CN105687135A - 一类杂合型肿瘤靶向纳米胶束及其用途 - Google Patents

一类杂合型肿瘤靶向纳米胶束及其用途 Download PDF

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Abstract

本发明公开的是一类杂合型肿瘤靶向纳米胶束及其用途，该胶束由聚合物1和聚合物2混合自组装而得，其中，聚合物1和聚合物2的亲水端分别为L-缬氨酸-L-缬氨酸二肽、雷洛昔芬修饰的聚乙二醇嵌段，疏水端为多聚组氨酸或多聚丙氨酸。是一类基于PepT1、ER为靶向的纳米胶束，可包裹疏水性抗肿瘤药物，体外研究显示，该类胶束稳定性明显优于非杂合型胶束，同时，此类纳米胶束给药系统能被PepT1、ER高表达的肿瘤细胞选择性摄取，并对该类肿瘤细胞显现出选择性细胞毒性，可应用于制备肿瘤靶向治疗药物中。

Description

一类杂合型肿瘤靶向纳米胶束及其用途
技术领域
本发明涉及一类基于肽转运蛋白1(PepT1)、雌激素受体(ER)靶向的杂合型肿瘤靶向纳米胶束，以及其在肿瘤靶向治疗领域的应用。
背景技术
癌症严重威胁人类健康，据我国卫生部数据显示，癌症已成为仅次于心血管疾病的第二大致死病因，到2020年，我国每年仅新发病人数量就会超过300万人。与癌症肆虐相应的却是目前临床治疗手段的差强人意。手术和化疗是癌症患者对抗疾病的主要武器，遗憾的是，目前临床上应用的化疗药物如阿霉素、顺铂、奥沙利铂、紫杉醇、喜树碱、5-氟尿嘧啶等治疗效果均不尽如人意，其主要缺陷在于选择性差，且有较严重的毒副作用。因此，开发肿瘤靶向性好、安全性高的新型抗癌药物已是迫在眉睫。
纳米胶束抗癌药物给药系统具有毒性低、适用范围广、改善药物的水溶性、延长药物作用时间等优点，此外，由于EPR效应，纳米胶束还能实现被动肿瘤靶向。本世纪以来纳米胶束抗癌药物给药系统研究取得了长足的发展，多个纳米胶束抗癌药物如NC-6004(顺铂纳米胶束)、NK105(紫杉醇纳米胶束)以及SP1049C(阿霉素纳米胶束)等已处于临床研究阶段，展现出了良好的开发前景。
纳米胶束给药系统研究方兴未艾，但也存在一些不足，其中典型问题有：i)部分胶束给药系统在循环系统中稳定性不足，存在突释、渗漏以及提前酶解等现象，致使到达病灶部位药物浓度不足，并对正常组织或器官造成损伤；ii)药物主动靶向性不足。依赖EPR效应纳米胶束给药系统虽然可以部分实现药物的肿瘤靶向转运，但是不可忽视的是被动靶向给药系统进入血液循环后易被巨噬细胞吞噬，在肝、脾、肺、骨髓、淋巴结等处富集，从而造成药物分布分散，并引起相应的器官损伤。
针对上述难题，近来纳米胶束给药系统研究逐渐聚焦于主动靶向性及长循环稳定性。通过在载体表面连接特定抗体或配体，通过抗原-抗体、受体-配体之间高特异性和高亲和性的作用，可以使治疗药物主动靶向转运至病灶部位。目前，研究较多的肿瘤靶向受体有叶酸受体、生物素受体、整合素受体等。近来有研究发现雌激素受体(ER)在乳腺、结肠、子宫、胃、前列腺等多类肿瘤细胞上过表达，例如，临床检测发现约2/3乳腺癌呈ER阳性。ER在肿瘤发生、发展乃至转移过程中扮演这重要作用，研究表明，ER如长期受雌二醇、雌激素酮等內源配体激活会显著引发乳腺、子宫、结肠等多个部位发生癌变，其机制可能是ER激活后会形成ER-Src-PELP-1复合体并上调下游Erk1/Erk2的表达。而ER拮抗剂可以通过和ER竞争性结合阻断內源配体的活化作用，从而抑制ER通道介导的癌变及转移。例如，ER拮抗剂他莫昔芬、雷洛昔芬等已成功应用于乳腺癌的治疗，是当前乳腺癌内分泌治疗的一线药物。上述研究提示，利用肿瘤细胞膜上高表达的ER，设计对ER具有高亲和力和拮抗活性的药物分子，有望获得兼具ER靶向性和内分泌治疗效果的抗癌药物。
