CN105754935A - 一种诱导成纤维细胞转分化为脂肪细胞的诱导培养基及其应用 - Google Patents
一种诱导成纤维细胞转分化为脂肪细胞的诱导培养基及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN105754935A CN105754935A CN201610213733.2A CN201610213733A CN105754935A CN 105754935 A CN105754935 A CN 105754935A CN 201610213733 A CN201610213733 A CN 201610213733A CN 105754935 A CN105754935 A CN 105754935A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- cell
- fibroblast
- transdifferentiation
- induction
- adipocyte
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 210000001789 adipocyte Anatomy 0.000 title claims abstract description 42
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 title claims abstract description 29
- 230000006698 induction Effects 0.000 title claims abstract description 25
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 title claims abstract description 16
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 21
- OHCQJHSOBUTRHG-KGGHGJDLSA-N FORSKOLIN Chemical compound O=C([C@@]12O)C[C@](C)(C=C)O[C@]1(C)[C@@H](OC(=O)C)[C@@H](O)[C@@H]1[C@]2(C)[C@@H](O)CCC1(C)C OHCQJHSOBUTRHG-KGGHGJDLSA-N 0.000 claims abstract description 18
- OHCQJHSOBUTRHG-UHFFFAOYSA-N colforsin Natural products OC12C(=O)CC(C)(C=C)OC1(C)C(OC(=O)C)C(O)C1C2(C)C(O)CCC1(C)C OHCQJHSOBUTRHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 10
- SUZLHDUTVMZSEV-UHFFFAOYSA-N Deoxycoleonol Natural products C12C(=O)CC(C)(C=C)OC2(C)C(OC(=O)C)C(O)C2C1(C)C(O)CCC2(C)C SUZLHDUTVMZSEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 9
- IGLYMJRIWWIQQE-QUOODJBBSA-N (1S,2R)-2-phenylcyclopropan-1-amine (1R,2S)-2-phenylcyclopropan-1-amine Chemical group N[C@H]1C[C@@H]1C1=CC=CC=C1.N[C@@H]1C[C@H]1C1=CC=CC=C1 IGLYMJRIWWIQQE-QUOODJBBSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 229960003741 tranylcypromine Drugs 0.000 claims abstract description 6
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 claims description 26
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 claims description 9
- 239000007640 basal medium Substances 0.000 claims description 7
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 claims description 6
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims description 2
- 238000007877 drug screening Methods 0.000 claims description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 abstract description 15
- FKSFKBQGSFSOSM-QFIPXVFZSA-N 1-[(2S)-butan-2-yl]-N-[(4,6-dimethyl-2-oxo-1H-pyridin-3-yl)methyl]-3-methyl-6-[6-(1-piperazinyl)-3-pyridinyl]-4-indolecarboxamide Chemical compound C1=C2N([C@@H](C)CC)C=C(C)C2=C(C(=O)NCC=2C(NC(C)=CC=2C)=O)C=C1C(C=N1)=CC=C1N1CCNCC1 FKSFKBQGSFSOSM-QFIPXVFZSA-N 0.000 abstract description 9
- 238000013459 approach Methods 0.000 abstract description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 4
