CN105879010A - 一种能促进创伤愈合减轻创后瘢痕的多肽组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种能促进创伤愈合减轻创后瘢痕的多肽组合物及其制备方法，本发明所述的多肽组合物，含有凝血酶肽衍生物TP508和安基奥101，两者的重量比为1∶1～5。TP508与安基奥101联合应用组成复方对创伤愈合有促进作用，并有助于愈后瘢痕的控制。

Description

一种能促进创伤愈合减轻创后瘢痕的多肽组合物及其制备方法

技术领域

本发明涉及外科用药领域，更为具体的说是涉及用于创伤后促进伤口愈合外用多肽组合物及其制备方法。

背景技术

创伤后愈合是外伤治疗中重点的评价指标。创伤愈合的过程是免疫细胞、成纤维细胞、内皮细胞、角质细胞共同发挥各自作用的过程。其中，免疫细胞清除抗原、成纤维细胞构成肉芽组织、内皮细胞生产血管、最终由上皮细胞完成修复，创伤愈合。促进组织再生、缩短创伤愈合时间、减轻愈合后瘢痕体征对伤者尤其是大面积外伤患者的肌体康复、心理康复具有重要意义。

凝血酶肽衍生物TP508具有促进细胞增殖的作用，其作用机理是激活凝血酶受体NPAR，释放凝血酶，进而加速成纤维细胞增殖促进肉芽组织、血管延伸及新血管生成、刺激内皮细胞增殖加速伤口愈合。

安基奥101是一个含有45个氨基酸的多肽，序列为NH2-MSDKPDLSEVETFDKSKLKKTNTEEKNTLPSKETIQQEKEYNQRS-COOH。作用机制是促进表皮干细胞再分布，促进细胞增殖和分化，尤其对肉芽组织有很好的促生成作用。

目前尚未有TP508与安基奥101联合应用的报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种能够促进伤口愈合并有助于减轻瘢痕的多肽组合物及其制备方法。

本发明所述的多肽组合物，含有凝血酶肽衍生物TP508和安基奥101，两者的重量比为1∶1～5。

所述的多肽组合物中还含有稳定剂，其中稳定剂选自糖类、多元醇类、氨基酸类、大分子化合物类中的一种或其组合。其中糖类选自葡萄糖、果糖、半乳糖、核糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖、海藻糖、棉籽糖、菊糖、纤维素中的一种或其组合；多元醇选自甘油、甘露醇、山梨醇、聚乙二醇、肌醇中的一种或其组合；氨基酸选自甘氨酸、谷氨酸、精氨酸中的一种或其组合；大分子化合物选自牛血清白蛋白、右旋糖苷、明胶中的一种或其组合。

所述的多肽组合物中还含有基质，其中基质选自卡波姆、羧甲基纤维素钠、纤维素中的一种或其组合。

各组分的构成比例为TP508∶安基奥101∶稳定剂∶基质＝1∶1～5∶100～500∶10000～100000。

以上皮化率为指标对制剂进行考查。并且运用改良Burgi氏公式，对TP508与安基奥101的相互作用进行了研究(q＞1.15为协同，q＜0.85为拮抗，介于0.85与1.15之间为相加)。