近来，肽转运蛋白1(Peptidetransporter1，PepT1)介导的肿瘤靶向也日益受到关注。PepT1能特异性识别、吸收氨基酸、小肽等营养物质。在健康人体中PepT1主要分布于小肠上皮细胞，而其他正常组织/器官少见表达。肿瘤组织由于在快速生长过程中需要大量的营养物质，因而在多类肿瘤细胞膜上发现有PepT1表达，如人结肠腺癌细胞caco-2、转移胰腺癌细胞AsPC-1、人胰腺癌细胞Capan-2、非小细胞肺癌细胞A549以及人纤维肉瘤细胞HT-1080等。Endter等利用RT-PCR方法分析多类肺癌细胞发现在所有测试细胞膜上PepT1表达均为阳性，提示PpeT1在肿瘤细胞膜上高表达可能是普遍现象。PetT1这种在正常细胞及肿瘤细胞上分布的差异性为实现肿瘤的靶向治疗提供了可能。之前有研究发现，部分氨基酸/小肽前药如氨基酸阿昔洛韦前药可被PetT1特异性识别并吸收，Amidon等合成了氨基酸去氧氟尿苷前药，发现其对PepT1表达的肿瘤细胞株的毒性显著高于无PepT1表达的肿瘤细胞株。本课题组前期研究也发现，PetT1能够特异性识别、吸收某些齐墩果酸二肽前药特别是L-Val-L-Val二肽前药，且该前药对PepT1表达的肿瘤细胞株均显示出了选择性毒性，提示L-Val-L-Val二肽前药是实现PepT1介导的肿瘤靶向转运的有效策略。
稳定性及药物突释/渗漏问题是纳米胶束给药系统面临的又一难题。对亲水端进行PEG化修饰可以一定程度提升胶束在循环系统中的稳定性；对于疏水端，以杂化交联多聚氨基酸为内核可以有效提升胶束的稳定性。杂化交联多聚氨基酸内核可通过两种途径实现：1)通过含两个乃至多个不同“疏水臂”单一两亲性聚合物分子通过自组装得到；2)通过两种或多种含不同疏水端的两亲性聚合物分子按不同比例混合自组装获得。前者由于聚合物分子结构较为复杂，合成制备难度较大，质量也较难控制，而后者制备较为简便。同时，申请人前期研究发现，利用多种不同的两亲性聚合物分子自组装不仅有助于形成杂化交联的疏水内核，同时也为不同功能基团的引入及组合提供了可能，从而为开发多功能纳米胶束给药系统开辟了一条新的途径。
发明内容
技术问题：本发明的主要目的是提供一类基于肽转运蛋白1(PepT1)、雌激素受体(ER)为靶向的杂合型肿瘤靶向纳米胶束和制备方法，及其在肿瘤靶向治疗方面的用途。
技术方案：一类杂合型肿瘤靶向纳米胶束，由聚合物1和聚合物2按物质的量比例1:10～10:1混合自组装而得，聚合物1和聚合物2的亲水端分别为L-缬氨酸-L-缬氨酸二肽、雷洛昔芬修饰的聚乙二醇嵌段，疏水端为多聚组氨酸或多聚丙氨酸，结构通式分别如式(1)、式(2)所示：
聚合物1结构通式
聚合物2结构通式
其中，R为-CH3或m＝40～230；n＝5～25。
聚合物1的制备方法为：与先进行缩合反应，然后催化加氢将叠氮基还原为胺基，再与L-丙氨酸-N-羧基-环内酸酐或2,4-二硝基苯基保护的组氨酸内酸酐开环聚合，最后脱保护基得到；R为-CH3或m＝40～230。
缩合反应是在DMAP、CH2Cl2存在下，氮气保护中反应。
催化加氢时溶剂是CH2Cl2、乙醇，催化剂为Pd/C。
与L-丙氨酸-N-羧基-环内酸酐保护的组氨酸内酸酐开环聚合是以DMF为溶剂，氮气保护下反应；脱保护基是以CF3COOH为溶剂，CH2Cl2存在下反应得到。
与2,4-二硝基苯基保护的组氨酸内酸酐开环聚合是Na2CO3和无水DMF，N2保护下反应；脱保护基是在2-巯基乙酸和DMF存在下反应得到。
聚合物2的制备方法为：与酯化反应，再催化加氢还原后与L-丙氨酸-N-羧基-环内酸酐或2,4-二硝基苯基保护的组氨酸内酸酐开环聚合得到。
