CN105815601A - 一种青鳉鱼专用免疫增强剂及其制备方法与应用 - Google Patents

Abstract

本发明具体涉及一种青鳉鱼专用免疫增强剂及其制备方法和应用。所述的青鳉鱼专用免疫增强剂，由β‑葡聚糖、假丝酵母粉、山葡萄粉、麦芽、穿龙薯蓣提取物、山核桃外果皮提取物、银杏叶醇溶物及刺五加根粉按重量份数比制备而成。在水产养殖行业中，我国大部分近海海域和内陆水体抗生素浓度远高于国家控制标准。本发明中的青鳉鱼专用免疫增强剂主要采用天然植物成分，辅以β‑葡聚糖与假丝酵母，可以有效增强免疫效果，而且本增强剂无抗生素添加，具有良好的生态效应。

Description

一种青鳉鱼专用免疫增强剂及其制备方法与应用

技术领域

本发明属于鱼类饲料添加剂领域，具体涉及一种青鳉鱼专用免疫增强剂及其制备方法与应用。

背景技术

青鳉鱼隶属辐鳍鱼纲，颌针鱼目，异鳉科，青鳉亚科，青鳉属。英文名Medeka，拉丁学名Oryziaslatipes。近几十年来，因其繁殖力强、繁殖周期短、产卵量大、透明度高、胚胎发育速度快、胚胎发育同步以及对水质极为敏感等特点，已被广泛用于发育生物学与生物毒理学等领域，是研究脊椎动物生殖系统发育、遗传工程以及污染物致毒效应机理的优良模式物种。此外，随着我国科教事业的飞速发展，在中小学生物科普活动以及创新课堂中经常将青鳉鱼作为观察鱼类生长发育的理想材料。然而，目前我国境内的青鳉鱼数量正急剧减少，大部分地区的野生青鳉鱼几乎绝迹，利用青鳉作为实验材料受到很大限制，目前提高青鳉鱼在实验室人工养殖条件下的成活率已成为当务之急，这对我国青鳉物种的保存与繁衍将会产生十分重要的意义。因此，提高青鳉鱼机体的免疫力，有效抵抗病原微生物的入侵，降低其发病率与死亡率，成为目前青鳉鱼实验室养殖亟待解决的重要课题。

在鱼类的养殖过程中，投喂饲料是最为关键的环节，饲料的组分与配比能够决定鱼体的免疫力。因此，在鱼类饲料中添加免疫增强剂，以通过投喂饲料的方式来增强机体免疫力，而且可以取代抗生素来发挥抗病毒、抑菌、杀菌、抗寄生虫的功效，这一举措对青鳉鱼的人工养殖意义重大。免疫增强剂是指单独使用或与抗原同时使用均可提高动物免疫反应的物质，增强动物抵抗外界病毒、细菌、真菌、寄生虫等病原体感染的能力，也可减轻外界环境中的有毒有害物质产生的胁迫作用。大多数针对鱼类的免疫增强剂需要随饲料投入水中后才能被鱼类获取并利用，因此其使用形式受限，作用机理更为复杂，给其在实际生产中的应用带来诸多不便，加之动物免疫增强剂一般都经过粉碎、提纯、增效后才能使用，投喂量也有严格的限制，所以其加工工艺、投喂方案以及组分配伍等问题需要严谨的设计与科学的实施。同一免疫增强剂对不同鱼类的免疫效果大相径庭。目前在养殖业中对于能够产生可观经济效益的养殖鱼类不断有开发出专用免疫增强剂的报道，但目前尚未有适用于青鳉鱼人工养殖的免疫增强剂。

发明内容

针对现有青鳉鱼人工养殖技术中存在的问题，本发明目的在于提供一种青鳉鱼专用的免疫增强剂，该免疫增强剂可有效增强青鳉鱼的免疫力与抗病力。

本发明通过下述技术方案加以实现：

青鳉鱼专用免疫增强剂，由如下主要原料按重量份数比制备而成：β-葡聚糖1.0-1.5份、假丝酵母粉20-25份、山葡萄粉10-15份、麦芽10-15份、穿龙薯蓣多糖提取物8-12份、山核桃外果皮提取物8-12份、银杏叶醇溶物8-12份、刺五加根粉5-10份。

