CN105796618A

CN105796618A - 一种浓缩三七总皂苷提取液的方法

Info

Publication number: CN105796618A
Application number: CN201410838008.5A
Authority: CN
Inventors: 李钊文; 黄宇声; 兰星; 徐卓; 郑志远
Original assignee: Guangxi Wuzhou Pharmaceutical Group Co Ltd
Current assignee: Guangxi Wuzhou Pharmaceutical Group Co Ltd
Priority date: 2014-12-30
Filing date: 2014-12-30
Publication date: 2016-07-27

Abstract

本发明涉及一种浓缩三七总皂苷提取液的方法，该方法主要是通过弱极性微球硅胶在三七总皂苷提取液浓缩过程的使用，在得到高浓缩液的同时，降低三七总皂苷在常见浓缩过程中的水解率。

Description

一种浓缩三七总皂苷提取液的方法

技术领域

本发明涉及医药发明领域，具体涉及一种浓缩三七总皂苷提取液的方法。

背景技术

三七总皂苷来源于三七主根药材，常用于活血祛瘀，通脉活络，具有抑制血小板聚集和增加心脑血流量的功效，对心脑血管疾病具有预防与治疗作用。其主要成分为三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Re、Rb1与Rd，三七总皂苷纯化过程包括加热提取、浓缩、层析及再次浓缩，由于上述成分在水中易水解，温度过高、PH值偏离太大均会增加其水解降解率，水解形成皂苷元及其他杂质而降低药用效果。

三七总皂苷的纯化工艺均以非极性或弱极性大孔吸附树脂进行吸附-洗脱以达到纯化的目的。大孔树脂的吸附量高，但洗脱能力差，使用大量溶剂洗脱后，所得洗脱液的三七总皂苷浓度低，而采用常规的浓缩方法，如真空干燥、喷雾干燥等均存在能耗大、周期长等缺点，且在干燥过程中需加热，易增加三七总皂苷水解率。

也有专利公开了膜浓缩技术，如专利申请号201010265373.3(公开号为CN101947250A)，发明名称为三七总皂苷提取纯化节能新工艺，该发明公开了使用膜浓缩装置包括纳滤装置及其附属预处理微滤装置进行三七总皂苷洗脱液预浓缩，浓缩至体积为洗脱液10％体积时，直接送入蒸发器蒸发干燥得三七总皂苷精提物。膜浓缩率均达到90％，膜浓缩的同时部分盐类及重金属可透过膜，有一定的除盐及除重金属的作用。该技术实际上使用的是纳滤技术。纳滤是一种介于反渗透和超滤之间的压力驱动膜分离过程，纳滤膜的孔径范围在几个纳米左右。由于纳滤的孔径大于反渗透孔径，因此所需压力较小，同时也造成透过物质较多，三七总皂苷损失较大。

聚苯乙烯类弱极性吸附树脂，适合吸附各类具有一定疏水性的中药成分。但由于该类树脂球形、粒径高度不够均一，孔径结构不太佳，存在分辨率不高、选择性不够好的缺点。利用该类树脂洗脱三七总皂苷时需要较多的洗脱液，浓缩效果不佳。

针对现有三七总皂苷浓缩处理中存在的问题，发明人经过大量的研究，最终提出了本发明。

发明内容

本发明的目的是提供一种浓缩三七总皂苷提取液的方法。

本发明所述浓缩三七总皂苷提取液的方法，其特征在于包括以下步骤：

1)取三七总皂苷提取液液通入径高比为1:3-8、装载弱极性微球硅胶的层析柱中，三七总皂苷提取液的量为柱体积的8－30倍，吸附过程用HPLC法检测层析柱流出液，吸附饱和后，用浓度为70-90％的乙醇洗脱，乙醇用量为层析柱体积的0.5-3倍，洗脱液分段收集；

2)检测分段洗脱液中三七总皂苷含量，三七总皂苷完全洗脱后，合并检测结果含有三七总皂苷的洗脱液，即得三七总皂苷浓缩液。

优选地，所述步骤1)弱极性微球硅胶为引入甲苯基的丙烯酸酯-二乙烯苯弱极性微球。

优选地，所述弱极性微球硅胶层析柱的径高比为1:5。

优选地，所述弱极性微球硅胶每毫升的吸附量为0.8-1.4mg三七总皂苷。

优选地，所述步骤1)洗脱用的乙醇浓度为85％。

优选地，所述步骤1)三七总皂苷提取液的量为柱体积的10倍。

优选地，所述步骤1)乙醇用量为层析柱体积的1倍。

三七总皂苷：PANAXNOTOGINSENOSIDES，分子式C47H80O17，来源于三七提取的活性有效成份。三七总皂苷提取液是从三七中通过水提或乙醇提取所得溶液。