2,4-二硝基苯基保护的组氨酸内酸酐开环聚合是在2-巯基乙酸和DMF存在下反应得到。
所述的一类杂合型肿瘤靶向纳米胶束在制备基于肽转运蛋白1、雌激素受体靶向的杂合型肿瘤靶向药物中的用途。
有益效果：杂合型肿瘤靶向纳米胶束给药系统稳定性比非杂合型胶束给药效果显著提升，该类胶束粒径在PBS以及血清培养液中96h未见明显变化；具有酸敏感特性，酸性条件下药物释放率显著高于正常生理条件下释放率，提示该给药系统可于肿瘤酸性微环境下靶向释放治疗药物；该类给药系统对PepT1、ER高表达的肿瘤细胞株显现出选择性细胞毒性，而对正常细胞以及PepT1、ER阴性细胞毒性较低，因而主动靶向性及较好的安全性。
具体实施方式
本发明由下述实施例得到进一步说明，但这些说明并不限制本发明的实施。
聚合物1和聚合物2按不同的比例混合自组装而得胶束系统，其中，聚合物1和聚合物2的亲水端分别为L-缬氨酸-L-缬氨酸二肽、雷洛昔芬修饰的聚乙二醇嵌段，疏水端为多聚组氨酸或多聚丙氨酸，其结构通式分别如式(1)、式(2)所示：
其中，R为-CH3或m＝40～230；n＝5～25。
本发明的聚合物1和聚合物2的制备方法为反应式(I)、(II)所示：
反应式(I)
其中,
反应式(II)
聚合物1的合成方法包括以下步骤：
步骤1：将叠氮基保护的PEG与Boc保护的L-缬氨酸-L-缬氨酸二肽在缩合剂存在的条件下反应得到二肽修饰的PEG中间体1；
步骤2：中间体1经催化氢化还原得到中间体2；
步骤3：中间体2与10-40当量的L-丙氨酸-N-羧基-环内酸酐或2,4-二硝基苯基保护的组氨酸内酸酐开环聚合得到中间体3或4；
步骤4：中间体3、4脱保护基得聚合物1。
聚合物2的合成方法包括以下步骤：
步骤1：将叠氮基保护的PEG与原料5反应得中间体6；
步骤2：中间体6经催化氢化还原得到中间体7；
步骤3：中间体7与10-40当量的L-丙氨酸-N-羧基-环内酸酐或2,4-二硝基苯基保护的组氨酸内酸酐开环聚合得到聚合物2。
本发明的杂合型肿瘤靶向纳米胶束给药系统的用途是，该纳米胶束系统可包裹疏水性抗肿瘤药物，体外研究显示，该类胶束稳定性明显优于非杂合型胶束，同时，相比于单独药物给药及非杂合型胶束给药系统给药，此类杂合型纳米胶束给药系统能被PepT1、ER高表达的肿瘤细胞选择性摄取，并对该类肿瘤细胞显现出选择性细胞毒性，而对正常细胞以及PepT1、ER阴性细胞毒性较低，因而可应用于肿瘤靶向治疗。
实施例1.中间体1的制备
25℃下，Boc-L-Val-L-Val二肽(1.2mmol)、HO-PEG-N3(1mmol)、DCC(1mmol)和DMAP(0.1mmol)分别加入到100mL单口瓶中，加100mLCH2Cl2搅拌溶解，N2保护，反应24h，反应液渐变浑浊。停止反应后，过滤，滤液用5％HCl水溶液洗(50mL×3)，有机层无水Na2SO4干燥，抽滤，滤液浓缩，柱层析(CH2Cl2：CH3OH＝10：1)得到白色蜡状固体，收率56％。
IR(KBr,cm-1):3418(NH,s)；2887(CH2CH2,vs)；2105(N3,s)；1720,1669,1624(C＝O,s)；1112(CH2-O-CH2,vs)
1HNMR(300MHz,CDCl3,δ):5.25(NH-CO),3.99-4.55(NH-CO)；4.57,3.97(NH-CH-CO)；3.64(O-CH 2CH 2-O)；2.25,2.13(CH(CH3)2)；1.45(C(CH 3)3)；0.93(CH(CH 3)2)
实施例2.中间体2的制备
