CN105911038A - 一种利用活性染料荧光探针检测铝离子的方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种利用活性染料荧光探针检测铝离子的方法，其特征在于，包括：将活性染料荧光探针溶于溶剂中，利用溶剂定容，得到探针储备液，移取探针储备液于容量瓶中，利用溶剂定容，得到探针溶液；步将铝盐溶于溶剂中，利用溶剂定容，得到铝离子储备液；确定荧光强度与铝离子浓度的关系；取铝离子待测液，在铝离子待测液中加入步骤1中得到的探针溶液，利用溶剂定容，静置一段时间后，检测荧光强度，根据所测荧光强度与铝离子浓度关系，确定铝离子待测液中铝离子的含量。

Description

一种利用活性染料荧光探针检测铝离子的方法

技术领域

本发明属于功能性活性染料及其制备领域，特别涉及一种利用活性染料荧光探针检测铝离子的方法。

背景技术

自然界中的金属离子与人类赖以生存的生命科学、环境科学、医学等领域有着密不可分的关系，脑组织对铝元素有亲和性，脑组织中的铝沉积过多，可使人记忆力减退、智力低下、对老年人及儿童尤为突出，特别对脑组织及智力危害尤为明显，引起行为异常、智能障碍、运动震颤.反应迟钝等。但是，由于铝中毒早期症状不明显，往往被人们忽视，因而造成的损失会更大。其次，影响钙和磷的代谢，进而影响骨骼的正常功能，造成骨脱钙、骨萎缩、骨密度降低、中老年人骨质疏松症和儿童佝偻病及牙齿生长发育迟缓。铝对生殖系统也有损害，可使女性促黄体生成素和促卵泡素减少；男性睾酮下降，性功能低下和阳痿，精子数量减少，畸形率升高等。

金属离子的检测方法经历了从传统分析方法到仪器分析方法，从单一的检测手段到多种技术相结合的发展过程。目前常用的分析检测方法包括络合滴定法、分光光度法、化学发光分析法、电化学分析法、色谱法、原子光谱法和质谱法等。其中，络合滴定法和分光光度法操作简单、设备经济，但误差较大；化学发光分析法和电化学分析法灵敏度高，线性范围宽，但选择性较差；色谱法技术相对先进，常规指标健全，但仪器维护费用高，且检测时间较长；相对于上述几种分析方法，光谱分析法种类丰富，各项性能优异，常用于测定微量及痕量金属元素。目前，常用的光谱分析方法又可分为原子光谱法和分子光谱法。其中，分子光谱法包括紫外-可见分光光度法，红外光谱法，分子荧光光谱法和分子磷光光谱法等。荧光光谱法以其优异的灵敏度和响应速度快等优势，而被广泛开发利用，并逐步成为分析化学、医学、生物化学、环境化学等领域的重要检测方法。

申请人的中国专利201511027292.9，“一种锌离子探针的功能性活性染料及 其制备方法和应用”，详细介绍了此荧光探针的制备方法。探针在DMF溶液中以1∶1络合锌离子，通过荧光光谱法利用372nm波长的光激发，其线性范围为0.05-1μM，检测限为0.1μM。中国专利201410354566.4“一种检测铝离子探针、制备方法及含有该探针的试剂盒”，2-羟基-1-萘甲醛缩氨基脲，是一种对铝离子有特异响应的萘甲醛类席夫碱衍生物，该化合物在PH＝6.0的Tris-HCl缓冲溶液中对铝离子有较好的识别能力。中国专利201410630250.3“一种荧光探针的制备及其对Al³⁺、Co²⁺离子的快速检测方法”，将8-羟基-久洛利定-9-甲醛和异烟肼在乙醇中微波加热回流制得针状探针分子，将探针溶解在乙醇中分装在螺口瓶中，既得10^-3-10^-5M的定性检测铝离子试剂。中国专利201510024203.9“特异性识别铝离子的水溶性荧光探针的制备方法及其应用”，以对甲酰基苯甲酸甲酯、二甘醇胺形成席夫碱在还原肼解，然后和2-羟基-1萘甲醛反应生成探针分子，其对铝离子有较高的选择性，实现对铝离子的高灵敏度检测。

