CN105900864A - 一种大型石斑鱼手术植入式雄性化方法 - Google Patents

一种大型石斑鱼手术植入式雄性化方法 Download PDF

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Abstract

一种大型石斑鱼手术植入式雄性化方法，属于水产育种技术领域。先制作激素药条，再植入鱼体。相对于药饵式雄性化技术，药条植入方式的雄性化率高，可达100％，不会出现复雌现象，药饵式适用于小型石斑鱼种类；相对于枪式植入式，手术植入式的药剂量易于控制，一次植入终生有效，无需强化补充植入，手术简单可靠，损伤小。方法简单，易于控制，不受污染，制作好的药条可长时间存放。药条植埋后，当季雄性化率达100％；手术感染率和死亡率为0。雄性化后性成熟的亲鱼在繁殖阶段体表出现交配色，有交配行为出现；挤压腹部生殖孔可排出精液，显微镜镜检下精子运动活跃；雌鱼产卵时雄性化的雄鱼所产精液可使卵子完成受精过程，并正常发育。

Description

一种大型石斑鱼手术植入式雄性化方法
技术领域
本发明属于水产育种技术领域，涉及鱼的雄性化方法，尤其是涉及一种大型石斑鱼手术植入式雄性化方法。
背景技术
石斑鱼是海水鱼类中经济价值最高的种类。在全世界100多种石斑鱼中，按其成体规格，可以分成大型和小型二类。小型石斑鱼就是我们常见的赤点石斑鱼(红斑)和青石斑鱼(土斑)这样的小型个体的石斑鱼，其外部特征是，个体小，已知最大个体一般在1-2kg以下；生长慢，从鱼种开始人工养殖二周年最大个体体重一般不超过1kg。大型石斑鱼的种类很多，常见经济种类有斜带石斑鱼、云纹石斑鱼、褐石斑鱼、龙胆石斑鱼等，个体都较大，已知最大个体一般可以达到几十甚至数百kg；生长快，从鱼种开始养殖一般一年可以达到1kg甚至更大。由于石斑鱼人工繁殖及规模化人工育苗的成功，其养殖近年来增长很快。这种增长主要依靠大型石斑鱼养殖量的增长。但是石斑鱼是雌雄同体雌性先熟的种类，小型石斑鱼很容易实现雄性化且群体中可以出现较多数量的雄性个体，而大型石斑鱼雄性个体不易获得。所有大型石斑鱼种类，生长期至少需要7龄才可能出现雄性个体；在一个局域性小群体中，只能有一个雄性个体存在。缺少雄性亲鱼，是大型石斑鱼工人繁殖的主要制约因素。本项技术，采用手术植入激素药条的方式，使雌性个体实现雄性化，为大型石斑鱼的人工繁殖和育苗生产提供雄性亲鱼。
发明内容
本发明的目的是提供方法简便、雄性化率可达100％、不会出现复雌现象的一种大型石斑鱼手术植入式雄性化方法。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种大型石斑鱼手术植入式雄性化方法，包括以下步骤：
1)激素药条的制作：准备3个烧杯，在第一烧杯中用移液管先后加入蒸馏水和明胶颗粒，第二烧杯中用移液管先后加入蒸馏水和阿拉伯胶颗粒，第一烧杯和第二烧杯均加热搅拌至溶解均匀，从而分别制成明胶溶液和阿拉伯胶溶液；再取第三烧杯，加入激素粉剂和植物油，在明胶溶液和阿拉伯胶溶液冷却至接近常温时，用移液管取明胶水溶液和阿拉伯胶水溶液加入第三烧杯中，搅拌均匀成糊状药剂，然后将药剂移入玻璃成型盘中，将药剂铺平，使药剂在成型盘中成为平板状；然后用手术刀片将成型盘中尚未完全固化的平板状药剂间隔横切制成药条，在药条完全固化后即可装入试剂瓶中密闭冷藏待用，所有制作过程在无菌操作箱中进行；
2)植入鱼体：在繁殖季节前6个月左右，选择需要雄性化的健康大型石斑鱼成体，移入池边便于操作的小网箱中进行手术,手术前将石斑鱼麻醉，用鱼夹将鱼夹紧，置于手术台上，露出鱼背部；然后用手术刀片在石斑鱼背肌上切开1个刀口，再用通条的针头端从该刀口与鱼体纵轴成30°～45°夹角插入背肌，然后取出通条，将药条从刀口处沿通条插入的通道插入背肌中，用通条的钝性端将药条顶入通道深部，手术前后石斑鱼体的手术刀口区域需用抗生素针剂清洗。
步骤1)中，所述第一烧杯中，蒸馏水与明胶颗粒的比例，按质量比可为9∶(0.8～1.2),优选9∶1；所述第二烧杯中，蒸馏水与阿拉伯胶颗粒的比例，按质量比可为9∶(0.8～1.2)，优选9∶1；所述第三烧杯中，激素粉剂与植物油的比例，按质量比可为1∶(0.003～0.007)，优选1∶0.005。
步骤1)中，所述激素粉剂可采用17α-Methyltestosterone，纯度≥97％的产品。
步骤1)中，所述平板状药剂的切制方法最好为：按0.2cm的间隔横切9刀，所制药剂切成10条2cm长、横切面为0.2cm×0.2cm的药条。