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 abstract description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 abstract 3
- 230000011759 adipose tissue development Effects 0.000 abstract 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 36
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 11
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 9
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 8
- 230000008569 process Effects 0.000 description 8
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 6
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 6
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 6
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 6
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 6
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 5
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 5
- 230000008672 reprogramming Effects 0.000 description 5
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 4
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 description 4
- 101000666634 Homo sapiens Rho-related GTP-binding protein RhoH Proteins 0.000 description 3
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 3
- 108060000200 adenylate cyclase Proteins 0.000 description 3
- 102000030621 adenylate cyclase Human genes 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 3
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 3
- 238000003762 quantitative reverse transcription PCR Methods 0.000 description 3
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 3
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 3
- -1 until after 24h Substances 0.000 description 3
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- 101150074151 Ebp gene Proteins 0.000 description 2
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 2
- 102000010909 Monoamine Oxidase Human genes 0.000 description 2
- 108010062431 Monoamine oxidase Proteins 0.000 description 2
- 101150023417 PPARG gene Proteins 0.000 description 2
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 2
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 2
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 2
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 2
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 2
- 230000002107 myocardial effect Effects 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 210000004681 ovum Anatomy 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 2
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 2
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 description 2
- OMKHWTRUYNAGFG-IEBDPFPHSA-N 3-deazaneplanocin a Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=CC=2N1[C@@H]1C=C(CO)[C@@H](O)[C@H]1O OMKHWTRUYNAGFG-IEBDPFPHSA-N 0.000 description 1
