制剂、内皮素受体拮抗剂、HMG-CoA还原酶抑制剂、雌激素、雌激素受体激动剂和/或拮抗剂、单胺再吸收抑制剂、肌肉松弛剂、利钠肽和其类似物、利钠肽清除受体拮抗剂、脑啡肽酶抑制剂、氧化氮供体、非甾族消炎剂、N-甲基d-天冬氨酸受体拮抗剂、类鸦片受体激动剂、磷酸二酯酶抑制剂、前列腺素类似物、前列腺素受体激动剂、肾素抑制剂、选择性血清素再吸收抑制剂、钠通道阻断剂、可溶性鸟苷酸环化酶刺激剂和活化剂、三环抗抑郁剂、血管加压素受体拮抗剂以及其组合。
24.根据权利要求23所述的药物组合物，其中所述治疗剂是AT1受体拮抗剂。
25.根据权利要求1到19中任一权利要求所述的化合物，其用于治疗。
26.根据权利要求25所述的化合物，其用于治疗高血压、心脏衰竭或肾病。
27.一种根据权利要求1到19中任一权利要求所述的化合物的用途，其用于制造供治疗高血压、心脏衰竭或肾病用的药剂。
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