CN105646462B - 芸香宁碱衍生物、其制备方法及应用 - Google Patents

Abstract

芸香宁碱衍生物、其制备方法及应用，该芸香宁碱衍生物的化学结构式如下：其中，式（I）中R₁、R₂分别为C_1‑6的烷基、C_3‑6的环烷基、苯基、苄基、芳香杂环或苄基杂环；NR₁R₂也可以是或，A为CH₂、O、S或NH；式（II）中x=1~3，R₃为OH或NR₄R₅；R₄、R₅分别为H、C_1‑6的烷基、C_3‑6的环烷基或(CH₂)_yNH₂，y=1~4；NR₄R₅也可以或，A为CH₂、O、S或NH；式（III）中Y=，，，，，，，或

Description

芸香宁碱衍生物、其制备方法及应用

技术领域

本发明属于药物与化工领域，具体涉及一种芸香宁碱衍生物、其制备方法及应用。

背景技术

芸香宁碱(式1)属于2-苯基喹啉类化合物，广泛存在于芸香科植物中，具有广泛的生理活性，研究表明，芸香宁碱能够抑制体外肿瘤细胞的增值、解除平滑肌痊挛、抗炎症作用及抗组织胺作用等。

式1芸香宁碱的化学结构式

1957年Chatterjee等人在芸香科植物臭草(Ruta graveolens)中发现了芸香宁碱，之后也有人从Lnasia amara和Ruta chalepensis等植物中提取分离得到。至此之后，很多研究人员围绕芸香宁碱的2-苯基喹啉骨架展开了合成研究。例如1991年，Strekowski等人以邻三氟甲基苯胺和苯乙酮为起始原料，首先在苯或者甲苯中回流10小时得到缩合的席夫碱，然后在低温的乙醚溶剂中与丁基锂反应得到2-苯基喹啉结构的目标产物。此法仅用两步反应，产率较高，但是要用到苯和丁基锂，危险系数较大。后来Andersen等人用苯甲酰乙酸乙酯和带有不同取代基的苯胺在多聚磷酸催化下关环，然后再用三氯氧磷进行氯代处理得到4-氯-2-苯基喹啉。此法用到多聚磷酸，后处理较麻烦，而且产率不高，需要进行柱层析分离提纯。也有人直接采用4-氯喹啉在丁基锂作用下与各种苯基的亲电试剂反应得到目标产物，但极度易燃的丁基锂，危险系数较大，而且原料市场上不易购买。因此开发新的合成路线很有必要。

老年痴呆是一种在老人群体中十分常见的疾病，目前临床上治疗老年痴呆的药物主要胆碱脂酶抑制剂。他克林(Tacrine)是第一个FDA批准用于治疗老年痴呆的胆碱脂酶抑制剂，它是一种喹啉类衍生物，与芸香宁碱具有相同的喹啉结构。肿瘤是引起人类死亡的第一位原因，临床上治疗肿瘤的主要方法是化疗，其中有一类药物可以抑制肿瘤新生血管的生成，这类抑制剂的结构特征为：具有两个芳香基团，其中一个芳香基团上有一个或者多个可以形成氢键的受体，两个芳香基团有一个键连接。此特征与芸香宁碱的结构特征相似。然而芸香宁碱衍生物的合成及活性评价基本没有文献报道，特别是芸香宁碱衍生物作为胆碱酯酶抑制剂及抗肿瘤活性则无报道。

发明内容

基于以上研究背景，本申请以芸香宁碱为母核，在其喹啉环的4-位，用生物电子等排原理，将甲氧基替换为其他基团，并增加侧链，增加氢键供体与受体，设计合成了一系列芸香宁碱衍生物并对其生物活性进行了评价。

本发明的化合物存在两个主要单元：2-二氧亚甲基苯基-喹啉部分和4-位取代基部分，它们可以通过伯胺或仲胺相连，也可以是两分子的2-二氧亚甲基苯基-喹啉与二胺相连。通过调整连接基团的长度及类型，使得化合物达到最优的生理活性。