罗丹明和希夫碱基团都属于生物友好型基团，基于这两类基团的荧光探针在生物检测领域有着广泛应用。而多通道离子探针又有着典型的减少分析时间的优点。以罗丹明B和对氨基苯甲酸甲酯为母体，通过进一步反应合成一种同时具有罗丹明B内酰胺基团和席夫碱结构的多通道活性染料类离子探针。申请人期望该化合物在通过内酰胺环的断裂实现“OFF-ON”型开关离子检测的同时，还可以通过席夫碱结构中具有孤对电子的原子实现与金属离子的配位。以上两种通道协同或分别作用即实现了多通道荧光探针的设计。三聚氯氰作为一种常用的活性修饰基团，也被引入到分子设计中，以实现最终产物的活性设计。

经查阅中国专利发现，利用荧光光谱法检测铝离子的专利非常少，而且没有专利上面注明探针和铝离子浓度之间所呈现的关系，更没有标明对铝离子的检测范围和检测限。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种利用活性染料荧光探针检测铝离子的方法，该活性染料对铝离子有很好的选择性，在污水处理应用中不仅方便而且具有较好的使用效果。

为了解决上述技术问题，本发明提供了一种利用活性染料荧光探针检测铝离子的方法，其特征在于，包括：利用活性染料荧光探针配制探针溶液，在铝离子 待测液中加入所述的探针溶液，利用溶剂定容，静置一段时间后，检测荧光强度，根据荧光强度与铝离子浓度关系，确定铝离子待测液中铝离子的含量；其中，所述的活性染料荧光探针的结构式为：

优选地，所述的“利用活性染料荧光探针配制探针溶液”的具体步骤包括：将活性染料荧光探针溶于溶剂中，利用溶剂定容，得到探针储备液，移取探针储备液于容量瓶中，利用溶剂定容，得到探针溶液。

更优选地，所述的溶剂皆为N，N-二甲基甲酰胺(DMF)。

更优选地，所述的探针贮备液的浓度为0.9×10^-3M～1.1×10^-3M。

更优选地，所述的探针溶液浓度为0.8×10^-4M～1.2×10^-4M。

优选地，所述的荧光强度与铝离子浓度关系的确定方法包括：

步骤1：将铝盐溶于溶剂中，利用溶剂定容，得到铝离子储备液；移取铝离子储备液于容量瓶中，利用溶剂定容，得到不同浓度的铝离子标准溶液；

步骤2：在铝离子标准溶液中加入步骤1中得到的探针溶液，利用溶剂定容，静置一段时间后，检测荧光强度，确定荧光强度与铝离子浓度的关系；

更优选地，所述的步骤1中的铝离子储备液的浓度为0.85×10^-2M～1.15×10^-2M。

更优选地，所述的步骤1中的“将铝盐溶于溶剂中，利用溶剂定容，得到铝离子储备液”中的溶剂为去离子水，“移取铝离子储备液于容量瓶中，利用溶剂定容，”中的溶剂为DMF。

更优选地，所述的步骤2中的溶剂由DMF 90vol％～100vol％和水0vol％～10vol％组成。

更优选地，所述的步骤2中的“检测荧光强度”时，采用的激发波长为385nm-395nm。

优选地，所述的步骤2中的静置时间为58min～62min。

优选地，所述的活性染料荧光探针对铝离子待测液的检测限为11.8nM- 13.8nM。

本发明利用活性染料作为探针，通过活性染料的荧光强度随着铝离子溶液浓度的增加而增加，当铝离子浓度达到一定值后荧光强度保持不变的特性，对溶液中的铝离子进行高灵敏检测。本发明的荧光探针含有酰胺基团和罗丹明B内酰胺基团，酰胺基团中间含有碳氮双键和苯环上的酚羟基以及能与纤维结合的三嗪基团，其中的一些基团对铝离子具有识别作用。其机理在于：在Al³⁺识别过程席夫碱与罗丹明基团协同作用通过1∶2络合比实现配位，但并未诱导罗丹明内酰胺开环。活性染料荧光探针和铝离子在DMF溶液中的络合比为1∶2。络合常数分为3.51×10⁴M^-1～3.91×10⁴M^-1。通过荧光光谱法利用390nm波长激发来检测铝离子的含量。在浓度为0.1μM-20μM范围内呈现良好的线性范围，线性相关系数为0.995，其检测限12.8nM。本发明的荧光探针合成方法在本申请人申请的中国专利“201511027292.9”中有详细介绍。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

