CN105749254A - 用于治疗血管性痴呆的干细胞制剂及其制备方法和应用 - Google Patents

用于治疗血管性痴呆的干细胞制剂及其制备方法和应用 Download PDF

Info

Publication number
CN105749254A
CN105749254A CN201610109284.7A CN201610109284A CN105749254A CN 105749254 A CN105749254 A CN 105749254A CN 201610109284 A CN201610109284 A CN 201610109284A CN 105749254 A CN105749254 A CN 105749254A
Authority
CN
China
Prior art keywords
stem cell
vascular dementia
concentration
growth factor
mesenchymal stem
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201610109284.7A
Other languages
English (en)
Inventor
曾宪卓
鲁菲
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
ISTEM REGENERATIVE MEDICINE SCI-TECH Co Ltd
Original Assignee
ISTEM REGENERATIVE MEDICINE SCI-TECH Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by ISTEM REGENERATIVE MEDICINE SCI-TECH Co Ltd filed Critical ISTEM REGENERATIVE MEDICINE SCI-TECH Co Ltd
Priority to CN201610109284.7A priority Critical patent/CN105749254A/zh
Publication of CN105749254A publication Critical patent/CN105749254A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/28—Bone marrow; Haematopoietic stem cells; Mesenchymal stem cells of any origin, e.g. adipose-derived stem cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A61K31/7064—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines
    • A61K31/7068—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines having oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. cytidine, cytidylic acid
    • A61K31/7072—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines having oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. cytidine, cytidylic acid having two oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. uridine, uridylic acid, thymidine, zidovudine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
    • A61K38/1808—Epidermal growth factor [EGF] urogastrone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
    • A61K38/1825—Fibroblast growth factor [FGF]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/38—Albumins
    • A61K38/385—Serum albumin

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明涉及一种用于治疗血管性痴呆的干细胞制剂，包括骨髓间充质干细胞、Brdu、表皮生长因子、成纤维细胞生长因子和人血白蛋白磷酸缓冲液。通过利用骨髓间充质干细胞能够分化成神经元样细胞的潜能，结合表皮生长因子、成纤维细胞生长因子和人血白蛋白等提高骨髓间充质干细胞的细胞活性及存活率，进而提高骨髓间充质干细胞的转化率，使得骨髓间充质干细胞分化为新生神经元细胞替代损伤细胞，重建神经环路，恢复神经功能，从而实现治疗血管性痴呆症的目的。

