CN105929171A - 一种高性能的人尿液免疫球蛋白g检测试剂盒 - Google Patents

一种高性能的人尿液免疫球蛋白g检测试剂盒 Download PDF

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CN105929171A CN201610227897.0A CN201610227897A CN105929171A CN 105929171 A CN105929171 A CN 105929171A CN 201610227897 A CN201610227897 A CN 201610227897A CN 105929171 A CN105929171 A CN 105929171A
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王延辉
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Abstract

本发明公开了一种高性能的人尿液免疫球蛋白G检测试剂盒。本发明的试剂盒，包括试剂2，所述试剂2为标记有兔抗人免疫球蛋白G多克隆抗体的胶乳颗粒溶液；其中，所述胶乳颗粒粒径范围为130nm～300nm，每升试剂2中抗体的用量为10ml～20ml。本发明可替代进口试剂，节约病患开支；同时能够提高检测效率。

Description

一种高性能的人尿液免疫球蛋白G检测试剂盒
技术领域
本发明涉及的是生物技术领域，具体涉及的是一种高性能的人尿液免疫球蛋白G检测试剂盒。
背景技术
IgG分子由两条轻链(κ或λ)和两条γ重链组成。大约80％的血清免疫球蛋白为IgG；其主要作用是防御微生物、直接中和毒素以及诱导补体结合。IgG是唯一能够穿越胎盘屏障，为胎儿和新生儿提供被动免疫保护的免疫球蛋白。这种母体保护逐渐减少，直到婴儿自身的免疫系统开始发育(在大约6个月时)。在18个月时血清/血浆中的免疫系统接近成人水平。
IgG是血液中主要的免疫球蛋白,多数以单体形式存在。主要由脾脏和淋巴结合成,不经肾小球滤过,故正常人尿中含量极低。尿中IgG升高,与肾小球破坏程度正相关。贫血、高血压、糖尿病、甲亢和妊娠后期等，肾血流量增加使小球内滤过压梯度增高，IgG等在压力增高的驱动下克服滤过膜阻力滤出增加。感染、肾中毒、血管病变和免疫损伤均可使滤过膜孔径增大。单纯的孔径增大时，以NAG、IgG滤出增多为主，ALb、TRY排出率增加不明显，sI值升高，形成非选择性蛋白尿。当滤过膜损IgG排出率梯度增加，尿中其含量变化可作为滤过膜损伤程度的标志蛋白。测定尿液中的IgG以及尿白蛋白，可区分选择性和非选择性肾小管蛋白尿，因为IgG仅在非选择性肾小球蛋白尿(IgG/白蛋白>0.03mg/mg)时显著增加。此外，尿液中IgG的测量可用于监测和评估肾小球蛋白尿、特发性膜性肾病、小儿紫癜性肾炎(HSPN)、糖尿病、高血压、狼疮性肾炎和小儿急性肾小球肾炎。故而急需开发一种能够检测人尿液免疫球蛋白G检测试剂盒。
发明内容
为了改善上述存在问题，本发明提供了一种高性能的人尿液免疫球蛋白G检测试剂盒。
为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
一种高性能的人尿液免疫球蛋白G检测试剂盒，包括试剂2，所述试剂2为标记有兔抗人免疫球蛋白G多克隆抗体的胶乳颗粒溶液。其中，试剂1选用常规的磷酸盐缓冲液、Good’s缓冲液或甘氨酸缓冲液即可。
值得说明的是，本发明是针对试剂盒中的试剂2进行改进，然而试剂1选用市面上的常用试剂均可。
本发明的胶乳颗粒粒径范围为130nm～300nm，每升试剂2中抗体的用量为10ml～20ml。
具体地，本发明是采用化学偶联方法将兔抗人免疫球蛋白G多克隆抗体标记在胶乳颗粒上。
作为一种优选，所述试剂盒对样本进行检测时，样本与抗体的体积比为1:1.6～1：8。
所述试剂盒是基于胶乳免疫比浊法检测人尿液免疫球蛋白G，其线性范围为1.00㎎/L～80.00㎎/L，抗原过剩范围达到13000㎎/L。
具体地，所述兔抗人免疫球蛋白G多克隆抗体为Dako公司生产的兔抗人免疫球蛋白G多克隆抗体。
另外，所述试剂盒适用于具有自动样本稀释功能的全自动分析仪器，如迪瑞、迈瑞、Roche、Hitachi、Olympus等多种全自动生化分析仪。
本发明具有以下优点及有益效果：