将中间体1(0.23mmol)溶于10mLCH2Cl2，再加入20mL乙醇和0.05g10％Pd/C，40℃常压氢化至反应完全，抽滤，滤液浓缩至3mL，滴加入剧烈搅拌的50mL乙醚中，冰水浴中冷却静置30min，抽滤，干燥，得到白色固体，收率90％。
IR(KBr,cm-1):3412(NH,NH2,s)；2887(CH2CH2,vs)；1739,1708,1676(C＝O,s)；1112(CH2-O-CH2,vs)
实施例3.中间体3的制备
30℃下，将中间体2(0.25mmol)溶于300mL无水DMF中，加入L-丙氨酸-N-羧基-环内酸酐(5mmol)，N2保护，搅拌反应3天，反应液渐变黄色粘稠胶状。减压蒸馏除去大部分DMF，剩余反应混合物装入透析袋在1L的蒸馏水中透析24h，透析袋内液冷冻干燥，得到浅黄色固体。
IR(KBr,cm-1):3414,3274(NH,NH2,s)；2886(CH2CH2,vs)；1697,1629(C＝O,s)；1111(CH2-O-CH2,vs)
1HNMR(300MHz,DMSO-d6,δ):4.53(NH-CO)；4.11(NH-CH-CO)；3.51(O-CH 2CH 2-O,CHCH3)；1.44-1.42(C(CH 3)3)；1.22(CHCH 3)；0.86(CH(CH 3)2)
实施例4.聚合物1a的制备
25℃下，将中间体3(1mmol)溶于CF3COOH(5mmol)中，加50mLCH2Cl2，搅拌6h，反应完毕后加入三乙胺(5mmol)，继续搅拌5min，反应液减压浓缩，用少量DMSO溶解后置于透析袋内在1L蒸馏水：丙酮(1：1，v/v)中透析24h，然后在1L蒸馏水中透析24h，透析袋内液冷冻干燥，得到浅黄色固体。
IR(KBr,cm-1):3414,3274(NH,NH2,s)；2886(CH2CH2,vs)；1697,1629(C＝O,s)；1111(CH2-O-CH2,vs)
1HNMR(300MHz,DMSO-d6,δ):4.53(NH-CO)；4.24(NH-CH-CO)；3.51(O-CH 2CH 2-O,CHCH3)；1.23(CHCH 3)；0.86(CH(CH 3)2)
实施例5.中间体4的制备
30℃下，在1L的圆底烧瓶中，加入Na2CO3(10mmol)和250mL无水DMF，N2保护，缓慢滴加L-His-NCA-Dnp·HCl(5mmol)的无水DMF(50mL)溶液，滴完搅拌1h，加入中间体2(0.25mmol)，反应3天。停止反应后，减压蒸馏除去DMF，剩余反应混合物装入透析袋在1L蒸馏水中透析24h，透析袋内液冷冻干燥，得产物。
IR(KBr,cm-1):3322,3106(NH,NH2,vs)；2882(CH2CH2,vs)；1661,1609(C＝O,s)；1118(CH2-O-CH2,vs)
1HNMR(300MHz,DMSO-d6,δ):0.84(CH(CH 3)2),1.38(C(CH 3)3),2.75-3.00(CH2),3.51(OCH 2CH 2O),4.17(NH-CH-CO),4.44(NH-CO),7.12(imidazole-H),7.90(imidazole-H,ArH),8.59(ArH),8.86(ArH)
实施例6.聚合物1b的制备
参照实施例4脱去Boc保护基后，将产物(1mmol)溶于50mLDMF中，加入5mL2-巯基乙酸，N2保护，搅拌24h，减压蒸馏除去部分DMF，剩余反应混合物置于透析袋内在1L蒸馏水中透析24h，透析袋内液冷冻干燥，得产物。
IR(KBr,cm-1):3135(NH,NH2,vs)；2886(CH2CH2,vs)；1726-1680(C＝O,s)；1110(CH2-O-CH2,vs)
