CN105838805A - 一种用于印度紫檀分子鉴定的标准基因及分子鉴定方法 - Google Patents

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杨时宇
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李体初
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Abstract

印度紫檀（Pterocarpus indicus Willd），是蝶形花科紫檀属植物，其心材木质细腻、花纹美观，被用作高级家具。因为心材生长速度慢，形成心材需要的时间较长，市场供不应求，市场价格不断攀升。在巨大的利益驱使下，印度紫檀的假冒品泛滥，如何准确鉴定印度紫檀成为印度紫檀交易市场上的最大难题。本发明提供一种用于印度紫檀分子鉴定的标准基因及分子鉴定方法，应用该方法来鉴定印度紫檀，具有快速、准确、对样品损伤小等特点。

Description

一种用于印度紫檀分子鉴定的标准基因及分子鉴定方法
技术领域
本发明属于分子生物学领域，具体涉及植物分子鉴定的标准基因及分子鉴定方法。
背景技术
印度紫檀（Pterocarpus indicus Willd），是蝶形花科紫檀属植物，原产于热带亚洲。印度紫檀的木材属《红木》国家标准中的花梨类，其心材木质细腻、花纹美观，被用作高级家具、细木工、钢琴、电视机、收音机的外壳，旋切单板可用来作船舶和客车车厢内部装修，其产生的树瘤用来制做微薄木非常美丽，是制作高级家具和细木工的好材料。
因为心材生长速度慢，形成心材需要的时间较长，市场供不应求，其市场价格不断攀升。在巨大的利益驱使下，印度紫檀的假冒品泛滥，如何准确鉴定印度紫檀成为印度紫檀交易市场上的最大难题。现在大多采用形态观测来鉴定印度紫檀，其操作过程复杂，对样品损伤严重，而且随着造假技术的进步，这些方法的鉴定准确率也得不到保证。
发明内容
为解决上述问题，本发明提供一种用于印度紫檀分子鉴定的标准基因及分子鉴定方法，应用该方法来鉴定印度紫檀，具有快速、准确、对样品损伤小等特点，具体技术方案如下。
（1）获取用于印度紫檀分子鉴定的标准基因
根据DNA条形码技术原理，采用PCR扩增方法。测序结果通过手工校对、序列拼接，确保所得序列为标准序列。从采集的印度紫檀样品提取基因组DNA，参考植物条形码DNA片段选取原则，利用引物进行聚合酶链式反应(PCR)，扩增出样品对应的psbK-psbI基因，将扩增产物测序后分析比对，优选引物序列扩增印度紫檀样品的psbK-psbI基因序列片段作为标准基因，基因序列为序列表所示（529个碱基）。
（2）用psbK-psbI基因序列鉴定印度紫檀的方法，分为四个步骤：
第一步，取样并提取DNA；
第二步，利用PCR反应扩增psbK-psbI基因序列；
第三步，对扩增产物进行测序；
第四步，将得到的序列与权利要求1中的psbK-psbI基因序列进行同源性比对，当同源性碱基比例小于95%时，排除该物种为印度紫檀的可能，当同源性碱基比例大于或等于95%时，该样本是印度紫檀的概率是×100%。
具体实施方式
实验中，用3个不同来源的印度紫檀样本，用TIANGENE公司DNA提取试剂盒提取样本DNA。采用的正向引物：TTAGCCTTTGTTTGGCAAG，反向引物：AGAGTTTGAGAGTAAGCAT，PCR扩增条件为94℃预变性4min，接下来94℃变性45s，50℃退火45 s，72℃延伸1.5min，一共进行35个循环，最后72℃延伸10min。获得产物经测序后比对，样本间的同源性都保持在99%以上，获得序列与其他物种通过在线比对，其同源性都在52%以下。
序列表：
CTGCTGTAAGTTTTCGATGAGATCTTGAATTTGAATAAATGTCCTCAAAAAATTCGGAATTTATCTCGAAAACAAAAATTCGAACATTTTAACAATTTAAAAGATCAGATAAGTCTTACAGTGTGAATCCTCGATTCAAATATTGAAATTTTTTGATAGACAAAAAAAATCTGGACCATCTCATTATTCCCTCATTCTTACGTTTTTTCCACTGAGAAATCCTTCTATTTTTAGATTTGTATTAGATTTGAGTCCACCACCAGTACCTGGGTTGTGGATATGAAAGAAAATCTTTTGTAATACAAATATTGGTAATAGTATATTGGTATTGGTAATACTATATTGGTAATAGTAATAAAGGGCTCGGCTCTTCCTACAAAGAAATAAATTTCCGAATTTTTTTTCTATTTCCTTGAAATCACTTCATTTCTTAGAAACTTTGTATCAAAAGAAACATAATGTGTTATATAAGAGAATCTATTCTCTTTTCTCTTTCTCTGTCGTTTTTTTTTATCTTGGAGATTTTGTA。

Claims (2)

1.一种用于印度紫檀分子鉴定的标准基因，其特征在于其氨基酸序列为序列表中的序列。
2.一种用权利要求1中的标准基因鉴定印度紫檀的方法，分为四个步骤：
第一步，取样并提取DNA；
第二步，利用PCR反应扩增psbK-psbI基因序列，前后引物序列分别为：TTAGCCTTTGTTTGGCAAG、AGAGTTTGAGAGTAAGCAT；
第三步，对扩增产物进行测序；
第四步，将得到的序列与权利要求1中的psbK-psbI基因序列进行同源性比对，当同源性碱基比例小于95%时，排除该物种为印度紫檀的可能，当同源性碱基比例大于或等于95%时，该样本是印度紫檀的概率为×100%。
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Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103820568A (zh) * 2014-03-20 2014-05-28 中国科学院上海有机化学研究所 检测印度紫檀的专用探针、引物、基因芯片和方法
CN103820569A (zh) * 2014-03-20 2014-05-28 中国科学院上海有机化学研究所 检测安达曼紫檀的专用探针、引物、基因芯片和方法

Patent Citations (2)

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