CN105917233A - 产后hellp综合征、产后子痫或产后子痫前期的预测 - Google Patents

产后hellp综合征、产后子痫或产后子痫前期的预测 Download PDF

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Abstract

本发明涉及用于预测女性主体发生产后HELLP综合征、产后子痫前期或产后子痫的风险的方法。所述方法基于测定在分娩婴儿之前获得自所述主体的第一样品和分娩婴儿之后获得自所述主体的第二样品中的i) sFlt‑1和PlGF或ii)内皮糖蛋白和PlGF的水平。此外，本发明涵盖的是用于实施本发明的方法的装置和试剂盒。

Description

产后HELLP综合征、产后子痫或产后子痫前期的预测
本发明涉及用于预测平安怀孕的女性主体在分娩婴儿之后发生至少一种子痫前期相关的不良后果的风险的方法。所述方法基于确定在分娩婴儿之前获得自所述主体的第一样品和分娩婴儿之后获得自所述主体的第二样品中的i) sFlt-1和PlGF或ii)内皮糖蛋白和PlGF的水平。此外，本发明涵盖的是用于实施本发明的方法的装置和试剂盒。
怀孕可以以不同的方式复杂化，其一方面与怀孕女性的怀孕相关死亡率相关，另一方面，还与新生儿增加的发病率和死亡率相关。比率为每100,000例活产中14.5例的母体死亡率在39岁以上的怀孕女性中更常见，且可以由出血、血栓性肺栓塞、感染、心肌病及心血管和非心血管病症以及其中子痫前期最常见的高血压病症引起(Berg 2010,Obstetrics and Gynecology:116:1302 – 1309)。
子痫前期涉及所有怀孕中的约2％至8％，并且是全世界母体和胎儿死亡率的主要贡献者(Duley 2009, Semin Perinatol:33:130–37)。怀孕过程中经常发生子痫前期。然而，也可以产后发生，即分娩婴儿之后。
子痫前期通常被定义为怀孕相关或诱发的高血压。其特征在于高血压和蛋白尿。详情还见于标准医学教科书和多种临床学会的指导，例如，Brown MA, Lindheimer MD, deSwiet M, Van Assche A, Moutquin JM:The classification and diagnosis of thehypertensive disorders of pregnancy:statement from the International Societyfor the Study of Hypertension in Pregnancy (ISSHP). Hypertens Pregnancy 2001,20:IX–XIV或ACOG Practice Bulletin, Clinical Management Guidelines forObstetrician - Gynecologists, no.:33, January 2002或DGGG. S1-Leitlinie:Diagnostik und Therapie hypertensiver Schwangerschaftserkrankungen derDeutschen Gesellschaft für Gynäkologie und Geburtshilfe, AWMF online, AWMFRegister Nummer 015/018, Klasse S1。
除了子痫前期以外，存在进一步子痫前期相关的不良后果，其可以在婴儿出生之后发生，例如HELLP综合征和子痫。所有病况都与母亲产后的不良后果相关。
HELLP综合征是一种威胁生命的产科并发症，并且涉及溶血性贫血、升高的肝功能测试(LFTs)和低血小板计数。HELLP通常在孕晚期(third trimester)开始；然而所有患者的高达30％在产后、通常在48小时内发生该综合征。该综合征的意外性、突发性和暴发进程是原发性的。在20％的病例中，可能在分娩之前或期间没有子痫前期的证据，并且所有实验室发现都是正常的。(Haram K, Svendsen E, Abildgaard U. The HELLP syndrome:clinical issues and management. A review. BMC Pregnancy and Childbirth 2009;9(8). http://dx.doi.org/10.1186/1471-2393-9-8; Pop-Trajkovic等人 2013 UppsalaJournal of Medical Sciences 118, 51-53)。
子痫通常被定义为具有子痫前期的体征或症状的妇女中在怀孕期间或产后癫痫大发作活动和/或无法解释的昏迷的新发作。其通常在妊娠期的第20周期间或之后或婴儿出生和胎盘分娩之后的产后期中出现。
对于鉴定处于出生后立即发生产后HELLP综合征、子痫或子痫前期的风险中的妇女存在高度未满足的医疗需求。
胎盘生长因子(PlGF)、可溶性内皮糖蛋白和可溶性fms样酪氨酸激酶1(sFlt-1)已经被描述为用于诊断和预测怀孕期间的子痫前期的标志物(参见，例如，WO2004/008946、WO2008/034750；Rana, 2007, Hypertension 50:137-142)。sFlt-1和PlGF或内皮糖蛋白和PlGF的比率已经被报道为分娩之前的孕妇中的子痫前期的诊断或预后参数。
文献中已知血管生成因子和抗血管生成因子在健康妇女以及子痫前期妇女分娩之后迅速下降。
Wikström等人检查了子痫前期妇女和对照分娩前后的sFlT-l和PlGF的浓度水平，并且发现所有组中两种标志物的快速下降(Acta Obstericia et Gynecologia, 2008;87:146-153)。然而，该研究中不包括产后显示子痫前期并发症的妇女。
Reddy等人发现，与正常对照妇女相比，sFlt-1(和激活蛋白A，但非可溶性内皮糖蛋白)的浓度水平在子痫前期妇女分娩期间增加(PLoS ONE, 2009, 4(2), e4453)。他们发现，在两组中，sFlt-1水平均在24小时内下降。该研究中不包括显示产后并发症的妇女。
WO 2013/068475描述了通过两次测量比率(sFlt-1/PlGF)而诊断处于在短时间段内发生子痫前期(妊娠的约第15周和约第34周之间)的风险中的孕妇的方法。如果比率2/比率增加至少约3倍，则妇女处于风险中。
WO 2014/001244描述了诊断孕妇是否处于在短时间段(1-2周)内发生子痫前期(子痫和/或HELLP综合征)的风险中的方法；怀孕主体在妊娠的约第20周至约第40周之间。
Prager等人2013监测了在可的松疗法下在分娩前发生HELLP综合征的孕妇中的sFlt-1/ PIGF的比率。该研究中不包括显示产后HELLP综合征的妇女(Prager, R; Eckart,A; Meint, P; Seelbach-Göbel, B:Verhalten der Angiogenesefaktoren (PlGF undsFlt-1) unter präpartaler Dexamethason-Therapie beim HELLP-Syndrom, ZGeburtshilfe Neonatol 2013; 217:Po01_6 DOI:10.1055/s-0033-1361384)。
产后并发症的早期诊断是重要的，因为已经报道的与这些并发症相关的发病率和死亡率是高的。例如，产后子痫前期需要迅速治疗。如果不治疗，产后子痫前期可以导致癫痫和其他严重并发症。因此，用于鉴定处于发生产后HELLP综合征、产后子痫和产后子痫前期的风险中的主体的可靠测定法尚不可用，但仍然非常需要。
作为本发明基础的技术问题可以视为提供用于满足前述需要的手段和方法。通过权利要求和下文中表征的实施方案来解决该技术问题。
有利地，在作为本发明基础的研究的背景下已经发现，平安怀孕的女性主体中的sFlt-1/PlGF或内皮糖蛋白/PlGF比率充当用于预测所述主体在婴儿分娩后发生子痫前期相关的不良后果、特别是发生产后子痫前期、产后子痫和/或产后HELLP综合征的风险的生物标志物。显著地，与分娩婴儿之前获得的样品相比分娩婴儿之后获得的sFlt-1/PlGF或内皮糖蛋白/PlGF的比率的增加表明分娩婴儿之后发生子痫前期相关的不良后果的风险，而sFlt-1/PlGF或内皮糖蛋白/PlGF的比率的减少表明主体不处于分娩婴儿之后发生子痫前期相关的不良后果的风险中。
由于本发明，可能更可靠地基于可靠的指示剂评价分娩婴儿之后发生至少一种子痫前期相关的不良后果的风险。此外，当应用本发明的方法时，可以避免耗时、昂贵和麻烦的诊断措施，并且可以起始合适的支持性措施。健康护理管理将大大得益于本发明的方法。
因此，本发明涉及用于预测女性主体在分娩婴儿之后发生至少一种子痫前期相关的不良后果(并且因此在分娩婴儿之后遭受至少一种子痫前期相关的不良后果)的风险的方法，所述方法包括以下步骤
a) 在分娩婴儿之前获得自平安怀孕的女性主体的第一样品中测量
i) 生物标志物sFlt-1(可溶性fms-样酪氨酸激酶-1)的水平或生物标志物内皮糖蛋白的水平，和
ii) 生物标志物PlGF(胎盘生长因子)的水平，
b) 计算如步骤a)中测量的生物标志物的水平的第一比率，
c) 在分娩婴儿之后获得自所述女性主体的第二样品中测量如步骤a)中测量的生物标志物的水平，
d) 计算步骤c)中测量的水平的第二比率，且
e) 将所述第二比率与所述第一比率进行比较。
在一个实施方案中，通过计算所述第二比率与所述第一比率的比率实施将所述第二比率与所述第一比率进行比较的步骤e)(或反之亦然)。