Description

用于治疗血管性痴呆的干细胞制剂及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及细胞工程技术领域，特别涉及一种用于治疗血管性痴呆的干细胞制剂及其制备方法和应用。
背景技术
血管性痴呆(VaD)是老年期痴呆的主要类型之一，是由一系列脑血管因素导致脑组织损害引起的以认知功能障碍为特征的综合征。临床主要表现为认知功能减退，严重者精神行为异常，影响患者的生活质量。随着社会老龄化的到来和脑血管病发病率的增高，血管性痴呆的发病率逐渐上升，而目前血管性痴呆的治疗尚无针对性特效药物。
干细胞是一类具有分化潜能的原始细胞，在适当条件下可以向特定的成熟组织细胞分化。具有神经细胞分化潜能的细胞主要有三种类型：胚胎干细胞、神经干细胞和成体细胞。胚胎干细胞存在一定的社会伦理道德问题，神经干细胞的获得需体外分离动物胚胎或成熟中枢神经系统的细胞，并利用含有特殊生长因子的条件培养基维持神经干细胞的未分化状态，操作繁琐，且神经干细胞复杂的定位决定它很难大量获得并应用于临床，而成体干细胞一旦加以适合神经分化的刺激，在体内、体外均可分化为神经细胞。成体干细胞包括神经干细胞、造血干细胞、骨髓间充质干细胞、表皮干细胞等。在成体干细胞中，骨髓间充质干细胞由于其取材方便、来源丰富而成为用于移植治疗中枢神经系统疾病的研究热点之一。
骨髓间充质干细胞(BMSCs)是存在于骨髓中的一类非造血干细胞，其具有强大的增殖和多向分化的潜能，免疫原性低，并能在体内外分化为神经元样细胞、肌细胞和成骨细胞等，对于治疗神经系统疾病的研究有着重要的意义。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是，针对现有技术中用于治疗血管性痴呆的药物疗效差等缺陷，提供一种能够提高血管性痴呆疗效的用于治疗血管性痴呆的干细胞制剂及其制备方法。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种用于治疗血管性痴呆的干细胞制剂，包括骨髓间充质干细胞、Brdu、表皮生长因子、成纤维细胞生长因子和人血白蛋白磷酸缓冲液。
在本发明提供的用于治疗血管性痴呆的干细胞制剂中，所述干细胞制剂中，所述干细胞制剂中，所述骨髓间充质干细胞的浓度为(1～3)×106个/ml。
在本发明提供的用于治疗血管性痴呆的干细胞制剂中，所述干细胞制剂中，
Brdu的浓度为5～15μmol/L、
表皮生长因子的浓度为2～10μg/ml、
成纤维细胞生长因子的浓度为2～20μg/ml，
以及人血白蛋白缓冲液的质量分数为0.5～2.0％。
在本发明提供的用于治疗血管性痴呆的干细胞制剂中，所述干细胞制剂中，
骨髓间充质干细胞的浓度为2×106个/ml、
Brdu的浓度为10μmol/L、
表皮生长因子的浓度为6μg/ml、
成纤维细胞生长因子的浓度为11μg/ml，
以及人血白蛋白缓冲液的质量分数为1％。
在本发明提供的用于治疗血管性痴呆的干细胞制剂中，所述人血白蛋白缓冲液是由人血清白蛋白原液和PBS缓冲液混合制成的。
在本发明提供的用于治疗血管性痴呆的干细胞制剂中，所述人血白蛋白缓冲液中，人血清白蛋白原液和PBS缓冲液的体积比为(0.5～2)：1。
本发明进一步保护上述用于治疗血管性痴呆的干细胞制剂的制备方法，
获取骨髓间充质干细胞的过程包括以下步骤：
采集骨髓，肝素抗凝，在percoll分离液中离心，取中层单核细胞，PBS缓冲液离心洗涤，弃上清液，即收获原代骨髓间充质干细胞；
将原代骨髓间充质干细胞浓度调整至1×106～1×108个/25ml，加入血清培养基进行培养；当细胞生长至融合时，PBS漂洗，加入胰蛋白酶，见胞质回缩，细胞间隙增大后，加入含胎牛血清的DMEM培养基终止消化，按1：2～1：3比例接种进行传代培养至细胞生长到融合，继续传代至获得第3～5代中任一代骨髓间充质干细胞，胰酶消化后，离心清洗。
