CN105753889A - Cochlioquinone类化合物及其制备方法和在制备抗肿瘤药物中的应用 - Google Patents

Cochlioquinone类化合物及其制备方法和在制备抗肿瘤药物中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了Cochlioquinone类化合物及其制备方法和在制备抗肿瘤药物中的应用。本发明从广藿香内生真菌索氏平脐蠕孢A606(Bipolaris sorokiniana A606)乙酸乙酯提取物中分离出的化合物isocochlioquinone D，isocochlioquinone E，cochlioquinone G，cochlioquinone H和cochlioquinone I具有显著的细胞毒活性。因此本发明为研究与开发新型的抗肿瘤药物提供了候选药物，为开发利用广藿香内生真菌资源提供了科学依据。

Description

Cochlioquinone类化合物及其制备方法和在制备抗肿瘤药物中的应用
技术领域：
本发明属于生物和医药领域，具体涉及Cochlioquinone类化合物及其制备方法和在制备抗肿瘤药物中的应用。
背景技术：
植物内生真菌(endophyticfungi)是指生活史的一定阶段或全部阶段生活在健康植物组织内，但不对植物组织引起明显病害症状的真菌(TanRXandZouWX,2001)。内生真菌物种丰富多样，它们处于植物内部的特殊环境中，能够产生各种结构的次生代谢产物，其化合物的结构类型远远超出其植物代谢产物的范围，容易从中发现新颖结构的化合物，并且具有多种生物活性，因此内生真菌已成为发现新天然活性物质的重要资源，在农业和医药工业中具有重要的应用潜力(施琦渊等，2007)。
广藿香[Pogostemoncablin(Blanco)Benth.]为唇形科草本药用植物，对于该植物内生真菌次级代谢产物研究甚少，仅见少量报道，具有比较大的研究空间。Cochlioquinones类化合物具有丰富的生物活性，如抑制胆固醇酰基转移酶(FujiokaT.etal.1996)，植物根系生长的抑制作用(LimCH.etal.1996)，细胞毒性和抗血管生成活性(JungHJ.etal.2003)，对人趋化因子受体拮抗活性和抗菌活性(KoyamaN.etal.2005)。
发明内容：
本发明的第一个目的是提供一类具有抗肿瘤活性的cochlioquinones类新化合物。
本发明的cochlioquinones类新化合物，其特征在于，结构如式(I)所示：
1为化合物isocochlioquinoneD、2为化合物isocochlioquinoneE、3为化合物cochlioquinoneG、4为化合物cochlioquinoneH、5为化合物cochlioquinoneI。
本发明的第二个目的是提供化合物isocochlioquinoneD、isocochlioquinoneE、cochlioquinoneG、cochlioquinoneH和cochlioquinoneI的制备方法，其特征在于，所述的化合物isocochlioquinoneD、isocochlioquinoneE、cochlioquinoneG、cochlioquinoneH和cochlioquinoneI是从索氏平脐蠕孢(Bipolarissorokiniana)A606的发酵培养物中制备得到。
优选，具体步骤如下：
制备索氏平脐蠕孢(Bipolarissorokiniana)A606的发酵培养物，将发酵培养物的发酵液和菌丝体分离，发酵液经乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯层经浓缩后得到浸膏A；菌丝体先用甲醇浸提，甲醇浸提液再用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯层经浓缩后得到浸膏B；
浸膏A先用石油醚-乙酸乙酯从30:1,20:1,10:1,7:1,9:2,3:1,2:1,1:1,1:2v/v梯度洗脱，再用乙酸乙酯洗脱，最后用二氯甲烷:甲醇＝5:1v/v洗脱，收集石油醚:乙酸乙酯＝3:1v/v洗脱下来的馏分E16，收集石油醚：乙酸乙酯＝1:1v/v洗脱下来的馏分，将此馏分进行TLC薄层层析，以二氯甲烷：甲醇＝10：1v:v作为展开剂，收集Rf值是2.7/2.5的馏分E19，收集Rf值是2.3/3.5的馏分E20，收集Rf值是1.8/3.5的馏分E26；