- 108010022579 ATP dependent 26S protease Proteins 0.000 description 1
- 208000002874 Acne Vulgaris Diseases 0.000 description 1
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 101710186200 CCAAT/enhancer-binding protein Proteins 0.000 description 1
- 101710134031 CCAAT/enhancer-binding protein beta Proteins 0.000 description 1
- 102100034798 CCAAT/enhancer-binding protein beta Human genes 0.000 description 1
- AQGNHMOJWBZFQQ-UHFFFAOYSA-N CT 99021 Chemical compound CC1=CNC(C=2C(=NC(NCCNC=3N=CC(=CC=3)C#N)=NC=2)C=2C(=CC(Cl)=CC=2)Cl)=N1 AQGNHMOJWBZFQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000000905 Cadherin Human genes 0.000 description 1
- 108050007957 Cadherin Proteins 0.000 description 1
- 101150061453 Cebpa gene Proteins 0.000 description 1
- 206010010356 Congenital anomaly Diseases 0.000 description 1
- 102100036279 DNA (cytosine-5)-methyltransferase 1 Human genes 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 1
- 102100024785 Fibroblast growth factor 2 Human genes 0.000 description 1
- 108090000379 Fibroblast growth factor 2 Proteins 0.000 description 1
- 102000001267 GSK3 Human genes 0.000 description 1
- 108060006662 GSK3 Proteins 0.000 description 1
- 102100039289 Glial fibrillary acidic protein Human genes 0.000 description 1
- 101710193519 Glial fibrillary acidic protein Proteins 0.000 description 1
- 101150065641 Gpdh1 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100038970 Histone-lysine N-methyltransferase EZH2 Human genes 0.000 description 1
- 101000931098 Homo sapiens DNA (cytosine-5)-methyltransferase 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000882127 Homo sapiens Histone-lysine N-methyltransferase EZH2 Proteins 0.000 description 1
- 229940123628 Lysine (K)-specific demethylase 1A inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 229940124647 MEK inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 101100463018 Mus musculus Pck1 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000028389 Nerve injury Diseases 0.000 description 1
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 1
- 108010016731 PPAR gamma Proteins 0.000 description 1
- 102000000536 PPAR gamma Human genes 0.000 description 1
- 101150110386 SLC2A4 gene Proteins 0.000 description 1
- 206010039793 Seborrhoeic dermatitis Diseases 0.000 description 1
- 240000003186 Stachytarpheta cayennensis Species 0.000 description 1
- 235000009233 Stachytarpheta cayennensis Nutrition 0.000 description 1
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 1
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 230000003187 abdominal effect Effects 0.000 description 1
- 206010000496 acne Diseases 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 238000004115 adherent culture Methods 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000000935 antidepressant agent Substances 0.000 description 1
