KR20140044773A

KR20140044773A - 패혈증 예후의 예측 방법

Info

Publication number: KR20140044773A
Application number: KR1020137020967A
Authority: KR
Inventors: 타케시 마쓰야; 요시카즈 오카무라; 랄프 토매; 에버하르트 슈파누트; 보리스 이반딕; 카몬 시라카와; 시게아츠 엔도
Original assignee: 미쓰비시 가가쿠 메디엔스 가부시키가이샤; 모찌다 세이야쿠 가부시끼가이샤
Priority date: 2011-01-11
Filing date: 2012-01-10
Publication date: 2014-04-15
Also published as: CN103403549A; EP2664922A4; EP2664922A1; CN103403549B; ES2738212T3; JP6018923B2; EP2664922B1; WO2012096245A1; JPWO2012096245A1; US11041864B2; KR20180118822A; US20130288276A1

Abstract

시료 중의 sCD14-ST를 측정하는 것을 특징으로 한다. 패혈증 예후의 예측 방법을 개시한다. 본 발명에서의 측정 대상인 sCD14-ST는, 패혈증 환자에서 그 예후를 예측하는 마커로 공지인 프로칼시토닌 보다도 우수한 마커이다.

Description

패혈증 예후의 예측 방법{Method for prediction of prognosis of sepsis}

본 발명은 패혈증 예후의 예측 방법과, 상기 방법을 실시하는 키트에 관한 것이다.

시료 중의 sCD14-ST를 측정하여 패혈증을 진단하는 것이 개시되어 있다 (비특허 문헌 1, 특허 문헌 1). 또한, sCD14-ST를 그의 특이적 항체에 의해 측정하는 것도 개시되어 있다 (특허 문헌 1, 특허 문헌 2). 또한, 그의 조기 검출 및 중증도(重篤度)를 평가하는 방법이 개시되어있다 (특허 문헌 2, 비특허 문헌 2-4). 거기에서는, 어떤 시점에서의 환자의 상태가 심각한지 아닌지를 평가할 수 있는 것, 또는 패혈증이 발생했을 때에 곧바로 패혈증인지 아닌지를 평가할 수 있는 것이 개시되어있을 뿐으로, 패혈증이 의심될 때에 sCD14-ST를 측정함에 의해, 상기 패혈증이 생겨서부터 수일에서부터 수십일 후의, 패혈증의 예후를 예측할 수 있는 것은 추측도 개시도 되어 있지 않다.

그런데, sCD14-ST 이외의 패혈증의 진단 마커(マ-カ-)로서 프로칼시토닌 (プロカルシトニン, PCT)이 알려져 있다. 프로칼시토닌은, 측정시에서 패혈증인지 아닌지의 평가가 가능할 뿐만 아니라, 패혈증의 중증도 정도의 예측, 즉, 예후(특히, 사망 리스크)를 평가할 수 있다고 되어서(비특허 문헌 5), 미국 FDA에서 패혈증의 중증도의 정도를 예측할 수 있는 마커로서 승인되어 있다.

[특허 문헌 1] 특허 제 4040666호 명세서 [특허 문헌 2] 특개 2005-106694호 공보

[비특허 문헌 1] J Infect Chemother 2005;11:234-238. [비특허 문헌 2] Medical Postgraduates 2010;48:25-27. [비특허 문헌 3] Therapeutic Reserach 2004;25:1689-1694. [비특허 문헌 4] ICU와 CCV 2005;29:21-26. [비특허 문헌 5] Am J Respir Crit Care Med 2001; 164:396-402.

패혈증이 의심된 후, 그에 대한 적절한 치료 방침을 신속하게 결정하는 것이 요구되고 있다. 본 발명의 과제는, 패혈증 환자에서 그의 예후를 예측하는 마커로서 공지인 프로칼시토닌 보다도 우수한, 예후 예측에 이용할 수 있는 신규 마커를 제공하는 것이다.

상기 과제의 해결 수단을 예의 탐구하는 가운데, 본 발명자는, 패혈증이 의심된 후 72 시간 이내에, 시료 중의 sCD14-ST를 측정함에 의해, 그 측정값 또는 정도로부터, 패혈증이 발생으로부터 수일에서 수십일 후에, 그 예후가 어느 정도 심각하게 되는 지가(소위 리스크 층별화), 또는 사망 리스크를 예측할 수 있는 것을 발견하고, 본 발명을 완성했다.

