CN105659094B - 评估全身炎症反应综合征(sirs)或脓毒症患者的死亡风险的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种评估呈现全身炎症反应(SIRS)或脓毒性综合征的患者的死亡风险的方法，所述方法包含测量生物样品中sCD127的表达。

Description

评估全身炎症反应综合征(SIRS)或脓毒症患者的死亡风险的 方法
本发明整体上涉及医疗领域，且尤其是重症监护(intensive care)的领域。
更准确而言，本发明涉及一种评估患者死亡风险的方法，所述患者已经受诸如手术、烧伤、创伤等侵害，从而在处于脓毒状态的患者中，即，在呈现脓毒症、特别是重度脓毒症(也称为严重脓毒症)的患者中，且优选是在处于脓毒性休克的患者中产生全身炎症反应或SIRS。
脓毒症是与感染相关的全身炎症反应综合征。
重度脓毒症是与至少一个器官的动脉低血压和/或灌注不足和/或功能异常相关的脓毒症。
脓毒性休克是与尽管进行合理的流体复苏和增压药治疗但仍持续低血压相关的重度脓毒症。
脓毒症、重度脓毒症和脓毒性休克之间的差异主要在于对所有生命功能的破坏程度。
呈现脓毒性综合征的SIRS患者(即，由于脓毒症、重度脓毒症、或脓毒性休克而处于脓毒状态的患者)是重症监护室中死亡的主要原因之一。
为了能够提供个性化护理且因此尝试降低死亡风险，评价SIRS、脓毒症或重度脓毒症患者，且特别是处于脓毒性休克状态的患者中的死亡风险因而至关重要。
入住重症监护室的患者的状况的严重度一般是借助于各种临床和生理参数来评价。这些参数可尤其用于定义关于存活率/死亡率的预期得分；这些得分包括特别是SOFA(序贯器官衰竭评估或脓毒症相关性器官衰竭评估)和SAPSII(简化急性生理学得分II)(也称IGS II(Simplified Gravity Index II)，简化重力指数)严重度得分。通过使用大量组群的重症监护患者所定义的这些组合得分包括了多个临床-生物参数，如循环血小板数，胆红血素，多尿，年龄，或体温。通过计算数值，这些得分可用于评估一个或多个生理系统(例如心血管、肾、大脑)的功能受侵害的程度。在入住重症监护的前些天对所述数值进行计算。就SAPSII得分而言，仅考虑在重症监护前24小时或他们在重症监护期间所测量的得分中包括的参数的最差值。
然而，这些得分的实际临床应用极少，原因是这需要医师对患者历史临床参数进行积极研究。
因此，确实需要提供可用于容易且迅速地评估入住重症监护室的患者的死亡风险(该患者被定义为处于可能危及生命的严重状况)的其他工具，特别是可测量的标记物。事实上，能够识别死亡风险增加的受试者将意味着，可更恰当地作出针对他们的护理和随访和治疗。
在此背景下，本发明提出提供一种新型"生物标记物"，其能够预测已经受严重侵害(手术、烧伤、创伤等)从而产生全身炎症反应(SIRS)的患者，或呈现脓毒症、特别是重度脓毒症的患者，以及优选处于脓毒性休克状态的患者的增加的死亡风险。研究该"生物标记物"的表达水平意味着，可容易且迅速地评估患者的死亡风险，并随后可采取所有可能的预防措施。
因此，在第一方面，本发明提供一种评估患者死亡风险的方法，所述患者已经受诸如手术、烧伤、创伤等侵害、或经受感染，从而产生全身炎症反应或SIRS，所述方法包含以下步骤或甚至由以下步骤组成：
-测量得自所述患者的生物样品(也称为测试样品)中sCD127的表达；和
-在比较sCD127的表达与参考值之后，判断是否存在增加的死亡风险。
本发明的方法是一种体外或离体进行的方法。例如，与SOFA和SAPSII严重度得分相比，本发明通过提供可直接测量的标记物，从而具有能够容易地评估死亡风险的优点，尤其是已入住重症监护室或作为急诊接收的患者的死亡风险，其中所述测量可以在患者附近的实验室进行或者在患者旁侧进行。所述标记物的测量完全适用于通过自动化分析机器或通过称为快速测试的测试方法来进行。
