CN105779370A - 一种鱼类败血病病原维氏气单胞菌减毒活疫苗及其应用 - Google Patents
一种鱼类败血病病原维氏气单胞菌减毒活疫苗及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN105779370A CN105779370A CN201610007988.3A CN201610007988A CN105779370A CN 105779370 A CN105779370 A CN 105779370A CN 201610007988 A CN201610007988 A CN 201610007988A CN 105779370 A CN105779370 A CN 105779370A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- aeromonas veronii
- snp
- veronii
- sequence
- live vaccine
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/0208—Specific bacteria not otherwise provided for
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/74—Vectors or expression systems specially adapted for prokaryotic hosts other than E. coli, e.g. Lactobacillus, Micromonospora
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/52—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells
- A61K2039/522—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells avirulent or attenuated
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明公开了一种鱼类败血病病原维氏气单胞菌减毒活疫苗及其应用,其将野生型维氏气单胞菌通过基因改造导入一种特异性肽适体SNP‑L1,使其毒力减弱,得到维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)减毒株L1,利用该减毒株L1制备的活疫苗通过腹腔注射斑马鱼,后期免疫保护率可达65%,可有效预防鱼类细菌性败血病的发生,具有一定的应用价值和减毒活疫苗的开发前景。
Description
技术领域
本发明涉及一种鱼类细菌性败血病病原维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)减毒活疫苗及其应用。
背景技术
自改革开放以来,我国水产养殖业发展迅速,取得了瞩目的成就,2014年全年水产品产量6450万吨,比上年增长4.5%。但是人们过于追求经济效益,不断扩大养殖规模,养殖密度增大,以及一些不科学地管理养殖模式,导致水产养殖细菌病害频发,严重限制水产养殖业的快速稳定发展。
其中由维氏气单胞菌引起的细菌性病害在水产养殖业中很常见。它是一种革兰氏阴性杆状细菌,一般从临床、自然环境和食品中分离获得,能够侵染多种水产养殖动物,如虾,鲫鱼、中华绒螯蟹、团头鲂、泥鳅、锦鲤等,严重危害我国水产养殖业的发展。同时对人类健康安全也造成威胁,它能够引起人类伤口感染,腹泻及免疫功能低下患者的败血症。
目前,水产养殖业中主要采用药物防控细菌病害,如大量使用广谱抗生素等化学药物进行防治。然而,抗生素在长期使用过程中容易导致病原菌耐药性增强、药物残留、生态环境污染以及危害人类健康等诸多问题,很难实现我国水产养殖业的可持续健康发展。相对于化学药物,疫苗可以安全有效预防鱼类传染性疾病的发生,是当前鱼类细菌性疾病防控的最有效方法。但相对于人用和兽用疫苗,鱼用疫苗很少,尤其关于维氏气单胞菌减毒活疫苗目前在国内外尚未见报道。
发明内容
鉴于现有技术的不足,本发明的目的在于提供一种鱼类细菌性败血病病原维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)减毒活疫苗及其应用。
为了实现本发明的目的,发明人经过大量试验研究筛选特异性肽适体,并将特异性肽适体通过细菌三亲接合方式导入到野生型毒株维氏气单胞菌中,从而获得了一种维氏气单胞菌减毒活疫苗。具体地,本发明的技术方案概况如下:
一种维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)减毒株L1,保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会微生物中心(保藏地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所;邮编100101),保藏日期为2015年12月23日,保藏编号为CGMCCNo.11922。
本发明所述的维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)减毒株L1,它是将能表达特异性肽适体SNP-L1的pRE112质粒导入野生型维氏气单胞菌后而得,所述的特异性肽适体SNP-L1的氨基酸序列如序列表中序列1所示。
本发明还提供了一种特异性肽适体SNP-L1,其氨基酸序列如序列表中序列1所示。
另外,本发明还提供了一种编码上述特异性肽适体SNP-L1的核苷酸序列。优选地,编码上述特异性肽适体SNP-L1的核苷酸序列为序列表中序列2所示。
进一步地,本发明还提供了一种含有上述特异性肽适体SNP-L1的重组质粒pRE112-SNP-L1;以及提供了一种含有该重组质粒pRE112-SNP-L1的宿主。
最后,本发明还提供了上述维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)减毒株L1在制备预防鱼类免受维氏气单胞菌侵染方面的减毒活疫苗中的应用。
与现有技术相比,本发明对野生型毒株维氏气单胞菌导入含有特异性肽适体SNP-L1的质粒pRE112-SNP-L1后制备维氏气单胞菌减毒株L1,其相对于野生毒株具有明显的低生长能力和低毒性,具有免疫保护能力,对鱼种的免疫保护率可达65%,可有效保护鱼种免受维氏气单胞菌野生毒株的侵染。所获得的维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)减毒株L1添加佐剂被制备成疫苗并免疫鱼类后,对鱼类具有较好的免疫保护效果,能够有效防控野生型毒株维氏气单胞菌的感染。
附图说明
图1为PCR扩增SNP-L1片段的电泳检测图,其中M为DSTM 5000Marker;1号为SNP-L1片段。
图2为PCR扩增pk18mobSacB质粒上的npt II的启动子区及pTRG-SNP-L1质粒上的SNP-L1片段的电泳检测图,其中M为DSTM 5000Marker;1号为npt II片段;2号为SNP-L1片段。
图3为融合片段电泳图,其中M为DSTM 5000Marker;1号为npt II启动子片段和SNP-L1的融合片段。
图4为筛选pRE112-SNP-L1阳性克隆子电泳图,其中2、4、8、10号为阳性克隆子。
图5为PCR验证是否细菌三亲结合成功的电泳检测图,其中M为DSTM 5000Marker;1-2号为成功导入pRE112-SNP-L1的维氏气单胞菌;3为空白对照。
图6为用野生型毒株维氏气单胞菌和减毒株维氏气单胞菌A.veronii L1的PCR检测,其中a-b图分别为取生理盐水组的斑马鱼麻醉致死后,以及用野生型毒株维氏气单胞菌和减毒株维氏气单胞菌A.veronii L1腹腔注射后死亡的斑马鱼,取腹腔组织液在LB加氨苄青霉素固体平板上划线;d图为对在a-b中在LB加氨苄青霉素固体平板上培养的菌落进行菌落PCR验证,其中M为DSTM 5000Marker;1-2号为注射野生型毒株维氏气单胞菌后死亡的斑马鱼组织液;3号为空白对照;4-5为注射减毒株维氏气单胞菌A.veronii L1后死亡的斑马鱼组织液;6号为空白对照。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明,但不用来限制本发明的范围。在不背离本发明精神和实质的情况下,对本发明方法、步骤或条件所作的修改或替换,均属于本发明的范围。若未特别指明,实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段;若未特别指明,实施例中所用试剂均为市售。
实施例1维氏气单胞菌减毒活疫苗的制备
1、构建pTRG-SNP-L1重组质粒
1)PCR扩增SNP-L1片段
PCR反应体系(50μl):1×
SNP F1:5’-CGCGGATCCATGGGTTACCCATACGACGTTC-3’
SNP R1:5’-CCGCTCGAGTTATCAGCGTTGTCTTCAGAC-3’
PCR反应条件:
PCR运行结束后用1%琼脂糖凝胶电泳检测,凝胶成像系统拍照(见图1)。