(1)本发明中的功能性活性染料荧光探针对铝离子有很好的选择性，在污水处理应用中不仅方便而且具有较好的使用效果；

(2)本发明中功能性活性染料荧光探针为固体粉末，便于使用贮藏，并且合成方法简单、收率高、成本低，应用前景良好；

(3)本发明将荧光探针与活性染料相结合，一般的荧光探针只是单一的检测重金属离子，而这功能性活性染料荧光探针与纤维结合可设计功能性的纤维，检测和吸附金属离子。

附图说明

图1为实施例3中荧光探针加入铝离子后的荧光变化图谱；在图1中，横坐标为荧光发射波长(nm)，纵坐标为荧光强度。

图2为实施例4中荧光探针(浓度为10μM)在DMF溶液中对铝离子的荧光光谱响应图；在图2中，横坐标为荧光发射波长(nm)，纵坐标为荧光强度(激发波长为390nm)，图中曲线分别代表加入不同浓度的铝离子荧光强度变化曲线(浓度依次为0μM、0.5μ、1μM、2μM、3μM、4μM、6μM、8μM、10μM、12μM、14μM、16μM、18μM、20μM)。

图3为实施例5中DMF溶液中10μM的探针荧光强度随加入铝离子时间变化曲线(λ_ex＝390nm)。横坐标为加入铝离子的时间，纵坐标为荧光强度。

图4为实施例6中探针相对荧光强度F/F₀和Al³⁺浓度线性关系曲线(λ_ex＝390nm)，在图4中，横坐标为铝离子浓度，纵坐标为强光强度的比值(其中F₀和F分别表示加入离子前后所测的探针体系的荧光强度)。

具体实施方式

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。以下实施例中所述的荧光探针或活性染料荧光探针的结构式为式(I)。

实施例1：活性染料荧光探针的合成

(1)罗丹明B酰肼的合成

取100mL三口烧瓶，称取1.200g(2.5mmol)罗丹明B溶于30mL无水乙醇中，室温下剧烈搅拌并缓慢向内滴加1mL(19.8mmol过量)98％水合肼。78℃加热回流2小时至溶液由暗紫色变为澄清黄色。反应完成后冷却至室温，利用旋转蒸发仪蒸除溶剂和过量水合肼，得淡黄色罗丹明B酰肼粗产物。取50mL新配置1M HCl加入粗产物中，产物溶解呈粉红色溶液状。搅拌下向溶液中缓慢加入1M NaOH，调节pH值至9-10之间。当NaOH逐滴加入到混合液中时，溶液pH调节至6左右时开始有淡粉色絮状沉淀析出。过滤并3次用15ml去离子水洗涤沉淀得纯净的罗丹明B酰肼产品。放入50℃真空干燥箱内干燥至恒重，最终可得淡粉红色粉末状产物。最高产率可得80％。FTIR(KBr)：v＝3450cm^-1(NH₂)；1619cm^-1(N-C＝O)；1225cm^-1，1270cm^-1(C₆H₆-O)；825cm^-1，786cm^-1，762cm^-1，703cm^-1(N-H)。H NMR(400MHz，DMSO，298K，δ/ppm)：8.58(S，2H)，7.97(d，J＝8.4Hz，2H)，7.43-7.51(m，8H)，7.11(d，J＝6.8Hz，2H)，6.48(d，J＝8.0Hz，4H)，6.42(d，J＝2.0Hz，4H)，6.22(d，J＝2.4Hz，2H)，6.19(d，J＝2.4Hz，2H)，3.30(q，J＝11.2Hz，16H)，1.14(t，J＝11.2Hz，24H)。

(2)4-氨基水杨醛苯甲酰肼腙(简称P)的合成

取2.000g(13.2mmol)对氨基苯甲酸甲酯溶于20ml无水乙醇中，室温下剧烈搅拌并缓慢向内滴加1ml(19.8mmol)98％水合肼。78℃加热回流8小时至溶液呈淡黄色溶液。旋转蒸发仪进行旋蒸除尽过量的水合肼和溶剂，得白色对氨基 苯甲酰肼粗品。取1.600g(10.5mmol)对氨基苯甲酰肼溶解于20ml无水乙醇中，搅拌状态下将1.3ml(11mmol)98％水杨醛缓慢滴加至三颈瓶中，加热78℃回流0.5h，混合物冷却至室温可得对氨基苯甲酰水杨醛腙(简称P)粗品。无水乙醇多次重结晶即可得纯品，过滤得金黄色片状晶体。干燥并称重。对氨基苯甲酰肼和水杨醛反应生成4-氨基水杨醛苯甲酰肼腙最高产率可达86％。FTIR(KBr)：v＝3434cm^-1(OH)；3256cm^-1(NH₂)；1680cm^-1，1657cm^-1(C＝O)；3054cm^-1，1603cm^-1，1566cm^-1，1521cm^-1(C₆H₆)；1274(C-O)。H NMR(400MHz，DMSO，298K，δ/ppm)：5.76(2H，s)，6.96-7.03(2H，m)，7.40-7.48(1H，m)，7.54-7.52(1H，d，J＝8.2Hz)，7.70-7.72(2H，d，J＝7.9Hz)，8.04-8.06(2H，d，J＝8.6Hz)，9.01(1H，s)，11.13(1H，s)，12.65(1H，s)。MS(ESI)，m/z：256.0[M+H]^-。