본 발명은,

[1] 시료 중의 sCD14-ST를 측정하는 것을 특징으로 하는, 패혈증 예후의 예측 방법,

[2] 패혈증 의심이 생기고부터 72 시간 이내에 sCD14-ST 측정하는, [1]의 예측 방법,

[3] 예후 예측이, 패혈증에 있어서 합병증 병발(倂發)의 예측인, [1]의 예측 방법,

[4] 패혈증의 예후를 예측하기 위한, 시료 중의 sCD14-ST를 측정하는 방법,

[5] 패혈증 의심이 생기고부터 72 시간 이내에 sCD14-ST을 측정하는, [4]의 측정 방법,

[6] 패혈증 치료를 실시한 후, sCD14-ST을 측정하는, [4]의 측정 방법,

[7] 예후 예측이, 패혈증에 있어서 합병증 병발의 예측인, [4]의 측정 방법,

[8] 패혈증이 의심되는 환자 또는 패혈증 환자로부터 채취한 시료 중의 sCD14-ST를 측정하는 공정,

sCD14-ST 값이 정상인과 비교하여 높은 값인 경우에 예후 불량이라고 판단하는 공정을 포함하는, 패혈증 예후의 예측 방법,

[9] 상기 판단 공정에서, sCD14-ST 값과 미리 결정된 역치(

)와 비교하는, [8]의 방법,

[10] 상기 판단 공정에서, sCD14-ST 값과, 미리 결정한 각 분위군(分位群)을 상관시키는, [8]의 방법,

[11] 상기 sCD14-ST를 면역학적 측정 방법으로 측정하는, [1] ~ [10] 중 하나의 방법,

[12] 패혈증의 예후를 예측하는 키트이며,

(a) sCD14-ST에 특이적인 항체,

(b) 시료 중의 sCD14-ST의 양과 예후와의 상관(相關)을 나타내는 표준 데이터,

(c) 취급 설명서

를 포함하는, 상기 키트에 관한 것이다.

본 명세서에서 「인간 sCD14-ST」(별칭으로 프레셉신(プレセプシン, 등록 상표)이라고 칭함)으로는, 특허 제 4040666호 명세서에 기재된 「제 1 양태의 가용성 CD14 항원」을 의미하고, 보다 구체적으로는 하기의 1) ~ 3)의 성질을 갖는 가용성 CD14 항원이다.

1) 비환원 조건 하 SDS-PAGE에서는, 분자량 13 ± 2kDa,

2) N 말단 서열에 서열 번호 1의 아미노산 서열을 가지며, 그리고

3) 서열 번호 2에 기재된 16 아미노산 잔기로 구성된 펩티드를 항원으로 제작한 항체에 특이적으로 결합한다.

또한, 본 명세서에서 「sCD14-ST」는 별도로 명시하지 않는 한 인간 sCD14-ST를 의미한다.

서열 번호 1:

Thr Thr Pro Glu Pro Cys Glu Leu Asp Asp Glu

1 5 10

서열 번호 2 :

Arg Val Asp Ala Asp Ala Asp Pro Arg Gln Tyr Ala Asp Thr Val Lys

1 5 10 15

「패혈증」으로는, 감염의 존재에 추가하여, 예를 들면, 전신성 염증 반응 증후군 (SIRS) 진단 항목인 이하 4 항목 중 2 항목 이상을 충족한 상태의 것을 말한다 [Chest 1992; 101 (6) : 1644-1655].

1) 체온 > 38 ℃ 또는 < 36 ℃

2) 심박 수 > 90 회/분

3) 호흡 수 > 20 회/분 또는 PaCO₂> 32 torr

4) 백혈구 수> 12000, < 4000/m³ 또는 미숙형 백혈구> 10 %

상기 감염은, 세균, 진균, 기생충, 또는 바이러스 등을 들 수 있다.

감염의 존재를 확인하는 방법으로서는, 특별히 한정하는 것은 아니지만, 일반적으로 행해지고 있는 혈액 배양 외에 유전자 동정법(同定法) (PCR, RP-PCR 등), 화상 진단, 초음파 진단, 내시경 검사, 생검(生檢) 등을 들 수 있다 [Am J Infect Control 1988; 16:128-140].

「중증 패혈증」은, 적어도 하나의 장기 부전(臟器不全)의 징후(예를 들면 저산소 혈증, 핍뇨증(乏尿症), 대사성 산증(代謝性アシド-シス) 또는 대뇌 기능 이상)에 의해 명확한 장기 저관류(臟器低灌流)를 더욱 수반하는 패혈증을 말한다.

「패혈증성 쇼크」는, 수축기 혈압 < 90 mmHg 또는 혈압 유지를 위한 약제 개입의 필요성에 의해 명확한 저혈압을 더욱 수반하는 「중증 패혈증」을 말한다.

「패혈증의 합병증」으로는, 다장기 기능부전 (多臟器機能不全) 증후군 (MODS), 파종성(播種性) 혈관내 응고 증후군 (DIC), 급성 호흡 촉박(促迫)증후군 (ARDS), 급성 신부전 (AKI) 등을 들 수 있다. 패혈증의 합병증은, 패혈증이 중증 패혈증, 패혈증성 쇼크와 중증도가 높아지면서 병발(倂發)할 가능성이 높아진다. 예를 들어 「MODS (다장기 부전 증후군)」는, 복수의 중요 장기가 동시에 기능 장애를 일으키는 증후군이며, SIRS와 관련하여 식별(同定)된다.

본 명세서에서 사용되는 「패혈증」은, 패혈증의 최종 단계와 관련된 패혈증, 「중증 패혈증」「패혈증성 쇼크」및 상기 「패혈증의 합병증」의 발병을 포함하나, 한정되지 않는 패혈증의 모든 단계를 포함한다.