本发明涉及式(I)、(II)和(III)所示的芸香宁碱衍生物或其互变异构体，药用盐，前药或溶剂化物，还包括药用载体、辅剂或赋形剂。

其中，式(I)中R₁、R₂分别为C_1-6的烷基、C_3-6的环烷基、苯基、苄基、芳香杂环或苄基杂环；NR₁R₂也可以是或A为CH₂、O、S或NH；式(II)中x＝1～3，R₃为OH或NR₄R₅；R₄、R₅分别为H、C_1-6的烷基、C_3-6的环烷基或(CH₂)_yNH₂，y＝1～4；NR₄R₅也可以或A为CH₂、O、S或NH；式(III)中 或-OCH₂CH₂O-，m＝0～4,n＝0～4；m、n、y和x均取整数。

上文所述“药用盐，前药，溶剂化物”是指任何药用盐，脂，溶剂化物，或经施用于接受者后能够提供直接或间接本文所述化合物的其他化合物。例如，本发明提供的化合物的药用盐可以通过常规方法由母体化合物制备，该母体化合物含有碱的部分。通常该盐，例如通过将游离碱形式的这些化合物与化学计算量的适当酸在水中或在有机溶剂中或者在两者的混合物中制备。通常，非水性介质如乙醇，乙酸乙酯，乙醚乙腈或异丙醇是优选的。酸加成盐的实例包括无机酸加成盐例如，盐酸盐，氢溴酸盐，氢碘酸盐，硫酸盐，硝酸盐，和有机酸加成盐，例如乙酸盐，马来酸盐，富马酸盐，柠檬酸盐，草酸盐，琥珀酸盐，酒石酸盐，苹果酸盐，扁桃酸盐和甲苯磺酸盐。优选的杂合物或前药是相对母体物质，当将这些化合物使用于患者时提高本发明化合物的生物利用度(例如通过使口服给药的化合物更容易被吸收到血液中)或增强母体化合物向生物区室(例如脑或淋巴系统)的传递等。式(I)、(II)或(III)化合物前药的任何化合物属于本发明的范围内，术语“前药”以其最广泛的意义使用并且包括在体内转化为本发明化合物的那些杂合物。这些杂合物对于本领域技术人员是显而易见的，并且根据分子中存在的官能团，包括不限于本发明化合物的下列杂合物：脂，氨基酸酯，氨基甲酸酯和酰胺。

上文所述药学上可接受的“载体、辅剂或赋形剂”是指药学领域常规的药物载体，例如：稀释剂，赋形剂如水等，填充剂如淀粉蔗糖等；黏合剂如纤维素衍生物、明胶等；另外还可以以组合物中加入其他辅料如香味剂、甜味剂等。

本发明的化合物可以作为有利化合物或作为溶剂化物的晶体形式。溶剂化的方法是本领域内公知的，适当的溶剂化物是药用溶剂化物。在具体实施方案中，溶剂化物是水合物。

以下为制备本发明化合物的方法，包括以下步骤：

具体制备方法是：

(1)将胡椒酸与邻氨基苯乙酮溶解在二氯甲烷中，加入DIC(N,N-二异丙基碳二亚胺)、DMAP(4-二甲氨基吡啶)，搅拌反应后，蒸干溶剂，三氯甲烷稀释，水洗，干燥，浓缩纯化得到中间体

(2)将上述所得中间体溶于叔丁醇中，加入叔丁醇，加热反应，蒸干溶剂，加入冰水，用盐酸溶液调pH为5-7，析出沉淀，过滤，干燥纯化得到中间体

(3)将上述所得的中间体与POCl₃混合，加热反应，待反应完成后，加入冰的饱和NaHCO₃溶液，然后加入氨水调pH值到8-12，滤除沉淀，过滤干燥，纯化得到中间体