1HNMR(300MHz,DMSO-d6,δ):0.85(CH(CH 3)2),2.73(CH2),2.89(CH2),3.64(OCH 2CH 2O),4.01(NH-CH-CO),4.64(NH-CO),6.91(imidazole-H),8.11(imidazole-H),8.85(NH2)
实施例7.中间体6的制备
25℃下，原料5(1.2mmol)、HO-PEG-N3(1mmol)、DCC(1mmol)和DMAP(0.1mmol)分别加入到100mL单口瓶中，加100mLCH2Cl2搅拌溶解，N2保护，反应24h，反应液渐变浑浊。停止反应后，过滤，滤液用5％HCl水溶液洗(50mL×3)，有机层无水Na2SO4干燥，抽滤，滤液浓缩，柱层析(CH2Cl2：CH3OH＝10：1)得到中间体6，收率63％。
IR(KBr,cm-1):3424(HO,s)；2899(CH2CH2,vs)；2105(N3,s)；1732(C＝O,s)；1645,1602，1462(arom,s)；1112(CH2-O-CH2,vs)
实施例8.中间体7的制备
将中间体6(0.23mmol)溶于10mLCH2Cl2，再加入20mL乙醇和0.05g10％Pd/C，40℃常压氢化至反应完全，抽滤，滤液浓缩至3mL，滴加入剧烈搅拌的50mL乙醚中，冰水浴中冷却静置30min，抽滤，干燥，得到中间体7，收率94％。
IR(KBr,cm-1):3445(NH2,s),3422(HO,s)；2899(CH2CH2,vs)；1732(C＝O,s)；1645,1602，1462(arom,s)；1112(CH2-O-CH2,vs)
实施例9.聚合物2a的制备
30℃下，在1L的圆底烧瓶中，加入Na2CO3(10mmol)和250mL无水DMF，N2保护，缓慢滴加L-His-NCA-Dnp·HCl(5mmol)的无水DMF(50mL)溶液，滴完搅拌1h，加入中间体7(0.25mmol)，反应3天。停止反应后，减压蒸馏除去DMF，剩余反应混合物装入透析袋在1L蒸馏水中透析24h，透析袋内液冷冻干燥，残留物溶于50mLDMF中，加入5mL2-巯基乙酸，N2保护，搅拌24h，减压蒸馏除去部分DMF，剩余反应混合物置于透析袋内在1L蒸馏水中透析24h，透析袋内液冷冻干燥，得产物。
IR(KBr,cm-1):3305(NH,NH2,vs)；2889(CH2CH2,vs)；1726-1680(C＝O,s)；1110(CH2-O-CH2,vs)
1HNMR(300MHz,DMSO-d6,δ):3.57(OCH 2CH 2O),6.68(arom),6.78(arom),6.83(arom),6.91(imidazole-H),6.98(arom),7.69(arom),8.11(imidazole-H)
实施例10.聚合物2b的制备
30℃下，将中间体7(0.25mmol)溶于300mL无水DMF中，加入L-丙氨酸-N-羧基-环内酸酐(5mmol)，N2保护，搅拌反应3天，反应液渐变黄色粘稠胶状。减压蒸馏除去大部分DMF，剩余反应混合物装入透析袋在1L的蒸馏水中透析24h，透析袋内液冷冻干燥，得到浅黄色固体。
IR(KBr,cm-1):3414,3274(NH,NH2,s)；2886(CH2CH2,vs)；1697,1629(C＝O,s)；1111(CH2-O-CH2,vs)
1HNMR(300MHz,DMSO-d6,δ):1.23(CHCH 3)；0.86(CH(CH 3)2)；3.51(O-CH 2CH 2-O,CHCH3)；6.68(arom),6.78(arom),6.83(arom),6.98(arom),7.69(arom).