- 229940005513 antidepressants Drugs 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 238000010009 beating Methods 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 238000007664 blowing Methods 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 230000002939 deleterious effect Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 210000001671 embryonic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 238000003208 gene overexpression Methods 0.000 description 1
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000005046 glial fibrillary acidic protein Anatomy 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229940121372 histone deacetylase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 239000003276 histone deacetylase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 230000008676 import Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 229940029329 intrinsic factor Drugs 0.000 description 1
- 230000006799 invasive growth in response to glucose limitation Effects 0.000 description 1
- 239000002829 mitogen activated protein kinase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000036456 mitotic arrest Effects 0.000 description 1
- 210000002894 multi-fate stem cell Anatomy 0.000 description 1
- FMURUEPQXKJIPS-UHFFFAOYSA-N n-(1-benzylpiperidin-4-yl)-6,7-dimethoxy-2-(4-methyl-1,4-diazepan-1-yl)quinazolin-4-amine;trihydrochloride Chemical compound Cl.Cl.Cl.C=12C=C(OC)C(OC)=CC2=NC(N2CCN(C)CCC2)=NC=1NC(CC1)CCN1CC1=CC=CC=C1 FMURUEPQXKJIPS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NFVJNJQRWPQVOA-UHFFFAOYSA-N n-[2-chloro-5-(trifluoromethyl)phenyl]-2-[3-(4-ethyl-5-ethylsulfanyl-1,2,4-triazol-3-yl)piperidin-1-yl]acetamide Chemical compound CCN1C(SCC)=NN=C1C1CN(CC(=O)NC=2C(=CC=C(C=2)C(F)(F)F)Cl)CCC1 NFVJNJQRWPQVOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008764 nerve damage Effects 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 1
- 235000014593 oils and fats Nutrition 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 150000002960 penicillins Chemical class 0.000 description 1
- 208000008742 seborrheic dermatitis Diseases 0.000 description 1
- 210000000329 smooth muscle myocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000011476 stem cell transplantation Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical group C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- YFDSDPIBEUFTMI-UHFFFAOYSA-N tribromoethanol Chemical compound OCC(Br)(Br)Br YFDSDPIBEUFTMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229950004616 tribromoethanol Drugs 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 description 1
- 230000009278 visceral effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0652—Cells of skeletal and connective tissues; Mesenchyme
