CN105884934A - 一种达肝素钠的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种达肝素钠的制备方法，该制备方法包括制备肝素钠溶液、制备肝素钠降解液、制备还原液、制备还原沉淀物、制备达肝素钠粗品、制备达肝素钠精品、冻干等步骤，其具备较低异物引入可能性、较高的产品稳定性、消除了难以分离的二氧化锰等优点。

Description

一种达肝素钠的制备方法

技术领域

本发明涉及一种肝素及其衍生物的制备方法，特别地涉及一种达肝素钠的制备方法

背景技术

肝素是一种葡萄糖胺聚糖，其广泛存在于动物器官中，例如小肠粘膜和肺，具有抗凝、抗炎、抗过敏、抗病毒、抗癌等多种药理活性。肝素是由糠醛酸和氨基葡萄糖以1-4糖苷键连起来的重复二糖单元组成的线性粘多糖，其广泛分布于哺乳动物的组织中，由结缔组织性肥大细胞表达产生。肝素在动物体内大部分以肝素钠-蛋白复合物的形式存在。由于肝素钠解离不完全，肝素提取方法会残留以共价键结合的蛋白质和以静电结合的带正电蛋白质。

低分子量肝素主要包括肝素钠和肝素钙，具有出血发生率较低的优点，其平均分子量为5000。达肝素钠是一种低分子量的肝素钠，主要用于防治深层静脉血栓形成。

目前，低分子肝素类产品生产方法主要包括高锰酸钾与双氧水的氧化降解法、过氧化氢降解法和酶降解法。过氧化氢降解法可能引入异物，导致病人的过敏反应可能性较高；酶降解法的产品末端含有不饱和基团，导致产品稳定性差；高锰酸钾与双氧水的氧化降解法会产生二氧化锰，其较难分离，降低了生产效率。

发明内容

针对上述现有工艺的缺陷，本发明提供了一种达肝素钠的制备方法，其具备较低的异物引入可能性、较高的产品稳定性、消除了难以分离的二氧化锰等特点。

为了达到上述优点，本发明具体采用了如下技术方案。

一种达肝素钠的制备方法，其步骤包括：

1)制备肝素钠溶液：在肝素钠中加入6～7质量倍的纯化水，在常温下搅拌3～5小时，肝素钠溶解；

2)制备肝素钠降解液：用盐酸调节步骤1的肝素钠溶液的pH值至9.5～10.5，加入相当于1.5％～2.5％肝素钠重量的亚硝酸钠，在15～25℃下搅拌反应2～5h，静置20～24h，得到肝素降解液；

3)制备还原液：用氢氧化钠溶液调节所述肝素降解液的pH值至9.5～10.5，加入相当于0.7％～0.9％肝素钠重量的硼氢化钠，反应11～15h，用氢氧化钠溶液调节pH值至6.6～6.9，得到还原液；

4)制备还原沉淀物：向所述还原液加入2.5～3.5体积倍的乙醇，搅拌2～6h，收集，得到还原沉淀物；

5)制备达肝素钠粗品：向所述还原沉淀物加入纯净水，搅拌至溶解，加入0.3％～0.9％体积倍的双氧水，在26～34℃下氧化11～23h，加入2.5～3.5体积倍量的乙醇，搅拌，收集，得到达肝素钠粗品；

6)制备达肝素钠精品：向所述达肝素钠粗品沉淀加入纯化水，溶解成1.1％～1.9％(w/w)的溶液，分别用分子量截留值为3100和7900的超滤膜进行超滤，除菌过滤，得到达肝素钠精品溶液；

7)冻干：在-26～-34℃冻干所述达肝素钠溶液，得到达肝素钠成品。

本发明具备如下优点：

1)较低的异物引入可能性；

2)较高的产品稳定性；

3)消除了难以分离的二氧化锰。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明做进一步详细说明。

实施例1

一种达肝素钠的制备方法，其步骤包括：

1)制备肝素钠溶液：在肝素钠中加入6质量倍的纯化水，在常温下搅拌3小时，肝素钠溶解；

2)制备肝素钠降解液：用盐酸调节步骤1的肝素钠溶液的pH值至9.5，加入相当于1.5％肝素钠重量的亚硝酸钠，在15℃下搅拌反应2h，静置20h，得到肝素降解液；

3)制备还原液：用氢氧化钠溶液调节所述肝素降解液的pH值至9.5，加入相当于0.7％肝素钠重量的硼氢化钠，反应11h，用氢氧化钠溶液调节pH值至6.6，得到还原液；