패혈증은, 항생 물질 및 지지(支持) 요법이 가능함에도 불구하고, 사망증례의 중대한 원인이 되고있다. 최근 연구에서의 추정으로는, 미국에서 매년 751,000 증례의 중증 패혈증이 발생하고 있고, 그의 사망률은 30-50 %이다. 2002년에 미국 집중 치료 의학회(SCCM)와 유럽 집중 치료 의학회(ESICM) 및 ISF(International Sepsis Forum)에 소속하는 집중 치료나 감염증의 전문가가, 중증 패혈증의 사망률을 향후 5 년간에서 25 % 저하시키는 것을 목적으로, "Surviving Sepsis Campaign (SSC)"라고 칭하는 국제적인 프로그램을 시작하여, 그 노력의 일환으로 Surviving Sepsis Campaign guidelines (SSCG)이 작성되어 있다. 이 가이드라인은 2004년에 처음으로 증거에 기반한 심한 패혈증의 진단·치료의 가이드라인으로서 발표되고, 2008년에는 그 개정판이 발표되어 있다 [Crit Care Med. 2008; 36:296-327]. 이러한 가이드라인은, 중증 패혈증에 대한 초기 수액(輸液)요법 (early-goal directed therapy) 등을 기반으로 하는 것이다 [New Engl. J. Med. 2001; 345:1368-1377].

본 가이드라인에 기재된 패혈증의 치료에는, 예를 들어 항균약, 수액 요법, 혈관 수축약, 강심약(强心藥), 스테로이드 요법, 혈액제제(血液製劑), 혈당 콘트롤, 혈액 정화법〔지속적 혈액 여과 (CHF), 지속적인 혈액 여과 투석 (CHDF), 혈액 투석 (HD)], 외과 수술 (농양 배약법(膿瘍ドレナ-ジ), 감염성 괴사 조직 제거) 등을 들 수 있지만, 그 밖에 엔도톡신(エンドトキシン) 흡착 요법 (PMX)이나 γ-글로불린 제제(製劑)도 들 수 있다 [Crit Care Med. 2008; 36:296-327]. 패혈증 치료제는 위에서 예시한 약제에 한정되는 것은 아니지만, 예를 들어, 미즈시마 히로(水島裕) 편집 「오늘의 치료약 해설과 편람 2006」, 남강당(南江堂) (2006년) 등을 참고로 할 수 있다.

본 명세서에서 「예후」는, 패혈증이 의심되고 나서 환자가 어떤 경과를 따라가는 가를 말한다. 예를 들면 예후의 리스크로서, 인공 호흡 치료, ICU (집중치료실)로의 이동, 투석, 합병증의 병발, 사망 등이 있으며, 이들 리스크는, 종래 알려진 마커와 비교하여 식별 가능하다. 특히, 투석 리스크나 사망 리스크는, 정밀도 양호하게 예측할 수 있다.

본 명세서에서 예후의 「예측」은, 패혈증이 의심되고 나서 환자가 어떤 경과를 따라가는 가를 예측하는 것을 말한다. 「예측」하는 방법의 하나로서, 「리스크 층별화」가 있다. 「리스크 층별화」는, 패혈증의 중증도에 따라 분류하여 판별하는 것이다. 중증도에 따른 분류로서는, 고도(高度), 중도(中度), 저도(低度) 등의 병태(病態)의 정도로 나눌수 도 있고, SIRS, 초기 패혈증, 중증 패혈증, 패혈증성 쇼크 등의 병태의 종류로 나눌 수도 있다. 또한 사망 리스크 또는 생존률을 분류할 수도 있다.

본 발명 방법에 의하면, 패혈증의 발병 초기 단계에서, 그의 예후가 좋은 것, 좋지 않은 것(양부;良否), 예를 들어, 예후의 중증도나, 사망 리스크 또는 생존률을 예측할 수 있다. 그 예측의 정확성은, 미국 FDA에서 패혈증의 중증도의 정도를 예측할 수 있는 마커로 승인된 프로칼시토닌과 비교해서, 매우 우수하다.

또한, 본 발명 방법에 의하면, 상기에서 예측된 예후에 맞추어서, 적절한 치료 방침을 책정할 수 있으며, 상기 치료 후에도, 그 예후의 좋음, 좋지 않음(良否), 예를 들면, 예후의 중증도나 사망 리스크 또는 생존율을 예측할 수 있다. 즉, 치료 효과를 예측할 수 있다.

또한, 본 발명 방법에 의하면, 예측된 예후의 중증도에 맞추어서, 패혈증의 합병증을 예측할 수 있다.

또한, 본 발명의 키트는, 본 발명 방법에 이용할 수 있다.