- C12N5/0653—Adipocytes; Adipose tissue
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
- G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/70—Enzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/70—Enzymes
- C12N2501/71—Oxidoreductases (EC 1.)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/70—Enzymes
- C12N2501/72—Transferases [EC 2.]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/70—Enzymes
- C12N2501/72—Transferases [EC 2.]
- C12N2501/727—Kinases (EC 2.7.)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2503/00—Use of cells in diagnostics
- C12N2503/02—Drug screening
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2506/00—Differentiation of animal cells from one lineage to another; Differentiation of pluripotent cells
- C12N2506/02—Differentiation of animal cells from one lineage to another; Differentiation of pluripotent cells from embryonic cells
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明公开了一种诱导成纤维细胞转分化为脂肪细胞的诱导培养基、方法及其应用，所述诱导培养基，包含基础培养基和诱导小分子组合，所述诱导小分子组合为SG或6TF，其中S为SB431542、G为GSK126、6为E61541、T为苯环丙胺、F为毛喉素。本发明诱导培养基能够将成纤维细胞诱导转分化为脂肪细胞，所得脂肪细胞具有正常脂肪细胞特异性分子标签，并且具有正常脂肪形成油脂的功能，为再生医学的细胞来源问题提供一种新的途径。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种诱导成纤维细胞转分化为脂肪细胞的诱导培养基及其应用。
背景技术
多细胞生物体绝大部分是由全能性的受精卵发育而来的。精卵结合形成的受精卵经历逐级谱系分化最终发育为成熟个体。其中，细胞的命运决定是成千上万的外源信号与内源因子协同作用的结果，这一过程复杂而难以操控。近些年生命科学飞速发展，其中最引人注目的成就之一便是人们通过外源途径来改变细胞的命运。通过过量表达谱系特异性调控因子，人们不仅能使成体细胞去分化为胚胎干细胞，还能实现不同世系成体细胞之间的转分化过程。
随着重编程技术的发展以及干细胞本身所具有的特性，使得人类有可能在体外培养某些干细胞，诱导其分化或定向转分化为具有重要功能的体细胞，以供临床所需；同时，再生医学则正是利用组织工程、干细胞移植和药物等临床手段，将功能无法自行恢复的病变组织、器官得到结构和功能的重建。干细胞在治疗脂肪和神经损伤举得一些疗效，但依然面临着细胞来源不足的问题，且异体移植又可能会导致免疫排斥的发生。目前，通过在体细胞中强制表达特定重编程因子，介导体细胞直接转分化为某些珍贵的或者不可再生的细胞，为解决上述细胞来源不足的问题提供了新的途径。
然而，外源基因过量表达的方法技术壁垒较高，表达载体可能插入基因组，导入系统安全性存在隐患，效率也有待提高。除了特异性基因的诱导手段，一些小分子化合物也被证实能够促进细胞重编程过程。最近的几项研究发现，重编程过程中的所有转录因子都可以用小分子替代。小分子化合物不仅具有渗透入细胞膜、易操控和成本低等优势，并且小分子能实现没有任何外源基因介入的体细胞重编程过程，这无疑为人们获得多能性干细胞提供了新的方法和思路。
目前，体外获取脂肪细胞主要是从脂肪组织等处直接分离，或者由干细胞分化得到。由干细胞获取脂肪细胞，一般都需经过两轮有丝分裂停滞，再依次激活PPARγ，C/EBP，E2F/DP等转录因子的表达。该过程是由一系列的小分子激活相应的信号通路完成，包括Forskolin或IBMX提高腺苷酸环化酶(cAMP)的水平，抑制Wnt10b和Sp1，激活C/EBPβ通路。此外，还有研究表面在低氧条件下培养脂肪干细胞，不仅能提高其存活率和增殖速度，还能提高其向脂肪分化的能力。然而，至今未见到转分化直接获取脂肪细胞的报道。
发明内容
本发明提供了一种利用添加有小分子组合的诱导培养基诱导成纤维细胞转分化为脂肪细胞的方法。
在系统分析了10多种小分子的不同组合对小鼠成纤维细胞基因表达和克隆形态影响的基础上，发现小鼠成纤维细胞可以同时转变为包括心肌细胞、神经细胞和脂肪细胞等各种体细胞类型。这种随机多向转分化的现象，称之为小分子组合诱导的多向转分化(inducedmulti-lineagetrans-differentiation，iMT)。具有这种功能的小分子组合称为诱导小分子组合。
一种诱导成纤维细胞转分化为脂肪细胞的诱导培养基，包含诱导小分子组合，诱导小分子组合为SG或6TF，其中S为SB431542、G为GSK126、6为E61541、T为苯环丙胺(Tranylcypromine)、F为毛喉素(Forskolin，FSK)。其中，E61542和SB431542是TGF-β信号通路中ALK5位点的抑制剂；GSK126是EZH2甲基转移酶的抑制剂；苯环丙胺是单胺氧化酶的抑制剂，一般作为抗抑郁药；毛喉素是腺苷酸环化酶(Adenylatecyclase，AC)的激活剂。