步骤2)中，所述刀口可为0.3～0.6cm宽度的刀口，最好为0.5cm宽度的刀口。
步骤2)中，所述药条植入量与鱼体重量相关，鱼体体重小于5kg可植入半根药条，鱼体体重5～10kg可植入1根药条，所述药条为2cm长、横切面为0.2cm×0.2cm的药条。
步骤2)中，所述抗生素针剂可为庆大霉素针剂。
与现有技术比较，本发明的有益效果如下：
本发明提供一种简便、可靠、有效的利用人工配制的激素药条手术植入大型石斑鱼成体背肌内使其实现雄性化的技术方法，旨在为大型石斑鱼人工繁殖和育苗生产提供雄性亲鱼。相对于药饵式雄性化技术，药条植入方式的雄性化率高，可以达到100％，不会出现复雌现象，药饵式适用于小型石斑鱼种类；相对于枪式植入式，手术植入式的药剂量易于控制，一次植入终生有效，无需强化补充植入，手术简单可靠，损伤小；药条制作方法简单，易于控制，不受污染，制作好的药条可以长时间存放。
本发明经斜带石斑鱼、云纹石斑鱼、褐石斑鱼、龙胆石斑鱼等大型石斑鱼上的数十例试验，结果表明：药条植埋后，当季雄性化率达到100％；手术感染率和死亡率为0。经手术5～8年的观察，尚未发现复雌现象。雄性化后性成熟的亲鱼在繁殖阶段体表出现交配色，有交配行为出现；挤压腹部生殖孔可以排出精液，显微镜镜检下精子运动活跃；雌鱼产卵时雄性化的雄鱼所产精液可使卵子完成受精过程，并正常发育。
具体实施方式
以下实施例将对本发明作进一步的说明。
一种大型石斑鱼手术植入式雄性化方法，包括以下步骤：
1)激素药条的制作：取二个100ml烧杯，用移液管分别加入18ml蒸馏水，一个烧杯加入2g明胶颗粒，另一个烧杯加入2g阿拉伯胶颗粒，分别用酒精灯加热使其溶解，加热时用玻璃棒轻轻搅拌使其受热溶解均匀，制成10％的明胶溶液和10％的阿拉伯胶溶液；再取另一个50ml烧杯，加入10g激素粉剂(17α-Methyltestosterone，纯度≥97％，美国进口)和一滴植物油，在明胶和阿拉伯胶冷却至接近常温时，用移液管取2.5ml 10％明胶水溶液和2.5ml阿拉伯胶水溶液加入已放置激素的烧杯中，用玻璃棒搅拌使其均匀成糊状，然后将药团移入体积为2cm(长)×2cm(宽)×0.2cm(厚)的玻璃制成型盘中；将药剂铺平，使其在成型盘中成为2cm(长)×2cm(宽)×0.2cm(厚)的平板状；一个小时后，移去固化盘边框，用手术刀片将成型盘中尚未完全固化的平板状药剂按0.2cm的间隔横切9刀，所制药剂即成10条2cm长、横切面为0.2cm×0.2cm的药条。在药条完全固化后即可装入50ml试剂瓶中密闭放入冰箱待用。以上所有制作过程需在无菌操作箱中进行。
2)植入鱼体：在繁殖季节前6个月左右，选择需要雄性化的健康大型石斑鱼成体，移入池边便于操作的小网箱中。手术前先用丁香酚将鱼麻醉，用鱼夹将鱼夹紧，置于手术台上，露出鱼背部；用手术刀片在背肌上切开一个0.5cm的刀口，再用通条(长10cm，直径0.3cm，不锈钢制，一端尖锐，一端平钝)的针头端从刀口与鱼体纵轴成30°～45°夹角插入背肌，插入的深度一般为5cm；取出通条，用镊子夹药条从刀口处沿通条插入的通道插入背肌中，用通条的钝性端将药条顶入通道深部。药条用量与鱼体重量相关，鱼体体重小于5kg仅需植入半根(1cm长)药条；鱼体体重5～10kg需植入1根(长2cm)药条。手术前后鱼体的手术刀口区域需用庆大霉素针剂清洗。
本发明的理论依据是：Kallmann,Kosswig电等人通过实验证实了常染色体上性别决定基因的存在，Yamarmoto提出了多基因模型(Polygenic model)，以解释鱼类性别决定现象。此模型认为雄性因子(M)和雌性因子(F)的主要部分分别存在于Y和X染色体上，同时，常染色体上亦分布有它们的同义因子。基因型为AAXX的个体是遗传的雌鱼，其性因了是∑F＞∑M，所以诱导物(雌性决定素)比雄性诱导物(雄性决定素)产生得多，因而能使未分化性腺诱导为卵巢。反之，AAXY个体产生更多的雄性诱导物(雄性决定素)而使未分化性腺诱导为精巢。可是用适量的雌(雄)性诱导物质投喂AAXY(AAXX)幼鱼，就能诱导未分化性腺，使之成为卵(精)巢。1969年，日本学者Yamamoto和Kajishima首次对鱼类的性别决定机制进行了系统的阐述，总结了鱼类的性腺类型、雌雄同体现象、性别决定的遗传学基础以及性类固醇激素对性分化的影响，提出类固醇激素是白然的“性诱导剂”，雌激素是“雌性诱导剂”，而雄激素是“雄性诱导剂。迄今为止，至少在15个科47种鱼类进行了激素诱导实验并取得了良好的诱导效果。