도 1은, 패혈증이 의심되는 환자(146 명)에 대해서, 내원 시에 채취한 혈장 검체의 sCD14-ST 값과 내원 후 30 일 이내의 생존률의 관계를 나타내는 그래프이다. I 군 ~ IV 군에서의 sCD14-ST 값은, 각각, 177 ~ 512 pg/mL (I 군), 524 ~ 927 pg/mL (II 군), 950 ~ 1810 pg/mL (III 군), 1858 pg/mL 이상 (IV 군)이다.
도 2는, 패혈증이 의심되는 환자(146 명)에 대해서, 내원 시에 채취한 혈장 검체의 sCD14-ST 값과 내원 후 30 일 이내의 생존률의 관계를 나타내는 그래프이다. 역치를 920 ng/mL로 하며, 역치보다 낮은 값을 보이는 환자군이 a 군, 역치 또는 그보다 높은 값을 보이는 환자군이 b 군이다.
도 3은, 도 2와 같은 환자에 대해, 내원 시에 채취한 혈장 검체의 프로칼시토닌(PCT) 값과 내원 후 30 일 이내의 생존률의 관계를 나타내는 그래프이다. 역치를 1.86 ng/mL로 하며, 역치보다 낮은 값을 보이는 환자군이 a 군, 역치 또는 그 보다 높은 값을 보이는 환자군이 b 군이다.
도 4는, 패혈증이 의심되는 환자(146 명)에 대해, 내원 시에 채취한 혈장 검체의 sCD14-ST 값과 PCT 값 각각에 대해, 내원 후 30일 이내의 사망률을 ROC 분석으로 비교를 한 결과를 나타내는 그래프이다.
도 5는, 패혈증이 의심되는 환자(146 명)에 대해, 내원시 (a군), 24 시간 후 (b군), 72 시간 후 (c군)에 혈장 검체를 채취하고, 각 채혈 포인트의 sCD14 -ST 값에 대해서 내원 후 30일 이내의 사망률을 ROC 분석에 의해 비교를 한 결과를 나타내는 그래프이다.
도 6은 도 5와 같은 환자에 대해, 내원시 (a군), 24 시간 후 (b군), 72 시간 후 (c군)에 혈장 검체를 채취하고, 각 채혈 포인트의 PCT 값에 대해서 내원 후 30 일 이내의 사망률을 ROC 분석에 의해 비교를 한 결과를 나타내는 그래프이다.

본 발명의 예측 방법 또는 측정 방법(이하, 본 발명 방법이라 칭한다)에서는, 피검 대상자, 특히, 패혈증이 의심되는 환자 또는 패혈증 환자로부터 채취한 시료 중의 sCD14-ST를 측정한다. 이와 같은 피검 대상자에게는, 예를 들어, 항균제 치료를 필요로 하는 감염증, 또는 악화된 감염증 환자도 포함된다.

sCD14-ST의 측정 방법 그것 자체는 공지이며, 단백질의 각종 공지 분석 방법, 예를 들면, 항체를 이용하는 면역학적 분석 방법, 전기 영동(電氣泳動)등의 생화학적 분석 방법으로 실시할 수 있으며, 임상 검사용의 자동 분석기를 사용할 수도 있다. RNA 압타머(アプタマ-) 등, 항체와 유사한 성질을 가지는 물질을 이용하는 분석 방법도 본 발명의 일부이다.

예를 들면, 특허 제 4040666호 명세서에는, 인간 sCD14-ST의 측정 방법, 보다 구체적으로는, 서열 번호 2에 기재된 16 아미노산 잔기로 구성된 펩티드(특허 제 4040666호 명세서에 기재된 S68 펩티드)를 항원으로 제작한 폴리클론(ポリクロ-ナル) 항체(S68 항체), 모노클론 항체(F1146-17-2 항체)와, 항CD14 항원 모노클론 항체 (예를 들면, F1031-8-3 항체, F1106-13-3 항체 등)와의 조합을 이용한 샌드위치 EIA계 [특허 제 4040666호 명세서의 실시예 7-(1)]가 개시되어 있어서, 본 발명 방법에 적용할 수 있다.

또한 후술하는 실시예에 나타난 바와 같이, sCD14-ST의 측정은, 자성 입자를 사용한 화학 발광 효소 면역 측정법에 의해, 자동 화학 발광 면역 측정 장치(PATHFAST; 미츠비시 화학 메디엔스(三菱化學メディエンス) 사)를 사용하여 실시할 수도 있다.

본 발명 방법에서 사용하는 시료로서는, sCD14-ST의 측정이 가능하는 한, 특별히 한정되는 것이 아니며, 예를 들어 혈액 시료(예를 들어, 전혈, 혈장, 혈청), 소변, 림프액, 뇌척수액, 그밖의 다른 체액을 사용할 수 있다.

본 발명 방법에서는, 시료 중의 sCD14-ST 농도의 상승을, 예후 불량의 지표로 한다. 예를 들어, 후술하는 실시예 2에 나타난 바와 같이, sCD14-ST 값이 높게되는 것에 따라서 생존율이 낮아지고, sCD14-ST 값이 높은 값(高値)인 환자군 (IV 군; 1858 pg/mL 이상)에서는 생존율이 35 %였다. 이와 같이, 본 발명 방법에서는, sCD14-ST 값이 높은 값을 보이는 경우에는 패혈증의 예후 상태가 불량이며, 사망 리스크가 높다고 판정할 수 있다. 한편, sCD14-ST 값이 낮은 값을 나타내는 경우에는, 패혈증의 예후 상태가 양호하고, 사망 리스크가 낮은 것으로 판정할 수 있다. 예를 들면, 시료 중의 sCD14-ST 농도가 정상인의 분위수 (예를 들면, 중앙값)보다 높으면, 패혈증의 예후 상태가 불량하다고 판정할 수 있다. 또한 Cox 회귀나 로지스틱(ロジスティック) 회귀 등의 통계학적 수법에 의해 행할 수 있다. 또한, sCD14-ST 값의 정도에 따라, 패혈증의 예후의 중증도를 예측할 수 있다. 판정을 위한 기준은, 사전에 준비해 놓은 「역치」를 사용할 수 있다.