浸膏B先用石油醚-乙酸乙酯从30:1,20:1,10:1,7:1,9:2,3:1,2:1,1:1,1:2v/v梯度洗脱，再用乙酸乙酯洗脱，最后用二氯甲烷:甲醇＝5:1v/v洗脱，收集石油醚:乙酸乙酯＝9:2v/v洗脱的馏分EJ14；
馏分E26以二氯甲烷:甲醇＝1:1v/v洗脱过SephadexLH-20，然后过反相硅胶柱层析，以体积比甲醇：水＝3:7-8:2梯度洗脱，收集甲醇：水＝7:3v/v梯度洗脱下来的馏分，过正相硅胶制备柱，以体积比正己烷:乙酸乙酯＝1:1等梯度洗脱，得到化合物isocochlioquinoneD；
馏分E20以二氯甲烷:甲醇＝1:1v/v洗脱过SephadexLH-20，然后过正相硅胶制备柱，以体积比正己烷：乙酸乙酯＝1:1等梯度洗脱，得到化合物isocochlioquinoneE；
馏分E19以二氯甲烷:甲醇＝1:1v/v洗脱过SephadexLH-20，然后过反相硅胶柱层析，以体积比甲醇:水＝3:7-6:4梯度洗脱，收集甲醇:水＝5:5v/v梯度洗脱下来的馏分，过正相硅胶制备柱，以体积比正己烷：乙酸乙酯＝1.5:1等梯度洗脱，得到化合物cochlioquinoneG；
馏分EJ14以二氯甲烷:甲醇＝1:1v/v洗脱过SephadexLH-20，然后过反相硅胶柱层析，以体积比甲醇：水＝7:3等梯度洗脱，收集洗脱下来的馏分，过正相硅胶制备柱，以体积比正己烷:乙酸乙酯＝2:1等梯度洗脱，得到化合物cochlioquinoneH；
馏分E16以二氯甲烷:甲醇＝1:1v/v洗脱过SephadexLH-20，然后过正相硅胶制备柱，以体积比正己烷:乙酸乙酯＝2:1等梯度洗脱，收集洗脱下来的馏分，过反相硅胶柱层析，以体积比甲醇:水＝40:60-60:40梯度洗脱，得到化合物cochlioquinoneI。
所述的制备索氏平脐蠕孢A606的发酵培养物是将活化的索氏平脐蠕孢A606接入马铃薯葡萄糖液体培养基中，28℃，200rpm，培养5d制得种子液，将种子液以体积比10％的接种量接入到马铃薯葡萄糖液体培养基中，28℃，200rpm，振荡培养7d，而制得发酵培养物。
本发明的第三个目的是提供索氏平脐蠕孢A606在制备化合物isocochlioquinoneD、isocochlioquinoneE、cochlioquinoneG、cochlioquinoneH或cochlioquinoneI中的应用。
本发明通过细胞毒活性测试发现，化合物isocochlioquinoneD、isocochlioquinoneE、cochlioquinoneG、cochlioquinoneH和cochlioquinoneI对肿瘤细胞株SF-268、MCF-7、NCI-H460和HePG-2均具有良好的抑制活性。其中，化合物cochlioquinoneH对肿瘤细胞株SF-268、MCF-7、NCI-H460和HePG-2的IC50值分别为6.4±0.2，8.6±0.2，15.5±0.7和7.6±0.1μM，阳性对照药物顺铂对上述四种肿瘤细胞株的IC50值分别为4.1±0.2，2.9±0.5，2.9±0.2和2.5±0.2μM。结果表明：本发明的化合物isocochlioquinoneD、isocochlioquinoneE、cochlioquinoneG、cochlioquinoneH和cochlioquinoneI具有显著的细胞毒活性，能用于制备抗肿瘤药物。
本发明的第四个目的是提供化合物isocochlioquinoneD、isocochlioquinoneE、cochlioquinoneG、cochlioquinoneH或cochlioquinoneI在制备抗肿瘤药物中的应用。
所述的抗肿瘤药物优选为抗神经胶质瘤、乳腺癌、非小细胞肺癌或肝癌的药物。
本发明的第五个目的是提供一种抗肿瘤药物，其特征在于，含有化合物isocochlioquinoneD、isocochlioquinoneE、cochlioquinoneG、cochlioquinoneH或cochlioquinoneI作为有效成分。
所述的抗肿瘤药物优选为抗神经胶质瘤、乳腺癌、非小细胞肺癌或肝癌的药物。
本发明从索氏平脐蠕孢A606的发酵培养物中制备分离得到五个新的化合物isocochlioquinoneD，isocochlioquinoneE，cochlioquinoneG，cochlioquinoneH和cochlioquinoneI，这五个化合物具有良好的抗肿瘤活性，可为新药研发提供化学实体。
索氏平脐蠕孢(Bipolarissorokiniana)A606于2015年7月8日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，地址：中国武汉市武汉大学，保藏编号为：CCTCCNO：M2015436。
附图说明：
图1是化合物1的1H-NMR谱；
图2是化合物1的13C-NMR谱；
图3是化合物1的质谱；
图4是化合物2的1H-NMR谱；
图5是化合物2的13C-NMR谱；
图6是化合物2的质谱；
图7是化合物3的1H-NMR谱；
图8是化合物3的13C-NMR谱；
图9是化合物3的质谱；
图10是化合物4的1H-NMR谱；
图11是化合物4的13C-NMR谱；
图12是化合物4的质谱；
图13是化合物5的1H-NMR谱；
图14是化合物5的13C-NMR谱；
图15是化合物5的质谱。
具体实施方式：
以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。
实施例1：
将活化的索氏平脐蠕孢(Bipolarissorokiniana)A606接入马铃薯葡萄糖(PD)液体培养基中，28℃，200rpm，培养5d制得种子液，将种子液以体积比10％的接种量接入到PD液体培养基中，28℃，200rpm，振荡培养7d，而制得发酵培养物。将该发酵培养物的发酵液和菌丝体分离，发酵液经乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯层经蒸馏浓缩后得到浸膏A；菌丝体先用甲醇浸提，甲醇浸提液再用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯层经蒸馏浓缩后得到浸膏B。两种浸膏A和B分别过硅胶柱，先用石油醚-乙酸乙酯从30:1,20:1,10:1,7:1,9:2,3:1,2:1,1:1,1:2(v/v)梯度洗脱，再用乙酸乙酯洗脱，最后用二氯甲烷:甲醇＝5:1(v/v)洗脱；根据TLC薄层色谱板的点板情况将浸膏A洗脱下来的组分进行划分，其中，馏分E16是在石油醚:乙酸乙酯＝3:1(v/v)的洗脱体系中洗脱下来；馏分E19、20和26均是在同洗脱体系(石油醚:乙酸乙酯＝1:1(v/v)下先后被洗脱下来，根据TLC色谱板中主斑点不同的情况下，对组分进行划分，在展开剂体系为二氯甲烷：甲醇＝10：1(v:v)条件下，馏分E19的Rf值是2.7/2.5、馏分E20的Rf值是2.3/3.5、馏分E26的Rf值是1.8/3.5；浸膏B被石油醚:乙酸乙酯＝9:2(v/v)洗脱的馏分EJ14。
馏分E26以二氯甲烷:甲醇＝1:1(v/v)洗脱过SephadexLH-20，然后过反相硅胶柱层析，以体积比甲醇：水＝3:7-8:2梯度洗脱，收集7:3(v/v)梯度洗脱下来的馏分，过正相硅胶制备柱，以体积比正己烷:乙酸乙酯＝1:1等梯度洗脱，得到化合物1(4.6mg)。
化合物1经质谱和核磁共振波谱分析(如图1、2、3所示)，其结构鉴定如下：
化合物1具有以下理化和波谱特性：黄色油状液体；[α]22 D+236.9(c0.1,EtOH)；UV(EtOH)λmax(logε)220(4.28),260(4.00),306(3.58)nm；IR(KBr)νmax3352-3275,2947,2935,2874,1661,1016cm–1。1H(500MHz)和13C(125MHz)NMR，见表1和表2；HRESIMSm/z560.2681[M-H]-(计算值为C30H42NO7S,560.2682)。1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ:9.53(1H,s,NH),4.95(1H,t,J＝10.2Hz,H-12),4.09(1H,q,J＝6.9Hz,H-5),3.37(1H,d,J＝14.7Hz,H-29a),3.25(1H,d,J＝14.7Hz,H-29b),3.25(1H,m,H-21),3.18(1H,dd,J＝12.0,3.8Hz,H-17),2.45(1H,m,H-3),2.42(1H,m,H-19a),1.95(1H,m,H-15a),1.89(1H,d,J＝10.2Hz,H-13),1.85(1H,m,H-15b),1.82(1H,m,H-19b),1.79(1H,m,H-20a),1.49(1H,m,H-20b),1.60(1H,m,H-16a),1.57(1H,m,H-2a),1.46(1H,m,H-16b),1.36(1H,m,H-2b),1.30(3H,d,J＝6.9Hz,H-27),1.23(3H,s,H-26),1.18(3H,s,H-24),1.17(3H,s,H-23),1.04(3H,s,H-25),0.91(3H,d,J＝6.9Hz,H-28),0.83(3H,t,J＝7.4Hz,H-1)。13CNMR(125MHz,CDCl3)δ:213.8(C-4),165.3(C-30),139.7(C-7),139.5(C-8),129.1(C-10),125.5(C-6),113.5(C-9),113.1(C-11),85.0(C-21),83.8(C-17),81.0(C-14),71.9(C-22),65.4(C-12),55.3(C-13),46.7(C-5),44.7(C-3),38.6(C-19),37.7(C-15),36.7(C-18),30.3(C-29),27.0(C-2),25.9(C-24),25.3(C-16),23.7(C-23),21.9(C-26),21.5(C-20),15.5(C-28),13.8(C-27),12.6(C-25),11.5(C-1)。经文献检索，该化合物为新化合物，命名为isocochlioquinoneD。
馏分E20以二氯甲烷:甲醇＝1:1(v/v)洗脱过SephadexLH-20，然后过正相硅胶制备柱，以体积比正己烷：乙酸乙酯＝1:1等梯度洗脱，得到化合物2(3.0mg)。
化合物2经质谱和核磁共振波谱分析(如图4、5、6所示)，其结构鉴定如下：
化合物2具有以下理化和波谱特性：黄色油状液体；[α]22 D+253.9(c0.1,EtOH)；UV(EtOH)λmax(logε)214(4.25),284(4.02),383(3.44)nm；IR(KBr)νmax3402,2972,2931,2870,1643,1634,1361,1188,1097,1047cm–1。1H(500MHz)和13C(125MHz)NMR，见表1和表2；HRESIMSm/z485.2543[M-H]-(计算值为C28H37O7,485.2539)。1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ:6.32(1H,s,H-12),3.95(1H,q,J＝6.8Hz,H-5),3.19(1H,d,J＝2.6Hz,H-21),3.17(1H,d,J＝3.4Hz,H-17),2.48(1H,dd,J＝13.1,6.8Hz,H-3),2.32(1H,dt,J＝13.2,3.1Hz,H-15a),2.12(1H,m,H-19a),2.03(1H,m,15b),1.84(1H,m,H-16a),1.74(1H,m,H-16b),1.73(1H,m,H-20a),1.62(1H,m,H-2a),1.60(1H,m,H-19b),1.59(1H,m,H-20b),1.57(3H,s,H-26),1.34(1H,m,H-2b),1.26(3H,d,J＝6.8Hz,H-27),1.20(3H,s,H-24),1.18(3H,s,H-23),1.12(3H,s,H-25),0.97(3H,d,J＝6.8Hz,H-28),0.83(3H,t,J＝7.4Hz,H-1)。13CNMR(125MHz,CDCl3)δ:212.0(C-4),181.0(C-10),180.5(C-7),155.2(C-11),149.1(C-13),146.5(C-8),129.0(C-6),115.8(C-9),110.1(C-12),84.5(C-21),82.0(C-14),81.0(C-17),71.8(C-22),44.4(C-3),41.1(C-4),38.6(C-18),37.8(C-15),34.8(C-19),27.3(C-26),27.0(C-2),26.1(C-16),24.5(C-24),23.8(C-23),21.6(C-20),20.2(C-25),15.6(C-28),14.1(C-27),11.3(C-1)。经文献检索，该化合物为新化合物，命名为isocochlioquinoneE。
馏分E19以二氯甲烷:甲醇＝1:1(v/v)洗脱过SephadexLH-20，然后过反相硅胶柱层析，以体积比甲醇:水＝3:7-6:4梯度洗脱，收集5:5(v/v)梯度洗脱下来的馏分，过正相硅胶制备柱，以体积比正己烷：乙酸乙酯＝1.5:1等梯度洗脱，得到化合物3(3.0mg)。
化合物3经质谱和核磁共振波谱分析(如图7、8、9所示)，其结构鉴定如下：
化合物3具有以下理化和波谱特性：红色油状液体；[α]22 D+142.5(c0.1,EtOH)；UV(EtOH)λmax(logε)203(4.22),238(4.42),294(4.25)nm；IR(KBr)νmax3483,3321,2957,2926,2855,1674,1622,1599,1205,1093cm–1。1H(500MHz)和13C(125MHz)NMR，见表1和表2；HRESIMSm/z468.2760[M-H2O+H]+(计算值为C28H38NO5,468.2750)。1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ:4.94(1H,t,J＝7.7Hz,H-12),3.25(1H,dd,J＝11.9,2.7Hz,H-21),3.19(1H,dd,J＝11.9,3.7Hz,H-17),2.83(1H,dq,J＝13.8,7.0Hz,H-3),2.41(1H,m,H-19a),2.21(3H,s,H-27),2.02(1H,m,H-15a),1.86(1H,m,H-15b),1.76(1H,m,16a),1.69(1H,m,H-13),1.64(2H,m,H-2a,H-20a),1.59(1H,m,H-16b),1.46(1H,m,H-19b),1.43(1H,m,H-20b),1.31(3H,s,H-26),1.25(3H,d,J＝7.0Hz,H-28),1.24(1H,d,J＝7.4Hz,H-2b),1.18(3H,s,H-24),1.16(3H,s,H-23),1.05(3H,s,H-25),0.83(3H,t,J＝7.4Hz,H-1)。13CNMR(125MHz,MeOD)δ:180.8(C-7),179.0(C-10),153.6(C-8),143.1(C-4),131.4(C-11),122.5(C-6),120.0(C-9),118.8(C-5),86.5(C-21),85.4(C-17),83.5(C-14),72.8(C-22),64.0(C-12),54.0(C-)13,39.9(C-19),38.6(C-15),37.7(C-18),33.7(C-3),30.5(C-2),26.3(C-16),25.5(C-24),22.5(C-20),21.1(C-26),20.2(C-28),13.1(C-25),12.5(C-1),10.0(C-27)。经文献检索，该化合物为新化合物，命名为cochlioquinoneG。
馏分EJ14以二氯甲烷:甲醇＝1:1(v/v)洗脱过SephadexLH-20，然后过反相硅胶柱层析，以体积比甲醇：水＝7:3等梯度洗脱，收集洗脱下来的馏分，过正相硅胶制备柱，以体积比正己烷:乙酸乙酯＝2:1等梯度洗脱，得到化合物4(6.3mg)。
化合物4经质谱和核磁共振波谱分析(如图10、11、12所示)，其结构鉴定如下：
化合物4具有以下理化和波谱特性：红色油状液体；[α]22 D+69.4(c0.1,EtOH)；UV(EtOH)λmax(logε)203(3.92),268(3.79)nm；IR(KBr)νmax3456,2961,2926,2855,1713,1651,1099,1095cm–1.1H(500MHz)和13C(125MHz)NMR，见表1和表2；HRESIMSm/z471.2753[M+H]+(计算值为C28H39O6,471.2747)。1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ:6.45(1H,d,J＝1.2Hz,H-11),6.29(1H,s,H-12),4.08(1H,m,H-5),3.16(1H,d,J＝3.3Hz,H-21),3.14(1H,d,J＝3.2Hz,H-17),2.67(1H,m,H-3),2.26(1H,dt,J＝13.3,3.3Hz,H-15a),2.04(1H,m,H-19a),1.98(1H,dd,J＝13.3,4.5Hz,H-15b),1.77(1H,m,H-16a),1.71(2H,m,H-2a,H-16b),1.65(1H,dd,J＝5.4,3.3Hz,H-20a),1.56(1H,dd,J＝4.7,2.2Hz,H-20b),1.53(1H,t,J＝3.3Hz,H-20b),1.50(3H,s,H-26),1.35(1H,m,H-2b),1.26(3H,d,J＝7.2Hz,H-27),1.16(3H,s,H-24),1.15(3H,s,H-23),1.11(3H,d,J＝6.9Hz,H-28),1.09(3H,s,H-25),0.83(3H,t,J＝7.4Hz,H-1)。13CNMR(125MHz,CDCl3)δ:212.6(C-4),184.4(C-10),181.0(C-7),148.7(C-8),147.7(C-13),146.0(C-6),132.4(C-11),117.5(C-9),110.5(C-12),84.4(C-21),81.5(C-17),80.9(C-14),71.8(C-22),47.3(C-3),43.0(C-5),38.6(C-18),37.7(C-15),34.7(C-19),27.0(C-26),26.0(C-23),25.7(C-2),24.4(C-16),23.7(C-24),21.5(C-20),20.1(C-25),16.5(C-28),14.8(C-27),11.7(C-1)。经文献检索，该化合物为新化合物，命名为cochlioquinoneH。
馏分E16以二氯甲烷:甲醇＝1:1(v/v)洗脱过SephadexLH-20，然后过正相硅胶制备柱，以体积比正己烷:乙酸乙酯＝2:1等梯度洗脱，收集洗脱下来的馏分，过反相硅胶柱层析，以体积比甲醇:水＝40:60-60:40梯度洗脱，得到化合物5(30.0mg)。
化合物5经质谱和核磁共振波谱分析(如图13、14、15所示)，其结构鉴定如下：
化合物5具有以下理化和波谱特性：红色油状液体；(c0.1,EtOH)；UV(EtOH)λmax(logε)211(4.27),271(4.17),325(3.87)nm；IR(KBr)νmax3410,2967,2934,2874,1715,1651,1608,1098,1082,1003cm–1.1H(500MHz)and13C(125MHz)NMR，见表1和表2；HRESIMSm/z523.2647[M+Na]+(计算值为C29H40O7Na，523.2672)。1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ:6.32(1H,s,H-12),3.95(1H,q,J＝6.8Hz,H-5),3.19(1H,d,J＝2.6Hz,H-21),3.17(1H,d,J＝3.4Hz,H-17),2.48(1H,dd,J＝13.1,6.8Hz,H-3),2.32(1H,dt,J＝13.2,3.1Hz,H-15a),2.12(1H,m,H-19a),2.03(1H,m,15b),1.84(1H,m,H-16a),1.74(1H,m,H-16b),1.73(1H,m,H-20a),1.62(1H,m,H-2a),1.60(1H,m,H-19b),1.59(1H,m,H-20b),1.57(3H,s,H-26),1.34(1H,m,H-2b),1.26(3H,d,J＝6.8Hz,H-27),1.20(3H,s,H-24),1.18(3H,s,H-23),1.12(3H,s,H-25),0.97(3H,d,J＝6.8Hz,H-28),0.83(3H,t,J＝7.4Hz,H-1)。13CNMR(125MHz,CDCl3)δ:212.0(C-4),181.0(C-10),180.5(C-7),155.2(C-11),149.1(C-13),146.5(C-8),129.0(C-6),115.8(C-9),110.1(C-12),84.5(C-21),82.0(C-14),81.0(C-17),71.8(C-22),44.4(C-3),41.1(C-4),38.6(C-18),37.8(C-15),34.8(C-19),27.3(C-26),27.0(C-2),26.1(C-16),24.5(C-24),23.8(C-23),21.6(C-20),20.2(C-25),15.6(C-28),14.1(C-27),11.3(C-1)。经文献检索，该化合物为新化合物，命名为cochlioquinoneI。
本发明所述的cochlioquinone类化合物：化合物isocochlioquinoneD、isocochlioquinoneE、cochlioquinoneG、cochlioquinoneH和cochlioquinoneI的具体结构式如下式(I)所示：
1为化合物isocochlioquinoneD、2为化合物isocochlioquinoneE、3为化合物cochlioquinoneG、4为化合物cochlioquinoneH、5为化合物cochlioquinoneI。
实施例2：
采用SRB法(SkehanP.etal.1990)测试化合物isocochlioquinoneD，isocochlioquinoneE，cochlioquinoneG，cochlioquinoneH和cochlioquinoneI的肿瘤细胞毒活性。
所述的肿瘤细胞株为神经胶质瘤细胞SF-268、乳腺癌细胞MCF-7、非小细胞肺癌细胞NCI-H460和肝癌细胞HePG-2。
1、实验方法：将本发明制备的化合物isocochlioquinoneD，isocochlioquinoneE，cochlioquinoneG，cochlioquinoneH和cochlioquinoneI用二甲基亚砜(DMSO)溶解得浓度为10mmol/L的母液，再用RPMI-1640培养基稀释至所需浓度，阳性对照药物为顺铂。
取对数生长期的NCI-H460、SF-268、MCF-7和HePG-2细胞，用胰酶消化，台盼蓝染色计数，台盼蓝排斥实验检测细胞活力大于95％后，用新鲜RPMI-1640培养基调整细胞浓度为3×104个/mL，细胞接种于96孔板，每孔加入180μL的细胞悬液，并设3个空白孔调零，于37℃、5％CO2培养箱中培养24h。待细胞贴壁后，每孔加入20μL一定浓度的所述化合物溶液，阴性对照加20μLRPMI-1640培养基，以顺铂作阳性对照。置37℃、5％CO2培养箱中培养72h后，加入50μL50％冷三氯醋酸固定细胞，4℃放置1h后用蒸馏水洗涤5次，空气中自然干燥。然后加入由1％冰醋酸配制的浓度为4mg/mL的SRB溶液100μL/孔，室温中染色30min，去上清，用1％冰醋酸洗涤5次。最后加入200μL/孔10mmol/mL的Tris溶液溶解，用酶标仪测定570nm处的吸光值(A)，用以下公式计算药物对细胞生长的抑制率：细胞生长抑制率(％)＝(1-A样品组/A对照 组)×100％。
2、实验结果：本发明制备的化合物isocochlioquinoneD，isocochlioquinoneE，cochlioquinoneG，cochlioquinoneH和cochlioquinoneI和阳性对照药物顺铂对肿瘤细胞株SF-268、MCF-7、NCI-H460和HePG-2的IC50值见表1。结果表明：本发明的化合物isocochlioquinoneD，isocochlioquinoneE，cochlioquinoneG，cochlioquinoneH和cochlioquinoneI具有显著的细胞毒活性，因此，本发明的实现为研究与开发新的抗肿瘤药物提供了候选化合物，为开发利用广藿香内生真菌资源提供了科学依据。
表1化合物1-5对肿瘤细胞的抑制活性

Claims (9)

1.cochlioquinones类新化合物，其特征在于，结构如式(I)所示：
1为化合物isocochlioquinoneD、2为化合物isocochlioquinoneE、3为化合物cochlioquinoneG、4为化合物cochlioquinoneH、5为化合物cochlioquinoneI。
2.一种化合物isocochlioquinoneD、isocochlioquinoneE、cochlioquinoneG、cochlioquinoneH和cochlioquinoneI的制备方法，其特征在于，所述的化合物isocochlioquinoneD、isocochlioquinoneE、cochlioquinoneG、cochlioquinoneH和cochlioquinoneI是从索氏平脐蠕孢(Bipolarissorokiniana)A606的发酵培养物中制备得到。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：
制备索氏平脐蠕孢(Bipolarissorokiniana)A606的发酵培养物，将发酵培养物的发酵液和菌丝体分离，发酵液经乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯层经浓缩后得到浸膏A；菌丝体先用甲醇浸提，甲醇浸提液再用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯层经浓缩后得到浸膏B；
浸膏A先用石油醚-乙酸乙酯从30:1,20:1,10:1,7:1,9:2,3:1,2:1,1:1,1:2v/v梯度洗脱，再用乙酸乙酯洗脱，最后用二氯甲烷:甲醇＝5:1v/v洗脱，收集石油醚:乙酸乙酯＝3:1v/v洗脱下来的馏分E16，收集石油醚：乙酸乙酯＝1:1v/v洗脱下来的馏分，将此馏分进行TLC薄层层析，以二氯甲烷：甲醇＝10：1v:v作为展开剂，收集Rf值是2.7/2.5的馏分E19，收集Rf值是2.3/3.5的馏分E20，收集Rf值是1.8/3.5的馏分E26；
浸膏B先用石油醚-乙酸乙酯从30:1,20:1,10:1,7:1,9:2,3:1,2:1,1:1,1:2v/v梯度洗脱，再用乙酸乙酯洗脱，最后用二氯甲烷:甲醇＝5:1v/v洗脱，收集石油醚:乙酸乙酯＝9:2v/v洗脱的馏分EJ14；
馏分E26以二氯甲烷:甲醇＝1:1v/v洗脱过SephadexLH-20，然后过反相硅胶柱层析，以体积比甲醇：水＝3:7-8:2梯度洗脱，收集甲醇：水＝7:3v/v梯度洗脱下来的馏分，过正相硅胶制备柱，以体积比正己烷:乙酸乙酯＝1:1等梯度洗脱，得到化合物isocochlioquinoneD；
馏分E20以二氯甲烷:甲醇＝1:1v/v洗脱过SephadexLH-20，然后过正相硅胶制备柱，以体积比正己烷：乙酸乙酯＝1:1等梯度洗脱，得到化合物isocochlioquinoneE；
馏分E19以二氯甲烷:甲醇＝1:1v/v洗脱过SephadexLH-20，然后过反相硅胶柱层析，以体积比甲醇:水＝3:7-6:4梯度洗脱，收集甲醇:水＝5:5v/v梯度洗脱下来的馏分，过正相硅胶制备柱，以体积比正己烷：乙酸乙酯＝1.5:1等梯度洗脱，得到化合物cochlioquinoneG；
馏分EJ14以二氯甲烷:甲醇＝1:1v/v洗脱过SephadexLH-20，然后过反相硅胶柱层析，以体积比甲醇：水＝7:3等梯度洗脱，收集洗脱下来的馏分，过正相硅胶制备柱，以体积比正己烷:乙酸乙酯＝2:1等梯度洗脱，得到化合物cochlioquinoneH；
馏分E16以二氯甲烷:甲醇＝1:1v/v洗脱过SephadexLH-20，然后过正相硅胶制备柱，以体积比正己烷:乙酸乙酯＝2:1等梯度洗脱，收集洗脱下来的馏分，过反相硅胶柱层析，以体积比甲醇:水＝40:60-60:40梯度洗脱，得到化合物cochlioquinoneI。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述的制备索氏平脐蠕孢A606的发酵培养物是将活化的索氏平脐蠕孢A606接入马铃薯葡萄糖液体培养基中，28℃，200rpm，培养5d制得种子液，将种子液以体积比10％的接种量接入到马铃薯葡萄糖液体培养基中，28℃，200rpm，振荡培养7d，而制得发酵培养物。
5.索氏平脐蠕孢A606在制备化合物isocochlioquinoneD、isocochlioquinoneE、cochlioquinoneG、cochlioquinoneH或cochlioquinoneI中的应用。
6.权利要求1所述的化合物isocochlioquinoneD、isocochlioquinoneE、cochlioquinoneG、cochlioquinoneH或cochlioquinoneI在制备抗肿瘤药物中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述的抗肿瘤药物为抗神经胶质瘤、乳腺癌、非小细胞肺癌或肝癌的药物。
8.一种抗肿瘤药物，其特征在于，含有化合物isocochlioquinoneD、isocochlioquinoneE、cochlioquinoneG、cochlioquinoneH或cochlioquinoneI作为有效成分。
9.根据权利要求8所述的抗肿瘤药物，其特征在于，所述的抗肿瘤药物为抗神经胶质瘤、乳腺癌、非小细胞肺癌或肝癌的药物。
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