结果表明TP508与安基奥101联合应用组成复方对创伤愈合有促进作用，并有助于愈后瘢痕的控制。

具体实施方式

实施例1

本实施例所描述的复方制剂所需原料质量配比为10mg TP508、10mg安基奥101、3g菊糖、1g卡波姆，各组分按如下描述配制：

将1g卡波姆加入到100g去离子水中，搅拌使其溶胀，降至1-5℃得混合液A。

将TP508、安基奥101加至PBS缓冲液中溶解与甘露醇在1-4℃下均匀混合保温30分钟，将此混合物加至混合液A中超声乳化既得终产品。

实施例2

本实施例所描述的复方制剂所需原料质量配比为10mg TP508、50mg安基奥101、3g甘露醇、1g卡波姆，各组分按如下描述配制：

将1g卡波姆加入到100g去离子水中，搅拌使其溶胀，降至1-5℃得混合液A。

将TP508、安基奥101加至PBS缓冲液中溶解与甘露醇在1-4℃下均匀混合保温30分钟，将此混合物加至混合液A中超声乳化既得终产品。

实施例3

本实施例所描述的复方制剂所需原料质量配比为1mg TP508、15mg安基奥101、3g甘露醇、1g羧甲基纤维素钠，各组分按如下描述配制：

将1g羧甲基纤维素钠加入到100g去离子水中，加热使其糊化，降至1-5℃得混合液A。

将TP508、安基奥101加至PBS缓冲液中溶解与甘露醇在1-4℃下均匀混合保温30分钟，将此混合物加至混合液A中超声乳化既得终产品。

实施例4

本实施例所描述的复方制剂所需原料质量配比为10mg TP508、25mg安基奥101、3g甘露醇、1g羧甲基纤维素钠，各组分按如下描述配制：

将1g羧甲基纤维素钠加入到100g去离子水中，加热使其糊化，降至1-5℃得混合液A。

将TP508、安基奥101加至PBS缓冲液中溶解与甘露醇在1-4℃下均匀混合保温30分钟，将此混合物加至混合液A中超声乳化既得终产品。

实施例5

本实施例所描述的复方制剂所需原料质量配比为10mg TP508、35mg安基奥101、3g甘露醇、1g羧甲基纤维素钠，各组分按如下描述配制：

将1g羧甲基纤维素钠加入到100g去离子水中，加热使其糊化，降至1-5℃得混合液A。

将TP508、安基奥101加至PBS缓冲液中溶解与甘露醇在1-4℃下均匀混合保温30分钟，将此混合物加至混合液A中超声乳化既得终产品。

实施例6

本实施例所描述的复方制剂所需原料质量配比为10mg TP508、45mg安基奥101、3g甘露醇、1g羧甲基纤维素钠，各组分按如下描述配制：

将1g羧甲基纤维素钠加入到100g去离子水中，加热使其糊化，降至1-5℃得混合液A。

将TP508、安基奥101加至PBS缓冲液中溶解与甘露醇在1-4℃下均匀混合保温30分钟，将此混合物加至混合液A中超声乳化既得终产品。

实施例7

本实施例所描述的复方制剂所需原料质量配比为10mg TP508、45mg安基奥101、0.5g半乳糖、1g甘油、0.1g右旋糖苷、1g羧甲基纤维素钠，各组分按如下描述配制：