본 발명 방법에 있어서, 예후 예측을 행하기 위한 sCD14-ST 농도의 역치는, 여러 가지 조건, 예를 들면, 성별, 연령 등에 의해 변화할 것으로 예상되지만, 당업자라면, 피검자에 대응하는 적당한 모집단을 적절히 선택하여, 그 집단에서 얻어진 데이터를 통계학적 처리를 실시함에 의해, 판정용 역치를 결정할 수 있다. 상기 모집단으로서는, 정상인군, 패혈증군, 패혈증의 각 병태 정도군, 패혈증의 각 병태의 종류군 등을 선택할 수 있다. 후술하는 실시예 4에서는, 도 4에 나타나는 ROC (receiver operating characteristic) 분석을 실시하여, 1108 pg/mL의 최적 컷오프(カットオフ)값 (감도 = 78 %, 특이도 = 66 %)을 결정하고 있다. 본 발명 방법에서는, 판정용 역치를 결정하고, 시료 중의 sCD14-ST 농도의 측정값과 판정용 역치를 비교함에 의해, 의사의 판단을 필요로 하지 않고, 자동적으로, 패혈증의 예후 예측을 실시하고자 하는 것이 가능하다.

본 발명 방법에 있어서, 검체의 채취 시기는, 패혈증 의심이 생긴 단계, 치료한 후 등이 바람직하지만, 환자가 입원하고부터 경시적으로 채취하여도 좋다. 구체적으로는, 병원이나 구급 병동에 처음 입원했을 때, 집중 치료실에서의 치료 전·치료 후, 치료 후 24 시간, 치료 후 48 시간, 치료 후 72 시간 등을 들 수 있다.

본 발명 방법의 제 1의 양태로서는, 패혈증의 발증의 초기 단계에, 그 예후를 예측할 수 있다. 패혈증의 발증 초기 단계로는, 패혈증의 의심이 생긴 단계도 포함된다.

패혈증 의심이 생긴 단계는, 예를 들어, 종래의 임상 증상이 패혈증의 임상 적 의심을 지지하기에 충분한 단계 전의, 패혈증의 조기(早期) 단계를 말한다. 본 발명의 방법은, 종래의 진단 가이드라인을 사용하여 패혈증으로 인정될 때 보다 전에 패혈증을 검출하기 위해 사용할 수 있기 때문에, 특정의 실시 양태에서, 초기 패혈증에서 환자의 질환 상태는, 패혈증의 징후가 더욱 임상적으로 명확할 때 보다도 과거로 거슬러 올라가 확인된다. 즉, 의사가 임상 증상에 의해, 패혈증의 임상적 의심을 가진 단계라고 말할 수 있다. 구체적으로는, 환자가 병원이나 ICU 등에 옮겨지고부터 72 시간 이내에, 의사가 패혈증의 임상적 의심을 갖는 단계를 말한다. 환자가 패혈증으로 되는 정확한 기구(機構)는, 본 발명의 중요한 실시 양태는 아니다. 본 발명의 방법은, 감염 과정의 기원과는 독립하여 패혈증의 발병을 검출할 수 있고, 패혈증 의심이 생겼을 단계에서 그 예후 예측을 할 수 있기 때문에 매우 유용하다.

본 발명 방법의 제 2 양태로서는, 패혈증의 치료 효과에 기인하는 예후를 예측할 수 있다. 치료 효과에 기인한 예후를 예측하는 것은, 특별히 한정되는 것은 아니지만, 다음과 같은 치료 효과를 모니터링하는 사용법이 생각된다. 예를 들어, 내원 후에 치료하기 전, 치료를 한 후, 치료 효과가 나타나는 시기에 검체를 채취하고, 치료를 했음에도 불구하고 설정한 역치를 초과한 경우에, 치료 효과가 없고 예후 불량이 예측된다. 또한, 내원 시 이미 역치를 초과한 병태(病態)로부터 치료에 의해 역치 보다도 저하한 경우는, 치료 효과가 예후가 좋은 것으로 예측된다.

본 발명 방법의 제 3 양태로서는, 패혈증의 합병증을 발생시킬 지 예측할 수있다. 패혈증의 합병증을 발생시킬 지 예측하는 것은, 특별히 한정되는 것은 아니지만, 설정한 역치를 초과한 경우에 합병증 병발의 가능성이 높게 된다고 예측된다. 또한 설정한 역치 보다도 낮은 값의 경우는, 합병증 병발의 가능성이 낮게 되는 것으로 예측된다.