sCD127为CD127(IL-7受体)的可溶形式或血浆形式。CD127或IL-7受体的α链是75千道尔顿(kDa)糖蛋白，其为造血生长因子受体超家族的成员。它与CD132(普通γc链)结合而在膜上表达，从而形成IL-7受体。该受体在分化、存活和淋巴细胞增殖中发挥重要作用。CD127由细胞外219个氨基酸(aa)部分、25aa的跨膜部分和195aa的胞质内部分构成。Goodwin RG等人在1990年(Cell,1990,23,941-951)描述了存在通过选择性剪接编码CD127的mRNA而生成的可溶形式/血浆形式(称为sCD127)，但迄今为止对其生物功能的理解甚少。
在本发明的上下文中，术语"sCD127"用于表示IL-7受体的可溶形式或循环形式(也称为血浆形式或血清形式)，也称为IL-7受体或IL7R的α链或IL7R-ALPHA或IL7RA或CDW127，并且尤其是如Goodwin等人所描述(Cell,1990,23,941-951)，并且由Crawley等人所测试(Journal of Immunology,2010,184,4679-4687)。
特别地，根据本发明用于CD127和因此用于sCD127的参考核酸序列优选为如下：Ensembl:ENSG00000168685,HPRD-ID:00893和核苷酸序列：NM_002185.2，VEGA基因：OTTHUMG00000090791。
此外，根据本发明用于CD127和因此用于sCD127的参考蛋白质序列优选为如下：NP_002176XP_942460；版本:NP_002176.2GI:28610151。
在本发明的方法的背景中，测试的样品为从待评估死亡风险的患者中采集的生物样品。特别地，这种类型的生物样品选自容许含有标记物sCD127的那些生物样品。
在本发明的背景中，术语"全身炎症反应"或"SIRS"旨在表示与至少两个以下标准相关的反应：温度>38℃或<36℃，心率>90/分钟(/min)，呼吸率>20/min或paCO2<32毫米汞柱(mmHg)，白细胞>12000/立方毫米(/mm3)或<4000/mm3(Bone等人,Chest,1992,1644-1655)。
本发明提供一种在呈现脓毒症、尤其重度脓毒症的患者中的优选应用。通过特别优选的方式，本发明的方法更尤其有利于评估处于脓毒性休克状态的患者的死亡风险。在感染之后呈现SIRS的处于脓毒症性状态(脓毒症、重度脓毒症和脓毒性休克)患者，感染可具有各种来源，特别是细菌来源、病毒来源或真菌来源。
在第一优选具体实施方式中，可采用本发明的方法作出判断：当相比于第一参考值，在测试样品中显示出sCD127的过表达时，患者具有增加的死亡风险。
术语"过表达"表示表达水平相对于参考值有显著增加。本领域技术人员能够确定要使用的统计学检验，从而确定sCD127的表达水平需要与之比较的参考值作为要进行的比较的函数，例如，样品群或不同类型样品的比较，一个样品群或同一类型的样品随时间的变化的比较，等等，以及确定sCD127表达水平的显著增加作为待测试样品类型(例如血浆、血清或血液)、所进行的免疫学分析的类型(例如，印记、ELISA)、或甚至所使用的分析设备的类型等等的函数。
在该具体实施方式中，第一参考值可能对应于在得自患者的生物样品中测量的sCD127的表达水平，所述患者是已经受侵害或感染从而产生全身炎症反应且已经幸免于此的患者，尤其是呈现脓毒症且已经幸免于此的患者，并且优选是处于脓毒性休克且已经幸免于此的患者。
在这种情况下，构成第一参考值的sCD127表达的测量优选并行进行，即，与得自待评估死亡风险的患者的样品上进行的sCD127表达测量在同一时间进行，即使参考样品的采集时间可能早于测试样品的采集时间。
该第一参考值还可对应于在得自患者的样品池(pool)上测量的sCD127的表达水平的平均值，所述患者是已经受诸如手术、烧伤、创伤等侵害或经受感染，从而产生全身炎症反应(SIRS)且已经幸免的患者，尤其是呈现脓毒症且已经幸免的患者，优选是处于脓毒性休克状态且已经幸免的患者。在这种情况下，构成第一参考值的sCD127表达的测量优选是在得自待评估死亡风险的患者的样品上测量sCD127表达之前进行，即使即便待"合并"的参考样品的采集时间早于测试样品的采集时间。
