CN105911007A - 一种血糖生成指数体外检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于食品技术领域，涉及一种血糖生成指数体外检测方法，通过模拟人体内的消化系统,消化含50mg碳水化合物的样品，针对不同消化时间点取样并加入3,5‑二硝基水杨酸，经还原反应生成氨基化合物，对氨基化合物进行吸光度检测，通过理论计算公式计算得血糖生成指数。该方法缩短了检测时间，降低了检测要求，解决了体内检测耗费大量的人力物力的问题。根据体内消化环境，在实验过程中模拟其环境，对样品进行处理，大大的降低了实验周期及实验难度，并且可进行重复的大量的操作。
Description
技术领域
本发明属于食品技术领域，具体涉及一种血糖生成指数体外检测方法。
背景技术
随着生活水平的提高，人们对健康日益关注。然而由于饮食习惯的改变，及人们运动量的减少，与肥胖相关的疾病逐渐增多。糖尿病人数也逐年递增，因此针对糖尿病人的食品的开发具有深远意义。血糖生成指数食品的检测方法对此类食品的开发具有指导性作用。
食物血糖生成指数可反映出食物与葡萄糖相比升高血糖的速度和能力。血糖生成指数的体内检测方法对受试者的身高体重及健康状况均有标准要求，而且对受试者的空腹血糖水平也有严格要求。体内检测血糖生成指数的测试前准备，也对受试者做了较多要求。且整个体内检测时间跨度为三个月，受试者在每次检测前12小时必须空腹、禁止喝酒及含酒精的饮料、避免剧烈运动，对受试者的要求比较多且严格。
发明内容
根据以上现有技术的不足，本发明所要解决的技术问题是提出一种血糖生成指数体外检测方法，通过体外模拟人体消化的方法，缩短了检测时间，降低了检测要求，解决了体内检测耗费大量的人力物力的问题。
为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：
一种血糖生成指数体外检测方法，通过模拟人体内的消化系统,消化含50mg碳水化合物的样品，针对不同消化时间点取样并加入3,5-二硝基水杨酸，经还原反应生成氨基化合物，对氨基化合物进行吸光度检测，通过理论计算公式计算得血糖生成指数。
优选的，所述模拟人体内的消化系统包括加入胃蛋白酶模拟胃消化的步骤及加入α-淀粉酶模拟小肠消化的步骤。
优选的，所述含50mg碳水化合物的样品的量是通过减重法计算得出，所述的碳水化合物(％)＝100-水分-灰分-脂肪-蛋白-膳食纤维(％)。
优选的，所述的血糖生成指数的理论计算公式参见Goni等人在1997年发表于Nutrition Research第17卷第三期的文章“A starch hydrolysisprocedure to estimate glycemic index”中建立的方程式GI＝39.71+0.549×HI，其中GI为血糖生成指数，HI为样品与标准参考物增值面积的百分比。
优选的，所述的模拟胃消化的步骤包括:向样品中加入10mlKCl-HCl水溶液及200ul胃蛋白酶溶液，于37℃-40℃条件下水浴搅拌1h，所述KCl-HCl水溶液中KCl、HCl、H2O质量体积比为3.7275:4.2:1g/ml/l；所述的胃蛋白酶溶液为胃蛋白酶与所述的KCl-HCl水溶液按质量体积比为1:10g/ml的混合物。
优选的，所述的模拟小肠消化的步骤包括：用磷酸缓冲液调节样品的pH＝6-7，然后加入5ml淀粉酶溶液，所述淀粉酶溶液为淀粉酶与磷酸缓冲液按质量体积比为0.02:1mg/ml的混合物。
优选的，所述的针对不同消化时间点取样，包括在0min、30min、60min、90min、120min、150min、180min时取样。
优选的，所述的样品模拟人体内消化后、加入3,5-二硝基水杨酸前需进行灭酶5min。
一种血糖生成指数体外检测方法，包括如下步骤：
1)取20g样品粉碎，过20目筛，通过减重法计算得出含50mg碳水化合物的样品的量,取过筛后的含50mg碳水化合物的样品放入酶反应器中；
