CN105911193B - 一种注射用哌拉西林钠舒巴坦钠有关物质检测方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种检测注射用哌拉西林钠舒巴坦钠中有关物质的方法。本发明采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料，以四丁基氢氧化铵溶液‑乙腈为流动相进行梯度洗脱，快速准确的实现了哌拉西林钠舒巴坦钠有关物质的测定。

Description

一种注射用哌拉西林钠舒巴坦钠有关物质检测方法
技术领域
本发明涉及一种注射用哌拉西林钠舒巴坦钠有关物质检测方法。
背景技术
哌拉西林钠是半合成青霉素，通过与细菌的青霉素结合蛋白（PBPs）结合抑制细菌细胞壁的合成而起到杀菌作用。它具有广谱、低毒的特点，但易被细菌产生的β－内酰胺酶水解而产生耐药性。舒巴坦钠为β－内酰胺酶抑制剂，能抑制Ⅱ-Ⅴ型的β－内酰胺酶，是一种竞争性的、不可逆抑制剂。
2010版中国药典收录了一种注射用哌拉西林钠舒巴坦钠，其为哌拉西林钠和舒巴坦钠按4：1的比例组成的复方制剂。哌拉西林与舒巴坦联合应用后，增强了哌拉西林的抗菌活性，扩大了抗菌谱，使其对哌拉西林耐药的产酶菌的抗菌活性增强。
研究发现，在注射用哌拉西林钠舒巴坦钠中有十余种杂质，其中含量最高的杂质为哌拉西林杂质B、哌拉西林杂质D和哌拉西林杂质E，均为已知杂质，其各自结构式如下：
、
、
。
2010版中国药典所收录的注射用哌拉西林钠舒巴坦钠有关物质的检测方法为：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以四丁基氢氧化铵溶液[水-3. 12%磷酸二氢钠溶液-8%四丁基氢氧化铵溶液（576 : 200 : 24)(用磷酸调节pH值至 5. 5 ) ] -乙腈（800：200)为流动相A，四丁基氢氧化铵溶液[水-3.12%磷酸二氢钠溶液-8 %四丁基氢氧化铵溶液（126：200 : 24)(用磷酸调节pH值至5. 5) ]-乙腈（350 : 650 )为流动相 B，柱温为40°C，检测波长为 220nm，梯度洗脱条件为：
该方法虽能同时检测注射用哌拉西林钠舒巴坦钠中的有关物质，但其需要的检测时间长达75分钟，无法满足快速检测该产品的有关物质的需要。
发明内容
为了克服现有的有关物质检测方法存在的检测时间过长的问题，本发明提供了一种快速检测哌拉西林钠舒巴坦钠有关物质的方法:
（1）溶液的配置：将注射用哌拉西林钠舒巴坦钠粉末用流动相A溶解并稀释成浓度为2.5mg/ml的溶液，摇匀，作为供试品溶液；精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，用流动相A稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液；
（2）精密量取供试品溶液和对照溶液各2μl，分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图，高效液相色谱条件：
色谱柱：100mm×2.1mm，1.7μm，十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；
柱温：40℃；
检测波长：220nm；
流速：0.613ml/min；
梯度洗脱条件：
时间（min） 流动相A 流动相B
0 100 0
0.68 92 8
4.08 92 8
8.16 0 100
8.84 0 100
9.52 100 0
10.2 100 0
所述流动相A是溶液1与乙腈按照786:200的体积比混合，并用磷酸调节pH至6.0制得的；所述溶液1的组成为水：3.12%磷酸二氢钠溶液：20%四丁基氢氧化铵溶液=576：200：9.6，v/v；
所述流动相B是溶液2与乙腈按照336:650的体积比混合，并用磷酸调节pH至6.0制得的；所述溶液2的组成为：水：3.12%磷酸二氢钠溶液：20%四丁基氢氧化铵溶液=126：200：9.6，v/v。
所述步骤（2）中高效液相色谱的具体测定流程如下：取对照溶液2μl注入高效液相色谱仪，调节检测灵敏度，使哌拉西林峰的峰高为满量程的20%，再精密量取供试品溶液和对照溶液各2μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。
另取氨苄西林对照品、哌拉西林杂质B、哌拉西林杂质D对照品、哌拉西林杂质E对照品、舒巴坦对照品、哌拉西林对照品各适量，加流动相A溶解并稀释制成每1ml中各含50μg的混合溶液，取2μl注入液相色谱仪，记录色谱图，氨苄西林峰与舒巴坦峰之间的分离度应大于1.5。
本发明人经过对高效液相色谱分析中色谱柱、流动相等条件进行筛选，选用合适的缓冲溶液体系，在流动相的比例调节上，充分兼顾哌拉西林钠与舒巴坦钠中十几种杂质的分离要求，最终建立了UPLC梯度洗脱的方法，将分析时间控制在10min，实现了同时对哌拉西林钠、舒巴坦钠及其有关物质的快速分离，可用于注射用哌拉西林钠舒巴坦钠的质量控制。
具体实施方式
以下通过各实施例对本发明作进一步描述，但是这些实施例不限制本发明的保护范围。
实施例1：检测注射用哌拉西林钠舒巴坦钠有关物质
1、溶液的配置
供试品溶液：将注射用哌拉西林钠舒巴坦钠粉末（生产企业：苏州二叶制药有限公司，规格2：1）用流动相A溶解并稀释成浓度为2.5mg/ml的溶液，摇匀，作为供试品溶液；
对照品溶液：精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，用流动相A稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液；
流动相A：四丁基氢氧化铵溶液[水：3.12%磷酸二氢钠溶液：20%四丁基氢氧化铵溶液（576：200：9.6）]-乙腈（786:200），用磷酸调节pH至6.0为流动相A；
流动相B：以四丁基氢氧化铵溶液[水：3.12%磷酸二氢钠溶液：20%四丁基氢氧化铵溶液（126：200：9.6）]-乙腈（336:650），用磷酸调节pH至6.0为流动相B。
2、色谱条件：
色谱柱：100mm×2.1mm，1.7μm，十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；
柱温：40℃；
检测波长：220nm；
流速：0.613ml/min；
梯度洗脱条件：
3、量取供试品溶液和对照溶液各2μl，分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图，结果见表1。
从表1可以看出，注射用哌拉西林钠舒巴坦钠的各杂质均实现了较好的分离，因此该实验条件可以满足检测注射用哌拉西林钠舒巴坦钠有关物质的要求。
供试品溶液的色谱图中如有杂质峰，哌拉西林杂质B按校正后的峰面积计算（乘以校正因子1.76），不得大于对照溶液主峰面积（1.0%），哌拉西林杂质D按校正后的峰面积计算（乘以校正因子2.6），不得大于对照溶液主峰面积的2倍（2.0%），哌拉西林杂质E按校正后的峰面积计算（乘以校正因子0.31），不得大于对照溶液主峰面积的0.2倍（0.2%）， 其他单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的0.2倍（0.2%），各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的3.5倍（3.5%）。
实施例2：注射用哌拉西林钠舒巴坦钠系统适用性试验
采用与实施例1相同的检测条件，分别对柱温、流速以及流动相pH进行考察，结果见表1。
表1. 注射用哌拉西林钠舒巴坦钠系统适用性试验
注：哌拉西林杂质E为第一个峰，在谱图上未显示其分离度，哌拉西林杂质E和舒巴坦杂质A的分离度为舒巴坦杂质A项下的分离度，依次类推，故哌拉西林杂质E项下的分离度以“——”表示。
由上述试验结果表明，柱温、流速有微小变动时，该方法系统适用性试验的分离度均较好。但在流动相pH值变化时，杂质的峰个数减少（杂质之间重合），故在调节流动相pH时应注意。
从上述实施例以及对比实施例的比较说明，本发明检测方法准确，操作简便，重现性好，灵敏度高，可以充分满足注射用哌拉西林钠舒巴坦钠中有关物质的检测要求，同时检测哌拉西林钠和舒巴坦钠两种来源的杂质，保证产品质量。