(3)中间产物R1的合成

将100mL无水THF的294.7mg(1.60mmol)三聚氯氰、604mg(4.38mmol)K₂CO₃混合液加入氮气保护的250mL三口烧瓶中，冰水浴控制温度为0-5℃(0℃)，搅拌状态下逐滴加入50mL 763.6mg(1.60mmol)罗丹明B酰肼的THF溶液，30min左右滴加完成。继续搅拌9h，用薄层色谱(TLC)跟踪至反应结束，展开剂为石油醚/乙酸乙酯/氯仿(体积比＝3∶1∶4)。过滤，多次水洗并真空干燥至恒重后得R1产物，产率82％。FTIR(KBr)：v＝3438cm^-1(NH₂)；3054cm^-1，1609cm^-1，1538cm^-1(C₆H₆)；1715cm^-1(C＝O)；1498cm^-1(三嗪)；1316cm^-1(C-N)；516cm^-1，850cm^-1(C-Cl)。

H NMR(400MHz，DMSO，298K，δ/ppm)：1.16(t，12H，J＝7.0Hz，NCH2CH3)，3.33(q，8H，J＝7.0Hz，NCH2CH3)，6.31-6.29(m，4H，ArH)，6.66-6.63(m，2H，ArH)，7.20(d，1H，J＝8Hz，ArH)，7.61-7.53(m，2H，ArH)，8.01(d，1H，J＝8.0Hz，ArH)。

(4)活性染料荧光探针的合成

取250ml的三口烧瓶，将603mg(1.00mmol)R1溶于20mL无水THF中，三口烧瓶内搅拌并置于油浴锅中，N₂保护下恒温保持40-45℃(最佳42℃)左右。称取0.16gNaHCO₃加入混合液中作为缚酸剂控制体系的pH值。取268mg(1.00mmol)的4-氨基水杨醛苯甲酰肼腙(P)，将其溶于40ml的THF中，在搅拌状态下缓慢滴加入三口烧瓶内。加热50℃回流搅拌反应六小时，TLC跑 板跟踪至原料反应完全。旋蒸滤液除去溶剂，固体产物多次用少量蒸馏水洗涤，真空干燥箱内烘干至恒重，得最终产物活性染料荧光探针。

FTIR(KBr)：v＝3435cm^-1(NH₂)；2957cm^-1，2926cm^-1(CH₂)；1724cm^-1，1620cm^-1(C＝O)；1603cm^-1，1566cm^-1，1521cm^-1(C₆H₆)；1271cm^-1(C-N)。

H NMR(400MHz，DMSO，298K，δ/ppm)：1.23-1.07(m，12H，NCH2CH3)，4.28-2.24(m，8H，NCH2CH3)，7.02-6.99(m，6H，ArH)，7.43-7.38(m，4H，ArH)，6.97-6.95(m，4H，ArH)，7.72-7.68(m，4H，ArH)，9.01(s，1H)，11.06(s，1H)，11.16(s，1H)。

MS(ESI)，m/z：828.5[M-H]⁺。

实施例2

配置8×10^-6M九水硝酸铝作为铝离子待测液，应用实施例1中合成的活性染料荧光探针检测其中的铝离子的方法，具体步骤为：

步骤1：将实施例1合成的活性染料荧光探针溶于溶剂DMF中，利用溶剂DMF在100mL容量瓶内定容，得到浓度为1.0×10^-3M的探针储备液，移取探针储备液于100mL容量瓶中，利用溶剂DMF在100mL容量瓶内定容，得到浓度为1.0×10^-4M探针溶液；

步骤2：将九水硝酸铝溶于溶剂去离子水中，利用溶剂去离子水在100mL容量瓶内定容，得到浓度为1.0×10^-2M的铝离子储备液；移取铝离子储备液于100mL容量瓶中，利用溶剂DMF定容，得到浓度为0.1μM、5μM、10μM、15μM、20μM的铝离子标准溶液；