4)制备还原沉淀物：向所述还原液加入2.5体积倍的乙醇，搅拌2h，收集，得到还原沉淀物；

5)制备达肝素钠粗品：向所述还原沉淀物加入纯净水，搅拌至溶解，加入0.3％体积倍的双氧水，在26℃下氧化11h，加入2.5体积倍量的乙醇，搅拌，收集，得到达肝素钠粗品；

6)制备达肝素钠精品：向所述达肝素钠粗品沉淀加入纯化水，溶解成1.1％(w/w)的溶液，分别用分子量截留值为3100和7900的超滤膜进行超滤，除菌，过滤，得到达肝素钠精品溶液；

7)冻干：在-26℃冻干所述达肝素钠溶液，得到达肝素钠成品。

实施例2

1)制备肝素钠溶液：在肝素钠中加入7质量倍的纯化水，在常温下搅拌5小时，肝素钠溶解；

2)制备肝素钠降解液：用盐酸调节步骤1的肝素钠溶液的pH值至10.5，加入相当于2.5％肝素钠重量的亚硝酸钠，在25℃下搅拌反应5h，静置24h，得到肝素降解液；

3)制备还原液：用氢氧化钠溶液调节所述肝素降解液的pH值至10.5，加入相当于0.9％肝素钠重量的硼氢化钠，反应15h，用氢氧化钠溶液调节pH值至6.9，得到还原液；

4)制备还原沉淀物：向所述还原液加入3.5体积倍的乙醇，搅拌6h，收集，得到还原沉淀物；

5)制备达肝素钠粗品：向所述还原沉淀物加入纯净水，搅拌至溶解，加入0.9％体积倍的双氧水，在34℃下氧化23h，加入3.5体积倍量的乙醇，搅拌，收集，得到达肝素钠粗品；

6)制备达肝素钠精品：向所述达肝素钠粗品沉淀加入纯化水，溶解成1.9％(w/w)的溶液，分别用分子量截留值为3100和7900的超滤膜进行超滤，除菌，过滤，得到达肝素钠精品溶液；

7)冻干：在-34℃冻干所述达肝素钠溶液，得到达肝素钠成品。

实施例3

一种达肝素钠的制备方法，其步骤包括：

1)制备肝素钠溶液：在肝素钠中加入6.1质量倍的纯化水，在常温下搅拌3.3小时，肝素钠溶解；

2)制备肝素钠降解液：用盐酸调节步骤1的肝素钠溶液的pH值至9.6，加入相当于1.6％肝素钠重量的亚硝酸钠，在16℃下搅拌反应3h，静置21h，得到肝素降解液；

3)制备还原液：用氢氧化钠溶液调节所述肝素降解液的pH值至9.6，加入相当于0.8％肝素钠重量的硼氢化钠，反应12h，用氢氧化钠溶液调节pH值至6.7，得到还原液；

4)制备还原沉淀物：向所述还原液加入2.6体积倍的乙醇，搅拌3h，收集，得到还原沉淀物；

5)制备达肝素钠粗品：向所述还原沉淀物加入纯净水，搅拌至溶解，加入0.4％体积倍的双氧水，在27℃下氧化12h，加入2.6体积倍量的乙醇，搅拌，收集，得到达肝素钠粗品；

6)制备达肝素钠精品：向所述达肝素钠粗品沉淀加入纯化水，溶解成1.2％(w/w)的溶液，分别用分子量截留值为3100和7900的超滤膜进行超滤，除菌，过滤，得到达肝素钠精品溶液；

7)冻干：在-27℃冻干所述达肝素钠溶液，得到达肝素钠成品。

实施例4

一种达肝素钠的制备方法，其步骤包括：

1)制备肝素钠溶液：在肝素钠中加入6.2质量倍的纯化水，在常温下搅拌3.5小时，肝素钠溶解；

2)制备肝素钠降解液：用盐酸调节步骤1的肝素钠溶液的pH值至9.8，加入相当于1.8％肝素钠重量的亚硝酸钠，在18℃下搅拌反应4h，静置22h，得到肝素降解液；

3)制备还原液：用氢氧化钠溶液调节所述肝素降解液的pH值至9.8，加入相当于0.72％肝素钠重量的硼氢化钠，反应13h，用氢氧化钠溶液调节pH值至6.8，得到还原液；

