CN1056249A - 具有生物活性的材料的制备方法以及基于该材料的包扎用品 - Google Patents

Abstract

一种制备具有生物活性材料的方法，该方法在 于，将纺织材料通过在其中形成有反应能力官能基团 (其含量为每1克载体0.0625～3.125毫克当量)而 活化。由pH6.5～7.5的缓冲液，在室温下将酶在载 体上固定8～16小时，在纺织材料和酶之间形成共 价化学键，挤干所得材料，然后洗净，干燥，成型为药 用形式，放在密闭袋中而消毒。

单独的包扎用品制成绷带，由依次放置的保护 层，吸收层和贴近伤口层组成，这些层中至少有一层 是由上述具有生物活性的材料制成。

Description

本发明涉及具有生物活性的材料的制备方法，以及基于该材料的包扎用品。

本方法可以制备一种具有生物活性的材料，该材料广泛用于治疗外伤、冻伤、营养不良性溃疡、化脓坏死的伤口、在外科、口腔科、泌尿科、直肠病、胃肠病的伴有形成坏死部分以及积聚浓厚、粘性渗出液的疾病。此外，具有生物活性的材料也可以用于兽医学、生物工程，例如，作为提取胰蛋白酶-α-抗胰蛋白酶抑制剂的吸着剂。

已知的具有生物活性的材料的制备方法，包括：

制备蛋白水解酶的水溶液，最好是胰蛋白酶;

配制醚纤维素溶液，在该情况下，是纤维素三乙酸酯，与水不混溶的有机溶液。

将第一种溶液在第二种溶液中乳化。

将材料制成药剂型：按干的方法制成薄片、薄膜等等。

将所得药物剂型在真空干燥箱中，25℃下放置1小时（参阅苏联No700138，1979年11月30日）。

用上述方法制备的具有生物活性的材料，其成份的重量比（%）是：

纤维素的三乙酯或二乙酯（80～99），

余量为胰蛋白酶（1～20）。

已知方法的实质性缺点是：

1.大量使用酶（到20%）;

2.在有机溶剂中乳化时损失酶的部分活性;

3.在酶和载体之间，缺乏化学连结，由于酶是以物理状态存在于材料的结构中;

4.以天然制剂的形式向受伤的渗出液中排出酶，这可能会导致不利的付作用例如过敏性反应;

5.使用特殊的设备一真空干燥箱。

用已知方法制备的材料是呈片状，不可能用作包扎用品，因此不具有必要的卫生学性质（吸湿性、透气性、有弹性等），仅仅可用作引流药剂。

还有一种已知的制备具有生物活性的材料的方法，该方法包括：

1.配制一种颗粒材料（载体）（制好的葡聚糖，甲壳质、壳聚糖）通过在水中膨胀而制成。

2.制备一种2-氨基-4，6-二氯-均三嗪的丙酮活化溶液，并以水在50℃稀释。

3.在50℃，在搅拌下，用活化溶液活化材料。

4.在有材料的活化溶液中，加入碳酸钠和盐酸溶液，并在50℃搅拌。

5.过滤所得混合物。

6.残留物用丙酮水溶液和水洗涤，得到活化材料，它可以在2℃保存在磷酸盐缓冲溶液中。

7.配制酶溶液，如糜蛋白酶的缓冲溶液。

8.将酶固定在活化材料一制好的葡聚糖、甲壳质、壳聚糖上。

9.轮流地用含不同浓度氯化钠的硼酸和乙酸的缓冲溶液洗涤有固定糜蛋白酶的材料。

10.用没有氯化钠的硼酸缓冲液洗涤材料。

11.冷冻干燥有固定酶的材料（参阅法国公开№2556222（1985年6月14日），Φ.P.Γ.公开-3444746（1985年6月20日）ЧCCPNo249311（1988））。