在该第一优选具体实施方式中，并且特别是为了评估处于脓毒性休克状态的患者的死亡风险，对测试样品中且适当时是对用于获得第一参考值的生物样品中的sCD127表达的测量是在脓毒性休克之后4天内或在第4天(D4)进行，优选在脓毒性休克之后3天内或在第3天(D3)，更优选在脓毒性休克之后2天内或在第2天(D2)，并且特别优选在脓毒性休克之后当天内或在第1天(D1)进行。换句话说，该第一参考值是在脓毒性休克之后4天内、3天内、2天内、当天内或在脓毒性休克之后第4天、第3天、第2天、第1天产生。根据本发明的该第一具体实施方式的特别有利的具体实施方式，该第一参考值是在脓毒性休克之后2天内或当天内、或实际上在第2天或第1天产生，这意味着被测试患者的死亡风险可以极早地确定。
根据第二优选具体实施方式，本发明的方法可用于作出判断：当在测试样品中测量的sCD127的表达相比于第二参考值未显著减小时，患者具有增加的死亡风险。本领域技术人员能够确定显著的百分比减小，这取决于测试样品的类型(例如，血浆、血清或血液)，或免疫学分析的类型(例如，印迹、ELISA)，或实际上取决于进行所述分析的设备，等等。一般来讲，如果在测试样品中测量的sCD127的表达相比于该第二参考值减小不大于30％，并且优选减小不大于25％，并且特别是减小不大于20％，或实际上相比于该第二参考值减小不大于15％或不大于10％，则判断出存在增加的死亡风险。
该第二参考值可对应于在得自与先前取样相同的患者的生物样品中测量的sCD127的表达水平，所述生物样品即得自待评估死亡风险的患者并且采集时间早于测试样品的时间的生物样品。术语"早"或"在...之前"用于表示时间上更早。优选地，第二参考值对应于紧接测试样品在生物样品中测量的sCD127的表达水平，即，测试样品置于从患者中采集的样品顺序之前。
在该第二优选具体实施方式中，并且特别是为了评估处于脓毒性休克的状态的患者的死亡风险，sCD127在测试样品中的表达的测量是在脓毒性休克之后第7天或大约第7天(D7)，更优选地在脓毒性休克之后第4天或大约第4天，特别是在脓毒性休克之后大约3天或3天，且还更优选地在脓毒性休克之后大约2天或2天。
举例而言，较早的样品可采集于脓毒性休克之后48小时(h)内或48h并且在采集测试样品前至少24h，并且优选地，该较早的样品采集于脓毒性休克之后48h内或48h，并且测试样品是在采集所述较早的样品之后48h内采集或在采集所述较早的样品之后48h采集。
因此，在所有情况下，在准确测量测试样品中sCD127的表达之前，本发明的方法可包含在较早的时间获得参考值，以用于与测试样品中待检测的表达水平进行比较，而不论这是第一参考值或第二参考值，以便作出判断：由其采集测试样品的患者是否具有增加的死亡风险。
因此，不论这些参考值是第一参考值或第二参考值，正是利用先前获得或在相同时间获得的这些参考值，与在测试样品中测量的sCD127的表达的值进行比较。
实施本发明方法的样品(也称为测试样品)可为动物或人来源，优选为人来源。
测试样品可为生物流体，例如，其选自血液、全血特别是取自血管的全血(即，含有白细胞和红细胞、血小板和血浆)、血清、血浆和支气管肺泡灌洗流体。
优选地，得自所述患者的测试样品为血浆或血清的样品。
可确定参考值的样品(无论其是否涉及第一参考值或第二参考值，也称为"参考样品")可能具有不同性质并且尤其具有如上文关于测试样品(生物流体)所述的生物性质。有利地，这些生物样品具有与待测试生物样品相同的性质，或至少具有与构成关于检测和/或定量sCD127的表达的参考相容的性质。
特别地，为了获得第一参考值，这些样品优选地得自与待评估死亡风险的受试者或患者具有相同特性或大多数共同特性、特别是相同性别和/或类似或相同年龄和/或相同种族起源的个体。在这种情况下，该参考样品也可由已校准而含有sCD127的平均值的任何生物或非生物样品所构成，所述平均值对应于得自患者的生物样品池所测得的水平，所述患者是已经受诸如手术、烧伤、创伤等侵害，或经受感染，从而产生全身炎症反应(SIRS)且已经幸免的患者，特别是呈现脓毒症且已经幸免的患者，并且优选是处于脓毒性休克的状态且已经幸免的患者。在此情况中，并且在特别优选的变型中，所述参考样品得自处于脓毒性休克的状态且已经幸免的一个或多个患者。