1、使用本发明的试剂盒对人尿液中的免疫球蛋白G进行测定，因线性范围较进口试剂提高33％，使用时大幅度减少了需要人工稀释复测的样本数量，大幅度节约了人力和试剂，极大地提高了检测效率，并节约了成本。
2、本发明的试剂盒抗原过剩范围广，有效避免了临床结果被低估甚至假阴性结果的出现，测定结果可靠性相比进口试剂更高。
3、本发明采用成熟的化学偶联胶乳标记方法，能够规模化生产，且能够配套市面上绝大多数自动化分析仪器使用，便于推广使用。
4、采用本发明的试剂盒进行检测，可替代进口试剂，节约病患开支。
附图说明
图1为本发明-实施例1的线性稀释图。
图2为本发明-实施例2的线性稀释图。
图3为本发明-实施例3的线性稀释图。
图4为本发明-实施例4的线性稀释图。
图5为本发明-实施例5的线性稀释图。
图6为本发明-实施例6的线性稀释图。
图7为本发明-实施例7的线性稀释图。
图8为本发明-实施例8的线性稀释图。
图9为本发明-实施例9的线性稀释图。
图10为本发明-实施例10的线性稀释图。
图11为本发明-实施例11的线性稀释图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明，但本发明的实施方式不限于下列实施例。
实施例1
本实施例的胶乳颗粒粒径为200nm，每升试剂2标记16ml Dako公司生产的兔抗人免疫球蛋白G多克隆抗体，使用胶乳免疫比浊中最常规的磷酸盐缓冲液作为试剂1，采用自动分析仪最常见参数试剂1：试剂2比例240μl：80μl，样本预先稀释15倍后加入8μl稀释过的样本到反应体系中(即样本与抗体比例为1:2.4)。
使用Hitachi7170全自动生化分析仪，波长为600nm单波长，两点终点法18-34读点计算，数据如下：
表1校准数据
表2线性稀释
具体如图1所示，图中方程为线性回归方程，R2为线性系数，估计值根据稀释比例带入回归方程计算，R＞0.99，估计值和实测值0～8之间的绝对偏差＜0.5,8～80之间的相对偏差＜10％，则说明线性合格。
表3检测下限
表4抗原过剩验证
理论值㎎/L 实测值㎎/L 备注
13.05 13.25 线性范围内
26.1 26.53 线性范围内
52.2 53.10 线性范围内
104.4 96.86 超线性
208.79 189.52 超线性
417.58 266.85 超线性
835.17 202.18 超线性
1670.33 178.71 超线性
3340.66 166.85 超线性
6681.31 134.21 超线性
8908.42 108.22 超线性
11135.52 97.37 超线性
13362.62 89.45 超线性
从表1～4可以看出，本实施例的UIgG试剂，在1.00㎎/L～80.00㎎/L内满足线性稀释实测值与估计值偏差＜10％，且检测下限也能达到1.00㎎/L(精密度CV＜20％)，符合国家相关法规要求，证明线性范围达到1.00㎎/L～80.00㎎/L；另外，从抗原过剩验证可以看出，实际抗原过剩范围高于13000㎎/L，满足抗原过剩范围达到13000㎎/L的要求。
实施例2
本实施例的胶乳颗粒粒径为130nm，每升试剂2标记10ml Dako公司生产的兔抗人免疫球蛋白G多克隆抗体，使用胶乳免疫比浊中最常规的磷酸盐缓冲液作为试剂1，采用自动分析仪最常见参数试剂1：试剂2比例240μl：80μl，样本预先稀释20倍后加入10μl稀释过的样本到反应体系中(即样本与抗体比例为1:1.6)。
使用Hitachi7170全自动生化分析仪，波长为600nm单波长，两点终点法18-34读点计算，数据如下。
表5校准数据
表6线性稀释
具体如图2所示，图中方程为线性回归方程，R2为线性系数，估计值根据稀释比例带入回归方程计算，R＞0.99，估计值和实测值0～8之间的绝对偏差＜0.5,8～80之间的相对偏差＜10％，则说明线性合格。
表7检测下限
浓度㎎/L 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00
精密度CV 19.82％ 16.34％ 10.45％ 6.26％ 4.17％
合格范围 ＜20％ ＜20％ ＜20％ ＜20％ ＜20％
表8抗原过剩验证