2)PCR产物回收
利用上海捷瑞生物工程有限公司的PCR产物纯化试剂盒(离心柱型)进行PCR产物纯化回收,用30μl ddH2O洗脱。
3)SNP-L1PCR纯化产物双酶切
其双酶切体系如下:25μl
掌型离心机上瞬间离心10sec混匀,37℃酶切5h。然后过柱回收纯化,用30μlddH2O洗脱。
4)“靶”空载体pTRG双酶切
其双酶切体系如下:25μl
掌型离心机上瞬间离心10sec混匀,37℃酶切5h。然后取1U CIP 37℃处理30min。然后过柱回收纯化,用30μl ddH2O洗脱。
5)连接反应
按照载体:基因片段摩尔比为1:3的比例,使用T4DNA ligase进行4℃过夜酶连,酶连反应体系如下:10μl
掌型离心机上瞬间离心10sec混匀,4℃冰箱过夜酶连。可以暂时放在-20℃保存。
6)制备E.coli XL1-Blue MRF’感受态细胞及热激转化
1)采用化学方法0.1M CaCl2制备E.coli XL1-Blue MRF’感受态细胞。验证好感受态细胞质量之后,取10μl连接产物加到100μl感受态细胞中,轻柔吹打混匀,冰上静置30min,不时轻柔旋转;
2)42℃水浴热激90sec,立即放置冰上冷却2min;
3)加入900μl 37℃预热的LB液体培养基,混匀,37℃150rpm振荡培养1h;
4)取200μl菌液用玻璃棒涂布在LB+Cam+IPTG+X-Gal平板上,37℃倒置培养12-16h。
7)筛选阳性克隆子及测序
1)挑取上述平板中白色单菌落,点缀到新鲜的LB+Cam平板上,37℃倒置培养;
2)菌落PCR验证阳性克隆子,采用SmpB上下游引物对上述单菌落进行菌落PCR验证;
3)菌落PCR验证成功之后,摇菌扩增质粒,提取质粒送往上海生工测序。测序结果见SEQ ID NO.1。其中无移码突变,有正确的起始密码子和终止密码子,成功构建“靶”重组质粒pTRG-SNP-L1。
2、构建pRE112-SNP-L1重组质粒
1)PCR扩增npt II片段和SNP-L1片段
PCR反应体系(50μl):1×
npt II F:5’-CCCCCGGGAGCGCAAAGAGAAAGCAGGTAG-3’
npt II R:5’-AACGTCGTATGGGTAACCCATCCATCTTGTTCAATCATGCG-3’
PCR反应体系(50μl):1×
SNP F2:5’-CGCATGATTGAACAAGATGGATGGGTTACCCATACGACGTT-3’
SNP R1:5’-CCGCTCGAGTTATCAGCGTTGTCTTCAGAC-3’
PCR反应条件:
PCR运行结束后用1%琼脂糖凝胶电泳检测,凝胶成像系统拍照(见图2)。
2)PCR产物回收
利用上海捷瑞生物工程有限公司的PCR产物纯化试剂盒(离心柱型)进行PCR产物纯化回收,用30μl ddH2O洗脱。
3)重叠PCR对npt II片段和SNP-L1片段进行融合
1)将第2步所得两份PCR产物进行混合使其互为模板及引物,加入dNTP及Pfu酶进行PCR 15个循环即可;
2)取上述步骤中的PCR产物做为模板,加入引物npt II F及SNP R1进行PCR扩增融合好的基因片段npt II+SNP-L1,见图3。
3)利用上海捷瑞生物工程有限公司的PCR产物纯化试剂盒(离心柱型)进行PCR产物纯化回收,用30μl ddH2O洗脱。
4)酶切
1)对融合PCR产物进行双酶切
其双酶切体系如下:25μl
掌型离心机上瞬间离心10sec混匀,37℃酶切5h。然后过柱回收纯化,用30μlddH2O洗脱。
2)自杀质粒pRE112双酶切
其双酶切体系如下:25μl
掌型离心机上瞬间离心10sec混匀,37℃酶切5h。然后取1U CIP 37℃处理30min。然后过柱回收纯化,用30μl ddH2O洗脱。
5)连接反应
按照载体:基因片段摩尔比为1:3的比例,使用T4DNA ligase进行4℃过夜酶连,酶连反应体系如下:10μl
掌型离心机上瞬间离心10sec混匀,4℃冰箱过夜酶连。可以暂时放在-20℃保存。
6)制备E.coli WM3064感受态细胞及热激转化
1)采用化学方法0.1M CaCl2制备E.coli WM3064感受态细胞。验证好感受态细胞质量之后,取10μl连接产物加到100μl感受态细胞中,轻柔吹打混匀,冰上静置30min,不时轻柔旋转;
2)42℃水浴热激90sec,立即放置冰上冷却2min;
3)加入900μl 37℃预热的LB液体培养基,混匀,37℃150rpm振荡培养1h;
4)取200μl菌液用玻璃棒涂布在LB+Cam+IPTG+X-Gal+Dap固体平板上,37℃倒置培养12-16h。
7)筛选阳性克隆子及测序