步骤3：在10mL铝离子标准溶液中加入15mL步骤1中得到的探针溶液，利用由DMF 99vol％和水1vol％组成的溶剂在10ml容量瓶中定容，静置60min后，采用激发波长为390nm，检测荧光强度，结果为20.50、238.16、480.22、701.63、924.12，确定荧光强度与铝离子浓度呈现良好的线性关系。

步骤4：取1mL铝离子待测液，在铝离子待测液中加入1.5mL步骤1中得到的探针溶液，利用由DMF 90vol％和水10vol％组成的溶剂在10ml容量瓶中定容，静置60min后，采用激发波长为390nm，检测荧光强度，结果为380.46，根据所测荧光强度与铝离子浓度关系，确定铝离子待测液中铝离子的含量，结果为8.1μM。

实施例3

在去离子水中加入含九个结晶水的硝酸铝，得到100nM浓度的铝离子溶液，将实施例1中合成的荧光探针溶于DMF中，得到10μM浓度的荧光探针溶液，向15ml荧光探针溶液中加入10ml铝离子溶液，静置30min后，激发波长为390nm，测试荧光强度，探针与铝离子的络合物在DMF溶液中的激发态吸收光谱与荧光发射光谱。如图1所示，采用390nm光进行激发(探针-Al³⁺)络合物，其发射峰位于455nm处，配体荧光探针(10μM)在390nm激发波长下测量荧光强度。

实施例4

在去离子水中加入含九个结晶水的硝酸铝，得到0μM、0.5μ、1μM、2μM、3μM、4μM、6μM、8μM、10μM、12μM、14μM、16μM、18μM、20μM浓度的铝离子溶液，将实施例1中合成的荧光探针溶于DMF中，得到10μM浓度的荧光探针溶液，向15ml荧光探针溶液中加入10ml铝离子溶液，静置60min后，激发波长为390nm，测试荧光强度。

荧光探针溶液在455nm左右处呈现荧光发射峰如图2，随着铝离子加入浓度的增大，在455nm处荧光发射峰强度也明显增强。当铝离子浓度达到20μM时，配体荧光探针的荧光强度几乎不再随离子浓度的增大而变化。

实施例5：

响应时间的测定，对探针-Al³⁺的荧光强度的影响。具体步骤如下；

步骤1：将实施例1合成的活性染料荧光探针溶于溶剂DMF中，利用溶剂DMF在100mL容量瓶内定容，得到浓度为1.0×10^-3M的探针储备液，移取探针储备液于100mL容量瓶中，利用溶剂DMF在100mL容量瓶内定容，得到浓度为1.0×10^-4M探针溶液，继续稀释得到10uM的探针溶液；

步骤2：将硝酸铝(含九个结晶水)溶于溶剂去离子水中，利用溶剂去离子水在100mL容量瓶内定容，得到浓度为1.0×10^-2M的铝离子储备液；移取铝离子储备液于100mL容量瓶中，利用溶剂DMF定容，得到浓度为0.5μM的铝离子标准溶液；

步骤3：在1mL铝离子标准溶液中加入1.5mL步骤1中得到的探针溶液，利用由DMF 99vol％和水1vol％组成的溶剂在100ml容量瓶中定容，静置60min后， 采用激发波长为390nm，检测荧光强度。

在去离子水中加入硝酸铝(含九个结晶水)，得到0.5μM浓度的铝离子溶液，将实施例1中合成的荧光探针溶于DMF中，得到10μM浓度的荧光探针溶液，向15ml荧光探针溶液中加入10ml铝离子溶液，如图3所示，当在15ml荧光探针溶液中加入10ml铝离子溶液后，其络合物的荧光强度随时间的增加不断的变化。实验中发现加入Al³⁺后10s即呈现出检测信号，随着时间的增加，探针-Al³⁺的荧光强度都在不断的增加，探针-Al³⁺大约在60min后趋于稳定，之后体系荧光强度几乎不再随时间的变化而产生明显变化。

实施例6

基于Stern-Volmer理轮，测定探针(10μM)溶液在DMF∶H₂O(99∶1)的混合溶剂中对Al³⁺进行检测时的线性范围和最低检测限。

步骤1：将实施例1合成的活性染料荧光探针溶于溶剂DMF中，利用溶剂DMF在100mL容量瓶内定容，得到浓度为1.0×10^-3M的探针储备液，移取探针储备液于100mL容量瓶中，利用溶剂DMF在100mL容量瓶内定容，得到浓度为1.0×10^-4M探针溶液；，继续稀释得到10uM的探针溶液；