优选地，基于步骤(e)中实施的比较步骤的结果预测女性主体在分娩婴儿之后发生至少一种子痫前期相关的不良后果的风险。因此，上述方法可以进一步包括基于比较步骤的结果预测(或提供预测)女性主体在分娩婴儿之后发生至少一种子痫前期相关的不良后果的风险的进一步步骤。
优选地，本发明的方法是离体(ex vivo)或体外方法。而且，除了上文明确提及的那些以外，它还可以包括其他步骤。例如，其他步骤可以涉及样品预处理或评估由所述方法获得的结果。所述方法可以手动或由自动化辅助实施。优选地，测量步骤、计算步骤和比较步骤可以全部或部分由自动化辅助，例如，通过合适的机器人和传感装置用于测量，计算步骤中的数据处理装置上的计算机实现的计算算法，或比较步骤中的数据处理装置上的比较和/或诊断算法。
根据本发明，应当预测女性主体在分娩婴儿之后发生，并且因此遭受至少一种子痫前期相关的不良后果的风险。在分娩婴儿之后发生的子痫前期相关的不良后果是技术人员众所周知的。如本文所使用的术语优选是指怀孕之后发生的子痫前期相关的不良后果。优选地，分娩婴儿之后的至少一种子痫前期相关的不良后果选自产后HELLP综合征、产后子痫前期和产后子痫、产后脑出血、产后肾衰竭，具体而言产后急性肾衰竭、产后肺水肿，具体而言急性产后肺水肿、产后脑水肿、和产后肝破裂、弥散性血管内凝血(DIC)和产后母体死亡。更优选地，分娩婴儿之后的至少一种子痫前期相关的不良后果选自产后HELLP综合征、产后子痫前期和产后子痫。因此，优选地预测女性主体是否处于发生产后HELLP综合征、产后子痫前期和/或产后子痫的风险中。
术语“至少一种子痫前期相关的不良后果”是指一种子痫前期相关的不良后果或多于一种，即，两种或三种(或甚至更多种)子痫前期相关的后果(因为例如子痫通常之前为子痫前期)。
如本文所使用的术语“子痫前期”是指特征在于高血压和蛋白尿的医学病况。在分娩婴儿之前和之后，即婴儿出生之前和之后，怀孕女性主体中可发生子痫前期。在本发明的上下文中，应当预测主体在分娩婴儿之后患有子痫前期、而非怀孕过程中患有子痫前期的风险。产后子痫前期的大多数病例在婴儿出生之后48小时内发生。然而，产后子痫有时直至婴儿出生之后四至六周发生。这被称为晚期产后子痫前期。优选地，怀孕诱发的高血压通过140mmHg(收缩压)至90mmHg(舒张压)或更高的两次血压测量被鉴定为存在于主体中，其中所述两次测量分开至少6小时进行。蛋白尿优选被鉴定为具体地以300 mg/dL或更多的蛋白存在于24 小时尿样品中。还优选地，通过蛋白试纸分析(如果≥2+)，或者是否≥30 mg/dL蛋白存在于点尿样品中，或者点尿中的蛋白/肌酸酐比为≥30 mg蛋白/mmol肌酸酐而鉴定蛋白尿。
子痫前期可以进展至子痫，子痫是特征在于出现强直阵挛性癫痫发作或昏迷病况的威胁生命的病症。与严重子痫前期相关的症状是24小时内少于500ml的少尿症、 脑或视觉障碍、肺水肿或发绀、上腹部或右上象限疼痛、肝功能受损、血小板减少。
术语“HELLP综合征”是本领域中众所周知的。HELLP综合征是通常被认为是子痫前期的并发症的威胁生命的产科并发症。两种病况通常发生在怀孕的后期过程中或分娩婴儿之后。在本发明的上下文中，应当预测女性主体在分娩之后患有HELLP综合征的风险。HELLP综合征与高风险的不良后果相关，所述不良结果诸如肾衰竭、肝包膜下血肿、复发性子痫前期或者甚至死亡。“HELLP”是该综合征的三种主要特征的缩写： 溶血(Hemolysis)、肝酶升高(Elevated Liver enzymes)和低血小板计数(Low Platelet count)。HELLP综合征可能由于患者间症状的变化(患者经常除一般腹痛以外再无症状)而难以诊断，并且早期诊断在降低发病率中是关键的。如果不及时治疗，患者可变得危病或死于肝破裂/出血或脑水肿。在具有可能HELLP综合征的患者中，进行一批血液测试： 全血计数、凝血实验对象组、肝酶、电解质和肾功能研究。通常，测定血纤蛋白降解产物(FDP)水平，其可升高。乳酸脱氢酶是溶血的标志物且升高(> 600 U/升)。蛋白尿存在，但可以是轻度的。子痫前期和伴随症状以及后续疾病诸如HELLP综合征或子痫的进一步详情见于标准医学教科书或相关医学学会的指导中。详情可见于例如，ACOG Practice Bulletin, Clinical Management Guidelinesfor Obstetrician - Gynecologists, no.:33, January 2002 or Haram K, SvendsenE, Abildgaard U. The HELLP syndrome:clinical issues and management. A review.BMC Pregnancy and Childbirth 2009;9(8). http://dx.doi.org/10.1186/1471-2393-9-8或DGGG. S1-Leitlinie:Diagnostik und Therapie hypertensiverSchwangerschaftserkrankun-gen der Deutschen Gesellschaft für Gynäkologie undGeburtshilfe，参见上述引文。
如本文提及的“主体”优选为哺乳动物。哺乳动物包括，但不限于，家养动物(例如，牛、绵羊、猫、狗和马)，灵长类动物(例如，人和非人灵长类动物诸如猴)，兔和啮齿类动物(例如，小鼠和大鼠)。优选地，所述主体是人主体。根据本发明的主体应当是女性主体。所述女性主体在获得第一样品时应当是怀孕的。然而，应当在分娩婴儿之后获得第二样品。术语“主体”和“患者”在本文中可互换使用。
优选地，所述女性主体应当是平安怀孕的主体。技术人员充分理解术语“平安怀孕”。具体而言，设想平安怀孕的主体在怀孕过程中(即，在本怀孕过程中)没有表现出子痫前期(具体而言严重子痫前期)、子痫和/或HELLP综合征。因此，平安怀孕的主体优选在分娩婴儿之前(具体而言，在本怀孕过程中)没有患有子痫前期(具体而言严重子痫前期)、子痫和/或HELLP综合征。具体而言，设想所述主体在分娩婴儿之前没有患有子痫前期(具体而言严重子痫前期)、子痫和HELLP综合征。
因此，在获得第一样品时，根据本发明的主体，优选地，应当优选在分娩之前没有表现出子痫前期、子痫和/或HELLP综合征的临床诊断。然而，根据本发明的主体可以表现出至少一种选自上腹部疼痛、头痛、视觉障碍、高血压和水肿的症状，并且因此可被怀疑处于在分娩婴儿之后发生(且因此遭受)至少一种子痫前期相关的不良后果，尤其是发生产后HELLP综合征、产后子痫前期和/或产后子痫的风险中。在一个实施方案中，所述主体在分娩婴儿之前不久表现出所述至少一种症状，具体而言所述主体在获得第一样品时表现出所述至少一种症状。
此外，设想平安怀孕的主体在分娩婴儿之前，即在本怀孕中，患有轻度子痫前期。在该情况下，所述风险是指在分娩婴儿之后发生至少一种严重的子痫前期相关的不良后果。优选地，所述严重的子痫前期相关的不良后果选自产后HELLP综合征、产后子痫和产后严重的子痫前期。术语“轻度子痫前期”和“严重子痫前期”是本领域中众所周知的。术语“轻度子痫前期”优选是指在20周的妊娠之前血压正常的妇女中的分开至少6小时的2次高血压(具体而言≥140/90 mm Hg的血压)，但没有终末器官损伤的证据。术语“严重子痫前期”是指具有以下症状中的至少一种的子痫前期，分开至少6小时的2次的160 mm Hg或更高的收缩血压或110 mm Hg或更高的舒张血压，24小时收集中超过5 g的蛋白尿或在分开至少4小时收集的2个随机尿样品上超过3+，少尿(24小时内< 400 mL)，持续头痛，上腹部疼痛和/或肝功能受损和血小板减少。对于该术语的定义，参见例如Sibai等人. Lancet. 2005 Feb26-Mar 4;365(9461):785-99，其关于其全部公开内容在此通过引入并入。
还优选地，所述主体可以是在分娩婴儿之后发生至少一种子痫前期相关的不良后果、特别是产后HELLP综合征、产后子痫前期和/或产后子痫的风险中的人。风险中的人优选是长于40岁的女性主体和/或首次怀孕的女性主体，其具有子痫前期(例如，母亲或姐妹中的子痫前期)的家族史，在先前怀孕中或在分娩先前婴儿之后具有子痫前期的先前病史，在首次接触时具有等于或高于35 kg/m²的体重指数，具有多次怀孕或预先存在的血管疾病，诸如高血压或糖尿病，例如如NICE (National Institute for Health and CareExcellence)) Antenatal Care guideline CG62，2008年3月中所述。
分娩技术可以是被视为适当的任何技术。优选地，分娩技术包括未引产的阴道分娩、剖腹产术和药物引产之一。在优选的实施方案中，分娩单个婴儿。然而，还设想分娩多于一个婴儿。优选地，所述婴儿在分娩之后是明显健康的。
根据本发明的方法，应当预测女性主体在分娩婴儿之后发生至少一种子痫前期相关的不良后果、特别是产后HELLP综合征、产后子痫前期和/或产后子痫的风险，和，因此，所述主体遭受所述不良后果的风险。优选地，预测是否在刚刚分娩婴儿之后发生所述不良后果。技术人员充分理解关于所述不良后果、特别是产后HELLP综合征、产后子痫前期和/或产后子痫的术语“在刚刚分娩婴儿之后”。优选地，预测在分娩婴儿之后两周内、更优选七天内、甚至更优选72小时内或最优选48小时内发生至少一种子痫前期相关的不良后果的风险。优选地，所述主体在获得第二样品时未遭受至少一种子痫前期相关的不良后果，特别是产后HELLP综合征、产后子痫前期和/或产后子痫。