从表5～8可以看出，实施例2的UIgG试剂，在1.00㎎/L～80.00㎎/L内满足线性稀释实测值与估计值偏差＜10％，且检测下限也能达到1.00㎎/L(精密度CV＜20％)，符合国家相关法规要求，证明线性范围达到1.00㎎/L～80.00㎎/L；另外，从抗原过剩验证可以看出，实际抗原过剩范围高于13000㎎/L，满足抗原过剩范围达到13000㎎/L的要求。但抗原过剩已处于边缘状态，灵敏度也已经处于边缘状态。再降低抗体使用量或胶乳粒径，难以保证试剂性能满足要求。
实施例3
本实施例的胶乳颗粒粒径为200nm，每升试剂2标记10ml Dako公司生产的兔抗人免疫球蛋白G多克隆抗体，使用胶乳免疫比浊中最常规的磷酸盐缓冲液作为试剂1，采用自动分析仪最常见参数试剂1：试剂2比例240μl：80μl，样本预先稀释20倍后加入10μl稀释过的样本到反应体系中(即样本与抗体比例为1:1.6)。
使用Hitachi7170全自动生化分析仪，波长为600nm单波长，两点终点法18-34读点计算，数据如下。
表9校准数据
表10线性稀释
具体如图3所示，图中方程为线性回归方程，R2为线性系数，估计值和实测值0～8之间的绝对偏差＜0.5，8～80之间的相对偏差＜10％，则说明线性合格。
表11检测下限
浓度㎎/L 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00
精密度CV 19.52％ 15.64％ 9.89％ 5.37％ 3.66％
合格范围 ＜20％ ＜20％ ＜20％ ＜20％ ＜20％
表12抗原过剩验证
从表9～12可以看出，实施例3的UIgG试剂，在1.00㎎/L～80.00㎎/L内满足线性稀释实测值与估计值偏差＜10％，且检测下限也能达到1.00㎎/L(精密度CV＜20％)，符合国家相关法规要求，证明线性范围达到1.00㎎/L～80.00㎎/L；另外，从抗原过剩验证可以看出，实际抗原过剩范围高于13000㎎/L，满足抗原过剩范围达到13000㎎/L的要求。但抗原过剩已处于边缘状态，灵敏度也已经处于边缘状态。再降低抗体使用量，难以保证试剂性能满足要求。
实施例4
本实施例的胶乳颗粒粒径为300nm，每升试剂2标记10ml Dako公司生产的兔抗人免疫球蛋白G多克隆抗体，使用胶乳免疫比浊中最常规的磷酸盐缓冲液作为试剂1，采用自动分析仪最常见参数试剂1：试剂2比例240μl：80μl，样本预先稀释20倍后加入10μl稀释过的样本到反应体系中(即样本与抗体比例为1:1.6)。
使用Hitachi7170全自动生化分析仪，波长为600nm单波长，两点终点法18-34读点计算，数据如下。
表13校准数据
表14线性稀释
具体如图4所示，图中方程为线性回归方程，R2为线性系数，估计值根据稀释比例带入回归方程计算，R＞0.99，估计值和实测值0～8之间的绝对偏差＜0.5,8～80间的相对偏差＜10％，则说明线性合格。
表15检测下限
浓度㎎/L 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00
精密度CV 19.36％ 14.36％ 9.37％ 4.26％ 3.02％
合格范围 ＜20％ ＜20％ ＜20％ ＜20％ ＜20％
表16抗原过剩验证
理论值㎎/L 实测值㎎/L 备注
13.05 12.92 线性范围内
26.1 25.81 线性范围内
52.2 52.87 线性范围内
104.4 85.42 超线性
208.79 158.92 超线性
417.58 245.66 超线性
835.17 142.66 超线性
1670.33 135.12 超线性
3340.66 126.85 超线性
6681.31 110.45 超线性
8908.42 95.42 超线性
11135.52 85.66 超线性
13362.62 82.01 超线性
从表13～16可以看出，实施例4的UIgG试剂，在1.00㎎/L～80.00㎎/L内满足线性稀释实测值与估计值偏差＜10％，且检测下限也能达到1.00㎎/L(精密度CV＜20％)，符合国家相关法规要求，证明线性范围达到1.00㎎/L～80.00㎎/L；另外，从抗原过剩验证可以看出，实际抗原过剩范围高于13000㎎/L，满足抗原过剩范围达到13000㎎/L的要求。但抗原过剩已处于边缘状态，灵敏度也已经处于边缘状态。再降低抗体使用量，难以保证试剂性能满足要求。
实施例5