所述基础培养基可以为常用的细胞培养基，比如DMEM培养基添加5％～15％的胎牛血清。因为本发明使用的成纤维细胞直接取自小鼠，属于细胞的原代培养，细胞相对比较脆弱，所以还可以适当添加些谷氨酰胺、bFGF和β-巯基乙醇等促进细胞生长的营养物质，一般添加的浓度为谷氨酰胺1～3mM、bFGF30～50ng/mL、β-巯基乙醇0.005～0.02mM。当然，为了防止细菌污染，在基础培养基中还可以添加一些抗生素，比如链霉素、青霉素等，一般添加浓度为链霉素50～200μg/mL和青霉素50～200U/mL。
优选的，所述诱导小分子组合中各组分的浓度为：
最优选的，所述诱导小分子组合中各组分的浓度为：
诱导小分子组合中各组分的浓度是在参考了各种文献报道的基础上，再经实验验证得到的，浓度过低或过高都会造成诱导转分化的效果变差。
本发明又提供了一种诱导成纤维细胞转分化为脂肪细胞的方法，使用所述的诱导培养基对成纤维细胞进行培养。
优选的，所述的成纤维细胞来源于小鼠。所述的成纤维细胞来源于10.5～14.5天的小鼠胚胎。或者，所述的成纤维细胞来源于小鼠尾尖。
优选的，所述成纤维细胞培养的第2天起开始使用如权利要求1所述的培养基，之后每4天更换一次培养基。然后统计克隆数，观察细胞形态，并提取总RNA进行RT-qPCR，检测相关基因的表达情况，从而初步确定诱导转分化成功，然后将转分化所得的脂肪细胞利用油红染色进行再次验证，发现转分化所得的脂肪细胞能够被油红染色。
本发明还提供了利用所述方法获得的脂肪细胞。
本发明还提供了所述的脂肪细胞在药物筛选中的应用。与脂肪细胞相关的疾病有先天性肥胖、痤疮、皮脂溢性皮炎等。
本发明诱导培养基能够将成纤维细胞诱导转分化为脂肪细胞，所得脂肪细胞具有正常脂肪细胞特异性分子标签，并且具有正常脂肪形成油脂的功能，为再生医学的细胞来源问题提供一种新的途径。
附图说明
图1为诱导小分子组合功能性筛选流程图；
图2为实施例2中不同小分子组合产生克隆个数与上调基因的散点图；
图3为实施例2中不同iMT类型细胞的验证结果图，其中各图分别表示心肌细胞(a-Actinin)、肝细胞(AFP)、脂肪细胞(Cebpa)、表皮细胞(E-cadherin)、神经细胞(Tuj1、GFAP)、平滑肌细胞(SMA)的免疫荧光染色，内脏层器官细胞的PAS染色和脂肪细胞的油红染色；
图4为不同小分子组合诱导成纤维细胞向脂肪细胞定向转分化效果对比图；
图5为实施例3中不同iMT类型细胞的验证结果图，其中，A：a-Actinin，B：Tuj1；
图6为实施例4中SG诱导转分化所得脂肪细胞中特异性基因上调结果柱状图，其中，A和B分别为不同基因的柱状图；
图7为实施例4中SG诱导转分化所得脂肪细胞的油红染色图，其中，A为未染色图，B为染色图；
图8为实施例6中6TF诱导转分化所得脂肪细胞中特异性基因上调结果柱状图，其中，A和B分别为不同基因的柱状图；
图9为实施例6中6TF诱导转分化所得脂肪细胞的油红染色图，其中A为对照组，B为实验组。
具体实施方式
基础培养基：DMEM、15％胎牛血清、2mM谷氨酰胺、40ng/mLbFGF、0.01mMβ-巯基乙醇、100μg/mL链霉素和100U/mL青霉素。
诱导培养基为在基础培养基的基础上添加5μMSB431542、0.5μMGSK126或者添加5μME61541、5μM苯环丙胺、10μM毛喉素。
实施例1
(1)小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)的制备步骤如下：
1)培养器皿的预处理：以0.2％明胶覆盖培养皿的底壁，室温下放置30min后，将0.2％明胶吸出，室温晾干后备用。
2)给孕13.5天的小鼠注射约0.5mL阿佛丁麻醉后，实施断颈法处死小鼠，将其浸入75％酒精中消毒5分钟。
3)用75％乙醇擦拭腹部，剪开皮肤并把皮肤向后拉，暴露出腹壁。剪开腹壁以暴露出子宫。将子宫移到100mm的皿里，用10mLPBS洗三遍。
4)用剪刀剪开胚囊，并将胚胎移到培养皿中。
5)小心去除胚胎的头和内脏，将胚胎躯干部分转移到青霉素小瓶中，用2mLPBS洗三遍。
6)用眼科剪将组织剪碎，加入2mL的0.05％胰蛋白酶/0.02％EDTA，将悬液移入50mL离心管中，并在37℃孵育大约20min，每隔5min振荡几次。
7)充分吹打后加入10mL培养基终止消化，静置5min后，将上层约8mL的细胞悬液移入培养皿中，置37℃，5％CO2培养6h后，换液。
8)细胞约90％汇合时传代。
(2)小鼠尾尖成纤维细胞(tail-tipfibroblasts，TTFs)的制备步骤如下：
1)将6周龄的B6/C57小鼠实施断颈法处死小鼠后，浸入75％酒精中消毒5分钟。无菌剪取小鼠尾尖约4cm的组织；
2)去除皮肤后，先用PBS洗3遍，除去血液和脂肪组织；再用眼科剪把鼠尾剪成适当大小分装至盛有2滴血清的1.5mL离心管中，再充分剪碎组织块，加入500μL的血清进行涂板；用组织块贴壁培养法倒置培养6-8h，期间注意添加血清，防止血清干涸；6-8小时后，添加5mL培养基，待到24h后，将培养基添加至8mL；
3)在小鼠胚胎成纤维培养基中培养7天，期间每3天换一次液，并将培养基加至10mL；待细胞爬出至适当密度时，进行传代或冻存处理。
实施例2
为了探索小分子在改变细胞命运上的潜在作用，对已被证明对重编程有影响的10余种小分子化合物和其组合进行了系统的分析和筛选，他们包括
HDAC抑制剂：NaB(N)、VPA(V)、TSA(A)；
DNMT抑制剂：RG108(R)、5-AZA(5)；
G9a抑制剂：BIX-01294(B)；
Ezh2抑制剂：DZNep(D)、GSK126(G)；
LSD1抑制剂：苯环丙胺(T)；
AC抑制剂：Forskolin(F)；
GSK3抑制剂：CHIR99021(C)；
MEK抑制剂：PD032590(P)；
ALK5抑制剂：A-83-01(8)、E616452(6)、SB431542(S)。
实验流程如图1所示，将实施例1制备的1000个MEFs细胞接种于96孔板上，从第二天开始培养基中添加不同的小分子组合，然后每四天换液，第16天检测，通过统计克隆的形成个数和qPCR分析，确定不同小分子组合的筛选效果。如表1所示，不同小分子组合获得的特定类型的克隆个数有所不同，其中，对照为未添加小分子，此时没有克隆形成。如图2所示，小分子组合6TCF和SGCF对MEFs相关基因上调数量较多，且转分化后的克隆数量最多，但所得的转分化后的克隆并不是单一的一种细胞类型，而是包括脂肪细胞、神经细胞和脂肪细胞等各种体细胞类型(图3)。所以在这两种小分子组合的基础上，进行进一步的优化与实验，以获得转分化后为单一体细胞类型的小分子组合。
通过大量的筛选，发现小分子组合为SG和6TF时，所得诱导转分化的细胞为单一的脂肪细胞，且所得脂肪细胞克隆数较多(图4)。