如本文所使用的术语“预测风险”优选是指评价在分娩婴儿之后主体中是否将发生至少一种子痫前期相关的不良后果的概率。更优选地，预测在分娩婴儿之后的特定时间窗口内发生(且因此遭受)至少一种子痫前期相关的不良后果的风险/概率。如上所述，预测窗口优选为分娩婴儿之后以两周、七天、72小时、48小时或任何间断时间范围的时间间隔。在本发明的一个特别优选的实施方案中，所述预测窗口优选为48小时的时间间隔。优选地，从分娩婴儿起计算所述预测窗口。还优选地，从已经获得第二样品的时间点计算所述预测窗口。
如本领域技术人员将理解，这样的预测通常并非意欲对于100％主体是正确的。然而，该术语要求可以对于主体的统计学显著部分以恰当和正确的方式进行预测。使用各种众所周知的统计学评估工具，本领域技术人员可以不用再费周折地测定部分是否是统计学显著的，所述统计学评估工具例如测定置信区间、p值测定、Student氏t检验、Mann-Whitney检验等。详情见于Dowdy和Wearden, Statistics for Research, John Wiley & Sons,New York 1983。优选的置信区间为至少90％、 至少95％、至少97％、至少98％或至少99％。P值优选为0.1、0.05、0.01、0.005 或0.0001。优选地，本发明设想的概率允许将针对给定组群或群体的至少60％、至少70％、至少80％或至少90％的主体校正增加、正常或降低风险的预测。该术语优选地涉及预测主体在刚刚分娩婴儿之后与女性主体的群体中在分娩婴儿之后发生至少一种子痫前期相关的不良后果的平均风险相比是否在升高风险或降低风险中。
如本文所使用的术语“预测在分娩婴儿之后发生至少一种子痫前期相关的不良后果的风险”意指将本发明的方法待分析的主体分配入主体在发生所述至少一种不良后果的风险中的组，或主体不在发生至少一种子痫前期相关的不良后果的风险中的组。如根据本发明所提及的发生所述至少一种不良后果的风险优选地意指发生所述至少一种不良后果的风险升高(预测窗口内)。优选地，与在刚刚分娩婴儿之后女性主体的组群(即这样的主体的组)中的平均风险相比，所述风险升高。如果主体不在如根据本发明所提及的发生所述子痫前期相关的不良后果的风险中，则优选地，发生所述不良后果的风险应当降低(预测窗口内)。优选地，与在刚刚分娩婴儿之后女性主体的组群中的平均风险相比，所述风险降低。在发生所述至少一种不良后果的风险中的主体优选具有80％或更大或更优选60％或更大的优选在刚刚分娩婴儿之后发生所述至少一种不良后果的风险。不在发生子痫前期相关的不良后果的风险中的主体优选具有低于20％、更优选低于10％或更低或更优选5％或更低的优选在刚刚分娩婴儿之后发生所述至少一种不良后果的风险。
根据本发明，可以提供风险预测。如本文所使用的短语“提供预测”优选是指使用关于患者样品中的第一和第二比率生成的信息或数据来预测所述主体在分娩婴儿之后发生至少一种子痫前期相关的不良后果的风险。所述信息或数据可以是任何形式，书面、口头或电子形式。在一些实施方案中，使用生成的信息或数据包括通信、呈现、报道、存储、发送、传输、供给、传送、分配或其组合。在一些实施方案中，通信、呈现、报道、存储、发送、传输、供给、传送、分配或其组合通过计算装置、分析器单元或其组合进行。在一些进一步实施方案中，通信、呈现、报道、存储、发送、传输、供给、传送、分配或其组合由实验室或医学专业人员进行。
术语“样品”指体液的样品、分离的细胞的样品或来自组织或器官的样品。体液的样品可以通过众所周知的技术获得，且包括血液、血浆、血清、尿液、淋巴液、痰液、腹水或任何其他身体分泌液或其衍生物的样品。组织或器官样品可以通过例如活检获得自任何组织或器官。分离的细胞可以通过分离技术诸如离心或细胞分选获得自体液或组织或器官。例如，细胞、组织或器官样品可以获得自表达或产生生物标志物的那些细胞、组织或器官。所述样品可以是冷冻的，新鲜的，固定的(例如福尔马林固定的)，离心的，和/或包埋的(例如石蜡包埋的)，等。在评价样品中的标志物的水平前，所述细胞样品当然可以进行各种众所周知的收集后制备和储存技术(例如，核酸和/或蛋白提取、固定、储存、冷冻、超滤、浓缩、蒸发、离心等)。同样地，活检样品也可以进行收集后制备和储存技术，例如，固定。
在一个实施方案中，所述样品是血液、血浆或，特别是血清样品。优选地，所述样品是源自女性主体的静脉血液、静脉血清或静脉血浆样品。还优选地，所述样品是尿样品。
根据本发明，设想测量来自女性主体的第一和第二样品中的如本文提及的生物标志物的水平。第一样品应当在分娩婴儿之前、特别是临分娩婴儿之前获得自女性主体。因此，优选地，应当在分娩婴儿之前两周或一周内、更优选三天内、甚至更优选48小时内或最优选24小时内已获得第一样品。此外，设想在分娩婴儿之前12小时内获得第一样品。
“第二样品”优选被理解为为了反映第二比率与第一样品中的第一比率相比的变化而获得的样品。应当在第一样品之后获得第二样品。具体而言，应当在分娩婴儿之后获得第二样品。优选地，已经在分娩婴儿之后72小时内或48小时内、更优选分娩婴儿之后24小时内、甚至更优选16小时内、且最优选分娩婴儿之后12小时内获得第二样品。
优选地，不在第一样品之后太早获得第二样品(以观察到足够显著的变化以允许风险预测)。因此，优选在第一样品之后不早于10小时、更优选不早于8小时或最优选不早于6小时获得“第二样品”。因此，在获得第一和第二样品之间应当存在优选至少10小时、更优选至少8小时且最优选至少6小时的时间间隔。
还优选地，设想在分娩婴儿之前不早于三小时获得第一样品，且在分娩婴儿之后不早于三小时获得第二样品。此外，可以在分娩婴儿之前不早于五小时获得第一样品，且可以在分娩婴儿之后不早于五小时获得第二样品。
技术人员充分理解与婴儿出生相关的术语“分娩”。这是怀孕期的顶点，其中从女性子宫排出一个或多个新生儿。如本文所使用，表述“分娩婴儿”优选是指婴儿的出生。更优选地，分娩婴儿是从主体的子宫排出胎儿的时间点。最优选地，分娩婴儿是婴儿开始呼吸的时间点。还设想分娩婴儿是分娩胎盘的时间点。
在本发明的一个实施方案中，在婴儿出生过程中没有母体或胎儿并发症。
应当理解的是，第一和第二样品是相同种类的样品。例如，如果第一样品是血清样品，第二样品同样应当是血清样品。
术语“测量”如本文所提及的标志物的水平是指，采用本文别处所述的适当的检测方法，定量生物标志物，例如测定样品中的生物标志物的水平。
在一个实施方案中，至少一种生物标志物的水平通过以下测量：使样品与特异性结合各自标志物的检测试剂接触，由此形成试剂和所述标志物之间的复合物，检测形成的复合物的水平，且由此测量所述标志物的水平。
如本文所提及的生物标志物可以使用本领域中通常已知的方法检测。检测的方法通常涵盖定量样品中的生物标志物的水平的方法(定量方法)。技术人员通常已知以下方法中的何种适合于定性和/或定量检测生物标志物。可以方便地使用商业可得的Westerns和免疫测定，如ELISA、RIA、基于荧光的免疫测定法，测定样品的例如蛋白。检测生物标志物的进一步合适的方法包括测量对于肽或多肽特异性的物理或化学特性，诸如其精确分子量或NMR谱。所述方法包括例如生物传感器、与免疫测定偶联的光学装置、生物芯片、分析装置诸如质谱仪、NMR分析仪或层析装置。此外，方法包括基于微板ELISA的方法、完全自动化或机器人免疫测定(例如可在ElecsysTM分析仪上获得)、CBA(酶促钴结合测定，例如可在Roche-HitachiTM分析仪上获得)、和乳胶凝集测定(例如可在Roche-HitachiTM分析仪上获得)。
为了检测如本文提及的生物标志物蛋白，广泛范围的使用这样的测定形式的免疫测定技术是可用的，参见，例如，美国专利号4,016,043、4,424,279和4,018,653。这些包括非竞争性类型的单位点和双位点或“夹心”测定法，以及传统的竞争结合测定法。这些测定法也包括标记的抗体与目标生物标志物的直接结合。
夹心测定法在最有用和常用的免疫测定法中。
用于测量电化学发光现象的方法是众所周知的。这样的方法利用特定金属络合物通过氧化的方式实现激发态的能力，所述特定金属络合物从所述激发态衰减至基态，发射电化学发光。关于综述，参见Richter, M.M., Chem. Rev. 104 (2004) 3003-3036。
也可以通过通常已知的方法，包括磁共振谱(NMR分光法)，气相色谱 - 质谱(GC-MS)，液相色谱 - 质谱(LC-MS)，高效和超高效-HPLC HPLC诸如反相HPLC，例如，离子配对HPLC与双UV-波长检测，毛细管电泳与激光诱导的荧光检测，阴离子交换色谱和荧光检测，薄层色谱法，检测生物标志物。
优选地，测量如本文提及的生物标志物的水平包括步骤(a)使能够引发细胞应答的细胞与肽或多肽接触足够时间段，所述细胞应答的强度指示所述肽或多肽的水平，(b)测量细胞应答。对于测量细胞应答，将样品或加工的样品优选加入细胞培养物中，并且测量内部或外部细胞应答。细胞应答可以包括报道基因的可测量表达或物质例如肽、多肽或小分子的分泌。表达或物质应生成与肽或多肽的水平关联的强度信号。
还优选地，测量肽或多肽的水平包括测量可获得自样品中的肽或多肽的特异性强度信号的步骤。如上所述，这样的信号可以是在对于肽或多肽特异性的质谱或NMR谱中观察到的对于肽或多肽特异性的m/z变量处观察到的信号强度。
测量肽或多肽的水平可以优选包括步骤(a)使所述肽与特异性结合剂接触，(b)(任选地)除去未结合的结合剂，(c)测量结合的结合剂(即，步骤(a)中形成的结合剂的复合物)的水平。根据一个优选的实施方案，所述接触、除去和测量的步骤可以由本文中公开的系统的分析器单元实施。根据一些实施方案，所述步骤可以由所述系统的单个分析器单元或彼此可操作通信的多于一个分析器单元实施。例如，根据一个特定的实施方案，本文中公开的所述系统可以包括用于实施所述接触和除去步骤的第一分析器单元和通过运输单元(例如机器人臂)可操作地连接至所述第一分析器单元的第二分析器单元，其实施所述测量步骤。
