CN102441016B

CN102441016B - 一种三七总皂苷提取液的浓缩方法

Info

Publication number: CN102441016B
Application number: CN201110414948.8A
Authority: CN
Inventors: 赵学伟; 黄宇声; 张栩颜; 刘冠萍; 李钊文; 陈小杰
Original assignee: Guangxi Wuzhou Pharmaceutical Group Co Ltd
Current assignee: Guangxi Wuzhou Pharmaceutical Group Co Ltd
Priority date: 2011-12-13
Filing date: 2011-12-13
Publication date: 2014-05-14
Anticipated expiration: 2031-12-13
Also published as: CN102441016A

Abstract

本发明涉及一种三七总皂苷提取液的浓缩方法，该方法主要是通过反渗透法对三七总皂苷提取液进行浓缩。本发明提供的浓缩方法，浓缩效果好、损耗小。

Description

一种三七总皂苷提取液的浓缩方法

技术领域

本发明涉及医药发明领域，具体涉及一种三七总皂苷提取液的浓缩方法。

背景技术

三七总皂苷大多使用乙醇提取方式获得，其后的工序中，回收乙醇处理大多采用热回流回收乙醇法。

使用热回流方式可以将三七总皂苷提取液浓缩至无醇味，最后干燥成粉末，但这种浓缩方式使三七总皂苷醇液一直处理高温状态，浓缩时间较长，造成三七总皂苷水解率较高，且大生产能耗较大。

专利申请号201010265373.3(公开号为CN 101947250A)，发明名称为三七总皂苷提取纯化节能新工艺，该发明公开了使用膜浓缩装置包括纳滤装置及其附属预处理微滤装置进行三七总皂苷洗脱液预浓缩，浓缩至体积为洗脱液10％体积时，直接送入蒸发器蒸发干燥得三七总皂苷精提物。膜浓缩率均达到90％，膜浓缩的同时部分盐类及重金属可透过膜，有一定的除盐及除重金属的作用。

上述专利使用了膜浓缩技术，实际上使用的是纳滤技术。纳滤是一种介于反渗透和超滤之间的压力驱动膜分离过程，纳滤膜的孔径范围在几个纳米左右。由于纳滤的孔径大于反渗透孔径，因此所需压力较小，同时也造成透过物质较多，三七总皂苷损失较大。针对现有三七总皂苷浓缩处理中存在的问题，发明人经过大量的研究，最终提出了本发明。

发明内容

本发明的目的是提供一种三七总皂苷的浓缩方法。

本发明使用反渗透法浓缩三七总皂苷提取液。

本发明提供的三七总皂苷提取液的浓缩方法，通过反渗透法对三七总皂苷提取液进行浓缩。

所述反渗透法使用的反渗透膜为聚酰胺复合膜，反渗透压为0-4.0MPa，膜通量为5-20L/(m²*h)，pH适用范围1-10，温度为0-50℃。

具体的，本发明提供的三七总皂苷提取液的浓缩方法包括以下步骤：对三七提取液用反渗透法进行浓缩，设置膜通量为0.4-20L/(m²*h)，反渗透压为0.1-4.0MPa，控制反渗透膜滤过温度为0-50℃，运行至截流部分体积为总体积的1-50％时，取出三七总皂苷浓缩液，真空浓缩干燥成固体，即得三七总皂苷。

本发明还提供了含有反渗透法浓缩三七总皂苷提取液的提取方法，该方法包括以下步骤：三七用乙醇提取，提取液浓缩后，过柱，用水、乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，脱色，然后对三七洗脱液用反渗透法进行浓缩，设置膜通量为0.4-20L/(m²*h)，反渗透压为0.1-4.0MPa，控制反渗透膜滤过温度为0-50℃，运行至截流部分的体积为总体积的1-50％，取出三七总皂苷浓缩液，真空浓缩干燥成固体，即得三七总皂苷。

进一步具体的，该提取方法包括以下步骤：

1)三七粉碎成粗粉，用2-20倍50-95％乙醇加热提取2-5次，每次1-5小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇并减压浓缩，制成每1ml含生药约0.1-1g；