微球硅胶是一种高活性吸附材料，属非晶态物质，主要成分是二氧化硅，其化学分子式为mSiO₂·nH₂O。其本身没有毒性，化学性质稳定，不燃烧。不溶于水和任何溶剂，除强碱、氢氟酸外不与任何物质发生反应。主要用做干燥剂、防潮珠、除味剂和各种吸附剂，以及提纯煤油、吸附芳烃等，在三聚氰胺、苯酐、顺丁烯二酸酐、顺丁橡胶、丙烯腈等重要工业品生产中用作催化剂及催化剂载体。

微球硅胶因为球形、孔径高度均一，具有高选择性、高分辨率、高回收率、洗脱集中、重现性好等优点。本发明所述的弱极性微球硅胶，特别是引入甲苯基的丙烯酸酯-二乙烯苯弱极性微球硅胶，具有高吸附量、高洗脱性能，通过该硅胶高吸附-高洗脱特性，将低浓度均匀分散体系的溶液系统完全吸附，用极少量洗脱液即可把三七总皂苷洗脱完全，残留量低，洗脱效率极高。

本发明提供的一种浓缩三七总皂苷提取液的方法具有以下优点：

1、本发明所述弱极性微球硅胶浓缩法无需加热，无需冷藏，具有能耗低、操作简便、主成分损耗少、收集容易的特点，极大程度减少了三七总皂苷的水解，提高提取回收率。

2、吸附量大，每毫升弱极性微球硅胶可吸附含0.8-1.4mg三七总皂苷的溶液。

3、易洗脱三七总皂苷。吸附柱体积10倍的溶液后，用1倍量的乙醇即可全部洗脱，即可浓缩为原溶液的10％，所使用洗脱液体积少，后期回收处理工艺简单。

具体实施方式

下面通过实施例进一步说明本发明。应该理解的是，本发明的实施例是用于说明本发明而不是对本发明的限制。根据本发明的实质对本发明进行的简单改进都属于本发明要求保护的范围。除非另有说明，本发明中的乙醇量的百分数是体积百分数，v/v表示溶液的体积比，BV为柱体积的倍数，如1BV为1倍柱体积。

实施例1：三七总皂苷提取液的制备方法

取三七药材1000g，加入三七重量5倍的60％乙醇60℃加热回流提取2次，第一次3小时，第二次2小时，合并提取液，过滤，滤液浓缩至相对密度为1.20，浓缩液脱脂后，所得浸膏过D101大孔吸附树脂吸附—洗脱，洗脱液经氧化铝、活性炭吸附脱色后浓缩，得三七总皂苷提取液。

实施例2：三七总皂苷提取液的制备方法

取三七粉碎成粗粉1000g，加80％乙醇8000ml提取7小时，收集提取液，过滤，取滤液回收乙醇至无醇味，加水制成每1ml含0.5g生药的溶液，过大孔树脂柱及氧化铝吸附，用65％的乙醇洗脱，洗脱液浓缩，得三七总皂苷提取液。

实施例3：三七总皂苷提取液的制备方法

取三七，制成20目粗粉，用乙醇提取2次，每次加10倍70％的乙醇，每次提取3小时，合并提取液，滤过，取滤液回收乙醇至无醇味，过8倍三七重量的大孔吸附树脂柱吸附，收集洗脱液，吸附脱色，回收溶剂，浓缩，得三七总皂苷提取液。

实施例4：三七总皂苷提取液的制备方法

取三七，粉碎成粗粉，加水提取3次，每次加10倍三七重量的水，每次提取3小时，合并提取液，滤过，滤液，过10倍三七重量的大孔吸附树脂柱吸附，收集洗脱液，吸附脱色，回收溶剂，浓缩，得三七总皂苷提取液。

实施例5：

把引入甲苯基的丙烯酸酯-二乙烯苯弱极性微球硅胶装载到层析柱中，径高比为1:5，通入柱体积10BV的三七总皂提取液，吸附过程用HPLC法检测层析柱流出液中三七总皂苷含量，吸附饱和后，用85％乙醇洗脱，乙醇用量为层析柱体积的2倍量，洗脱液分段取检测三七总皂苷含量，乙醇量达到1倍层析柱体积时，开始检测到三七总皂苷，至1.8倍体积时，三七总皂苷基本洗脱完全，收集含三七总皂苷的洗脱液，即得三七总皂苷浓缩液，三七总皂苷浓缩液体积仅为上柱体积的8％，回收液最终回收率达99.9％。浓缩液真空干燥，得三七总皂苷干燥品。