1)挑取上述平板中白色单菌落,点缀到新鲜的LB+Cam+Dap平板上,37℃倒置培养;
2)菌落PCR验证阳性克隆子,采用npt II F和SNP R1引物对上述单菌落进行菌落PCR验证,1%琼脂糖凝胶电泳检测,见图4。
3)挑取2、4、8、10号,摇菌扩增质粒,提取质粒送往上海生工测序。成功构建好含npt II启动子的pRE112-SNP-L1质粒。
3、三亲接合法将pRE112-SNP-L1导入维氏气单胞菌
1)从新鲜培养的供体菌E.coli WM 3064(pRE112-SNP-L1)的平板上挑取单菌落接种到含Dap和氯霉素的LB液体培养基中,37℃振荡培养过夜。同时从新鲜培养的受体菌维氏气单胞菌平板上挑取单菌落接种到含氨苄青霉素的LB液体培养基中,30℃培养过夜。
2)将两种菌液按供体菌:受体菌体积比4:1的比例混合,将细菌重悬液点种于LB加Dap固体培养基平板上,进行接合反应。
3)然后用LB加氨苄青霉素和氯霉素的筛选固体平板进行筛选。
4)挑取单菌落,进行菌落PCR验证:用维氏气单胞菌特异性引物ArfA验证是否为维氏气单胞菌;
ArfA F:5’-ATGGCCAATATTCGGGTCAA-3’
ArfA R:5’-TTAGCAGCAGACGCGGATCA-3’
同时用pRE112载体上的氯霉素基因引物进行验证是否为pRE112-SNP-L1质粒。1%琼脂糖凝胶电泳检测,凝胶成像系统拍照(见图5)。将获得的维氏气单胞菌减毒株命名为维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)减毒株L1,并保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会微生物中心(保藏地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所;邮编100101),保藏日期为2015年12月23日,保藏编号为CGMCCNo.11922。
实施例2以斑马鱼为对象的致病感染实验
1)从-70℃取出甘油保存的野生型毒株维氏气单胞菌,在添加有氨苄青霉素的LB固体培养基上进行划线活化,置30℃培养箱倒置培养16h;
2)挑取维氏气单胞菌单菌落,接种到添加有氨苄青霉素的LB液体培养基中,30℃过夜振荡培养,测OD600,然后在新鲜的LB培养液中以初始OD600为0.05,30℃振荡培养至OD600达到0.6-0.8,室温5000rpm离心15min,弃上清,收集菌体,用PBS重悬洗涤一遍,然后室温5000rpm离心15min,弃上清,收集菌体,再用PBS重悬,然后进行十倍稀释,然后每个梯度取10μl对已经在实验室驯养7d的斑马鱼进行腹腔注射攻毒,每个梯度注射10尾,观察注射后一周内斑马鱼的死亡情况,统计数量;对照组为0.86%的生理盐水。最后用Reed-Muench方法分析结果显示腹腔注射野生型维氏气单胞菌对斑马鱼的半致死浓度为2.25×106CFU/ml。
实施例3导入SNP-L1的维氏气单胞菌A.ver L1半致死浓度LD50的测定:
1)从-70℃取出甘油保存的导入SNP-L1的维氏气单胞菌A.veronii L1,在添加有氨苄青霉素的LB固体平板上进行划线活化,置30℃培养箱倒置培养16h;
2)挑取A.veronii L1单菌落,接种到添加有氨苄青霉素的LB液体培养基中,30℃过夜振荡培养,测OD600,然后在新鲜的LB培养液中以初始OD600为0.0530℃振荡培养至OD600达到0.6-0.8,室温5000rpm离心15min,弃上清,收集菌体,用PBS重悬洗涤一遍,然后室温5000rpm离心15min,弃上清,收集菌体,再用PBS重悬,十倍稀释,每个梯度取10μl对已经在实验室驯养7d的斑马鱼进行腹腔注射攻毒,每个梯度注射10尾,观察注射后一周内斑马鱼的死亡情况,统计数量;用Reed-Muench方法分析结果显示腹腔注射A.veronii L1对斑马鱼的半致死浓度为1.12×107CFU/ml。与野生型维氏气单胞菌毒株具有显著性差异。
实施例4野生型毒株和减毒株检测实验:
1)将注射维氏气单胞菌A.veronii和维氏气单胞菌减毒株A.veronii L1后死亡的斑马鱼立即取出,同时也取出注射生理盐水的斑马鱼,麻醉处理。
2)分开用75%乙醇浸泡5min,在超净台中用无菌剪刀剪开斑马鱼腹部,用无菌接种环挑取腹腔液体,在添加有氨苄青霉素的LB固体培养基上划线分离,置30℃培养箱倒置培养16h,观察两组是否都有菌落长出来,以及观察长出来的菌落形态;同时用维氏气单胞菌的特异性引物ArfA和肽适体SNP-L1引物进行菌落PCR验证(见图6),结果表明均为目的菌株。
实施例5斑马鱼的免疫保护率分析