结合的结合剂，即结合剂或结合剂/肽复合物，将生成强度信号。根据本发明的结合包括共价和非共价结合。根据本发明的结合剂可以是任何化合物，例如与本文描述的肽或多肽结合的肽、多肽、核酸或小分子。优选结合剂包括抗体、核酸、肽或多肽诸如对于肽或多肽及其包含关于肽的结合结构域的片段的受体或结合配偶体、和适配子例如核酸或肽适配子。制备这样的结合剂的方法是本领域众所周知的。例如，合适抗体或适配子的鉴定和产生也由商业供应商提供。本领域技术人员熟悉开发具有更高亲和力或特异性的这样的结合剂衍生物的方法。例如，随机突变可以引入核酸、肽或多肽。根据本领域已知的筛选程序例如噬菌体展示，这些衍生物随后可以针对结合进行测试。如本文提及的抗体包括多克隆和单克隆抗体，以及其片段，诸如能够结合抗原或半抗原的Fv、Fab和F(ab)2片段。本发明还包括单链抗体和人源化杂交抗体，其中显示出所需抗原特异性的非人供体抗体的氨基酸序列与人受体抗体的序列组合。供体序列通常将包括供体的至少抗原结合氨基酸残基，但还可以包含供体抗体的其他结构上和/或功能上相关的氨基酸残基。这样的杂交物可以通过本领域众所周知的几种方法进行制备。优选地，结合剂或试剂特异性结合肽或多肽。根据本发明的特异性结合意指配体或试剂不应实质上结合(与之“交叉反应)待分析的样品中存在的另一种肽、多肽或物质。优选地，特异性结合的肽或多肽应以比任何其他相关肽或多肽高至少3倍、更优选高至少10倍且甚至更加优选高至少50倍的亲和力结合。非特异性结合可以是可耐受的，如果它仍可以明确区分且测量，例如根据其在蛋白印迹上的大小，或通过其在样品中相对更高的丰度。结合剂的结合可以通过本领域已知的任何方法进行测量。优选地，所述方法是半定量或定量的。下文描述了用于测定多肽或肽的其他合适的技术。
结合剂的结合可以例如通过NMR或表面等离振子共振直接测量。根据优选的实施方案，结合剂结合的测量通过本文公开的系统的分析器单元实现。此后，测量的结合水平可通过本文公开的系统的计算装置进行计算。如果结合剂还充当目标肽或多肽的酶促活性的底物，则可以测量酶促反应产物(例如蛋白酶的水平可以通过例如在Western印迹上测量切割底物的水平进行测量)。或者，结合剂可以自身展示出酶促性质，并且各自由肽或多肽结合的“结合剂/肽或多肽”复合物或结合剂可以与合适底物接触，允许通过强度信号的生成进行检测。对于酶促反应产物的测量，优选地底物的水平是饱和的。底物还可以在反应前用可检测标记进行标记。优选地，样品与底物接触足够时间段。足够时间段是指对于产生可检测优选可测量的水平的产物所需的时间。代替测量产物的水平，可以测量对于给定(例如可检测)水平的产物出现所需的时间。第三，结合剂可以与标记共价或非共价偶联，允许结合剂的检测和测量。标记可以通过直接或间接方法完成。直接标记涉及标记与结合剂直接(共价或非共价)偶联。间接标记涉及二级结合剂与第一结合剂的结合(共价或非共价)。二级结合剂应特异性结合第一结合剂。所述二级结合剂可以与合适标记偶联和/或是结合二级结合剂的三级结合剂的目标(受体)。二级、三级或甚至更高级别结合剂的使用通常用于增加信号。合适的二级和更高级别结合剂可以包括抗体、二级抗体和众所周知的链霉抗生物素蛋白-生物素系统(Vector Laboratories, Inc.)。结合剂或底物还可以用如本领域已知的一种或多种标签“标签化”。这样的标签随后可以是更高级别结合剂的目标。合适标签包括生物素、地高辛配基(digoxygenin)、His-标签、谷胱甘肽-S-转移酶、FLAG、GFP、myc-标签、甲型流感病毒血凝素(HA)、麦芽糖结合蛋白等。在肽或多肽的情况下，标签优选在N末端和/或C末端。合适标记是可通过合适检测方法检测的任何标记。一般标记包括金颗粒、乳胶珠、吖啶(acridan)酯、鲁米诺、钌、酶促活性标记、放射性标记、磁性标记(“例如磁珠”包括顺磁和超顺磁标记)、和荧光标记。酶促活性标记包括例如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、萤光素酶及其衍生物。用于检测的合适底物包括二氨基联苯胺(DAB)、3,3'-5,5'-四甲基联苯胺、NBT-BCIP(4-氯化硝基四氮唑蓝和5-溴-4-氯-3-吲哚基-磷酸盐，可作为现成储存溶液从Roche Diagnostics获得)、CDP-Star™ (Amersham Bio-sciences)、ECF™(Amersham Biosciences)。合适的酶-底物组合可以导致有色反应产物、荧光或化学发光，其可以根据本领域已知的方法(例如使用感光胶片或合适的照相机系统)进行测量。关于测量酶促反应，类似地应用上文给出的标准。一般的荧光标记包括荧光蛋白(例如GFP及其衍生物)、Cy3、Cy5、Texas Red、荧光素和Alexa染料(例如Alexa 568)。进一步的荧光标记例如可从Molecular Probes (Oregon)获得。还考虑使用量子点作为荧光标记。放射性标记可以通过已知和合适的任何方法进行检测，例如感光胶片或磷光体显像仪。
肽或多肽的水平还可以优选如下测定：(a)使包含关于如上指定的肽或多肽的结合剂的固体支持物与包含肽和多肽的样品接触，和(b)测量结合支持物的肽或多肽的水平。优选选自核酸、肽、多肽、抗体和适配子的结合剂优选以固定化形式存在于固体支持物上。用于制造固体支持物的材料是本领域众所周知的，并且尤其包括商购可得的柱材料、聚苯乙烯珠、乳胶珠、磁珠、胶体金属颗粒、玻璃和/或硅片和表面、硝酸纤维素条、膜、片、duracytes、反应托盘的孔和壁、塑料管等。结合剂或试剂可以结合许多不同载体。众所周知的载体的实例包括玻璃、聚苯乙烯、聚氯乙烯、聚丙烯、聚乙烯、聚碳酸酯、葡聚糖、尼龙、直链淀粉、天然和改性纤维素、聚丙烯酰胺、琼脂糖和磁石。载体的性质对于本发明的目的可以是可溶或不可溶的。用于固定/固定化所述结合剂的合适方法是众所周知的，并且包括但不限于离子、疏水、共价相互作用等。还考虑使用“悬浮阵列”作为根据本发明的阵列(Nolan2002, Trends Biotechnol. 20(1):9-12)。在这样的悬浮阵列中，载体例如微珠或微球体存在于悬液中。阵列由可能标记的、携带不同结合剂的不同微珠或微球体组成。产生例如基于固相化学和光不稳定保护基团的这样的阵列的方法是通常已知的(US 5,744,305)。
在本发明的一个实施方案中，通过使用实施例部分中所述的测定法测量如本文所提及的生物标志物的水平。
在本发明方法的另一个实施方案中，可以通过分析器单元、具体而言通过如本文别处所定义的分析器单元实施步骤a)中(或步骤a)和c)中)的测量。
术语“结合剂”是指包含特异性结合对应于相应的生物标志物的结合部分的分子。“结合剂”的实例是适配子、抗体、抗体片段、肽、肽核酸(PNA)或化合物。
术语“特异性结合”或“特异性地结合”是指结合反应，其中结合对分子在它们不显著结合其他分子的条件下表现出与彼此的结合。当指作为生物标志物的蛋白或肽时，术语“特异性结合”或“特异性地结合”是指结合反应，其中结合剂以至少10-7 M的亲和力结合相应的生物标志物。术语“特异性结合”或“特异性地结合”优选是指对于其目标分子的至少10-8 M或甚至更优选至少10-9 M的亲和力。术语“特异性”或“特异性地”用于表示样品中存在的其他分子没有显著结合对于目标分子特异性的结合剂。优选地，与除了目标分子以外的分子结合的水平导致作为与目标分子的亲和力的仅10％或更低、更优选仅5％或更低的结合亲和力。
“结合剂”或“试剂”的实例是核酸探针、核酸引物、DNA分子、RNA分子、适配子、抗体、抗体片段、肽、肽核酸(PNA)或化合物。优选的试剂是特异性结合待测量的生物标志物的抗体。本文中的术语“抗体”以最广泛意义使用，且涵盖各种抗体结构，包括但不限于单克隆抗体、多克隆抗体、多特异性抗体(例如，双特异性抗体)和抗体片段，只要它们表现出期望的抗原结合活性。优选地，所述抗体是多克隆抗体。更优选地，所述抗体是单克隆抗体。
在一个方面，可以应用的另一种结合剂可以是特异性结合样品中的至少一种标志物的适配子。当指作为结合剂的核酸适配子时，术语“特异性结合”或“特异性地结合”是指结合反应，其中核酸适配子以低nM至pM范围内的亲和力结合相应的目标分子。
在又一个方面，在测量结合剂与至少一种标志物之间形成的复合物的水平之前，从所形成的复合物除去样品。因此，在一个方面，所述结合剂可以固定化在固体支持物上。在又一个方面，可通过施用洗涤溶液将样品从固体支持物上形成的复合物去除。所形成的复合物与样品中存在的至少一种标志物的水平应成比例。应当理解，待应用的结合剂的特异性和/或灵敏度定义样品中包含的能够被特异性结合的至少一种标志物的比例程度。在本文中别处还发现关于如何实施测定的更详细的描述。所形成的复合物的水平将被转化为至少一种标志物的水平，其反映样品中实际存在的水平。在一个方面，此类水平可以基本上是样品中存在的水平，或者在另一个方面也可以是由于所形成的复合物与初始样品中存在的水平之间的关系导致的作为其特定比例的水平。