4)制备还原沉淀物：向所述还原液加入2.7体积倍的乙醇，搅拌4h，收集，得到还原沉淀物；

5)制备达肝素钠粗品：向所述还原沉淀物加入纯净水，搅拌至溶解，加入0.5％体积倍的双氧水，在28℃下氧化13h，加入2.7体积倍量的乙醇，搅拌，收集，得到达肝素钠粗品；

6)制备达肝素钠精品：向所述达肝素钠粗品沉淀加入纯化水，溶解成1.3％(w/w)的溶液，分别用分子量截留值为3100和7900的超滤膜进行超滤，除菌，过滤，得到达肝素钠精品溶液；

7)冻干：在-28℃冻干所述达肝素钠溶液，得到达肝素钠成品。

实施例5

一种达肝素钠的制备方法，其步骤包括：

1)制备肝素钠溶液：在肝素钠中加入6.3质量倍的纯化水，在常温下搅拌3.7小时，肝素钠溶解；

2)制备肝素钠降解液：用盐酸调节步骤1的肝素钠溶液的pH值至10.0，加入相当于2.0％肝素钠重量的亚硝酸钠，在20℃下搅拌反应3.2h，静置23h，得到肝素降解液；

3)制备还原液：用氢氧化钠溶液调节所述肝素降解液的pH值至9.9，加入相当于0.73％肝素钠重量的硼氢化钠，反应14h，用氢氧化钠溶液调节pH值至6.8，得到还原液；

4)制备还原沉淀物：向所述还原液加入2.8体积倍的乙醇，搅拌5h，收集，得到还原沉淀物；

5)制备达肝素钠粗品：向所述还原沉淀物加入纯净水，搅拌至溶解，加入0.6％体积倍的双氧水，在29℃下氧化14h，加入2.8体积倍量的乙醇，搅拌，收集，得到达肝素钠粗品；

6)制备达肝素钠精品：向所述达肝素钠粗品沉淀加入纯化水，溶解成1.4％(w/w)的溶液，分别用分子量截留值为3100和7900的超滤膜进行超滤，除菌，过滤，得到达肝素钠精品溶液；

7)冻干：在-29℃冻干所述达肝素钠溶液，得到达肝素钠成品。

实施例6

一种达肝素钠的制备方法，其步骤包括：

1)制备肝素钠溶液：在肝素钠中加入6.4质量倍的纯化水，在常温下搅拌3.9小时，肝素钠溶解；

2)制备肝素钠降解液：用盐酸调节步骤1的肝素钠溶液的pH值至10.1，加入相当于2.1％肝素钠重量的亚硝酸钠，在21℃下搅拌反应3.4h，静置23h，得到肝素降解液；

3)制备还原液：用氢氧化钠溶液调节所述肝素降解液的pH值至10.0，加入相当于0.75％肝素钠重量的硼氢化钠，反应12h，用氢氧化钠溶液调节pH值至6.9，得到还原液；

4)制备还原沉淀物：向所述还原液加入2.9体积倍的乙醇，搅拌3.5h，收集，得到还原沉淀物；

5)制备达肝素钠粗品：向所述还原沉淀物加入纯净水，搅拌至溶解，加入0.7％体积倍的双氧水，在30℃下氧化15h，加入2.9体积倍量的乙醇，搅拌，收集，得到达肝素钠粗品；

6)制备达肝素钠精品：向所述达肝素钠粗品沉淀加入纯化水，溶解成1.5％(w/w)的溶液，分别用分子量截留值为3100和7900的超滤膜进行超滤，除菌，过滤，得到达肝素钠精品溶液；

7)冻干：在-30℃冻干所述达肝素钠溶液，得到达肝素钠成品。

实施例7

一种达肝素钠的制备方法，其步骤包括：

1)制备肝素钠溶液：在肝素钠中加入6.5质量倍的纯化水，在常温下搅拌4小时，肝素钠溶解；

2)制备肝素钠降解液：用盐酸调节步骤1的肝素钠溶液的pH值至10.3，加入相当于2.3％肝素钠重量的亚硝酸钠，在22℃下搅拌反应4h，静置23h，得到肝素降解液；

