CN105777779A - 一种对甲苯磺酸依度沙班化合物 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种对甲苯磺酸依度沙班化合物。依度沙班是小分子口服抗凝药，为凝血因子X（FXa）阻滞剂。凝血过程中，活化的凝血因子X（FXa）将凝血酶原（FII）激活成为凝血酶（FIIa），促使纤维蛋白形成，由此形成血栓，因而FXa已成为开发新一代抗凝药物的主要靶点。依度沙班通过选择性、可逆性且直接抑制FXa达到抑制血栓形成的口服抗凝药物。

Description

一种对甲苯磺酸依度沙班化合物

技术领域

本发明属于制药技术领域，具体地涉及一种对甲苯磺酸依度沙班化合物。

背景技术

对甲苯磺酸依度沙班，化学名称为N-(5-氯吡啶-2-基)-N'-[(1S，2R，4S)-4-(二甲基氨基羰基)-2-(5-甲基-4，5，6，7-四氢[1，3]噻唑并[5，4-c]吡啶-2-甲酰氨基)环己基]乙二酰胺(对甲苯磺酸盐)一水合物

化学结构式：

分子式：C24H30ClN7O4S·C7H8O3S·H2O，分子量：738.27

血栓能够引起血管腔狭窄与闭塞，使主要脏器发生缺血和梗死，从而引发各种疾病，如心肌梗死、缺血性脑梗死和静脉血栓栓塞等。静脉血栓栓塞症(venousthromboembolism，VTE)包括深静脉血栓形成(deepveinthrombosis，DVT)和肺栓塞(pulmonaryembolism，PE)，已成为严重威胁人类健康的常见疾病。美国每年新发VTE患者高达900000例；每年因肺栓塞死亡约300000例，其中约1/3为猝死。另外一项研究表明，VTE已成为外科术后第三位最常见的并发症。我国尽管缺乏权威流行病学资料，但VTE的高发病率、高致残率及高死亡率已受到临床医师的高度关注。

凝血途径中的最终产物纤维蛋白和红细胞是构成静脉血栓的主体。活化凝血因子X(FXa)的作用是将凝血酶原激活成为凝血酶，凝血酶将纤维蛋白原转变成纤维蛋白。一分子FXa在1min内即可致138分子凝血酶分子产生，除凝血酶原外，FXa还会激活凝血因子V、凝血因子VII和C蛋白。在体外，对甲苯磺酸依度沙班竞争性、选择性地抑制FXa，而对其他相关凝血因子的丝氨酸蛋白酶的抑制活性较弱。

依度沙班是日本第一三共株式会社研制的小分子口服抗凝药，为凝血因子X(FXa)阻滞剂。凝血过程中，活化的凝血因子X(FXa)将凝血酶原(FII)激活成为凝血酶(FIIa)，促使纤维蛋白形成，由此形成血栓，因而FXa已成为开发新一代抗凝药物的主要靶点。依度沙班通过选择性、可逆性且直接抑制FXa达到抑制血栓形成的口服抗凝药物，其对FXa的选择性比FIIa高104倍。日本国内外临床试验均证实本品可有效抑制接受下肢整形外科手术患者并发VTE，且安全可靠。

在日本及台湾对接受全膝关节置换术(TKA)、全髋关节置换术(THA)、髋关节骨折手术(HFS)患者进行依度沙班临床试验，依度沙班各组抑制VTE发生的作用均显著优于安慰剂组、与依诺肝素钠组相当。大出血或临床意义上严重出血的发生率，各给药组间无明显差异。主要不良反应为出血(尿潜血阳性、皮下出血、伤口出血等)、γ-GTP升高、ALT升高，其他不良反应有头痛、腹泻、出疹、瘙痒、浮肿、发热等。安全性实验结果表明，依度沙班对中枢神经系统、心血管系统、呼吸系统、肾功能的影响很小。

发明内容

本发明的目的在于提供一种对甲苯磺酸依度沙班化合物，其具有以下结构：

上述的对甲苯磺酸依度沙班化合物，其X-射线粉末衍射图谱在2θ为约10.0012，14.0113，15.0033，16.4325，18.5695，19.7816，20.0003，25.3457，26.1058，26.5453和28.0076处有特征峰。