1)从-70℃取出甘油保存的维氏气单胞菌减毒株A.veronii L1,在添加有氨苄青霉素的LB固体培养基上,进行划线活化,置30℃培养箱倒置培养16h;
2)挑取维氏气单胞菌减毒株A.veronii L1单菌落,接种到添加有氨苄青霉素的LB液体培养基中,30℃过夜振荡培养,测OD600,然后在新鲜的LB培养液中以初始OD600为0.05,30℃振荡培养至OD600达到0.6-0.8,室温5000rpm离心15min,弃上清,收集菌体,用PBS重悬洗涤一遍,然后室温5000rpm离心15min,弃上清,收集菌体,再用PBS重悬,以104CFU/尾对已经在实验室驯养7d的斑马鱼进行腹腔注射,注射20尾,对照组为同剂量的0.86%的生理盐水。
3)免疫周期14d之前几天,从-70℃取出甘油保存的野生型维氏气单胞菌,在LB加氨苄青霉素的固体培养基上,进行划线活化,置30℃培养箱倒置培养16h;
4)挑取维氏气单胞菌单菌落,接种到添加有氨苄青霉素的LB液体培养基中,30℃过夜振荡培养,测OD600,然后在新鲜的LB培养液中以初始OD600为0.05,30℃振荡培养至OD600达到0.6-0.8,室温5000rpm离心15min,弃上清,收集菌体,用PBS重悬洗涤一遍,然后室温5000rpm离心15min,弃上清,收集菌体,再用PBS重悬,以2.25×106CFU/尾对已经免疫14d的斑马鱼进行腹腔注射攻毒,对照组为未免疫组及0.86%生理盐水组,也用野生型毒株维氏气单胞菌进行攻毒,每组注射10尾,观察注射后一周内斑马鱼的死亡情况,统计数量,使用公式相对免疫保护率(RBS)=(对照组死亡率-免疫组死亡率)/对照组死亡率。计算维氏气单胞菌减毒株A.veronii L1对斑马鱼的免疫保护率。统计结果表明相对免疫保护率(RBS)=(对照组死亡率-免疫组死亡率)/对照组死亡率=(100%-35%)/100%=65%(见表1)。显示出较好的免疫保护效应。
表1减毒株对斑马鱼免疫保护实验结果
Claims (8)
1.一种维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)减毒株L1,其保藏编号为:CGMCCNo.11922。
2.根据权利要求1所述的维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)减毒株L1,其特征在于,它是将能表达特异性肽适体SNP-L1的pRE112质粒导入野生型维氏气单胞菌后而得,所述的特异性肽适体SNP-L1的氨基酸序列如序列表中序列1所示。
3.一种特异性肽适体SNP-L1,其氨基酸序列如序列表中序列1所示。
4.一种编码权利要求3所述特异性肽适体SNP-L1的核苷酸序列。
5.根据权利要求4所述特异性肽适体SNP-L1的核苷酸序列,其特征在于,该核苷酸序列为序列表中序列2所示。
6.一种含有权利要求4所述特异性肽适体SNP-L1的重组质粒pRE112-SNP-L1。
7.一种含有权利要求6所述重组质粒pRE112-SNP-L1的宿主。
8.权利要求1所述的维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)减毒株L1在制备预防鱼类免受维氏气单胞菌侵染方面的减毒活疫苗中的应用。
Priority Applications (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201610007988.3A CN105779370B (zh) | 2016-01-07 | 2016-01-07 | 一种用于生产鱼类败血病病原维氏气单胞菌减毒活疫苗的特异性肽适体 |
CN201610368276.4A CN105950526B (zh) | 2016-01-07 | 2016-01-07 | 一种鱼类败血病病原维氏气单胞菌减毒活疫苗及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201610007988.3A CN105779370B (zh) | 2016-01-07 | 2016-01-07 | 一种用于生产鱼类败血病病原维氏气单胞菌减毒活疫苗的特异性肽适体 |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201610368276.4A Division CN105950526B (zh) | 2016-01-07 | 2016-01-07 | 一种鱼类败血病病原维氏气单胞菌减毒活疫苗及其应用 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN105779370A true CN105779370A (zh) | 2016-07-20 |