实施例6：

引入甲苯基的丙烯酸酯-二乙烯苯弱极性微球硅胶装载到层析柱中，径高比为1:5，通入柱体积10倍的三七总皂提取液，吸附过程用HPLC法检测层析柱流出液中三七总皂苷含量，吸附饱和后，用90％乙醇洗脱，乙醇用量为层析柱体积的1倍量，洗脱液分段取检测三七总皂苷含量，乙醇量达到0.4倍层析柱体积时，开始检测到三七总皂苷，至0.9倍体积时，三七总皂苷基本洗脱完全，收集含三七总皂苷的洗脱液，即得三七总皂苷浓缩液，三七总皂苷浓缩液体积仅为上柱体积的5％，回收液最终回收率达99.5％。浓缩液真空干燥，得三七总皂苷干燥品。

实施例7：

引入甲苯基的丙烯酸酯-二乙烯苯弱极性微球硅胶装载到层析柱中，径高比为1:8，通入柱体积30倍的三七总皂提取液，吸附过程用HPLC法检测层析柱流出液中三七总皂苷含量，吸附饱和后，用70％乙醇洗脱，乙醇用量为层析柱体积的3倍量，洗脱液分段取检测三七总皂苷含量，乙醇量达到1.6倍层析柱体积时，开始检测到三七总皂苷，至2.6倍体积时，三七总皂苷基本洗脱完全，收集含三七总皂苷的洗脱液，即得三七总皂苷浓缩液，三七总皂苷浓缩液体积仅为上柱体积的10％，回收液最终回收率达99.9％。浓缩液真空干燥，得三七总皂苷干燥品。

实验例1：浓缩效果

三七总皂苷检测方法：照高效液相色谱法(附录ⅥD)测定。

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以流动相A：乙腈，流动相B：水，按表1进行梯度洗脱；检测波长为203nm。理论板数按人参皂苷Rg₁峰计算应不低于6000，人参皂苷Rg₁与Re的分离度应不低于1.5。

表1：梯度洗脱

时间(分钟)	流动相A(％)	流动相B(％)
			0-25	19	81
25-35	19→20	81→80
			35-70	20→35	80→65
70-75	35→45	65→55
			75-76	45→90	55→10
76-80	90	10
			80-81	90→19	10→81
81-90	19	81

对照品溶液(或对照提取物溶液)的制备：分别取减压干燥12小时的三七皂苷R₁对照品、人参皂苷Rg₁对照品、人参皂苷Re对照品和人参皂苷Rb₁对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含三七皂苷R₁0.3mg、人参皂苷Rg₁1.2mg、人参皂苷Re0.2mg、人参皂苷Rb₁1.0mg、人参皂苷Rd0.1mg的混合溶液，摇匀，即得对照品溶液；或取减压干燥12小时的三七总皂苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含2.5mg的溶液，摇匀，即得对照提取物溶液。

供试品溶液的制备：取装量差异项下的本品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含4mg的溶液，即得。

测定法：分别精密吸取对照品溶液(或对照提取物溶液)与供试品溶液各5-10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

对实施例5的操作过程进行分析，通入三七总皂苷提取液的量达到层析柱的10倍体积时，层析柱出口流出液仍未检出三七总皂苷，表明吸附未达最饱和状态。通入乙醇洗脱时，乙醇量达到1倍层析柱体积时，开始流出三七总皂苷，至1.8倍体积时，三七总皂苷基本洗脱完全，三七总皂苷浓缩液体积仅为上柱体积的8％，回收液最终回收率达99.9％。具体结果见表2。

表2：具体检测数据

实验例结果显示：本发明弱极性微球硅胶对三七总皂苷的吸附量大，且极易于洗脱，能够显著地达到浓缩效果。

虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之做出一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims

1.一种浓缩三七总皂苷提取液的方法，其特征在于包括以下步骤：

1)取三七总皂苷提取液通入径高比为1:3-8、装载弱极性微球硅胶的层析柱中，三七总皂苷提取液的量为柱体积的8－30倍，吸附过程用HPLC法检测层析柱流出液，吸附饱和后，用浓度为70-90％的乙醇洗脱，乙醇用量为层析柱体积的0.5-3倍，洗脱液分段收集；

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤1)弱极性微球硅胶为引入甲苯基的丙烯酸酯-二乙烯苯弱极性微球。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述弱极性微球硅胶层析柱的径高比为1:5。

4.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述弱极性微球硅胶每毫升的吸附量为0.8-1.4mg三七总皂苷。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤1)洗脱用的乙醇浓度为85％。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤1)三七总皂苷提取液的量为柱体积的10倍。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤1)乙醇用量为层析柱体积的1倍。