特别地，为了获得第二参考值，该参考样品优选是如下所述的生物样品：其从待评估死亡风险并且已采集了测试样品的患者获得，但从采集时间早于测试样品的时间的样品获得。优选地，该第二参考值从如下所述的生物样品获得：所述生物样品的采集时间在测试样品的时间紧前，即，在从患者采集样品的顺序中在测试样品之前的样品。
在特定具体实施方式中，本发明的方法包括测量sCD127的表达以及评价SOFA和/或SAPSII严重度得分中的至少一个，以便评估患者的死亡风险，所述患者是已经受侵害或感染从而产生全身炎症反应(SIRS)的患者，特别是处于脓毒性休克的状态的患者。在此具体实施方式中，SOFA得分优选如D.L.Vincent等人在Intensive Care Med.,1996；22:707-710中所述那样计算，和/或SAPSII得分优选如D.R.Le Gall等人在JAMA,1993；270:2957-63中所述那样计算。
在本发明的上下文中，术语"测量表达"旨在表示体外或离体测量。此外，该术语旨在指sCD127的检测和量化，优选在蛋白质水平。
就这一点而言，可以使用本领域技术人员熟悉的检测和/或定量的任何方法来实施本发明，而无论其是否与确定sCD127蛋白质的表达的存在和/或测量无关。作为测量sCD127蛋白质的表达的方法的实例，可特别提及的是Crawley等人在Journal ofImmunology,2010,184,4679-4687中所述的方法。
特别地，测定sCD127的表达水平借助于可直接或间接确定sCD127存在和/或定量其表达水平的对sCD127特异的工具或试剂。
能够检测和/或定量sCD127并且可提及的工具或试剂的实例是特异性抗体，其可是多克隆抗体或单克隆抗体，优选是单克隆抗体，或抗体的片段或衍生物，例如，Fab、F(ab)'2、Sv、scFv片段，或抗体类似物，特别是具有竞争性的亲和蛋白(NanofitinsTM)。
这些工具或试剂的优选实例是对IL-7受体的可溶形式具有特异性的那些工具或试剂，即，所述工具或试剂不识别CD127，该CD127是该受体的不可溶的细胞/膜形式。然而，可使用识别IL-7受体的可溶形式或sCD127和细胞形式或CD127的工具或试剂，只要可以通过一些其他手段，例如通过被分析样品的性质(例如，血浆或血清与含有细胞或全血的生物样品)，辨别这两种形式。
当在蛋白质水平上检测和/或定量sCD127时，可以使用诸如Western印迹、ELISA、RIA、IRMA、FIA、CLIA、ECL、流式细胞术或免疫细胞学的标准技术。
特别有利地，在蛋白质水平上来测量sCD127的表达，并且优选借助于ELISA技术。
在本发明中，并且特别是在该特定具体实施方式中，sCD127的表达水平优选借助于抗-sCD127抗体来测量，所述抗体可能是单克隆抗体或多克隆抗体，并且特别是抗-sCD127单克隆抗体。举例而言，可使用Beckman销售的R34.34抗-人CD127单克隆抗体或R&D销售的抗-CD127多克隆抗体。
上文涉及测量sCD127的表达的所有指示和优选项等同地适用于测量在测试样品和在参考样品中的该表达。
在第二方面，本发明还提供了体外或离体测量sCD127的表达以在患者中评估死亡风险的用途，所述患者是已经受诸如手术、烧伤、创伤等侵害，或感染从而产生全身炎症反应或SIRS的患者，特别是呈现脓毒症、尤其重度脓毒症的患者。
优选地，该用途特别有利于评估处于脓毒性休克的患者的死亡风险。
此外，在本发明用途的背景中，sCD127的表达优选地在蛋白质水平上来测量，并且尤其是借助于ELISA技术。
特别地，sCD127的表达可使用单克隆或多克隆抗-sCD127抗体、优选单克隆抗-sCD127抗体来测量。上述抗体也可用于本发明的该第二方面。
在更广泛的方面，涉及方法和其组合的上述所有优选具体实施方式还构成关于所述用途的优选具体实施方式。更特别地，根据本发明的用途可具体包含测量sCD127的表达以及评价SOFA和/或SAPSII严重度得分中至少一者，以便在患者中评估死亡风险，所述患者是已经受侵害或感染从而产生全身炎症反应(SIRS)的患者，并且尤其是处于脓毒性休克的状态的患者。