步骤2：将硝酸铝(含九个结晶水)溶于溶剂去离子水中，利用溶剂去离子水在100mL容量瓶内定容，得到浓度为1.0×10^-2M的铝离子储备液；移取铝离子储备液于100mL容量瓶中，利用溶剂DMF定容，得到浓度为0μM、0.5μ、1μM、2μM、3μM、4μM、6μM、8μM、10μM、12μM、14μM、16μM、18μM、20μM浓度的的铝离子标准溶液；

步骤3.在10mL铝离子标准溶液中加入15mL步骤1中得到的探针溶液，利用由DMF 99vol％和水1vol％组成的溶剂在100ml容量瓶中定容，静置60min后，采用激发波长为390nm，检测荧光强度。

向15ml探针溶液中加入10ml的铝离子溶液，其铝离子的浓度从0增加到2.0×10^-5M，静置60min后测试。探针在390nm激发光激发下无荧光产生。随着Al³⁺的加入，荧光强度不断增强，根据Stern-Volmer方程：

F/F₀＝1+K_svC_q

其中F₀和F分别表示加入离子前后所测的探针体系的荧光强度，K_sv是增强常数，取值为463.15，C_q为离子的浓度。探针体系荧光增强程度与离子浓度呈 现良好的线性关系，如图4所示，通过计算线性回归方程，线性相关系数为0.995，线性范围为0.1μM-20μM，其检测限为12.8nM(3倍标准偏差/斜率)，其中仪器的设置对检测限也会产生一定影响。上述计算结果可以看出探针对Al³⁺呈现出很好的检测灵敏性，Al³⁺识别过程简单，且席夫碱三齿配体结构对Al³⁺的识别可以构成更稳定的平面共轭结构。

Claims (10)

1.一种利用活性染料荧光探针检测铝离子的方法，其特征在于，包括：利用活性染料荧光探针配制探针溶液，在铝离子待测液中加入所述的探针溶液，利用溶剂定容，静置一段时间后，检测荧光强度，根据荧光强度与铝离子浓度关系，确定铝离子待测液中铝离子的含量；其中，所述的活性染料荧光探针的结构式为：

2.如权利要求1所述的利用活性染料荧光探针检测铝离子的方法，其特征在于，所述的“利用活性染料荧光探针配制探针溶液”的具体步骤包括：将活性染料荧光探针溶于溶剂中，利用溶剂定容，得到探针储备液，移取探针储备液于容量瓶中，利用溶剂定容，得到探针溶液。

3.如权利要求2所述的利用活性染料荧光探针检测铝离子的方法，其特征在于，所述的溶剂皆为N，N-二甲基甲酰胺。

4.如权利要求2所述的利用活性染料荧光探针检测铝离子的方法，其特征在于，所述的探针贮备液的浓度为0.9×10^-3M～1.1×10^-3M。

5.如权利要求2所述的利用活性染料荧光探针检测铝离子的方法，其特征在于，所述的探针溶液浓度为0.8×10^-4M～1.2×10^-4M。

6.如权利要求1所述的利用活性染料荧光探针检测铝离子的方法，其特征在于，所述的荧光强度与铝离子浓度关系的确定方法包括：

步骤1：将铝盐溶于溶剂中，利用溶剂定容，得到铝离子储备液；移取铝离子储备液于容量瓶中，利用溶剂定容，得到不同浓度的铝离子标准溶液；

步骤2：在铝离子标准溶液中加入步骤1中得到的探针溶液，利用溶剂定容，静置一段时间后，检测荧光强度，确定荧光强度与铝离子浓度的关系。

7.如权利要求6所述的利用活性染料荧光探针检测铝离子的方法，其特征在于，所述的步骤2中的静置时间为58min～62min。

8.如权利要求6所述的利用活性染料荧光探针检测铝离子的方法，其特征在于，所述的步骤1中的铝离子储备液的浓度为0.85×10^-2M～1.15×10^-2M。

9.如权利要求6所述的利用活性染料荧光探针检测铝离子的方法，其特征在于，所述的步骤1中的“将铝盐溶于溶剂中，利用溶剂定容，得到铝离子储备液”中的溶剂为去离子水，“移取铝离子储备液于容量瓶中，利用溶剂定容，”中的溶剂为DMF。

10.如权利要求1所述的利用活性染料荧光探针检测铝离子的方法，其特征在于，所述的活性染料荧光探针对铝离子待测液的检测限为11.8nM-13.8nM。