본 발명의 키트는, 본 발명 방법을 실시하는 데 사용될 수 있으며,

(a) sCD14-ST에 특이적인 항체,

(b) 시료 중의 sCD14-ST의 양과 예후와의 상관을 나타내는 표준 데이터,

(c) 취급 설명서

를 포함한다.

본 발명의 키트에 이용하는 상기 항체는, 모노클론 항체 또는 폴리클론 항체의 어느 것이어도 가능하다. 또한 sCD14-ST로의 특이적 결합능을 유지하는 항체 단편, 예를 들어, Fab, Fab', F(ab')₂, 또는 Fv으로서, 키트에 사용할 수도 있다.

또한, 상기 항체는 그대로의 상태에서 키트에 사용할 수도 있고, 이용하는 면역학적 수법에 기초하여, 그것에 적합한 형태, 예를 들면, 라텍스 응집 면역 측정법을 이용하는 것이면, 라텍스 담체에 고정한 상태에서, 자성 입자 등을 이용한 고감도 측정법을 이용하는 것이면, 자성 입자에 고정한 상태에서, 면역 크로마토그래프(イムノクロマトグラフ)법 등의 기판을 이용하는 방법이라면, 기판에 고정된 상태에서, 표지(標識) 물질(예를 들면, 효소, 형광 물질, 화학 발광 물질, 방사성 동위 원소, 비오틴(ビオチン), 아비딘(アビジン))에 의한 표지의 필요가 있다면, 표지화한 상태에서, 키트에 사용할 수도 있다.

본 발명의 키트에 포함된 상기 표준 데이터는, 시료 중의 sCD14-ST의 양과 예후와의 상관을 나타내는 것인 한, 특별히 한정되는 것은 아니지만, 예를 들어, 판정용 역치, 또는 판정용 역치를 산출하기 위한 오리지날 데이터 또는 통계 처리 데이터 등을 들 수 있다. 상기 표준 데이터는, 상기 취급 설명서 중에 기재되어도 좋고, 따로 데이터 시트로서 첨부하여도 좋다. 또한 첨부된 문서의 형태는, 종이, CD-ROM 등의 전자 매체, 홈페이지 등으로부터 다운로드도 포함된다.

또한, 본 발명의 키트에 포함된 상기 취급 설명서는, 적어도, 시료 중의 sCD14-ST의 양과 패혈증의 예후와의 관계를 언급하는 것이면, 특별히 한정하는 것이 아니며, 상기 언급에 추가하여, 예를 들어, 본 발명의 키트를 사용하는 면역학적 측정의 실시 수순에 관한 설명, 얻어진 측정값에 따라 예후를 예측하는 수순에 대한 설명, 키트 자체의 보존·취급 등에 대한 주의 사항 등을 포함할 수 있다.

[실시예]

이하, 실시예에 의해 본 발명을 구체적으로 설명하지만, 이들은 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

패혈증의 전향적 연구로서 1 시설의 임상 현장에서 일정 기간, 등록된 구급 환자를 대상으로 하였다. 또한, 이 시험은 윤리위원회의 승인을 얻어 실행했다. 시험에 등록된 환자는, 중증 감염증의 징후가 인정되어 구급 병원에 입원한 18세 이상의 남녀로, 이하 4 항목 중 2 항목 이상을 충족하고, 명백한 패혈증의 징후 또는 패혈증이 강하게 의심되는 경우를 대상으로 했다.

1) 체온 > 38 ℃ 또는 < 36 ℃

2) 심박수 > 90 회/분

3) 호흡 수 > 20 회/분 또는 PaCO₂ > 4.3kPa

4) 백혈구 수 > 12000, < 4000/m³ 또는 미숙형 백혈구 > 10 %

시험 등록시의 감염의 유무는, 혈액 배양 결과를 필수로 하지 않고, 의사가 환자의 임상 소견이나 증상을 보고 판단을 했다. 또한, 시험 등록 후의 혈액 배양 결과에 따라, 패혈증이 아닌 SIRS인 것으로 판명된 환자는 대상에서 제외했다.

sCD14-ST의 측정에 사용되는 샘플은, 환자로부터 입원 직후, 24 시간 후, 72 시간 후에 EDTA 혈장을 채취하여, 측정할때 까지 -70 ℃에서 보존하였다. 입원 직후는, 입원하고나서 6 시간 이내의 것을 나타낸다.

또한, 입원 후의 중증도의 판정은, "Acute Physiology And Chronic Health Score II"(APACHEII) "Glasgow Coma Scale"(GCS), "Sepsis-related Organ Failure Assessment Score"(SOFA), "Mortality in Emergency Department Sepsis "(MEDS)를 이용하였다.

예후의 판정은, 구급 병원에 입원하고나서 30일 이내에 사망한 날, 또는 집중치료실(ICU)로 이동, 인공 호흡, 신장 대체 요법 (예, 투석) 중 어느 하나의 상태로 이행한 날로 하였다. 30일 이내에 퇴원한 경우에는, 30 일 후에 전화로 생사 상태를 확인했다.