Claims (3)

1.一种注射用哌拉西林钠舒巴坦钠有关物质检测方法，其特征在于：
（1）溶液的配制：将注射用哌拉西林钠舒巴坦钠粉末用流动相A溶解并稀释成浓度为2.5mg/ml的溶液，摇匀，作为供试品溶液；精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，用流动相A稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液；
（2）精密量取供试品溶液和对照溶液各2μl，分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图，高效液相色谱条件：
色谱柱：100mm×2.1mm，1.7μm，十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；
柱温：40℃；
检测波长：220nm；
流速：0.613ml/min；
梯度洗脱条件：
；所述流动相A是溶液1与乙腈按照786:200的体积比混合，并用磷酸调节pH至6.0制得的；所述溶液1的组成为水：3.12%磷酸二氢钠溶液：20%四丁基氢氧化铵溶液=576：200：9.6，v/v；
所述流动相B是溶液2与乙腈按照336:650的体积比混合，并用磷酸调节pH至6.0制得的；所述溶液2的组成为：水：3.12%磷酸二氢钠溶液：20%四丁基氢氧化铵溶液=126：200：9.6，v/v。
2.根据权利要求1所述的注射用哌拉西林钠舒巴坦钠有关物质检测方法，其特征在于：所述步骤（2）中高效液相色谱的具体测定流程如下：取对照溶液2μL注入高效液相色谱仪，调节检测灵敏度，使哌拉西林峰的峰高为满量程的20%，再精密量取供试品溶液和对照溶液各2μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。
3.根据权利要求1所述的注射用哌拉西林钠舒巴坦钠有关物质检测方法，其特征在于：杂质的检测限度为：哌拉西林杂质B的峰面积乘以校正因子1.76，不得大于对照溶液主峰面积，哌拉西林杂质D的峰面积乘以校正因子2.6，不得大于对照溶液主峰面积的2倍，哌拉西林杂质E的峰面积乘以校正因子0.31，不得大于对照溶液主峰面积的0.2倍， 其他单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的0.2倍，各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的3.5倍。
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