本实施例的胶乳颗粒粒径为130nm，每升试剂2标记20ml Dako公司生产的兔抗人免疫球蛋白G多克隆抗体，使用胶乳免疫比浊中最常规的磷酸盐缓冲液作为试剂1，采用自动分析仪最常见参数试剂1：试剂2比例240μl：80μl，样本预先稀释10倍后加入10μl稀释过的样本到反应体系中(即样本与抗体比例为1:1.6)。
使用Hitachi7170全自动生化分析仪，波长为600nm单波长，两点终点法18-34读点计算，数据如下。
表17校准数据
表18线性稀释
具体如图5所示，图中方程为线性回归方程，R2为线性系数，估计值根据稀释比例带入回归方程计算，R＞0.99，估计值和实测值0～8之间的绝对偏差＜0.5，8～80间的相对偏差＜10％，则说明线性合格。
表19检测下限
浓度㎎/L 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00
精密度CV 19.89％ 15.66％ 10.23％ 4.86％ 3.45％
合格范围 ＜20％ ＜20％ ＜20％ ＜20％ ＜20％
表20抗原过剩验证
理论值㎎/L 实测值㎎/L 备注
13.05 13.12 线性范围内
26.1 25.42 线性范围内
52.2 53.36 线性范围内
104.4 92.95 超线性
208.79 177.35 超线性
417.58 252.62 超线性
835.17 185.89 超线性
1670.33 167.66 超线性
3340.66 142.32 超线性
6681.31 128.66 超线性
8908.42 108.32 超线性
11135.52 95.87 超线性
13362.62 83.42 超线性
从表17～20可以看出，实施例5的UIgG试剂，在1.00㎎/L～80.00㎎/L内满足线性稀释实测值与估计值偏差＜10％，且检测下限也能达到1.00㎎/L(精密度CV＜20％)，符合国家相关法规要求，证明线性范围达到1.00㎎/L～80.00㎎/L；另外，从抗原过剩验证可以看出，实际抗原过剩范围高于13000㎎/L，满足抗原过剩范围达到13000㎎/L的要求。但抗体用量太大，处于标记工艺的极限水平，且成本过高。
实施例6
本实施例的胶乳颗粒粒径为300nm，每升试剂2标记20ml Dako公司生产的兔抗人免疫球蛋白G多克隆抗体，使用胶乳免疫比浊中最常规的磷酸盐缓冲液作为试剂1，采用自动分析仪最常见参数试剂1：试剂2比例240μl：80μl，样本预先稀释10倍后加入10μl稀释过的样本到反应体系中(即样本与抗体比例为1:1.6)。
使用Hitachi7170全自动生化分析仪，波长为600nm单波长，两点终点法18-34读点计算，数据如下。
表21校准数据
表22线性稀释
具体如图6所示，图中方程为线性回归方程，R2为线性系数，估计值根据稀释比例带入回归方程计算，R＞0.99，估计值和实测值0～8之间的绝对偏差＜0.5，8～80间的相对偏差＜10％，则说明线性合格。
表23检测下限
浓度㎎/L 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00
精密度CV 18.71％ 13.92％ 10.12％ 4.12％ 3.06％
合格范围 ＜20％ ＜20％ ＜20％ ＜20％ ＜20％
表24抗原过剩验证
理论值㎎/L 实测值㎎/L 备注
13.05 12.78 线性范围内
26.1 25.63 线性范围内
52.2 53.62 线性范围内
104.4 91.79 超线性
208.79 172.69 超线性
417.58 249.89 超线性
835.17 192.13 超线性
1670.33 171.23 超线性
3340.66 138.69 超线性
6681.31 121.51 超线性
8908.42 102.45 超线性
11135.52 93.31 超线性
13362.62 81.79 超线性
从表21～24可以看出，实施例6的UIgG试剂，在1.00㎎/L～80.00㎎/L内满足线性稀释实测值与估计值偏差＜10％，且检测下限也能达到1.00㎎/L(精密度CV＜20％)，符合国家相关法规要求，证明线性范围达到1.00㎎/L～80.00㎎/L；另外，从抗原过剩验证可以看出，实际抗原过剩范围高于13000㎎/L，满足抗原过剩范围达到13000㎎/L的要求。但抗体用量太大，处于标记工艺的极限水平，且成本过高。
实施例7