表1不同小分子组合下克隆形成数量(单位：个)。
实施例3
将实施例1制备的TTFs细胞接种于细胞培养皿上，从第二天开始培养基中添加不同的小分子组合，然后每四天换液，第16天检测，通过统计克隆的形成个数和qPCR分析，确定不同小分子组合的筛选效果。如图5所示，小分子组合6TCF处理TTFs，也能获取a-Actinin阳性的类脂肪细胞和Tuj1阳性的类神经细胞。
实施例4
将约20000个MEFs接种在35mm培养皿上，其培养基为成纤维细胞基础培养基。第二天，将培养基更换成诱导培养基(添加5μMSB431542、0.5μMGSK126)，每4天更换一次培养基。第16天，统计细胞克隆个数，收集细胞总RNA进行RT-qPCR检测相关基因的表达情况，结果如图6所示，Pparg、Scd、Pxrα、Glut4、c/Ebp、Pepck和Gpdh等脂肪细胞特异性基因上调明显。如图7所示，诱导转分化所得细胞能被油红染料染色。
实施例5
为探索小分子SB431542和GSK126的浓度对成纤维细胞定向转分化为脂肪细胞效率的影响，设计不同浓度的SB431542与GSK126组合添加到培养基中后用于对成纤维细胞进行诱导转分化，然后用油红染色确定脂肪细胞的个数，结果如表2所示，5μMSB431542与0.5μMGSK126的组合在验证的组合中，具有最高的转化效率。
表2小分子化合物SB431542和GSK126浓度筛选结果
实施例6
将约20000个MEFs接种在35mm培养皿上，其培养基为成纤维细胞基础培养基。第二天，将培养基更换成诱导培养基(添加5μME61541、5μM苯环丙胺、10μM毛喉素)，每4天更换一次培养基。第16天，统计细胞克隆个数，收集细胞总RNA进行RT-qPCR检测相关基因的表达情况，结果如图8所示，Adipoq、Pparg、Scd和c/Ebp等脂肪细胞特异性基因上调明显。如图9所示，诱导转分化所得细胞能被油红染料染色。
Claims (9)
1.一种诱导成纤维细胞转分化为脂肪细胞的诱导培养基，包含基础培养基和诱导小分子组合，其特征在于，所述诱导小分子组合为SG或6TF，其中S为SB431542、G为GSK126、6为E61541、T为苯环丙胺、F为毛喉素。
2.如权利要求1所述的诱导培养基，其特征在于，所述诱导小分子组合中各组分的浓度为：
3.一种诱导成纤维细胞转分化为脂肪细胞的方法，其特征在于，使用如权利要求1或2任一所述的诱导培养基对成纤维细胞进行培养。
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的成纤维细胞来源于小鼠。
5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述的成纤维细胞来源于10.5～14.5天的小鼠胚胎。
6.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述的成纤维细胞来源于小鼠尾尖。
7.如权利要求3所述的方法，其特征在于，成纤维细胞培养的第2天起开始使用如权利要求1所述的诱导培养基，之后每4天更换一次培养基。
8.使用如权利要求3～7任一所述的方法获得的脂肪细胞。
9.如权利要求8所述的脂肪细胞在药物筛选中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201610213733.2A CN105754935B (zh) | 2016-04-07 | 2016-04-07 | 一种诱导成纤维细胞转分化为脂肪细胞的诱导培养基及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201610213733.2A CN105754935B (zh) | 2016-04-07 | 2016-04-07 | 一种诱导成纤维细胞转分化为脂肪细胞的诱导培养基及其应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN105754935A true CN105754935A (zh) | 2016-07-13 |
| CN105754935B CN105754935B (zh) | 2019-01-04 |
Family
ID=56333611
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201610213733.2A Active CN105754935B (zh) | 2016-04-07 | 2016-04-07 | 一种诱导成纤维细胞转分化为脂肪细胞的诱导培养基及其应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN105754935B (zh) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106381285A (zh) * | 2016-09-30 | 2017-02-08 | 浙江大学 | 一种诱导成纤维细胞转分化为神经细胞的诱导培养基及其应用 |
| CN106399248A (zh) * | 2016-09-30 | 2017-02-15 | 浙江大学 | 一种诱导成纤维细胞转分化为神经细胞的方法 |
| WO2019144968A1 (zh) | 2018-01-29 | 2019-08-01 | 中国科学院动物研究所 | 一种细胞诱导的方法 |
| CN111172101A (zh) * | 2019-12-31 | 2020-05-19 | 上海林望生物科技有限公司 | 人多能干细胞诱导分化为脂肪细胞的方法 |
| CN112175906A (zh) * | 2019-07-05 | 2021-01-05 | 中国科学院生物物理研究所 | 胸腺嘧啶核苷诱导成纤维细胞转分化在中性粒细胞减少症治疗中的应用 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102382800A (zh) * | 2011-12-08 | 2012-03-21 | 吉林大学 | 一种细胞信号通路抑制剂诱导猪脂肪细胞形成的方法 |
| WO2015010417A1 (zh) * | 2013-07-25 | 2015-01-29 | 中国科学院广州生物医药与健康研究院 | 利用确定的细胞因子组合促进成纤维细胞转分化为脂肪细胞 |
-
2016