2)加浓缩液体积0.5-1.5％的氯化钠，搅匀，静置12-36小时，滤过；

3)滤液经脱脂处理后，以流速为0.5-15BV/h过大孔吸附树脂柱，用水洗涤，水洗液弃去，依次用40-80％的不同浓度的乙醇(40％、50％、60％、70％、80％)梯度洗脱，收集洗脱液；

4)洗脱液加压通过药材量的10-150％的中性氧化铝柱，收集流出液，得到三七总皂苷提取液；

5)将三七总皂苷提取液转经反渗透装置，设置反渗透膜的通量为0.4-20L/(m²*h)，反渗透压为0.1-4.0MPa，控制反渗透膜滤过温度为0-50℃，运行至截流部分体积为总体积的1-50％，取出三七总皂苷浓缩液，浓缩液流入收集罐，清液另贮，返回大孔吸附树脂柱入口用作乙醇洗脱液；

6)浓缩液用真空浓缩干燥成固体(温度40-80℃，真空度0.05-0.1Mpa)，即得三七总皂苷。

上述方法中：

所述三七为三七主根和/或三七芦头。

所述BV为柱体积。

所述大孔吸附树脂的类型可选用D101、D201、AB-8或NKA-9等常用的类型。

本发明提供的三七总皂苷浓缩方法具有以下优点：

1、浓缩效果好

反渗透又称逆渗透，一种以压力差为推动力，从溶液中分离出溶剂的膜分离操作。因为它和自然渗透的方向相反，故称反渗透。根据各种物料的不同渗透压，就可以使大于渗透压的反渗透法达到分离、提取、纯化和浓缩的目的。本发明将该方法用于三七总皂苷提取液的浓缩方面，与真空浓缩及纳滤浓缩方法相比，本发明提供的三七总皂苷浓缩方法浓缩率高，三七总皂苷水解率大为降低。

2、与纳滤对比

纳滤与反渗透截流后测定清液内三七总皂苷的浓度，纳滤的损耗率为1.5％，反渗透的损耗率不高于0.5％。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

BV为柱体积的倍数，如1BV为1倍柱体积。

以下实施例中大孔吸附树脂的类型可选用D101、D201、AB-8或NKA-9等常用的类型。

实施例1：三七总皂苷的提取及浓缩

1、制备三七提取液：

三七粉碎成粗粉，用乙醇提取5次，每次用2倍量50％乙醇，每次提取1小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇并减压浓缩，制成每1ml含生药约0.1g。加浓缩液体积0.5％的氯化钠，搅匀，静置12小时，滤过。滤液经脱脂处理后，以流速为0.5BV/h过大孔吸附树脂柱，用水洗涤，水洗液弃去，依次用40％、50％、60％、70％、80％乙醇液梯度洗脱，收集洗脱液，当出口洗脱液醇浓度与入口醇浓度相当时，停止收集洗脱液。洗脱液加压通过药材量的10％的中性氧化铝柱(柱内压5kg/cm²，流速为0.5BV/h)，收集流出液，得三七总皂苷提取液；

2、浓缩方法：使用聚酰胺复合膜滤过截流三七总皂苷提取液，设置反渗透膜的通量为20L/(m²*h)，反渗透压力为4.0Mpa，控制反渗透膜滤过温度为30±2℃，运行至截流部分体积为总体积的20％，取出三七总皂苷浓缩液，真空浓缩干燥成固体(温度60℃，真空度0.1Mpa)，即得三七总皂苷。

3、样品检测方法：

照高效液相色谱法(附录VID)测定。

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以流动相A：乙腈，流动相B：水，按下表(表1)进行梯度洗脱；检测波长为203nm。理论板数按人参皂苷Rg₁峰计算应不低于6000，人参皂苷Rg₁与Re的分离度应不低于1.5。