(4)将上述所得中间体，无水碳酸钾，HNR₁R₂或或加入到乙腈中，加热搅拌待反应完成后，蒸除溶剂，三氯甲烷稀释，水洗，干燥，浓缩纯化得到最终产物。

本发明的优选化合物的结构是：式(I)NR₁R₂＝吡咯烷、哌啶或二(吡啶-2-亚甲基)胺；式(II)R₃＝OH、NH₂、哌啶或吗啉；式(III)或时的结构活性优于其他结构活性。

其中步骤一、二、三所得到的中间体的纯化优选硅胶柱层析分离，所用的洗脱剂为石油醚(或正己烷)，氯仿、二氯甲烷或乙酸乙酯的任何比例的混合液。

其中式(I)、(II)和(III)化合物的纯化优选硅胶柱层析分离，所用洗脱剂为氯仿(或二氯甲烷)、甲醇、氨水的任何比例的混合液。

如果需要，可以通过常规方法如结晶法或色谱法纯化反应产物。用于制备本发明化合物的上述方法产生立体异构体的混合物时，这些异构体可以通过常规技术和制备色谱法分离。如果存在手性中心，化合物可能以外消旋的形式制备，或者可以通过对应特异性合成或通过拆分来制备单个的对映异构体。一种优选的药用形式是结晶形式，包括药物组合物中的这种形式。如果是盐和溶剂化物，另外的离子或溶剂部分也应当是非毒性的。

本发明另外提供以式(I)、(II)和(III)化合物为活性成分的药物组合物，其包含本发明的化合物或其互变异构体、药用盐类、前药或溶剂化物，以及药用载体，辅剂或赋形剂。

本发明的化合物可以与其他药物一起制备成组合物，例如制备成复方药物。

由上述结构式(I)、(II)和(III)表示的化合物或其互变异构体、药用盐类、前药或溶剂化物显示优越的胆碱酯酶及肿瘤细胞增殖抑制作用。因此本发明另一方面涉及它们以及以它们为活性成分的药物组合物，在治疗、改善或预防老年痴呆及肿瘤等方面的应用。

本发明的芸香宁碱衍生物或其互变异构体、药用盐类、前药或溶剂化物可以制备成片剂、丸剂、胶囊、注射剂、悬浮剂或乳剂等。

具体实施方式

以下实施例仅用以对本发明技术方案的进一步举例说明，而不是对本发明保护范围的限定。

实施例一：

2-(苯并[d][1,3]二氧-5-基)-4-(吡咯烷-1-基)喹啉。

具体制备步骤如下：

(1)将10mmol胡椒酸、10mmol邻氨基苯乙酮、12mmol的DIC(N,N-二异丙基碳二亚胺)和0.5mmol的DMAP(4-二甲氨基吡啶)加入到50mL二氯甲烷或三氯甲烷中，搅拌反应24小时后，水洗三次，取有机层，无水硫酸钠干燥，蒸干溶剂，硅胶柱层析分离。洗脱剂为石油醚/乙酸乙酯(体积比)＝8:1，得中间体

(2)将步骤(1)所得中间体10mmol溶于50mL叔丁醇中，加入60mmol叔丁醇钾，加热回流反应12小时，反应结束后蒸干溶剂，加入100mL冰水混合物，用体积分数为10％的稀盐酸溶液调pH为5-7，析出沉淀，过滤，干燥后重结晶，溶剂石油醚/二氯甲烷(体积比)＝1:1或石油醚/三氯甲烷(体积比)＝1:1，得到中间体

(3)将步骤(2)所得的中间体10mmol与30mL三氯氧磷混合，加热回流反应4小时，待反应完成后，蒸出多余的三氯氧磷，缓慢加入0℃的饱和NaHCO₃水溶液，然后加入浓氨水缓慢调pH值到8-12，过滤出沉淀，干燥，硅胶柱层析，洗脱剂为体积比＝8:1的下述组合的溶剂的混合物：石油醚/氯仿、石油醚/二氯甲烷、石油醚/乙酸乙酯，得中间体