CN105779370B CN105779370B (zh) | 2019-06-25 |
Family
ID=56390422
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201610007988.3A Expired - Fee Related CN105779370B (zh) | 2016-01-07 | 2016-01-07 | 一种用于生产鱼类败血病病原维氏气单胞菌减毒活疫苗的特异性肽适体 |
CN201610368276.4A Expired - Fee Related CN105950526B (zh) | 2016-01-07 | 2016-01-07 | 一种鱼类败血病病原维氏气单胞菌减毒活疫苗及其应用 |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201610368276.4A Expired - Fee Related CN105950526B (zh) | 2016-01-07 | 2016-01-07 | 一种鱼类败血病病原维氏气单胞菌减毒活疫苗及其应用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (2) | CN105779370B (zh) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN117106613A (zh) * | 2023-04-10 | 2023-11-24 | 中国水产科学研究院珠江水产研究所 | 一种鱼类维氏气单胞菌弱毒疫苗株及其应用 |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102643821A (zh) * | 2012-01-05 | 2012-08-22 | 集美大学 | 嗜水气单胞菌适体及其筛选方法与应用 |
CN103468698A (zh) * | 2012-01-05 | 2013-12-25 | 集美大学 | 嗜水气单胞菌适体及其筛选方法与应用 |
CN104531885A (zh) * | 2015-01-14 | 2015-04-22 | 天津市水产技术推广站 | 维氏气单胞菌快速检测引物、试剂盒及应用 |
CN104784683A (zh) * | 2015-03-16 | 2015-07-22 | 西南大学 | 一种维氏气单胞菌渔用注射疫苗的制备及使用方法 |
Family Cites Families (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103468700B (zh) * | 2012-01-05 | 2017-07-04 | 集美大学 | 嗜水气单胞菌适体及其筛选方法与应用 |
-
2016
- 2016-01-07 CN CN201610007988.3A patent/CN105779370B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2016-01-07 CN CN201610368276.4A patent/CN105950526B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102643821A (zh) * | 2012-01-05 | 2012-08-22 | 集美大学 | 嗜水气单胞菌适体及其筛选方法与应用 |
CN103468698A (zh) * | 2012-01-05 | 2013-12-25 | 集美大学 | 嗜水气单胞菌适体及其筛选方法与应用 |
CN104531885A (zh) * | 2015-01-14 | 2015-04-22 | 天津市水产技术推广站 | 维氏气单胞菌快速检测引物、试剂盒及应用 |
CN104784683A (zh) * | 2015-03-16 | 2015-07-22 | 西南大学 | 一种维氏气单胞菌渔用注射疫苗的制备及使用方法 |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
DE CHASSEY B等: "An antiproliferative genetic screening identifies a peptide aptamer that targets calcineurin and up-regulates its activity", 《MOL CELL PROTEOMICS》 * |