《실시예 1: sCD14-ST의 측정 방법》

sCD14-ST의 측정은, 특허 제 4040666호 명세서의 실시예 7-(1)을 개변하여 실시했다. 즉, 알칼리 포스파타제(ALP) 표지된 폴리클론 항체(S68 항체)와, 자성 입자(JSR사 제품)에 고정화한 모노클론 항체(F1031-8-3 항체)를 사용하여, 자동 화학 발광 효소 면역 측정 장치인 PATHFAST (미츠비시화학 메디엔스사 제품)로 측정했다. 알칼리 포스파타제(ALP) 표지된 폴리클론 항체(S68 항체)는, 상기 폴리클론 항체(S68 항체)의 Fab' 분획을 조제하여, 말레이미드(マレイミド) 법에 의해 ALP와 결합시켜 제작하였다. 발광 기질(基質)은 CDP-star (어플라이드 바이오시스템사 제품)를 사용했다.

측정은 이하의 수순에 따라서 실시했다. 먼저, 검체를 자성 입자 고정화 항체와 ALP 표지 항체를 반응시켜, 검체 중의 sCD14-ST와 상기 2 개의 항체로 복합체를 형성시킨 후, 이 복합체를 자력체(磁力體)로 수집하여, 결합하지 않은 ALP 표지 항체를 제외했다. 발광 기질을 추가하여, 발광량을 sCD14-ST 양으로 검출했다.

《실시예 2: sCD14-ST 값과 생존률과의 관계》

패혈증이 의심된 환자 146 명을 대상으로, 내원 시에 채취한 혈장 검체의 sCD14-ST 값과 내원 후 30 일 이내에 생존률의 관계를 도 1에 나타낸다. sCD14-ST 측정은 실시예 1에 따라서 실시했다. 도 1에서, 가로축은 환자 내원 후의 경과일 수를 나타낸다. 세로축은 생존률(낮을수록 사망률이 높다)을 나타낸다.

sCD14-ST 값을 4 단계 [177 ~ 512 pg/mL (도 1에서 I 군), 524 ~ 927 pg/mL (II 군), 950 ~ 1810 pg/mL (III 군), 1858 pg/mL 이상 (IV 군)]로 분류하여 분석 한 바, 값이 높을수록 생존율이 낮아지고, 내원 시 1858 pg/mL 이상의 sCD14-ST 값을 나타낸 환자군 IV에서는 생존율 35 %였다 (III 군과 IV 군과 간의 유의성: P < 0.0005). 이상의 결과에서, sCD14-ST 값은, 패혈증 환자의 사망 리스크를 예측할 수 있음이 판명됐다.

《실시예 3: 프로칼시토닌 (PCT)과 sCD14-ST에 의한 생존률의 비교 평가》

패혈증이 의심된 환자 146 명 (실시예 2와 동일)을 대상으로, 내원 시에 채취한 혈장 검체의 sCD14-ST 값, PCT 값 각각에 대해 내원 후 30 일 이내에 생존률의 관계를 도 2 (sCD14-ST) 및 도 3 (PCT)에 나타낸다. sCD14-ST 측정은, 실시예 1에 따라서 실시했다. PCT 측정은, Kryptor automated analyzer (BRAHMS 사, 독일) 전용 측정 시약을 사용하였다. sCD14-ST는 920 ng/mL을 역치, PCT는 1.86 ng/mL을 역치로 한 경우의 생존률을 보여주었다. 역치는, 각각 시험에 등록된 환자의 내원시의 측정값의 중앙값을 사용하였다. 역치 보다도 낮은 값을 보이는 환자군을 「a」군으로 하고, 역치 또는 그보다 높은 값을 보이는 환자군을 「b」군으로 했다. 가로축은 환자 내원 후의 경과일 수를 나타낸다. 세로축은 생존률 (낮을수록 사망률이 높다)을 나타낸다. sCD14-ST는, PCT에 대해 정밀도가 양호하게 생존율을 평가할 수 있고, 또한 사망 리스크를 예측할 수 있음이 판명됐다.

《실시예 4: PCT 및 sCD14-ST의 ROC 분석에 의한 비교 평가》

패혈증이 의심된 환자 146 명 (실시예 2와 동일)를 대상으로, 내원 시에 채취 한 혈장 검체의 sCD14-ST 값과 PCT 값 각각에 대하여 내원 후 30 일 이내의 사망률을 ROC 분석으로 비교했다. sCD14-ST 측정은, 실시예 1에 따라서 실시했다. PCT 측정은, Kryptor automated analyzer (BRAHMS 사, 독일) 전용 측정 시약을 사용하였다. 도 4에서 가로축은 「100 - (특이도)」이며, 세로축은 「감도」이다.

sCD14-ST의 AUC(0.779)은, PCT의 AUC (0.521)에 대해 컸다. PCT는, 미국 FDA에서 패혈증의 중증도의 정도를 예측할 수 있는 마커로 승인되어 있지만, 이 결과로부터 sCD14-ST 쪽이, 높은 정밀도로 예측할 수 있는 것으로 확인되었다.