(4)将步骤(3)所得中间体1mmol，无水碳酸钾5mmol，吡咯烷1mmol加入到10mL乙腈中，加热回流4小时后，蒸除溶剂，三氯甲烷稀释，水洗，取有机层干燥，浓缩柱层析，洗脱剂为氯仿/甲醇(体积比)＝20:1或二氯甲烷/甲醇(体积比)＝20:1，得到目标化合物。

产率：80％，¹H NMR(300MHz,Chloroform-d)δ8.15(d,J＝8.6Hz,1H),8.08(d,J＝8.5Hz,1H),7.63-7.54(m,3H),7.28(ddd,J＝8.1,6.7,1.8Hz,1H),6.90(d,J＝8.1Hz,1H),6.76(s,1H),5.99(s,2H),3.78-3.57(m,5H),2.14-1.87(m,4H).ESI-MS m/z:319.2[M+H]⁺.

实施例二：

2-(苯并[d][1,3]二氧-5-基)-4-(哌啶-1-基)喹啉。

制备方法同实施例一，所不同的是步骤(4)中用哌啶代替吡咯烷，最终得淡黄色固体。

产率：75％，¹H NMR(300MHz,Chloroform-d)δ8.10(d,J＝8.4Hz,1H),7.99(d,J＝8.3Hz,1H),7.70(d,J＝1.7Hz,1H),7.63(td,J＝8.5,1.5Hz,3H),7.46-7.37(m,1H),7.19(s,1H),6.93(d,J＝8.1Hz,1H),6.01(s,2H),3.27-3.12(m,5H),1.85(p,J＝5.9Hz,6H),1.74-1.62(m,4H).ESI-MS m/z:333.2[M+H]⁺.

实施例三：

2-(苯并[d][1,3]二氧-5-基)-N，N-二(吡啶-2-亚甲基)喹啉-4-胺。

制备方法同实施例一，所不同的是步骤(4)中用二(吡啶-2-亚甲基)胺代替吡咯烷，最终得淡黄色固体。

产率：60％，¹H NMR(300MHz,Chloroform-d)δ8.62(d,J＝4.3Hz,2H),8.34(d,J＝8.4Hz,1H),7.70-7.59(m,3H),7.51(d,J＝1.5Hz,1H),7.46(d,J＝7.8Hz,3H),7.24(s,1H),7.22-7.16(m,2H),6.88(d,J＝8.2Hz,1H),6.01(s,2H),4.82(s,4H).ESI-MS m/z:447.3[M+H]⁺.

实施例四：

3-(2-(苯并[d][1,3]二氧-5-基)-喹啉-4-胺基)-1-丙醇。

制备方法同实施例一，所不同的是步骤(4)中用丙醇胺代替吡咯烷，最终得淡黄色油状液体。

产率：75％，¹H NMR(300MHz,Methanol-d₄)δ8.00(dd,J＝8.5,1.3Hz,1H),7.87(dd,J＝8.5,1.2Hz,1H),7.61(ddd,J＝8.4,6.8,1.4Hz,1H),7.46-7.32(m,3H),6.95-6.83(m,1H),6.75(s,1H),5.99(s,2H),3.75(t,J＝6.0Hz,2H),3.49(t,J＝7.0Hz,2H),1.98(p,J＝6.4Hz,2H).ESI-MS m/z:323.1[M+H]⁺.