MASCINI M等: "Nucleic acid and peptide aptamers: fundamentals and bioanalytical aspects", 《ANGEW CHEM INT ED ENGL.》 * |
刘栓栓 等: "SmpB蛋白结构与功能研究进展", 《生命的化学》 * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN117106613A (zh) * | 2023-04-10 | 2023-11-24 | 中国水产科学研究院珠江水产研究所 | 一种鱼类维氏气单胞菌弱毒疫苗株及其应用 |
CN117106613B (zh) * | 2023-04-10 | 2024-01-30 | 中国水产科学研究院珠江水产研究所 | 一种鱼类维氏气单胞菌弱毒疫苗株及其应用 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN105779370B (zh) | 2019-06-25 |
CN105950526B (zh) | 2019-04-02 |
CN105950526A (zh) | 2016-09-21 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN104784686B (zh) | Tgev、pedv二联活疫苗及其制备方法 | |
CN101381695B (zh) | 鸭疫里默氏杆菌血清1型基因工程减毒菌株及其构建方法 | |
CN104498441B (zh) | 鸭甲肝病毒iii型弱毒株及由其制备的活疫苗和应用 | |
CN107858317A (zh) | 一种防控水产养殖动物气单胞菌出血病的减毒活疫苗 | |
CN104560851A (zh) | 杀鲑气单胞菌活疫苗制剂和冻干疫苗制品的制备方法及应用 | |
CN112063551A (zh) | 杀香鱼假单胞菌六型分泌系统缺失突变株及其应用 | |
CN102181457B (zh) | 密码子优化的艰难梭菌外毒素b氨基端基因序列及其核酸疫苗 | |
CN103330934B (zh) | 一种鳗弧菌01血清型灭活疫苗及其制备和使用方法 | |
CN105274064B (zh) | 一种鸭坦布苏病毒弱毒疫苗株及其应用 | |
CN100484959C (zh) | 一种改良重组猪α干扰素蛋白及其编码基因与应用 | |
CN102199611B (zh) | 密码子优化的艰难梭菌外毒素a羧基端基因序列及其核酸疫苗 | |
CN109010815A (zh) | 一种哈氏弧菌灭活疫苗及其制备和应用 | |
CN104138597B (zh) | 一种鳗弧菌二价疫苗及其制备和使用方法 | |
CN103705918B (zh) | 抗猪流行性腹泻病毒高免血清及其制备方法 | |
CN105779370A (zh) | 一种鱼类败血病病原维氏气单胞菌减毒活疫苗及其应用 | |
CN102533629B (zh) | 禽脑脊髓炎病毒vp1蛋白亚单位疫苗的制备方法 | |
CN102061303B (zh) | 两种海洋动物抗菌肽基因的融合表达产物及其制备方法 | |
CN106906141A (zh) | 一种嗜水气单胞菌活菌疫苗菌株的筛选方法 | |
CN104784684B (zh) | 一种鱼类烂鳃病病原约氏黄杆菌减毒活疫苗及构建方法 | |
CN101906403B (zh) | 肠道病毒及其应用 | |
CN104232502A (zh) | 维罗纳气单胞菌菌蜕、其制备方法及应用 | |
CN106676151A (zh) | 一种重组猪干扰素γ成品冻干制剂的制备方法 | |
CN106497855B (zh) | 一种肠炎沙门菌基因敲除减毒突变株及其制备与应用 | |
CN101519440B (zh) | 一种交叉保护性疫苗抗原及其制备方法和应用 | |
CN103495159A (zh) | 柱状黄杆菌基因重组疫苗的制备方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant | ||
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee | ||
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20190625 Termination date: 20220107 |