将1g羧甲基纤维素钠加入到100g去离子水中，加热使其糊化，降至1-5℃得混合液A。

将TP508、安基奥101与甘油在1-4℃下均匀混合保温30分钟，加入右旋糖苷、半乳糖均匀混合搅拌5分钟，加PBS缓冲液中超声乳化得混合物B。

将混合物B加至混合液A中超声乳化既得终产品。

实施例8 PBS缓冲液的配制

本发明所用PBS缓冲液浓度为0.1mol/L，pH＝7.4；配制方法如下：

甲液：0.1mol/L Na2HPO4溶液：称取磷酸氢二钠9.465g 7.099g，加蒸馏水至1000ml；

乙液：0.05mol/L KH2P04溶液：称取磷酸二氢钾，9.07g 6.803g，加蒸馏水至1000ml。

将甲乙液分装在棕色瓶内，于4℃冰箱中保存，用时甲、乙两液各按4/1比例混合即得。

实施例9 TP508凝胶的制备

本实施例所描述的制剂所需原料质量配比为10mg TP508、0.5g半乳糖、1g甘油、0.1g右旋糖苷、1g卡波姆，各组分按如下描述配制：

将1g卡波姆加入到100g去离子水中，搅拌使其溶胀，降至1-5℃得混合液A。

将TP508加至PBS缓冲液中溶解与甘露醇、右旋糖苷在1-4℃下均匀混合保温30分钟，将此混合物加至混合液A中超声乳化既得终产品。

实施例10 安基奥101凝胶的制备

本实施例所描述的制剂所需原料质量配比为50mg安基奥101、0.5g半乳糖、1g甘油、0.1g右旋糖苷、1g卡波姆，各组分按如下描述配制：

将1g卡波姆加入到100g去离子水中，搅拌使其溶胀，降至1-5℃得混合液A。

将安基奥101加至PBS缓冲液中溶解与甘露醇、右旋糖苷在1-4℃下均匀混合保温30分钟，将此混合物加至混合液A中超声乳化既得终产品。

实施例11 空白基质的制备

本实施例所描述的制剂所需原料质量配比为0.5g半乳糖、1g甘油、0.1g右旋糖苷、1g卡波姆，各组分按如下描述配制：

将1g卡波姆加入到100g去离子水中，搅拌使其溶胀，降至1-5℃得混合液A。

将PBS缓冲液中溶解与甘露醇、右旋糖苷在1-4℃下均匀混合保温30分钟，将此混合物加至混合液A中超声乳化既得终产品。

试验例

创伤模型分组

试验小鼠雌雄各半，体重20g±2g，温度20℃±2℃，湿度50％±2％，模拟自然光照条件，随机分成5组每组各45只，分别编号为1-5。

创伤模型建立

用20％乌拉坦腹腔注射麻醉，剪去背毛，用脱毛剂脱毛洗净擦干；用75％酒精消毒后在背部同一部位切除直径为2毫米的圆形全层皮肤。

1组为阳性对照组，涂覆重组人表皮生长因子凝胶，每隔24小时一次，每次约0.1g，外用纱布包裹胶布固定。

2组为单组份对照组涂覆实施例9所述TP508凝胶，每隔24小时一次，每次约0.1g，外用纱布包裹胶布固定。

3组为单组份对照组涂覆实施例10所述安基奥101凝胶，每隔24小时一次，每次约0.1g，外用纱布包裹胶布固定。

4组为给药组涂覆实施例2所述复方制剂，每隔24小时一次，每次约0.05g，外用纱布包裹胶布固定。

5组为空白对照组涂覆实施例11所述空白基质，每隔24小时一次，每次0.1g，外用纱布包裹胶布固定

分别于1d、3d、6d、9d随机处死10只小鼠，于距离创缘2毫米正常皮肤至创面取材，分别取样测定上皮化率后，切片光镜观察。

试验结果如下：

上皮化率测试结果如表1上皮化率结果

表1 上皮化率结果

	1d	3d	6d	9d
					1组(阳性对照)	0.11±0.03	0.78±0.05	0.90±0.07	1.0
2组(实施例9)	0.09±0.02	0.68±0.14	0.90±0.05	1.0
					3组(实施例10)	0.10±0.02	0.61±0.12	0.87±0.03	1.0
4组(实施例2)	0.12±0.03	0.76±0.07	0.92±0.12	1.0
					5组(空白对照)	0	0.44±0.11	0.81±0.28	0.96±0.07

各组与空白组P＜0.05

运用改良Burgi氏公式计算各天的q值

	1d	3d	6d	9d
					q值	1.26	1.18	1.02	1

1d、3d复方给药组相对于TP508对照组、安基奥101对照组有明显的协同增强作用，6d复方给药组、TP508对照组、安基奥101对照组基本完全愈合无法比较药物相互作用。复方给药组与阳性对照组药效相当。

光镜检查结果：

术后1d各组伤口均见渗出，少量炎症细胞浸润；1-4组痂皮完整明显，可见凝胶层覆盖位于创面上方；5组痂皮不完整可见凝胶层覆盖位于创面上方。

术后3d1-4组痂下肉芽组织生长、炎细胞浸润、微血管扩张延伸；5组仍有渗出，光镜下肉芽组织出现、有坏死现象、未见微血管扩张。

术后6d1-4组肉芽组织增厚、组织开始分化、炎症细胞减少、上皮组织覆盖伤口。3、4组可辨识出组织分化迹象。5组直接观察仍有渗出，光镜下炎细胞明显，上皮组织未完全覆盖。

术后9d1-7组肉芽组织生长完好，未见炎细胞，3、4组光镜下观察到毛囊生成。5组上皮组织生长，炎细胞明显，肉芽组织增殖加快。

术后21d直接观察各组，各给药组伤口均已愈合，开始长毛。3、4组绒毛茂盛，4组毛下瘢痕较1组明显。空白组伤口愈合但毛未长出。光镜下给药组创口已愈合，上皮完整，毛囊分布均匀；空白组上皮完整但未长平，仅伤口边缘有毛囊出现。

各实施例中

TP508由上海肽和生物科技有限公司生产

安基奥101由西安美联生物科技有限公司生产

卡波姆由广州汉普医药有限公司生产

羧甲基纤维素钠由日本旭化成公司生产。

Claims (8)

1.一种多肽组合物，含有凝血酶肽衍生物TP508和安基奥101，两者的重量比为1∶1～5。

2.根据权利要求1所述的多肽组合物，其特征在于，含有稳定剂和基质，各组分的重量比例为TP508∶安基奥101∶稳定剂∶基质＝1∶1～5∶100～500∶10000～100000。

3.根据权利要求2所述的多肽组合物，其特征在于，所述的稳定剂选自糖类、多元醇、氨基酸、大分子化合物中的一种或其组合。

4.根据权利要求3所述的多肽组合物，其特征在于，所述的糖类选自葡萄糖、果糖、半乳糖、核糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖、海藻糖、棉籽糖、菊糖、纤维素中的一种或其组合。

5.根据权利要求3所述的多肽组合物，其特征在于，所述的多元醇选自甘油、甘露醇、山梨醇、聚乙二醇、肌醇中的一种或其组合。

6.根据权利要求3所述的多肽组合物，其特征在于，所述的氨基酸选自甘氨酸、谷氨酸、精氨酸中的一种或其组合。

7.根据权利要求3所述的多肽组合物，其特征在于，所述的大分子化合物选自牛血清白蛋白、右旋糖苷、明胶中的一种或其组合。

8.根据权利要求2所述的多肽组合物，其特征在于，所述的基质选自卡波姆、羧甲基纤维素钠、纤维素中的一种或其组合。