实施例五：

2-(苯并[d][1,3]二氧-5-基)-N-((3-哌啶-1-基)丙基)喹啉-4-胺。

制备方法同实施例一，所不同的是步骤(4)中用1-(3-氨基丙基)哌啶代替吡咯烷，最终得土黄色固体。

产率：70％，¹H NMR(300MHz,Methanol-d₄)δ8.27-8.01(m,1H),7.91(d,J＝8.5Hz,1H),7.71(ddd,J＝8.4,6.9,1.3Hz,1H),7.56-7.40(m,3H),6.98(d,J＝8.0Hz,1H),6.81(s,1H),6.06(s,2H),3.56(t,J＝6.8Hz,2H),2.76(q,J＝7.4Hz,6H),2.07(p,J＝7.0Hz,2H),1.71(p,J＝5.6Hz,4H),1.57(d,J＝6.3Hz,2H).¹³C NMR(75MHz,MeOD)δ157.07,152.40,149.24,148.24,145.59,132.79,130.27,125.77,124.49,122.02,121.04,117.50,108.01,107.70,101.62,95.99,56.34,53.92,41.11,24.65,24.12,23.17.ESI-MS m/z:390.2[M+H]⁺.

实施例六：

2-(苯并[d][1,3]二氧-5-基)-N-(3-吗啉丙基)喹啉-4-胺。

制备方法同实施例一，所不同的是步骤(4)中用1-(3-吗啉)丙胺代替吡咯烷，最终得淡黄色固体。

产率：66％，¹H NMR(300MHz,Chloroform-d)δ8.19(d,J＝8.0Hz,1H),7.97(d,J＝8.2Hz,1H),7.60(d,J＝8.2Hz,4H),7.55(s,2H),7.40(s,1H),6.86(d,J＝7.8Hz,1H),6.64(s,1H),5.98(s,2H),3.83(s,4H),3.52(s,0H),2.60(d,J＝17.8Hz,7H),1.99(s,2H).ESI-MS m/z:392.2[M+H]⁺.

实施例七：

N¹-(2-(苯并[d][1,3]二氧-5-基)喹啉-4-基)丁基-1,4丁二胺。

制备方法同实施例一，所不同的是步骤(4)中用5mmol的1,4丁二胺代替1mol的吡咯烷，最终得淡黄色油状液体。

产率：56％，¹H NMR(300MHz,Chloroform-d)δ7.75(d,J＝8.4Hz,1H),7.68(t,J＝7.6Hz,1H),7.58(d,J＝8.4Hz,1H),7.41(t,J＝7.6Hz,1H),7.06(d,J＝8.2Hz,1H),6.90(s,1H),6.72(d,J＝8.2Hz,1H),6.34(s,1H),5.87(s,2H),3.33(s,2H),2.92(s,2H).ESI-MS m/z:336.2[M+H]⁺.

实施例八：

N¹-(3-氨丙基)-N⁴-(2-(苯并[d][1,3]二氧-5-基)喹啉-4-基)丁基-1,4丁二胺。

制备方法同实施例一，所不同的是步骤(4)中用5mmol的N¹-(3-氨丙基)丁基-1,4丁二胺代替1mol的吡咯烷，最终得淡黄色油状液体。

产率：48％，¹H NMR(300MHz,Chloroform-d)δ7.88(t,J＝7.8Hz,1H),7.79(d,J＝8.4Hz,1H),7.61(t,J＝7.7Hz,1H),7.15(dd,J＝8.3,1.9Hz,1H),6.98(d,J＝1.9Hz,1H),6.70(d,J＝8.2Hz,1H),6.42(s,0H),5.95(s,1H),3.61(t,J＝7.2Hz,1H),3.36(t,J＝7.9Hz,2H),3.32-3.25(m,1H),2.36-2.17(m,2H).ESI-MS m/z:393.2[M+H]⁺.

实施例九：

N¹,N⁴-二(2-(苯并[d][1,3]二氧-5-基)喹啉-4-基)丁基-1,4丁二胺。

制备方法同实施例一，所不同的是步骤(4)中用0.5mmol的1,4丁二胺代替1mol吡咯烷，最终得淡黄色油状液体。

产率：67％，¹H NMR(300MHz,Methanol-d₄)δ8.11(d,J＝8.5Hz,2H),7.83(d,J＝8.5Hz,2H),7.76(d,J＝7.3Hz,2H),7.49-7.27(m,6H),6.97(d,J＝8.0Hz,2H),6.81(s,2H),6.10(s,4H),3.68(s,4H),2.05(s,4H).ESI-MS m/z:583.2[M+H]⁺.