在本发明提供的用于治疗血管性痴呆的干细胞制剂的制备方法中，所述血清培养基中添加有10-6～10-8mol/L的氢化可的松、80-120U/ml的青霉素及80-120mg/ml的链霉素。
本发明进一步保护上述干细胞制剂在制备治疗血管性痴呆的药物中的应用。
实施本发明提供的用于治疗血管性痴呆的干细胞制剂，可以达到以下有益效果：通过利用骨髓间充质干细胞能够分化成神经元样细胞的潜能，结合表皮生长因子、成纤维细胞生长因子和人血白蛋白等提高骨髓间充质干细胞的细胞活性及存活率，进而提高骨髓间充质干细胞的转化率，使得骨髓间充质干细胞分化为新生神经元细胞替代损伤细胞，重建神经环路，恢复神经功能，从而实现治疗血管性痴呆症的目的。
具体实施方式
本发明提供的用于治疗血管性痴呆的干细胞制剂，包括骨髓间充质干细胞、Brdu、表皮生长因子、成纤维细胞生长因子和人血白蛋白磷酸缓冲液。
在干细胞制剂中，骨髓间充质干细胞的浓度为(1～3)×106个/ml，Brdu的浓度为5～15μmol/L、表皮生长因子的浓度为2～10μg/ml、成纤维细胞生长因子的浓度为2～20μg/ml，以及人血白蛋白缓冲液的质量分数为0.5～2.0％。
其中，骨髓间充质干细胞可来源于骨髓、脐带、胎盘等，来源广泛、扩增潜能较强，横向分化能力较强，可逃避免疫识别和抑制免疫反应等，具有其他干细胞无法比拟的优势，如细胞活力较好、扩增能力稳定、无免疫原性、无致瘤性等优点。在本发明中，优先采用第3～5代中任一代骨髓间充质干细胞，具有细胞活性较强，存活率较高且生长增殖旺盛等优势。骨髓间充质干细胞植入体内后可激活成年哺乳动物脑中的神经干细胞，使其发生迁移、增殖和分化，自我修复脑实质细胞；骨髓间充质干细胞分化为新生神经元替代损伤细胞，重建神经环路，从而恢复神经功能。骨髓间充质干细胞能够分泌白细胞介素，巨噬细胞克隆刺激因子以及干细胞因子等，这些细胞因子可以促进神经前体细胞生存、生长及分化，促进内源性的神经干细胞向成熟神经细胞分化；同时，骨髓间充质干细胞还可以分泌上调内源性修复机制的蛋白，骨髓间充质干细胞通过这些蛋白激活中枢神经系统内未充分发挥功能的神经元，使其分泌BDNF而促进神经功能恢复。
进一步地，Brdu(5-溴脱氧尿嘧啶核苷)是DNA前体胸腺嘧啶核苷类似物，通过竞争掺入S期细胞单链DNA核苷酸序列替代胸腺嘧啶，能够促进合成DNA，提高骨髓间充质干细胞的增殖率。
表皮生长因子与表皮生长因子受体结合后，酪氨酸自动磷酸化，激活了酪氨酸蛋白激酶，细胞内蛋白磷酸化，导致表皮生长因子-表皮生长因子受体复合物向细胞内传递信息，促进骨髓间充质干细胞增殖的同时，促进间充质干细胞向神经细胞方向分化。
成纤维细胞生长因子是一种神经营养因子，能保护神经元，促进神经生长，而且成纤维细胞生长因子还是生物活性很强的促分裂因子，可以改善衰老造成的学习及记忆下降。
人血白蛋白磷酸缓冲液由人血清白蛋白原液和PBS缓冲液混合制成的；其中，人血清白蛋白原液和PBS缓冲液的体积比为(0.5～2)：1。人血白蛋白能够为骨髓间充质干细胞的增殖分化提供必须的营养物质，以提高其增殖分化率及细胞存活率和细胞活性；结合PBS缓冲液，调节干细胞制剂的PH值，以降低干细胞制剂的免疫排斥反应。
本发明提供的治疗血管性痴呆的干细胞制剂的制备方法，包括以下步骤：
S1、骨髓间充质干细胞的获取过程包括以下步骤：
采集骨髓，肝素抗凝，在percoll分离液中离心，取中层单核细胞，PBS缓冲液离心洗涤，弃上清液，即收获原代骨髓间充质干细胞；
将步骤S1中获得的原代骨髓间充质干细胞浓度调整至1×106～1×108个/25ml，加入血清培养基进行培养；当细胞生长至融合时，PBS漂洗，加入胰蛋白酶，见胞质回缩，细胞间隙增大后，加入含胎牛血清的DMEM培养基终止消化，按1：2～1：3比例接种进行传代培养至细胞生长到融合，继续传代至获得第3～5代中任一代骨髓间充质干细胞，胰酶消化后，离心清洗。
其中，血清培养基中添加有10-6～10-8mol/L的氢化可的松、80-120U/ml的青霉素及80-120mg/ml的链霉素。氢化可的松能够参与细胞的糖代谢、脂类代谢等，调节骨髓间充质干细胞的增值，促进骨髓间充质干细胞功能表达。青霉素能够阻碍细菌的细胞壁合成，导致细胞泄漏死亡，从而抑制细菌的生长；链霉素能够作用于细菌的核糖体，阻碍蛋白翻译，从而抑制细菌生长；自然环境下，不考虑人为产生的抗药性，对青霉素不敏感的绝大多数微生物对链霉素敏感，反之亦然；因此，最为优选地是将青霉素和链霉素搭配使用能够控制几乎全部常见的细菌，从而能够尽量避免细菌对骨髓间充质干细胞的生长及活性造成的不良影响。因此，采用该血清培养基培养间充质干细胞不仅可以促进骨髓间充质干细胞生长和增殖，提高骨髓间充质干细胞活性，而且可避免培养过程中产生的细菌对细胞活性造成的影响。
S2、将Brdu、表皮生长因子、成纤维细胞生长因子和人血白蛋白磷酸缓冲液的混合物逐滴加入上述骨髓间充质干细胞中，边添加边混合，混合均匀后，冻存，待用。
另外，本发明进一步保护上述干细胞制剂在制备治疗血管性痴呆的药物中的应用。
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
实施例1
本发明提供的用于治疗血管性痴呆的干细胞制剂，包括以下成分；且细胞制剂中，各成分浓度如下：
第五代骨髓间充质干细胞的浓度为2×106个/ml、
Brdu的浓度为10μmol/L、
表皮生长因子的浓度为6μg/ml、
成纤维细胞生长因子的浓度为11μg/ml，
以及人血白蛋白缓冲液的质量分数为1％。
上述干细胞制剂的制备方法为：
S1、获取骨髓间充质干细胞
S1a、获取原代骨髓间充质干细胞；
取4周龄健康SD大鼠2只，10％水合氯醛(0.3ml/100g)腹腔注射麻醉，无菌条件取两侧股骨及胫骨，PBS清洗3次，用添加有青-链霉素的L-DMEM培养基冲洗骨髓腔，反复吹打，冲出骨髓，按1：2的比例加在密度为1.073g/ml的percoll分离液上，2300rpm转速下离心30min，取中层单核细胞，加入PBS缓冲液，1000rpm离心10min，洗涤3次，弃上清液，即获得原代骨髓间充质干细胞。
S2a、原代骨髓间充质干细胞的传代培养；
将步骤S1a中所获得的骨髓间充质干细胞调整至1×107个/培养瓶(25ml)密度，并添加血清培养基进行培养，其中，血清培养基为含有10％胎牛血清、10-6mol/L的氢化可的松、100U/ml的青霉素及100mg/ml链霉素的低糖DMEM培养基，葡萄糖的浓度为1500-4500mg/l。当细胞生长到95％以上完全融合时，倾去旧培养基，用PBS液漂洗2～3次，倾去PBS液，加入含0.02％EDTA的0.25％的胰蛋白酶，加入量以使胰蛋白酶可以完全覆盖瓶底的细胞为准。将培养瓶置于倒置显微镜下观察，见胞质回缩，细胞间隙增大后，立即加入含10％胎牛血清的低糖DMEM培养终止消化，吸管顺序轻轻吹打瓶底，倒置显微镜下观察细胞完全脱壁后，按1：2～1：3比例传代接种于25ml培养瓶，放置于37℃、5％CO2、95％湿度的培养箱中培养，直至细胞生长到几乎完全融合时，再次进行传代，至获取第五代骨髓间充质干细胞，用0.25％胰蛋白酶消化后，于4℃、1000r/m条件下离心10min，用PBS清洗细胞3次。
S2、将Brdu、表皮生长因子、成纤维细胞生长因子和人血白蛋白磷酸缓冲液的混合物逐滴加入上述骨髓间充质干细胞中，边添加边混合，混合均匀后，分装到预充注射器中，放到-80℃冰箱中冻存，待用。
实施例2
本实施例提供的用于治疗血管性痴呆的干细胞制剂，包括以下成分，且各成分在细胞制剂中的浓度如下：
第五代骨髓间充质干细胞的浓度为1×106个/ml、
Brdu的浓度为5μmol/L、
表皮生长因子的浓度为2μg/ml、
成纤维细胞生长因子的浓度为2μg/ml，
以及人血白蛋白缓冲液的质量分数为0.5％。
该干细胞制剂的制备方法大致与实施例1相同。
实施例3
本实施例提供的用于治疗血管性痴呆的干细胞制剂，包括以下成分，且各成分在细胞制剂中的浓度如下：
第五代骨髓间充质干细胞的浓度为3×106个/ml、
Brdu的浓度为15μmol/L、
表皮生长因子的浓度为10μg/ml、
成纤维细胞生长因子的浓度为20μg/ml，
以及人血白蛋白缓冲液的质量分数为2.0％。
该干细胞制剂的制备方法大致与实施例1相同。
为进一步验证本发明提供的用于治疗血管性痴呆的干细胞制剂的显著效果，通过以下实验及实验数据进行具体说明。
实验动物分组和模型构建
入组大鼠均适应性喂养1周后，术前12h禁食，4h禁水。模型组大鼠采用改良四血管法制备VaD模型，大鼠术前12h禁食，4h禁水。大鼠称重后用10％水合氯醛麻醉后俯卧位固定，备皮，碘伏和75％乙醇消毒，行背侧颈正中切口，暴露双侧第一颈椎横突翼小孔，用直径0.5mm电凝针插入双侧翼小孔凝闭双侧椎动脉。逐层整理好皮下组织，局部伤口缝合前，涂以适量青霉素粉以防止感染，间断缝合皮肤。24h后行颈前正中切口，分离各层组织暴露双侧颈动脉后穿线待用，拉起穿线用微动脉夹夹闭双侧颈总动脉5min，共夹闭3次，每次间隔1h。
造模后1个月，采用Morris水迷宫检测大鼠的学习记忆能力。第1～4d进行定向航行试验:每日将大鼠按Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ象限顺序从各入水点靠池壁放入水中，记录60s内大鼠从入水到爬上平台(固定于第Ⅳ象限)所需时间即逃避潜伏期。每只大鼠每天训练4次。第5d撤去平台，进行空间探索实验，记录大鼠第1次穿越平台区域的时间以及60s内总的穿越平台区域次数。学习记忆下降的模型组大鼠为造模成功。
本发明实施例1提供的干细胞制剂组大鼠侧脑室注射移植BMSCs密度为2×106个/ml，以1μl/min速度匀速注射1ml。对照组为空白的1％人血白蛋白磷酸缓冲液1ml。
认知功能检测于BMSCs注射后30d，采用Moris水迷宫试验检测大鼠的空间学习和记忆能力，步骤同上。
下表1数据为穿越平台所用时间(s)：
天数 干细胞制剂组 空白对照
1d 23.27±8.71 26.09±5.90
5d 19.55±4.21 24.81±9.05
10d 15.04±6.53 21.94±8.91
15d 12.06±2.91 18.64±5.31
20d 9.70±5.28 15.22±4.04
30d 8.01±1.39 15.29±3.01
表1为大鼠穿越平台所用时间(单位：秒)
实验结果：由表1中数据可知，干细胞制剂组大鼠随治疗天数的增加，其穿越平台所需时间越短，且短于空白对照组，由此说明经本发明提供的干细胞制剂对大鼠血管性痴呆症具有显著疗效。
综上所述，本发明提供的用于治疗血管性痴呆的干细胞制剂，通过利用骨髓间充质干细胞能够分化成神经元样细胞的潜能，结合表皮生长因子、成纤维细胞生长因子和人血白蛋白等提高骨髓间充质干细胞的细胞活性及存活率，进而提高骨髓间充质干细胞的转化率，进而实现治疗血管性痴呆症的目的。
以上对本发明的实施例进行了描述，但是本发明并不局限于上述的具体实施方式，上述的具体实施方式仅仅是示意性的，而不是限制性的，本领域的普通技术人员在本发明的启示下，在不脱离本发明宗旨和权利要求所保护的范围情况下，还可做出很多形式，这些均属于本发明的保护之内。

Claims (9)

1.一种用于治疗血管性痴呆的干细胞制剂，其特征在于，包括骨髓间充质干细胞、Brdu、表皮生长因子、成纤维细胞生长因子和人血白蛋白磷酸缓冲液。
2.根据权利要求1所述的用于治疗血管性痴呆的干细胞制剂，其特征在于，所述干细胞制剂中，所述骨髓间充质干细胞的浓度为(1～3)×106个/ml。
3.根据权利要求1或2所述的用于治疗血管性痴呆的干细胞制剂，其特征在于，所述干细胞制剂中，
Brdu的浓度为5～15μmol/L、
表皮生长因子的浓度为2～10μg/ml、
成纤维细胞生长因子的浓度为2～20μg/ml，
以及人血白蛋白缓冲液的质量分数为0.5～2.0％。
4.根据权利要求1所述的用于治疗血管性痴呆的干细胞制剂，其特征在于，所述干细胞制剂中，
骨髓间充质干细胞的浓度为2×106个/ml、
Brdu的浓度为10μmol/L、
表皮生长因子的浓度为6μg/ml、
成纤维细胞生长因子的浓度为11μg/ml，
以及人血白蛋白缓冲液的质量分数为1％。
5.根据权利要求1所述的用于治疗血管性痴呆的干细胞制剂，其特征在于，所述人血白蛋白缓冲液是由人血清白蛋白原液和PBS缓冲液混合制成的。
6.根据权利要求5所述的用于治疗血管性痴呆的干细胞制剂，其特征在于，所述人血白蛋白缓冲液中，人血清白蛋白原液和PBS缓冲液的体积比为(0.5～2)：1。
7.一种如权利要求1～6任一项所述的用于治疗血管性痴呆的干细胞制剂的制备方法，其特征在于，
获取骨髓间充质干细胞的过程包括以下步骤：
采集骨髓，肝素抗凝，在percoll分离液中离心，取中层单核细胞，PBS缓冲液离心洗涤，弃上清液，即收获原代骨髓间充质干细胞；
将原代骨髓间充质干细胞浓度调整至1×106～1×108个/25ml，加入血清培养基进行培养；当细胞生长至融合时，PBS漂洗，加入胰蛋白酶，见胞质回缩，细胞间隙增大后，加入含胎牛血清的DMEM培养基终止消化，按1：2～1：3比例接种进行传代培养至细胞生长到融合，继续传代至获得第3～5代中任一代骨髓间充质干细胞，胰酶消化后，离心清洗。
8.根据权利要求7所述的用于治疗血管性痴呆的干细胞制剂的制备方法，其特征在于，所述血清培养基中添加有10-6～10-8mol/L的氢化可的松、80-120U/ml的青霉素及80-120mg/ml的链霉素。
9.根据权利要求1～8任一项所述的干细胞制剂在制备治疗血管性痴呆的药物中的应用。
CN201610109284.7A 2016-02-28 2016-02-28 用于治疗血管性痴呆的干细胞制剂及其制备方法和应用 Pending CN105749254A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610109284.7A CN105749254A (zh) 2016-02-28 2016-02-28 用于治疗血管性痴呆的干细胞制剂及其制备方法和应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610109284.7A CN105749254A (zh) 2016-02-28 2016-02-28 用于治疗血管性痴呆的干细胞制剂及其制备方法和应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN105749254A true CN105749254A (zh) 2016-07-13

Family

ID=56331474

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610109284.7A Pending CN105749254A (zh) 2016-02-28 2016-02-28 用于治疗血管性痴呆的干细胞制剂及其制备方法和应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN105749254A (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106619722A (zh) * 2016-12-05 2017-05-10 上海安集协康生物技术股份有限公司 一种治疗脑部损伤类疾病的神经干细胞注射液
CN106880838A (zh) * 2017-03-17 2017-06-23 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 一种干细胞制剂及其制备方法和应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101420964A (zh) * 2006-03-07 2009-04-29 吉塔·什罗夫 包含人胚胎干细胞和其衍生物的组合物、其使用方法和制备方法
CN103037872A (zh) * 2010-03-26 2013-04-10 国立大学法人名古屋大学 损伤部位治疗用组合物
US20140105871A1 (en) * 2011-05-19 2014-04-17 Ariel University Research And Development Company, Ltd. Use Of Mesenchymal Stem Cells For The Improvement Of Affective And Cognitive Function

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101420964A (zh) * 2006-03-07 2009-04-29 吉塔·什罗夫 包含人胚胎干细胞和其衍生物的组合物、其使用方法和制备方法
CN103037872A (zh) * 2010-03-26 2013-04-10 国立大学法人名古屋大学 损伤部位治疗用组合物
US20140105871A1 (en) * 2011-05-19 2014-04-17 Ariel University Research And Development Company, Ltd. Use Of Mesenchymal Stem Cells For The Improvement Of Affective And Cognitive Function

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
汪大琨等: "储运条件对脐带间充质干细胞存活率的影响", 《中国组织工程研究》 *
黄敬: "细胞移植及药物治疗血管性痴呆的实验研究", 《中国博士学位论文全文数据库 医药卫生科技辑》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106619722A (zh) * 2016-12-05 2017-05-10 上海安集协康生物技术股份有限公司 一种治疗脑部损伤类疾病的神经干细胞注射液
CN106880838A (zh) * 2017-03-17 2017-06-23 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 一种干细胞制剂及其制备方法和应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Toma et al. Human mesenchymal stem cells differentiate to a cardiomyocyte phenotype in the adult murine heart
Saxena et al. Vascularized three‐dimensional skeletal muscle tissue‐engineering
CN107028980A (zh) 用于治疗心脏疾病的药物组合物
US20060247195A1 (en) Method of altering cell properties by administering rna
KR20110106302A (ko) 암 치료를 위한 세포외 기질 조성물
CN108865986B (zh) 用于修复关节软骨损伤/缺损的间充质干细胞制剂及其制备方法和应用
RU2394593C2 (ru) Имплантируемая нейроэндопротезная система, способ ее получения и способ проведения реконструктивной нейрохирургической операции
KR20140040696A (ko) 간엽줄기세포 및 면역조절 t 세포를 유효성분으로 포함하는 면역질환의 예방 또는 치료용 세포치료제 조성물
De Siena et al. Omentum-derived stromal cells improve myocardial regeneration in pig post-infarcted heart through a potent paracrine mechanism
Xing et al. Engineered myocardial tissues constructed in vivo using cardiomyocyte-like cells derived from bone marrow mesenchymal stem cells in rats
CN107460158A (zh) 一种诱导脐带间充质干细胞分化为形成胰岛素的方法
CN105395571A (zh) 间充质干细胞分泌的外泌小体治疗心肌梗死的新用途
Dong et al. The distribution of transplanted umbilical cord mesenchymal stem cells in large blood vessel of experimental design with traumatic brain injury
CN105412986B (zh) 小肠黏膜下层载药补片及其制备方法和应用
CN105749254A (zh) 用于治疗血管性痴呆的干细胞制剂及其制备方法和应用
CN113897337A (zh) 一种调节巨噬细胞极化状态的方法
US11007229B2 (en) Method for inducing transdifferentiation of fibroblasts into chondrocytes
JP5579270B2 (ja) 膵島と脂肪組織由来幹細胞を利用した膵島移植
JP2019026573A (ja) 育毛剤
Hu et al. The impact of bone marrow-derived mesenchymal stem cells on neovascularisation in rats with brain injury
CN106399318A (zh) 一种氧调控性碱性成纤维细胞生长因子修饰细胞的方法
US20180256643A1 (en) Method of ex vivo cellular growth
CN111184743B (zh) 多类型混合细胞在心肌梗死细胞治疗中的应用
WO2021029651A1 (ko) Ｍａｔｒｉｌｉｎ-3 전처리 줄기세포 스페로이드 생산 방법, 및 그에 의해 도출된 연골질환 예방 또는 치료용 조성물
KR101415809B1 (ko) 제대혈 유래 중간엽 줄기세포의 세포외기질을 유효성분으로 함유하는 암치료용 약제학적 조성물

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
CB02 Change of applicant information

Address after: 518057, room 2, building 10, Shenzhen biological incubation center, No. 302, Nanshan District hi tech, Shenzhen, Guangdong

Applicant after: ISTEM REGENERATIVE MEDICINE SCI-TECH CO., LTD.

Address before: 518057, Guangdong Province, Nanshan District high tech Zone, South Ring Road, No. 29, No. 02 building, international students, building No. 15

Applicant before: ISTEM REGENERATIVE MEDICINE SCI-TECH CO., LTD.

COR Change of bibliographic data
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20160713