实施例11.聚合物3a、3b的制备
以甲氧基PEG4000为原料，参见实施例3、4、5、6的方法制备得到聚合物3a、3b。
实施例12.纳米胶束的制备
空白胶束的制备：通过透析法制备胶束：室温下(25℃)，将聚合物溶于DMSO中，搅拌下用纯水稀释，继续搅拌1h，装入透析袋中，在纯水中透析24h，使用水相滤膜过滤透析袋内液除去大分子沉淀。
载药胶束的制备：室温下(25℃)，将聚合物溶于DMSO中，搅拌下缓慢滴加阿霉素的DMSO溶液，继续搅拌0.5h，然后用纯水稀释，继续搅拌1h，装入透析袋中，在纯水中透析24h，使用水相滤膜过滤透析袋内液除去大分子沉淀。
本发明所制备的胶束构成如表一所示：
表一、目标胶束构成一览表。
实施例13.纳米胶束基本性质测定
应用DSL测定制备所得的目标胶束在纯水中的粒径及Zeta电位，然后进一步测定胶束在纯水中不同时间点以及不同pH缓冲溶液中胶束的粒径及Zeta电位，以判断胶束在不同时间及pH条件下的稳定性。结果如表二、表三所示：
表二、不同时间点胶束粒径及Zeta电位变化情况。
表三、胶束随pH值不同粒径及Zeta电位变化情况。。
从表二可见，杂合型胶束的聚合物组成对胶束的稳定性有显著的影响，聚合物1和聚合物2的物质的量比值在1:10～10:1之间时，胶束最稳定，历时72小时也没有显著变化。相反，当聚合物1和聚合物2的物质的量比值为1:100～1:50或50:1～100:1时，胶束稳定性显著下降，在48h或72小时即出现胶束溶胀乃至崩解现象，提示以此胶束为载药系统可能存在药物渗漏或突释问题。因此，聚合物1和聚合物2的物质的量比值的优选范围为1:10～10:1。
从表三可见，pH值对胶束稳定性也有显著影响，在近中性或弱碱性条件下，胶束非常稳定；而当pH值降低至酸性时，胶束稳定性明显会发生膨胀乃至崩解，提示我们制备所得的胶束为酸敏感胶束，用作载药系统时有可能在肿瘤组织酸性条件下靶向释放受载药物，从而达到靶向治疗的效果。
实施例13.载药纳米胶束体外抗肿瘤活性测定
应用胶束M1e、M2e、M3a、M4a包裹阿霉素、紫杉醇、羟基喜树碱、顺铂等疏水性药物，应用HPLC法测定其载药率，并对载药胶束进行了体外抗肿瘤活性测定，被筛选的细胞株有：人体肝癌细胞HepG2、人体正常肝细胞L02、人体乳腺癌细胞MCF-7、人体肺癌细胞A549和人体结肠癌细胞Caco-2，选用阿霉素为阳性对照。实验采用CCK-8试剂盒法，具体操作如下：将选用的肿瘤细胞株(100微升5000个细胞)接种于96孔板上，同时加入10μL受试化合物4‰DMSO水溶液(受试化合物浓度依次0.1，0.4，2，10，50μg/mL)进行培养。然后每孔加入10μLCCK-8溶液，在细胞培养箱内继续孵育0.5-4h。在450nm波长处测定吸光度，并计算受试化合物IC50值。测试结果见表四。
表四、载药胶束的体外细胞毒活性