作为优选，所述的青鳉鱼专用免疫增强剂，由如下主要原料按重量份数比制备而成：β-葡聚糖1.2-1.5份、假丝酵母粉22-25份、山葡萄粉12-15份、麦芽12-15份、穿龙薯蓣提取物8-10份、山核桃外果皮提取物8-10份、银杏叶醇溶物10-12份、刺五加根粉8-10份。

一种所述的青鳉鱼专用免疫增强剂的制备方法，包括下述步骤：第一步，按上述重量份数比，将经过干燥处理的山葡萄粉、山核桃外果皮提取物及刺五加根粉混合，粉碎后过100-150目筛制得粉料；第二步，按上述重量份数比，麦芽与银杏叶醇溶物混合浸泡8-10小时后粉碎制成浆料；第三步，将第一步得到的粉料和第二步得到的浆料混合并按上述重量份数比添加β-葡聚糖、穿龙薯蓣多糖提取物和假丝酵母粉，充分混匀后得到免疫增强剂成品。

一种所述的青鳉鱼专用免疫增强剂在制备饲料中的应用，所述的青鳉鱼专用免疫增强剂在饲料中的添加量为1-3wt％。

试验研究表明，本发明中的免疫增强剂中的各组分在单一饲喂时，均不能明显增强青鳉鱼的免疫力与抗病力，个别组分显示有效但并无显著效果。而本发明各组分质量份数经过科学的配比混合而成，营养物质均衡，各组分中的有效成分协调配伍，产生协同作用而增进疗效，在提高青鳉鱼成活率方面效果显著，避免了使用抗生素而产生的抗药性以及药物残留等问题。

在水产养殖行业中，我国大部分近海海域和内陆水体抗生素浓度远高于国家控制标准，在水产品的生产、流通环节，兽药禁用及残留限量标准没有得到严格执行，养殖户肆无忌惮的撒药，抗生素等药物也越下越猛。本发明的青鳉鱼专用免疫增强剂主要采用天然植物成分，辅以β-葡聚糖与假丝酵母，可以有效增强免疫效果，而且本增强剂无抗生素添加，具有很好的生态效应。

具体实施方案

下面通过具体实施例，对本发明的技术方案进行详细说明。在本发明中，所有的份数与百分比均为重量单位，全部养殖设施与原料等均是本行业常用的。

实施例1：第一步，将经过干燥处理的山葡萄粉12份、山核桃外果皮提取物8份及刺五加根粉10份混合，粉碎后过100-150目筛制得粉料；第二步，麦芽12份与银杏叶醇溶物12份混合浸泡8-10小时后粉碎制成浆料；第三步，将第一步得到的粉料和第二步得到的浆料混合并添加β-葡聚糖1.5份、穿龙薯蓣多糖提取物8份和假丝酵母粉22份，充分混匀后得到免疫增强剂成品。产品也可通过鼓风干燥制成约1mm的免疫增强剂颗粒投喂。

实施例2：

一种青鳉鱼专用免疫增强剂，具体制备步骤见实施例1，其配比为：β-葡聚糖1.1份、假丝酵母粉21份、山葡萄粉12份、麦芽15份、穿龙薯蓣提取物8份、山核桃外果皮8份、银杏叶醇溶物12份、刺五加根粉8份。

实施例3：

一种青鳉鱼专用免疫增强剂，具体制备步骤见实施例1，其配比为：β-葡聚糖1.5份、假丝酵母粉25份、山葡萄粉15份、麦芽10份、穿龙薯蓣提取物10份、山核桃外果皮8份、银杏叶醇溶物10份、刺五加根粉5份。

实施例4：

一种青鳉鱼专用免疫增强剂，具体制备步骤见实施例1，其配比为：β-葡聚糖1.5份、假丝酵母粉20份、山葡萄粉15份、麦芽10份、穿龙薯蓣提取物12份、山核桃外果皮8份、银杏叶醇溶物12份、刺五加根粉8份。

实施例5：

一种青鳉鱼专用免疫增强剂，具体制备步骤见实施例1，其配比为：β-葡聚糖1.0份、假丝酵母粉22份、山葡萄粉12份、麦芽15份、穿龙薯蓣提取物8份、山核桃外果皮8份、银杏叶醇溶物10份、刺五加根粉7份。

实施例6：

一种青鳉鱼专用免疫增强剂，具体制备步骤见实施例1，其配比为：β-葡聚糖1.2份、假丝酵母粉23份、山葡萄粉10份、麦芽13份、穿龙薯蓣提取物9份、山核桃外果皮10份、银杏叶醇溶物8份、刺五加根粉10份。