3)制备还原液：用氢氧化钠溶液调节所述肝素降解液的pH值至10.2，加入相当于0.85％肝素钠重量的硼氢化钠，反应13h，用氢氧化钠溶液调节pH值至6.9，得到还原液；

4)制备还原沉淀物：向所述还原液加入3.0体积倍的乙醇，搅拌5h，收集，得到还原沉淀物；

5)制备达肝素钠粗品：向所述还原沉淀物加入纯净水，搅拌至溶解，加入0.8％体积倍的双氧水，在31℃下氧化20h，加入3.1体积倍量的乙醇，搅拌，收集，得到达肝素钠粗品；

6)制备达肝素钠精品：向所述达肝素钠粗品沉淀加入纯化水，溶解成1.8％(w/w)的溶液，分别用分子量截留值为3100和7900的超滤膜进行超滤，除菌，过滤，得到达肝素钠精品溶液；

7)冻干：在-32℃冻干所述达肝素钠溶液，得到达肝素钠成品。

显然，本发明的上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非是对本发明实施方式的限定。对于所述领域的技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而这些属于本发明的精神所引申出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围之中。

Claims (2)

1.一种达肝素钠的制备方法，其特征在于，其步骤包括：

1)制备肝素钠溶液：在肝素钠中加入6～7质量倍的纯化水，在常温下搅拌3～5小时，肝素钠溶解；

2)制备肝素钠降解液：用盐酸调节步骤1的肝素钠溶液的pH值至9.5～10.5，加入相当于1.5％～2.5％肝素钠重量的亚硝酸钠，在15～25℃下搅拌反应2～5h，静置20～24h，得到肝素降解液；

3)制备还原液：用氢氧化钠溶液调节所述肝素降解液的pH值至9.5～10.5，加入相当于0.7％～0.9％肝素钠重量的硼氢化钠，反应11～15h，用氢氧化钠溶液调节pH值至6.6～6.9，得到还原液；

4)制备还原沉淀物：向所述还原液加入2.5～3.5体积倍的乙醇，搅拌2～6h，收集，得到还原沉淀物；

5)制备达肝素钠粗品：向所述还原沉淀物加入纯净水，搅拌至溶解，加入0.3％～0.9％体积倍的双氧水，在26～34℃下氧化11～23h，加入2.5～3.5体积倍量的乙醇，搅拌，收集，得到达肝素钠粗品；

6)制备达肝素钠精品：向所述达肝素钠粗品沉淀加入纯化水，溶解成1.1％～1.9％(w/w)的溶液，分别用分子量截留值为3100和7900的超滤膜进行超滤，除菌，过滤，得到达肝素钠精品溶液；

7)冻干：在-26～-34℃冻干所述达肝素钠溶液，得到达肝素钠成品。

2.如权利要求1所述达肝素钠的制备方法，其特征在于，其步骤包括：

1)制备肝素钠溶液：在肝素钠中加入5质量倍的纯化水，在常温下搅拌4小时，肝素钠溶解；

2)制备肝素钠降解液：用盐酸调节步骤1的肝素钠溶液的pH值至10.0，加入相当于2.0％肝素钠重量的亚硝酸钠，在20℃下搅拌反应3h，静置22h，得到肝素降解液；

3)制备还原液：用氢氧化钠溶液调节所述肝素降解液的pH值至10.0，加入相当于0.8％肝素钠重量的硼氢化钠，反应13h，用氢氧化钠溶液调节pH值至6.8，得到还原液；

4)制备还原沉淀物：向所述还原液加入3.5体积倍的乙醇，搅拌5h，收集，得到还原沉淀物；

5)制备达肝素钠粗品：向所述还原沉淀物加入纯净水，搅拌至溶解，加入0.5％体积倍的双氧水，在29℃下氧化15h，加入3.5体积倍量的乙醇，搅拌，收集，得到达肝素钠粗品；

6)制备达肝素钠精品：向所述达肝素钠粗品沉淀加入纯化水，溶解成1.5％(w/w)的溶液，分别用分子量截留值为3100和7900的超滤膜进行超滤，除菌，过滤，得到达肝素钠精品溶液；

7)冻干：在-34℃冻干所述达肝素钠溶液，得到达肝素钠成品。