本实施例的胶乳颗粒粒径为300nm，每升试剂2标记20ml Dako公司生产的兔抗人免疫球蛋白G多克隆抗体，使用胶乳免疫比浊中最常规的磷酸盐缓冲液作为试剂1，采用自动分析仪最常见参数试剂1：试剂2比例240μl：80μl，样本预先稀释25倍后加入5μl稀释过的样本到反应体系中(即样本与抗体比例为1:8)。
使用Hitachi7170全自动生化分析仪，波长为600nm单波长，两点终点法18-34读点计算，数据如下。
表25校准数据
表26线性稀释
具体如图7所示，图中方程为线性回归方程，R2为线性系数，估计值根据稀释比例带入回归方程计算，R＞0.99，估计值和实测值0～8之间的绝对偏差＜0.5，8～80间的相对偏差＜10％，则说明线性合格。
表27检测下限
浓度㎎/L 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00
精密度CV 19.37 16.89％ 13.21％ 5.88％ 4.02％
合格范围 ＜20％ ＜20％ ＜20％ ＜20％ ＜20％
表28抗原过剩验证
理论值㎎/L 实测值㎎/L 备注
13.05 12.45 线性范围内
26.1 25.17 线性范围内
52.2 53.21 线性范围内
104.4 93.89 超线性
208.79 192.56 超线性
417.58 188.31 超线性
835.17 253.17 超线性
1670.33 219.32 超线性
3340.66 188.45 超线性
6681.31 155.37 超线性
8908.42 129.17 超线性
11135.52 109.21 超线性
13362.62 98.45 超线性
从表24～28可以看出，实施例7的UIgG试剂，在1.00㎎/L～80.00㎎/L内满足线性稀释实测值与估计值偏差＜10％，且检测下限也能达到1.00㎎/L(精密度CV＜20％)，符合国家相关法规要求，证明线性范围达到1.00㎎/L～80.00㎎/L；另外，从抗原过剩验证可以看出，实际抗原过剩范围高于13000㎎/L，满足抗原过剩范围达到13000㎎/L的要求。但抗体用量太大，处于标记工艺的极限水平，且成本过高。
实施例8
本实施例的胶乳颗粒粒径为300nm，每升试剂2标记20ml Dako公司生产的兔抗人免疫球蛋白G多克隆抗体，使用胶乳免疫比浊中最常规的磷酸盐缓冲液作为试剂1，采用自动分析仪最常见参数试剂1：试剂2比例240μl：80μl，样本预先稀释20倍后加入8μl稀释过的样本到反应体系中(即样本与抗体比例为1:1.6)。
使用Hitachi7170全自动生化分析仪，波长为600nm单波长，两点终点法18-34读点计算，数据如下。
表29校准数据
表30线性稀释
具体如图8所示，图中方程为线性回归方程，R2为线性系数，估计值根据稀释比例带入回归方程计算，R＞0.99，估计值和实测值0～8之间的绝对偏差＜0.5，8～80间的相对偏差＜10％，则说明线性合格。
表31检测下限
表32抗原过剩验证
理论值㎎/L 实测值㎎/L 备注
13.05 12.69 线性范围内
26.1 25.17 线性范围内
52.2 52.68 线性范围内
104.4 91.62 超线性
208.79 188.71 超线性
417.58 268.74 超线性
835.17 233.17 超线性
1670.33 209.32 超线性
3340.66 160.45 超线性
6681.31 136.37 超线性
8908.42 106.17 超线性
11135.52 92.22 超线性
13362.62 88.23 超线性
从表29～32可以看出，实施例8的UIgG试剂，在1.00㎎/L～80.00㎎/L内满足线性稀释实测值与估计值偏差＜10％，且检测下限也能达到1.00㎎/L(精密度CV＜20％)，符合国家相关法规要求，证明线性范围达到1.00㎎/L～80.00㎎/L；另外，从抗原过剩验证可以看出，实际抗原过剩范围高于13000㎎/L，满足抗原过剩范围达到13000㎎/L的要求。但抗体用量太大，处于标记工艺的极限水平，且成本过高。
通过实施例2～4对比可以看出，在抗体用量和抗原抗体比例一定的情况下，提高胶乳颗粒粒径有利于试剂灵敏度，但因为胶乳试剂稳定性限制，不能无限制提高胶乳粒径，优选的胶乳粒径范围为130nm～300nm。
通过实施例2对比实施例5，实施例4对比实施例6可以看出，在胶乳颗粒粒径和抗原抗体比例一定的情况下，提高抗体用量，有利于提高灵敏度，但受到标记工艺以及成本限制，不能无限制提高抗体量，优选抗体使用体积范围为10ml～20ml/L试剂2。