表1：梯度洗脱

时间(分钟)	流动相A(％)	流动相B(％)
			0-25	19	81
25-35	19→20	81→80
			35-70	20→35	80→65
70-75	35→45	65→55
			75-76	45→90	55→10
76-80	90	10
			80-81	90→19	10→81

81-90

19

81

对照品溶液(或对照提取物溶液)的制备：分别取减压干燥12小时的三七皂苷R₁对照品、人参皂苷Rg₁对照品、人参皂苷Re对照品和人参皂苷Rb₁对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含三七皂苷R₁0.3mg、人参皂苷Rg₁1.2mg、人参皂苷Re0.2mg、人参皂苷Rb₁1.0mg、人参皂苷Rd 0.1mg的混合溶液，摇匀，即得对照品溶液；或取减压干燥12小时的三七总皂苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含2.5mg的溶液，摇匀，即得对照提取物溶液。

供试品溶液的制备：取装量差异项下的本品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含4mg的溶液，即得。

测定法：分别精密吸取对照品溶液(或对照提取物溶液)与供试品溶液各5-10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品按干燥品计算，三七皂苷R₁为10.6％，人参皂苷Rg₁为44.0％，人参皂苷Re为5.8％，人参皂苷Rb₁为32.5％，人参皂苷Rd为2.0％。三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁、人参皂苷Re、人参皂苷Rb₁、人参皂苷Rd总量为94.9％。

4、浓缩损耗率：三七总皂苷收得率按三七总皂苷总含量计。

取样检测，与浓缩前的三七总皂苷提取液作对比，三七总皂苷损耗率为0.5％。

实施例2：三七总皂苷的提取及浓缩

1、三七粉碎成粗粉，用乙醇提取3次，每次用20倍量95％乙醇，每次提取5小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇并减压浓缩，制成每1ml含生药约1g。加浓缩液体积1.5％的氯化钠，搅匀，静置36小时，滤过。滤液经脱脂处理后，以流速为15BV/h过大孔吸附树脂柱，用水洗涤，水洗液弃去，依次用40％、50％、60％、70％、80％乙醇液梯度洗脱，收集洗脱液。洗脱液加压通过药材量的150％的中性氧化铝柱(柱内压100kg/cm²，流速为15BV/h)，收集流出液，得到三七提取液。

2、浓缩方法：使用聚酰胺复合膜滤过截流三七总皂苷提取液，设置反渗透膜的通量为0.4L/(m²*h)，反渗透压力为0.1Mpa，控制反渗透膜滤过温度为2±2℃，运行至截流部分体积为总体积的1％，取出三七总皂苷浓缩液，真空浓缩干燥成固体(温度50℃，真空度0.05Mpa)，即得三七总皂苷。

2、含量检测：方法同实施例1，结果为：三七皂苷R₁为10.7％、人参皂苷Rg₁为44.1％、人参皂苷Re为5.9％、人参皂苷Rb₁为32.5％、人参皂苷Rd为2.2％，以上总量为95.4％。

3、浓缩损耗率：三七总皂苷收得率按三七总皂苷总含量计。

取样检测，与浓缩前的三七总皂苷提取液作对比，三七总皂苷损耗率为0.2％。

实施例3：三七总皂苷的提取及浓缩

1、三七粉碎成粗粉，用乙醇提取4次，每次用8倍量60％乙醇，每次提取4小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇并减压浓缩，制成每1ml含生药约0.2g。加浓缩液体积1.0％的氯化钠，搅匀，静置24小时，滤过。滤液经脱脂处理后，以流速为10BV/h过大孔吸附树脂柱，用水洗涤，水洗液弃去，依次用40％、50％、60％、70％、80％乙醇液醇梯度洗脱，收集洗脱液。洗脱液加压通过药材量的100％的中性氧化铝柱(柱内压30kg/cm²，流速为8BV/h)，收集流出液，得到三七提取液。