用上述方法制得的具有生物活性的材料，其组成的重量比（%）为：

酶-19.5～20，

载体-余量。

上述方法具有以下的实质性缺点：

1.使用酶量大（到20%），

2.多步工艺生产，因而产率低而昂贵，

3.使用短缺的和国外的原料，如由螃蟹壳或由真菌菌丝制得的甲壳质，penicillium  chzysogenum，

4.使用特殊的设备以保存活化材料以及进行冷冻干燥。

用已知方法制得的具有生物活性的材料，不能用作包扎用品，它只能以粉末状或悬浮液形式存在，因为制成的材料形式是带有固定酶的粉末，其粒径为0.01～0.5mm。

在医药实践中治疗化脓发炎病人而使用天然蛋白水解酶是已知的。但所提的酶是贵的并短缺的。尽管有相当的效果，但它们对伤口部分中所含的抑制剂、PH值的改变以及温度因素都是不稳定的。此外，这些酶具有抗原（致敏作用的）和热原性质。

具有生物活性的薄膜材料也是已知的，它含有三乙酸酯纤维素或二乙酸酯纤维素载体以及蛋白水解酶（例如，胰蛋白酶、α-糜蛋白酶）。其成份具有以下的比例：

三乙酸酯（二乙酸酯）纤维素-80～99重量%，

酶-余量（参阅CCCP  No700133，79年11月30日）。

这种材料是这样制成的：将蛋白水解酶的水溶液在纤维素的醚溶液中乳化，在不与水混溶的有机溶剂中接着成型为薄膜材料。在制得的材料中，蛋白水解酶是以最细小的吸留物形式存在。

这种材料，由于由材料表面逐渐分离出小剂量的酶而使之呈现长的坏死作用的特性。

可是当酶由材料中出来以后，它就有自己本身的缺点：对抑制剂、PH变化及湿度变化的不稳定性，抗原性和热原性。同时，必须指出，它使用大量的酶-达到重量20%。

使用这种材料的局限在于酶在膜材料或单线成型时所用的有机溶剂中有很大的失活可能性。材料本身只能用作引流，它不可能用作包扎材料。

具有生物活性粒状材料也是已知的，它含有载体-葡聚糖、甲壳质，壳聚糖之类的化合物以及固定在其上的酶-糜胰蛋白酶，胰蛋白酶（法国公开1985年6月14日.2556222）。其重量比为：载体80.0～80.5重量%，其余为酶。这种材料具有延期作用，而酶失掉渗透入血管的可能性并表现抗原性。

这种材料的缺点也是高含量的酶-达到20%而且是贵的。此外这种材料需要特殊装置和设备以用于在较低的温度（2℃）下将它贮存于特定的制备好的缓冲溶液中。

具有生物活性的包扎用品是已知的，它含有按顺序放置的保护层和吸收层以及贴近伤口层（英国专利，2092006，1986年2月11日）。这种用品含有薄层酶，它放在贴近伤口层的里面。保护层可以以纺织的或无纺材料制成。

吸收层是由棉纤维或粘胶纤维（棉絮）、人造丝制成。

贴近伤口的层是织物或无纺的材料或者是由聚醚、聚酰胺、聚氨酯、聚乙烯、聚丙烯、及三乙酸酯纤维素制成的有孔薄膜并含有金属铜或铜的化合物。

伤口部分和现有的包扎用品相互作用时呈现全部酶的本身的负性质，也就是对伤口部分含有的抑制剂、对PH变化和温度因素的不稳定性、抗原性和热原性，并由于酶的高消耗量而是较贵的。

本发明的目的是建立一个制备具有生物活性的材料的方法，该材料确保所含药用物质的延期作用，有利于在正常条件的包装中长期保存，并完全具有包扎材料所存在的卫生性质，在更低的生物活性物质含量时，在更短时间内保证其治疗效果，并可以有效地用作包扎用品。

本发明的另一个目的是提出一种制备生物活性材料的方法，该方法使制得的材料可用作包扎材料，该方法工艺上是简单的，使用易得材料，不需要高的材料消耗，而且在工业条件下易于实施。

本发明又一个目的是制备包扎用品，该用品在相当小的酶消耗下保证高治疗效果，并具有对伤口部份所含的抑制剂、PH变化及湿度变化的稳定性，没有抗原和热原性质的特点。

所提出的任务是通过建立一种具有生物活性新材料的制备方法而达到的，该材料含有载体以及固定在其上面的酶。按照本发明作为载体的是纺织材料，同时材料含有固定在其上的酶，该酶共价结合纺织载体，按以下的组成比例，（重量%）：酶为0.02～0.50，载体为99.98～99.50。