在第三方面，本发明还提供一种用于体外或离体测量生物样品中sCD127的表达的试剂盒，所述试剂盒包含：
-用于测量所述生物样品中sCD127的表达的特异性工具或试剂；和
-阳性对照样品，其经过校准而含有与在来自已知幸免的患者的样品池中测量的平均数量相对应的sCD127的数量，
和/或阴性对照样品，其经过校准而含有与在来自已知未幸免的患者的样品池中测量的平均数量相对应的sCD127的数量。
因此，本发明的试剂盒包含用于测量所述生物样品中和至少一个对照样品中sCD127的表达的特异性工具或试剂。
特别地，本发明的试剂盒可用于评估住院患者的死亡风险，所述患者是已经受诸如手术、烧伤、创伤等侵害或感染，从而产生全身炎症反应(SIRS)的患者，并且特别是处于脓毒性休克的状态的患者。
优选地，可用于测定生物样品中sCD127的表达的存在于本发明的试剂盒中的特异性工具或试剂可以被用于检测和/或定量sCD127的表达，优选地在蛋白质水平上。
在特别优选实施方式中，本发明的试剂盒含有单克隆或多克隆抗-sCD127抗体、特别是单克隆抗体，来作为能够测量所述生物样品中sCD127的表达的特异性工具或试剂。
另一个阳性对照样品也可以是从已知已幸免的至少一个患者获得的生物样品。类似地，另一个阴性对照样品也可以是从已知未幸免的至少一个患者获得的生物样品。与其用于阳性或阴性对照无关，这种类型的对照样品特别得自一个或多个下述患者，所述患者已经受诸如手术、烧伤、创伤等侵害、或感染，从而产生全身炎症反应(SIRS)，特别是呈现脓毒症的一个或多个患者，并且优选是处于脓毒性休克的状态的一个或多个患者。
优选地，该试剂盒包含阳性对照样品和阴性对照样品，并且特别地，各样品选自如上文定义的校准样品。
本发明还涵盖了本发明的试剂盒用于实施本发明的方法的用途，且特别是在患者中评估死亡风险的用途，所述患者是已经受诸如手术、烧伤、创伤等的侵害或感染，从而产生全身炎症反应(SIRS)的患者，特别是呈现脓毒症、特别是重度脓毒症的患者。优选地，使用本发明的试剂盒能够评估处于脓毒性休克的状态中的患者的死亡风险。
涉及所述方法的上述所有优选具体实施方式和其组合也构成本发明的试剂盒及其用途的优选实施方式。
各种其他特性从参照附图作出的以下描述而变得明显，所述附图通过非限制性实例示出本发明的具体实施方式，其中：
·图1示出脓毒性休克之后在70位患者中，在D1-2测量的血浆性sCD127的浓度、SAPSII得分和SOFA得分的ROC曲线。
·图2A、2B和2C示出在脓毒性休克之后在D1-2(A)和D3-4(B)的70位患者的sCD127和SAPSII得分(C)的存活曲线。
·图3A和3B示出在脓毒性休克之后在D1-2(A)和D3-4(B)的70位患者的sCD127的组合与SAPSII得分的存活曲线。
方法
生物样品
在脓毒性休克之后第1-2天(D1-2)和第3-4天(D3-4)自处于脓毒性休克的70位患者采集血浆样品，并且随后储存(回顾性队列)。还从41位健康志愿受试者采集了血浆样品。
入住脓毒性休克的重症监护之后28天，14位患者未存活("NS")，即，20％，同时70位患者中56位患者("S")已存活。
通过ELISA测定IL-7受体(sCD127)的可溶形式
"涂覆"
制备"涂覆"缓冲液，所述缓冲液在500毫升(mL)水(pH 9.6)中含有0.8克(g)Na2CO3、1.4g NaHCO3和0.1g NaN3。
在板中每个孔沉积稀释于"涂覆"缓冲液中的100μL捕获抗体(Ab)(小鼠抗-人CD127单克隆抗体R34.34，Beckman)([Ab]＝8μg/mL)。随后将该板覆盖并在4℃下孵育过夜。
随后抽吸所述孔的内容物，并且用至少300μL的0.05％PBS-Tween20洗涤缓冲液洗涤所述孔3次。每次洗涤时均小心去除所有液体。在最后一次洗涤之后，将所述板倒置在吸附剂纸上以消除缓冲液的所有痕迹。
"封闭"
借助于每个孔150μL的封闭缓冲液(10％胎牛血清(FCS)/PBS-Tween20,0.05％)来封闭非特异性固定，然后在37℃下将所述板孵育1h。