人工养殖试验：

选取体重为1-1.5g范围内，体长约1.5cm的青鳉鱼鱼苗，本试验分为6个组，其中1组为空白对照组，2至5组使用本发明实施例1-5制得的青鳉鱼专用免疫增强剂对青鳉鱼鱼苗进行饲养，免疫增强剂的用量为混合饲料总质量的2％，对照组未饲喂免疫增强剂。每组3个平行，每个平行30尾鱼苗，养殖时间为3个月，饲料系数及成活率情况见表1。在试验期3个月内，各组养殖环境条件相同，均采用常规市售的混合饲料饲喂，每日换水1次。

3个月后对各组青鳉鱼进行称重，试验组(实施例第2至第6组)与对照组(第1组)相比，青鳉鱼的重量增加显著，平均成活率高出约20％。上述试验结果表明，本发明的免疫增强剂可有效提青鳉鱼的免疫力和抗病力，提高了成活率。

β-葡聚糖来源于新鲜燕麦，它属于多糖类的一种，为自由基清除剂，能够激活巨噬细胞与噬中性粒细胞，清除由辐射造成细胞分解碎片，使巨噬细胞辨别并破坏变异细胞，协助受损组织如淋巴组织细胞加速恢复产生白细胞介素(IL-1)。发明人已有的研究发现，β-葡聚糖具有促使包括抗生素，抗真菌与抗寄生药在内的其他药物更好地发挥效用的功能。但单独对青鳉鱼投喂β-葡聚糖的免疫效果不明显。

假丝酵母是含有丰富的蛋白质、维生素和酶等生理活性物质的饲料酵母。将假丝酵母经过培养与干燥制成的无发酵能力、细胞呈死亡状态的粉末。其平均蛋白质含量35％左右，还含有微量的B族维生素、氨基酸等物质。假丝酵母粉能够促进动物的生长发育，在养殖业应用可缩短饲养期，改良肉质和提高瘦肉率，并能增强幼禽畜的抗病、抗逆能力。

山葡萄(拉丁学名VitisamurensisRupr.)是葡萄科葡萄属的植物，是中国东北地区的特有植物。对山葡萄功能研究显示其具有抗氧化、降低血液粘稠度、抑制血小板凝结与血管舒张、保持血液畅通等作用，特别是其中含有大量的原花青素与白黎卢醇，具有较强的抗氧化与防止真菌入侵的作用。本发明所述的山葡萄粉为东北山葡萄粉，东北山葡萄浆果干呈现深紫色，非淡黄色，将其果实晒干后研磨制成粉后使用。

麦芽含α-及β-淀粉酶、转化糖酶、催化酶、维生素B、蛋白质、磷脂、麦芽糖以及葡萄糖等成分。麦芽除发挥上述活性物质的功能外，在本组分中也起到赋形剂的作用，使制成的免疫增强剂具有良好的成形性。本发明将其烘干研磨制成粉后使用。

穿龙薯蓣(拉丁学名DioscoreanipponicaMakino)别名穿山龙，地下部分的根状茎是传统入药部分，其主要有效成分为薯蓣皂苷，此外还含有甾醇、尿囊素、树脂、葡萄糖、鼠李糖及淀粉等。穿龙薯蓣主要药用成分为薯蓣皂苷及水解后产生的薯蓣皂苷元，是甾体激素类药物的基础材料，是国内各大药厂开发新药、特药和中成药的主要原料之一。但对薯蓣多糖的研究报道较少，本发明则关注穿龙薯蓣多糖的应用，本发明中将干燥根及地上部位均作为组分。穿龙薯蓣根茎去土、去栓皮和须根系，晾晒；穿龙薯蓣地上植株阴干备用。多糖提取物提取工艺可按常规提取工艺提取，本发明优选为：地上及地下部分两者合并→中药材粉碎机粉碎(转数：12000转/分；细度：150-200目)→水浴浸提两次→过滤合并提取液→浓缩→95％乙醇后静置12h以上→弃上清液取沉淀→无水乙醇洗涤→乙醚洗涤→真空干燥→粗多糖。在本发明的组分中，最初以穿龙薯蓣地下干燥根作为组分之一进行试验，后来由地上及地下部分两者合并代替单独地下根后，即本发明的免疫增强剂组分能显著提高青鳉鱼的免疫力和抗病力，主动防病效果较好，这是由于黄茂提取物中薯蓣多糖的含量达到了有效量，和其它组分配伍后产生协同效果而使药效提升。