如本文所使用的术语“sFlt-1”是指多肽，其是fms样酪氨酸激酶1的可溶性形式。该多肽在本领域中也称为可溶性VEGF受体1(sVEGF R1)(参见例如 Sunderji 2010, Am JObstet Gynecol 202:40e1-7)。它是在人脐静脉内皮细胞的条件培养基中鉴定的。内源sFlt-1受体在色谱和免疫上类似于重组人sFlt-1，并且以相当高亲和力结合[125I] VEGF。显示人sFlt-1在体外与KDR/Flk-1的胞外结构域形成VEGF稳定的复合物。优选地，sFlt-1是指Kendall 1996, Biochem Biophs Res Commun 226(2):324-328中所述的人sFlt-1；对于氨基酸序列，还参见例如Genebank登录号P17948, GI:125361(人 sFlt-1)和BAA24499.1,GI:2809071(小鼠sFlt-1)(Genbank可在 www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez得自NCBI，美国)。该术语还涵盖前述人 sFlt-1多肽的变体。这样的变体至少具有与前述sFlt-1多肽相同的基本生物学和免疫学特性。具体而言，如果可通过本说明书中提及的相同的特定测定法，例如通过使用特异性识别所述sFlt-1多肽的多克隆或单克隆抗体的 ELISA测定法检测它们，则它们具有相同的基本生物学和免疫学特性。此外，应当理解，根据本发明提及的变体应当具有由于至少一个氨基酸取代、缺失和/或添加而不同的氨基酸序列，其中该变体的氨基酸序列仍然优选分别与特定的sFlt-1多肽，优选人sFlt-1的完整长度至少50％、60％、70％、80％、 85％、90％、92％、95％、97％、98％或99％相同。两个氨基酸序列之间的同一性程度可以通过本领域众所周知的算法来测定。优选地，通过在比较窗口比较两个最佳比对的序列来测定同一性程度，其中与参考序列(其不包含添加或缺失)相比，比较窗口中的氨基酸序列的片段可以为了最佳比对而包含添加或缺失(例如缺口或突出)。通过以下来计算百分比：测定在两个序列中存在相同氨基酸残基的位置数来产生匹配位置数，将匹配位置数除以比较窗口中的总位置数且将结果乘以100来产生序列同一性的百分比。可以通过Smith1981, Add. APL. Math. 2:482公开的局部同源性算法、通过Needleman 1970, J. Mol.Biol. 48:443的同源性比对算法、通过Pearson 1988, Proc. Natl. Acad Sci. (USA)85:2444的检索相似性的方法、通过这些算法的计算机化实现(Wisconsin GeneticsSoftware Package, Genetics Computer Group (GCG), 575 Science Dr., Madison, WI中的GAP、BESTFIT、BLAST、FAST、PASTA和TFASTA)或通过目视检查来进行用于比较的序列的最佳比对。鉴于已经鉴定出两个序列用于比较，优选利用GAP 和BESTFIT来确定它们的最佳比对，因此确定同一性程度。优选地，使用缺口权重5.00和缺口长度权重0.30的默认值。上文提及的变体可以是等位基因变体或任何其他物种特异性同源物、旁系同源物或直向同源物。上文提及的变体可以是等位基因变体或任何其他物种特异性同源物、旁系同源物或直向同源物。而且，本文提及的变体包括特定的sFlt-1多肽或前述类型的变体的片段或亚基，只要这些片段具有上文提及的基本免疫学和生物学特性。这样的片段可以是例如sFlt-1多肽的降解产物。如果可通过本说明书中提及的相同的特定的测定法，例如通过使用特异性识别所述sFlt-1多肽的多克隆或单克隆抗体的ELISA测定法检测变体，则认为变体具有相同的基本生物学和免疫学特性。优选的测定法描述于所附实施例中。进一步包括由于翻译后修饰诸如磷酸化或十四烷基化而不同的变体。sFlt-1可以以结合或游离形式检测或检测为样品中的总sFlt-1水平。
如本文所使用的术语“内皮糖蛋白”是指这样的多肽，其具有非还原时的180kDa，还原后的95kDa和呈其还原和N-去糖基化形式的66kDa的分子量。优选地，术语“内皮糖蛋白”是指可溶性内皮糖蛋白。该多肽能够形成二聚体，且结合TGF-β和TGF-β受体。优选地，内皮糖蛋白是指人内皮糖蛋白。更优选地，人内皮糖蛋白具有如Genebank登录号AAC63386.1, GI:3201489中所示的氨基酸序列。已经描述了两种内皮糖蛋白同工型，S-内皮糖蛋白和L-内皮糖蛋白。L-内皮糖蛋白由具有47个氨基酸的胞质尾部的总计633个氨基酸组成，而S-内皮糖蛋白由具有14个氨基酸的胞质尾部的600个氨基酸组成。优选地，如本文所使用的内皮糖蛋白是可溶性内皮糖蛋白。如本文提及的可溶性内皮糖蛋白优选描述于EP 1 804 836 B1 中。而且，应当理解，根据本发明提及的变体可以具有由于至少一个氨基酸取代、 缺失和/或添加而不同的氨基酸序列，其中所述变体的氨基酸序列仍然优选与特定内皮糖蛋白的氨基酸序列至少50％、60％、70％、80％、85％、90％、92％、95％、 97％、98％或99％相同。变体可以是等位基因变体、剪接变体或任何其他物种特异性同源物、旁系同源物或直向同源物。而且，本文提及的变体包括特定的内皮糖蛋白或前述类型的变体的片段，只要这些片段具有如上文提及的基本免疫学和生物学特性。这样的片段可以是例如内皮糖蛋白的降解产物。如果可通过本说明书中提及的相同的特定测定法，例如通过使用特异性识别所述内皮糖蛋白多肽的多克隆或单克隆抗体的ELISA测定法检测变体，则认为它们共享相同的基本生物学和免疫学特性。优选的测定法描述于所附实施例中。进一步包括由于翻译后修饰诸如磷酸化或十四烷基化而不同的变体。内皮糖蛋白可以以结合或游离形式检测或检测为样品中的总内皮糖蛋白水平。
如本文所使用的术语“P1GF(胎盘生长因子)”优选是指胎盘衍生的生长因子，其是具有149个氨基酸长度且与人血管内皮生长因子(VEGF)的血小板衍生的生长因子样区域高度同源的多肽。如VEGF，P1GF在体外和体内具有血管生成活性。例如，源自经转染的COS-1细胞的P1GF的生物化学和功能表征揭示，它是能够在体外刺激内皮细胞生长的糖基化二聚体分泌性蛋白(Maqlione 1993, Oncogene 8(4):925-31)。优选地，PlGF是指人PlGF，更优选地，是指具有如Genebank登录号P49763, GI:17380553中所示的氨基酸序列的人PlGF。该术语涵盖所述特定人PlGF的变体。这样的变体至少具有与特定PIGF多肽相同的基本生物学和免疫学特性。如果可通过本说明书中提及的相同的特定测定法，例如通过使用特异性识别所述PIGF多肽的多克隆或单克隆抗体的ELISA测定法检测变体，则认为它们具有相同的基本生物学和免疫学特性。优选的测定法描述于所附实施例中。此外，应当理解，如根据本发明提及的变体应当具有由于至少一个氨基酸取代、缺失和/或添加而不同的氨基酸序列，其中该变体的氨基酸序列仍然优选与特定PIGF多肽的氨基酸序列至少50％、60％、70％、80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％ 或99％相同。两个氨基酸序列之间的同一性程度可以通过本领域众所周知的算法和本文别处描述的算法来测定。上文提及的变体可以是等位基因变体或任何其他物种特异性同源物、旁系同源物或直向同源物。而且，本文提及的变体包括特定PIGF多肽或前述类型的变体的片段，只要这些片段具有上文提及的基本免疫学和生物学特性。这样的片段可以是例如PIGF 多肽的降解产物或剪接变体。进一步包括由于翻译后修饰诸如磷酸化或十四烷基化而不同的变体。PIGF可以以结合或游离形式检测或检测为样品中的总PIGF水平。
如本文所使用的术语“水平”涵盖如本文提及的生物标志物的绝对量、所述生物标志物的相对量或浓度以及与之相关或可以来源于其的任何值或参数。这样的值或参数包括来自所有特异性物理或化学特性的强度信号值，例如质谱或NMR谱中的强度值，所述强度信号值通过直接测量获得自所述肽。而且，涵盖通过本说明书中别处指出的间接测量获得的所有值或参数，例如从生物读出系统测定的响应于该肽的反应量或获得自特异性结合的配体的强度信号。应当理解，还可以通过所有标准数学运算获得与前述量或参数相关的值。
如本文所使用的术语“比较”是指将来自主体的第一样品中的如本文提及的生物标志物的水平的比率(第一比率)与来自主体的第二样品中的所述生物标志物的水平的比率(第二比率)进行比较。应当理解的是，如本文所使用的比较通常是指比较相应的参数或值，例如，将绝对量与绝对参考量进行比较，同时将浓度与参考浓度进行比较，或者将获得自样品中的生物标志物的强度信号与相同类型的获得自参考样品的强度信号进行比较。可以手动或计算机辅助实施所述比较。因此，可以通过计算装置(例如，本文公开的系统的计算装置)实施所述比较。来自主体的第一样品中的(第一)比率的值和第二样品中的(第二)比率的值可以，例如，与彼此进行比较，并且可以通过执行用于比较的算法的计算机程序自动实施所述比较。实施所述评估的计算机程序将提供合适输出格式的期望的评价。对于计算机辅助的比较，可以将第二样品中的测定比率的值与通过计算机程序存储于数据库中的第一样品中的比率的值进行比较。计算机程序可以进一步评估比较的结果，即自动提供合适输出格式的期望的评价。对于计算机辅助的比较，可以将第二样品中的测定比率的值与通过计算机程序存储于数据库中的第一样品中的比率的值进行比较。计算机程序可以进一步评估比较的结果，即自动提供合适输出格式的期望的评价。
如本文提及的术语“计算第一比率”或“计算第二比率”涉及通过除以所述水平或通过实施置于sFlt-1或内皮糖蛋白的水平朝向PlGF的水平的关系的任何其他类似的数学计算而计算sFlt-1或内皮糖蛋白的水平和PlGF的水平的比率。优选地，将sFlt-1或内皮糖蛋白的水平除以PlGF的水平，以便计算所述比率(因此，计算sFlt-1或内皮糖蛋白的水平与PlGF的水平的比率)。还优选地，将PlGF的水平除以sFlt-1或内皮糖蛋白的水平，以便计算所述比率(因此，计算PlGF的水平与sFlt-1或内皮糖蛋白的水平的比率)。对于所述第一和所述第二样品中分开测定的各自水平实施所述计算，分别得到第一和第二比率。可以在同时或在不同时间实施所述计算。
如果所述方法包括第二比率与第一比率的比较，优选地，以下适用：