2、浓缩方法：使用聚酰胺复合膜滤过截流三七总皂苷提取液，设置反渗透膜的通量为6L/(m²*h)，反渗透压力为1Mpa，控制反渗透膜滤过温度为48±2℃，运行至截流部分体积为总体积的50％，取出三七总皂苷浓缩液，真空浓缩干燥成固体(温度80℃，真空度0.06Mpa)，即得三七总皂苷。

3、含量检测：方法同实施例1，结果为：三七皂苷R₁为10.5％、人参皂苷Rg₁为44.2％、人参皂苷Re为5.8％、人参皂苷Rb₁为32.5％、人参皂苷Rd为2.3％，以上总量为95.3％。

4、浓缩损耗率：三七总皂苷收得率按三七总皂苷总含量计。

取样检测，与浓缩前的三七总皂苷提取液作对比，三七总皂苷损耗率为0.4％。

实施例4：三七总皂苷的提取及浓缩

1、三七粉碎成粗粉，用乙醇提取2次，每次用10倍量70％乙醇，每次提取3小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇并减压浓缩，制成每1ml含生药约0.6g。加浓缩液体积0.8％的氯化钠，搅匀，静置20小时，滤过。滤液经脱脂处理后，以流速为6BV/h过大孔吸附树脂柱，用水洗涤，水洗液弃去，依次用40％、50％、60％、70％、80％乙醇液梯度洗脱，收集洗脱液。洗脱液加压通过药材量的80％的中性氧化铝柱(柱内压20kg/cm²，流速为10BV/h)，收集流出液，得到三七提取液。

2、浓缩方法：使用聚酰胺复合膜滤过截流三七总皂苷提取液，设置反渗透膜的通量为9L/(m²*h)，反渗透压力为2Mpa，控制反渗透膜滤过温度为20±2℃，运行至截流部分体积为总体积的40％，取出三七总皂苷浓缩液，真空浓缩干燥成固体(温度40℃，真空度0.08Mpa)，即得三七总皂苷。

3、含量检测：方法同实施例1，结果为：三七皂苷R₁为10.2％、人参皂苷Rg₁为43.2％、人参皂苷Re为6.1％、人参皂苷Rb₁为31.5％、人参皂苷Rd为2.0％，以上总量为93.0％。

4、浓缩损耗率：三七总皂苷收得率按三七总皂苷总含量计。

实施例5：三七总皂苷的提取及浓缩

1、三七粉碎成粗粉，用乙醇提取3次，每次用15倍量80％乙醇，每次提取2小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇并减压浓缩，制成每1ml含生药约0.9g。加浓缩液体积1.4％的氯化钠，搅匀，静置22小时，滤过。滤液经脱脂处理后，以流速为12BV/h过大孔吸附树脂柱，用水洗涤，水洗液弃去，依次用40％、50％、60％、70％、80％乙醇液梯度洗脱，收集洗脱液。洗脱液加压通过药材量的120％的中性氧化铝柱(柱内压90kg/cm²，流速为2BV/h)，收集流出液，得到三七提取液。

2、浓缩方法：使用聚酰胺复合膜滤过截流三七总皂苷提取液，设置反渗透膜的通量为15L/(m²*h)，反渗透压力为3Mpa，控制反渗透膜滤过温度为10±2℃，运行至截流部分体积为总体积的30％，取出三七总皂苷浓缩液，真空浓缩干燥成固体(温度70℃，真空度0.07Mpa)，即得三七总皂苷。

3、含量检测：方法同实施例1，结果为：三七皂苷R₁为10.4％、人参皂苷Rg₁为44.4％、人参皂苷Re为5.7％、人参皂苷Rb₁为32.9％、人参皂苷Rd为2.4％，以上总量为95.8％。

4、浓缩损耗率：三七总皂苷收得率按三七总皂苷总含量计。

对比例1：三七总皂苷的提取及浓缩方法(采用传统的真空浓缩方式)

