CN105722834A - 酪氨酸蛋白激酶抑制剂 - Google Patents

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Abstract

本申请公开了式I的化合物：其中所有变量如本文所述定义，该化合物抑制Btk。本文公开的化合物用于调节Btk活性并且治疗与过度Btk活性相关的疾病。所述化合物还用于治疗异常B?细胞活化导致的肿瘤、自身免疫疾病和炎性疾病。还公开了包含式I的化合物和至少一种载体、稀释剂或赋形剂的组合物。

Description

酪氨酸蛋白激酶抑制剂
发明领域
本发明涉及新化合物在抑制Btk并且用于治疗由异常B-细胞活化导致的肿瘤、自身免疫和炎性疾病中的用途。
发明背景
蛋白质激酶组成人类酶的最大家族之一并且通过添加磷酸基团到蛋白质上来调节许多不同的信号传导过程(T.Hunter，Cell 1987 50：823-829)。特别地，酪氨酸激酶磷酸化蛋白质在酪氨酸残基的酚部分。酪氨酸激酶家族包括控制细胞生长、迁移和分化的成员。异常的激酶活性已经涉及许多人类疾病，包括癌症、自身免疫疾病和炎性疾病。由于蛋白质激酶属于细胞信号传导的关键调节剂，它们提供用小分子激酶抑制剂来调节细胞功能的目标，并且因此成为了良好的药物设计靶标。除了激酶介导的疾病过程的治疗，激酶活性的选择性和有效抑制剂还可用于研究细胞信号传导过程和鉴定其他具有治疗意义的细胞靶标。
关于B细胞在自身免疫和/或炎性疾病的发病机制中的关键作用存在良好的证据。消耗B细胞的基于蛋白质的治疗剂如Rituxan针对自身抗体导致的炎性疾病如类风湿性关节炎是有效的(Rastetter等人Annu Rev Med2004 55：477)。因此，在B-细胞活化中发挥作用的蛋白质激酶的抑制剂对于B细胞介导的疾病病理如自身抗体生成应该是有用的治疗剂。
通过B-细胞受体(BCR)的信号传导控制一系列B细胞应答，包括增殖和分化成成熟的抗体生成细胞。BCR是B-细胞活性的关键调节点并且异常的信号传导可以导致失调的B-细胞增殖和病原性自身抗体的形成，其导致多种自身免疫疾病和/或炎性疾病。酪氨酸蛋白激酶(Btk)是在BCR的膜近端和紧接下游的非-BCR相关的激酶。Btk的缺乏已经显示阻断BCR信号传导，并且因此Btk的抑制可以是阻断B细胞介导的疾病过程的有用的治疗方法。
Btk是酪氨酸激酶Tec家族的成员，并且显示是早期B细胞发育以及成熟B细胞活化和存活的关键调节剂(Khan等人Immunity 1995 3：283；Ellmeier等人J.Exp.Med.2000192：1611)。人中的Btk突变导致病症x染色体连锁性无γ球蛋白血症(XLA)(Rosen等人NewEng.J.Med.1995 333：431和Lindvall等人Immunol.Rev.2005 203：200中综述)。这些患者是免疫受损的，并且显示受损的B细胞成熟，降低的免疫球蛋白和外周B细胞水平，减少的不依赖T细胞的免疫应答以及在BCR刺激后的减弱的钙动员。
关于Btk在自身免疫疾病和炎性疾病中的作用的证据也已经由Btk-缺陷型小鼠模型提供。在系统性红斑狼疮(SLE)的临床前鼠模型中，Btk缺陷型小鼠显示疾病进展的显著改善。此外，Btk-缺陷型小鼠对胶原诱导的关节炎具有抗性(Jansson和HolmdahlClin.Exp.Immunol.1993 94：459)。已经证明选择性Btk抑制剂在小鼠关节炎模型中的剂量依赖性功效(Z.Pan等人，Chem.Med Chem.2007 2：58-61)。
Btk还由除了B-细胞之外可能涉及疾病过程的细胞表达。例如，Btk由肥大细胞表达并且Btk缺陷型骨髓来源的肥大细胞显示受损的抗原诱导的脱粒(Iwaki等人J.Biol.Chem.2005280：40261)。这显示Btk可以用于治疗病理性肥大细胞反应如变态反应和哮喘。此外，其中缺乏Btk活性的来自XLA患者的单核细胞显示在刺激后减少的TNFα生成(Horwood等人J Exp Med 197：1603，2003)。因此，TNFα介导的炎症可以由小分子Btk抑制剂调节。此外，已经报道Btk在细胞凋亡中发挥作用(Islam和Smith Immunol.Rev.2000178：49)，并且因此Btk抑制剂对于治疗某些B-细胞淋巴瘤和白血病将是有用的(Feldhahn等人J.Exp.Med.2005 201：1837)。
发明概述
本申请提供式I的Btk抑制剂化合物，它的使用方法，如本文下面所述：
本申请提供式I的化合物，
其中：
R1是低级烷基、苯基、环烷基或吡啶基，其任选地被一个或多个R1’取代；
R1’各自独立地是低级烷基、卤素、-C(＝O)NH2或氰基；
R2不存在、为卤素、低级烷氧基、羟基或低级烷基；
R3不存在、为卤素、低级烷氧基、羟基或低级烷基；
R4不存在或为杂环烷基低级链烯基；
X是CH或N；且
Y是CH或N；
或其药学上可接受的盐。
本申请提供了治疗炎性疾病和/或自身免疫病症的方法，包括对有此需要的患者施用治疗有效量的式I的Btk抑制剂化合物。
本申请提供了药物组合物，其包含式I的化合物与至少一种药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。
发明详述
定义
如本文使用的，短语“一(a)”或“一(an)”种实体是指该实体的一种或多种；例如，一种化合物指一种或多种化合物或至少一种化合物。因此，术语“一种(a)”(或“一种(an)”)，“一种或多种”和“至少一种”可以在本文中可交换使用。
短语“如上文定义”是指如发明概述或最宽权利要求中提供的每个基团的最宽定义。在下面提供的所有的其他实施方案中，可以在每个实施方案中存在并且没有明确定义的取代基保留在发明概述中提供的最宽定义。
如在本说明书中使用的，不管在过渡性短语中或在权利要求的主体中，术语″包含″和″包括″应当被解释为具有开放式的含义。即，该术语应当被解释为与短语″至少具有″或″至少包括″同义。当在方法的上下文中使用时，术语″包括″是指该方法至少包括所述的步骤，但是可以包括另外的步骤。当在化合物或组合物的上下文中使用时，术语″包含″是指该化合物或组合物至少包括所述的特征或组分，但是还可以包括另外的特征或组分。
如本文中所用的，除非另外具体指出，单词″或″的使用是“和/或”的“包括”意思，而不是“或/或”的“排它”意思。
本文中使用的术语″独立地″是指变量被用于任何一种情况，而不考虑在相同的化合物内存在或不存在具有相同或不同定义的变量。因此，在其中R″出现两次并且被定义为″独立地为碳或氮″的化合物中，两个R″可以是碳，两个R″可以是氮，或者一个R″可以是碳并且另一个是氮。
在描绘或描述本发明中采用的或要求保护的化合物的任何部分或式中，任何变量出现多于一次时，其在每一次出现时的定义独立于其在每一次另外出现时的定义。此外，取代基和/或变量的组合只有在这些化合物导致稳定的化合物的情况下才是允许的。
在键末端处的符号″*″或划过键的″------″分别是指官能团或其他化学部分与其作为一部分的分子的余下部分的连接点。因此，例如：
MeC(＝O)OR4其中
划入环体系中的键(与在明确的顶点处连接相反的)是指该键可以连接到任何适宜的环原子上。
如本文中所用的术语“任选的”或“任选地”是指随后描述的事件或情形可以、但不是必须发生，并且是指该描述包括事件或情形发生的情况，和它不发生的情况。例如，“任选取代的”是指任选取代的部分可以结合氢原子或取代基。
短语“任选的键”是指该键可以存在或可以不存在，并且是指该描述包括单键、双键或叁键。如果取代基被指定为是″键″或″不存在″，则连接到该取代基上的原子直接连接。
本文使用的术语″约″是指大致地、在...的附近、粗略地或大约。当术语″约″与一个数值范围一起使用时，它通过将边界延伸高于和低于所列出的数值而改变该范围。通常，本文使用的术语″约″将数值改变到高于和低于所述的值至20％的方差的程度。
式I的某些化合物可以显示出互变异构现象。互变异构的化合物可以以两种或更多种可以相互转化的种类存在。质子转移的互变异构体由共价结合的氢原子在两个原子之间的迁移得到。互变异构体通常存在着平衡并且分离单个互变异构体的尝试通常制备出其化学和物理性质与化合物的混合物一致的混合物。平衡的位置取决于在分子内的化学特征。例如，在许多脂族醛和酮如乙醛的情况下，酮形式占优势，而在酚类中，烯醇形式占优势。常见的质子转移的互变异构体包括酮/烯醇 酰胺/亚氨酸和脒互变异构体。后两种在杂芳基和杂环中是特别常见的，并且本发明包括化合物的所有互变异构形式。
本文使用的技术和科学术语具有本发明所属技术领域内的技术人员所通常理解的含义，除非另外定义。本文参考本领域技术人员已知的各种方法和材料。列出药理学的通用原理的标准参考书包括Goodman和Gilman′s The Pharmacological Basis ofTherapeutics，第10版，McGraw Hill Companies Inc.，New York(2001)。可以将本领域技术人员已知的任何适宜材料和/或方法用于实施本发明。但是，描述的是优选的材料和方法。在下面的说明和实施例中涉及的材料、试剂等可获自商业来源，除非另外指出。
本文所述的定义可以被附加以形成化学上相关的组合，如“杂烷基芳基”、“卤代烷基杂芳基”、“芳基烷基杂环基”、“烷基羰基”、“烷氧基烷基”等。当术语“烷基”被用作另一个术语之后的后缀时，如在“苯基烷基”或“羟烷基”中时，它意在表示如上定义的烷基，其被一至两个选自所述的另外具体标名的基团的取代基取代。因此，例如“苯基烷基”是指具有1至2个苯基取代基的烷基，并且因此包括苄基、苯基乙基和联苯。“烷基氨基烷基”是具有1至2个烷基氨基取代基的烷基。“羟烷基″包括2-羟基乙基、2-羟基丙基、1-(羟甲基)-2-甲基丙基、2-羟基丁基、2，3-二羟基丁基、2-(羟甲基)、3-羟基丙基等。因而，如本文中所用的，术语“羟烷基”用来定义下面定义的杂烷基的子集。术语-(芳)烷基是指未取代的烷基或芳烷基。术语(杂(hetero))芳基或(杂(het))芳基是指芳基或杂芳基。
如本文中所用的术语“螺环烷基”是指螺环的环烷基，诸如，例如，螺[3.3]庚烷。如本文中所用的术语螺杂环烷基是指螺环的杂环烷基，诸如，例如，2，6-二氮杂螺[3.3]庚烷。
如本文中所用的术语“酰基”表示式-C(＝O)R的基团，其中R是氢或如本文中定义的低级烷基。如本文中所用的术语″烷基羰基″表示式-C(＝O)R的基团，其中R是如本文中定义的烷基。术语C1-6酰基是指基团-C(＝O)R，其含1-6个碳原子。如本文中所用的术语″芳基羰基″表示式C(＝O)R的基团，其中R是芳基；如本文中所用的术语″苯甲酰基″是其中R是苯基的″芳基羰基″。
如本文中所用的术语“酯”表示式-C(＝O)OR的基团，其中R是如本文所定义的低级烷基。
如本文中所用的术语“烷基”表示含有1至10个碳原子的非支链或支链的饱和一价烃残基。术语“低级烷基”表示含有1至6个碳原子的直链或支链烃残基。如本文中所用的″C1-10烷基″是指由1至10个碳构成的烷基。烷基的实例包括但不限于低级烷基，包括甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基或戊基、异戊基、新戊基、己基、庚基和辛基。
当术语“烷基”被用作另一个术语之后的后缀时，如在“苯基烷基”或“羟烷基”中时，它意在表示如上定义的烷基，其被一至两个选自所述的另外具体标名的基团的取代基取代。因此，例如“苯基烷基”表示基团R′R″-，其中R′是苯基，并且R″是如本文中定义的亚烷基，其中理解的是苯基烷基部分的连接点将在亚烷基上。芳基烷基的实例包括但是不限于苄基、苯基乙基、3-苯基丙基。术语“芳基烷基”或″芳烷基″被类似地解释，不同之处在于R′是芳基。术语″(杂)芳基烷基″或″(杂)芳烷基″被类似地解释，不同之处在于R′任选是芳基或杂芳基。
术语“卤代烷基”或“卤代-低级烷基”或“低级卤代烷基”是指含1至6个碳原子的直链或支链烃残基，其中一个或多个碳原子被一个或多个卤原子取代。
如本文中所用的术语″亚烷基(alkylene或alkylenyl)″表示1至10个碳原子的二价饱和直链烃基(例如(CH2)n)或2至10个碳原子的支链饱和二价烃基(例如-CHMe-或-CH2CH(i-Pr)CH2-)，除非另外指出。除了在亚甲基的情况下之外，亚烷基的开放价态不连接到相同的原子上。亚烷基的实例包括但是不限于：亚甲基、亚乙基、亚丙基、2-甲基-亚丙基、1，1-二甲基-亚乙基、亚丁基、2-乙基亚丁基。
如本文中所用的术语″烷氧基″表示-O-烷基，其中烷基如上定义，诸如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、己氧基，包括它们的异构体。如本文中所用的″低级烷氧基″表示具有如上面定义的″低级烷基″基团的烷氧基。如本文中所用的″C1-10烷氧基″是指-O-烷基，其中烷基是C1-10。
术语“PCy3”是指被三个环状部分三取代的膦。
术语“卤代烷氧基”或“卤代-低级烷氧基”或“低级卤代烷氧基”是指低级烷氧基，其中一个或多个碳原子被一个或多个卤原子取代。
如本文中所用的术语″羟烷基″表示如本文中定义的烷基，其中在不同碳原子上的1至3个氢原子被羟基替代。
如本文中所用的术语″烷基磺酰基″和″芳基磺酰基″是指式-S(＝O)2R的基团，其中R分别是烷基或芳基，并且烷基和芳基如本文中定义。如本文中所用的术语“杂烷基磺酰基”表示式-S(＝O)2R的基团，其中R是如本文中定义的“杂烷基”。
如本文中所用的术语″烷基磺酰氨基″和″芳基磺酰氨基″是指式-NR′S(＝O)2R的基团，其中R分别是烷基或芳基，R′是氢或C1-3烷基，并且烷基和芳基如本文中所定义。
如本文中所用的术语“环烷基”是指含有3至8个碳原子的饱和碳环，即环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基或环辛基。如本文中所用的″C3-7环烷基″是指由在碳环中的3至7个碳构成的环烷基。
如本文中所用的术语羧基-烷基是指烷基部分，其中一个氢原子已经被羧基替代，其中应理解，杂烷基的连接点是通过碳原子。术语“羧基(carboxy或carboxyl)”是指-CO2H部分。
如本文中所用的术语″杂芳基”或″杂芳族″是指5至12个环原子的单环或双环基团，其具有至少一个芳族或部分不饱和的环，每个环含有4至8个原子，结合有一个或多个N、O或S杂原子，其余环原子是碳，其中理解的是杂芳基的连接点将在芳族或部分不饱和的环上。如本领域中技术人员周知的，杂芳基环比它们的全碳副本具有更低的芳族特性。因此，对于本发明的目的而言，杂芳基只需要具有一定程度的芳族特性。杂芳基部分的实例包括具有5至6个环原子和1至3个杂原子的单环芳族杂环，包括但不限于，吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、噁嗪基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、噁唑基、4，5-二氢-噁唑基、5，6-二氢-4H-[1，3]噁唑基、异噁唑、噻唑、异噻唑、三唑啉、噻二唑和噁二唑啉(oxadiaxoline)，它们可以任选被1个或多个，优选1或2个取代基取代，所述的取代基选自羟基、氰基、烷基、烷氧基、硫代、低级卤代烷氧基、烷硫基、卤素、低级卤代烷基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、卤素、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、氨基烷基、烷基氨基烷基和二烷基氨基烷基、硝基、烷氧基羰基和氨基甲酰基、烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、芳基氨基甲酰基、烷基羰基氨基和芳基羰基氨基。双环部分的实例包括但不限于喹啉基、异喹啉基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并噁唑、苯并异噁唑、苯并噻唑、萘啶基、5，6，7，8-四氢-[1，6]萘啶基和苯并异噻唑。双环部分可以在任一环上任选取代，但是连接点在含有杂原子的环上。
如本文中所用的术语″杂环基″、″杂环烷基″或″杂环″表示由一个或多个环，优选1至2个环(包括螺环系统)组成的一价饱和环状基团，每个环3至8个原子，其结合有一个或多个环杂原子(选自N，O或S(O)0-2)，并且其可以任选独立地被一个或多个、优选1个或2个取代基取代，所述的取代基选自羟基、氧代、氰基、低级烷基、低级烷氧基、低级卤代烷氧基、烷硫基、卤素、低级卤代烷基、羟基烷基、硝基、烷氧基羰基、氨基、烷基氨基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、烷基氨基磺酰基、芳基氨基磺酰基、烷基磺酰基氨基、芳基磺酰基氨基、烷基氨基羰基、芳基氨基羰基、烷基羰基氨基、芳基羰基氨基及其离子形式，除非另外指出。杂环基的实例包括但不限于吗啉基、哌嗪基、哌啶基、氮杂环丁烷基、吡咯烷基、六氢氮杂基、氧杂环丁烷基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、噁唑烷基、噻唑烷基、异噁唑烷基、四氢吡喃基、硫代吗啉基、奎宁环基和咪唑啉基及其离子形式。实例还可以是双环的，诸如，例如，3，8-二氮杂-双环[3.2.1]辛烷、2，5-二氮杂-双环[2.2.2]辛烷或八氢-吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪。
Btk抑制剂
本申请提供式I的化合物，
其中：
R1是低级烷基、苯基、环烷基或吡啶基，其任选地被一个或多个R1’取代；
R1’各自独立地是低级烷基、卤素、-C(＝O)NH2或氰基；
R2不存在、为卤素、低级烷氧基、羟基或低级烷基；
R3不存在、为卤素、低级烷氧基、羟基或低级烷基；
R4不存在或为杂环烷基低级链烯基；
X是CH或N；且
Y是CH或N；
或其药学上可接受的盐。
本申请提供式I的化合物，其中Y是CH。
本申请提供上述式I的化合物的任一种，其中X是N。
本申请可选地提供上述式I的化合物的任一种，其中X是CH。
本申请提供上述式I的化合物的任一种，其中R4是吗啉基亚甲基。
本申请可选地提供上述式I的化合物的任一种，其中R4不存在。
本申请提供上述式I的化合物的任一种，其中R2不存在。
本申请可选地提供上述式I的化合物的任一种，其中R2是卤素。
本申请可选地提供上述式I的化合物的任一种，其中R2是低级烷基。
本申请可选地提供上述式I的化合物的任一种，其中R2是低级烷氧基。
本申请可选地提供上述式I的化合物的任一种，其中R2是羟基。
本申请提供上述式I的化合物的任一种，其中R3是卤素、低级烷氧基或羟基。
本申请提供上述式I的化合物的任一种，其中R1是苯基，其任选地被一个或多个R1’取代。
本申请可选地提供上述式I的化合物的任一种，其中R1是低级烷基、环烷基或杂芳基，其任选地被一个或多个R1’取代。
本申请提供式I的化合物，其选自：
[5-氨基-1-(3-氟-4-苯氧基-苯基)-1H-吡唑-4-基]-(1H-吲哚-2-基)-甲酮；
[5-氨基-1-(6-苯氧基-吡啶-3-基)-1H-吡唑-4-基]-(1H-吲哚-2-基)-甲酮；
{5-氨基-1-[4-(吡啶-2-基氧基)-苯基]-1H-吡唑-4-基}-(1H-吲哚-2-基)-甲酮；
{5-氨基-1-[4-(吡啶-3-基氧基)-苯基]-1H-吡唑-4-基}-(1H-吲哚-2-基)-甲酮；
5-氨基-1-(3-氯-4-苯氧基-苯基)-1H-吡唑-4-基]-(1H-吲哚-2-基)-甲酮；
{5-氨基-1-[4-(3，4-二氟-苯氧基)-苯基]-1H-吡唑-4-基}-(1H-吲哚-2-基)-甲酮；
[5-氨基-1-(3-甲氧基-4-苯氧基-苯基)-1H-吡唑-4-基]-(1H-吲哚-2-基)-甲酮；
[5-氨基-1-(3-羟基-4-苯氧基-苯基)-1H-吡唑-4-基]-(1H-吲哚-2-基)-甲酮；
[5-氨基-1-(2-甲氧基-4-苯氧基-苯基)-1H-吡唑-4-基]-(1H-吲哚-2-基)-甲酮；
[5-氨基-1-(2-羟基-4-苯氧基-苯基)-1H-吡唑-4-基]-(1H-吲哚-2-基)-甲酮；
[5-氨基-1-(4-异丙氧基-苯基)-1H-吡唑-4-基]-(1H-吲哚-2-基)-甲酮；
[5-氨基-1-(4-环戊氧基-苯基)-1H-吡唑-4-基]-(1H-吲哚-2-基)-甲酮；
{5-氨基-1-[4-(2，2-二甲基-丙氧基)-苯基]-1H-吡唑-4-基}-(1H-吲哚-2-基)-甲酮；
{5-氨基-1-[4-(2，3-二氟-苯氧基)-2-甲基-苯基]-1H-吡唑-4-基}-(1H-吲哚-2-基)-甲酮；
2-{4-[5-氨基-4-(1H-吲哚-2-羰基)-吡唑-1-基]-3-甲基-苯氧基}-苄腈；
3-{4-[5-氨基-4-(1H-吲哚-2-羰基)-吡唑-1-基]-3-氯-苯氧基}-苄腈；
3-{4-[5-氨基-4-(1H-苯并咪唑-2-羰基)-吡唑-1-基]-3-甲基-苯氧基}-苯甲酰胺；
{5-氨基-1-[4-(2，3-二氟-苯氧基)-2-甲基-苯基]-1H-吡唑-4-基}-(1H-苯并咪唑-2-基)-甲酮；
[5-氨基-1-(4-苯氧基-苯基)-1H-吡唑-4-基]-(6-吗啉-4-基甲基-1H-吲哚-2-基)-甲酮；和
3-{4-[5-氨基-4-(6-吗啉-4-基甲基-1H-吲哚-2-羰基)-吡唑-1-基]-3-氯-苯氧基}-苄腈。
本申请提供了治疗炎性和/或自身免疫病症的方法，包括对有此需要的患者施用治疗有效量的式I的化合物。
本申请提供了治疗类风湿性关节炎的方法，包括对有此需要的患者施用治疗有效量的式I的化合物。
本申请提供了治疗哮喘的方法，包括对有此需要的患者施用治疗有效量的式I的化合物。
本申请提供了治疗癌症的方法，包括对有此需要的患者施用治疗有效量的式I的化合物。
本申请提供了包含式I的化合物的药物组合物。
本申请提供了药物组合物，其包含式I的化合物与至少一种药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。
本申请提供了式I的化合物在制备用于治疗炎性障碍的药物中的用途。
本申请提供了式I的化合物在制备用于治疗自身免疫障碍的药物中的用途。
本申请提供了式I的化合物在制备用于治疗类风湿性关节炎的药物中的用途。
本申请提供了式I的化合物在制备用于治疗哮喘的药物中的用途。
本申请提供了如上所述的化合物在治疗炎性和/或自身免疫病症中的用途。
本申请提供了如上所述的化合物在治疗类风湿性关节炎中的用途。
本申请提供了如上所述的化合物在治疗哮喘中的用途。
本申请提供了如上所述的用于治疗炎性和/或自身免疫病症的化合物。
本申请提供了如上所述的用于治疗类风湿性关节炎的化合物。
本申请提供了如上所述的用于治疗哮喘的化合物。
本申请提供了如本文所述的化合物、方法或组合物。
本申请提供了如上所述的本发明。
化合物和制备
在下面的表中提供由本发明包含并且在本发明范围内的代表性化合物的实例。提供下面的这些实施例和制备以使本领域的技术人员能够更清楚地理解并且实践本发明。它们不应当被认为是限制本发明的范围，而仅为示例性的并且是其代表。
通常，本申请中使用的命名法基于AUTONOMTM v.4.0，一种用于产生IUPAC系统命名的Beilstein Institute计算机化的系统。如果在画出的结构和给出该结构的名称之间有差异，则画出的结构将给予更大的权重。此外，如果结构或结构的一部分的立体化学没有用例如粗体或虚线指示，则所述结构或结构的一部分将解释为包含其全部立体异构体。
表I描述了式I的化合物的实例：
表I.
一般合成方案
可以通过任意常规方式制备本发明的化合物。将用于合成这些化合物的适合的方法提供在实施例中。通常，可以根据如下方案制备本发明的化合物。
方案1
可以使用方案1中概括的路径制备式14的化合物，其中R1和R2如上述式I的种类中所述。根据该方法，可以将为商购的式1的化合物4-溴甲基-苯甲酸甲酯转化成苄胺，得到式2的化合物。还原该酯，得到苄醇衍生物4，可以将其氧化成醛衍生物5。与叠氮基-乙酸乙酯反应，得到丙烯酸甲酯衍生物7，使其环化，得到相应的吲哚衍生物8。用标准保护基例如甲苯磺酰基(Ts)或2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基(SEM)保护吲哚环，得到式9的化合物。然后使酯9与衍生自乙腈的阴离子反应，得到式10的氰基乙酰基衍生物。与二甲基甲酰胺二甲基乙缩醛反应，得到丙烯腈衍生物11，使其与式12的苯基肼衍生物反应，得到式13的氨基吡唑。然后除去保护基，得到本发明式14的化合物。
可以用碱例如二异丙基乙胺在惰性溶剂例如四氢呋喃中在约0℃的温度下在吗啉的存在下处理式1的化合物4-溴甲基-苯甲酸甲酯。将该混合物在室温搅拌1小时至几小时的反应时间。用于这类反应的条件可以在文献中找到，例如在Moore，Jason L.等人Arkivoc，2005，6，287-292中。
可以通过在溶剂例如四氢呋喃和甲醇的混合物中用还原剂例如硼氢化钠处理可以将式3的化合物便利地转化成式4的苄醇衍生物。可以将该混合物在回流状态下搅拌2小时至几小时的反应时间。
可以通过用氧化剂例如二氧化锰在溶剂例如二氯甲烷中处理将式4的化合物便利地转化成式5的醛衍生物。可以将该混合物在室温下搅拌几小时。
醛5与叠氮基-乙酸乙酯6之间的缩合反应可以在约0℃温度下在甲醇钠的存在下使用溶剂例如甲醇进行。可以将该混合物搅拌30分钟或几小时的反应时间。
可以使用Hemetsberger-Knittel合成以丙烯酸甲酯衍生物7为原料形成吲哚8。使用溶剂例如二甲苯或甲苯，将该反应混合物高温加热(90℃或以上)几小时。可以利用文献中的其它方法进行环化。参见，Stokes等人，J.Am.Chem.Soc.2007，129，7500-7501描述了使用全氟丁酸铑(II)作为催化剂的柔和方法。还参见，Tetrahedron Letters 2009，50，1708-1709。或者，可以使用不同的合成方法合成吲哚环。就综述而言，参见Chem.Rev.2006，106，2875-2911。
可以便利地用碱例如氢化钠在惰性溶剂例如四氢呋喃中在约0℃的温度下处理式8的化合物，生成相应的阴离子。将其用保护基例如甲苯磺酰氯或2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基氯处理，将该混合物在室温搅拌约1小时，得到式9的衍生物。
可以通过用乙腈和强碱例如二异丙基氨基锂或六甲基二硅氮化锂在溶剂例如四氢呋喃中在低温、例如在约-78℃下处理将式9的化合物便利地转化成式10的氰基乙酰基衍生物。用于这类反应的条件可以在专利文献中找到，例如在Taka，N.等人US 20120208811第163页中。
可以通过用N，N-二甲基甲酰胺二甲基乙缩醛在惰性溶剂例如芳香烃(例如甲苯)或四氢呋喃中在约室温下处理将式10的化合物转化成式11的丙烯腈衍生物。用于这类反应的条件可以在专利文献中找到，例如在Taka，N.等人US 20120208811第132页中。
可以通过在约溶剂的回流温度下在醇溶剂例如甲醇或乙醇或异丙醇中用式12的中间体(其中R1和R2如上述式I的种类中所述)处理将式11的丙烯腈衍生物转化成式13的氨基吡唑衍生物。用于这类反应的条件可以在专利文献中找到，例如在Taka，N.等人US20120208811第94页中。
可以使用任意常规方法将式13的化合物转化成本发明式14的化合物。例如，在甲苯磺酰基的保护基的情况中，可以通过用碱例如碳酸铯和低级醇例如甲醇的混合物在溶剂例如四氢呋喃中在约室温至约该混合物的回流温度之间的温度下处理式13的化合物进行该反应。可以用于这类反应的条件的实例可以在文献中找到，例如在Zhang，B和Wee.A.G.H.Org.Biomol.Chem.2012，10，4597-4608补充性情报；Alam，M.等人US20110071150第54页；和Taka，N.等人US 20120208811第55页中。例如，在SEM保护基的情况中，可以通过用氟化四丁基铵和乙二胺的混合物在溶剂例如四氢呋喃或二甲基甲酰胺中在约50℃至约该混合物的回流温度之间的温度下处理式13的化合物进行该反应。可以用于这类反应的条件的实例可以在文献中找到，例如在Barrett，T.D.等人WO 2004007463第182页；Kerns，J.K.等人WO 2007062318第47页；和Degnan，A.P.等人US 20090018132第119页中。或者，可以用浓盐酸在醇溶剂(例如甲醇、乙醇或异丙醇)或在四氢呋喃中在回流温度下处理式14的化合物，得到本发明式14的化合物。可以用于这类反应的条件的实例可以在文献中找到，例如在Muneau，Y.等人US 20080262020第24页中。
方案2
可以根据方案2制备式12的中间体，其中R1和R2如上述式I的种类中所述。式15的化合物与式16的苯酚衍生物进行亲核芳香取代反应，得到式17的化合物。还原式18的化合物上的硝基基团，然后重氮化并且还原，得到式12的芳基-肼衍生物。
可以用式16的苯酚在碱例如碳酸钾或碳酸铯的存在下、在惰性溶剂例如二甲基甲酰胺中在100℃-约150℃的温度下、任选地在微波照射下处理4-氯-1-硝基-苯衍生物，例如化合物15，得到式17的硝基化合物。可以用于这类反应的具体条件的实例可以在文献中找到，例如在Chee，G.-L等人US 20040266738第5页；和Cui，S.-L.等人Synlett 2004，1829-1831中。
可以使用有机合成领域普通技术人员众所周知的各种方法还原式17的化合物上的硝基基团。许多这些方法概括在Larock，R.C.Comprehensive Organic TransformationsJohn Wiley&Sons Inc.NY 1999，pp.823等中。一种便利的方法在于用氢气在贵金属催化剂例如披钯碳的存在下在溶剂如醇(例如甲醇或乙醇)中在约1个大气压至约3个大气压的氢气气氛中在约室温下处理式17的化合物。可以用于这类反应的具体条件的实例可以在文献中找到，例如在Chee，G.-L等人US 20040266738第5页；和Schoenafinger，K.等人US20030236288第18页中。
可以使用任意常规方法使式17的化合物上的苯胺基团重氮化和还原。例如，该反应便利地通过用亚硝酸钠水溶液在无机酸例如盐酸的存在下在低于约5℃且优选低于约0℃的温度下处理式18的化合物、然后在约相同温度下添加还原剂例如氯化锡(II)或连二亚硫酸钠进行。可以用于这类反应的具体条件的实例可以在文献中找到，例如在Wipf，P.和Qiming，J.WO2012078859第47页；Rewolinski，M.V.等人WO 2009055721第82页；和Schoenafinger，K.等人US 20030236288第18页中。
方案3
可以使用方案1中概括的路径制备式7的化合物，其中R1和R2如上述式I的种类中所述。根据该方法，可以使用保护基例如甲苯磺酰基(Ts)或2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基(SEM)保护为商购的式1的化合物，得到式2的化合物。然后使酯2与衍生自乙腈的阴离子反应，得到式3的氰基乙酰基衍生物。与二甲基甲酰胺二甲基乙缩醛反应，得到丙烯腈衍生物4，使其与式5的苯基肼衍生物反应，得到式6的氨基吡唑。然后除去保护基，得到本发明式7的化合物。
可以便利地用碱例如氢化钠在惰性溶剂例如四氢呋喃中在约0℃的温度下处理式1的化合物1H-吲哚-2-甲酸乙酯和1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸乙酯，生成相应的阴离子。用甲苯磺酰氯或2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基氯处理该阴离子，将该混合物在室温搅拌约1小时，得到式2的衍生物。
可以通过用乙腈和强碱例如二异丙基氨基锂或六甲基二硅氮化锂在溶剂例如四氢呋喃中在低温、例如在约-78℃下处理将式2的化合物便利地转化成式3的氰基乙酰基衍生物。用于这类反应的条件可以在专利文献中找到，例如在Taka，N.等人US 20120208811第163页中。
可以通过用N，N-二甲基甲酰胺二甲基乙缩醛在惰性溶剂例如芳香烃(例如甲苯)或四氢呋喃中在约室温下处理将式3的化合物转化成式4的丙烯腈衍生物。用于这类反应的条件可以在专利文献中找到，例如在Taka，N.等人US 20120208811第132页中。
可以通过在约溶剂的回流温度下在醇溶剂例如甲醇或乙醇或异丙醇中用式5的中间体(其中R1和R2如上述式I的种类中所述)处理将式4的丙烯腈衍生物转化成式6的氨基吡唑衍生物。用于这类反应的条件可以在专利文献中找到，例如在Taka，N.等人US20120208811第94页中。
可以使用任意常规方法将式6的化合物转化成本发明式7的化合物。例如，在甲苯磺酰基的保护基的情况中，可以通过用碱例如碳酸铯和低级醇例如甲醇的混合物在溶剂例如四氢呋喃中在约室温至约该混合物的回流温度之间的温度下处理式6的化合物进行该反应。可以用于这类反应的条件的实例可以在文献中找到，例如在Zhang，B和Wee.A.G.H.Org.Biomol.Chem.2012，10，4597-4608Supplementary Information；Alam，M.等人US20110071150第54页；和Taka，N.等人US 20120208811第55页中。例如，在SEM保护基的情况中，可以通过用氟化四丁基铵和乙二胺的混合物在溶剂例如四氢呋喃或二甲基甲酰胺中在约50℃至约该混合物的回流温度之间的温度下处理式6的化合物进行该反应。可以用于这类反应的条件的实例可以在文献中找到，例如在Barrett，T.D.等人WO 2004007463第182页；Kerns，J.K.等人WO 2007062318第47页；和Degnan，A.P.等人US20090018132第119页中。或者，可以用浓盐酸在醇溶剂(例如甲醇、乙醇或异丙醇)或在四氢呋喃中在回流温度下处理式7的化合物，得到本发明式7的化合物。可以用于这类反应的条件的实例可以在文献中找到，例如在Muneau，Y.等人US 20080262020第24页中。
方案4
可以根据方案2制备式5的中间体，其中R1和R2如上述式I的种类中所述。式8的化合物与式9的醇衍生物进行亲核芳香取代反应，得到式10的化合物。还原式11的化合物上的硝基基团，然后重氮化并且还原，得到式5的芳基-肼衍生物。
可以用式9的醇(苯酚或烷基醇)在碱例如碳酸钾或碳酸铯的存在下、在惰性溶剂例如二甲基甲酰胺中在100℃-约150℃的温度下、任选地在微波照射下处理4-氯-1-硝基-苯衍生物，例如化合物8，得到式10的硝基化合物。可以用于这类反应的具体条件的实例可以在文献中找到，例如在Chee，G.-L等人US 20040266738第5页；和Cui，S.-L.等人Synlett2004，1829-1831中。
可以使用有机合成领域普通技术人员众所周知的各种方法还原式10的化合物上的硝基基团。许多这些方法概括在Larock，R.C.Comprehensive Organic TransformationsJohn Wiley&Sons Inc.NY 1999，pp.823等中。一种便利的方法在于用氢气在贵金属催化剂例如披钯碳的存在下在溶剂如醇(例如甲醇或乙醇)中在约1个大气压至约3个大气压的氢气气氛中在约室温下处理式10的化合物。可以用于这类反应的具体条件的实例可以在文献中找到，例如在Chee，G.-L等人US 20040266738第5页；和Schoenafinger，K.等人US20030236288第18页中。
可以使用任意常规方法使式11的化合物上的苯胺基团重氮化和还原。例如，该反应便利地通过用亚硝酸钠水溶液在无机酸例如盐酸的存在下在低于约5℃且优选低于约0℃的温度下处理式11的化合物、然后在相同温度下添加还原剂例如氯化锡(II)或连二亚硫酸钠进行。可以用于这类反应的具体条件的实例可以在文献中找到，例如在Wipf，P.和Qiming，J.WO2012078859第47页；Rewolinski，M.V.等人WO 2009055721第82页；和Schoenafinger，K.等人US 20030236288第18页中。
药物组合物和施用
可以以广泛种类的口服施用剂型和载体配制本发明的化合物。口服施用可以是片剂、包衣片剂、糖衣丸、硬和软明胶胶囊、溶液、乳剂、糖浆或混悬剂的形式。在其他施用途径中，当由包括持续(静脉内滴注)局部肠胃外、肌内、静脉内、皮下、透皮(其可以包含渗透增强剂)、含服、经鼻、吸入和栓剂施用等其他施用途径施用时，本发明的化合物是有效的。优选的施用方式通常是使用常规日服剂量方案进行口服，所述日服剂量方案可以根据痛苦的程度和患者对活性成分的反应进行调节。
本发明的一种化合物或多种化合物以及它们的药用盐、与一种或多种常用赋形剂、载体或稀释剂一起可以被置于药物组合物和单位剂量的形式中。药物组合物和单位剂型可以由常规比例的常用的成分，存在另外的活性化合物或要素，或不存在另外的活性化合物或要素组成，并且所述单位剂型可以包含与所意欲使用的日剂量范围相当的任何适合的有效量的活性成分。所述药物组合物可以以固体如片剂或填充胶囊、半固体、散剂、缓释制剂或液体如溶液、混悬剂、乳剂、酏剂或填充胶囊使用，进行口服应用；或以用于直肠或阴道施用的栓剂形式使用；或以用于肠胃外使用的无菌可注射溶液的形式使用。典型的制剂包含约5％到约95％的一种活性化合物或多种活性化合物(w/w)。术语“制剂”或“剂型”意欲包括活性化合物的固体和液体制剂并且本领域的技术人员将理解活性成分可以根据靶器官或组织并且根据需要的剂量和药物代谢动力学参数而以不同制剂存在。
术语“赋形剂”用于本文时指用于制备药物组合物的、通常是安全无毒并且没有生物学上或其他方面不适宜的化合物，并且包括可用于兽医使用以及人药物应用的赋形剂。本发明的化合物可以单独施用，但是通常与一种或多种根据意欲施用的途径和标准的药物实践选择的适合的药物赋形剂、稀释剂或载体一起施用。
“药学上可接受的”是指其可以用于制备通常安全、无毒并且在生物学上和其他方面都没有不适宜的药物组合物，并且包括其对于兽医以及人类药物用途是可接受的。
活性成分的“药学可接受的盐”形式也可以在开始赋予活性成分需要的药物代谢动力学性质，所述药物代谢动力学性质在非盐形式中是缺乏的，并且就其体内治疗活性而论，可能甚至正面影响活性成分的药效学。短语化合物的“药学可接受的盐”指药物学上可接受的并且具有母体化合物的需要的药理活性的盐。所述盐包括：(1)酸加成盐，与无机酸如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等形成；或与有机酸如乙酸、丙酸、己酸、环戊烷丙酸、羟基乙酸、丙酮酸、乳酸、丙二酸、琥珀酸、苹果酸、马来酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、3-(4-羟基苯甲酰)苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、1，2-乙二磺酸、2-羟基乙磺酸、苯磺酸、4-氯苯磺酸、2-萘磺酸、4-甲苯磺酸、樟脑磺酸、4-甲基二环[2.2.2]-辛-2-烯-1-甲酸、葡糖庚酸、3-苯基丙酸、三甲基乙酸、叔丁基乙酸、月桂基硫酸、葡萄糖酸、谷氨酸、羟基萘甲酸、水杨酸、硬脂酸、粘康酸等形成；或(2)当在母体化合物中存在的酸质子被金属离子例如碱金属离子、碱土离子或铝离子替换时形成的盐；或与有机碱如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、氨丁三醇、N-甲基葡糖胺等配位形成的盐。
固体形式制剂包括散剂、片剂、丸剂、胶囊、扁囊剂、栓剂和可分散的颗粒。固体载体可以是一种或多种物质，其也可以充当稀释剂、调味剂、增溶剂、润滑剂、悬浮剂、粘合剂、防腐剂、片剂崩解剂或包封材料。在散剂中，所述载体通常是细碎固体，其是与细碎活性成分的混合物。在片剂中，活性成分通常与具有必要的结合能力的载体以适合比例混合，并且被压制成需要的形状和大小。适合的载体包括但不限于碳酸镁、硬脂酸镁、滑石粉、糖、乳糖、果胶、糊精、淀粉、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、低熔点蜡、可可脂等。除了活性成分之外，固体形式的制剂可以包含着色剂、香料、稳定剂、缓冲剂、人工和天然的甜味剂、分散剂、增稠剂、溶解剂等。
液体制剂也适合于口服施用，包括液体制剂，包括乳剂、糖浆、酏剂、水溶液、水性混悬剂。这些包括意欲在即将使用前转化为液体形式制剂的固体形式制剂。乳剂可以以溶液形式例如以丙二醇水溶液的形式制备或可以包含乳化剂，如卵磷脂、去水山梨糖醇单油酸酯或阿拉伯胶。可以通过将活性成分溶解在水中并加入适合的着色剂、香料、稳定剂和增稠剂来制备水溶液。可以通过将细碎的活性成分与粘性物质如天然或合成的树胶、树脂、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠及其他的熟知的悬浮剂一起分散在水中来制备水性混悬剂。
本发明的化合物可以配制用于肠胃外施用(例如通过注射例如推注，或连续输注)并且可以以单位剂型在安瓿、预装注射器、小体积的输注液中或在多剂量容器中与加入的防腐剂一起存在。所述组合物可以采用这样的形式，如在油性或水性赋形剂中的混悬剂、溶液或乳剂形式，例如在水性聚乙二醇中的溶液。油性或非水性载体、稀释剂、溶剂或赋形剂的实例包括丙二醇、聚乙二醇、植物油(例如橄榄油)和可注射有机酯(例如油酸乙酯)，并且可以包含配制剂如防腐剂、湿润剂、乳化剂或悬浮剂、稳定剂和/或分散剂。或者，所述活性成分可以以粉末形式存在，所述粉末通过无菌分离灭菌固体获得或通过从溶液中冻干获得，其在使用前用适合的赋形剂例如无菌的无热原的水进行重构。
可以配制本发明的化合物，作为软膏、乳膏或洗剂，或作为透皮贴片用于给表皮的局部施用。软膏和乳膏例如可以用水性或油性基质，在加入适宜的增稠剂和/或胶凝剂的情况下配制。洗剂可以用水性或油性基质配制，并且通常也将含有一种或多种乳化剂、稳定剂、分散剂、悬浮剂、增稠剂或着色剂。适宜于口中局部施用的制剂包括：锭剂，其在调味基质中包含活性成分，所述的调味基质通常是蔗糖和阿拉伯胶或黄蓍胶；软锭剂，其在惰性基质中包含活性成分，所述的惰性基质如明胶和甘油或蔗糖和阿拉伯胶；以及漱口药，其在适宜液体载体中包含活性成分。
可以将本发明的化合物配制作为栓剂施用。首先将低熔点蜡，如脂肪酸甘油酯或可可脂的混合物融化，并且例如通过搅拌均匀分散活性成分。接着，将融化的均匀混合物倾入合宜尺寸的模具中，使其冷却并且固化。
可以将本发明的化合物配制用于阴道施用。阴道栓剂、棉球、乳膏剂、凝胶、糊剂、泡沫或喷雾剂除了活性成分外，还包含如本领域已知是合适的载体。
可以配制本发明的化合物用于经鼻施用。由常规装置例如用滴管、吸管或喷雾器将溶液剂或混悬剂直接施用至鼻腔。制剂可以以单剂量或多剂量形式提供。在滴管或吸管的后一种情况下，这可以通过患者施用适宜的、预定体积的溶液剂或混悬剂来实现。在喷雾器的情况下，这可以通过例如计量的雾化喷雾泵来实现。
可以配制本发明的化合物用于气雾剂施用，特别是对呼吸道施用，并且包括鼻内施用。该化合物通常具有小的粒子大小，例如约五(5)微米或更小。这样的粒子大小可以通过本领域中已知的方式获得，例如通过微粉化获得。将活性成分提供在具有适宜抛射剂的加压容器中，所述的抛射剂如氯氟烃(CFC)，例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷或二氯四氟乙烷，或二氧化碳或其他适宜的气体。气雾剂还可以方便地含有表面活性剂如卵磷脂。药物的剂量可以通过计量阀来控制。或者活性成分可以以干粉的形式提供，例如化合物在适宜粉末基质中的粉末混合物，所述的粉末基质如乳糖、淀粉、淀粉衍生物如羟丙基甲基纤维素和聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。粉末载体将在鼻腔中形成凝胶。粉末组合物可以以单位剂量形式存在，例如在如明胶的胶囊或药筒中，或泡眼包装中，这些包装中的粉末可以通过吸入器施用。
当需要时，可以用适合于活性成分的缓释或控释施用的肠溶衣制备制剂。例如，本发明的化合物可以在透皮或皮下药物递送装置中配制。当所述化合物的缓释是需要的时并且当患者顺应治疗方案是重要的时，这些递送系统是有利的。在透皮递送系统中的化合物经常附着于皮肤粘附性固体支持物。目的化合物还可以与渗透增强剂例如月桂氮酮(1-十二烷基氮杂-环庚-2-酮)组合。将缓释递送系统通过外科手术或注射皮下插入皮下层。皮下植入物在脂溶性膜例如硅橡胶或可生物降解的聚合物例如聚乳酸(polyactic acid)中包封化合物。
在雷明顿：药物科学和实践(Remington：The Science and Practice ofPharmacy 1995，由E.W.Martin编辑，Mack出版公司，第19版，Easton，宾夕法尼亚州)中描述了适合的制剂以及药物载体、稀释剂和赋形剂。有经验的制剂科学家可以在本发明说明书教导的范围内改变制剂以提供多种制剂，其用于施用的具体途径，而不使本发明的组合物不稳定或有损它们的治疗活性。
使本发明的化合物在水或其他赋形剂中的溶解度增高的修饰，例如可以容易地通过较小的修饰实现(形成盐，酯化等)，这都在本领域普通技能的范围内。也在本领域普通技能范围内的是，改变施用途径和具体化合物的剂量方案从而使本发明化合物的药物代谢动力学在患者中获得最大的有益效果。
用于本文时，术语″治疗有效量″是指减轻个体中的疾病的症状所需要的量。将在每个具体病例中，根据个体需要调整剂量。取决于多种因素，该剂量可以在广泛范围内改变，所述因素如待治疗的疾病的严重性、患者的年龄和一般健康状况、治疗患者的其他药物、施用的途径和形式、和涉及的执业医生的偏好和经验。对于口服施用，在每天约0.01-约1000mg/kg体重之间的日剂量应该在单一治疗和/或组合治疗情况中是适合的。优选的日剂量在每天约0.1-约500mg/kg体重之间，更优选在每天0.1-约100mg/kg体重之间，最优选在每天1.0-约10mg/kg体重/天之间。因此，对于施用给70kg的人，剂量范围是约7mg-0.7g/天。日剂量可以以单一剂量或以分剂量进行施用，典型地在1-5个剂量/天。一般而言，用比化合物的最佳剂量少的较小剂量开始治疗。随后，通过小增量增加剂量直到达到个体患者的最佳效果。治疗本文所述疾病的本领域普通技术人员能够不经过过度实验和根据个人的知识经验和本申请的公开内容来确定本发明化合物对于给定疾病和患者的治疗有效量。
药物制剂优选为单位剂量形式。在这种形式下，将制剂再分成含有适宜量的活性成分的单位剂量。单位剂量形式可以是包装制剂，该包装含有离散量的制剂，如小包片剂、胶囊和在管瓶或安瓿中的散剂。此外，单位剂量形式可以是胶囊、片剂、扁囊剂或锭剂本身，或者它可以是适宜数量的包装形式的这些中的任何一种。
适应症和治疗方法
式I的化合物抑制酪氨酸激酶(Btk)。上游激酶活化Btk导致磷脂酶-Cγ活化，由此刺激促炎介体释放。式I的化合物用于治疗关节炎和其他抗炎和自身免疫疾病。因此，式I的化合物用于治疗关节炎。式I的化合物用于抑制细胞中的Btk并且用于调节B-细胞发育。本发明还包含药物组合物，其包含式I的化合物与药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。
本文描述的化合物是激酶抑制剂，特别是Btk抑制剂。这些抑制剂可以用于治疗哺乳动物中的一种或多种响应激酶抑制的疾病，包括响应Btk抑制和/或B-细胞增殖的抑制的疾病。不希望束缚于任何特定的理论，相信本发明化合物与Btk的相互作用导致Btk活性的抑制，并因此得到这些化合物药学应用。因此，本发明包括用于治疗具有响应Btk活性的抑制和/或抑制B-细胞增殖的疾病的哺乳动物、例如人的方法，该方法包括：向具有这样的疾病的哺乳动物施用有效量的至少一种在本文中提供的化学实体。可以在实验上例如通过测定化合物的血液浓度，或理论上通过计算生物利用度，确定有效浓度。除了Btk之外，还可能受到影响的其他激酶包括但不限于，其他酪氨酸激酶和丝氨酸/苏氨酸激酶。
激酶在控制基本细胞过程如增殖、分化和死亡(细胞凋亡)的信号传导路径方面起着显著的作用。异常的激酶活性已经暗示于各种疾病中，所述的疾病包括多种癌症、自身免疫和/或炎性疾病和急性炎性反应。激酶在关键细胞信号传导路径中的多面性作用提供识别靶向激酶和信号传导路径的新药物的显著机会。
一个实施方案包括治疗具有自身免疫和/或炎性疾病或响应Btk活性和/或B细胞增殖的抑制的急性炎性反应的患者的方法。
使用根据本发明的化合物和组合物可以影响的自身免疫和/或炎性疾病包括但不限于：银屑病、变态反应、克罗恩病、肠易激综合征、舍格伦病、组织移植物排斥反应和移植器官的超急性排斥反应、哮喘、系统性红斑狼疮(和相关的肾小球肾炎)、皮肌炎、多发性硬化、硬皮病、血管炎(ANCA-相关的和其他的血管炎)、自身免疫溶血性和血小板减少性症状、古德帕斯综合征(和相关的肾小球肾炎和肺出血)、动脉粥样硬化、类风湿性关节炎、慢性的特发性血小板减少性紫癜(ITP)、艾迪生病、帕金森病、阿尔茨海默病、糖尿病、脓毒性休克和重症肌无力。
本文中包括的是治疗方法，其中将本文中提供的至少一种化学实体与抗炎药组合施用。抗炎药包括但不限于：NSAID、非特异性和COX-2特异性环氧合酶酶抑制剂、金化合物、皮质类固醇类、甲氨蝶呤、肿瘤坏死因子受体(TNF)受体拮抗剂、免疫抑制剂和甲氨蝶呤。
NSAID的实例包括但不限于布洛芬、氟比洛芬、萘普生和萘普生钠、双氯芬酸、双氯芬酸钠和米索前列醇的组合、舒林酸、苯噁丙酸、二氟尼柳、吡罗昔康、吲哚美辛、依托度酸、非诺洛芬钙、酮洛芬、萘丁美酮钠、柳氮磺吡啶、托美丁钠和羟氯喹。NSAID的实例还包括COX-2特异性抑制剂如塞来考昔、伐地考昔、芦米考昔和/或艾托考昔。
在一些实施方案中，抗炎药是水杨酸酯或盐。水杨酸酯或盐包括但不限于乙酰基水杨酸或阿斯匹林、水杨酸钠以及水杨酸胆碱和水杨酸镁。
抗炎药还可以是皮质类固醇类。例如，皮质类固醇类可以是可的松、地塞米松、甲泼尼龙、泼尼松龙、泼尼松龙磷酸钠或泼尼松。
在另外的实施方案中，抗炎药是金化合物如金硫丁二钠或金诺芬。
本发明还包括其中抗炎药是代谢抑制剂如二氢叶酸还原酶抑制剂如甲氨蝶呤或二氢乳清酸盐脱氢酶抑制剂如来氟米特的实施方案。
本发明的其他实施方案涉及其中至少一种抗炎化合物是抗-C5单克隆抗体(如依库珠单抗或培克珠单抗)，TNF拮抗剂如依那西普(entanercept)或英利昔单抗的组合，所述英利昔单抗是一种抗-TNFα单克隆抗体。
本发明的再其他的实施方案涉及组合，其中至少一种活性药是免疫抑制剂化合物如选自甲氨蝶呤、来氟米特、环胞素、他克莫司、硫唑嘌呤和吗替麦考酚酯中的免疫抑制剂化合物。
表达BTK的B-细胞和B-细胞前体已经暗示于B细胞恶性的病理学中，B细胞恶性包括但不限于B细胞淋巴瘤、淋巴瘤(包括何杰金和非何杰金淋巴瘤)、毛细胞淋巴瘤、多发性骨髓瘤、慢性的和急性的髓细胞源性白血病和慢性的和急性的淋巴细胞白血病。
已经表明BTK是在B-系淋巴样细胞中Fas/APO-1(CD-95)死亡诱导信号传导复合物(DISC)的抑制剂。白血病/淋巴瘤细胞的命运可能在于由DISC活化的半胱天冬蛋白酶的反向前细胞凋亡作用和包括BTK和/或其底物的上游抗细胞凋亡调节机理之间的平衡(Vassilev等人，J.Biol.Chem.1998，274，1646-1656)。
还发现BTK抑制剂可以用作化学敏化剂，因此可以用于与其他化学治疗药组合，所述的化学治疗药特别是诱导细胞凋亡的药。可以与化学敏化BTK抑制剂组合使用的其他化学治疗药的实例包括拓扑异构酶I抑制剂(喜树碱或托泊替康)、拓扑异构酶II抑制剂(如道诺霉素和依托泊苷)、烷化剂(如环磷酰胺、美法仑和BCNU)，微管蛋白导向的活性剂(如泰素和长春碱)和生物活性剂(例如抗体如抗CD20抗体、IDEC8、免疫毒素和细胞因子)。
Btk活性还与一些表达由部分染色体9和22的易位导致的bcr-abl融合基因的白血病相关。这种异常通常在慢性髓细胞源性白血病中观察到。Btk由bcr-abl激酶组成型磷酸化，这引发在bcr-abl细胞中防止细胞凋亡的下游生存信号(N.Feldhahn等人J.Exp.Med.2005201(11)：1837-1852)。
治疗方法
本申请提供了用于治疗炎性和/或自身免疫病症的方法，包括对有此需要的患者施用治疗有效量的式I的化合物。
本申请提供了用于治疗炎性病症的方法，包括对有此需要的患者施用治疗有效量的式I的化合物。
本申请提供了用于治疗类风湿性关节炎的方法，包括对有此需要的患者施用治疗有效量的式I的化合物。
本申请提供了用于治疗哮喘的方法，包括对有此需要的患者施用治疗有效量的式I的化合物。
本申请提供了用于治疗炎性和/或自身免疫病症的方法，包括对有此需要的患者施用治疗有效量的式I的Btk抑制剂化合物。
本申请提供了用于治疗关节炎的方法，包括对有此需要的患者施用治疗有效量的式I的Btk抑制剂化合物。
本申请提供了用于治疗癌症的方法，包括对有此需要的患者施用治疗有效量的式I的Btk抑制剂化合物。
本申请提供了用于治疗哮喘的方法，包括对有此需要的患者施用治疗有效量的式I的Btk抑制剂化合物。
本申请提供了用于抑制B-细胞增殖的方法，包括对有此需要的患者施用治疗有效量的式I的Btk抑制剂化合物。
本申请提供了用于抑制Btk活性的方法，包括施用式I的任意一种Btk抑制剂化合物，其中所述Btk抑制剂化合物在Btk活性体外生化测定中显示50微摩尔或以下的IC50。
在上述方法的另一种变化形式中，所述化合物在Btk活性体外生化测定中显示100纳摩尔或以下的IC50。
在上述方法的另一种变化形式中，所述化合物在Btk活性体外生化测定中显示10纳摩尔或以下的IC50。
本申请提供了用于治疗炎性病症的方法，包括对有此需要的患者施用治疗有效量的抗炎化合物与式I的Btk抑制剂化合物。
本申请提供了用于治疗炎关节炎的方法，包括对有此需要的患者施用治疗有效量的抗炎化合物与式I的Btk抑制剂化合物。
本申请提供了用于治疗淋巴瘤或BCR-ABL1+白血病细胞的方法，通过对有此需要的患者施用治疗有效量的式I的Btk抑制剂化合物来进行。
实施例
通用缩写
通常使用的缩写包括：乙酰基(Ac)，偶氮二异丁腈(AIBN)，大气压(Atm)，9-硼杂双环[3.3.1]壬烷(9-BBN或BBN)，2，2’-双(二苯基膦基)-1，1’-联苯(BINAP)，叔丁氧羰基(Boc)，焦碳酸二叔丁酯(di-tert-butyl pyrocarbonate)或boc酸酐(BOC2O)，苄基(Bn)，丁基(Bu)，化学文摘登记号(CASRN)，苄氧羰基(CBZ或Z)，羰基二咪唑(CDI)，1，4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷(DABCO)，三氟化二乙氨基硫(DAST)，二亚苄基丙酮(dba)，1，5-二氮杂双环[4.3.0]壬-5-烯(DBN)，1，8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯(DBU)，N，N′-二环己基碳二亚胺(DCC)，1，2-二氯乙烷(DCE)，二氯甲烷(DCM)，2，3-二氯-5，6-二氰基-1，4-苯并喹酮(DDQ)，偶氮二甲酸二乙酯(DEAD)，偶氮二甲酸二异丙酯(DIAD)，氢化二异丁基铝(DIBAL或DIBAL-H)，二异丙基乙胺(DIPEA)，N，N-二甲基乙酰胺(DMA)，4-N，N-二甲氨基吡啶(DMAP)，N，N-二甲基甲酰胺(DMF)，二甲亚砜(DMSO)，1，1′-双-(二苯基膦基)乙烷(dppe)，1，1′-双-(二苯基膦基)二茂铁(dppf)，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDCI)，2-乙氧基-1-乙氧基羰基-1，2-二氢-喹啉(EEDQ)，乙基(Et)，乙酸乙酯(EtOAc)，乙醇(EtOH)，2-乙氧基-2H-喹啉-1-甲酸乙酯(EEDQ)，二乙醚(Et2O)，乙基异丙基醚(EtOiPr)，O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐乙酸(HATU)，乙酸(HOAc)，1-N-羟基苯并三唑(HOBt)，高压液相色谱(HPLC)，异丙醇(IPA)，氯化异丙基镁(iPrMgCl)，六甲基二硅烷基胺(HMDS)，液相色谱质谱(LCMS)，六甲基二硅氮化锂(lithium hexamethyl disilazne)(LiHMDS)，间氯过氧苯甲酸(m-CPBA)，甲醇(MeOH)，熔点(mp)，MeSO2-(甲磺酰基或Ms)，甲基(Me)，乙腈(MeCN)，间氯过苯甲酸(CPBA)，质谱(ms)，甲基叔丁基醚(MTBE)，甲基四氢呋喃(MeTHF)，N-溴琥珀酰亚胺(NBS)，n-丁基锂(nBuLi)，N-羧基酸酐(NCA)，N-氯琥珀酰亚胺(NCS)，N-甲基吗啉(NMM)，N-甲基-吡咯烷酮(NMP)，氯铬酸吡啶鎓(PCC)，二氯-((双-二苯基膦基)二茂铁基)钯(II)(Pd(dppf)Cl2)，醋酸钯(II)(Pd(OAc)2)，三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(Pd2(dba)3)，重铬酸吡啶鎓(PDC)，苯基(Ph)，丙基(Pr)，异丙基(i-Pr)，磅/平方英寸(psi)，吡啶(pyr)，1，2，3，4，5-五苯基-1′-(二叔丁基膦基)二茂铁(Q-Phos)，室温(环境温度、rt或RT)，仲丁基锂(sBuLi)，叔丁基二甲基甲硅烷基或t-BuMe2Si(TBDMS)，四正丁基氟化铵(TBAF)，三乙胺(TEA或Et3N)，2，2，6，6-四甲基哌啶1-氧基(TEMPO)，三甲基甲硅烷基乙氧基甲基(SEM)，三氟甲磺酸根或CF3SO2-(Tf)，三氟乙酸(TFA)，1，1′-双-2，2，6，6-四甲基庚烷-2，6-二酮(TMHD)，O-苯并三唑-1-基-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓四氟硼酸盐(TBTU)，薄层色谱(TLC)，四氢呋喃(THF)，三甲代甲硅烷基或Me3Si(TMS)，一水合对甲苯磺酸(TsOH或pTsOH)，4-Me-C6H4SO2-或甲苯磺酰基(Ts)，和N-氨基甲酸乙酯-N-羧基酸酐(UNCA)。当用于烷基部分时，包括前缀正(n)、异(i-)、仲(sec-)、叔(tert-)和新(neo)的常规命名法具有它们的惯用含义(J.Rigaudy和D.P.Klesney，Nomenclature in Organic Chemistry，IUPAC1979Pergamon Press，Oxford)。
一般条件
本发明的化合物可以从商购原料开始通过使用通用合成技术和本领域技术人员公知的方法制备。如下概述是适合于制备这样的化合物的反应方案。另外的示例可以在具体实施例中找到。
特定缩写
CDCl3 氘代氯仿
CH2Cl2 二氯甲烷
CH3CN 乙腈
CO2 二氧化碳
Conc 浓
Cs2CO3 碳酸铯
DIPEA 二异丙基乙胺
DMF N，N-二甲基甲酰胺
DMSO 二甲亚砜
EtOAc 乙酸乙酯
EtOH 乙醇
HCl 盐酸
K2CO3 碳酸钾
LDA 二异丙基氨基锂
LiAlH4 氢化铝锂
MeOH 甲醇
NaBH4 硼氢化钠
NaOH 氢氧化钠
Na2SO4 硫酸钠
NaH 氢化钠
NaNO2 亚硝酸钠
Pd(OAc)2 乙酸钯(II)
Pd(PPh3)4 四(三苯膦)钯(0)
SOCl2 亚硫酰氯
SEM 2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基
SEM-Cl 2-三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基氯
THF 四氢呋喃
一般实验的细节
试剂购自Aldrich，Oakwood，Matrix或其它供应商且不进一步纯化使用。使用加热用微波照射的反应采用Personal Chemistry Emrys Optimizer System或CEM DiscoverySystem进行。通过本领域技术人员公知的方法对多毫克至多克等级进行纯化，所述公知的方法例如硅胶快速柱洗脱；在一些情况中，还通过使用预填充的多克硅胶柱(RediSep)进行制备型闪蒸塔纯化，用CombiFlash系统洗脱。BiotageTM和ISCOTM也是可以用于本发明中纯化中间体的闪蒸塔仪器。
为了判断化合物身份和纯度的目的，采用如下系统记录LC/MS(液相色谱法/质谱法)光谱。对于测量质谱，所述系统由Micromass Platform II分光光度计组成：正离子模式的ES电离(质量范围：150-1200)。使用如下HPLC系统同时进行色谱分离：ES IndustriesChromegabond WR C-18 3u(3.2x30mm)柱；流动相A：水(0.02％TFA)和B相：乙腈(0.02％TFA)；梯度10％B-90％B，3分钟；平衡时间1分钟；流速2mL/分钟。
还采用本领域技术人员众所周知的方法，通过反相HPLC纯化式1的许多化合物。在一些情况中，采用连接至Shimadzu制备型HPLC系统和Leap自动注射器的Gilson 215采集器的PE Sciex 150EX Mass Spec进行制备型HPLC纯化。在正离子模式检测中的LC/MS检测：采用溶剂(A)0.05％TFA/H2O和溶剂(B)0.035％TFA/乙腈的适合的线性梯度模式在10分钟内从C-18柱上洗脱化合物(2.0x10cm，以20mL/min洗脱)。为了注射在HPLC系统上，将粗样品溶于甲醇、乙腈和DMSO的混合物。
使用Bruker或Varian 300或400MHz NM光谱仪进行1H-NMR表征。
可以根据已知方法合成本发明的化合物。提供下列实施例和参考例是为了有助于理解本发明。然而，这些实施例不预以限定本发明，其正确的范围在待批权利要求中举出。实施例中终产物的名称使用Isis AutoNom2000生成。
中间体1
(E)-3-二甲氨基-2-[1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吲哚-2-羰基]-丙烯腈
步骤1)
1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吲哚-2-甲酸乙酯
在0℃向搅拌的1H-吲哚-2-甲酸乙酯(1g，5.29mmol)在干THF中的溶液中加入氢化钠的60％油分散液(0.423g，10.58mmol)，搅拌30min。向该混合物中加入对-甲苯磺酰氯(2g，10.58mmol)，搅拌12h。用饱和氯化铵使其猝灭，用乙酸乙酯萃取，用无水硫酸钠干燥，减压蒸发，通过柱色谱法纯化粗物质(硅胶，5％EtOAc/己烷)，得到1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吲哚-2-甲酸乙酯，为白色固体(1.1g，61％)。MS计算值C18H17NO4S[(M+H)+]344，测定值344.1。
步骤2)
3-氧代-3-[1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吲哚-2-基]-丙腈
在-78℃向搅拌的1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吲哚-2-甲酸乙酯(8g，23.3mmol)和乙腈(3.8mL，93.3mmol)在干THF(40mL)中的溶液中滴加LDA(47.3ml，46.64mmol)[通过在-78℃添加n-BuLi(25.6mL，46.64mmol)至二异丙基胺(6.7mL，46.6mmol)在干THF(15mL)中的溶液中制备，在氩气气氛中搅拌30min]。搅拌20min，用氯化铵(10mL)猝灭，浓缩，用乙酸乙酯萃取，用无水硫酸钠干燥，减压蒸发，通过柱色谱法纯化(硅胶，30％EtOAc/己烷)，得到3-氧代-3-[1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吲哚-2-基]-丙腈，为粘性棕色液体(5.7g，72％)。MS计算值C18H14N2O3S[(M+H)+]339，测定值339.0。
步骤3)
(E)-3-二甲氨基-2-[1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吲哚-2-羰基]-丙烯腈
在rt将DMF-DMA(0.72g，7.09mmol)加入到搅拌的3-氧代-3-[1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吲哚-2-基]-丙腈(2g，5.91mmol)在甲苯(30mL)中的溶液中，搅拌15h。减压蒸发溶剂，通过柱色谱法纯化粗物质(硅胶，30％EtOAc/己烷)，得到(E)-3-二甲氨基-2-[1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吲哚-2-羰基]-丙烯腈，为黄色固体(1.2g，52％)。MS计算值C21H19N3O3S[(M+H)+]394，测定值394.3。
中间体2
(E)-3-二甲氨基-2-[1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-1H-吲哚-2-羰基]-丙烯腈
步骤1)
1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-1H-吲哚-2-甲酸乙酯
在250mL圆底烧瓶中，将1H-吲哚-2-甲酸乙酯(5g，26.4mmol)、SEM-Cl(5.29g，5.62mL，31.7mmol)和NaH的60％油分散液(1.27g，31.7mmol)在4℃与THF(40mL)和DMF(20mL)合并。搅拌该反应混合物，保持温热至室温5小时。用MeOH使该反应混合物猝灭，用水和EtOAc稀释。用盐水洗涤该溶液。用无水硫酸钠干燥合并的有机相，减压除去溶剂。通过柱色谱法纯化粗物质(硅胶，0-40％EtOAc/己烷)，得到1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-1H-吲哚-2-甲酸乙酯(6.8g，81％)，为橙色油状物。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.69(t，J＝7.63Hz，2H)，7.31-7.41(m，2H)，7.17(t，J＝7.50Hz，1H)，5.96(s，2H)，4.32(q，J＝7.16Hz，2H)，3.43(t，J＝7.82Hz，2H)，1.33(t，J＝7.06Hz，3H)，0.76(t，J＝7.82Hz，2H)，-0.14(s，9H)。
步骤2)
3-氧代-3-[1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-1H-吲哚-2-基]-丙腈
在500mL圆底烧瓶中，在-78℃在氮气气氛中将1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲哚-2-甲酸乙酯(5g，15.7mmol)、乙腈(3.93g，5mL，95.7mmol)与THF(75mL)合并，得到橙色溶液。在-78℃加入LDA 2M在THF(10mL，20.0mmol)中的溶液，搅拌该反应混合物，温热至室温。2小时30分钟后反应完成。用水和EtOAc稀释该反应混合物，用盐水洗涤。用无水硫酸钠干燥合并的有机相，减压除去溶剂。通过柱色谱法纯化粗物质(硅胶，0-40％EtOAc/己烷)，得到3-氧代-3-[1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-1H-吲哚-2-基]-丙腈(3.9g，79％)，为油状物。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.77(d，J＝7.91Hz，1H)，7.65-7.72(m，2H)，7.44(t，J＝7.63Hz，1H)，7.21(t，J＝7.44Hz，1H)，5.93(s，2H)，4.75(s，2H)，1.17(t，J＝7.16Hz，2H)，0.78(t，J＝7.91Hz，2H)，-0.12(s，9H)。
步骤3)
(E)-3-二甲氨基-2-[1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-1H-吲哚-2-羰基]-丙烯腈
在250mL圆底烧瓶中，将3-氧代-3-(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲哚-2-基)丙腈(3.8g，12.1mmol)和DMF-DMA(7mL，52.3mmol)与甲苯(30mL)合并，得到淡黄色溶液。将该反应混合物在室温搅拌过夜。减压除去溶剂。通过柱色谱法纯化粗物质(硅胶，0-100％EtOAc/己烷)，得到(E)-3-二甲氨基-2-[1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-1H-吲哚-2-羰基]-丙烯腈(3.5g，78％)，为橙色泡沫体。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.03(s，1H)，7.69(d，J＝7.91Hz，1H)，7.63(d，J＝8.29Hz，1H)，7.32(t，J＝7.25Hz，1H)，7.12-7.19(m，2H)，5.78(s，2H)，3.40(s，3H)，3.31-3.35(m，2H)，3.30(s，3H)，0.75(t，J＝8.01Hz，2H)，-0.13(s，9H)。
中间体3
(E)-3-二甲氨基-2-[1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-1H-苯并咪唑-2-羰基]-
丙烯腈
步骤1)
1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-1H-苯并咪唑-2-甲酸乙酯
在250mL圆底烧瓶中，将1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸乙酯(3g，15.8mmol)、SEM-Cl(3.36mL，18.9mmol)和NaH的60％油分散液(760mg，31.7mmol)与THF(25mL)和DMF(10mL)合并，得到白色混悬液。将该反应混合物在室温搅拌3小时。用水使反应停止。用EtOAc稀释该反应混合物，用盐水洗涤。用无水硫酸钠干燥合并的有机相，减压除去溶剂。通过柱色谱法纯化粗物质(硅胶，0-40％EtOAc/己烷)，得到1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-1H-苯并咪唑-2-甲酸乙酯(2.7g，53％)，为油状物。LC/MS：m/z计算值C16H24N2O3Si([M+H]+)：321.4，测定值：321.0。
步骤2)
3-氧代-3-[1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-1H-苯并咪唑-2-基]-丙腈
在100mL圆底烧瓶中，将1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸乙酯(2g，6.24mmol)和乙腈(2.56g，3.26ml，62.4mmol)与THF(40mL)在-78℃在氮气气氛中合并，得到浅棕色溶液。在-78℃加入LDA 2M的THF溶液(5mL，10.0mmol)，搅拌该反应混合物，保持温热至室温。将该反应混合物在该温度下搅拌4小时，然后将该反应混合物倾倒在饱和NH4Cl水溶液上，用EtOAc萃取。用无水硫酸钠干燥合并的有机相，减压除去溶剂。通过柱色谱法纯化粗物质(硅胶，0-40％EtOAc/己烷，得到3-氧代-3-[1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-1H-苯并咪唑-2-基]-丙腈(0.6g，31％)，为油状物。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.88(d，J＝8.10Hz，1H)，7.78-7.84(m，1H)，7.49-7.57(m，1H)，7.38-7.47(m，1H)，5.87-6.09(m，2H)，4.86(s，2H)，3.41-3.71(m，2H)，0.68-0.94(m，2H)，-0.1(s，9H)。
步骤3)
(E)-3-二甲氨基-2-[1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-1H-苯并咪唑-2-羰基]-丙烯腈
在20mL闪烁小瓶中，将3-氧代-3-(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙腈(500mg，1.59mmol)和DMF-DMA(0.85mL，6.34mmol)与甲苯(5mL)合并，得到黄色溶液。将该反应混合物在室温搅拌过夜。减压除去溶剂。通过柱色谱法纯化粗物质(硅胶，0-100％EtOAc/己烷)，得到(E)-3-二甲氨基-2-[1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-1H-苯并咪唑-2-羰基]-丙烯腈(0.26g，44％)，为橙色泡沫体。LC/MS：m/z计算值C19H26N4O2Si([M+H]+)：371.5，测定值：371.0。
通用方法A：亲核芳香取代
将Cs2CO3(1.5当量)加入到搅拌的硝基化合物(1当量)和苯酚或烷基醇衍生物(1.2当量)在干DMF中的溶液中。将该混合物在150℃在密封试管中加热24h。过滤该反应混合物，减压蒸发滤液。通过硅胶色谱法纯化残余物，得到产物。
通用方法B：硝基的还原
在氮气气氛中将10％披钯碳(10％重量)加入到搅拌的硝基化合物在乙醇中的溶液中。将该反应混合物在氢气气氛中搅拌12h，通过烧结漏斗过滤，减压蒸发，得到相应的胺。
通用方法C-1：芳基肼类的制备
在-5℃将亚硝酸钠(1.5当量)在水中的溶液加入到搅拌的氨基芳香化合物(1当量)在盐酸中的溶液中，将该混合物在-5℃搅拌45min。加入氯化锡(II)(5当量)在盐酸中的溶液，将该混合物搅拌30min。通过添加NaOH水溶液使该混合物呈碱性，用EtOAc萃取该混合物。干燥有机萃取物(Na2SO4)，过滤，蒸发，得到产物，直接用于下一步。
通用方法C-2：芳基肼类的制备
在-5℃将亚硝酸钠(1.5当量)在水中的溶液加入到搅拌的氨基芳香化合物(1当量)在盐酸中的溶液中，将该混合物在-5℃搅拌45min。加入氯化锡(II)(5当量)在盐酸中的溶液，将该混合物搅拌30min。过滤该混合物，风干，得到产物，直接用于下一步。
通用方法D：吡唑环形成
将式Ar-NH-NH2的芳基肼(2当量)和(E)-3-二甲氨基-2-[1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吲哚-2-羰基]-丙烯腈(可以如中间体1步骤3所述制备；1当量)在EtOH中的混合物回流加热16h。减压蒸发溶剂。通过硅胶色谱法纯化残余物，得到产物。
通用方法E：Ts保护基的脱保护
向搅拌的Ts-保护的吲哚(1当量)在THF∶MeOH(7∶3)中的溶液中加入碳酸铯(2当量)。将该混合物在室温搅拌18h。减压蒸发溶剂。通过硅胶色谱法纯化残余物，得到产物。
实施例1
[5-氨基-1-(3-氟-4-苯氧基-苯基)-1H-吡唑-4-基]-(1H-吲哚-2-基)-甲酮
步骤1)
2-氟-4-硝基-1-苯氧基-苯
使用通用方法A中概括的条件使1-溴-2-氟-4-硝基苯与苯酚反应，得到2-氟-4-硝基-1-苯氧基-苯。
步骤2)
3-氟-4-苯氧基-苯基胺
使用通用方法B中概括的条件还原2-氟-4-硝基-1-苯氧基-苯，得到3-氟-4-苯氧基-苯基胺。MS计算值C12H11FNO[(M+H)+]204，测定值204.2。
步骤3)
(3-氟-4-苯氧基-苯基)-肼
使用通用方法C-1中概括的条件使3-氟-4-苯氧基-苯基胺重氮化并且还原，得到(3-氟-4-苯氧基-苯基)-肼。
步骤4)
[5-氨基-1-(3-氟-4-苯氧基-苯基)-1H-吡唑-4-基]-[1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮
使用通用方法D中概括的条件使(3-氟-4-苯氧基-苯基)-肼与(E)-3-二甲氨基-2-[1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吲哚-2-羰基]-丙烯腈(可以如中间体1步骤3中所述制备)反应，得到[5-氨基-1-(3-氟-4-苯氧基-苯基)-1H-吡唑-4-基]-[1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮。MS计算值C31H23FN4O4S[(M+H)+]567，测定值567.1。
步骤5)
[5-氨基-1-(3-氟-4-苯氧基-苯基)-1H-吡唑-4-基]-(1H-吲哚-2-基)-甲酮
使用通用方法E中概括的条件使[5-氨基-1-(3-氟-4-苯氧基-苯基)-1H-吡唑-4-基]-[1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮与碳酸铯反应，得到[5-氨基-1-(3-氟-4-苯氧基-苯基)-1H-吡唑-4-基]-(1H-吲哚-2-基)-甲酮。MS计算值C24H17FN4O2[(M+H)+]413，测定值413.1。
实施例2
[5-氨基-1-(6-苯氧基-吡啶-3-基)-1H-吡唑-4-基]-(1H-吲哚-2-基)-甲酮
步骤1)
5-硝基-2-苯氧基-吡啶
使用通用方法A中概括的条件使2-氯-5-硝基-吡啶与苯酚反应，得到5-硝基-2-苯氧基-吡啶。
步骤2)
6-苯氧基-吡啶-3-基胺
使用通用方法B中概括的条件还原5-硝基-2-苯氧基-吡啶，得到6-苯氧基-吡啶-3-基胺。MS计算值C11H10N2O[(M+H)+]187，测定值187.1。
步骤3)
(6-苯氧基-吡啶-3-基)-肼
使用通用方法C-1中概括的条件使6-苯氧基-吡啶-3-基胺重氮化并且还原，得到(6-苯氧基-吡啶-3-基)-肼。
步骤4)
[5-氨基-1-(6-苯氧基-吡啶-3-基)-1H-吡唑-4-基]-[1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮
使用通用方法D中概括的条件使(6-苯氧基-吡啶-3-基)-肼与(E)-3-二甲氨基-2-[1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吲哚-2-羰基]-丙烯腈(可以如中间体1步骤3中所述制备)反应，得到[5-氨基-1-(6-苯氧基-吡啶-3-基)-1H-吡唑-4-基]-[1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮。MS计算值C30H23N5O4S[(M+H)+]550，测定值550.2。
步骤5)
[5-氨基-1-(6-苯氧基-吡啶-3-基)-1H-吡唑-4-基]-(1H-吲哚-2-基)-甲酮
使用通用方法E中概括的条件使[5-氨基-1-(6-苯氧基-吡啶-3-基)-1H-吡唑-4-基]-[1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮与碳酸铯反应，得到[5-氨基-1-(6-苯氧基-吡啶-3-基)-1H-吡唑-4-基]-(1H-吲哚-2-基)-甲酮。MS计算值C23H17N5O2S[(M+H)+]396，测定值396.1。
实施例3
{5-氨基-1-[4-(吡啶-2-基氧基)-苯基]-1H-吡唑-4-基}-(1H-吲哚-2-基)-甲酮
步骤1)
2-(4-硝基-苯氧基)-吡啶
使用通用方法A中概括的条件使1-氯-4-硝基-苯与吡啶-2-醇反应，得到2-(4-硝基-苯氧基)-吡啶。MS计算值C11H8N2O3[(M+H)+]217，测定值217.1。
步骤2)
4-(吡啶-2-基氧基)-苯基胺
使用通用方法B中概括的条件还原2-(4-硝基-苯氧基)-吡啶，得到4-(吡啶-2-基氧基)-苯基胺。MS计算值C11H10N2O[(M+H)+]187，测定值187.3。
步骤3)
[4-(吡啶-2-基氧基)-苯基]-肼
使用通用方法C-1中概括的条件使4-(吡啶-2-基氧基)-苯基胺重氮化并且还原，得到[4-(吡啶-2-基氧基)-苯基]-肼。
步骤4)
{5-氨基-1-[4-(吡啶-2-基氧基)-苯基]-1H-吡唑-4-基}-[1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮
使用通用方法D中概括的条件使[4-(吡啶-2-基氧基)-苯基]-肼与(E)-3-二甲氨基-2-[1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吲哚-2-羰基]-丙烯腈(可以如中间体1步骤3中所述制备)反应，得到{5-氨基-1-[4-(吡啶-2-基氧基)-苯基]-1H-吡唑-4-基}-[1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮。MS计算值C30H23N5O4S[(M+H)+]550，测定值550.0。
步骤5)
{5-氨基-1-[4-(吡啶-2-基氧基)-苯基]-1H-吡唑-4-基}-(1H-吲哚-2-基)-甲酮
使用通用方法E中概括的条件使{5-氨基-1-[4-(吡啶-2-基氧基)-苯基]-1H-吡唑-4-基}-[1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮与碳酸铯反应，得到{5-氨基-1-[4-(吡啶-2-基氧基)-苯基]-1H-吡唑-4-基}-(1H-吲哚-2-基)-甲酮。MS计算值C23H17N5O2S[(M+H)+]396，测定值395.9。
实施例4
{5-氨基-1-[4-(吡啶-3-基氧基)-苯基]-1H-吡唑-4-基}-(1H-吲哚-2-基)-甲酮
步骤1)
3-(4-硝基-苯氧基)-吡啶
使用通用方法A中概括的条件使1-氯-4-硝基-苯与吡啶-3-醇反应，得到3-(4-硝基-苯氧基)-吡啶。MS计算值C11H8N2O3[(M+H)+]217，测定值217.2。
步骤2)
4-(吡啶-3-基氧基)-苯基胺
使用通用方法B中概括的条件还原3-(4-硝基-苯氧基)-吡啶，得到4-(吡啶-3-基氧基)-苯基胺。MS计算值C11H10N2O[(M+H)+]187，测定值187.4。
步骤3)
[4-(吡啶-3-基氧基)-苯基]-肼
使用通用方法C-1中概括的条件使4-(吡啶-3-基氧基)-苯基胺重氮化并且还原，得到[4-(吡啶-3-基氧基)-苯基]-肼。
步骤4)
{5-氨基-1-[4-(吡啶-3-基氧基)-苯基]-1H-吡唑-4-基}-[1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮
使用通用方法D中概括的条件使[4-(吡啶-3-基氧基)-苯基]-肼与(E)-3-二甲氨基-2-[1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吲哚-2-羰基]-丙烯腈(可以如中间体1步骤3中所述制备)反应，得到{5-氨基-1-[4-(吡啶-3-基氧基)-苯基]-1H-吡唑-4-基}-[1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮。MS计算值C30H23N5O4S[(M+H)+]550，测定值550.3。
步骤5)
{5-氨基-1-[4-(吡啶-3-基氧基)-苯基]-1H-吡唑-4-基}-(1H-吲哚-2-基)-甲酮
使用通用方法E中概括的条件使{5-氨基-1-[4-(吡啶-3-基氧基)-苯基]-1H-吡唑-4-基}-[1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮与碳酸铯反应，得到{5-氨基-1-[4-(吡啶-3-基氧基)-苯基]-1H-吡唑-4-基}-(1H-吲哚-2-基)-甲酮。MS计算值C23H17N5O2S[(M+H)+]396，测定值396.4。
实施例5
5-氨基-1-(3-氯-4-苯氧基-苯基)-1H-吡唑-4-基]-(1H-吲哚-2-基)-甲酮
步骤1)
2-氯-4-硝基-1-苯氧基-苯
使用通用方法A中概括的条件使1，2-二氯-4-硝基-苯与苯酚反应，得到2-氯-4-硝基-1-苯氧基-苯。MS计算值C12H8ClNO3[(M+H)+]250，测定值249.9。
步骤2)
3-氯-4-苯氧基-苯基胺
使用通用方法B中概括的条件还原2-氯-4-硝基-1-苯氧基-苯，得到3-氯-4-苯氧基-苯基胺。
步骤3)
(3-氯-4-苯氧基-苯基)-肼
使用通用方法C-1中概括的条件使3-氯-4-苯氧基-苯基胺重氮化并且还原，得到(3-氯-4-苯氧基-苯基)-肼。
步骤4)
[5-氨基-1-(3-氯-4-苯氧基-苯基)-1H-吡唑-4-基]-[1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮
使用通用方法D中概括的条件使(3-氯-4-苯氧基-苯基)-肼与(E)-3-二甲氨基-2-[1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吲哚-2-羰基]-丙烯腈(可以如中间体1步骤3所述制备)反应，得到[5-氨基-1-(3-氯-4-苯氧基-苯基)-1H-吡唑-4-基]-[1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮。MS计算值C31H23ClN4O4S[(M+H)+]584，测定值585.2。
步骤5)
[5-氨基-1-(3-氯-4-苯氧基-苯基)-1H-吡唑-4-基]-(1H-吲哚-2-基)-甲酮
使用通用方法E中概括的条件使[5-氨基-1-(3-氯-4-苯氧基-苯基)-1H-吡唑-4-基]-[1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮与碳酸铯反应，得到[5-氨基-1-(3-氯-4-苯氧基-苯基)-1H-吡唑-4-基]-(1H-吲哚-2-基)-甲酮。MS计算值C24H17ClN4O2[(M+H)+]429，测定值429.4。
实施例6
{5-氨基-1-[4-(3，4-二氟-苯氧基)-苯基]-1H-吡唑-4-基}-(1H-吲哚-2-基)-甲酮
步骤1)
3，4-二氟-3-(4-硝基-苯氧基)-苯
使用通用方法A中概括的条件使1-氯-4-硝基-苯与3，4-二氟-苯酚反应，得到3，4-二氟-3-(4-硝基-苯氧基)-苯。MS计算值C12H7F2NO3[(M+H)+]252，测定值252.0。
步骤2)
4-(3，4-二氟-苯氧基)-苯基胺
使用通用方法B中概括的条件还原1，2-二氟-3-(4-硝基-苯氧基)-苯，得到4-(3，4-二氟-苯氧基)-苯基胺。
步骤3)
[4-(3，4-二氟-苯氧基)-苯基]-肼
使用通用方法C-1中概括的条件使4-(2，3-二氟-苯氧基)-苯基胺重氮化并且还原，得到[4-(3，4-二氟-苯氧基)-苯基]-肼。
步骤4)
{5-氨基-1-[4-(3，4-二氟-苯氧基)-苯基]-1H-吡唑-4-基}-[1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮
使用通用方法D中概括的条件使[4-(3，4-二氟-苯氧基)-苯基]-肼与(E)-3-二甲氨基-2-[1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吲哚-2-羰基]-丙烯腈(可以如中间体1步骤3所述制备)反应，得到{5-氨基-1-[4-(3，4-二氟-苯氧基)-苯基]-1H-吡唑-4-基}-[1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮。
步骤5)
{5-氨基-1-[4-(3，4-二氟-苯氧基)-苯基]-1H-吡唑-4-基}-(1H-吲哚-2-基)-甲酮
使用通用方法E中概括的条件使{5-氨基-1-[4-(3，4-二氟-苯氧基)-苯基]-1H-吡唑-4-基}-[1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮与碳酸铯反应，得到{5-氨基-1-[4-(3，4-二氟-苯氧基)-苯基]-1H-吡唑-4-基}-(1H-吲哚-2-基)-甲酮。MS计算值C24H16F2N4O2[(M+H)+]431，测定值431.3。
实施例7
[5-氨基-1-(3-甲氧基-4-苯氧基-苯基)-1H-吡唑-4-基]-(1H-吲哚-2-基)-甲酮
步骤1)
2-甲氧基-4-硝基-1-苯氧基-苯
使用通用方法A中概括的条件使1-氯-2-甲氧基-4-硝基-苯与苯酚反应，得到2-甲氧基-4-硝基-1-苯氧基-苯。MS计算值C13H11NO4[(M+H)+]246，测定值246.0。
步骤2)
3-甲氧基-4-苯氧基-苯基胺
使用通用方法B中概括的条件还原2-甲氧基-4-硝基-1-苯氧基-苯，得到3-甲氧基-4-苯氧基-苯基胺。
步骤3)
(3-甲氧基-4-苯氧基-苯基)-肼
使用通用方法C-1中概括的条件使3-甲氧基-4-苯氧基-苯基胺重氮化并且还原，得到(3-甲氧基-4-苯氧基-苯基)-肼。
步骤4)
[5-氨基-1-(3-甲氧基-4-苯氧基-苯基)-1H-吡唑-4-基]-[1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮
使用通用方法D中概括的条件使(3-甲氧基-4-苯氧基-苯基)-肼与(E)-3-二甲氨基-2-[1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吲哚-2-羰基]-丙烯腈(可以如中间体1步骤3所述制备)反应，得到[5-氨基-1-(3-甲氧基-4-苯氧基-苯基)-1H-吡唑-4-基]-[1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮。MS计算值C32H26N4O5S[(M+H)+]579，测定值579.1。
步骤5)
[5-氨基-1-(3-甲氧基-4-苯氧基-苯基)-1H-吡唑-4-基]-(1H-吲哚-2-基)-甲酮
使用通用方法E中概括的条件使[5-氨基-1-(3-甲氧基-4-苯氧基-苯基)-1H-吡唑-4-基]-[1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮与碳酸铯反应，得到[5-氨基-1-(3-甲氧基-4-苯氧基-苯基)-1H-吡唑-4-基]-(1H-吲哚-2-基)-甲酮。MS计算值C25H20N4O3[(M+H)+]425，测定值425.3。
实施例8
[5-氨基-1-(3-羟基-4-苯氧基-苯基)-1H-吡唑-4-基]-(1H-吲哚-2-基)-甲酮
步骤1)
[5-氨基-1-(3-羟基-4-苯氧基-苯基)-1H-吡唑-4-基]-[1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮
在0℃向[5-氨基-1-(3-甲氧基-4-苯氧基-苯基)-1H-吡唑-4-基]-[1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮(150mg，0.296mmol)在DCM(8mL)中的溶液中加入BBr3(0.103mL，1.04mmol)，搅拌30min。TLC显示原料完全耗尽，然后用NaOH水溶液使该混合物猝灭，用DCM萃取。用水洗涤有机层，用无水硫酸钠干燥，浓缩。通过柱色谱法纯化粗物质(硅胶，25％EtOAc/己烷)，得到[5-氨基-1-(3-羟基-4-苯氧基-苯基)-1H-吡唑-4-基]-[1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮(100mg，68％)，为淡黄色固体。MS计算值C31H24N4O5S[(M+H)+]565，测定值565.3。
步骤2)
[5-氨基-1-(3-羟基-4-苯氧基-苯基)-1H-吡唑-4-基]-(1H-吲哚-2-基)-甲酮
使用通用方法E中概括的条件使[5-氨基-1-(3-羟基-4-苯氧基-苯基)-1H-吡唑-4-基]-[1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮与碳酸铯反应，得到[5-氨基-1-(3-羟基-4-苯氧基-苯基)-1H-吡唑-4-基]-(1H-吲哚-2-基)-甲酮。MS计算值C24H18N4O3[(M+H)+]411，测定值411.2。
实施例9
[5-氨基-1-(2-甲氧基-4-苯氧基-苯基)-1H-吡唑-4-基]-(1H-吲哚-2-基)-甲酮
步骤1)
2-甲氧基-1-硝基-4-苯氧基-苯
使用通用方法A中概括的条件使1-氯-3-甲氧基-4-硝基-苯与苯酚反应，得到2-甲氧基-1-硝基-4-苯氧基-苯。MS计算值C13H11NO4[(M+H)+]246，测定值246.0。
步骤2)
2-甲氧基-4-苯氧基-苯基胺
使用通用方法B中概括的条件还原2-甲氧基-1-硝基-4-苯氧基-苯，得到2-甲氧基-4-苯氧基-苯基胺。
步骤3)
(2-甲氧基-4-苯氧基-苯基)-肼
使用通用方法C-1中概括的条件使2-甲氧基-4-苯氧基-苯基胺重氮化并且还原，得到(2-甲氧基-4-苯氧基-苯基)-肼。
步骤4)
[5-氨基-1-(2-甲氧基-4-苯氧基-苯基)-1H-吡唑-4-基]-[1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮
使用通用方法D中概括的条件使(2-甲氧基-4-苯氧基-苯基)-肼与(E)-3-二甲氨基-2-[1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吲哚-2-羰基]-丙烯腈(可以如中间体1步骤3所述制备)反应，得到[5-氨基-1-(2-甲氧基-4-苯氧基-苯基)-1H-吡唑-4-基]-[1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮。MS计算值C32H26N4O5S[(M+H)+]579，测定值579.1。
步骤5)
[5-氨基-1-(2-甲氧基-4-苯氧基-苯基)-1H-吡唑-4-基]-(1H-吲哚-2-基)-甲酮
使用通用方法E中概括的条件使[5-氨基-1-(2-甲氧基-4-苯氧基-苯基)-1H-吡唑-4-基]-[1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮与碳酸铯反应，得到[5-氨基-1-(2-甲氧基-4-苯氧基-苯基)-1H-吡唑-4-基]-(1H-吲哚-2-基)-甲酮。MS计算值C25H20N4O3[(M+H)+]425，测定值425.3。
实施例10
[5-氨基-1-(2-羟基-4-苯氧基-苯基)-1H-吡唑-4-基]-(1H-吲哚-2-基)-甲酮
步骤1)
[5-氨基-1-(2-羟基-4-苯氧基-苯基)-1H-吡唑-4-基]-[1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮
在0℃向[5-氨基-1-(2-甲氧基-4-苯氧基-苯基)-1H-吡唑-4-基]-[1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮(150mg，0.296mmol)在DCM(8mL)中的溶液中加入BBr3(0.103mL，1.04mmol)，搅拌30min。TLC显示原料完全耗尽，然后用NaOH水溶液使该混合物猝灭，用DCM萃取。用水洗涤有机层，用无水硫酸钠干燥，浓缩。通过柱色谱法纯化粗物质(硅胶，25％EtOAc/己烷)，得到[5-氨基-1-(2-羟基-4-苯氧基-苯基)-1H-吡唑-4-基]-[1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮(100mg，68％)，为淡黄色固体。MS计算值C31H24N4O5S[(M+H)+]565，测定值565.3。
步骤2)
[5-氨基-1-(2-羟基-4-苯氧基-苯基)-1H-吡唑-4-基]-(1H-吲哚-2-基)-甲酮
使用通用方法E中概括的条件使[5-氨基-1-(2-羟基-4-苯氧基-苯基)-1H-吡唑-4-基]-[1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮与碳酸铯反应，得到[5-氨基-1-(2-羟基-4-苯氧基-苯基)-1H-吡唑-4-基]-(1H-吲哚-2-基)-甲酮。MS计算值C24H18N4O3[(M+H)+]411，测定值411.3。
实施例11
[5-氨基-1-(4-异丙氧基-苯基)-1H-吡唑-4-基]-(1H-吲哚-2-基)-甲酮
步骤1)
1-异丙氧基-4-硝基-苯
使用通用方法A中概括的条件使1-氯-4-硝基-苯与异丙醇反应，得到1-异丙氧基-4-硝基-苯。MS计算值C9H11NO3[(M+H)+]182，测定值182.2。
步骤2)
4-异丙氧基-苯基胺
使用通用方法B中概括的条件还原1-异丙氧基-4-硝基-苯，得到4-异丙氧基-苯基胺。
步骤3)
(4-异丙氧基-苯基)-肼
使用通用方法C-1中概括的条件使4-异丙氧基-苯基胺重氮化并且还原，得到(4-异丙氧基-苯基)-肼。
步骤4)
[5-氨基-1-(4-异丙氧基-苯基)-1H-吡唑-4-基]-[1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮
使用通用方法D中概括的条件使(4-异丙氧基-苯基)-肼与(E)-3-二甲氨基-2-[1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吲哚-2-羰基]-丙烯腈(可以如中间体1步骤3所述制备)反应，得到[5-氨基-1-(4-异丙氧基-苯基)-1H-吡唑-4-基]-[1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮。MS计算值C28H26N4O4S[(M+H)+]515，测定值515.2。
步骤5)
[5-氨基-1-(4-异丙氧基-苯基)-1H-吡唑-4-基]-(1H-吲哚-2-基)-甲酮
使用通用方法E中概括的条件使[5-氨基-1-(4-异丙氧基-苯基)-1H-吡唑-4-基]-[1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮与碳酸铯反应，得到[5-氨基-1-(4-异丙氧基-苯基)-1H-吡唑-4-基]-(1H-吲哚-2-基)-甲酮。MS计算值C21H20N4O2[(M+H)+]361，测定值361.2。
实施例12
[5-氨基-1-(4-环戊氧基-苯基)-1H-吡唑-4-基]-(1H-吲哚-2-基)-甲酮
步骤1)
1-环戊氧基-4-硝基-苯
使用通用方法A中概括的条件使1-氯-4-硝基-苯与环戊醇反应，得到1-环戊氧基-4-硝基-苯。
步骤2)
4-环戊氧基-苯基胺
使用通用方法B中概括的条件还原1-环戊氧基-4-硝基-苯，得到4-环戊氧基-苯基胺。
步骤3)
(4-环戊氧基-苯基)-肼
使用通用方法C-1中概括的条件使4-环戊氧基-苯基胺重氮化并且还原，得到(4-环戊氧基-苯基)-肼。
步骤4)
[5-氨基-1-(4-环戊氧基-苯基)-1H-吡唑-4-基]-[1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮
使用通用方法D中概括的条件使(4-环戊氧基-苯基)-肼与(E)-3-二甲氨基-2-[1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吲哚-2-羰基]-丙烯腈(可以如中间体1步骤3所述制备)反应，得到[5-氨基-1-(4-环戊氧基-苯基)-1H-吡唑-4-基]-[1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮。MS计算值C30H28N4O4S[(M+H)+]541，测定值541.3。
步骤5)
[5-氨基-1-(4-环戊氧基-苯基)-1H-吡唑-4-基]-(1H-吲哚-2-基)-甲酮
使用通用方法E中概括的条件使[5-氨基-1-(4-环戊氧基-苯基)-1H-吡唑-4-基]-[1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮与碳酸铯反应，得到[5-氨基-1-(4-环戊氧基-苯基)-1H-吡唑-4-基]-(1H-吲哚-2-基)-甲酮。MS计算值C23H22N4O2[(M+H)+]387，测定值387.4。
实施例13
{5-氨基-1-[4-(2，2-二甲基-丙氧基)-苯基]-1H-吡唑-4-基}-(1H-吲哚-2-基)-甲酮
步骤1)
1-(2，2-二甲基-丙氧基)-4-硝基-苯
使用通用方法A中概括的条件使1-氯-4-硝基-苯与2，2-二甲基-丙-1-醇反应，得到1-环戊氧基-4-硝基-苯。MS计算值C11H15NO3[(M+H)+]210，测定值210.2。
步骤2)
4-(2，2-二甲基-丙氧基)-苯基胺
使用通用方法B中概括的条件还原1-(2，2-二甲基-丙氧基)-4-硝基-苯，得到4-(2，2-二甲基-丙氧基)-苯基胺。
步骤3)
[4-(2，2-二甲基-丙氧基)-苯基]-肼
使用通用方法C-1中概括的条件使4-(2，2-二甲基-丙氧基)-苯基胺重氮化并且还原，得到[4-(2，2-二甲基-丙氧基)-苯基]-肼。
步骤4)
{5-氨基-1-[4-(2，2-二甲基-丙氧基)-苯基]-1H-吡唑-4-基}-[1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮
使用通用方法D中概括的条件使[4-(2，2-二甲基-丙氧基)-苯基]-肼与(E)-3-二甲氨基-2-[1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吲哚-2-羰基]-丙烯腈(可以如中间体1步骤3所述制备)反应，得到{5-氨基-1-[4-(2，2-二甲基-丙氧基)-苯基]-1H-吡唑-4-基}-[1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮。MS计算值C30H30N4O4S[(M+H)+]543，测定值543.2。
步骤5)
{5-氨基-1-[4-(2，2-二甲基-丙氧基)-苯基]-1H-吡唑-4-基}-(1H-吲哚-2-基)-甲酮
使用通用方法E中概括的条件使{5-氨基-1-[4-(2，2-二甲基-丙氧基)-苯基]-1H-吡唑-4-基}-[1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮与碳酸铯反应，得到{5-氨基-1-[4-(2，2-二甲基-丙氧基)-苯基]-1H-吡唑-4-基}-(1H-吲哚-2-基)-甲酮。MS计算值C23H24N4O2[(M+H)+]389，测定值389.2。
实施例14
{5-氨基-1-[4-(2，3-二氟-苯氧基)-2-甲基-苯基]-1H-吡唑-4-基}-(1H-吲哚-2-基)-甲酮
步骤1：2-甲基-1-硝基-4-(2，3-二氟)-苯氧基-苯
使4-氯-2-甲基-硝基苯与2，3-二氟-苯酚在通用方法A中概括的条件下反应，得到2-甲基-1-硝基-4-(2，3-二氟)-苯氧基-苯。MS计算值C13H10F2NO3[(M+H)+]266，测定值266.2。
步骤2：4-(2，3-二氟-苯氧基)-2-甲基-苯基胺
使用通用方法B概括的条件还原2-甲基-1-硝基-4-(2，3-二氟)-苯氧基-苯，得到4-(2，3-二氟-苯氧基)-2-甲基-苯基胺。MS计算值C13H12F2NO[(M+H)+]236，测定值235.8。
步骤3：[4-(2，3-二氟-苯氧基)-2-甲基-苯基]-肼，盐酸盐
使用通用方法C-2中概括的条件使4-(2，3-二氟-苯氧基)-2-甲基-苯基胺重氮化并且还原，得到[4-(2，3-二氟-苯氧基)-2-甲基-苯基]-肼盐酸盐。
步骤4)
{5-氨基-1-[4-(2，3-二氟-苯氧基)-2-甲基-苯基]-1H-吡唑-4-基}-(1-乙氧基甲基-1H-吲哚-2-基)-甲酮
在20mL闪烁小瓶中，将(E)-3-(二甲氨基)-2-(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲哚-2-羰基)丙烯腈(中间体2步骤3)(200mg，0.541mmol)、(4-(2，3-二氟苯氧基)-2-甲基苯基)肼(271mg，1.08mmol)和碳酸钾(224mg，1.62mmol)与EtOH(4mL)合并，得到黄色混悬液。将该反应混合物在80℃加热过夜。用EtOAc稀释该反应混合物，用盐水洗涤。用无水硫酸钠干燥合并的有机相，减压除去溶剂。通过柱色谱法纯化粗物质(硅胶，EtOAc/己烷0-100％)，得到{5-氨基-1-[4-(2，3-二氟-苯氧基)-2-甲基-苯基]-1H-吡唑-4-基}-(1-乙氧基甲基-1H-吲哚-2-基)-甲酮(165mg，79％)，为油状物。LC/MS：m/z计算值C28H24F2N4O3([M+H]+)：503.5，测定值：503.1。
步骤5)
{5-氨基-1-[4-(2，3-二氟-苯氧基)-2-甲基-苯基]-1H-吡唑-4-基}-(1H-吲哚-2-基)-甲酮
在20mL闪烁小瓶中，将(5-氨基-1-(4-(2，3-二氟苯氧基)-2-甲基苯基)-1H-吡唑-4-基)(1-(乙氧基甲基)-1H-吲哚-2-基)甲酮(100mg，0.199mmol)与EtOH(4mL)和HCl 10％水溶液(2mL)合并。将该反应混合物在80℃加热2小时。用EtOAc稀释该反应混合物，用盐水洗涤。用无水硫酸钠干燥合并的有机相，减压除去溶剂。通过柱色谱法纯化粗物质(硅胶，0-70％EtOAc-己烷)，得到{5-氨基-1-[4-(2，3-二氟-苯氧基)-2-甲基-苯基]-1H-吡唑-4-基}-(1H-吲哚-2-基)-甲酮(36mg，41％)，为油状物。LC/MS：m/z计算值C25H18F2N4O2([M+H]+)：445.4，测定值：444.9。
实施例15
2-{4-[5-氨基-4-(1H-吲哚-2-羰基)-吡唑-1-基]-3-甲基-苯氧基}-苄腈
步骤1)
2-(3-甲基-4-硝基-苯氧基)-苄腈
将4-氟-2-甲基-1-硝基-苯(13.1g，84mmol)、2-羟基苄腈(10g，84mmol)和K2CO3(23.5g，168mmol)在丙酮(100mL)中的混合物在70℃加热过夜。加入水，用EtOAc萃取该混合物。用无水硫酸钠干燥合并的有机层，过滤，蒸发。加入MeOH，将该混合物在室温静置，历时一个周末。过滤固体，得到2批2-(3-甲基-4-硝基-苯氧基)-苄腈(7.5g，35％)，为黄色固体。1H NMR(300MHz，CDCl3)δppm 8.10(d，J＝8.9Hz，1H)，7.75(dd，J＝7.7，1.5Hz，1H)，7.56-7.68(m，1H)，7.33(td，J＝7.6，0.9Hz，1H)，7.09(d，J＝8.5Hz，1H)，6.88-7.00(m，2H)，2.64(s，3H)。MS计算值C14H11N2O3[(M+H)+]255，测定值255.0。
步骤2)
2-(4-氨基-3-甲基-苯氧基)-苄腈
将氯化锡(II)(18.6g，98.3mmol)、2-(3-甲基-4-硝基-苯氧基)-苄腈(5g，19.7mmol)、MeOH(60mL)、THF(100mL)和水(30mL)的混合物在70℃加热4h。蒸发该混合物，通过添加10N NaOH使残余物呈碱性。用EtOAc萃取得到的混合物。干燥有机层(Na2SO4)，过滤，蒸发。通过色谱法纯化残余物(硅胶，0-30％EtOAc/己烷)，得到2-(4-氨基-3-甲基-苯氧基)-苄腈(3.5g，79％)，为固体。MS计算值C14H13N2O[(M+H)+]225，测定值224.9。
步骤3)
2-(4-肼基-3-甲基-苯氧基)-苄腈盐酸盐
在4℃将NaNO2(1.23g，17.8mmol)在水(10mL)中的溶液加入到2-(4-氨基-3-甲基-苯氧基)-苄腈(2g，8.92mmol)、HCl(10mL)、水(20mL)和MeOH(15mL)的混合物中。将该混合物在4℃搅拌45min。加入氯化锡(II)(10g，44.6mmol)在浓HCl(10mL)中的溶液，将该混合物搅拌4h。过滤该混合物，得到粗2-(4-肼基-3-甲基-苯氧基)-苄腈盐酸盐(600mg，28％)，为黄色盐。将该物质不经进一步纯化用于下一步。
步骤4)
2-(4-{5-氨基-4-[1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-1H-吲哚-2-羰基]-吡唑-1-基}-3-甲基-苯氧基)-苄腈
在20mL闪烁小瓶中，将(E)-3-(二甲氨基)-2-(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲哚-2-羰基)丙烯腈(中间体2步骤3)(200mg，0.541mmol)、2-(3-肼基-2-甲基苯氧基)苄腈盐酸盐(200mg，0.836mmol)和碳酸钾(300mg，2.17mmol)与EtOH(4mL)合并，得到深红色混悬液。将该反应混合物在80℃加热过夜。用EtOAc稀释该反应混合物，用盐水洗涤。用无水硫酸钠干燥合并的有机相，减压除去溶剂。通过柱色谱法纯化粗物质(硅胶，0-70％EtOAc-己烷)，得到2-(4-{5-氨基-4-[1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-1H-吲哚-2-羰基]-吡唑-1-基}-3-甲基-苯氧基)-苄腈(160mg，52％)，为油状物。LC/MS：m/z计算值C32H33N5O3Si([M+H]+)：564.7，测定值：564.2。
步骤5)
2-{4-[5-氨基-4-(1H-吲哚-2-羰基)-吡唑-1-基]-3-甲基-苯氧基}-苄腈
在20mL闪烁小瓶中，合并2-(4-(5-氨基-4-(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲哚-2-羰基)-1H-吡唑-1-基)-3-甲基苯氧基)苯甲酰胺(160mg，0.275mmol，Eq：1.00)、TBAF 1M的THF溶液(5.5mL，5.5mmol，Eq：20)和乙-1，2-二胺(165mg，2.75mmol，Eq：10)。将该反应混合物在70℃加热过夜。18小时后，反应不完全。再加入4mL TBAF 1M的THF溶液，保持在70℃再搅拌2小时。减压除去溶剂。用EtOAc稀释粗物质，用饱和NH4Cl水溶液洗涤。用无水硫酸钠干燥合并的有机相，减压除去溶剂。通过柱色谱法纯化粗物质(硅胶，0-100％EtOAc/己烷)，得到2-{4-[5-氨基-4-(1H-吲哚-2-羰基)-吡唑-1-基]-3-甲基-苯氧基}-苄腈(50mg，42％)，为固体。LC/MS：m/z计算值C26H19N5O2([M+H]+)：434.4，测定值：434.0。
实施例16
3-{4-[5-氨基-4-(1H-吲哚-2-羰基)-吡唑-1-基]-3-氯-苯氧基}-苄腈
步骤1)
3-(3-氯-4-硝基-苯氧基)-苄腈
将2-氯-4-氟-1-硝基-苯(15g，85mmol)、3-羟基苄腈(10.1g，85mmol)和Cs2CO3(30.4g，93.5mmol)在DMF(100mL)中的混合物在120℃加热1h。加入EtOAc，用水和盐水洗涤该混合物。干燥有机层(Na2SO4)，过滤，蒸发，得到3-(3-氯-4-硝基-苯氧基)-苄腈(23g，99％)，为黄色固体。
步骤2)
3-(4-氨基-3-氯-苯氧基)-苄腈
将二水合氯化锡(II)(75.4g，335mmol)在HCl(50mL)中的溶液加入到3-(3-氯-4-硝基-苯氧基)-苄腈(23g，83.9mmol)在MeOH(500mL)中的溶液中，将该混合物在室温搅拌6h。通过添加2N NaOH使该混合物呈碱性，用EtOAc萃取得到的混合物。用盐水洗涤有机层，干燥(Na2SO4)，过滤，蒸发。通过色谱法纯化残余物(硅胶，0-30％EtOAc/己烷)，得到3-(4-氨基-3-氯-苯氧基)-苄腈(13.8g，67％)，为黄色油状物。
步骤3)
3-(3-氯-4-肼基-苯氧基)-苄腈盐酸盐
将3-(4-氨基-3-氯-苯氧基)-苄腈(5g，20.4mmol)和浓HCl(30mL)在MeOH(30mL)中的混合物冷却至-5℃。加入NaNO2(1.72g，24.5mmol)在水(2mL)中的溶液，在-5℃将该混合物搅拌40min。加入二水合氯化锡(II)(23.1g，102mmol)在HCl(20mL)中的溶液，将该混合物搅拌1h。蒸发该混合物，过滤出固体，真空干燥，得到3-(3-氯-4-肼基-苯氧基)-苄腈盐酸盐(5.8g，96％)。将该物质不经进一步纯化用于下一步。
步骤4)
3-{4-[5-氨基-4-(1-乙氧基甲基-1H-吲哚-2-羰基)-吡唑-1-基]-3-氯-苯氧基}-苄腈
在20mL闪烁小瓶中，将(E)-3-(二甲氨基)-2-(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲哚-2-羰基)丙烯腈(中间体2，步骤3)(100mg，0.271mmol)、碳酸钾(112mg，0.812mmol)和3-(3-氯-4-肼基苯氧基)苄腈(217mg，0.836mmol)与EtOH(4mL)合并，得到黄色混悬液。将该反应混合物在80℃加热过夜。用EtOAc稀释该反应混合物，用盐水洗涤。用无水硫酸钠干燥合并的有机相，减压除去溶剂。通过柱色谱法纯化粗物质(硅胶，0-100％EtOAc/己烷)，得到3-{4-[5-氨基-4-(1-乙氧基甲基-1H-吲哚-2-羰基)-吡唑-1-基]-3-氯-苯氧基}-苄腈(95mg，69％)，为油状物。LC/MS：m/z计算值C28H22ClN5O3([M+H]+)：512.9，测定值：511.9。
步骤5)
3-{4-[5-氨基-4-(1H-吲哚-2-羰基)-吡唑-1-基]-3-氯-苯氧基}-苄腈
在20mL闪烁小瓶中，将3-(4-(5-氨基-4-(1-(乙氧基甲基)-1H-吲哚-2-羰基)-1H-吡唑-1-基)-3-氯苯氧基)苄腈(60mg，0.117mmol)与EtOH(4mL)和HCl 10％水溶液(2mL)合并。将该反应混合物在80℃加热3小时。用EtOAc稀释该反应混合物，用盐水洗涤。用无水硫酸钠干燥合并的有机相，减压除去溶剂。通过柱色谱法纯化粗物质(硅胶，0-70％EtOAc/己烷)，得到3-{4-[5-氨基-4-(1H-吲哚-2-羰基)-吡唑-1-基]-3-氯-苯氧基}-苄腈(18mg，34％)，为浅棕色固体。LC/MS：m/z计算值C25H16ClN5O2([M+H]+)：454.8，测定值：454.0。
实施例17
3-{4-[5-氨基-4-(1H-苯并咪唑-2-羰基)-吡唑-1-基]-3-甲基-苯氧基}-苯甲酰胺
步骤1)
3-(3-甲基-4-硝基-苯氧基)-苄腈
将4-氟-2-甲基-1-硝基-苯(13.1g，84mmol)、3-羟基苄腈(10g，84mmol)和Cs2CO3(30.1g，92mmol)在DMF(100mL)中的混合物在120℃加热3h。加入Et2O，用水和盐水洗涤该混合物。干燥有机层(Na2SO4)，过滤，蒸发，得到3-(3-甲基-4-硝基-苯氧基)-苄腈(19.2g，90％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 8.09(d，J＝8.8Hz，1H)，7.71-7.77(m，2H)，7.62-7.70(m，1H)，7.48-7.55(m，1H)，7.16(d，J＝2.8Hz，1H)，7.04(dd，J＝8.9，2.9Hz，1H)。MS计算值C14H11N2O3[(M+H)+]255，测定值254.9。
步骤2)
3-(4-氨基-3-甲基-苯氧基)-苄腈
将二水合氯化锡(II)(34.9g，155mmol)在浓HCl(35mL)中的溶液加入到3-(3-甲基-4-硝基-苯氧基)-苄腈(9.85g，38.7mmol)在MeOH(300mL)中的溶液中，将该混合物搅拌过夜。蒸发该混合物，通过添加2N NaOH使残余物呈碱性。用EtOAc将得到的混合物萃取4次。用水和盐水洗涤有机层，干燥(Na2SO4)，过滤，蒸发。通过色谱法纯化残余物(硅胶，0-30％EtOAc/己烷)，得到3-(4-氨基-3-甲基-苯氧基)-苄腈(4.6g，53％)，为黑色液体。MS计算值C14H13N2O([M+H]+)：225，测定值225.0。
步骤3)
3-(4-肼基-3-甲基-苯氧基)-苄腈
在4℃将NaNO2(340mg，4.9mmol)在水(1mL)中的溶液加入到3-(4-氨基-3-甲基-苯氧基)-苄腈(1g，4.46mmol)、浓HCl(2mL)、水(4mL)和MeOH(2mL)的混合物中。将该混合物搅拌30min。缓慢地加入氯化锡(II)(4.23g，22mmol)在浓HCl(10mL)中的溶液，将该混合物搅拌3h。加入MeOH(10mL)，然后加入10M NaOH(谨慎：放热)。冷却该混合物，加入EtOAc和10MNaOH。用盐水洗涤有机相，蒸发，得到粗的3-(4-肼基-3-甲基-苯氧基)-苄腈(600mg，56％)，为红棕色油状物。将该物质不经进一步纯化用于下一步。MS计算值C14H14N3O([M+H]+)：240，测定值222.9。
步骤4)
3-(4-{5-氨基-4-[1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-1H-苯并咪唑-2-羰基]-吡唑-1-基}-3-甲基-苯氧基)-苄腈
在20mL闪烁小瓶中，将(E)-3-(二甲氨基)-2-(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-羰基)丙烯腈(中间体3，步骤3)(200mg，0.540mmol)、3-(4-肼基-3-甲基苯氧基)苄腈(200mg，0.836mmol)和碳酸钾(300mg，2.17mmol)与EtOH(4mL)合并，得到橙色混悬液。将该反应混合物在80℃加热过夜。反应不完全。加入3-(4-肼基-3-甲基苯氧基)苄腈(200mg，0.836mmol，Eq：1.55)，将该反应混合物在80℃再加热1小时。用EtOAc稀释该反应混合物，用盐水洗涤。用无水硫酸钠干燥合并的有机相，减压除去溶剂。通过柱色谱法纯化粗物质(硅胶，0-70％EtOAc/己烷)，得到3-(4-{5-氨基-4-[1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-1H-苯并咪唑-2-羰基]-吡唑-1-基}-3-甲基-苯氧基)-苄腈(30mg，10％)，为油状物。LC/MS：m/z计算值C31H32N6O3Si([M+H]+)：565.7，测定值：565.1。
步骤5)
3-{4-[5-氨基-4-(1H-苯并咪唑-2-羰基)-吡唑-1-基]-3-甲基-苯氧基}-苯甲酰胺
在20mL闪烁小瓶中，将3-(4-(5-氨基-4-(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-羰基)-1H-吡唑-1-基)-3-甲基苯氧基)苄腈(30mg，0.053mmol)、湿TBAF 1M的THF溶液(13.9mg，0.053mmol)和乙-1，2-二胺(32mg，0.53mmol)与THF(1mL)合并。将该反应混合物在70℃加热24小时。减压除去溶剂。用EtOAc稀释粗物质，用饱和NH4Cl水溶液洗涤。用无水硫酸钠干燥合并的有机相，减压除去溶剂。通过柱色谱法纯化粗物质(硅胶，0-100％EtOAc/己烷)，得到3-{4-[5-氨基-4-(1H-苯并咪唑-2-羰基)-吡唑-1-基]-3-甲基-苯氧基}-苯甲酰胺(13mg，54％收率)，为固体。LC/MS：m/z计算值C25H20N6O3([M+H]+)：453.4，测定值：452.9。
实施例18
{5-氨基-1-[4-(2，3-二氟-苯氧基)-2-甲基-苯基]-1H-吡唑-4-基}-(1H-苯并咪唑-2-基)-甲酮
步骤1)
{5-氨基-1-[4-(2，3-二氟-苯氧基)-2-甲基-苯基]-1H-吡唑-4-基}-[1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-1H-苯并咪唑-2-基]-甲酮
在20mL闪烁小瓶中，将(E)-3-(二甲氨基)-2-(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-羰基)丙烯腈(中间体3，步骤3)(200mg，0.540mmol)、(4-(2，3-二氟苯氧基)-2-甲基苯基)肼(实施例14，步骤3)(261mg，1.04mmol)和碳酸钾(224mg，1.62mmol)与EtOH(5mL)合并，得到黄色混悬液。将该反应混合物在80℃加热过夜。用EtOAc稀释该反应混合物，用盐水洗涤。用无水硫酸钠干燥合并的有机相，减压除去溶剂。通过柱色谱法纯化粗物质(硅胶，0-70％EtOAc/己烷)，得到{5-氨基-1-[4-(2，3-二氟-苯氧基)-2-甲基-苯基]-1H-吡唑-4-基}-[1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-1H-苯并咪唑-2-基]-甲酮(40mg，13％收率)，为油状物。LC/MS：m/z计算值C30H31F2N5O3Si([M+H]+)：576.7，测定值：576.1。
步骤2)
{5-氨基-1-[4-(2，3-二氟-苯氧基)-2-甲基-苯基]-1H-吡唑-4-基}-(1H-苯并咪唑-2-基)-甲酮
在20mL闪烁小瓶中，将(5-氨基-1-(4-(2，3-二氟苯氧基)-2-甲基苯基)-1H-吡唑-4-基)(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)甲酮(40mg，0.070mmol)、乙-1，2-二胺(42mg，0.695mmol)和TBAF 1M的THF溶液(0.9mL，1.8mmol)与THF(1mL)合并，得到淡红色溶液。将该反应混合物在70℃加热24小时。减压除去溶剂。用EtOAc稀释粗物质，用饱和NH4Cl水溶液洗涤。用无水硫酸钠干燥合并的有机相，减压除去溶剂。通过柱色谱法纯化粗物质(硅胶，0-100％EtOAc/己烷)，得到{5-氨基-1-[4-(2，3-二氟-苯氧基)-2-甲基-苯基]-1H-吡唑-4-基}-(1H-苯并咪唑-2-基)-甲酮(20mg，65％收率)，为固体。LC/MS：m/z计算值C24H17F2N5O2([M+H]+)：446.4，测定值：445.9。
实施例19
[5-氨基-1-(4-苯氧基-苯基)-1H-吡唑-4-基]-(6-吗啉-4-基甲基-1H-吲哚-2-基)-甲酮
步骤1)4-吗啉-4-基甲基-苯甲酸甲酯
在0℃将二异丙基乙胺(15.2mL，87.3mmol)加入到搅拌的吗啉(4.2mL，48mmol)在干THF(50mL)中的溶液中。加入在干THF(70mL)中的4-溴甲基-苯甲酸甲酯(10g，87.3mmol)，搅拌12h。减压除去溶剂，用水稀释。用乙酸乙酯萃取得到的溶液。用无水硫酸钠干燥合并的有机相，减压蒸发。通过柱色谱法纯化粗物质(硅胶，30％EtOAc/己烷)，得到4-吗啉-4-基甲基-苯甲酸甲酯(10.5g，93％)，为黄白色固体。MS计算值C13H17NO3[(M+H)+]236，测定值236.1。
步骤2)(4-吗啉-4-基甲基-苯基)-甲醇
在0℃在氮气气氛中将硼氢化钠(2.57g，68mmol)加入到搅拌的4-吗啉-4-基甲基-苯甲酸甲酯(2g，8.5mmol)在THF∶MeOH(8∶1)混合物(56mL)中的溶液中。将该反应混合物加热至回流2h。在0℃用饱和氯化铵溶液猝灭，搅拌30min。用乙酸乙酯(20mL x 2)萃取，用无水硫酸钠干燥，减压蒸发，通过柱色谱法纯化(硅胶，2％MeOH/DCM)，得到(4-吗啉-4-基甲基-苯基)-甲醇(1.3g，74％)，为白色固体。MS计算值C12H17NO2[(M+H)+]208，测定值208.1。
步骤3)4-吗啉-4-基甲基-苯甲醛
在rt将二氧化锰(3.28g，37.67mmol)加入到搅拌的(4-吗啉-4-基甲基-苯基)-甲醇(1.3g，6.28mmol)在二氯甲烷(120mL)中的溶液中，搅拌72h。通过烧结漏斗、使用硅藻土过滤该反应混合物，用二氯甲烷(50mL)洗涤。减压蒸发溶剂，通过柱色谱法纯化(硅胶，20％EtOAc/己烷)，得到4-吗啉-4-基甲基-苯甲醛(1.2g，93％)，为白色固体。MS计算值C12H15NO2[(M+H)+]206，测定值206.3。
步骤4)E)-2-叠氮基-3-(4-吗啉-4-基甲基-苯基)-丙烯酸甲酯
在0℃将4-吗啉-4-基甲基-苯甲醛(6.8g，33.17mmol)和叠氮基-乙酸乙酯(7.11g，132.68mmol)在甲醇(18mL)中的混合物加入到搅拌的甲醇钠(5.37g，99.51mmol)在甲醇(30mL)中的溶液中，搅拌30min。用烧结漏斗过滤该反应混合物，用水洗涤，得到E)-2-叠氮基-3-(4-吗啉-4-基甲基-苯基)-丙烯酸甲酯(7g，70％)，为白色固体。MS计算值C15H18N4O3[(M+H)+]302，测定值303.3。
步骤5)6-吗啉-4-基甲基-1H-吲哚-2-甲酸甲酯
将在二甲苯(90mL)中的E)-2-叠氮基-3-(4-吗啉-4-基甲基-苯基)-丙烯酸甲酯(3.8g，12.58mmol)加热至90℃ 2h，冷却至rt，在rt搅拌12h。减压蒸发二甲苯，通过柱色谱法纯化(硅胶，2％MeOH/DCM)，得到6-吗啉-4-基甲基-1H-吲哚-2-甲酸甲酯(1.9g，55％)，为白色固体。MS计算值C15H18N2O3[(M+H)+]275，测定值275.2。
步骤6)6-吗啉-4-基甲基-1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吲哚-2-甲酸甲酯
在0℃将在干THF(10mL)中的6-吗啉-4-基甲基-1H-吲哚-2-甲酸甲酯(3.6g，13.13mmol)加入到搅拌的氢化钠的60％油分散液(1.3g，32.84mmol)在干THF(20mL)中的溶液中，搅拌30min。加入在干THF(10mL)中的对-甲苯磺酰氯(5g，26.27mmol)。将该反应混合物在rt搅拌12h。用饱和氯化铵溶液猝灭，用乙酸乙酯萃取，用无水硫酸钠干燥，减压蒸发。通过柱色谱法纯化粗物质(硅胶，1％MeOH/DCM)，得到6-吗啉-4-基甲基-1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吲哚-2-甲酸甲酯(3.5g，93％)，为白色固体。MS计算值C22H24N2O5S[(M+H)+]429，测定值428.9。
步骤7)3-[6-吗啉-4-基甲基-1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吲哚-2-基]-3-氧代-丙腈
在-78℃将丁基锂(15ml，13.55mmol)加入到搅拌的二异丙基胺(1.95ml，13.55mmol)在干THF(20mL)中的溶液中，搅拌30min。在-78℃将其加入到搅拌的6-吗啉-4-基甲基-1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吲哚-2-甲酸甲酯(2.9g，6.77mmol)和乙腈(1.4mL，27mmol)在干THF(20mL)中的溶液中，搅拌30min。用饱和氯化铵溶液使该反应混合物猝灭，用乙酸乙酯(20mL X2)萃取。用无水硫酸钠干燥合并的有机相，减压蒸发，通过柱色谱法纯化(硅胶，2％MeOH/DCM)，得到3-[6-吗啉-4-基甲基-1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吲哚-2-基]-3-氧代-丙腈(1.8g，90％)，为黄色固体。MS计算值C23H23N3O4S[(M+H)+]438，测定值438.1。
步骤8)(E)-3-二甲氨基-2-[6-吗啉-4-基甲基-1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吲哚-2-羰基]-丙烯腈
在rt将DMF-DMA(3.9ml，29.3mmol)加入到搅拌的3-[6-吗啉-4-基甲基-1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吲哚-2-基]-3-氧代-丙腈(3.2g，7.32mmol)在干甲苯(50mL)中的溶液中，搅拌12h。甲苯减压蒸发，通过柱色谱法纯化(硅胶，2％MeOH/DCM)，得到(E)-3-二甲氨基-2-[6-吗啉-4-基甲基-1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吲哚-2-羰基]-丙烯腈(2.5g，97％)，为黄色固体。MS计算值C26H28N4O4S[(M+H)+]493，测定值493.3。
步骤9)[5-氨基-1-(4-苯氧基-苯基)-1H-吡唑-4-基]-[6-吗啉-4-基甲基-1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮
将(E)-3-二甲氨基-2-[6-吗啉-4-基甲基-1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吲哚-2-羰基]-丙烯腈(0.15g，0.305mmol))加入到搅拌的(4-苯氧基-苯基)-肼(0.091g，0.457mmol)在乙醇中的溶液中，回流加热16h。减压蒸发乙醇，通过柱色谱法纯化粗物质(硅胶，2％MeOH/DCM)，得到[5-氨基-1-(4-苯氧基-苯基)-1H-吡唑-4-基]-[6-吗啉-4-基甲基-1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮(0.14g，71％)，为黄色固体。MS计算值C36H33N5O5S[(M+H)+]648，测定值648.2。
步骤10)[5-氨基-1-(4-苯氧基-苯基)-1H-吡唑-4-基]-(6-吗啉-4-基甲基-1H-吲哚-2-基)-甲酮
在rt将碳酸铯(0.21g，0.65mmol)加入到搅拌的[5-氨基-1-(4-苯氧基-苯基)-1H-吡唑-4-基]-[6-吗啉-4-基甲基-1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮(0.14g，0.216mmol)在THF∶MeOH(7∶3)(6mL)混合物中的溶液中，搅拌18h。减压蒸发溶剂，通过柱色谱法纯化粗物质(硅胶，5％MeOH/DCM)，得到[5-氨基-1-(4-苯氧基-苯基)-1H-吡唑-4-基]-[6-吗啉-4-基甲基-1H-吲哚-2-基]-甲酮(0.055g，52％)，为黄色固体。MS计算值C29H27N5O3[(M+H)+]494，测定值494.4。
实施例20
3-{4-[5-氨基-4-(6-吗啉-4-基甲基-1H-吲哚-2-羰基)-吡唑-1-基]-3-氯-苯氧基}-苄腈
步骤1)3-(3-氯-4-硝基-苯氧基)-苄腈
将2-氯-4-氟-1-硝基-苯(15g，85mmol)、3-羟基苄腈(10.1g，85mmol)和Cs2CO3(30.4g，93.5mmol)在DMF(100mL)中的混合物在120℃加热1h。加入EtOAc，用水和盐水洗涤该混合物。干燥有机层(Na2SO4)，过滤，蒸发，得到3-(3-氯-4-硝基-苯氧基)-苄腈(23g，99％)，为黄色固体。
步骤2)3-(4-氨基-3-氯-苯氧基)-苄腈
将二水合氯化锡(II)(75.4g，335mmol)在HCl(50mL)中的溶液加入到3-(3-氯-4-硝基-苯氧基)-苄腈(23g，83.9mmol)在MeOH(500mL)中的溶液中，将该混合物在室温搅拌6h。通过添加2N NaOH使该混合物呈碱性，用EtOAc萃取得到的混合物。用盐水洗涤有机层，干燥(Na2SO4)，过滤，蒸发。通过色谱法纯化残余物(硅胶，0-30％EtOAc/己烷)，得到3-(4-氨基-3-氯-苯氧基)-苄腈(13.8g，67％)，为黄色油状物。
步骤3)3-(3-氯-4-肼基-苯氧基)-苄腈盐酸盐
将3-(4-氨基-3-氯-苯氧基)-苄腈(5g，20.4mmol)和浓HCl(30mL)在MeOH(30mL)中的混合物冷却至-5℃。加入NaNO2(1.72g，24.5mmol)在水(2mL)中的溶液，将该混合物在-5℃搅拌40min。加入二水合氯化锡(II)(23.1g，102mmol)在HCl(20mL)中的溶液，将该混合物搅拌1h。蒸发该混合物，过滤出固体，真空干燥，得到3-(3-氯-4-肼基-苯氧基)-苄腈盐酸盐(5.8g，96％)。将该物质不经进一步纯化用于下一步。
步骤4)6-吗啉-4-基甲基-1H-吲哚-2-甲酸甲酯
将(E)-2-叠氮基-3-(4-吗啉-4-基甲基-苯基)-丙烯酸甲酯(303.34mg，1.00mmol)、Rh2(pfb)4(四(全氟丁酸)二铑(II))(52.8mg，0.05mmol)溶于甲苯(758μl)，然后加热至60℃ 2天，然后加热至90℃ 2h。用EtOAc稀释该反应混合物，用水、盐水洗涤。用无水硫酸钠干燥合并的有机相。减压除去溶剂，通过柱色谱法纯化粗物质(硅胶，2％MeOH/DCM)，得到6-吗啉-4-基甲基-1H-吲哚-2-甲酸甲酯(0.41g，50％)，为白色固体。MS计算值C15H18N2O3[(M+H)+]275，测定值275.2。
步骤5)6-吗啉-4-基甲基-1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-1H-吲哚-2-甲酸甲酯
在0℃将NaH的60％的油分散液(244mg，6.1mmol)分小部分加入到搅拌的6-(吗啉代甲基)-1H-吲哚-2-甲酸乙酯(1.6g，5.5mmol)在干THF(6mL)和DMF(2.5mL)中的溶液中。将该反应混合物在0℃搅拌30min。在0℃加入(2-(氯甲氧基)乙基)三甲基硅烷(925mg，5.55mmol)，然后在rt搅拌1h。用EtOAc稀释该反应混合物，用水和盐水洗涤。用无水硫酸钠干燥合并的有机相。减压除去溶剂，通过柱色谱法纯化粗物质(硅胶，0-50％EtOAc/己烷)，得到6-吗啉-4-基甲基-1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-1H-吲哚-2-甲酸甲酯，为黄色油状物。MS计算值C21H32N2O4Si[(M+H)+]405，测定值405.2。
步骤6)3-[6-吗啉-4-基甲基-1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-1H-吲哚-2-基]-3-氧代-丙腈
在100mL圆底烧瓶中，将6-吗啉-4-基甲基-1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-1H-吲哚-2-甲酸甲酯(1.6g，3.82mmol)和MeCN(941mg，1.2mL，22.9mmol)与THF(20mL)合并，得到深棕色溶液。在-78℃冷却后，缓慢地加入LDA(2M/THF)(3.82mL，7.64mmol)，历时5min。将该反应混合物在-78℃搅拌30min。用饱和NH4Cl(10mL)使反应停止。用水(150mL)稀释该反应体系，用EtOAc(100mL)萃取，用盐水洗涤。用无水硫酸钠干燥合并的有机相，减压除去溶剂。通过柱色谱法纯化粗物质(硅胶，0-40％EtOAc/己烷)，得到3-[6-吗啉-4-基甲基-1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-1H-吲哚-2-基]-3-氧代-丙腈(0.15g，10％)，为黄色油状物。MS计算值C22H31N3O3Si[(M+H)+]414，测定值414.3。
步骤7)(E)-3-二甲氨基-2-[6-吗啉-4-基甲基-1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-1H-吲哚-2-羰基]-丙烯腈
在25mL圆底烧瓶中，将3-[6-吗啉-4-基甲基-1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-1H-吲哚-2-基]-3-氧代-丙腈(145mg，351μmol)与甲苯(1.46mL)合并，得到淡黄色溶液。加入N，N-二甲基甲酰胺二甲基乙缩醛(60.5μl，456μmol)，在室温搅拌30min。减压除去溶剂。通过柱色谱法纯化粗物质(硅胶，0-50％EtOAc/己烷)，得到(E)-3-二甲氨基-2-[6-吗啉-4-基甲基-1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-1H-吲哚-2-羰基]-丙烯腈(0.12g，73％)，为黄色油状物。MS计算值C25H36N4O3Si[(M+H)+]469，测定值469.2。
步骤8)3-(4-{5-氨基-4-[6-吗啉-4-基甲基-1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-1H-吲哚-2-羰基]-吡唑-1-基}-3-氯-苯氧基)-苄腈
将在EtOH(2mL)中的(E)-3-二甲氨基-2-[6-吗啉-4-基甲基-1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-1H-吲哚-2-羰基]-丙烯腈(115mg，245μmol)、3-(3-氯-4-肼基-苯氧基)-苄腈盐酸盐(218mg，736μmol)和K2CO3(170mg，1.23mmol)在80℃加热2h。用EtOAc稀释该反应混合物，用水、盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥。减压除去溶剂，通过柱色谱法纯化粗物质(硅胶，0-50％EtOAc/己烷)，得到3-(4-{5-氨基-4-[6-吗啉-4-基甲基-1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-1H-吲哚-2-羰基]-吡唑-1-基}-3-氯-苯氧基)-苄腈(0.103g，61％)，为黄色油状物。MS计算值C36H39ClN6O4Si[(M+H)+]683，测定值683.2。
步骤10)3-{4-[5-氨基-4-(6-吗啉-4-基甲基-1H-吲哚-2-羰基)-吡唑-1-基]-3-氯-苯氧基}-苄腈
将3-(4-{5-氨基-4-[6-吗啉-4-基甲基-1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-1H-吲哚-2-羰基]-吡唑-1-基}-3-氯-苯氧基)-苄腈(80mg，117μmol)溶于EtOH(4mL)，加入HCl10％(2mL，20.0mmol)，加热至80℃ 10min。减压除去溶剂。将粗物质与乙醚一起研磨，得到3-{4-[5-氨基-4-(6-吗啉-4-基甲基-1H-吲哚-2-羰基)-吡唑-1-基]-3-氯-苯氧基}-苄腈(80mg，94％收率)。1H NMR(DMSO-d6)δ：12.13(s，1H)，8.45(s，1H)，7.89(d，J＝8.3Hz，1H)，7.72-7.86(m，6H)，7.58-7.70(m，3H)，7.42(d，J＝8.3Hz，1H)，7.36(dd，J＝8.7，2.6Hz，1H)，7.25(br.s.，1H)，4.57(d，J＝4.8Hz，2H)，3.77-4.14(m，4H)，3.16-3.45(m，4H)。
生物学实施例
酪氨酸激酶(Btk)抑制测定
该测定是通过过滤捕获放射性33p磷酸化产物。Btk，生物素化的SH2肽底物(Src同源性)与ATP的相互作用导致肽底物的磷酸化。生物素化的产物是结合的链霉抗生物素蛋白琼脂糖珠。所有结合的、放射性标记的产物通过闪烁计数器检测。
测定的板是96-孔聚丙烯(Greiner)和96孔1.2μm亲水性PVDF过滤板(Millipore)。在此处报道的浓度是最终测定浓度：在DMSO(Burdick和Jackson)中的10-100μM化合物，5-10nM Btk酶(His-标记的，全长)，30μM肽底物(生物素-Aca-AAAEEIYGEI-NH2)，100μM ATP(西格玛(Sigma))，8mM咪唑(西格玛，pH7.2)，8mM甘油-2-磷酸(西格玛)，200μM EGTA(罗氏诊断(Roche Diagnostics))，1mM MnCl2(西格玛)，20mM MgCl2(西格玛)，0.1mg/ml BSA(西格玛)，2mM DTT(西格玛)，1μCi33P ATP(Amersham)，20％链霉抗生物素蛋白琼脂糖珠(Amersham)，50mM EDTA(Gibco)，2M NaCl(Gibco)，2M NaCl w/1％磷酸(Gibco)，microscint-20(铂尔金爱尔默(Perkin Elmer)。
使用从标准的96孔板测定模板产生的数据，从每个化合物的10个数据点计算IC50测定值。在每个板上测试一种对照化合物和七种未知抑制剂，每个板进行两次。典型地，以半对数(half-log)稀释化合物，从100μM开始并且以3nM结束。对照化合物是星形孢菌素。在不存在肽底物时计数背景。在存在肽底物时，测定总活性。使用下列方案来测定Btk抑制。
样品制备：将测试化合物以半对数增量，在测定缓冲液(咪唑，甘油-2-磷酸，EGTA，MnCl2，MgCl2，BSA)中稀释。
珠制备
1)通过在500g离心漂洗珠
2)用PBS和EDTA重构所述珠，产生20％珠的浆状物
3)在30℃预温育不合底物的反应混合物(测定缓冲液，DTT，ATP，33P ATP)和具有底物的混合物(测定缓冲液，DTT，ATP，33P ATP，肽底物)达15分钟。
4)为了启动测定，在室温预温育10μL在酶缓冲液(咪唑，甘油-2-磷酸，BSA)中的Btk和10μL的测试化合物达10分钟。
5)将30μL不含有或含有底物的反应混合物加入到Btk和化合物中。
6)在30℃温育50μL的总测定混合物达30分钟。
7)将40μL的测定物转移到过滤板中的150μL珠浆状物中来终止反应。
8)在30分钟后，用下列步骤洗涤过滤板：
3x250μL NaCl
3x250μL NaCl，其包含1％磷酸
1x250μL H2O
9)在65℃干燥板1小时或在室温干燥板过夜。
10)加入50μL microscint-20并在闪烁计数器上计数33P cpm。
从以cpm表示的原始数据计算百分比活性
百分比活性＝(样品-bkg)/(总活性-bkg)x100
使用一位点(one-site)剂量反应S形曲线模型从百分比活性计算IC50
y＝A+((B-A)/(1+((x/C)D))))
x＝化合物(cmpd)浓度，y＝％活性，A＝min，B＝max，C＝IC50，D＝1(希尔(hill)斜率)
酪氨酸激酶(BTK)抑制TR-FRET(时间分辨FRET)测定
这种BTK竞争性测定法采用FRET(/荧光共振能量转移)技术测量化合物对酪氨酸激酶的失活状态的效能(IC50)。在使用前以50nM BTK-BioeaseTm的起始浓度在冰上将BTK-Eu复合物温育1小时：10nM Eu-抗生蛋白链菌素(Perkin-Elmer Catalog#AD0062)。测定缓冲液由20mM HEPES(pH7.15)、0.1mM DTT、10mM MgCl2、0.5mg/ml BSA与3％激酶稳定剂(Fremont Biosolutions，Catalog#STB-K02)组成。1h后，用测定缓冲液将来自上述的反应混合物稀释10倍，制成5nM BTK：1nM Eu-抗生蛋白链菌素复合物(供体荧光团)。然后将18μl 0.11nM BTK-Eu和0.11nM激酶示踪物178(Invitrogen，目录号#PV5593)的混合物与单独的BTK-Eu作为无阴性对照调配入384-孔平底培养板(Greiner，784076)。将测定中测试的化合物制备成10x浓度并且用DMSO以半对数递增顺序稀释，生成10点曲线。为了启动FRET反应，将制备成在DMSO中的10x储备溶液的化合物加入到培养板中并且将该板在14℃温育18-24h。
在温育后，用BMG Pherastar Fluorescent培养板读出器(或等效物)读取培养板并且用于测量来自铕供体荧光团的发射能(620nm发射)和FRET(665nm发射)。求阴性对照孔值的平均值，得到最小平均值。求阳性“无抑制剂”对照孔的平均值，得到最大平均值。使用如下等式计算最大FRET百分比：
％max FRET＝100x[(FSR化合物-FSR最小平均值)/(FSR最大平均值-FSR最小平均值)]
其中FSR＝FRET信号比。用Activity Base(Excel)绘制％Max FRET曲线并且测定IC50(％)、希尔斜率、z’和％CV。平均IC50和标准偏差采用Microsoft Excel来源于一式两份曲线(来自两次独立稀释的单线态抑制)。
本测定的有代表性的化合物数据如下表II中所示。
表II.
化合物 FRET IC50(μmol) 放射性测量的IC50(μmol)
I-1 0.041
I-2 0.869
I-3 0.502
I-4 21.95
I-5 0.216
I-6 1.0
I-7 0.552
I-8 0.059
I-9 0.146
I-10 0.162
I-11 73.85
I-12 ＞1
I-13 ＞1
I-14 0.003
I-15 0.007
I-16 0.082
I-17 0.230
I-18 0.005
I-19 0.0005
I-20 0.001
通过CD69表达测量的全血中的B细胞活化的抑制
用于测试Btk抑制剂抑制在人血液中B细胞的B细胞受体介导的活化的能力的方法如下：
人全血(HWB)获自健康志愿者，满足以下限制：24hr不用药，不吸烟者。通过静脉穿刺将血液收集到用肝素钠抗凝化的Vacutainer管中。测试化合物在PBS中稀释至10倍所需初始药物浓度(20x)，接着在10％的在PBS中的DMSO中三倍系列稀释，得到9点的剂量响应曲线。将5.5μl的每种化合物稀释液一式两份添加到2ml 96孔V型底的板(Analytical Sales和Services，#59623-23)上；向对照和无刺激孔中添加5.5μl的10％在PBS中的DMSO。向每孔添加HWB(100μl)，在混合后将板在37C，5％CO2，100％湿度温育30分钟。在混合下向每孔(无刺激孔除外)添加羊F(ab’)2抗人IgM(Southern Biotech，#2022-14)(10μl的500μg/ml溶液，50μg/ml最终浓度)，并且将板温育另外20小时。
在20小时温育结束时，将样品与荧光探针标记的抗体(15μl PE小鼠抗人CD20，BDPharmingen，#555623，和/或20μl APC小鼠抗人CD69，BD Pharmingen#555533)在37℃，5％CO2，100％湿度温育30分钟。包括用于补偿调节和初始电压设置的诱导对照、未染色的和单染色剂。然后将样品用1ml的1X Pharmingen Lyse Buffer(BD Pharmingen#555899)裂解，并且将板在1800rpm离心5分钟。通过抽吸除去上清液，将残留的团粒用另外1ml的1XPharmingen Lyse Buffer再次裂解，并且将板如前离心(spun down)。吸出上清液，将残留的团粒在FACs缓冲液(PBS+1％FBS)中洗涤。在最后旋转后，除去上清液，并且将团粒重悬浮在180μl的FACs缓冲液中。将样品转移至适于在BD LSR II流式细胞器的HTS96孔体系上运行的96孔板。
采用适合所用荧光团的激发和发射波长，获联数据并且采用Cell QuestSoftware获得百分比阳性细胞值。结果最初用FACS分析软件(Flow Jo)分析。测试化合物的IC50定义为使CD69阳性细胞的百分比下降50％的浓度，所述CD69阳性细胞在用抗IgM刺激后也是CD20阳性的(8个对照孔的平均，在扣除8个无刺激背景的孔的平均值后)。IC50值是使用XLfit软件版本3，公式201计算的。
在Ramos细胞中抑制B细胞活化-B细胞FLIPR测定
通过测定测试化合物对于抗-IgM刺激的B细胞应答的影响，证明本发明的化合物对B细胞活化的抑制。
B细胞FLIPR测定是测定潜在抑制剂对于由抗-IgM抗体刺激导致的细胞内钙增加的影响的、基于细胞的功能方法。将Ramos细胞(人Burkitt’s淋巴瘤细胞系。ATCC-No.CRL-1596)培养在生长培养基(下述)中。在测定前一天，将Ramos细胞重悬浮在新鲜的生长培养基(与上相同)中并且以0.5x106/mL的浓度放置在组织培养瓶中。在测定当天，对细胞计数并且将其以1x106/mL的浓度放入补充了1μM FLUO-3AM(TefLabs目录号0116，在无水DMSO和10％嵌段聚醚酸(Pluronic acid)中制备)的生长培养基的组织培养瓶中，并且在37℃(4％CO2)温育1小时。为了去除细胞外染料，通过离心(5分钟，1000rpm)收集细胞，并以1x106细胞/mL重悬浮在FLIPR缓冲液(下述)中，接着以1x105细胞/孔分配在96-孔聚-D-赖氨酸包被的黑色/透明的板(BD目录号356692)中。加入从100μM到0.03μM范围内的各个浓度(7个浓度，下面详述)的测试化合物，并且使其与细胞一起在室温温育30分钟。通过加入10μg/mL抗-IgM(Southern Biotech，目录号2020-01)刺激Ramos细胞Ca2+信号传导并且在FLIPR(Molecular Devices，使用具有在480nM激发的氩激光器的CCD照相机捕获96孔板的图像)上测量。
介质/缓冲液：
生长培养基：RPMI 1640培养基，其含有L-谷氨酰胺(Invitrogen，目录号61870-010)，10％胎牛血清(FBS，Summit Biotechnology目录号FP-100-05)；1mM丙酮酸钠(Invitrogen目录号11360-070)。
FLIPR缓冲液：HBSS(Invitrogen，目录号141175-079)，2mM CaCl2(西格玛，目录号C-4901)，HEPES(Invitrogen，目录号15630-080)，2.5mM丙磺舒(西格玛，目录号P-8761)，0.1％BSA(西格玛，目录号A-7906)，11mM葡萄糖(西格玛，目录号G-7528)。
化合物稀释细节：
为了获得100μM的最高最终测定浓度，将24μL的10mM化合物贮存溶液(在DMSO中制备)直接加入576μL的FLIPR缓冲液中。将测试化合物稀释在FLIPR缓冲液中(使用Biomek2000自动移液器)得到下列稀释方案：媒介物，1.00x10-4M，1.00x10-5，3.16x10-6，1.00x10-6，3.16x10-7，1.00x10-7，3.16x10-8。
测定和分析：
使用最大-最小统计(使用Molecular Devices FLIPR对照和统计输出软件，从由加入所述刺激抗体导致的峰减去静止的基线)报道钙的细胞内增加。使用非线性曲线拟合(GraphPad Prism软件)确定IC50。
小鼠胶原蛋白-诱导的关节炎(mCIA)
在第0天，将小鼠用II型胶原蛋白在完全弗氏佐剂(CFA)中的乳剂在尾巴基部或在背部上的几个位置皮内注射(i.d.)。在胶原免疫之后，动物将在约21至35天出现关节炎。关节炎的发作通过在第21天系统施用在不完全弗氏佐剂(IFA；i.d.)中的胶原蛋白而同步(增强)。在第20天之后每天检查动物轻微关节炎(1或2分；参考下面的评分描述)的任何发作，这是增强的信号。在增强后，将小鼠评分并且将候选的治疗剂以预定的时间(典型地2-3周)和剂量施用频率剂量施用，每天一次(QD)或每天两次(BID)。
大鼠胶原蛋白-诱导的关节炎(rCIA)
在第0天，将大鼠用II型牛胶原蛋白在不完全弗氏佐剂(IFA)中的乳剂注射，在背部上的几个位置皮内注射(i.d.)。在约第7天在尾巴基部或背部的备选位点提供胶原蛋白乳剂的加强注射(i.d.)。在初始胶原蛋白注射之后的12-14天通常观察到关节炎。从第14天起，如下面所述(关节炎的评价)可以评价动物的关节炎的发展。将动物用候选的治疗剂以预防的方式，开始于二次激发时剂量施用，并且以预定的时间(典型地2-3周)和剂量施用频率剂量施用，每天一次(QD)或每天两次(BID)。
关节炎的评价：
在两种模型中，使用评分系统对爪和肢关节的炎症发展进行定量，所述的评分系统包括按照下面所述的标准对4个爪的评估：
评分：1＝爪或一个趾的肿胀和/或发红。
2＝两个或更多个关节肿胀。
3＝爪的总体肿胀，涉及多于两个关节。
4＝整个爪和趾的严重关节炎。
如下进行评估：在第0天进行基线测量，在第一个征候或肿胀时再次开始，每周可达三次，直至实验结束。通过将四个单爪评分加和来获得每只小鼠的关节炎指数，每只动物的最大分数为16。
大鼠体内哮喘模型
将雄性棕挪威(Brown-Norway)大鼠用在0.2ml明矾中的100μgOA(卵清蛋白)每周i.p.致敏一次，致敏三周(第0，7和14天)。在第21天(最后致敏后一周)，将大鼠用赋形剂或化合物制剂皮下q.d.剂量给药，0.5小时后进行OA气溶胶激发(1％OA，历时45分钟)并且在激发4或24小时后终止。在处死时，从所有动物收集血清和血浆用于分别进行血清学研究和PK。插入气管套管并且将肺用PBS灌洗3X。分析BAL流体的总白细胞数和差别白细胞计数。细胞等份试样(20-100μl)中的总白细胞数是通过库尔特计数器确定的。对于差别白细胞计数，将50-200μl样品在Cytospin中离心并且用Diff-Quik将载玻片染色。采用标准形态学标准，在光学显微镜下计数单核细胞、嗜酸性粒细胞、中性白细胞和淋巴细胞的比例，并且用百分比表示。Btk的代表性抑制剂显示：OA致敏的和激发的大鼠的BAL中总白细胞计数与对照水平相比下降。
已经通过举例说明和实施例的方式比较详细地描述了上述发明，以用于阐述和理解的目的。对于本领域技术人员显而易见的是，可以在后附权利要求的范围内进行改变和改进。因此，应该理解上述说明意在是举例说明性的而不是限制性的。因此，本发明的范围不应该参考上述说明书而确定，而应该参考下列后附的权利要求以及由权利要求授权的等价物的全部范围而确定。
将本申请中引用的全部专利、专利申请和出版物的全部内容通过引用并入本文以满足全部目的到这样的程度，就如同每个专利，专利申请或出版物是分别指明的一样。

Claims (26)

1.式I的化合物，
其中：
R1是低级烷基、苯基、环烷基或吡啶基，其任选地被一个或多个R1’取代；
R1’各自独立地是低级烷基、卤素、-C(＝O)NH2或氰基；
R2不存在、为卤素、低级烷氧基、羟基或低级烷基；
R3不存在、为卤素、低级烷氧基、羟基或低级烷基；
R4不存在或为杂环烷基低级链烯基；
X是CH或N；且
Y是CH或N；
或其药学上可接受的盐。
2.权利要求1的化合物，其中Y是CH。
3.权利要求1-2任一项的化合物，其中X是N。
4.权利要求1-2任一项的化合物，其中X是CH。
5.权利要求1-4任一项的化合物，其中R4是吗啉基亚甲基。
6.权利要求1-4任一项的化合物，其中R4不存在。
7.权利要求1-6任一项的化合物，其中R2不存在。
8.权利要求1-6任一项的化合物，其中R2是卤素。
9.权利要求1-6任一项的化合物，其中R2是低级烷基。
10.权利要求1-6任一项的化合物，其中R2是低级烷氧基。
11.权利要求1-6任一项的化合物，其中R2是羟基。
12.权利要求1-11任一项的化合物，其中R3是卤素、低级烷氧基或羟基。
13.权利要求1-12任一项的化合物，其中R1是苯基，其任选地被一个或多个R1’取代。
14.权利要求1-12任一项的化合物，其中R1是低级烷基、环烷基或杂芳基，其任选地被一个或多个R1’取代。
15.权利要求1-14任一项的化合物，其选自：
[5-氨基-1-(3-氟-4-苯氧基-苯基)-1H-吡唑-4-基]-(1H-吲哚-2-基)-甲酮；
[5-氨基-1-(6-苯氧基-吡啶-3-基)-1H-吡唑-4-基]-(1H-吲哚-2-基)-甲酮；
{5-氨基-1-[4-(吡啶-2-基氧基)-苯基]-1H-吡唑-4-基}-(1H-吲哚-2-基)-甲酮；
{5-氨基-1-[4-(吡啶-3-基氧基)-苯基]-1H-吡唑-4-基}-(1H-吲哚-2-基)-甲酮；
5-氨基-1-(3-氯-4-苯氧基-苯基)-1H-吡唑-4-基]-(1H-吲哚-2-基)-甲酮；
{5-氨基-1-[4-(3，4-二氟-苯氧基)-苯基]-1H-吡唑-4-基}-(1H-吲哚-2-基)-甲酮；
[5-氨基-1-(3-甲氧基-4-苯氧基-苯基)-1H-吡唑-4-基]-(1H-吲哚-2-基)-甲酮；
[5-氨基-1-(3-羟基-4-苯氧基-苯基)-1H-吡唑-4-基]-(1H-吲哚-2-基)-甲酮；
[5-氨基-1-(2-甲氧基-4-苯氧基-苯基)-1H-吡唑-4-基]-(1H-吲哚-2-基)-甲酮；
[5-氨基-1-(2-羟基-4-苯氧基-苯基)-1H-吡唑-4-基]-(1H-吲哚-2-基)-甲酮；
[5-氨基-1-(4-异丙氧基-苯基)-1H-吡唑-4-基]-(1H-吲哚-2-基)-甲酮；
[5-氨基-1-(4-环戊氧基-苯基)-1H-吡唑-4-基]-(1H-吲哚-2-基)-甲酮；
{5-氨基-1-[4-(2，2-二甲基-丙氧基)-苯基]-1H-吡唑-4-基}-(1H-吲哚-2-基)-甲酮；
{5-氨基-1-[4-(2，3-二氟-苯氧基)-2-甲基-苯基]-1H-吡唑-4-基}-(1H-吲哚-2-基)-甲酮；
2-{4-[5-氨基-4-(1H-吲哚-2-羰基)-吡唑-1-基]-3-甲基-苯氧基}-苄腈；
3-{4-[5-氨基-4-(1H-吲哚-2-羰基)-吡唑-1-基]-3-氯-苯氧基}-苄腈；
3-{4-[5-氨基-4-(1H-苯并咪唑-2-羰基)-吡唑-1-基]-3-甲基-苯氧基}-苯甲酰胺；
{5-氨基-1-[4-(2，3-二氟-苯氧基)-2-甲基-苯基]-1H-吡唑-4-基}-(1H-苯并咪唑-2-基)-甲酮；
[5-氨基-1-(4-苯氧基-苯基)-1H-吡唑-4-基]-(6-吗啉-4-基甲基-1H-吲哚-2-基)-甲酮；和
3-{4-[5-氨基-4-(6-吗啉-4-基甲基-1H-吲哚-2-羰基)-吡唑-1-基]-3-氯-苯氧基}-苄腈。
16.治疗炎性和/或自身免疫病症的方法，包括对有此需要的患者施用治疗有效量的权利要求1-15任一项的化合物。
17.治疗炎性病症的方法，包括对有此需要的患者施用治疗有效量的权利要求1-15任一项的化合物。
18.治疗类风湿性关节炎的方法，包括对有此需要的患者施用治疗有效量的权利要求1-15任一项的化合物。
19.治疗哮喘的方法，包括对有此需要的患者施用治疗有效量的权利要求1-15任一项的化合物。
20.治疗癌症的方法，包括对有此需要的患者施用治疗有效量的权利要求1-15任一项的化合物。
21.药物组合物，其包含权利要求1-15任一项的化合物与至少一种药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。
22.权利要求1-15任一项的化合物，其用作治疗活性物质。
23.权利要求1-15任一项的化合物，其用于治疗炎性病症和/或自身免疫病症。
24.权利要求1-15任一项的化合物在制备用于治疗炎性和/或自身免疫病症的药物中的用途。
25.权利要求1-15任一项的化合物用于治疗炎性和/或自身免疫病症中的用途。
26.如上文所述的本发明。
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