从测试结果可见，本发明的杂合型胶束载药系统M1e阿霉素及M2e阿霉素对A549(PepT1中低度表达)、Caco-2(PepT1高表达)均表现出了强效细胞毒性，且IC50值明显低于阳性对照阿霉素；对应地，非靶向胶束载药系统提示M4a阿霉素对A549和Caco-2细胞株的毒性要显著低于M1e阿霉素及M2e阿霉素，提示PepT1靶向基团的引入对载药系统的靶向作用至关重要。同样，对于ER受体高表达的MCF-7细胞，M1e阿霉素及M2e阿霉素同样显示出优于其他给药组的活性，表明雷洛昔芬片段的引入有利于实现ER受体靶向作用。M3a阿霉素虽然不具有酸敏感特性，但在体外细胞测试中依然表现出了很好的活性，表明酸敏感性质在体外活性测试中并不能起到重要作用，而需要动物体内实验方能体现出两者差别。对比与阿霉素，所有纳米胶束载药系统均对正常人体细胞L02表现出低毒性，体现了纳米给药系统独特的低毒性优势。
将胶束M2e包裹羟基喜树碱、紫杉醇、顺铂等其他疏水性药物，发现所得载药系统均表现出良好的抗肿瘤活性，特别是对PepT1高表达的Caco-2细胞，活性明显优于原药。而对对正常人体细胞L02未表现出明显毒性。
由上可见，本发明所公布的杂合型肽转运蛋白1(PepT1)、雌激素受体(ER)双靶向纳米胶束给药系统具有稳定性高、靶向、低毒以及酸敏感等多重特点，在肿瘤靶向治疗等领域具有广阔的应用前景。

Claims (9)

1.一类杂合型肿瘤靶向纳米胶束，其特征在于，由聚合物1和聚合物2按物质的量比例1:10～10:1混合自组装而得，聚合物1和聚合物2的亲水端分别为L-缬氨酸-L-缬氨酸二肽、雷洛昔芬修饰的聚乙二醇嵌段，疏水端为多聚组氨酸或多聚丙氨酸，结构通式分别如式(1)、式(2)所示：
其中，R为-CH3，或m＝40～230；n＝5～25。
2.如权利要求1所述的一类杂合型肿瘤靶向纳米胶束，其特征在于，聚合物1的制备方法为：与先进行缩合反应，然后催化加氢将叠氮基还原为胺基，再与L-丙氨酸-N-羧基-环内酸酐或2,4-二硝基苯基保护的组氨酸内酸酐开环聚合，最后脱保护基得到；R为-CH3，或m＝40～230。
3.如权利要求2所述的一类杂合型肿瘤靶向纳米胶束，其特征在于，缩合反应是在DMAP、CH2Cl2存在下，氮气保护中反应。
4.如权利要求2所述的一类杂合型肿瘤靶向纳米胶束，其特征在于，催化加氢时溶剂是CH2Cl2、乙醇，催化剂为Pd/C。
5.如权利要求2所述的一类杂合型肿瘤靶向纳米胶束，其特征在于，与L-丙氨酸-N-羧基-环内酸酐保护的组氨酸内酸酐开环聚合是以DMF为溶剂，氮气保护下反应；脱保护基是以CF3COOH为溶剂，CH2Cl2存在下反应得到。
6.如权利要求2所述的一类杂合型肿瘤靶向纳米胶束，其特征在于，与2,4-二硝基苯基保护的组氨酸内酸酐开环聚合是Na2CO3和无水DMF，N2保护下反应；脱保护基是在2-巯基乙酸和DMF存在下反应得到。
7.如权利要求1所述的一类杂合型肿瘤靶向纳米胶束，其特征在于，聚合物2的制备方法为：与酯化反应，再催化加氢还原后与L-丙氨酸-N-羧基-环内酸酐或2,4-二硝基苯基保护的组氨酸内酸酐开环聚合得到。
8.如权利要求7所述的一类杂合型肿瘤靶向纳米胶束，其特征在于，2,4-二硝基苯基保护的组氨酸内酸酐开环聚合是在2-巯基乙酸和DMF存在下反应得到。
9.权利要求1～8任一所述的一类杂合型肿瘤靶向纳米胶束在制备基于肽转运蛋白1、雌激素受体靶向的杂合型肿瘤靶向药物中的用途。
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