通过对比实施例7和实施例8，在胶乳粒径和抗体使用量一定的情况下，可以看出抗原与抗体比例在增加时，灵敏度提高，但抗原过剩范围下降，反之灵敏度下降，抗原过剩范围提高，故而，将抗原抗体比例控制在一定范围内能够有效的确保试剂线性和抗原过剩，作为一种优选，抗原抗体比例范围为1:1.6～1:8。
实施例9
本实施例的胶乳颗粒粒径为200nm，每升试剂2标记16ml Dako公司生产的兔抗人免疫球蛋白G多克隆抗体，使用胶乳免疫比浊中最常规的Good’s缓冲液作为试剂1，采用自动分析仪最常见参数试剂1：试剂2比例240μl：80μl，样本预先稀释15倍后加入8μl稀释过的样本到反应体系中(即样本与抗体比例为1:2.4)。
使用Hitachi7170全自动生化分析仪，波长为600nm单波长，两点终点法18-34读点计算，数据如下。
表33校准数据
表34线性稀释
具体如图9所示，图中方程为线性回归方程，R2为线性系数，估计值根据稀释比例带入回归方程计算，R＞0.99，估计值和实测值0～8之间的绝对偏差＜0.5，8～80间的相对偏差＜10％，则说明线性合格。
表35检测下限
浓度㎎/L 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00
精密度CV 18.22％ 12.21％ 9.02％ 3.37％ 2.26％
合格范围 ＜20％ ＜20％ ＜20％ ＜20％ ＜20％
表36抗原过剩验证
理论值㎎/L 实测值㎎/L 备注
13.05 13.36 线性范围内
26.1 26.31 线性范围内
52.2 51.68 线性范围内
104.4 95.59 超线性
208.79 182.63 超线性
417.58 256.65 超线性
835.17 206.37 超线性
1670.33 182.56 超线性
3340.66 162.31 超线性
6681.31 130.20 超线性
8908.42 106.32 超线性
11135.52 92.92 超线性
13362.62 85.71 超线性
从表33～36可以看出，实施例9的UIgG试剂，在1.00㎎/L～80.00㎎/L内满足线性稀释实测值与估计值偏差＜10％，且检测下限也能达到1.00㎎/L(精密度CV＜20％)，符合国家相关法规要求，证明线性范围达到1.00㎎/L～80.00㎎/L；另外，从抗原过剩验证可以看出，实际抗原过剩范围高于13000㎎/L，满足抗原过剩范围达到13000㎎/L的要求。
实施10
本实施例的胶乳颗粒粒径为200nm，每升试剂2标记16ml Dako公司生产的兔抗人免疫球蛋白G多克隆抗体，使用胶乳免疫比浊中最常规的甘氨酸缓冲液作为试剂1，采用自动分析仪最常见参数试剂1：试剂2比例240μl：80μl，样本预先稀释15倍后加入8μl稀释过的样本到反应体系中(即样本与抗体比例为1:2.4)。
使用Hitachi7170全自动生化分析仪，波长为600nm单波长，两点终点法18-34读点计算，数据如下。
表37校准数据
表38线性稀释
具体如图10所示，图中方程为线性回归方程，R2为线性系数，估计值根据稀释比例带入回归方程计算，R＞0.99，估计值和实测值0～8之间的绝对偏差＜0.5，8～80间的相对偏差＜10％，则说明线性合格。
表39检测下限
浓度㎎/L 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00
精密度CV 16.62％ 13.71％ 9.01％ 3.01％ 2.09％
合格范围 ＜20％ ＜20％ ＜20％ ＜20％ ＜20％
表40抗原过剩验证
理论值㎎/L 实测值㎎/L 备注
13.05 13.62 线性范围内
26.1 26.41 线性范围内
52.2 53.53 线性范围内
104.4 98.21 超线性
208.79 191.2 超线性
417.58 276.32 超线性
835.17 215.43 超线性
1670.33 171.62 超线性
3340.66 159.89 超线性
6681.31 130.26 超线性
8908.42 110.23 超线性
11135.52 96.51 超线性
13362.62 86.31 超线性