在一个实施方案中，第一和第二比率是sFlt-1与PlGF的比率，或内皮糖蛋白与PlGF的比率。优选地，第二比率(或基本上不变的第二比率)与第一比率相比的增加指示处于在分娩婴儿之后发生至少一种子痫前期相关的不良后果的风险中的主体，和/或第二比率与第一比率相比的减少指示不处于在分娩婴儿之后发生子痫前期相关的不良后果的风险中的主体。还优选地，如果第二比率与第一比率相比增加，或如果第二比率与第一比率是基本相同的，则所述主体处于在分娩婴儿之后发生至少一种子痫前期相关的不良后果的风险中，而如果第二比率与第一比率相比降低，则所述主体不处于在分娩婴儿之后发生子痫前期相关的不良后果的风险中。
在另一个实施方案中，第一和第二比率是PlGF与sFlt-1的比率，或PlGF与内皮糖蛋白的比率。优选地，第二比率(或基本上不变的第二比率)与第一比率相比的降低指示处于在分娩婴儿之后发生至少一种子痫前期相关的不良后果的风险中的主体，和/或第二比率与第一比率相比的增加指示不处于在分娩婴儿之后发生子痫前期相关的不良后果的风险中的主体。还优选地，如果第二比率与第一比率相比降低，或如果第二比率与第一比率是基本相同的，则所述主体处于在分娩婴儿之后发生至少一种子痫前期相关的不良后果的风险中，而如果第二比率与第一比率相比增加，则所述主体不处于在分娩婴儿之后发生子痫前期相关的不良后果的风险中。
术语“基本上不变的”是本领域中众所周知的，并且由诊断领域中有经验的技术人员所理解。该术语是指第二比率与第一比率相比的较小变化，例如小于3或7％的变化。在一个实施方案中，该术语是指不变的比率。
如果通过计算第二比率与第一比率的比率实施将第二比率与第一比率进行比较的步骤e)(或反之亦然)，则优选以下适用：
如果第一和第二比率是sFlt-1与PlGF的比率，或内皮糖蛋白与PlGF的比率，则以下适用： 优选地，等于或大于1的比率指示处于在分娩婴儿之后发生至少一种子痫前期相关的不良后果的风险中的主体，而低于1的比率指示不处于在分娩婴儿之后发生子痫前期相关的不良后果的风险中的主体。
如果第一和第二比率是PlGF与sFlt-1的比率，或PlGF与内皮糖蛋白的比率，则以下适用：优选地，等于或低于1的比率指示处于在分娩婴儿之后发生至少一种子痫前期相关的不良后果的风险中的主体，而大于1的比率指示不处于在分娩婴儿之后发生子痫前期相关的不良后果的风险中的主体。
根据本发明，术语“增加”和“降低”优选分别是指统计学显著的增加和降低。具体地，统计学显著的增加(或降低)是被认为对于风险预测统计学显著的大小的增加(或降低)。术语“显著的”和“统计学显著的”是本领域技术人员已知的。本领域技术人员可以使用各种众所周知的统计评估工具、包括本文提及的那些不用再费周折地确定增加或降低是否是统计学显著的。
已经在本发明的过程中发现指示处于在分娩婴儿之后发生至少一种子痫前期相关的不良后果的风险中的主体的第二样品中的sFlt-1或内皮糖蛋白与PlGF的第二比率与第一样品中的sFlt-1或内皮糖蛋白与PlGF的第一比率相比的优选增加优选为增加至少3％、更优选至少10％、且甚至更优选至少20％、且最优选至少30％。
已经在本发明的过程中发现指示不处于在分娩婴儿之后发生子痫前期相关的不良后果的风险中的主体的第二样品中的sFlt-1或内皮糖蛋白与PlGF的第二比率与第一样品中的sFlt-1或内皮糖蛋白与PlGF的第一比率相比的优选降低优选为降低至少10%、更优选至少20%、且甚至更优选至少30%、且最优选至少40%。
应当理解，上下文所作的术语的定义和解释相应地适用于本说明书和所附权利要求中所述的所有实施方案。
本发明进一步涉及用于区分处于在分娩婴儿之后发生至少一种子痫前期相关的不良后果的风险中的主体与不处于在分娩婴儿之后发生子痫前期相关的不良后果的风险中的主体的方法，所述方法包括以下步骤
a) 在分娩婴儿之前获得自平安怀孕的女性主体的第一样品中测量
i) 生物标志物sFlt-1(可溶性fms-样酪氨酸激酶-1)的水平或生物标志物内皮糖蛋白的水平，和
ii) 生物标志物PlGF(胎盘生长因子)的水平，
b) 计算如步骤a)中测量的生物标志物的水平的第一比率，
c) 在分娩婴儿之后获得自所述女性主体的第二样品中测量如步骤a)中测量的生物标志物的水平，
d) 计算步骤c)中测量的水平的第二比率，且
e) 将所述第二比率与所述第一比率进行比较。
在一个实施方案中，通过计算所述第二比率与所述第一比率的比率实施将所述第二比率与所述第一比率进行比较的步骤e)(或反之亦然)。
本发明进一步涉及用于鉴定处于在分娩婴儿之后发生至少一种子痫前期相关的不良后果的风险中的主体的方法，所述方法包括以下步骤
a) 在分娩婴儿之前获得自平安怀孕的女性主体的第一样品中测量
i) 生物标志物sFlt-1(可溶性fms-样酪氨酸激酶-1)的水平或生物标志物内皮糖蛋白的水平，和
ii) 生物标志物PlGF(胎盘生长因子)的水平，
b) 计算如步骤a)中测量的生物标志物的水平的第一比率，
c) 在分娩婴儿之后获得自所述女性主体的第二样品中测量如步骤a)中测量的生物标志物的水平，
d) 计算步骤c)中测量的水平的第二比率，且
e) 将所述第二比率与所述第一比率进行比较。
在一个实施方案中，通过计算所述第二比率与所述第一比率的比率实施将所述第二比率与所述第一比率进行比较的步骤e)(或反之亦然)。
在本发明方法的一个优选的实施方案中，所述方法进一步包括如果预测所述主体处于在分娩婴儿之后发生至少一种子痫前期相关的不良后果的风险中(或如果所述主体被鉴定为处于在分娩婴儿之后发生至少一种子痫前期相关的不良后果的风险中)，则推荐和/或起始至少一种合适的支持性措施的步骤。
如前所讨论，在分娩婴儿之后遭受至少一种子痫前期相关的不良后果的主体需要特别的医疗护理。因此，如果主体被鉴定为处于在分娩婴儿之后发生至少一种子痫前期相关的不良后果、特别是发生产后子痫前期、产后子痫和/或产后HELLP综合征的风险中，则这样的评价可以帮助为主体提前、即分娩婴儿之后的子痫前期相关的不良后果变得临床明显之前建立合适的支持性措施。优选地，所述至少一种合适的支持性措施选自：密切监测(具体地关于产后HELLP综合征、产后子痫前期或产后子痫的临床症状)，进入重症监护病房，皮质类固醇的施用，硫酸镁的纳入，和降血压剂的施用和取决于母体的不良后果的其他具体措施。Haram K, Svendsen E, Abildgaard U. The HELLP syndrome:clinical issuesand management. A review. BMC Pregnancy and Childbirth 2009;9(8). http://dx.doi.org/10.1186/1471-2393-9-8或DGGG. S1-Leitlinie:Diagnostik und Therapiehypertensiver Schwangerschaftserkrankungen der Deutschen Gesellschaft für Gynäkologie und Geburtshilfe，参见上述引文。
因此，本发明进一步涉及分娩婴儿之后在女性主体中起始至少一种合适的支持性措施的方法；所述方法包括本发明的上述方法的步骤，将患者鉴定为处于在分娩婴儿之后发生至少一种子痫前期相关的不良后果的风险中的进一步步骤，和起始如上所概述的至少一种合适的支持性措施的进一步步骤。
如果所述主体不处于风险中，可以从所述至少一种支持性措施排除所述主体。
本发明进一步涉及
• 生物标志物sFlt-1(或内皮糖蛋白)和PlGF，或
• (特异性)结合sFlt-1的试剂(或(特异性)结合内皮糖蛋白的试剂)和(特异性)结合PlGF的试剂
在分娩婴儿之前获得自平安怀孕的女性主体的第一样品中和分娩婴儿之后获得自所述女性主体的第二样品中，用于预测女性主体分娩婴儿之后发生至少一种子痫前期相关的不良后果的风险的(体外)用途。
本发明进一步涉及
• 生物标志物sFlt-1(或内皮糖蛋白)和PlGF，和/或
• (特异性)结合sFlt-1的试剂(或(特异性)结合内皮糖蛋白的试剂)和(特异性)结合PlGF的试剂
具体地分娩婴儿之前获得自平安怀孕的女性主体的第一样品中和分娩婴儿之后获得自所述女性主体的第二样品中，用于制备诊断剂的(体外)用途，所述诊断剂用于预测女性主体分娩婴儿之后发生至少一种子痫前期相关的不良后果的风险。
优选地，使用如上述方法中所示的生物标志物或试剂。
优选地，应当针对第一和第二样品计算sFlt-1或内皮糖蛋白和PlGF的第一和第二比率(如本文别处所述)，并且应当比较所述比率，具体而言，其中第二比率(或基本上不变的比率)与第一比率相比的增加指示处于在分娩婴儿之后发生至少一种子痫前期相关的不良后果的风险中的主体，和/或其中第二比率与第一比率相比的降低指示不处于在分娩婴儿之后发生子痫前期相关的不良后果的风险中的主体。
优选地，所述试剂是检测试剂。在一个实施方案中，所述试剂是抗体，诸如单克隆抗体或多克隆抗体。
本文上面公开优选的诊断算法。
优选地，所述试剂是检测试剂。在一个实施方案中，所述试剂是抗体，诸如单克隆抗体或多克隆抗体。
本发明进一步涉及适配于具体地通过实施上述方法预测女性主体分娩婴儿之后发生至少一种子痫前期相关的不良后果的风险的装置，所述装置包括：
a) 分析器单元，其包含特异性结合sFlt-1和/或内皮糖蛋白的试剂和特异性结合PlGF的试剂，所述单元适配于测量分娩婴儿之前获得的女性主体的第一样品和分娩婴儿之后获得的所述女性主体的第二样品中的sFlt-1和/或内皮糖蛋白的水平和PlGF的水平；和
b) 评估单元，其包括已经实现用于实施以下步骤的算法的数据处理器：
i) 从第一样品中测定的sFlt-1或内皮糖蛋白和PlGF的所述水平计算第一比率，且从第二样品中测定的sFlt-1或内皮糖蛋白和PlGF的所述水平计算第二比率；和