2)模拟胃消化：向酶反应器中加入10ml KCl-HCl溶液，200ul胃蛋白酶溶液，于37℃-40℃条件下水浴搅拌1h；
3)模拟小肠消化：向酶反应器中加入磷酸缓冲液，使溶液pH值在6-7，然后加5ml淀粉酶溶液，开始计时；
4)在0min、30min、60min、90min、120min、150min、180min消化时间点分别取1mL测试液于离心管中，并沸水浴灭酶5min，灭酶后冷却；
5)取冷却后的测试液0.1ml于试管中，加水至2ml，加入2mlDNS，然后将试管放入沸水浴中加热6min,冷却后转移至容量瓶中，定容摇匀，待检测；
6)分光光度计预热30min，状态切换至A，波长为520nm，用蒸馏水调零，将0mg/ml、0.2mg/ml、0.4mg/ml、0.6mg/ml、0.8mg/ml、1.0mg/ml、1.2mg/ml、1.4mg/ml葡萄糖标准溶液进样检测，得葡萄糖标准液的浓度及吸光度，作出标准曲线；
7)对测试液进行吸光度检测，将测试液的吸光度代入标准曲线中，得样品的葡萄糖浓度并计算出样品的相对葡萄糖浓度，对标准参考物进行吸光度检测，将标准参考物的吸光度代入标准曲线中，得标准参考物的葡萄糖浓度并计算出标准参考物的相对葡萄糖浓度，通过样品及标准参考物的相对葡萄糖浓度计算出HI值，将HI值带入理论计算公式GI＝39.71+(0.549×HI)中计算得GI值。
优选的，所述的标准参考物为白面包。
优选的，所述的相对葡萄糖浓度为样品进行30min、60min、90min、120min、150min、180min消化后的葡萄糖浓度减去样品在0min时葡萄糖浓度。
本发明有益效果是：本发明血糖生成指数体外检测方法通过体外模拟人体消化的方法，缩短了检测时间，降低了检测要求，解决了体内检测耗费大量的人力物力的问题。根据体内消化环境，在实验过程中模拟其环境，对样品进行处理，大大的降低了实验周期及实验难度，并且可进行重复的大量的操作。
附图说明
图1是葡萄糖标准溶液中葡萄糖浓度与吸光度的关系曲线图；
图2是白面包的消化时间与吸光度之间的关系曲线图；
图3是本发明实施例的消化时间与吸光度之间的关系曲线图。
具体实施方式
下面通过对实施例的描述，对本发明作进一步详细的说明，以帮助本领域技术人员对本发明的发明构思、技术方案有更完整、准确和深入的理解。
一种血糖生成指数体外检测方法，包括如下步骤：
1)取20g样品粉碎，过20目筛，取过筛后的含50mg碳水化合物的样品放入酶反应器中；
2)模拟胃消化：向酶反应器中加入10ml KCl-HCl溶液，200ul胃蛋白酶溶液，于37℃-40℃条件下水浴搅拌1h；
3)模拟小肠消化：向酶反应器中加入磷酸缓冲液，使溶液pH值在6-7，然后加5ml淀粉酶溶液，开始计时；
4)在0min、30min、60min、90min、120min、150min、180min消化时间点分别取1mL测试液于离心管中，并沸水浴灭酶5min，灭酶后冷却；
5)取冷却后的测试液0.1ml于试管中，加水至2ml，加入2mlDNS，然后将试管放入沸水浴中加热6min,冷却后转移至容量瓶中，定容摇匀，待检测；
6)分光光度计预热30min，状态切换至A，波长为520nm，用蒸馏水调零，将0mg/ml、0.2mg/ml、0.4mg/ml、0.6mg/ml、0.8mg/ml、1.0mg/ml、1.2mg/ml、1.4mg/ml葡萄糖标准溶液进样检测，得葡萄糖标准液的浓度及吸光度，作出标准曲线；
7)对测试液进行吸光度检测，将测试液的吸光度代入标准曲线中，得样品的葡萄糖浓度并计算出样品的相对葡萄糖浓度，对白面包进行吸光度检测，将白面包的吸光度代入标准曲线中，得白面包的葡萄糖浓度并计算出白面包的相对葡萄糖浓度，通过样品及白面包的相对葡萄糖浓度计算出HI值，将HI值带入理论计算公式GI＝39.71+(0.549×HI)中计算得GI值。