根据本发明，用于包扎用品的具有生物活性的纺织材料是，例如纺织的或无纺的或编织的布，并在其上固定有酶。

使用纺织材料是因为，它本身具有弱的治疗作用，因为由伤口引流、并在材料上集中了微生物和毒素，保护伤口表面不污染，预防过量失水。

纺织材料可以由天然的，如棉花、亚麻、丝、毛的纤维制成，或者可以由合成纤维，如，聚丙烯腈、聚己酰胺、聚氨酯纤维制成，或由人造纤维，如，三乙酸酯、二乙酸酯纤维素纤维，粘胶纤维制成。

根据本发明，固定在纺织材料上的酶共价连结纺织材料，本发明材料的成份具有以下比例（重量%）：酶-0.02～0.50，纺织材料-99.98～99.50。所述的比例基于使用具有生物活性的材料，酶含量低于0.02重量%时治疗效果急剧下降（超过1.5倍），而使用的材料，酶含量高于0.50重量%，并不缩短治疗时间（平均治疗时间14±2天），可是大大增加治疗材料的价格。

在治疗条件下，在伤口上材料一次使用的实际合理时间为48～96小时。

在正常条件下（室温约20℃）在包装保存下，材料的治疗效果可保持不低于5年。

使用本发明制得的材料，可以缩短伤口治愈时间，与具有生物活性或天然酶的现有材料的治愈伤口的时间相比较，本发明所用剂量少10～30倍而治愈时间平均少1.5倍。材料没有毒性，也不会引起过敏反应。

根据本发明，纺织载体由天然纤维制成，它保证向伤口表面放置材料时条件良好，近于舒适。

根据本发明，为了扩大原料基础，纺织载体由合成纤维或人造纤维制备为好。

根据本发明，合适的是材料含有用作酶的蛋白水解酶（水解酶（гигролитин），原枯草菌素（псотосубтилин），土曲酶（террилитин），胰蛋白酶）或溶解胶原酶（胶原酶）或细菌溶解酶（溶菌酶），这些酶可以分解各种结构的改性蛋白而促进净化伤口。本发明所得的材料，由于载体的形式可以是巾、绷带、包裹用品。

也根据本发明，最好，具有生物活性的材料是纤维长1.0-15mm的棉绒，以便将它用于口腔科，以治疗严重的，其中包括刺伤化脓的复杂形状的伤口。

本发明所得的材料也可以制成0.001～1.00mm的粉末状，以便将它用于治疗有复杂形状的大面积的伤口表面。

材料适宜于治疗化脓一坏死的伤口，在治疗急性和慢性的牙周炎，在治疗复杂形状的空腔的伤口，具有细排出道的活组织的空器官的伤口，例如，治疗膀胱腔的发炎过程。

在实验和临床观察条件下，对本发明方法所得材料的鉴定表明具有高的生物活性和内科治疗的活性。特定研究表明，与伤口表面接触的材料，其最大治疗活性，自使用时算起，保持四天。

试验动物，在使用本发明制备的具有生物活性的材料中，没有发生过敏反应。没有发现有这样的止血功能的变化，如同含有血纤维蛋白原和纤维蛋白溶解活性的血纤维蛋白原的降解产物的程度。

在使用材料的前后通过对伤口的细菌培养研究可以注意到，培养出的微生物的谱有收缩，由于置换成较少的病原性群而降低其毒性，降低对抗菌素的稳定性。使用材料导致降低伤口表面细菌的无培养性（oбecceHeHяHocTb）的程度，减少病人对整形手术的准备时间，并缩短病人在恒定的治疗医药设施中的停留时期平均为10天。