上述的对甲苯磺酸依度沙班化合物，具有与附图1类似的图谱。

上所述的对甲苯磺酸依度沙班化合物，具有与附图2类似的图谱。

本发明的目的在于提供一种药物组合物，包含有效剂量的上述的化合物以及药学上可接受的辅料。

本发明提供的对甲苯磺酸依度沙班杂质含量更低，更有利于体现安全可控的用药原则。

附图说明

图1为本发明化合物的粉末X射线衍射图。

图2为本发明化合物的差热分析图谱。

具体实施方式

为了更好地理解本发明，下面将通过本发明的实施例和实验数据对本发明及其优势进行详细描述和说明，但这些实施例并不用于限制本发明。

对比例1-对甲苯磺酸依度沙班化合物制备

对甲苯磺酸依度沙班粗品25g，加入的2.5的％500ml醋酸搅拌溶解后，逐步3％碳酸氢钠溶液30ml，充分搅拌，放置过夜，析出晶体18.56g。所得晶体经粉末X射线衍射：使用Cu-K辐射，该化合物的X射线粉末衍射图谱见附图1。差示扫描量热分析：该化合物的差热分析图谱见附图2。

实施例2-本发明化合物的质量研究和质量标准的制订

对甲苯磺酸依度沙班中含有的特定降解杂质为杂质L、M、N、O。其中杂质L、M为依度沙班的水解产物，在碱性条件下较易产生；杂质N、O为氧化产物。

根据影响因素试验及稳定性试验结果，自制品及市售品在放置过程主要产生的杂质为氧化杂质N、O，在高温和高湿条件下会有增长。

下表是测定对甲苯磺酸依度沙班(实施例1)含量及其杂质检测限的色谱条件：

表1对甲苯磺酸依度沙班(实施例1)有关物质检测方法

通过以上方法测定的有效成分与有关物质，具体数据如下，由此可见本发明提供的对甲苯磺酸依度沙班杂质含量更低，更有利于体现安全可控的用药原则。

表:2对甲苯磺酸依度沙班(实施例1)杂质控制分析表

实施例2-本发明化合物的活性验证

1材料与方法：

1.1主要试剂阳性对照药(人凝血酶)购自上海BD公司；本发明化合物(实施例1)；人纤溶酶原、FXa、人血浆均购自上海BD公司；十二水磷酸氢二钠(规格：500g/瓶)；磷酸二氢钠氯化钠溶液(规格：500g/瓶)购自南京市化学试剂厂；0.9％生理盐水(500ml/瓶)自配；戊巴比妥钠购自国际集团化学试剂有限公司。1.2主要仪器：

AlphaHP3400荧光/可见数字图像分析系统购自美国AlphaHP3400公司；BIO-RAD电泳仪、BIO-RAD酶标仪购自北京赛百奥科技有限公司；SIGMA3K30高速冷冻离心机购自上海肯强仪器有限公司；THZC1型冷冻恒温摇床购自太仓市实验设备厂；BS124S型分析天平购自北京赛多利斯仪器系统有限公司；TECOCoatronM2双通道血凝仪购自德国TECO公司。

1.3实验动物SPF级KM小鼠50只，22～24g，雌雄各半。

1.4实验方法：

1.4.1实施例1配制10％DMSO的水液，将实施例1和人凝血酶溶于缓冲液中，使实施例1浓度分别达到100、10和1μg/ml，人凝血酶浓度为100U/ml。实施例1溶液、人凝血酶溶液和人血浆分别在37℃水浴孵育3min后，每次分别各取0.2ml的上述各浓度药物溶液与0.2ml的人血浆混合。血凝仪测其凝血时间，每个浓度平行测量6次取平均值。溶媒组用0.2ml磷酸钠缓冲液代替药物进行同样操作。1.4.2浸药纱布制备人血凝酶用上述磷酸钠缓冲液配制成100U/ml，实施例1配制3个浓度梯度：100、10和1μg/ml。将单层纱布剪成3cm×3cm，然后把剪好的纱布叠成4层浸泡于上述溶液中。溶媒组用磷酸钠缓冲液代替