ii) 比较所述第一和所述第二比率的值，且任选地
iii) 预测所述主体分娩婴儿之后发生至少一种子痫前期相关的不良后果的风险，
具体而言，其中如果第二比率的值与第一比率的值相比增加(或基本上不变)(和/或如果第二比率与第一比率的比率等于或大于1)，则预测主体处于在分娩婴儿之后发生至少一种子痫前期相关的不良后果的风险中，和/或其中如果第二比率的值与第一比率的值相比降低(和/或如果第二比率与第一比率的比率低于1)，则预测主体不处于在分娩婴儿之后发生子痫前期相关的不良后果的风险中。
任选地，用于实施以下步骤的算法可以进一步实施预测分娩婴儿之后发生至少一种子痫前期相关的不良后果的风险的步骤。
如本文所使用的术语“装置”是指包含可操作地彼此连接以允许根据本发明的方法的诊断的前述单元的系统。本文中别处公开了可用于分析器单元的优选的试剂(即，检测试剂)。所述分析器单元优选地包含待与样品接触的在固体支持物上固定化形式的所述检测试剂，所述样品与包含其水平待测定的生物标志物。而且，分析器单元还可包含测量特异性结合生物标志物的检测试剂的水平的检测器。测量的水平可传输至评估单元。所述评估单元包含数据处理元件诸如计算机，其具有实现算法，所述实现算法用于实施比率(或生物标志物水平的比率)的计算、任选地比较所述计算的比率和通过实现实施本文别处详细记载的本发明的方法步骤的基于计算机的算法而评估比较的结果。结果可以作为参数诊断性原始数据的输出给出。应当理解，这些数据将通常需要临床医师的解释。然而，还设想专家系统装置，其中输出包含经加工的诊断性原始数据，其解释不需要专门的临床医师。
根据一些实施方案，分析器单元可配置用于光学检测样品中的分析物，例如标志物。配置用于光学检测的示例性分析器单元包含配置用于将电磁能转化成电信号的装置，其包括单元件和多元件或阵列光学探测器。根据本公开，光学探测器能够监测光电磁信号并提供指示位于光路中的样品中分析物的存在和/或浓度的相对于基线信号的电源插座信号(electrical outlet signal)或应答信号。此类装置还可以包括，例如光电二极管，包括雪崩光电二极管(avalanche photodiodes)，光电晶体管，光电导检测器，线性传感器阵列，CCD检测器，CMOS检测器，包括CMOS阵列检测器，光电倍增管，和光电倍增管阵列。根据某些实施方案，光学检测器，诸如光电二极管或光电倍增管可含有额外的信号调节或处理电器元件。例如光学检测器可包括至少一个预放大器，电子过滤器，或集成电路。合适的预放大器包括，例如集成、跨阻抗，和电流增益(电流镜)预放大器。
此外，根据本公开的一个或多个分析器单元可包含用于发射光的光源。例如，分析器单元的光源可以由至少一个光发射元件(诸如，发光二极管，电力发射源诸如白炽灯，电致发光灯，气体放电灯，高强度放电灯，激光)组成，用于测量待测试样品中的分析物浓度，或使得能够能量转换(例如，通过荧光共振能量转移或催化酶)。
此外，所述系统的分析器单元可包括一个或多个孵育单元(例如用于将样品或试剂维持在特定温度或温度范围)。
此外，本文公开的系统的分析器单元可包含或可操作地连接至反应容器或小杯(cuvette)输送单元。示例性输送单元包括液体加工单元，诸如移取单元，用来将样品和/或试剂递送至反应容器。所述移取单元可包含可重复使用的耐洗针，例如钢针，或者一次性移液头。所述分析器单元还可包含一个或多个混合单元，例如用于振荡含液体的小杯的振荡器，或用于混合小杯或试剂容器中的液体的搅拌桨。
根据上文描述，根据本公开的一些实施方案，本文公开和描述的方法的一些步骤的部分可通过计算装置进行。计算装置可以是例如一般目的计算机或手提式计算装置。还应当理解，可一起使用多个计算装置，诸如经网络或转移数据的其他方法，用于实施本文公开的方法的一个或多个步骤。示例性计算装置包括桌面计算机、便携式计算机、个人数据助手(“PDA”)，诸如BLACKBERRY牌装置、手机装置(cellular device)、平板电脑、服务器等。通常，计算装置包含能够执行多个指令(诸如软件程序)的处理器。
计算装置能够访问存储器。存储器是计算机可读介质且可以包含单个存储装置或多个存储装置，例如其局部位于计算装置或可跨网络访问计算装置。计算机可读介质可以是可由计算装置访问的任何可访问介质，而且包括稳定和不稳定介质两者。此外，计算机可读介质可以是可移除和不可移除介质中的一者或两者。通过实例且非限制地，计算机可读介质可以包含计算机存储介质。示例性的计算机存储介质包括但不限于，RAM、ROM、EEPROM、闪存或任何其他存储技术，CD-ROM、数字通用光盘(DVD)或其他光盘存储器、磁盒、磁带、磁盘存储器或其他磁性存储装置，或任何其他可用于存储多个指令的介质，所述指令能够由计算装置访问且由计算机装置的处理器执行。
根据本公开的实施方案，软件可以包括指令，当由计算装置的处理器执行时，其可以进行本文公开方法的一个或多个步骤。一些指令可适配以产生控制其他机器运行的信号，因此可以通过那些控制信号运行以转化与计算机本身相距甚远的材料。这些描述和代表是由数据处理领域的技术人员使用的手段，例如以最有效地将其工作物质传达给其他本领域技术人员。
所述多个指令还可以包含这样的算法，其一般理解为导致期望结果的自身一致的步骤序列。这些步骤是需要物理量的物理操作的那些步骤。通常，尽管非必要地，这些量采用能够被存储、转移、转化、组合、比较和以其他方式操作的电或磁脉冲或信号的形式。有时主要出于常见用法的原因，将这些信号提及为值、字符、显示数据、数字等作为对其中这些信号被体现或表示的物理项或表现的提及，证明是方便的。然而，应当记住，所有这些和相似的术语应当与合适的物理量有关且本文中仅用作应用于这些量的方便的标记。根据本公开的一些实施方案，将用于实施本文公开的一种或多种标志物的测定水平和合适参考之间的比较的算法通过执行指令来体现和进行。结果可以作为参数诊断性原始数据输出或作为绝对或相对水平给出。根据本文公开的系统的多个实施方案，“诊断”可以由本文公开的系统的计算装置基于计算的“水平”与参考或阈值的比较来提供。例如，系统的计算装置可以以词语、符号或数值的形式提供指示物，其指示具体的诊断。
所述计算装置还可以访问输出装置。示例性输出装置包括例如传真机、显示器、打印机和文档。根据本公开的一些实施方案，计算装置可以进行本文公开方法的一个或多个步骤，且其后经由输出装置提供输出，其涉及方法的结果、指示、比率或其他因素。
此外，本发明涵盖适配于实施上述用于预测女性主体分娩婴儿之后发生至少一种子痫前期相关的不良后果的风险的方法的试剂盒，其包含i)用于测定生物标志物sFlt-1和PlGF的水平的检测试剂或ii)用于测定生物标志物内皮糖蛋白和PlGF的水平的检测试剂，或iii)用于测定生物标志物sFlt-1、内皮糖蛋白和/或PlGF的水平的检测试剂以及用于实施所述方法的说明书。
如本文所使用的术语“试剂盒”是指上述组分的集合，优选地，其单独地或在单一容器内提供。所述容器内还包含用于实施本发明的方法的说明书。这些说明书可以是手册的形式，或可以通过计算机程序代码提供，当在计算机或数据处理装置上实现所述代码时，其能够实施本发明的方法中提及的比较，并相应地建立诊断。所述计算机程序代码可以在数据存储介质或装置诸如光学存储介质(例如，光盘)，或者直接在计算机或数据处理装置上提供。此外，所述试剂盒应当包含用于如上文上面定义的参考的至少一种标准品，即具有代表参考水平的预先定义水平的如本文所提及的生物标志物的溶液。
在一些实施方案中，本文公开的试剂盒包括用于实施公开的方法的至少一种组分或组分的包装组合。“包装组合”意指所述试剂盒提供了单一包装，所述单一包装含有如本文公开的一种或多种组分，诸如探针(例如，抗体)、对照、缓冲剂、试剂(例如，缀合物和/或底物)说明书等的组合。含有单一容器的试剂盒也包括在“包装组合”的定义内。在一些实施方案中，所述试剂盒包括至少一种探针，例如抗体(对于如本文公开的生物标志物的表位具有特异性亲和力)。例如，试剂盒可以包括用荧光团标记的抗体或作为融合蛋白的成员的抗体。在试剂盒中，探针可以固定，并且可以以特定构象固定。例如，固定的探针可以在试剂盒中提供以特异性结合目标蛋白，以检测样品中的目标蛋白，和/或从样品中去除目标蛋白。
根据一些实施方案，试剂盒包括在至少一个容器中的至少一种探针，其可以是固定的。试剂盒还可以包括一个或多个容器中的多种探针，其任选是固定的。例如，多种探针可以存在于单一容器中或分开的容器中，例如，其中每个容器含有单一探针。
在一些实施方案中，试剂盒可以包括一种或多种非固定的探针和包括或不包括固定的探针的一种或多种固体支持物。一些此类实施方案可以包含对于将一种或多种探针固定至固体支持物所需的试剂和用品中的一些或全部，或对于将固定的探针结合样品内的特定蛋白所需的试剂和用品中的一些或全部。
在某些实施方案中，单一探针(包括多个拷贝的相同探针)可以固定在单一固体支持物上，且提供在单一容器中。在其他实施方案中，在单一容器中提供两种或更多种探针，每种对于不同的目标蛋白或不同形式的单一目标蛋白(诸如特异性表位)是特异性的。在一些此类实施方案中，固定的探针可以在多个不同的容器中提供(例如，以一次性形式)，或者多种固定的探针可以在多个不同的容器中提供。在进一步实施方案中，探针可以固定在多种不同类型的固体支持物上。考虑固定的一种或多种探针和一个或多个容器的任何组合用于本文公开的试剂盒，并且其任何组合可以选择以获得合适的试剂盒用于期望用途。