1、三七总皂苷提取液：使用实施例1制备的三七总皂苷提取液。

2、浓缩方法：三七总皂苷提取液，直接使用真空浓缩干燥法，设置温度为60℃，真空度为0.1Mpa，干燥至成固体，即得三七总皂苷。

3、样品含量检测：方法同实施例1，结果为：三七皂苷R₁为9.6％、人参皂苷Rg₁为40.7％、人参皂苷Re为5.4％、人参皂苷Rb₁为29.3％、人参皂苷Rd为1.9％，以上总量为86.9％。

4、浓缩损耗率：三七总皂苷收得率按三七总皂苷总含量计。

取样检测，与实施例1浓缩前的三七总皂苷提取液作对比，三七总皂苷损耗率为8.2％。

对比例2：三七总皂苷的提取及浓缩方法(参考公开文献《三七总皂苷提取纯化节能新工艺》专利实施例)

2、浓缩方法：三七总皂苷提取液，脱色，微滤后进入纳滤膜浓缩机组，当浓缩至分离出的乙醇达到洗脱液量90％后停止浓缩，剩余10％浓缩液，真空浓缩干燥成固体(温度60℃，真空度0.1Mpa)，即得三七总皂苷。

3、含量检测：方法同实施例1，结果为：三七皂苷R₁为10.1％、人参皂苷Rg₁为42.1％、人参皂苷Re为5.6％、人参皂苷Rb₁为30.4％、人参皂苷Rd为2.0％，以上总量为90.4％。

4、浓缩损耗率：三七总皂苷收得率按三七总皂苷总含量计。

取样检测，与实施例1浓缩的三七总皂苷提取液作对比，三七总皂苷损耗率为4.8％。

实验例1：浓缩效果比较

对实施例1-5、以及对比例1-2的三七总皂苷浓缩效果及含量进行比较，检测方法：滤液取样后，按标准进行各成分测定，并通过与进样原液对比得出损失率结果见下表：

表：三七总皂苷损耗率及含量比较

损耗率

三七皂苷R₁

人参皂苷Rg₁

人参皂苷Re

人参皂苷Rb₁

人参皂苷Rd

三七总皂苷总含量

实施例1

0.5％

10.6％

44.0％

5.8％

32.5％

2.0％

94.9％

实施例2

0.2％

10.7％

44.1％

5.9％

32.5％

2.2％

95.4％

实施例3

0.4％

10.5％

44.2％

5.8％

32.5％

2.3％

95.3％

实施例4

0.5％

10.2％

43.2％

6.1％

31.5％

2.0％

93.0％

实施例5

0.3％

10.4％

44.4％

5.7％

32.9％

2.4％

95.8％

对比例1

8.2％

9.6％

40.7％

5.4％

29.3％

1.9％

86.9％

对比例2

4.8％

10.1％

42.1％

5.6％

30.4％

2.0％

90.2％

上表结果显示：本发明实施例1-5三七总皂苷损耗率远远低于对比例1、对比例2。

虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之做出一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims

1.一种三七总皂苷的提取方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

1）三七用2-20倍50-95%乙醇加热提取2-5次，每次1-5小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇并减压浓缩，制成每1ml含生药约0.1-1g；

2）加浓缩液体积0.5-1.5%的氯化钠，搅匀，静置12-36小时，滤过；

3）滤液经脱脂处理后，以流速为0.5-15BV/h过大孔吸附树脂柱，用水洗涤，水洗液弃去，依次用40-80%乙醇液梯度洗脱，收集洗脱液；

4）洗脱液加压通过药材量的10-150%的中性氧化铝柱，收集流出液，得到三七总皂苷提取液；

5）将三七总皂苷的提取液转经反渗透装置，反渗透压为0.1-4.0MPa，控制反渗透膜滤过温度为0-50℃，运行至截流部分体积为总体积的1-50%，取出三七总皂苷浓缩液，浓缩液流入收集罐，清液另贮，返回大孔吸附树脂柱入口用作乙醇洗脱液；

6）浓缩液用真空浓缩干燥成固体，真空干燥温度为40-80℃，真空度为0.05-0.1Mpa。

2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述三七为三七主根和/或三七芦头。

3.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述大孔吸附树脂的类型选用D101、D201、AB-8或NKA-9。