药物溶液。

1.4.3小鼠剪尾试验，取KM小鼠50只，按体重随机分为5组，每组10只，分别为阴性对照磷酸钠缓冲液组，人凝血酶组，本发明化合物高、中、低剂量组。戊巴比妥钠30mg/kg腹腔注射麻醉后，用锋利的手术剪剪去小鼠尾巴3cm，并开始计时，同时于出血处盖上相应组别的上述制备的浸药纱布1块。每15s用称量过重量的滤纸吸去伤口血液直到出血停止，称量吸有血液的滤纸和浸药纱布为总重量，记录出血时间及计算出血量。出血量＝总重量－(浸药纱布重量+滤纸重量)。1.4.4实施例1对人纤溶酶原的作用用0.05mol/LTris－HCl(pH7.4)缓冲液分别配制1μg/ml实施例1溶液、2KU/ml立止血溶液、8U/ml人凝血酶溶液、2KU/ml的尿激酶溶液和2mg/ml人纤溶酶原溶液。以上溶液在使用前均于37℃充分水浴。取5个0.5mlEP管，标号1～5，分别加入10μl人纤溶酶原溶液，然后在1～5号管中分别加入50μl0.05mol/LTris-HCl(pH7.4)缓冲液、4U/ml实施例1溶液、2KU/ml立止血溶液、8U/ml人凝血酶溶液和2KU/ml尿激酶溶液。混匀后均于37℃充分水浴。孵育2h后取出10μl混合溶液，然后向每个反应体系中加入10μl10mol/L的尿素溶液(内含2％SDS，2％β-巯基乙醇)以终止反应，将样品与SDS-PAGE上样缓冲液4∶1混合，沸水煮3～5min，取15μl上样。接通电泳仪电源，在积层胶阶段用低电压(60V)使样品浓缩成一条线，然后加大电压(100V)，约2.5h后待溴酚蓝指示剂达到底部边缘时切断电源，出凝胶，切角标记，新鲜配制考马斯亮蓝染色15min，脱色液洗净凝胶背景，观察电泳结果。

1.4.5实施例1对FXa+t-PA诱导的人纤溶酶原体外激活的影响制备PCPS：将磷脂酰丝氨酸和磷脂酰胆碱(质量比1∶3)混悬于HEPES缓冲液(0.02mol/LHEPES、0.15mol/LNaCl、pH7.4)中涡旋均匀，然后在氮气流和冰浴的条件下持续超声30min，经2次超速离心后(4℃35000r/min30min；4℃40000r/min3h)，均匀清晰的上清液为均匀磷脂囊泡。用于模拟体内血小板第三因子。等摩尔浓度的60nmol/L实施例1和60nmol/LFXa各130μl混合后于37℃充分水浴中孵育90min。育1h。再加入130μl浓度为10nmol/Lt-PA溶液于37℃孵育。分别于0、5、10、20、30、40、50、60min取出10μl反应液，加入200μl含S2403特异性显色底物显色(80μmol/L)及EDTA(20mmol/L)溶液，于405nm处测定OD值。

1.5统计学方法采用SPSS13.0软件进行统计

学分析，计量资料以(x±s)表示，组间两两比较采用t检验，多组均数间行单因素方差分析，相关性分析采用Spearman检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

结果：本发明化合物和人凝血酶能明显缩短人血浆凝固时间，并能明显缩短小鼠剪尾的止血时间及减少出血量，与溶媒组比较差异有统计学意义(P<0.05)；实施例1对人纤溶酶原没有直接的裂解作用，不激活人纤溶酶原；实施例1可抑制FXa+t-PA诱导的人纤溶酶原体外激活。本发明化合物具有良好的局部止血效果，其作用机制与抑制FXa激活纤溶系统有关。

局部用药可使药物高度集中在出血部位，迅速发挥止血作用；对外科手术而言，避免了因注射使用药物全身分布后止血效果减弱的影响；降低全身给药带来的副作用。从人血浆凝固时间及小鼠剪尾药效学实验结果可看出，本发明化合物和人凝血酶都具有明显的止血效果。

Claims (5)

1.一种对甲苯磺酸依度沙班化合物，其特征在于具有以下结构：

。

2.根据权利要求1所述的对甲苯磺酸依度沙班化合物，其特征在于其X-射线粉末衍射图谱在2θ为约10.0012，14.0113，15.0033，16.4325，18.5695，19.7816，20.0003，25.3457，26.1058，26.5453和28.0076处有特征峰。

3.根据权利要求3所述的对甲苯磺酸依度沙班化合物，其特征在于具有与附图1类似图谱。

4.根据权利要求1-3任一项所述的对甲苯磺酸依度沙班化合物，其特征在于具有与附图2类似的图谱。

5.一种药物组合物，其特征在于包含有效剂量的上述的化合物以及药学上可接受的辅料。