山核桃(拉丁学名CaryacathayensisSarg.)又名核桃楸、胡桃楸。山核桃果皮中含有多种酚类物质，其中黄酮化合物具有重要的生物学功能，如抑制油脂氧化、清除活性氧自由基及一定的抑菌作用，对鱼类的生长提供适量的营养元素和激发主动免疫机能。本发明中将山核桃果皮提取物作为组分。提取工艺可按常规提取工艺提取，本发明优选为：外果皮粉碎→用95％乙醇在70℃水浴中浸提2h→减压浓缩→大孔树脂色谱柱分离→40％乙醇洗脱→收集→浓缩并干燥→富含黄酮的粗提物。

银杏(拉丁名GinkgobilobaL.)为我国特有珍稀树种。银杏中主要活性成分为黄酮甙类和银杏内酯类化合物。银杏叶中含有30余种黄酮化合物、酚类、萜类、氨基酸及微量元素等成分,具有降低血清胆固醇、增加冠状动脉流量、改善脑循环、松弛支气管以及抑菌等作用。银杏叶提取物可按常规提取工艺提取，本发明优选为：银杏叶挑选与清洗→60℃下鼓风干燥至恒重→高速中药粉碎机下粉碎(转数：12000转/分；细度：100-150目)→60％乙醇提取→一次过滤→65％乙醇二次提取→二次过滤→将两次滤液合并→0.08Pa真空度下进行真空浓缩(温度范围：55～65℃)→银杏叶醇溶物。

刺五加(拉丁学名Eleutherococcusenticosus)，具有调节免疫系统、恢复非正常低血压、改善循环系统、纠正糖脂代谢紊乱、增强网状内皮系统的吞噬能力与腹腔巨噬细胞的吞噬能力等功效。刺五加多糖及其甙B(紫丁香甙)、D和E(两种构型的紫丁香树脂酚甙)均能明显提高细胞产生诱生干扰素的能力，本发明中选取刺五加的根部研磨制成粉后使用。

以上实施例仅用于描述本发明的技术方案，而并非将本技术方案设定具体限制。针对本领域的技术人员，对上述实施例的技术方案进行修改，或者对其中的组分进行等同替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明所要求保护的技术方案本质与范围。

表1

Claims (6)

1.一种青鳉鱼专用免疫增强剂，其特征在于由如下主要原料按重量份数比制备而成：β-葡聚糖1.0-1.5份、假丝酵母粉20-25份、山葡萄粉10-15份、麦芽10-15份、穿龙薯蓣多糖提取物8-12份、山核桃外果皮提取物8-12份、银杏叶醇溶物8-12份、刺五加根粉5-10份。

2.根据权利要求1所述的一种青鳉鱼专用免疫增强剂，其特征在于由如下主要原料按重量份数比制备而成：β-葡聚糖1.2-1.5份、假丝酵母粉22-25份、山葡萄粉12-15份、麦芽12-15份、穿龙薯蓣提取物8-10份、山核桃外果皮提取物8-10份、银杏叶醇溶物10-12份、刺五加根粉8-10份。

3.根据权利要求1或2所述的一种青鳉鱼专用免疫增强剂，其特征在于所述的山葡萄粉为东北山葡萄粉，东北山葡萄浆果干呈现深紫色，非淡黄色。

4.根据权利要求1或2所述的一种青鳉鱼专用免疫增强剂，其特征在于所述的穿龙薯蓣提取物为穿龙薯蓣根茎及地上植株的共同提取物。

5.根据权利要求1或2所述的一种青鳉鱼专用免疫增强剂的制备方法，其特征在于包括下述步骤：第一步，按上述重量份数比，将经过干燥处理的山葡萄粉、山核桃外果皮提取物及刺五加根粉混合，粉碎后过100-150目筛制得粉料；第二步，按上述重量份数比，麦芽与银杏叶醇溶物混合浸泡8-10小时后粉碎制成浆料；第三步，将第一步得到的粉料和第二步得到的浆料混合并按上述重量份数比添加β-葡聚糖、穿龙薯蓣多糖提取物和假丝酵母粉，充分混匀后得到免疫增强剂成品。

6.根据权利要求1或2所述的一种青鳉鱼专用免疫增强剂在制备饲料中的应用，所述的青鳉鱼专用免疫增强剂在饲料中的添加量为1-3wt%。