同样，抽吸所述孔的内容物，并且用至少300μL的0.05％PBS-Tween20洗涤缓冲液洗涤所述孔3次。每次洗涤时均谨慎去除所有液体。在最后一次洗涤之后，将所述板倒置在吸附剂纸上以便消除缓冲液的所有痕迹。
样品和对照
校准标度是用稀释于PBS 5％FCS稀释缓冲液中的重组人IL-7Rα/CD127Fc嵌合体(R&D Systems-目录号：306-IR)来产生，如在下表1中并根据C.Janot-Sardet等人，Journalof Immunological Methods,2010,28,115-123所述。
表1
将100μL样品或对照(临时重构且以60ng/mL和10ng/mL的浓度呈等分试样的CD127Fc嵌合体溶液)加入各孔，随后将该板在37℃下孵育1h。
再次抽吸所述孔的内容物，并且用至少300μL的0.05％PBS-Tween20洗涤缓冲液洗涤所述孔3次。每次洗涤时均小心去除所有液体。在最后一次洗涤之后，将所述板倒置在吸附剂纸上以便消除缓冲液的所有痕迹。
检测抗体
将稀释于PBS/5％FCS中的100μL的检测抗体(用1mL的1％TBS-BSA(R&D)重构的生物素酰化山羊多克隆抗-CD127抗体)加入各孔([Ab]＝200ng/mL)，然后将该板在37℃下孵育1h。
再次抽吸所述孔的内容物，并且用至少300μL的0.05％PBS-Tween20洗涤缓冲液洗涤所述孔3次。每次洗涤时均小心去除所有液体。在最后一次洗涤之后，将所述板倒置在吸附剂纸上以便消除缓冲液的所有痕迹。
揭示内容
将100μL链霉抗生物素蛋白-HRP加入各孔([链霉抗生物素蛋白-HRP]＝8μL/mL)。随后覆盖该板并且在环境温度下孵育30min。
再次抽吸所述孔的内容物，并且用至少300μL的0.05％PBS-Tween20洗涤缓冲液洗涤所述孔3次。每次洗涤时均小心去除所有液体。在最后一次洗涤之后，将所述板倒置在吸附剂纸上以便消除缓冲液的所有痕迹。在此洗涤阶段，所述孔用洗涤缓冲液浸泡1min至2min，然后抽吸。
将两个烧瓶的比色底物TMB(3,3′,5,5′-四甲基对二氨基联苯，bioMérieux#XX7LF1UC)按体积比混合，并且将100μL的此底物溶液沉积至各孔中。随后覆盖该板并且在环境温度下孵育30min。
最终，通过测量450nm处的吸光度来读取该板。
多变量分析
Cox模型可以评价"危害比(Hazard Ratio)"和其95％置信区间(95％CI)以及其显著性。SAPSII和SOFA得分以连续变量的形式被包括在该模型中，假定其值与死亡风险之间(存活者与非存活者)呈线性关系。统计分析是使用软件SPSS(17.0版，SPSS,Chicago,IL)和GraphPad Prism(5.03版，GraphPad Software,La Jolla,CA)来进行。将p值小于0.05视为显著。
存活比较分析("对数秩和(Log Rank)"检验)
使用上述软件生成ROC(接受者操作特性)曲线，并且用于获得最佳灵敏度和特异性的优化浓度或最佳sCD127阈是通过约登指数(Youden's index)来定义，其将用于所考虑的标记物的增量数值的灵敏度和特异性的参数相结合。因此确定出提供最高约登指数(即优化的灵敏度和特异性)的标记物的优化浓度。在基于该优化值对患者划分层之后，获得Kaplan-Meier存活曲线。使用"对数秩和(Log Rank)"检验和基于这些存活曲线的斜率计算的"危害比"(和其95％置信区间)，来评估所述组之间存活的差异。
结果
分析IL-7受体的可溶形式(sCD127)
如上所述在来自处于脓毒性休克的70位患者的血浆样品中测量血浆sCD127的浓度，并且基于住院治疗的前24小时可得的临床和生理数据，在这些患者中评估SOFA和SAPSII严重度得分。
还在得自41位健康志愿受试者(HV)的样品上进行相同测量。
结果归纳于下表2至4：
sCD127预测脓毒性休克患者的死亡的能力
针对待研究事件(即，死亡率)，研究测定血浆sCD127的浓度的预测能力。还针对该相同事件，研究得自两个参考得分(SAPSII和SOFA)的预测能力。
结果是以患脓毒性休克的70位患者在D1-2测量的sCD127以及SAPSII和SOFA严重度得分的的ROC(接受操作特性)曲线形式示于图1中。