试剂盒的容器可以是任何容器，其适合用于包装和/或含有本文公开的一种或多种组分，包括例如探针(例如，抗体)、对照、缓冲剂和试剂(例如，缀合物和/或底物)。合适的材料包括，但不限于，玻璃、塑料、纸板或其他纸制品、木材、金属及其任何合金。在一些实施方案中，容器可以完全包住固定的一种或多种探针，或者可以简单地覆盖探针以尽可能减少灰尘、油类等的污染和光暴露。在一些进一步实施方案中，试剂盒可包含单个容器或多个容器，并且当存在多个容器时，每个容器可以与所有其他容器相同，与其他容器不同，或与一些但不是所有其他容器不同。
本发明还涉及用于预测女性主体发生至少一种子痫前期相关的不良后果的风险的系统，其包括
a) 分析器单元​​，其经配置为使如本文别处所述的来自主体的第一和第二样品的部分与i)特异性结合PlGF的试剂和ii)特异性结合sFlt-1的试剂，或特异性结合内皮糖蛋白的试剂体外接触，
b) 分析器单元，其经配置为检测来自与所述试剂接触的来自主体的样品部分的信号，
c) 具有处理器和与所述分析单元可操作通信的计算装置，和
d) 非短暂性机器可读介质，其包括可由所述处理器执行的多个指令，当实现时，所述指令计算如本文别处所述的第一和第二比率，且将第一比率与第二比率进行比较，由此预测女性主体发生至少一种子痫前期相关的不良后果的风险。
上文提及的所有参考文献就其整体公开内容以及上述说明书中明确提及的其特定公开内容而言在此通过引用并入。
实施例
以下实施例应仅举例说明本发明。它们无论如何不应解释为限制本发明的范围。
实施例1：PlGF、sFlt-1和内皮糖蛋白的血清水平的测量
用市售免疫测定测定sFlt-1、PlGF和内皮糖蛋白的血清水平。具体而言，已经使用了以下测定。
使用来自Roche Elecsys™-或cobas e™-系列的分析仪，用夹心免疫测定法测定sFlt-1。该测定法包含对各自多肽特异性的两种单克隆抗体。这些抗体中的第一种是生物素化的，且第二种是用Tris(2,2’-双吡啶基)钌(II)络合物标记的。在第一孵育步骤中，将两种抗体与样品孵育。形成包含待测定的肽和两种不同抗体的夹心复合物。在下一孵育步骤中，将链霉抗生物素蛋白包被的珠粒添加至该复合物。珠粒结合夹心复合物。然后将反应混合物抽吸入测量室，在所述测量室中，珠粒磁性捕获在电极的表面上。然后电压的施加诱导通过光电倍增管测量的来自钌络合物的化学发光发射。发光量取决于电极上的夹心复合物的量。sFlt-1测试可商售自Roche Diagnostics GmbH, Mannheim, Germany。关于该测定法的进一步详情见于包装插页中。sFlt-1的测量范围包括10至85,000pg/ml之间的水平。
使用商购自R&D Systems, Inc, Minneapolis, US的Quantikine™人内皮糖蛋白/CD105免疫测定法测量内皮糖蛋白。该测定法利用定量夹心酶免疫测定技术。将对内皮糖蛋白特异性的单克隆抗体预包被至微量板上。将标准品和样品抽吸入孔，且通过固定的抗体结合存在的任何内皮糖蛋白。洗去任何未结合的物质之后，将对内皮糖蛋白特异性的酶联单克隆抗体添加至孔。洗涤以去除任何未结合的抗体-酶试剂之后，将底物溶液添加至孔，且显示与初始步骤中结合的内皮糖蛋白的水平成比例的颜色。终止显色，且测量颜色强度。关于该测定法的进一步详情见于包装插页中。内皮糖蛋白的测量范围包括 0.001ng/L至10ng/ml之间的水平。
在Elecsys™-或cobas e™-系列分析仪(详述见上文)上实施的夹心免疫测定中使用两种PlGF特异性抗体测试PlGF。PlGF测试商购自Roche Diagnostics GmbH,Mannheim, Germany。关于该测定法的进一步详情见于包装插页中。PlGF的测量范围包括3至10,000pg/ml的水平。
实施例2： 发生产后HELLP综合征、产后子痫前期或产后子痫的后果患者中和对照中的生物标志物sFlt-1和PlGF的分析。R1代表第一样品中的比率的结果；R2对应于获得自第二样品的比率的结果。
具有产后HELLP综合征/产后子痫前期/产后子痫的妇女
1) 具有产后HELLP综合征的妇女：
sFlt-1/PlGF比率 (R1)=44
sFlt-1/PlGF比率 (R2)=64
R2/R1= 65/44=1.45 (>=1)
2) 具有产后严重子痫前期和相关肝脏病理学的妇女：
sFlt-1/PlGF比率 (R1)=162
sFlt-1/PlGF比率 (R2)=283
R2/R1= 283/162=1.74 (>=1)
对照
具有子痫前期(分娩之前疾病的临床发作)的妇女：
1) 具有严重子痫前期(在妊娠第33-36周疾病发作和分娩)的妇女
sFlt-1/PlGF比率 (R1)=101
sFlt-1/PlGF比率 (R2)=19
R2/R1= 19/101=0.18 (<1)
不具有子痫前期/子痫/HELLP综合征的妇女：
1) 具有升高肝酶的妇女
sFlt-1/PlGF比率 (R1)=143
sFlt-1/PlGF比率 (R2)=73
R2/R1= 73/143=0.51 (<1)
2) 另一个对照妇女
sFlt-1/PlGF比率 (R1)=132
sFlt-1/PlGF比率 (R2)=35
R2/R1= 35/132=0.26 (<1)。
此外，将分娩之后获得的样品中的sFlt-1和PlGF的水平与分娩之前获得的样品中的sFlt-1和PlGF的水平进行比较。有趣的是，在具有产后子痫前期相关的不良后果的主体中，两种水平在分娩之后均下降。基于观察到的下降，不可能基于分别单独的单一生物标志物sFlt-1或PlGF的水平建立测试患者的风险预测(与对照相比)。因此，如本文公开的比率是用于预测产后子痫前期相关的不良后果的风险的可靠标志物。

Claims (15)

1.用于预测女性主体在分娩婴儿之后发生至少一种子痫前期相关的不良后果的风险的方法，所述方法包括以下步骤
a) 在分娩婴儿之前获得自平安怀孕的女性主体的第一样品中测量
i) 生物标志物sFlt-1(可溶性fms-样酪氨酸激酶-1)的水平或生物标志物内皮糖蛋白的水平，和
ii) 生物标志物PlGF(胎盘生长因子)的水平，
b) 计算如步骤a)中测量的生物标志物的水平的第一比率，
c) 在分娩婴儿之后获得自所述女性主体的第二样品中测量如步骤a)中测量的生物标志物的水平，
d) 计算步骤c)中测量的水平的第二比率，和
e) 将所述第二比率与所述第一比率进行比较。
2.权利要求1的方法，其中在步骤a)和c)中，测量生物标志物sFlt-1和PlGF的水平。
3.权利要求2的方法，其中至少一种子痫前期相关的不良后果选自产后子痫前期、产后子痫和产后HELLP综合征。
4.权利要求1至3中任一项的方法，其中平安怀孕的女性主体在分娩婴儿之前没有表现出子痫前期相关的不良后果，具体地其中平安怀孕的主体在分娩婴儿之前没有患有子痫前期，具体地严重的子痫前期、子痫和/或HELLP综合征。
5.权利要求1至4中任一项的方法，其中在分娩婴儿之前48小时内、具体地分娩婴儿之前24小时内已获得所述第一样品。
6.权利要求1至5中任一项的方法，其中在分娩婴儿之后24小时内、具体地分娩婴儿之后16小时内已获得所述第二样品。
7.权利要求1至6中任一项的方法，其中第一和第二比率是sFlt-1与PlGF的比率或内皮糖蛋白与PlGF的比率，并且其中与第一比率相比第二比率增加或第二比率基本上不变指示处于在分娩婴儿之后发生至少一种子痫前期相关的不良后果的风险中的主体，和/或其中与第一比率相比第二比率降低指示不处于在分娩婴儿之后发生子痫前期相关的不良后果的风险中的主体。
8.权利要求1至6中任一项的方法，其中第一和第二比率是PlGF与sFlt-1的比率或PlGF与内皮糖蛋白的比率，并且其中与第一比率相比第二比率减少或第二比率基本上不变指示处于在分娩婴儿之后发生至少一种子痫前期相关的不良后果的风险中的主体，和/或其中与第一比率相比第二比率增加指示不处于在分娩婴儿之后发生子痫前期相关的不良后果的风险中的主体。
9.权利要求1至8中任一项的方法，其中所述主体是人。
10.权利要求1至9中任一项的方法，其中所述样品是血液、血清或血浆样品，或者其中所述样品是尿样品。
11.权利要求1至10中任一项的方法，其中预测在分娩婴儿之后七天内、具体地72小时内或48小时内发生至少一种子痫前期相关的不良后果的风险。
12.i) 生物标志物sFlt-1和PlGF，
ii) 特异性结合sFlt-1的试剂和特异性结合PlGF的试剂，
iii) 生物标志物内皮糖蛋白和PlGF，和/或
iv) 特异性结合内皮糖蛋白的试剂和特异性结合PlGF的试剂，
在分娩婴儿之前获得自平安怀孕的女性主体的第一样品中和分娩婴儿之后获得自所述女性主体的第二样品中，用于预测女性主体分娩婴儿之后发生至少一种子痫前期相关的不良后果的风险的用途。
13.根据权利要求12的用途，其中所述用途进一步包括计算sFlt-1或内皮糖蛋白和PlGF的第一和第二比率，和比较所述第一比率与第二比率。
14.权利要求12和13的用途，其中所述试剂是抗体。
15.适配于预测女性主体分娩婴儿之后发生至少一种子痫前期相关的不良后果的风险的装置，所述装置包括：
a) 分析器单元，其包含特异性结合sFlt-1和/或内皮糖蛋白的试剂和特异性结合PlGF的试剂，所述单元适配于测量分娩婴儿之前获得的女性主体的第一样品和分娩婴儿之后获得的所述女性主体的第二样品中的sFlt-1和/或内皮糖蛋白的水平和PlGF的水平；和
b) 评估单元，其包括已经实现用于实施以下步骤的算法的数据处理器：
i) 从第一样品中测定的sFlt-1或内皮糖蛋白和PlGF的所述水平计算第一比率，且从第二样品中测定的sFlt-1或内皮糖蛋白和PlGF的所述水平计算第二比率；和
ii) 比较所述第一和所述第二比率的值，和
iii) 预测所述主体分娩婴儿之后发生至少一种子痫前期相关的不良后果的风险。
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