《실시예 5: 패혈증 환자 내원 후 72 시간 이내의 각 채혈 포인트에서 PCT와 sCD14-ST 값과 생존률 비교 평가》

패혈증이 의심되는 환자를 대상으로, 내원시, 24 시간 후, 72 시간 후에 혈장 검체를 채취하고, 각 채혈 포인트의 sCD14-ST 값, PCT 값에 대해서 내원 후 30 일 이내의 사망률을 ROC 분석에 의해 비교를 실시했다. 또한, 모든 채혈 포인트에서 데이터가 얻어진 환자 (sCD14-ST 값은 68 명을, PCT 값은 32 명)을 대상으로 했다. sCD14-ST 측정은, 실시예 1에 따라서 실시했다. PCT 측정은, Kryptor automated analyzer (BRAHMS 사, 독일) 전용 측정 시약을 사용하였다. 결과를 도 5 (sCD14-ST) 및 도 6 (PCT)에 나타낸다. 내원 시의 AUC를 꺾임선 a, 24 시간 후의 AUC를 꺾임선 b, 72 시간 후의 AUC를 꺾임선 c로 나타낸다. sCD14-ST는, 72 시간 이내의 어느 포인트에서 측정하여도, 안정하고 정밀도가 양호하여, 내원 후 30 일 이내의 사망 리스크를 예측할 수 있음이 표시되었다.

《실시예 6: 패혈증 환자 내원 시에 있어서 PC와 sCD14-ST의 값과 예후의 비교 평가》

실시예 2로부터 5에 앞서서 행한 소규모 임상 시험에서, 패혈증이 의심된 환자 68 명을 대상으로, 내원시에 혈장 검체를 채취하고, sCD14-ST 값, PCT 값에 대해서 내원 후 30 일 이내의 상태 (인공 호흡 치료, ICU (집중치료실)로의 이동, 투석, 사망)를 ROC 분석에 의해 비교를 했다. sCD14-ST 측정은 실시예 1에 따라서 실시했다. PCT 측정은, Kryptor automated analyzer (BRAHMS 사, 독일) 전용 측정 시약을 사용하였다. ROC 분석에 의한 AUC 값을 표 1에 나타낸다. sCD14-ST는, 어느 지표에서도 PCT 보다도 그것의 리스크가 높은 것을 예측할 수 있으며, 또한, 투석이나 사망에 있어서는, 정밀도가 매우 양호하게 예측할 수 있음이 표시되었다.

본 발명은, 패혈증이 의심되는 환자의 예후 (특히는 사망 리스크)의 예측에 이용할 수 있다.

이상, 본 발명을 특정 양태에 따라 설명했지만, 당업자에게 자명한 변형이나 개량은 본 발명의 범위에 포함된다.

<110> Mitsubishi Chemical Medience Corporation Mochida Pharmaceutical Co., Ltd. <120> Method for prediction of prognosis of sepsis <130> PI10444 <150> JP 2011003016 <151> 2011-01-11 <160> 2 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Thr Thr Pro Glu Pro Cys Glu Leu Asp Asp Glu 1 5 10 <210> 2 <211> 16 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Arg Val Asp Ala Asp Ala Asp Pro Arg Gln Tyr Ala Asp Thr Val Lys 1 5 10 15

Claims

시료 중의 sCD14-ST를 측정하는 것을 특징으로 하는, 패혈증 예후의 예측 방법.
청구항 1에 있어서, 패혈증 의심이 생겨서부터 72 시간 이내에 sCD14-ST를 측정하는, 예측 방법.
청구항 1에 있어서, 예후 예측이, 패혈증에 있어서의 합병증 병발의 예측인, 예측 방법.
패혈증의 예후를 예측하기 위한, 시료 중의 sCD14-ST를 측정하는 방법.
청구항 4에 있어서, 패혈증 의심이 생겨서부터 72 시간 이내에 sCD14-ST를 측정하는, 측정 방법.
청구항 4에 있어서, 패혈증 치료를 실시한 후, sCD14-ST를 측정하는, 측정 방법.
청구항 4에 있어서, 예후 예측이, 패혈증에 있어서의 합병증 병발의 예측인, 측정 방법.
패혈증이 의심되는 환자 또는 패혈증 환자로부터 채취한 시료 중의 sCD14-ST를 측정하는 공정, 및
sCD14-ST 값이 정상인과 비교하여 높은 값인 경우에 예후 불량이라고 판단하는 공정을 포함하는, 패혈증 예후의 예측 방법.
청구항 8에 있어서, 상기 판단 공정에서, sCD14-ST 값과 미리 결정된 역치를 비교하는, 방법.
청구항 8에 있어서, 상기 판단 공정에서 sCD14-ST 값과 미리 결정한 각 분위군을 상관시키는, 방법.
청구항 1 내지 11의 어느 한 항에 있어서, 상기 sCD14-ST를 면역학적 측정 방법으로 측정하는, 방법.
패혈증의 예후를 예측하는 키트이며,
(a) sCD14-ST에 특이적인 항체,
(b) 시료 중의 sCD14-ST의 양과 예후와의 상관을 나타내는 표준 데이터,
(c) 취급 설명서를 포함하는, 상기 키트.