实施例十：

N¹,N⁴-(哌嗪-1,4-二基双(乙-2,1-二基))双(2-(苯并[d][1,3]二氧-5-基)喹啉-4-胺)。

制备方法同实施例一，所不同的是步骤(4)中用0.5mmol的2,2’-(哌嗪-1,4二基)双(乙基-1-胺)代替1mol的吡咯烷，最终得淡黄色油状液体。

产率：62％，¹H NMR(300MHz,Methanol-d₄)δ8.10(d,J＝8.6Hz,2H),7.84(d,J＝8.6Hz,2H),7.76(d,J＝7.2Hz,2H),7.49-7.27(m,6H),6.97(d,J＝8.1Hz,2H),6.81(s,2H),6.10(s,4H),3.68(m,8H),3.60(m,4H),3.35(m,4H).ESI-MS m/z:667.3[M+H]⁺.

试验例一:生物学评估

乙酰胆碱脂酶(AChE)抑制实验

选择实施例一～十制备的化合物，采用Ellman(Ellman,GL,Courtney,KD,et al,Biochem.Pharmacol.1961,7,88-95)报道的比色法在37℃评估AChE抑制活性。测试溶液由以下各项组成：0.1M磷酸缓冲液pH 8.0，1mM 5,5-二硫代双(2-硝基苯甲酸)(DTNB,Ellman’s试剂)，0.01mg/mL的AChE，和1mM乙酰硫代胆碱作为酶促反应的底物。检测时，将待检测的化合物加入由0.1M磷酸缓冲液pH 8.0、1mM的5,5-二硫代双(2-硝基苯甲酸)(DTNB，Ellman’s试剂)和0.01mg/mL AChE组成的混合液中，使待检测的化合物与AChE在37℃下预孵育5分钟。该时间后，加入1mM硫代乙酰胆碱作为底物。用多功能酶标仪记录在412nm的吸光度变化2分钟，比较反应速率，计算由于测试化合物的存在导致的百分比抑制。用至少三次的独立测量值计算反应速率，将IC₅₀定义为相对于没有抑制剂下将酶活性降低50％的每种化合物的浓度。结果在表1中显示。

试验例二:生物学评估

丁酰胆碱脂酶(BChE)抑制实验

选择实施例一～十制备的化合物，采用Ellman报道的比色法在37℃评估BChE抑制活性。测试溶液由以下各项组成：0.1M磷酸缓冲液pH 8.0，1mM的DTNB，0.02mg/mL的BChE，和1mM丁酰硫代胆碱作为酶促反应的底物。检测时，将待检测的化合物加入由0.1M磷酸缓冲液pH 8.0、1mM的5,5-二硫代双(2-硝基苯甲酸)(DTNB，Ellman’s试剂)和0.02mg/mL BChE组成的混合液中，使待检测的化合物与BChE在37℃下预孵育5分钟。该时间后，加入1mM丁酰硫代胆碱作为底物。用多功能酶标仪记录在412nm的吸光度变化2分钟，比较反应速率，计算由于测试化合物的存在导致的百分比抑制。用至少三次的独立测量值计算反应速率，将IC₅₀定义为相对于没有抑制剂下将酶活性降低50％的每种化合物的浓度。结果在表1中显示。