曲线下面积的评估在下表2中记录，意味着已知SOFA和SAPSII得分的预测性能可与血浆性sCD127测量的预测性能相媲美。
表2
曲线下面积(AUC) p值
在D1-2测量的sCD127 0.846 P<0.001
在D3-4测量的sCD127 0.774 P＝0.002
D1的SOFA 0.692 P＝0.027
D1的SAPSII 0.770 P＝0.002
对于在D1-2测量的sCD127的值，使用约登指数将最佳阈定义为44.45ng/mL，这产生86％的灵敏度、71％的特异性，43％的正向预测值(如果测试高于所述阈则患者将死亡的可能性)和95％的负向预测值(当该测试低于所述阈时患者将存活的可能性)。
类似地，对于在D3-4测量的sCD127的值，最佳阈被定义为48.10ng/mL，这产生71％的灵敏度、86％的特异性、56％的正向预测值和92％的负向预测值。
通过比较在D1测量的SOFA得分，灵敏度为64.3％并且特异性为66.1％，并且正向预测值为32.1％并且负向预测值为88.1％。
通过在D1测量的SAPSII得分，灵敏度为71.4％并且特异性为55.4％，并且正向预测值为28.6％并且负向预测值为88.6％。
因此，这些结果表明，与常规使用的SOFA和SAPSII得分相比(基于ROC曲线下面积)，在D1-2对来自患者的血浆中sCD127浓度的测量具有预测脓毒性休克后死亡的能力更佳。
多变量分析
为了与脓毒性休克患者的已知风险因子相比(通过SAPSII和SOFA得分评估的初始严重度和衰竭器官数)来评估sCD127血浆浓关联的独立性，如上所述地进行单变量和多变量逻辑回归分析。
在SOFA、SAPSII得分与在D1-2和D3-4获得的sCD127的测量值之间进行多变量分析。结果归纳于下表3和4中，表明sCD127的测量值是完全独立于预测脓毒性休克后死亡率的两个已知风险因子(SOFA和SAPSII)的标记物。
表3
p值 "危害比" 95％置信区间
sCD127D1-2 0.004 8.153 1.927-34.503
SOFA 0.872 1.125 0.268-4.718
SAPSII 0.062 3.887 0.936-16,149
表4
p值 "危害比" 95％置信区间
sCD127D3-4 0.011 6.748 1.55-29.374
SOFA 0.599 1.436 0.373-5.526
SAPSII 0.06 3.787 0.947-15.141
卡普兰-迈耶(Kaplan-Meier)存活曲线
基于使用针对D1-2和D3-4的sCD127的ROC曲线和约登指数测定的最佳阈值，建立存活曲线。还生成在基于SAPSII得分对患者进行分层之后的存活曲线(阈等于53)。结果示于图2A、2B和2C中。
与是否在D1-2(图2A)或在D3-4(图2B)无关，这些结果示出作为sCD127的最佳阈的函数的两个存活曲线之间的显著差异(D1-2(图2A)："危害比"＝10.22；[95％Cl]:3.36-31.13；p<0.001，"对数秩和"检验；D3-4(图2B)："危害比"＝28.50；[95％Cl]:7.519-108.0)；p<0.001，"对数秩和"检验。
相比之下，在基于SAPSII得分分层之后，显示出死亡率无显著差异(图2C:p＝0.082,"对数秩和"检验，"危害比"＝2.55,[95％CI]:0.887-7.309)。
最后，在基于使用针对在D1-2和在D3-4的sCD127的ROC曲线和约登指数以及用于SAPSII的最佳阈(阈等于53)确定的最佳阈对患者分层之后，如上文所述，评估sCD127的增大值与增大的SAPSII得分相结合对死亡风险的预测能力。因此，还生成对应存活曲线，并且结果分别示于图3A和3B中。
与是否在D1-2或在D3-4无关，这些结果表明，相比于具有较高浓度sCD127和最高SAPSII得分的那些患者，具有最低浓度sCD127和最低SAPSII得分的患者具有高的多的存活机会：
D1-2(图3A):p<0.001,对数秩和检验，危害比＝12.98；[95％Cl]:3.453-48.83。