从表37～40可以看出，实施例10的UIgG试剂，在1.00㎎/L～80.00㎎/L内满足线性稀释实测值与估计值偏差＜10％，且检测下限也能达到1.00㎎/L(精密度CV＜20％)，符合国家相关法规要求，证明线性范围达到1.00㎎/L～80.00㎎/L；另外，从抗原过剩验证可以看出，实际抗原过剩范围高于13000㎎/L，满足抗原过剩范围达到13000㎎/L的要求。
实施11
本实施例的胶乳颗粒粒径为200nm，每升试剂2标记16ml Dako公司生产的兔抗人免疫球蛋白G多克隆抗体，使用胶乳免疫比浊中最常规的磷酸盐缓冲液作为试剂1，采用自动分析仪最常见参数试剂1：试剂2比例240μl：80μl，样本预先稀释15倍后加入8μl稀释过的样本到反应体系中(即样本与抗体比例为1:2.4)。
使用Hitachi7170全自动生化分析仪，波长为600nm单波长，两点终点法18-34读点计算，数据如下。
表41校准数据
表42线性稀释
具体如图11所示，图中方程为线性回归方程，R2为线性系数，估计值根据稀释比例带入回归方程计算，R＞0.99，估计值和实测值0～8之间的绝对偏差＜0.5，8～80间的相对偏差＜10％，则说明线性合格。
表43检测下限
浓度㎎/L 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00
精密度CV 18.26％ 14.26％ 9.89％ 4.02％ 2.56％
合格范围 ＜20％ ＜20％ ＜20％ ＜20％ ＜20％
表44抗原过剩验证
理论值㎎/L 实测值㎎/L 备注
13.05 13.45 线性范围内
26.1 26.52 线性范围内
52.2 52.89 线性范围内
104.4 96.37 超线性
208.79 189.45 超线性
417.58 254.71 超线性
835.17 209.41 超线性
1670.33 182.35 超线性
3340.66 145.69 超线性
6681.31 130.26 超线性
8908.42 106.52 超线性
11135.52 92.18 超线性
13362.62 82.71 超线性
从表41～44可以看出，实施例11的UIgG试剂，在1.00㎎/L～80.00㎎/L内满足线性稀释实测值与估计值偏差＜10％，线性系数R＞0.99，且检测下限也能达到1.00㎎/L(精密度CV＜20％)，符合国家相关法规要求，证明线性范围达到1.00㎎/L～80.00㎎/L；另外，从抗原过剩验证可以看出，实际抗原过剩范围高于13000㎎/L，满足抗原过剩范围达到13000㎎/L的要求。
按照上述实施例，便可很好地实现本发明。

Claims (7)

1. 一种高性能的人尿液免疫球蛋白G检测试剂盒，包括试剂2，其特征在于：所述试剂2为标记有兔抗人免疫球蛋白G多克隆抗体的胶乳颗粒溶液；
其中，所述胶乳颗粒粒径范围为130nm～300nm，每升试剂2中抗体的用量为10ml～20ml。
2. 根据权利要求1所述的一种高性能的人尿液免疫球蛋白G检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒对样本进行检测时，样本与抗体的体积比为1:1.6～1：8。
3. 根据权利要求1或2所述的一种高性能的人尿液免疫球蛋白G检测试剂盒，其特征在于，采用化学偶联方法将兔抗人免疫球蛋白G多克隆抗体标记在胶乳颗粒上。
4. 根据权利要求1或2所述的一种高性能的人尿液免疫球蛋白G检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒是基于胶乳免疫比浊法检测人尿液免疫球蛋白G，其线性范围为1.00㎎/L～80.00㎎/L，抗原过剩范围达到13000㎎/L。
5. 根据权利要求1或2所述的一种高性能的人尿液免疫球蛋白G检测试剂盒，其特征在于，所述兔抗人免疫球蛋白G多克隆抗体为Dako公司生产的兔抗人免疫球蛋白G多克隆抗体。
6. 根据权利要求1或2所述的一种高性能的人尿液免疫球蛋白G检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒适用于具有自动样本稀释功能的全自动分析仪器。
7. 根据权利要求1或2所述的一种高性能的人尿液免疫球蛋白G检测试剂盒，其特征在于，还包括试剂1，所述试剂1为磷酸盐缓冲液、Good’s缓冲液或甘氨酸缓冲液。
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