Claims (8)

1.一种大型石斑鱼手术植入式雄性化方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)激素药条的制作：准备3个烧杯，在第一烧杯中用移液管先后加入蒸馏水和明胶颗粒，第二烧杯中用移液管先后加入蒸馏水和阿拉伯胶颗粒，第一烧杯和第二烧杯均加热搅拌至溶解均匀，从而分别制成明胶溶液和阿拉伯胶溶液；再取第三烧杯，加入激素粉剂和植物油，在明胶溶液和阿拉伯胶溶液冷却至接近常温时，用移液管取明胶水溶液和阿拉伯胶水溶液加入第三烧杯中，搅拌均匀成糊状药剂，然后将药剂移入玻璃成型盘中，将药剂铺平，使药剂在成型盘中成为平板状；然后用手术刀片将成型盘中尚未完全固化的平板状药剂间隔横切制成药条，在药条完全固化后即可装入试剂瓶中密闭冷藏待用，所有制作过程在无菌操作箱中进行；
2)植入鱼体：在繁殖季节前6个月左右，选择需要雄性化的健康大型石斑鱼成体，移入池边便于操作的小网箱中进行手术,手术前将石斑鱼麻醉，用鱼夹将鱼夹紧，置于手术台上，露出鱼背部；然后用手术刀片在石斑鱼背肌上切开1个刀口，再用通条的针头端从该刀口与鱼体纵轴成30°～45°夹角插入背肌，然后取出通条，将药条从刀口处沿通条插入的通道插入背肌中，用通条的钝性端将药条顶入通道深部，手术前后石斑鱼体的手术刀口区域需用抗生素针剂清洗。
2.如权利要求1所述一种大型石斑鱼手术植入式雄性化方法，其特征在于，步骤1)中，所述第一烧杯中，蒸馏水与明胶颗粒的比例，按质量比为9∶(0.8～1.2)；所述第二烧杯中，蒸馏水与阿拉伯胶颗粒的比例，按质量比为9∶(0.8～1.2)；所述第三烧杯中，激素粉剂与植物油的比例，按质量比为1∶(0.003～0.007)。
3.如权利要求2所述一种大型石斑鱼手术植入式雄性化方法，其特征在于，所述第一烧杯中，蒸馏水与明胶颗粒的比例，按质量比为9∶1；所述第二烧杯中，蒸馏水与阿拉伯胶颗粒的比例，按质量比为9∶1；所述第三烧杯中，激素粉剂与植物油的比例，按质量比为1∶0.005。
4.如权利要求1所述一种大型石斑鱼手术植入式雄性化方法，其特征在于，步骤1)中，所述激素粉剂采用17α-Methyltestosterone，纯度≥97％的产品。
5.如权利要求1所述一种大型石斑鱼手术植入式雄性化方法，其特征在于，步骤1)中，所述平板状药剂的切制方法为：按0.2cm的间隔横切9刀，所制药剂切成10条2cm长、横切面为0.2cm×0.2cm的药条。
6.如权利要求1所述一种大型石斑鱼手术植入式雄性化方法，其特征在于，步骤2)中，所述刀口为0.3～0.6cm宽度的刀口。
7.如权利要求6所述一种大型石斑鱼手术植入式雄性化方法，其特征在于，所述刀口为0.5cm宽度的刀口。
8.如权利要求1所述一种大型石斑鱼手术植入式雄性化方法，其特征在于，步骤2)中，当石斑鱼鱼体体重小于5kg植入半根药条，当石斑鱼鱼体体重5～10kg植入1根药条，所述药条为2cm长、横切面为0.2cm×0.2cm的药条。
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