在全部病人治疗期间要进行尿和血的分析控制，测量体温，没有一例有任何一般的或局部的，因使用本发明材料而引起的并发症。

材料可以按例如包扎用品的形式使用，它是绷带，至少由三层组成，按次放置保护层、吸收层和贴近伤口层。

包扎用品可以按几种不同方案制成，例如，有一层或二层本发明的纺织材料，此材料具有生物活性，并有固定的酶共价连结所述的材料。

在全部方案中，根据本发明制备的包扎材料的保护层是由纺织的或无纺的或编织的布构成。

在全部包扎用品的方案中，根据本发明，贴近伤口层是由具有生物活性的材料组成，它含有由纺织材料制成的载体，该材料是由天然的或合成的或人造的纤维制成，并在所述载体上固定有酶，例如溶解胶原的（胶原酶）蛋白水解的（水解酶，原枯草菌素，土曲霉，胰蛋白酶）或溶解细菌的（溶菌酶）。同时所述酶是共价连结上述载体，其重量比，载体∶酶（按%）是99.98～99.50∶0.02～0.50。制成包扎用品的贴近伤口层的纺织材料是编织的或纺织的或无纺的布。

在包扎用品的方案中，一层是具有生物活性的材料层，它是贴近层，而吸收层是由没有生物活性物质的纺织的或无纺的或编织布所制成的。

在包扎用品的一个方案中，有两层是有生物活性的材料，吸收层由含有细菌溶解酶（如，溶菌酶）的材料所制成，材料是纺织的或无纺的或编织的纺织布。重量比，酶∶纺织材料（%）是，0.02～0.50∶99.98～99.95。此外，吸收层可以由固定有细菌溶解酶的1.0～15mm长的纤维制成棉绒形成的（棉花的）纺织材料制成的，也可以由0.001～1mm粒径的同样材料的粉末制成。

包扎用品有保证将它固定在病人体上的附件，如胶布、Beлbkpo型的带子等等。

包扎用品是通过使用通用的纺织和缝纫生产工艺来制备的。

在外伤（受伤）后几小时就使用本发明的包扎用品可以予防感染并缩短以后治疗时期2～4天。

上述根据本发明的具有生物活性的材料，通过下法制得：用化学法活化惰性载体，在本情况下纺织载体呈布状，然后在活化的载体上固定生物活性物质，其中有酶：原枯草菌素、水解酶、土曲酶、胰蛋白酶、溶解酶、胶原酶等等。

活化包括在纺织载体上引入有反应能力的官能团。活化过程取决于载体的化学结构（天然的、人造的、合成的纤维）和纺织结构（编织方法、厚度以及组装线的数目、纺织材料的密度等等）。活化进行到每克载体上含有有反应能力的官能团0.0625～3.125毫克当量。

含有纤维素的纺织载体的活化是通过用碱金属的过碘酸盐氧化而进行的如，过碘酸钠，直到氧化到二醛纤维素。活化的纺织载体在1克载体上含有0.0625～3.125毫克当量的有反应能力的官能团。

由合成纤维（含纤维素的载体），如由聚己酰胺纤维制成的纺织载体的活化是通过用酸水解载体，然后洗净并将水解的载体与含有反应能力的官能团的物质溶液相互作用，直到在载体中含有后者达每1克载体有0.0625～0.3125毫克当量。在这种情况下，宜于使用强的无机酸，如盐酸或硫酸。由合成纤维制成的水解载体的处理宜于用戊二醛溶液进行，然后在水中洗涤或者用硫酸二甲酯溶液进行处理，然后在乙醇和在磷酸缓冲液中洗涤载体。

将生物活性物质，（在本情况下是酶）固定在活化的纺织载体上，是在PH6.5～7.5的缓冲溶液中在室温进行8-16小时。这时，由于纺织载体的有反应能力的基团和生物活性物质的游离官能团（在本情况下是酶）相互作用，而在纺织载体和酶之间形成共价化学键，从而制得具有化学（共价）固定生物活性物质的、延期作用的纺织材料。固定过程要进行到所制得具有生物活性的纺织材料中酶含量达到材料重量的0.02～0.5%。

将制得的布挤干、洗去吸附的酶，干燥，并将它放在袋子中，例如，插入聚乙烯包内，或在塑料形式的包中用纸复盖物盖住装入的材料并用周知的方法，γ-射线或在气体介质中消毒。

在将材料装入袋子以前，必需通过周知的方法制成方便使用的形式（方巾、绒、粉末等等）。

本发明方法与现有方法相比较，其区别在于所进行的工艺和实施该工艺的设备都简单而且便宜。

本申请的方法可以制备结合有药物制剂性质，并保持原包扎材料全部卫生和物理化学性质特性的材料。

用这种方法制取的具有生物活性的材料，在通常包装形式的条件下保存，可以保持最高治疗效果不低于5年时间。

对于各种纺织载体，本发明更详细的方法将描述于实施例。

上述方法所制得的材料，对3200例患有化脓坏死、冻伤、和营养不良性溃疡等的病人治疗，在临床条件下进行了监测。

材料按以下局部使用：在予先外科处理-去掉化脓坏死物质、剖开囊、打开联结物、并形成一个腔-后，在伤口引入所推荐的，具有生物活性的材料，例如浸有生理盐水的方巾，棉花（棉绒）。

同时证明，使用这种材料治疗时，具有局部缩短愈合伤口期限到15±2.1天，可是，使用传统方法，使用具有防腐的高渗溶液治疗病人的对照组（3110病例）这个期间是26±2.2昼夜。也就是说，使用本发明方法制得的材料可以加速治疗平均1.5倍。

使用本发明制得的材料的临床情况下，没有一例有明显的中毒或过敏反应。

由于在材料表面共价结合酶，使材料具有较高的非外伤性，由伤口表面撕下材料所用的力比没有改进的传统使用的包扎材料平均小2倍。

临床使用本发明材料的结果表明：

1.在治疗化脓坏死过程中有高效：缩短疗程1.3～1.8倍。

2.高的非外伤性：由伤口表面撕下的用力要小二倍。

3.减少酶的消耗：在治疗同一病人时，与天然酶消耗相比较少10～30倍，与现有类似法比较不少于25倍（类似的含0.5～20%酶，在本发明治疗材料中仅含0.02～0.5%酶）。

在消毒以后，材料生物活性的稳定性测试表明：在通常条件（20℃）下的包装状况，并保持全部物理机械和卫生性质下，它保持治疗作用不少于5年。

材料不具有付作用，也不附有使用禁忌。

使用具有生物活性的材料（固定有水解酶）的临床效果与传统的治疗化脓坏死伤口的软纺织用品进行比较，以下面所列数据说明：

表

治疗时期（天）

治疗过程特性  具有生物活性的  天然酶  高渗浓液

材料（有固定的酶）  防腐剂

完全清洗伤口  4.5±0.2  7.8±0.5  9.5±0.6

出现小块肉芽

由开始治疗到  15.0±2.1  20.0±1.5  26.0±2.2

完全愈合

临床治疗表明，使用有固定酶的纺织材料，在治疗患有化脓疾病组织的病人时，可以缩短总疗程1.3-1.8倍。

在酶疗法条件下，大大缩短开始清洗伤口和出现肉芽生长的时期1.7～2.1倍。

为了更好地理解发明，下面列举了制备具有生物活性材料的方法和包扎用品的实施例。

实施例1.在反应器中倒入3.3升水，置入搅拌器，并加入9.4克碘酸。

在另一反应器中注入相同量的水，加入搅拌器，加入1.6克氢氧化钠。搅拌两个溶液，5-15分钟直到酸和苛性钠的晶体全部溶解为止。

然后将两个溶液注入一个反应器，搅拌3-6分钟，得到PH＝5的过碘酸钠溶液。

在所得溶液中放入1公斤纺织纤维布（药用棉纱布）并将它在暗处在室温保持（活化）14小时。在布活化（二醛纤维素）后，挤干，用10升水洗四次，再挤干。

由于活化，在棉布中形成有反应能力的官能团，在本情况下是醛基团，在1克纺织载体上含有0.0625毫克当量。为了制备缓冲溶液（在本情况下是磷酸盐缓冲液）也使用二个反应器。在其中一个内注入3.3升水并在搅拌下加入5克磷酸二氢钾。在另一个反应器中，在相同量的水中，在搅拌下，加入37克磷酸氢钠。搅拌10～20分钟直到晶体全部溶解。