- 2016-04-07 CN CN201610213733.2A patent/CN105754935B/zh active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102382800A (zh) * | 2011-12-08 | 2012-03-21 | 吉林大学 | 一种细胞信号通路抑制剂诱导猪脂肪细胞形成的方法 |
| WO2015010417A1 (zh) * | 2013-07-25 | 2015-01-29 | 中国科学院广州生物医药与健康研究院 | 利用确定的细胞因子组合促进成纤维细胞转分化为脂肪细胞 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| RADHIKA ARASALA RAO等: "Ezh2 mediated H3K27me3 activity facilitates somatic transition during human pluripotent reprogramming", 《SCIENTIFIC REPORTS》 * |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106381285A (zh) * | 2016-09-30 | 2017-02-08 | 浙江大学 | 一种诱导成纤维细胞转分化为神经细胞的诱导培养基及其应用 |
| CN106399248A (zh) * | 2016-09-30 | 2017-02-15 | 浙江大学 | 一种诱导成纤维细胞转分化为神经细胞的方法 |
| CN106399248B (zh) * | 2016-09-30 | 2020-01-14 | 浙江大学 | 一种诱导成纤维细胞转分化为神经细胞的方法 |
| WO2019144968A1 (zh) | 2018-01-29 | 2019-08-01 | 中国科学院动物研究所 | 一种细胞诱导的方法 |
| CN112175906A (zh) * | 2019-07-05 | 2021-01-05 | 中国科学院生物物理研究所 | 胸腺嘧啶核苷诱导成纤维细胞转分化在中性粒细胞减少症治疗中的应用 |
| CN112175906B (zh) * | 2019-07-05 | 2023-09-29 | 中国科学院生物物理研究所 | 胸腺嘧啶核苷诱导成纤维细胞转分化在中性粒细胞减少症治疗中的应用 |
| CN111172101A (zh) * | 2019-12-31 | 2020-05-19 | 上海林望生物科技有限公司 | 人多能干细胞诱导分化为脂肪细胞的方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN105754935B (zh) | 2019-01-04 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN105861428B (zh) | 一种诱导成纤维细胞转分化为心肌细胞的诱导培养基及其应用 | |
| CN105754935A (zh) | 一种诱导成纤维细胞转分化为脂肪细胞的诱导培养基及其应用 | |
| CN105154386B (zh) | 人肝细胞长期维持和增殖传代培养的专用培养基和培养方法 | |
| CN106967672A (zh) | 一种肺及肺癌组织培养方法以及用其构建肺癌小鼠动物模型方法 | |
| US20230212525A1 (en) | Cardiac organoid, manufacturing method therefor, and method for evaluating drug toxicity by using same | |
| CN101479376A (zh) | 含有源自身体的多个细胞种类的、能形成原始的器官样的细胞块 | |
| CN102168065A (zh) | 一种体外诱导人脐带间充质干细胞成为肝细胞的方法与应用 | |
| CN106987555A (zh) | 高效诱导人多能干细胞向心肌细胞分化的小分子化合物组合物 | |
| CN104232574A (zh) | 一种间充质干细胞体外向黑素细胞定向分化诱导的方法 | |
| CN110283788A (zh) | 一种诱导脊髓星形胶质细胞重编程为运动神经元的方法 | |
| CN104178456B (zh) | 一种人诱导多能干细胞的传代方法及应用 | |
| CN106399248A (zh) | 一种诱导成纤维细胞转分化为神经细胞的方法 | |
| CN105420193B (zh) | 分化培养基及其在制备神经干细胞中的用途 | |
| Gerlach et al. | Current state of stem cell research for the treatment of Parkinson's disease | |
| CN102161980A (zh) | 用人间充质干细胞为滋养层培养诱导多能干细胞的方法 | |
| CN113881624A (zh) | 一种细胞诱导的方法 | |
| CN105670989A (zh) | 高效诱导成体细胞表观重编程的试剂盒及其方法 | |
| Asakawa et al. | Functional hair follicle regeneration by the rearrangement of stem cells | |
| CN101363010A (zh) | 肝芽干细胞及其制备方法和用途 | |
| CN109576308A (zh) | 一种提高人类干细胞来源肝样细胞解毒功能的方法及其应用 | |
| CN113038830A (zh) | 用于重构具有毛囊的人皮肤组织的组合物、人皮肤组织模型动物及其制造方法 | |
| CN106591223A (zh) | 一种人皮肤成纤维细胞分离与原代培养方法 | |
| Bronner-Fraser | Manipulations of neural crest cells or their migratory pathways | |
| CN104388385B (zh) | 一种人外周血间充质干细胞的培养方法以及应用 | |
| CN104805053B (zh) | 珍珠龙胆石斑鱼吻端组织细胞系及其构建方法、应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |