CN105708954A - 一种中药组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种中药组合物及其制备方法，该中药组合物由如下方法制成：取黄芪1-10重量份，红景天2-12重量份，五味子2-16重量份，蛤蚧1-10重量份，制成临床或药学上可接受的片剂、胶囊剂、散剂、软胶囊剂、丸剂、颗粒剂、蜜炼膏剂、缓释制剂、速释制剂、口服液体制剂。该中药组合物具有补益肺肾脾之气、敛肺纳气，提高缺氧耐受力、改善脑缺血缺氧、改善支气管哮喘、慢性支气管炎、抗肺纤维化、抗疲劳作用。

Description

一种中药组合物及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种中药组合物及其制备方法，特别涉及一种具有补益肺肾脾之气、敛肺纳气，提高缺氧耐受力、改善脑缺血缺氧、改善支气管哮喘、慢性支气管炎、抗肺纤维化、抗疲劳作用的中药组合物及其制备方法。

技术背景

中医学认为，耐缺氧能力的降低与肺肾气虚关系密切。气是构成人体的最基本的物质，也是维持人体生命活动的最基本的物质。气者，人之根本。生命物质的气与其所构成的形体，共同构成了生命活动的物质基础。《素问·五脏生成篇第十》曰：“肺主一身之气”，“诸气者，皆属于肺。”《中藏经》也指出：“肺者，生气之源。”肺为气之主，功能主气，司呼吸。《诸病源候论·卷三十七》云“其肺气虚，谓之不足，则短乏少气。”《脉经·卷二》言：“肺虚……病苦少气不足以息，嗌干不朝津液。”《医经秘旨·卷上》云“肺虚不能卫血，血溢妄行，随气出于鼻为衄”，言气虚则血失于摄；《丹台玉案·卷四》云“肺失统气之权，不能固表，故毫毛疏豁，汗流不禁”，言气虚则汗不得固。《医学衷中参西录·治大气下陷方》云：“夫大气者，内气也。呼吸之气，外气也。人觉有呼吸之外气与内气不相接续者，即大气虚而欲陷，不能紧紧包举肺外也。”“此气一虚，呼吸即觉不利，而且肢体酸懒，精神昏愦，脑力心思，为之顿减。若其气虚而且陷，或下陷过甚者，其人即呼吸顿停，昏然罔觉。”肺气虚是指由于肺功能活动减弱，其临床表现有：咳喘无力、吐痰清稀、面色淡白、神疲体倦、少气短息、语声低怯、虚汗自出，舌淡苔白，脉弱。同时，肺朝百脉，肺气虚时运血无力，血脉淤阻，故见心悸，胸闷，头晕，喘促气急，舌唇青紫，舌质紫暗，肢冷，指甲青紫。上述肺气虚的表现与缺氧耐受力下降的表现颇为相似。

呼吸运动虽为肺脏所主，但亦与其他脏腑有关。《难经·四难》曰：“呼出心与肺，吸入肾与肝。”由于肾藏精，为“封藏之本”(《素问·六节藏象论》)，肾(命门)为“十二经脉之根，呼吸之门，三焦之源”(王肯堂《灵兰要览》)，而足少阴肾经“其直者，从肾上贯肝膈，入肺中”(《灵枢。经脉》)，“肾上连肺”(《灵枢·本输》)，故肾的封藏作用能摄纳由肺吸入的自然界之清气，以使呼吸调匀，深长有力。正如《医碥》所说：“气根于肾，亦归于肾。故曰肾纳气，其息深深。”肺居上焦而司呼吸，肾位下焦而主纳气，肺肾相合，吸纳相因，则呼吸深长，节律调匀。《类证治裁》：“肺为气之主，肾为气之根。肺主出气，肾主纳气。”明代李梴在《医学入门》中说：“肾有两枚，……纳气收血，化精，为封藏之本。”肾精充足，则纳气正常，呼吸深长有力；若肾精不足，肾气亏虚，摄纳无力，则既不能摄纳由肺吸入自然界之清气，又不能调节呼吸之深度，从而导致呼吸表浅、呼多吸少、动则气喘、气息不续等症。即如《灵枢。经脉》说“肾足少阴之脉，是动则病饥不欲食，面如漆柴，咳唾则有血，喝喝而喘。”《证治准绳》曰：“真元耗损，喘出于肾气之奔，……乃气不归元也。”肾主纳气，肾气衰惫，摄纳无权，故见气喘难续，夜尿频多；肾虚精亏，不能温养腰膝，故见腰膝酸软；肾精不足，髓海不充，故见耳鸣。

因此，对缺氧耐受能力的降低，与肺肾气虚关系密切。针对肺肾气虚的人群，采用补益肺肾脾之气，敛肺纳气的保健方法，可从根本上提高缺氧耐受力。

脑缺血缺氧是与炎症反应相关的病理过程。缺血缺氧破坏血脑屏障，血管系统的促炎分子表达，引发炎症反应，最初表现为微血管通透性增高、白细胞浸润等。伴随早期白细胞浸润，其他炎症因子显著积累，启动复杂信号转导途径，使内皮细胞表面表达各种勃附分子。同时，聚集的炎症细胞释放氧自由基、蛋白水解酶及细胞激动素等，直接损伤内皮细胞，进一步破坏血脑屏障，使外周血单核细胞更易豁附于内皮细胞，最终游移到受损脑组织。炎症细胞到达受损脑组织后，释放多种炎症因子、细胞因子，这些因子再进一步促使炎症细胞浸润，如此循环，加重脑缺血损伤。脑缺血根据其病理表现和临床特点可归属于中医“缺血中风”的范围。中医学认为缺血中风的发生主要与风、火、痰、瘀、虚等因素有关，但各家立论均不相同，具体如下:(1)风:即内、外风之别，如《内经》有“内虚邪中”“风为百病之长”之外风说，《临证指南》“内风乃身中阳气之变动”，张景岳有“非风”论。风之产生是由于肝肾阴精亏耗，阴亏于下，风动于上而产生。中风后，因痰浊、瘀血内阻，瘫肢失用，营卫失于正常功能，机体失去抵御外邪之能力，致“虚而受邪”，气血不得畅行而致肿胀疼痛。(2)痰与瘀:痰瘀痹阻经脉是其重要的发病机理。因瘀血阻碍津液敷布，而易致痰生，且痰瘀互换，痰瘀痹阻贯穿中风始终。(3)火:主要为内生之火，心肝之火。刘河间认为“心火暴甚”“五志过极”可发生中风。姬晓东认为中风病以阴虚为本，而七情六欲刺激为导致机体阴虚的主要因素，如怒气伤肝，则肝火炽盛，而有冲逆薄厥之势；或由生活失调饮食不节，热炽肠胃，伤及阴液则易致肝阳上亢。发病机理为肝、肾、心三经阴阳失去平衡，阴虚于下，阳亢于上，使气血向上冲逆犯脑，震扰脑络所致。(4)虚:主要为气虚、阴虚。发病机理由气虚致阴血虚所致。徐木林：“气阴两虚血瘀是对—切中风病起支配作用的基本病机。”张树泉则认为肾虚血瘀痰阻是中风的基本病机。结合现代医学的研究：微血栓和血液动力学、血液流变障碍与中医的“血瘀”观是一致的。血瘀是脑缺血的病理基础。因此，长期以来都主张使用以“活血化瘀”为主的治则来治疗本病。同时中医又认为气血相关，气行则血行，气虚则血非瘀即阻。气虚可致血瘀，血瘀日久又可耗气而致气虚，二者互为因果，因此气虚血瘀是脑缺血的主要病机。中医药利用活血化瘀、益气通络的方药治疗脑缺血，其作用与现代医学的扩血管抗凝、改善局部血液循环及局部细胞代谢功能是一致的。近年来中医治疗中风病有了理论上的突破，在重视传统风、火、痰、虚、瘀等发病机理的基础上，随着对传统毒邪认识的深化，逐渐认识到毒邪与中风发病密切相关，认为“毒损脑络”是中风发病的关键。“脑络”是经络在脑内之络等，是络脉与腠理、组织进行气血交换之所。具有“溢奇邪以通荣卫”(《素问·经络论篇第五十七》)的作用。中风病发病是由于毒邪损伤脑络，络脉破损或络脉拘急瘀闭，气血输注失常，致脑神失养，神机失守，形成神昏闭厥、半身不遂的病理状态。脑络瘀阻导致营卫失和，卫气壅滞而化生火毒进一步损伤脑络是中风病康复困难的病机关键。随着对中风病理机制的深入研究，为“毒损脑络”病机假说提供了现代生物学依据。脑缺血局部的缺血再灌注，产生了大量的自由基和代谢毒性物质及兴奋性氨基酸，超过了机体对这些物质的清除能力，即成为有害的毒性物质。它们通过各自特有的途径，损伤血管内皮细胞，导致相关脑区微血管灌流障碍，微循环淤滞。因此，缺血缺氧再灌注对血管内皮细胞的损伤，是“毒损脑络”病机假说的关键。结合这些病因病机，并结合各自不同的证候，现代中医学者亦多采取不同的分证方法治疗中风病，其方法各有所长。

支气管哮喘是由多种细胞特别是肥大细胞、嗜酸性粒细胞和T淋巴细胞参与的慢性气道炎症，在易感者中此种炎症可引起反复发作的喘息，气促、胸闷和(或)咳嗽等症状，多在夜间和(或)凌晨发生，气道对多种刺激因子反应性增高。但症状可自行或经治疗缓解。近十余年来，美国、英国、澳大利亚，新西兰等国家哮喘患病率和死亡率有上升趋势，全世界约有一亿哮喘患者，已成为严重威胁公众健康的一种主要慢性疾病，我国哮喘的患病率约为1％，儿童可达3％，据测算全国约有一千万以上哮喘患者。中医认为哮喘的发生，系由宿痰内伏于肺，因外感、饮食或情志劳倦等诱因而引发，以致痰阻气道，肺失肃降，气道挛急，多属本虚标实之证。近年来，许多学者认识到瘀痰、瘀血、风等病邪为哮喘的重要病机，其中较为重视瘀血，认为其产生与哮喘时气的升降失调而致气滞血瘀有关，也与一定脏腑功能失调有关，有肺气或脾气虚致瘀，肾阳虚致瘀等。中医认为“肺主气司呼吸”、“肺朝百脉”和“心主血而贯百脉”。所以肺气受伤，痰壅气塞，务必影响气血运行，心脉痹阻而致血瘀，这一点，正与现代研究的结果相吻合。因此，补益肺肾之气，敛肺纳气，振奋脏腑机能，有效缓解支气管哮喘。

慢性支气管炎是气管、支气管黏膜及其周围组织的慢性非特异性炎症。临床上以咳嗽、咳痰或伴有气喘等反复发作为主要症状，每年持续3个月，连续2年以上。早期症状轻微，多于冬季发作，春夏缓解。晚期因炎症加重，症状可常年存在。其病理学特点为支气管腺体增生和黏膜分泌增多。病情呈缓慢进行性进展，常并发阻塞性肺气肿，严重者常发生肺动脉高压，甚至肺源性心脏病。慢性支气管炎多属于中医学中的“咳嗽”、“痰证”、“饮证”、“喘证”等范畴，本病的主要症状为咳嗽和大量咳痰，也即所谓“痰饮”病。痰饮的产生，除对外感时邪、寒冷伤肺为其诱因外，内在因素尤为重要，主要是由于三焦气化失宣，阳虚水液不运引起。传统中医认为肺居上焦，可以同调水道；脾居中焦，可以转输水谷精微；肾居下焦，可以蒸化水液，分清泌浊。三脏功能失常，则水液聚为饮为痰。由此可知，本病表现为肺、脾、肾三脏虚损，以及它们相互协调关系失衡，同时又因痰、湿、寒、瘀等因素的参与愈加复杂。因此，慢性支气管炎的病因病机，可以描述为：久咳不已、反复发作导致肺气不足、宣降失司，痰饮伏肺则咳喘痰多；脾胃运化失司，痰湿内盛犯肺故咳嗽、大量咳痰；久病累及于肾，肾气不足，摄纳无权，则气短喘促。由此可见，补益肺肾之气，加强脾胃运化水湿，可以有效的治疗慢性支气管炎。

肺纤维化，即肺脏间质组织由胶原蛋白、弹性素及蛋白醣类构成，当成纤维细胞受到化学性或物理性伤害时，会分泌胶原蛋白进行肺间质组织的修补，进而造成肺脏纤维化；即肺脏受到伤害后，人体修复产生的结果。肺纤维化归属于中医络病范畴，认为本病的病位在肺络，基本病机为肺络痹阻，而肺络痹阻的原因多由肺肾亏虚致络中气血不足，或邪毒入络，影响络中气血的运行及津液的输布，络失通畅或渗灌失常，导致血瘀痰凝互结阻于络中而成。其病机特点为本虚标实证，本虚以肺肾气阴两虚为主，标实指痰瘀蕴肺，而本虚为发病的关健。因此，补益肺肾之气，使气血充盈、脉络通畅，可以有效治疗肺纤维化。

疲劳又称疲乏，是主观上一种疲乏无力的不适感觉，疲劳不是特异症状，很多疾病都可引起疲劳，不同疾病引起不同程度的疲劳，有些疾病表现更明显，有时可作为就诊的首发症状。疲劳的病机主要为五脏功能虚损，机体失于气血的充养而致。气是不断运动着的精微物质，它所反映的是脏腑组织器官的机能活动，如五脏之气、六腑之气等。肾藏元真之气，脾胃化生水谷之气，肺司呼吸之气，三者相合，内充盈脏腑经络，外敷布四肢百骸，生生不已，生命不消。血即血液，对人体脏腑官转有濡养作用的一种赤色液体物质。气血充盛，运行不息，以营养全身肌肉、筋骨、官转、五脏六腑，维持人体的正常生理功能。素体虚弱，气血不足，全身形体官穷筋骨肌肉失于孺养，一派虚弱之象，虚则不荣，则出现一系列身体疲劳症候；脾胃素虚，失于运化，脑穷失养，血不养心，导致精神疲劳症状的产生。如神疲乏力、少气懒言、困重嗜睡或血不养心而失眠，毛发不泽易于脱落以及“不荣而痛”的虚证疼痛现象。由此可见，补益肺肾脾，充养气血，可以有效的治疗疲劳综合症。

发明内容

本发明目的在于提供一种具有补益肺肾脾之气、敛肺纳气，提高缺氧耐受力、改善脑缺血缺氧、改善支气管哮喘、慢性支气管炎、抗肺纤维化、抗疲劳作用的中药组合物及其制备方法；本发明的另一个目的在于提供所述中药组合物的新用途。

本发明组合物由如下方法制成：

原料药组成为(重量比)：

黄芪1-10重量份红景天2-12重量份

五味子2-16重量份蛤蚧1-10重量份。

本发明药物组合物的原料药组成优选为：

黄芪1重量份红景天2重量份

五味子3重量份蛤蚧1重量份。

本发明药物组合物的原料药组成更优选为：

黄芪3重量份红景天7重量份

五味子9重量份蛤蚧3重量份。

本发明药物组合物的原料药组成更优选为：

黄芪6重量份红景天4重量份

五味子4重量份蛤蚧5重量份。

本发明药物组合物的原料药组成更优选为：

黄芪7.5重量份红景天5重量份

五味子6重量份蛤蚧5重量份。

将上述按照按照常规工艺制成临床或药学上可接受的片剂、胶囊剂、散剂、软胶囊剂、丸剂、颗粒剂、蜜炼膏剂、缓释制剂、速释制剂、口服液体制剂。

本发明中药组合物还可以由如下方法制成：

步骤1、取黄芪、红景天、五味子，加水煎煮，浓缩，得混合稠膏；

步骤2、取蛤蚧，用乙醇闷润灭菌，再与混合稠膏混合，共同干燥粉碎；

步骤3、取黄芪、红景天、五味子、蛤蚧混合干膏粉、加入常规辅料，按照常规工艺，制成临床或药学上可接受的片剂、胶囊剂、散剂、软胶囊剂、丸剂、颗粒剂、蜜炼膏剂、缓释制剂、速释制剂、口服液体制剂。

本发明中药组合物的制备方法还优选如下步骤：

步骤1：取黄芪、红景天、五味子，加水浸泡2h，煎煮提取2次，加水量分别为10、8倍，每次1.5小时，滤过合并滤液，得混合水煮液，减压浓缩(压力0.08MPa，温度60℃)成稠膏(60℃时相对密度为1.15～1.20)。

步骤2：取蛤蚧去除杂质，破碎，加1倍量75％乙醇混合均匀，密闭1小时，得到灭菌蛤蚧，干燥2小时(温度70℃)，得到干燥蛤蚧。

步骤3：取黄芪、红景天、五味子的混合稠膏和干燥蛤蚧，混合，减压干燥(压力0.08MPa，温度60℃)，得混合干膏，粉碎，过80目筛，得到混合干膏粉。

步骤4：取混合干膏粉、加入常规辅料，按照常规工艺，制成临床或药学上可接受的片剂、胶囊剂、散剂、软胶囊剂、丸剂、颗粒剂、蜜炼膏剂、缓释制剂、速释制剂、口服液体制剂。

本发明采瑞牌青阔片由黄芪、红景天、五味子、蛤蚧组成，配方中黄芪补益肺脾，升阳举陷，实卫固表，抵御外邪；红景天益气活血，通脉平喘；五味子收敛固涩，益气生津，补肾宁心；蛤蚧补肺益肾，纳气定喘，助阳益精。诸药共用，调理各脏腑机能，通过纳气定喘、脾胃运化、益气活血，可以治疗缺氧、哮喘、支气管炎、抗疲劳。

总之，本发明从补益肺肾脾之气、敛肺纳气的角度提供了一种新的能补益肺肾脾之气、敛肺纳气，提高缺氧耐受力、改善脑缺血缺氧、改善支气管哮喘、慢性支气管炎、抗肺纤维化、抗疲劳作用的中药组合物。

下面实施例、实验例均用于进一步说明但不作为本发明范围的限制(下述实验例中所用“采瑞牌青阔片”为实施例1制备的产品)。

实验例1

在查阅大量文献，并结合中医理论基础，筛选出一组对耐缺氧有较好作用的配方，其配方组成为：黄芪、红景天、五味子、蛤蚧、天麻、刺五加。为精简配方组成，设计一组7因素2水平的正交试验，优选具有耐缺氧作用的配方组成。正交因素设计见表1。

表1组方考察因素水平表

1材料和方法

1.1样品：黄芪、红景天、五味子、蛤蚧、天麻、刺五加

1.2实验动物：18～22g昆明种健康SPF级雄性小鼠，随机分为9组(空白组、8组正交试验组)，每组12只。进行常压耐缺氧实验，以呼吸停止为指标，考察配方中对耐缺氧有较好作用的药味。

1.3试验分组：空白组；8个正交试验组分别为正交组1：黄芪+红景天+五味子+蛤蚧+天麻+刺五加，正交组2：黄芪+红景天+五味子，正交组3：黄芪+蛤蚧+天麻，正交组4：黄芪+刺五加，正交组5：红景天+蛤蚧+刺五加，正交组6：红景天+天麻，正交组7：五味子+蛤蚧，正交组8：五味子+天麻+刺五加。

1.4正交试验组药物制备：

黄芪提取物制备：取黄芪，粉碎成粗粉，加水浸泡2h，煎煮提取2次，加水量分别为10、8倍，每次1.5小时，滤过，合并滤液得黄芪水煮液，减压浓缩(压力0.08MPa，温度60℃)成稠膏(60℃时相对密度为1.15～1.20)，减压干燥(压力0.08Mpa，温度60℃)，得提取物干膏，计算黄芪出膏率，粉碎，过80目筛，得到黄芪提取物细粉，待用；

红景天提取物制备：取红景天，粉碎成粗粉，加水浸泡2h，煎煮提取2次，加水量分别为10、8倍，每次1.5小时，滤过，合并滤液得红景天水煮液，减压浓缩(压力0.08MPa，温度60℃)成稠膏(60℃时相对密度为1.15～1.20)，减压干燥(压力0.08Mpa，温度60℃)，得提取物干膏，计算红景天出膏率，粉碎，过80目筛，得到红景天提取物细粉，待用；

五味子提取物制备：取五味子，破碎，加水浸泡2h，煎煮提取2次，加水量分别为10、8倍，每次1.5小时，滤过，合并滤液得五味子水煮液，减压浓缩(压力0.08MPa，温度60℃)成稠膏(60℃时相对密度为1.15～1.20)，减压干燥(压力0.08Mpa，温度60℃)，得提取物干膏，计算五味子出膏率，粉碎，过80目筛，得到五味子提取物细粉，待用；

蛤蚧粉的制备：取蛤蚧去除杂质，破碎，加1倍量75％乙醇混合均匀，密闭1小时，得灭菌蛤蚧，干燥2小时(温度70℃)，得干燥蛤蚧，减压干燥(压力0.08MPa，温度60℃)，粉碎，过80目筛，得到蛤蚧粉。

天麻提取物制备：取天麻，粉碎成粗粉，加70％乙醇回流提取2次，加醇量分别为10、10倍，每次2小时，减压回收乙醇(压力0.05MPa，温度60℃)，减压浓缩(压力0.08MPa，温度60℃)成稠膏(60℃时相对密度为1.20～1.25)，减压干燥(压力0.08Mpa，温度70℃)，得提取物干膏，计算天麻提取物出膏率，粉碎，过80目筛，得到天麻提取物细粉，待用；

刺五加提取物制备：取刺五加，破碎成粗块，加水浸泡2h，煎煮提取2次，加水量分别为10、8倍，每次1.5小时，滤过，合并滤液得刺五加水煮液，减压浓缩(压力0.08MPa，温度60℃)成稠膏(60℃时相对密度为1.15～1.20)，减压干燥(压力0.08Mpa，温度60℃)，得提取物干膏，计算刺五加出膏率，粉碎，过80目筛，得到刺五加提取物细粉，待用；

1.4受试物配制：各组受试药物的生药量总量共9g，各受试药物药味均按生药量1:1的比例配比，药物用蒸馏水(已消毒)配制。

1.5给药：每日一次灌胃给药，小鼠灌胃体积为0.2mL/10g鼠重，空白组用蒸馏水(已消毒)代替受试物，每日灌胃体积与各受试物组相同。

2实验方法

常压耐缺氧试验：各受试物组经口连续给予不同浓度受试样品，空白组给予同等量蒸馏水，于末次灌胃后1小时，将各组小鼠分别放入称有5g钠石灰的250ml磨口瓶内(每瓶1只)，用凡士林封瓶口，盖严，使之不漏气，立即计时，以呼吸停止为指标，观察小鼠因缺氧而死亡的时间。

3数据处理

用SPSS软件进行数据处理。采用方差分析，但需求按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值﹤F_0.05，结论：各组均数间差异无显著性；F值≥F_0.05，P≤0.05，用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正太或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。

4结果

由实验统计结果发现，与空白组相比，各给药组均能明显延长小鼠常压耐缺氧存活时间(P＜0.001、P＜0.01或P＜0.05)，结果见表2。

表2各受试药物组对小鼠常压耐缺氧试验存活时间的影响

﹡：与空白组比较，P＜0.05；**：与空白组比较，P＜0.01

5各单味药的存活时间正交分析

表3组方筛选L₈(2⁷)正交试验表

表4方差分析(存活时间)

按存活时间对各单味药进行方差分析，黄芪A、红景天B、五味子C和蛤蚧D在配方中对存活时间有显著性差异，天麻E和刺五加F无显著性差异；故精简配方为黄芪、红景天、五味子和蛤蚧。

实验例2、“采瑞牌青阔片”提高缺氧耐受力、改善脑缺血缺氧功能试验报告

1材料和方法

1.1样品：“采瑞牌青阔片”，棕褐色片剂，0.8g/片。

1.2实验动物：18～22g昆明种健康SPF级雄性小鼠，分别进行常压耐缺氧实验、亚硝酸钠中毒存活实验、急性脑缺血性缺氧实验。每个实验随机分为1个阴性对照组和3个剂量组，每组10只。

1.3剂量：“采瑞牌青阔片”的推荐剂量为成人(按60kg体重计)每日4.8g，相当于0.08g/日/kg体重。实验设人体推荐量的10倍、20倍、30倍，即每日0.8g/kgBW、1.6g/kgBW和2.4g/kgBW为低、中、高剂量组。受试物用蒸馏水(已消毒)配制，每日一次经口给予，连续灌胃30天后测各项指标。小鼠灌胃体积为0.2mL/10g鼠重。同时设一阴性对照组(0g/kgBW)，用蒸馏水(已消毒)代替受试物，每日灌胃体积与各受试物组相同。

1.4实验方法：

1.4.1常压耐缺氧实验

小鼠连续灌胃30天，末次给予受试物后1h，将各组小鼠分别放入盛有5g钠石灰的250ml磨口瓶内(每瓶1只)，用凡士林封瓶口，盖严，使之不漏气，立即秒表计时，以呼吸停止为指标，观察小鼠因缺氧而死亡的时间。

1.4.2亚硝酸钠中毒存活实验

小鼠连续灌胃30天，末次给予受试物后1h，各组动物按240mg/kgBW剂量腹腔注射亚硝酸钠(注射量为0.1ml/10gBW)，立即秒表计时，记录动物存活时间。

1.4.3急性脑缺血性缺氧实验

小鼠连续灌胃30天，末次给予受试物后1h，各组动物自颈部逐只断头，立即按秒表记录小鼠断头后至张口喘气停止时间。

1.5数据处理

用SPSS软件进行数据处理。采用方差分析，但需求按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值﹤F_0.05，结论：各组均数间差异无显著性；F值≥F_0.05，P≤0.05，用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正太或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。

2结果

2.1采瑞牌青阔片对小鼠常压耐缺氧实验存活时间的影响

采瑞牌青阔片高剂量组能明显延长小鼠常压耐缺氧存活时间，与阴性对照组比较有显著性差异(P＜0.05)，见表5。

表5采瑞牌青阔片对小鼠常压耐缺氧实验存活时间的影响

﹡：与阴性对照组比较，P＜0.05；**：与阴性对照组比较，P＜0.01

2.2采瑞牌青阔片对小鼠亚硝酸钠中毒存活实验存活时间的影响

采瑞牌青阔片高剂量组能明显延长小鼠亚硝酸钠中毒后存活时间，与阴性对照组比较P＜0.05，见表6。

表6采瑞牌青阔片对小鼠亚硝酸钠中毒存活实验存活时间的影响

﹡：与阴性对照组比较，P＜0.05；**：与阴性对照组比较，P＜0.01

2.3采瑞牌青阔片对小鼠急性脑缺血性缺氧实验存活时间的影响

采瑞牌青阔片高剂量组能明显延长急性脑缺血性缺氧实验小鼠喘气时间，与阴性对照组比较有显著性差异P＜0.05，见表7。

表7采瑞牌青阔片对小鼠急性脑缺血性缺氧实验喘气时间的影响

﹡：与阴性对照组比较，P＜0.05；**：与阴性对照组比较，P＜0.01

3结论

采瑞牌青阔片人群推荐日摄入量4.8g/人/天，成人平均体重按60kg计算，即0.08g/kgBW扩大10、20、30倍设计低、中、高三个剂量组，即0.8g/kgBW、1.6g/kBW、2.4g/kgBW，同时设阴性对照组。采用SPF级昆明种雄性小鼠，连续灌胃给予，30天后开始测试。实验结果以P＜0.05判断为显著性差异，结果显示：1)高剂量组能明显延长小鼠常压耐缺氧存活时间；2)高剂量组能明显延长亚硝酸钠中毒后存活时间；3)高剂量组能明显延长急性脑缺血性缺氧实验小鼠喘气时间。

综合以上各项试验结果判定，采瑞牌青阔片具有提高缺氧耐受力、改善脑缺血缺氧功能。

实验例3“采瑞牌青阔片”改善支气管哮喘作用实验报告

1材料和方法

1.1样品：“采瑞牌青阔片”，棕褐色片剂，日摄入量为4.8g/60kg·BW。用蒸馏水配制各剂量浓度。

1.2实验动物：雄性SD大鼠，体重180～200g。

1.3剂量选择：“采瑞牌青阔片”，按人体日摄入量4.8g/60kg·BW，本试验设计了正常对照组、模型组和低、中、高三个剂量组(0.4g/kg·BW、0.8g/kg·BW、1.6g/kg·BW)。即相当于人体推荐量的5倍、10倍、20倍。受试物用生理盐水配制。

1.4试验方法：

1.4.1模型制备：将模型组及受试物高、中、低剂量组大鼠腹腔注射10％卵蛋白1ml和氢氧化铝干粉100mg致敏。2周后予以超声雾化吸入1％卵蛋白激发，隔日一次，每次30min，共激发2周，即可观察到大鼠呼吸加快、点头呼吸及站立不稳等表现，表示造模成功。正常对照组用生理盐水代替抗原液进行注射和雾化吸入。

1.4.2给药：试验开始第3周起，每天灌胃给药，每天一次，连续4周，大鼠灌胃体积为10ml/kg。正常对照组及模型组给予等量生理盐水灌胃。

1.4.3大鼠肺功能测定：末次给药0.5h后，大鼠用25％乌拉坦4ml/kg腹腔注射麻醉，行气管插管后，上动物呼吸机，经信号调理器处理后，采用AniRes动物肺功能分析系统分析。测定用力肺活量(FVC)、0.2秒呼出容积(Fev0.2)、最大呼出量(PEF)，计算第0.2秒用力呼出容积占用力肺活量百分比(Fev0.2/FVC)。

1.4.4检测指标：大鼠最后一次给药24小时后，用2％戊巴比妥钠麻醉，股静脉采血，3000r/min(4℃)离心10min，分离血清，测定大鼠免疫球蛋白(T-IgE)的含量。处死大鼠，游离气管，提取支气管肺泡灌洗液(BALF)，3000r/min(4℃)离心10min，吸取上清液，测定白介素-4(IL-4)与γ-干扰素(IFN-γ)的水平。

1.5数据处理

用SPSS软件进行数据处理。采用方差分析，但需求按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值﹤F_0.05，结论：各组均数间差异无显著性；F值≥F_0.05，P≤0.05，用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正太或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。

2结果

2.1采瑞牌青阔片对哮喘大鼠肺功能的影响

肺功能测定结果显示，正常对照组0.2秒呼出容积(Fev0.2)、最大呼出量(PEF)、第0.2秒用力呼出容积占用力肺活量百分比(Fev0.2/FVC)为6.87、46.38和81.45，与正常对照组相比，哮喘模型组此三指标显著降低，分别为5.88、39.95和63.26(P<0.01或P<0.05)。采瑞牌青阔片各剂量组均可明显升高Fev0.2、PEF、Fev0.2/FVC比值(P<0.01或P<0.05)，(表8)。

表8采瑞牌青阔片对哮喘大鼠肺功能的影响

##：与正常对照相比P<0.01；

*与模型组相比P<0.05；**与模型组相比P<0.01；

2.2采瑞牌青阔片对哮喘大鼠血清中IgE水平的影响

实验结果显示，哮喘模型大鼠血清IgE的水平与正常对照组相比显著升高(P＜0.01)；给予采瑞牌青阔片后IgE的水平明显降低且有一定的量效关系(表9)。

表9采瑞牌青阔片对哮喘大鼠血清中IgE水平的影响

##：与正常对照相比P<0.01；

*与模型组相比P<0.05；**与模型组相比P<0.01；

2.3采瑞牌青阔片对哮喘大鼠BALF中IL-4与IFN-γ水平的影响

与正常对照组比较，模型组IL-4显著升高，IFN-γ显著降低(P＜0.01)；与模型组相比，采瑞牌青阔片高、中剂量组能显著降低IL-4水平，提高IFN-γ的水平(P＜0.05，P＜0.01)(表10)。

表10采瑞牌青阔片对哮喘大鼠BALF中IL-4与IFN-γ水平的影响

##与正常对照相比P<0.01

*与模型组相比P<0.05，**与模型组相比P<0.01

2.4采瑞牌青阔片对哮喘大鼠肺组织中TGF-β1和TNF-α的影响

与正常对照组比较，模型组TGF-β1和TNF-α均显著升高(P＜0.05，P＜0.01)；与模型组相比，采瑞牌青阔片各剂量组均能显著降低TGF-β1和TNF-α水平(P＜0.05，P＜0.01)(表11)。

表11采瑞牌青阔片对哮喘大鼠肺组织中TGF-β1和TNF-α的影响

##与正常对照相比P<0.01

*与模型组相比P<0.05，**与模型组相比P<0.01

3.结论

本次结果显示，采瑞牌青阔片各剂量组可显著抑制哮喘大鼠气道高反应，改善肺功能；能显著降低哮喘大鼠血清IgE水平；能显著降低哮喘大鼠支气管肺泡灌洗液中IL-4水平，同时能显著升高哮喘大鼠支气管肺泡灌洗液中IFN-γ水平；能显著降低哮喘大鼠肺组织中TGF-β1和TNF-α，表明采瑞牌青阔片对哮喘大鼠具有平喘的作用。

实验例4、“采瑞牌青阔片”对慢性支气管炎的治疗作用实验报告

1材料和方法

1.1样品：样品为“采瑞牌青阔片”，棕色片剂。人体推荐服用量为每日4.8g，相当于0.08/kg·BW。

1.2实验动物：180-200g雄性SD大鼠。

1.3剂量选择：实验动物随机分为正常对照组、模型组、高、中、低剂量5组，每组10只。高、中、低剂量分别为1.6、0.8和0.4g/kg·BW，分别相当于人口服剂量的20、10、5倍，受试物用生理盐水配置。

1.4试验方法：

1.4.1采瑞牌青阔片对棉球诱导大鼠肉芽肿模型的影响

1.4.1.1模型制备取健康雄性SD大鼠40只，用10％水合氯醛(350mg/kg)腹腔注射麻醉，在无菌条件下切开腹部皮肤，将己称重的灭菌棉球(每个棉球重50±1mg，高压灭菌后，每个加入氨苄青霉素lmg/0.lml，50℃烘箱烘干),分别植入大鼠两侧腹股沟皮下。

1.4.1.2分组和给药将模型大鼠随机分成模型组和采瑞牌青阔片高、中、低剂量组共4组，每组10只。造模后开始，采瑞牌青阔片高、中、低剂量组每日灌胃给药1次，连续7天。模型组灌胃给予等体积生理盐水。末次给药1小时后，在右耳的前后两面涂布二甲苯(空白组涂抹生理盐水)0.02mL/只，以左耳当对照，30min后将其脱颈处死，剪下左、右耳，然后用直径为9mm的打孔器分别在同一部位取下耳圆片，天平称重，计算耳壳的肿胀度，公式：肿胀度(mg)＝右耳的重量(mg)－左耳的重量(mg)。

1.4.1.3测定指标及检测方法

末次灌胃后第二天将大鼠颈椎脱臼处死，取出棉球，置60℃烤箱烤至恒重后，减去原棉球净重即为肉芽肿净重，以100g体重生成肉芽肿净重(mg)表示。计算每只大鼠肉芽肿重的抑制率。肉芽肿重抑制率＝(模型组肉芽肿净重-用药组大鼠肉芽肿净重/模型组肉芽肿净重)×100％。比较给药组与对照组之间大鼠肉芽肿净重的差异显著性。比较SQDG与TGP、TGP+ASTs各组之间大鼠肉芽肿净重的差异显著性。

1.4.2采瑞牌青阔片对慢性支气管炎大鼠血清SOD、MDA、ET-1、NO、TNF-α、IL-4、IL-10含量的影响。

1.4.2.1分组和给药SD大鼠，雌雄各半，随机分为正常对照组，模型组、采瑞牌青阔片高、中、低剂量组，所有用药大鼠均于造模后28d开始按上述剂量灌胃给药，连续10d，正常对照组和模型组给予等体积生理盐水。

1.4.2.2造模大鼠分组完成后，除正常对照组外，其他各组大鼠分批置于40cm×35cm×60cm的熏箱(熏箱上留有缝隙)内，利用3g的亚硫酸钠与过量的硫酸反应生成SO₂，每日1次，每次30分钟，熏4周，全程28天。

1.4.2.3检测指标大鼠眼眶取血后，3000r/min离心10min，取上清，严格按照试剂盒说明检测血清中超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量。立即断颈处死，剖取气管和肺脏，取右侧肺组织行支气管肺泡灌洗，用生理盐水洗去表面血渍,用4℃生理盐水反复灌洗4次,每次灌洗量为4ml，回收量＞90％，4℃1500r/min离心5min，提取上清液，-20℃冻存待检测内皮素-1(ET-1)和一氧化氮(NO)。取左肺下叶组织0.3g左右，在冰冷的生理盐水中漂洗，除去血液，滤纸拭干，称质量，置于小烧杯中。用移液管量取0.86％的预冷生理盐水2.7mL(按照实际组织质量的9倍计算)，先将1.8mL置于小烧杯中，用眼科剪尽快剪碎组织块。将剪碎的组织倒入玻璃匀浆管中，用剩余的冷生理盐水冲洗小烧杯，一起倒入匀浆管中。将匀浆器下端插入盛有冰水混合物的器皿中，充分研磨使组织匀浆化。将制备好的匀浆以4000r/min离心10min，移取上清液，在-20℃下冻存待测。取上清液按试剂盒要求测定肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-10(IL-10)水平。

1.5数据处理

用SPSS软件进行数据处理。采用方差分析，但需求按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值﹤F_0.05，结论：各组均数间差异无显著性；F值≥F_0.05，P≤0.05，用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正太或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。

2结果

2.1采瑞牌青阔片对棉球诱导大鼠肉芽肿形成的影响

棉球植入当天给药组开始连续灌胃给药7天，给药后第8天摘取大鼠腹股沟处的棉球肉芽肿，置烤箱烤至恒重后称重观察采瑞牌青阔片高、中、低剂量组对棉球诱导大鼠肉芽肿形成的影响。结果见表12，模型组大鼠肉芽肿组织增生明显，剥离时局部可见大量炎性渗出物，而采瑞牌青阔片各剂量组对棉球诱导的大鼠肉芽组织增生具有明显的抑制作用，并使局部的炎性渗出液减少。

表12采瑞牌青阔片对棉球诱导大鼠肉芽肿形成的影响(N＝10，)

*与模型组相比P<0.05，**与模型组相比P<0.01

2.2采瑞牌青阔片对慢性支气管大鼠血清中SOD、MDA的影响

模型组中SOD活性相对于正常对照组明显降低(P＜0.05)，MDA的含量则相对于正常对照组明显升高(P＜0.05)。采瑞牌青阔片高、中、低剂量组SOD活性相对于模型组明显升高(P＜0.05)，MDA的含量则相对于模型组明显降低(P＜0.05)，说明采瑞牌青阔片高、中、低剂量组都能抑制慢性支气管炎所引起的大鼠血清中SOD活性的降低以及MDA含量的升高，且作用强度随剂量的增加而增强(见表13)。说明采瑞牌青阔片可以提高慢性支气管炎大鼠清除自由基的能力,从而减轻大鼠脂质过氧化损伤。

表13采瑞牌青阔片对慢性支气管大鼠血清中SOD、MDA的影响(N＝10，)

##与空白组相比P<0.01

*与模型组相比P<0.05，**与模型组相比P<0.01

2.3采瑞牌青阔片对慢性支气管大鼠支气管肺泡灌洗液中ET-1、NO的影响

结果显示，模型组大鼠BALF中ET-1含量均较正常对照组明显升高(P＜0.01)；经治疗用药,采瑞牌青阔片中、高剂量组BALF中ET-1含量与模型组比较均有明显降低(P＜0.01)；模型组大鼠BALF中NO含量均较正常对照组明显降低(P＜0.01)；经治疗用药,采瑞牌青阔片低、中、高剂量组BALF中NO含量均高于模型组(P＜0.05或P＜0.01)(结果见表14)。采瑞牌青阔片可有效抑制ET-1的产生，显著提高NO含量，控制肺脏慢性炎症，以达补气活血祛瘀、宣肺止咳平喘之用。

表14采瑞牌青阔片对慢性支气管大鼠支气管肺泡灌洗液中ET-1、NO的影响(N＝10，)

##与空白组相比P<0.01

*与模型组相比P<0.05，**与模型组相比P<0.01

2.4采瑞牌青阔片对慢性支气管大鼠肺组织匀浆中TNF-α、IL-4、IL-10的影响

由结果可知，与正常对照组相比，模型组大鼠肺组织匀浆中TNF-α水平明显升高，而IL-10、IL-4水平则明显降低(P＜0.01)。采瑞牌青阔片中、高剂量组可显著降低慢性支气管炎大鼠肺组织匀浆中升高的TNF-α(P＜0.05)，低、中、高剂量组均可使下降的IL-10、IL-4水平升高，与模型组比较，差异显著(P＜0.05或P＜0.01)，结果见表15。

表15采瑞牌青阔片对慢性支气管大鼠肺组织匀浆中TNF-α、IL-4、IL-10的影响(N＝10,)

##与空白组相比P<0.01

*与模型组相比P<0.05，**与模型组相比P<0.01

3结果

采瑞牌青阔片对棉球诱导大鼠肉芽肿慢性炎症模型有明显的抗炎作用。

采瑞牌青阔片能抑制慢性支气管炎所引起的大鼠血清中SOD活性的降低以及MDA含量的升高；可明显降低支气管肺泡灌洗液中ET-1的含量，同时可显著提高NO含量；可显著降低慢性支气管炎大鼠肺组织匀浆中升高的TNF-α水平，同时使下降的IL-10、IL-4水平升高。

本实验结果说明采瑞牌青阔片对慢性支气管炎的治疗作用。

实验例5、“采瑞牌青阔片”抗肺纤维化作用试验报告

1材料和方法

1.1样品：“采瑞牌青阔片”，棕色片剂，日摄入量为4.8g/60kg·BW，折合0.08g/kg·BW。

1.2实验动物：雄性SD大鼠。体重180～200g。

1.3剂量选择：“采瑞牌青阔片”，按人体日摄入量4.8g/60kg·BW，本试验设计了对照组和低、中、高三个剂量组，分别为每日0.8g/kg·BW、1.6g/kg·BW、2.4g/kg·BW。即相当于人体推荐量的10倍、20倍、30倍。受试物用纯净水配制。每日一次，经口给予，连续灌胃28天后测定各项指标。大鼠灌胃体积为0.1mL/10g鼠重。同时设一空白对照组(0g/kg·BW)，用蒸馏水代替受试物，每日灌胃体积与各受试物组相同。

1.4试验方法

1.4.1模型制备

大鼠腹腔注射4％水合氯醛0.01mL/g麻醉，在无菌条件下行颈部正中切口，分离气管，向气管内缓慢注射博莱霉素4.5mg/kg，空白对照组注入等体积的生理盐水，注射后立刻缝合切口并消毒处理，将大鼠直立旋转3min，使药液在肺中分布均匀，清醒后常规饲养。从造模后次日开始每日灌胃给药1次，连续28天。对照组和模型组灌胃给予等体积蒸馏水。观察各组大鼠在给药28天期间体质量、毛色、呼吸状态等的变化。

1.4.2大鼠肺功能检测

末次给药0.5h后，大鼠用25％乌拉坦4ml/kg腹腔注射麻醉，行气管插管后，上动物呼吸机，经信号调理器处理后，采用AniRes动物肺功能分析系统分析。测定用力肺活量(FVC)、0.2秒呼出容积(Fev0.2)、最大呼出量(PEF)，计算第0.2秒用力呼出容积占用力肺活量百分比(Fev0.2/FVC)。

1.4.3指标检测

给药28天后，大鼠麻醉，腹主动脉取血，离心制备血清，检测血清中总抗氧化能力(T-AOC)、还原性谷胱甘肽(GSH)、髓过氧化物酶(MPO)水平。断头处死，取左肺在液氮中保存，供检测羟脯氨酸(HYP)含量。

用；

1.5数据处理

用SPSS软件进行数据处理。采用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值＜F_0.05，结论：各组均数间差异无显著性；F值≥F_0.05，P≤0.05，用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，带满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。

2试验结果

2.1采瑞牌青阔片对肺纤维化大鼠肺功能的影响

肺功能测定结果显示，正常对照组0.2秒呼出容积(Fev0.2)、最大呼出量(PEF)、第0.2秒用力呼出容积占用力肺活量百分比(Fev0.2/FVC)为6.84、46.16和81.61，与正常对照组相比，哮喘模型组此三指标显著降低，分别为5.80、39.50和60.88(P<0.01或P<0.05)。采瑞牌青阔片各剂量组均可明显升高Fev0.2、PEF、Fev0.2/FVC比值(P<0.01或P<0.05)，结果见表16。

表16采瑞牌青阔片对肺纤维化大鼠肺功能的影响

##：与正常对照相比P<0.01；

*与模型组相比P<0.05；**与模型组相比P<0.01；

2.2采瑞牌青阔片对肺纤维化大鼠血清中T-AOC、GSH、MPO的影响

与空白对照组比较，模型组肺纤维化大鼠血清中的T-AOC和GSH水平显著降低(P＜0.01)，MPO水平显著升高(P＜0.01)。与模型组比较，采瑞牌青阔片高、中、低各剂量组肺纤维化模型大鼠的T-AOC、GSH水平明显升高(P＜0.05、0.01)，采瑞牌青阔片中、高剂量组MPO水平明显降低(P＜0.05、P＜0.01)，结果见表17。

表17采瑞牌青阔片对肺纤维化大鼠血清中T-AOC、GSH、MPO的影响

*与空白对照组相比P<0.05，**与空白对照组相比P<0.01

2.3采瑞牌青阔片对肺纤维化大鼠肺组织中HYP的影响

与空白对照组大鼠比较，模型组大鼠肺组织HYP含量明显升高(P＜0.01)。与模型组比较，采瑞牌青阔片高、中、低剂量组大鼠肺组织HYP含量明显降低(P＜0.01、P＜0.05)，结果见表18。

表18采瑞牌青阔片对肺纤维化大鼠肺组织中HYP的影响

*与空白对照组相比P<0.05，**与空白对照组相比P<0.01

3.结论

由上述试验结果可知，经口给予大鼠不同剂量的采瑞牌青阔片28天后，与模型组比较，该受试物能明显升高肺纤维化模型大鼠血清中的T-AOC、GSH水平(P＜0.01、P＜0.05)，可明显降低血清中MPO含量(P＜0.01、P＜0.05)。另外，采瑞牌青阔片可明显降低肺纤维化大鼠肺组织中HYP含量(P＜0.01、P＜0.05)。

通过本实验说明采瑞牌青阔片具有肺纤维化的作用。

实验例6、“采瑞牌青阔片”抗疲劳作用试验报告

1材料和方法

1.1样品：“采瑞牌青阔片”，棕色片剂，日摄入量为4.8g/60kg·BW，折合0.08g/kg·BW。

1.2实验动物：雄性昆明种小鼠48只。随机分为4组。

1.3剂量选择：“采瑞牌青阔片”，按人体日摄入量4.8g/60kg·BW，本试验设计了对照组和低、中、高三个剂量组，分别为每日0.4g/kg·BW、0.8g/kg·BW、2.4g/kg·BW。即相当于人体推荐量的5倍、10倍、30倍。受试物用纯净水配制。每日一次，经口给予，连续灌胃30天后测定各项指标。小鼠灌胃体积为0.1mL/10g鼠重。同时设一空白对照组(0g/kg·BW)，用纯净水代替受试物，每日灌胃体积与各受试物组相同。

1.4试验方法

1.4.1负重游泳试验

末次给小鼠受试物30min后，将尾根部负荷5％体重铅丝的小鼠置于游泳箱中游泳。水深30cm，水温25.0℃±1.0℃，记录小鼠自游泳开始至死亡的时间，作为小鼠负重游泳时间。

1.4.2血清尿素测定

末次给小鼠受试物30min后，在温度30℃的水中游泳90min，休息60min后立即拔眼球采血0.5ml。置4℃冰箱约3h，血凝固后3000r/min离心15min，取血清测定。

1.4.3肝糖原测定

末次给小鼠受试物30min后，立即处死，取肝脏经生理盐水漂洗后用滤纸吸干，精确称取肝脏100mg，加入4mlTCA，匀浆1min，将匀浆液倒入离心管，以3000r/min离心15min，取上清液0.5ml，加95％乙醇2ml，充分混匀至两种液体间不留有界面，用干净塞子塞上，室温下树立放置过夜。次日以3000r/min离心15min。小心倒掉上清液并使试管倒立放置10min。用2ml蒸馏水溶解糖元待测。

1.4.4血乳酸测定

末次给小鼠受试物30min后，采血20μl加入40μl破膜液中，振荡摇匀。然后是小鼠在温度为30℃的水中游泳10min后停止，立即采血20μl加入40μl破膜液中，振荡摇匀。休息20min后，再各采血20μl加入40μl破膜液中，振荡摇匀。用血乳酸测定仪测定，所得值乘3即为血乳酸值。

1.5数据处理

用SPSS软件进行数据处理。采用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值＜F_0.05，结论：各组均数间差异无显著性；F值≥F_0.05，P≤0.05，用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，带满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。

2试验结果

2.1采瑞牌青阔片对小鼠负重游泳时间的影响

由结果可知，经口给予小鼠不同剂量的采瑞牌青阔片30天后，2.4g/kgBW组与空白对照组比较，负重游泳时间有显著性差异(P＜0.01)。即采瑞牌青阔片在2.4g/kgBW组能延长小鼠的负重游泳时间，结果见表19。

表19采瑞牌青阔片对小鼠负重游泳时间的影响

*与空白对照组相比P<0.05，**与空白对照组相比P<0.01

2.2采瑞牌青阔片对小鼠游泳后血清尿素水平的影响

由结果可知，经口给予小鼠不同剂量的采瑞牌青阔片30天后，2.4g/kgBW组与空白对照组比较，血清尿素含量有显著性差异(P＜0.05)。即采瑞牌青阔片在2.4g/kgBW组能减少疲劳小鼠血清尿素含量，结果见表20。

表20采瑞牌青阔片对小鼠游泳后血清尿素水平的影响

*与空白对照组相比P<0.05，**与空白对照组相比P<0.01

2.3采瑞牌青阔片对小鼠肝糖原含量的影响

由结果可知，经口给予小鼠不同剂量的采瑞牌青阔片30天后，各剂量组与空白对照组比较，肝糖原含量均无显著性差异(P＜0.05)。即采瑞牌青阔片在对小鼠肝糖原含量无影响，结果见表21。

表21采瑞牌青阔片对小鼠肝糖原含量的影响

*与空白对照组相比P<0.05，**与空白对照组相比P<0.01

2.4采瑞牌青阔片对小鼠游泳后血乳酸值的影响

由结果可知，经口给予小鼠不同剂量的采瑞牌青阔片30天后，2.4g/kgBW组与空白对照组比较，血乳酸曲线下面积有显著性差异(P＜0.05)。即采瑞牌青阔片在2.4g/kgBW组能减少游泳后小鼠血乳酸曲线下面积，结果见表22。

表22采瑞牌青阔片对小鼠游泳后血乳酸值的影响

*与空白对照组相比P<0.05，**与空白对照组相比P<0.01

3.结论

由上述试验结果可知，经口给予小鼠不同剂量的采瑞牌青阔片30天后，与空白对照组比较，该受试物在2.4g/kgBW组能延长小鼠的负重游泳时间(P＜0.01)、减少疲劳小鼠血清尿素含量(P＜0.05)、减少游泳后小鼠血乳酸曲线下面积(P＜0.05)。

通过本实验说明采瑞牌青阔片具有抗疲劳的作用。

具体实施方式

实施例1

黄芪1kg红景天2kg

五味子3kg蛤蚧1kg

制备方法：

1、取黄芪、红景天、五味子，加水浸泡2h，煎煮提取2次，加水量分别为10、8倍，每次1.5小时，滤过合并滤液，得混合水煮液，减压浓缩(压力0.08MPa，温度60℃)成稠膏(60℃时相对密度为1.15～1.20)。

2、取蛤蚧去除杂质，破碎，加1倍量75％乙醇混合均匀，密闭1小时，得到灭菌蛤蚧，干燥2小时(温度70℃)，得到干燥蛤蚧。

3、取黄芪、红景天、五味子的混合稠膏和干燥蛤蚧，混合，减压干燥(压力0.08MPa，温度60℃)，得混合干膏，粉碎，过80目筛，得到混合干膏粉。

4、取均匀的混合干膏粉，按常规工艺制成片剂。

实施例2

黄芪3kg红景天7kg

五味子9kg蛤蚧3kg

制备方法：

1、取黄芪，加水浸泡2h，煎煮提取2次，加水量分别为10、8倍，每次1.5小时，滤过合并滤液，得混合水煮液，减压浓缩(压力0.08MPa，温度60℃)成稠膏(60℃时相对密度为1.15～1.20)。

2、取红景天加70％乙醇，浸泡2小时，提取2次，第一次加12倍量醇，第二次加10倍醇，每次2小时，滤过，滤液减压浓缩(压力0.08MPa，温度60℃)成稠膏(60℃时相对密度为1.25～1.30)，减压干燥(压力0.08Mpa，温度≤70℃)得提取物干膏，粉碎，过80目筛，即得红景天提取物粉。

3、取五味子加80％乙醇，浸泡1小时，提取2次，第一次加8倍量乙醇，第二次加6倍量乙醇，每次1小时，滤过，滤液减压浓缩(压力0.08MPa，温度60℃)成稠膏(60℃时相对密度1.25-1.30)，减压干燥(压力0.08Mpa，温度≤70℃)，干膏粉碎，过80目筛，即得五味子提取物粉。

4、取蛤蚧去除杂质，破碎，加1倍量75％乙醇混合均匀，密闭1小时，得到灭菌蛤蚧，干燥2小时(温度70℃)，得到干燥蛤蚧。

5、取黄芪提取稠膏和干燥蛤蚧，混合，减压干燥(压力0.08MPa，温度60℃)，得混合干膏，粉碎，过80目筛，得到混合干膏粉。

6、取黄芪和蛤蚧混合干膏粉、红景天提取物粉、五味子提取物粉混合均匀，按常规工艺制成胶囊剂。

实施例3

黄芪6kg红景天4kg

五味子4kg蛤蚧5kg

制备方法：

1、取黄芪、红景天、五味子，加水浸泡2h，煎煮提取2次，加水量分别为10、8倍，每次1.5小时，滤过合并滤液，得混合水煮液，减压浓缩(压力0.08MPa，温度60℃)成稠膏(60℃时相对密度为1.15～1.20)。

2、取蛤蚧去除杂质，破碎，加1倍量75％乙醇混合均匀，密闭1小时，得到灭菌蛤蚧，干燥2小时(温度70℃)，得到干燥蛤蚧。

3、取黄芪、红景天、五味子的混合稠膏和干燥蛤蚧，混合，减压干燥(压力0.08MPa，温度60℃)，得混合干膏，粉碎，过80目筛，得到混合干膏粉。

4、取均匀的混合干膏粉，按常规工艺制成颗粒剂。

实施例4

黄芪7.5kg红景天3kg

五味子6kg蛤蚧6kg

制备方法：

1、取黄芪、红景天、五味子，加水浸泡2h，煎煮提取2次，加水量分别为10、8倍，每次1.5小时，滤过合并滤液，得混合水煮液，减压浓缩(压力0.08MPa，温度60℃)成稠膏(60℃时相对密度为1.15～1.20)。

2、取蛤蚧去除杂质，破碎，加1倍量75％乙醇混合均匀，密闭1小时，得到灭菌蛤蚧，干燥2小时(温度70℃)，得到干燥蛤蚧。

3、取黄芪、红景天、五味子的混合稠膏和干燥蛤蚧，混合，减压干燥(压力0.08MPa，温度60℃)，得混合干膏，粉碎，过80目筛，得到混合干膏粉。

4、取均匀的混合干膏粉，按常规工艺制成散剂。

实施例5

黄芪1.2kg红景天2.4kg

五味子3.5kg蛤蚧1.4kg

制备方法：

1、取黄芪，加水浸泡2h，煎煮提取2次，加水量分别为10、8倍，每次1.5小时，滤过合并滤液，得混合水煮液，减压浓缩(压力0.08MPa，温度60℃)成稠膏(60℃时相对密度为1.15～1.20)。

2、取红景天加70％乙醇，浸泡2小时，提取2次，第一次加12倍量醇，第二次加10倍醇，每次2小时，滤过，滤液减压浓缩(压力0.08MPa，温度60℃)成稠膏(60℃时相对密度为1.25～1.30)，减压干燥(压力0.08Mpa，温度≤70℃)得提取物干膏，粉碎，过80目筛，即得红景天提取物粉。

3、取五味子加80％乙醇，浸泡1小时，提取2次，第一次加8倍量乙醇，第二次加6倍量乙醇，每次1小时，滤过，滤液减压浓缩(压力0.08MPa，温度60℃)成稠膏(60℃时相对密度1.25-1.30)，减压干燥(压力0.08Mpa，温度≤70℃)，干膏粉碎，过80目筛，即得五味子提取物粉。

4、取蛤蚧去除杂质，破碎，加1倍量75％乙醇混合均匀，密闭1小时，得到灭菌蛤蚧，干燥2小时(温度70℃)，得到干燥蛤蚧。

5、取黄芪提取稠膏和干燥蛤蚧，混合，减压干燥(压力0.08MPa，温度60℃)，得混合干膏，粉碎，过80目筛，得到混合干膏粉。

6、取黄芪和蛤蚧混合干膏粉、红景天提取物粉、五味子提取物粉混合均匀，按常规工艺制成片剂。

实施例6

黄芪3kg红景天8kg

五味子10kg蛤蚧4kg

制备方法：

1、取黄芪、红景天、五味子，加水浸泡2h，煎煮提取2次，加水量分别为10、8倍，每次1.5小时，滤过合并滤液，得混合水煮液，减压浓缩(压力0.08MPa，温度60℃)成稠膏(60℃时相对密度为1.15～1.20)。

2、取蛤蚧去除杂质，破碎，加1倍量75％乙醇混合均匀，密闭1小时，得到灭菌蛤蚧，干燥2小时(温度70℃)，得到干燥蛤蚧。

3、取黄芪、红景天、五味子的混合稠膏和干燥蛤蚧，混合，减压干燥(压力0.08MPa，温度60℃)，得混合干膏，粉碎，过80目筛，得到混合干膏粉。

4、取均匀的混合干膏粉，按常规工艺制成胶囊剂。

实施例7

黄芪1kg红景天3kg

五味子4kg蛤蚧5kg

制备方法：

1、取黄芪、五味子，加水浸泡2h，煎煮提取2次，加水量分别为10、8倍，每次1.5小时，滤过合并滤液，得混合水煮液，减压浓缩(压力0.08MPa，温度60℃)成稠膏(60℃时相对密度为1.15～1.20)。

2、取红景天加70％乙醇，浸泡2小时，提取2次，第一次加12倍量醇，第二次加10倍醇，每次2小时，滤过，滤液减压浓缩(压力0.08MPa，温度60℃)成稠膏(60℃时相对密度为1.25～1.30)，减压干燥(压力0.08Mpa，温度≤70℃)得提取物干膏，粉碎，过80目筛，即得红景天提取物粉。

3、取蛤蚧去除杂质，破碎，加1倍量75％乙醇混合均匀，密闭1小时，得到灭菌蛤蚧，干燥2小时(温度70℃)，得到干燥蛤蚧。

4、取黄芪和五味子提取稠膏和干燥蛤蚧，混合，减压干燥(压力0.08MPa，温度60℃)，得混合干膏，粉碎，过80目筛，得到混合干膏粉。

5、取混合干膏粉、红景天提取物粉混合均匀，按常规工艺制成颗粒剂。

实施例8

黄芪3.5kg红景天3kg

五味子6kg蛤蚧6kg

制备方法：

1、取黄芪，加水浸泡2h，煎煮提取2次，加水量分别为10、8倍，每次1.5小时，滤过合并滤液，得混合水煮液，减压浓缩(压力0.08MPa，温度60℃)成稠膏(60℃时相对密度为1.15～1.20)。

2、取红景天加70％乙醇，浸泡2小时，提取2次，第一次加12倍量醇，第二次加10倍醇，每次2小时，滤过，滤液减压浓缩(压力0.08MPa，温度60℃)成稠膏(60℃时相对密度为1.25～1.30)，减压干燥(压力0.08Mpa，温度≤70℃)得提取物干膏，粉碎，过80目筛，即得红景天提取物粉。

3、取五味子加80％乙醇，浸泡1小时，提取2次，第一次加8倍量乙醇，第二次加6倍量乙醇，每次1小时，滤过，滤液减压浓缩(压力0.08MPa，温度60℃)成稠膏(60℃时相对密度1.25-1.30)，减压干燥(压力0.08Mpa，温度≤70℃)，干膏粉碎，过80目筛，即得五味子提取物粉。

4、取蛤蚧去除杂质，破碎，加1倍量75％乙醇混合均匀，密闭1小时，得到灭菌蛤蚧，干燥2小时(温度70℃)，得到干燥蛤蚧。

5、取黄芪提取稠膏和干燥蛤蚧，混合，减压干燥(压力0.08MPa，温度60℃)，得混合干膏，粉碎，过80目筛，得到混合干膏粉。

6、取黄芪和蛤蚧混合干膏粉、红景天提取物粉、五味子提取物粉混合均匀，按常规工艺制成散剂。

Claims (9)

1.一种中药组合物，其特征在于该组合物由如下方法制成：

该组合物的原料药组成为：

黄芪1-10重量份红景天2-12重量份

五味子2-16重量份蛤蚧1-10重量份；

制备方法为：

步骤1、取黄芪、红景天、五味子，加水煎煮，浓缩，得混合稠膏；

步骤2、取蛤蚧，用乙醇闷润灭菌，再与混合稠膏混合，共同干燥粉碎；

步骤3、取黄芪、红景天、五味子、蛤蚧混合干膏粉，按照常规工艺，制成临床或药学上可接受的片剂、胶囊剂、散剂、软胶囊剂、丸剂、颗粒剂、蜜炼膏剂、缓释制剂、速释制剂、口服液体制剂。

2.如权利要求1所述的中药组合物，其特征在于其中所述的该组合物的原料药组成为：

3.如权利要求1-2任一所述的中药组合物，其特征在于其中的制备方法包括如下步骤：

步骤1：取黄芪、红景天、五味子，加水浸泡1-3h，煎煮提取1-2次，加水量分别为8-10倍，每次1-2小时，滤过合并滤液，得混合水煮液，减压浓缩成60℃时相对密度为1.15～1.20稠膏；

步骤2：取蛤蚧去除杂质，破碎，加1-2倍量70-80％乙醇混合均匀，密闭1-2小时，得到灭菌蛤蚧，温度60-80℃干燥1-2小时，得到干燥蛤蚧；

步骤3：取黄芪、红景天、五味子的混合稠膏和干燥蛤蚧，混合，减压干燥，得混合干膏，粉碎，得到混合干膏粉；

步骤4：取混合干膏粉、按照常规工艺，制成临床或药学上可接受的片剂、胶囊剂、散剂、软胶囊剂、丸剂、颗粒剂、蜜炼膏剂、缓释制剂、速释制剂、口服液体制剂。

4.如权利要求3所述的中药组合物，其特征在于其中的方法包括如下步骤：

步骤1：取黄芪、红景天、五味子，加水浸泡2h，煎煮提取2次，加水量分别为10、8倍，每次1.5小时，滤过合并滤液，得混合水煮液，在压力0.08MPa，温度60℃条件下减压浓缩成60℃时相对密度为1.15～1.20稠膏；

步骤2：取蛤蚧去除杂质，破碎，加1倍量75％乙醇混合均匀，密闭1小时，得到灭菌蛤蚧，温度70℃干燥2小时，得到干燥蛤蚧；

步骤3：取黄芪、红景天、五味子的混合稠膏和干燥蛤蚧，混合，在压力0.08MPa，温度60℃条件下减压干燥，得混合干膏，粉碎，过80目筛，得到混合干膏粉；

步骤4：取混合干膏粉、按照常规工艺，制成临床或药学上可接受的片剂、胶囊剂、散剂、软胶囊剂、丸剂、颗粒剂、蜜炼膏剂、缓释制剂、速释制剂、口服液体制剂。

5.一种中药组合物的制备方法，其特征在于该方法为：

该组合物的原料药组成为：

黄芪1-10重量份红景天2-12重量份

五味子2-16重量份蛤蚧1-10重量份；

制备方法为：

步骤1、取黄芪、红景天、五味子，加水煎煮，浓缩，得混合稠膏；

步骤2、取蛤蚧，用乙醇闷润灭菌，再与混合稠膏混合，共同干燥粉碎；

步骤3、取黄芪、红景天、五味子、蛤蚧混合干膏粉，按照常规工艺，制成临床或药学上可接受的片剂、胶囊剂、散剂、软胶囊剂、丸剂、颗粒剂、蜜炼膏剂、缓释制剂、速释制剂、口服液体制剂。

6.如权利要求5所述的中药组合物的制备方法，其特征在于其中所述的该组合物的原料药组成为：

7.如权利要求5-6任一所述的中药组合物的制备方法，其特征在于其中的制备方法包括如下步骤：

步骤1：取黄芪、红景天、五味子，加水浸泡1-3h，煎煮提取1-2次，加水量分别为8-10倍，每次1-2小时，滤过合并滤液，得混合水煮液，减压浓缩成60℃时相对密度为1.15～1.20稠膏；

步骤2：取蛤蚧去除杂质，破碎，加1-2倍量70-80％乙醇混合均匀，密闭1-2小时，得到灭菌蛤蚧，温度60-80℃干燥1-2小时，得到干燥蛤蚧；

步骤3：取黄芪、红景天、五味子的混合稠膏和干燥蛤蚧，混合，减压干燥，得混合干膏，粉碎，得到混合干膏粉；

步骤4：取混合干膏粉、按照常规工艺，制成临床或药学上可接受的片剂、胶囊剂、散剂、软胶囊剂、丸剂、颗粒剂、蜜炼膏剂、缓释制剂、速释制剂、口服液体制剂。

8.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于该方法包括如下步骤：

步骤1：取黄芪、红景天、五味子，加水浸泡2h，煎煮提取2次，加水量分别为10、8倍，每次1.5小时，滤过合并滤液，得混合水煮液，在压力0.08MPa，温度60℃条件下减压浓缩成60℃时相对密度为1.15～1.20稠膏；

步骤2：取蛤蚧去除杂质，破碎，加1倍量75％乙醇混合均匀，密闭1小时，得到灭菌蛤蚧，温度70℃干燥2小时，得到干燥蛤蚧；

步骤3：取黄芪、红景天、五味子的混合稠膏和干燥蛤蚧，混合，在压力0.08MPa，温度60℃条件下减压干燥，得混合干膏，粉碎，过80目筛，得到混合干膏粉；

步骤4：取混合干膏粉、按照常规工艺，制成临床或药学上可接受的片剂、胶囊剂、散剂、软胶囊剂、丸剂、颗粒剂、蜜炼膏剂、缓释制剂、速释制剂、口服液体制剂。

9.如权利要求1-4任一所述的中药组合物在制备治疗具有补益肺肾脾之气、敛肺纳气，提高缺氧耐受力、改善脑缺血缺氧、改善支气管哮喘、慢性支气管炎、抗肺纤维化或抗疲劳作用的药物中的应用。