下表1为样品和白面包在不同消化时间点的吸光度和相对葡糖糖浓度值：
表1
Claims (9)
1.一种血糖生成指数体外检测方法，其特征在于：通过模拟人体内的消化系统,消化含50mg碳水化合物的样品，针对不同消化时间点取样并加入3,5-二硝基水杨酸，经还原反应生成氨基化合物，对氨基化合物进行吸光度检测，通过理论计算公式计算得血糖生成指数。
2.根据权利要求1所述的血糖生成指数体外检测方法，其特征在于：所述模拟人体内的消化系统包括加入胃蛋白酶模拟胃消化的步骤及加入α-淀粉酶模拟小肠消化的步骤。
3.根据权利要求1所述的血糖生成指数体外检测方法，其特征在于：所述含50mg碳水化合物的样品的量是通过减重法计算得出，所述的碳水化合物(％)＝100-水分-灰分-脂肪-蛋白-膳食纤维(％)。
4.根据权利要求2所述的血糖生成指数体外检测方法，其特征在于：所述的模拟胃消化的步骤包括:向样品中加入10mlKCl-HCl水溶液及200ul胃蛋白酶溶液，于37℃-40℃条件下水浴搅拌1h，所述KCl-HCl水溶液中KCl、HCl、H2O质量体积比为3.7275:4.2:1g/ml/l；所述的胃蛋白酶溶液为胃蛋白酶与所述的KCl-HCl水溶液按质量体积比为1:10g/ml的混合物。
5.根据权利要求2所述的血糖生成指数体外检测方法，其特征在于：所述的模拟小肠消化的步骤包括：用磷酸缓冲液调节样品的pH＝6-7，然后加入5ml淀粉酶溶液，所述淀粉酶溶液为淀粉酶与磷酸缓冲液按质量体积比为0.02:1mg/ml的混合物。
6.根据权利要求1所述的血糖生成指数体外检测方法，其特征在于：所述的针对不同消化时间点取样，包括在0min、30min、60min、90min、120min、150min、180min时取样。
7.根据权利要求1所述的血糖生成指数体外检测方法，其特征在于：所述的样品模拟人体内消化后、加入3,5-二硝基水杨酸前需进行灭酶5min。
8.根据权利要求1-7任一项所述的血糖生成指数体外检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)取20g样品粉碎，过20目筛，取过筛后的含50mg碳水化合物的样品放入酶反应器中；
2)模拟胃消化：向酶反应器中加入10ml KCl-HCl溶液，200ul胃蛋白酶溶液，于37℃-40℃条件下水浴搅拌1h；
3)模拟小肠消化：向酶反应器中加入磷酸缓冲液，使溶液pH值在6-7，然后加5ml淀粉酶溶液，开始计时；
4)在0min、30min、60min、90min、120min、150min、180min消化时间点分别取1mL测试液于离心管中，并沸水浴灭酶5min，灭酶后冷却；
5)取冷却后的测试液0.1ml于试管中，加水至2ml，加入2mlDNS，然后将试管放入沸水浴中加热6min,冷却后转移至容量瓶中，定容摇匀，待检测；
6)分光光度计预热30min，状态切换至A，波长为520nm，用蒸馏水调零，将0mg/ml、0.2mg/ml、0.4mg/ml、0.6mg/ml、0.8mg/ml、1.0mg/ml、1.2mg/ml、1.4mg/ml葡萄糖标准溶液进样检测，得葡萄糖标准液的浓度及吸光度，作出标准曲线；
7)对测试液进行吸光度检测，将测试液的吸光度代入标准曲线中，得样品的葡萄糖浓度并计算出样品的相对葡萄糖浓度，对标准参考物进行吸光度检测，将标准参考物的吸光度代入标准曲线中，得标准参考物的葡萄糖浓度并计算出标准参考物的相对葡萄糖浓度，通过样品及标准参考物的相对葡萄糖浓度计算出HI值，将HI值带入理论计算公式GI＝39.71+(0.549×HI)中计算得GI值。
9.根据权利要求8所述的血糖生成指数体外检测方法，其特征在于：所述的标准参考物为白面包。
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