D3-4(图3B):p<0.001,对数秩和检验，危害比＝50.94；[95％Cl]:9.352-277.4)。
这些结果证明，sCD127与SAPSII或SOFA得分中至少一个的组合测量可增大对入住重症监护的患者的死亡率预测的强度。
因此，这一系列的结果证明，测量sCD127在血浆中的表达是用于在入住重症监护室的患者、且特别是处于脓毒性休克状态的患者中评估死亡风险的极其有用和可靠的免疫学标记物。另外，该参数可与通常的临床得分结合，以便改善这些得分对死亡风险的预测能力。
本发明不限于所述和所示实例，因为可在不脱离本发明的范围下向其提供各种修改。

Claims (14)

1.用于测量得自患者的生物样品的sCD127表达的工具或试剂在制备用于评估所述患者死亡风险的试剂盒中的用途，其中所述患者处于脓毒性休克状态，所述样品也称为测试样品。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，当相比于第一参考值，在所述测试样品中显示出sCD127的过表达时，判断所述患者具有增加的死亡风险，其中所述第一参考值对应于在得自已经受脓毒性休克且已知其已幸免的患者的生物样品中所测量的sCD127的表达水平，或者所述第一参考值实际上对应于在得自已经受脓毒性休克且已知其已幸免的患者的样品池中所测量的sCD127的表达水平的平均值。
3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，sCD127在所述测试样品中以及在用于获得所述第一参考值的生物样品中的表达，是在脓毒性休克之后2天内或当天内进行测量的，或是在脓毒性休克之后2天或1天进行测量的。
4.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，当在所述测试样品中测量的sCD127的表达相比于第二参考值并未显著减少时，判断所述患者具有增加的死亡风险，其中所述第二参考值对应于在先前从同一所述患者采集的生物样品中即先前样品中测量的sCD127的表达水平。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的用途，其特征在于，所述测试样品中sCD127的表达是在或大约在所述脓毒性休克之后第4天(D4)进行测量。
6.根据权利要求1-4中任一项所述的用途，其特征在于，所述测试样品中sCD127的表达是在或大约在所述脓毒性休克之后第3天(D3)进行测量。
7.根据权利要求1-4中任一项所述的用途，其特征在于，所述测试样品中sCD127的表达是在或大约在所述脓毒性休克之后第2天(D2)进行测量。
8.根据权利要求4所述用途，其特征在于，所述先前样品是在所述脓毒性休克之后48h内或48h并且在所述测试样品采集之前至少24h采集的。
9.根据权利要求1-4和8中任一项所述的用途，其特征在于，将sCD127表达的测量与SOFA和/或SAPSII严重度得分中至少一者的评估相结合，以评估所述患者的死亡风险。
10.根据权利要求1-4和8中任一项所述的用途，其特征在于，sCD127的表达是借助于抗-sCD127抗体来测量的。
11.根据权利要求1-4和8中任一项所述的用途，其特征在于，sCD127的表达是借助于单克隆抗-sCD127抗体来测量的。
12.根据权利要求1-4和8中任一项所述的用途，其中所述测量是在体外或离体进行的。
13.用于体外或离体测量生物样品中sCD127表达的试剂盒，所述试剂盒包含：
-用于测量所述生物样品中sCD127表达的特异性工具或试剂；和
-阳性对照样品，其经过校准而含有的sCD127量与在来自患者的样品池中测量的平均量对应，所述患者已经受脓毒性休克且已知其已幸免，
和/或阴性对照样品，其经过校准而含有的sCD127量与在来自患者的样品池中测量的平均量对应，所述患者受脓毒性休克且已知其未幸免。
14.根据权利要求13所述的试剂盒，其特征在于，其含有抗-sCD127抗体作为用于测量所述生物样品中sCD127表达的特异性工具或试剂。
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