表1、各实施化合物对AChE和BChE的抑制活性

由上表可以看出，实施例一～十均具有比对照药物卡巴拉汀强的AChE抑制作用，而且实施例一～十具有高于或与卡巴拉汀相当的BChE抑制作用。

试验例三:生物学评估

体外肝毒性测试

取肝癌细胞株HepG2和正常肝细胞株QSG-7701。以含10％(体积比)胎牛血清的RPMI-1640完全培养基在37℃、湿度饱和，含体积分数为5％CO₂的二氧化碳培养箱中培养，2天传代一次。取对数生长期细胞，以每孔6000个细胞铺板入96孔板，每孔90μL。培养24小时后，每孔加入10μL不同浓度的待测样品。使样品终浓度为：1、10、50μM，对照组(阿霉素)及空白用生理盐水代替，继续培养48小时。在对照组和样品组中加入浓度为1mg/mL的MTT，50mL/孔，继续培养4小时。甩去上清，每孔加入100mL二甲基亚砜，振荡20分钟，用全波长酶标仪在570nm下测定各孔的吸光度。计算细胞抑制率：细胞抑制率＝(对照组吸光值-实验组吸光值/对照组吸光值-空白组吸光值)×100％，每组实验重复3次。结果表明，实施例一～十在50μM浓度下对肝癌细胞株HepG2的抑制率均高于70％，优于对照药物阿霉素(63％)，而对正常肝细胞株QSG-7701的抑制率均小于30％，低于对照药物阿霉素(56％)，表明实施例一～十具有体外抗肿瘤活性，对正常细胞毒性较小。

Claims (4)

1.芸香宁碱衍生物，其特征在于，结构通式如下：

其中，式（I）中R₁、R₂分别为C_1-6的烷基、C_3-6的环烷基、苯基、苄基、吡啶基或吡啶-2-亚甲基；NR₁R₂也可以是或， A为CH₂、O、S或NH；式（II）中x=1~3，R₃为OH或NR₄R₅；R₄、R₅分别为H、C_1-6的烷基、C_3-6的环烷基或(CH₂)_yNH₂，y=1~4；NR₄R₅也可以是或，A为O、S或NH；式（III）中Y= ，，，，，，，或；m=0~4，n=0~4；m、n、y和x均取整数。

2.权利要求1所述芸香宁碱衍生物的制备方法，其特征在于，合成路线如下：

具体制备步骤如下：

一、将胡椒酸与邻氨基苯乙酮溶解在二氯甲烷中，加入DIC、DMAP，搅拌至反应完成后，蒸干溶剂，三氯甲烷稀释，水洗，干燥，浓缩纯化得到中间体；

二、将步骤一所得中间体溶于叔丁醇中，加入叔丁醇钾，加热，反应完成后，蒸干溶剂，加入冰水，用盐酸溶液调pH为5-7，析出沉淀，过滤，干燥纯化得到中间体；

三、将步骤二所得的中间体与POCl₃混合，加热反应，待反应完成后，加入饱和NaHCO₃水溶液，然后加入氨水调pH值至8-12，滤除沉淀，过滤干燥，纯化得到中间体；

四、将步骤三所得中间体，无水碳酸钾， 或 或加入到乙腈中，加热搅拌待反应完成后，蒸除溶剂，三氯甲烷稀释，水洗，干燥，浓缩纯化得到最终产物，上述合成路线和制备步骤中，式（I）中R₁、R₂分别为C_1-6的烷基、C_3-6的环烷基、苯基、苄基、吡啶基或吡啶-2-亚甲基；NR₁R₂也可以是或， A为CH₂、O、S或NH；式（II）中x=1~3，R₃为OH或NR₄R₅；R₄、R₅分别为H、C_1-6的烷基、C_3-6的环烷基或(CH₂)_yNH₂，y=1~4；NR₄R₅也可以是或，A为O、S或NH；式（III）中Y= ，，，，，，，或；m=0~4，n=0~4；m、n、y和x均取整数。

3.权利要求1所述芸香宁碱衍生物在制备抗老年痴呆药物中的应用。

4.权利要求1所述芸香宁碱衍生物在制备抗肝癌药物中的应用。