然后将两种溶液都倒入一个反应器中，制得PH＝7.5的磷酸盐缓冲液。

在制备好的磷酸盐缓冲液中在搅拌下加入0.4克酶，（在本情况下是水解酶），搅拌10～20分钟直到全部溶解。在所制得的溶液中，放入1公斤活化的布（二醛纤维素）并在室温保持12小时。这时，由于出现共价化学键而发生固定酶的过程。将布洗涤直到洗涤水中没有蛋白为止。然后将布挤干，并在空气中干燥几昼夜。结果得到一种材料（在本情况下是棉布），具有生物活性并延期的治疗效果。固定的酶量（在本例中是水解酶）按溶液中酶的减少量计算：是在1克纺织棉布上有0.2毫克，即，布重量的0.02%。

将干燥材料加工成形为药用形状，如，按所需大小的方巾，嵌入双层聚乙烯包中并用周知的方法-辐照消毒。

实施例2.按实施例1制备过碘酸钠溶液。在其中放入30克药用棉纱布。按实施例1进行以下步骤。得到的纱布每1克纺织布含有醛基团0.78毫克当量。

按实施例1制备磷酸缓冲溶液，在其中加入0.24克酶，在本例中是水解酶。按实施例1进行以下步骤。

固定的酶（水解酶）的量是每1克纺织载体上有1.25毫克酶（0.125%重量）

实施例3.按实施例1制备过碘酸钠溶液。在其中放入20克药用棉纱布。按实施例1进行以下步骤。获得的纱布中，每1克纱布有3.125毫克当量的醛基团。

按实施例1制备磷酸盐缓冲液。在其中加入0.192克酶-水解酶。按实施例1进行以下步骤。

所固定的酶（水解酶）的量是每1克载体上有5毫克（0.5%重量）。

实施例4.方法按实施例1进行。但使用土曲酶作为酶。所固定的酶量（本例中为土曲酶）是棉纱布重量的0.02%。

实施例5.方法按实施例1进行。但使用胶原酶作为酶。所固定的酶量（在本例是胶原酶）是棉纱布重量的0.02%。

实施例6.方法按实施例2进行。但使用土曲酶作为酶。所固定的土曲酶量是棉纱布重量的0.120%。

实施例7.方法按实施例2进行，但使用胶原酶作为酶。所固定的胶原酶的量是纺织纱布重量的0.140%。

实施例8.方法按实施例3进行，但使用土曲酶作为酶。所固定的土曲酶量为纱布重的0.5%。

实施例9.方法按实施例3进行，但使用胶原酶作为酶，所固定的胶原酶的量是纱布重量的0.5%。

实施例10.方法按实施例1进行。但使用棉粘胶纤维纱布作为纺织材料。

实施例11.方法按实施例2进行，但使用棉粘胶纤维纱布作为纺织材料。

实施例12.方法按实施例3进行，但使用棉粘胶纤维纱布作为纺织材料。

实施例13.方法按实施例1进行。但为制备缓冲溶液加入20.7克磷酸二氢钾和11.8克磷酸氢钠。所得的磷酸盐缓冲液的PH值＝6.5。

实施例14.方法按实施例1进行，但为制备缓冲溶液加入11.9克磷酸二氢钾和23.6克磷酸氢钠。所得磷酸盐缓冲液的PH值为7。

实施例15.方法按实施例1进行，但使用胰蛋白酶作为酶。

实施例16.方法按实施例1进行。但使用PH＝7.5的磷酸-柠檬酸缓冲液。溶液按下述方法制备。

在第一个反应器中加入1.8克水，放入搅拌器并加入19.06克柠檬酸-水合物，在第二个反应器中注入8.25克水，放入搅拌器并加入329.3克磷酸氢钠。搅拌直到完全溶解。然后将两种溶液倒在一起。

以下步骤按实施例1进行。

实施例17.方法按实施例13进行。但使用磷酸-柠檬酸缓冲液。其制备是：在一个反应器的1.8升水中，在搅拌下加入71.7克柠檬酸-水合物，和在另一反应器的8.25升水中也在搅拌下加入224.5克磷酸氢钠。盐溶解后将溶液倒在一起。所得缓冲溶液的PH＝6.5。以下的步骤按实施例13进行。

实施例18.方法按实施例14进行。但为制备磷酸-柠檬酸缓冲溶液，在反应器中在搅拌下，向1.8升水中加入38.1克柠檬酸-水合物并在另一反应器中，向8.25升水中加入290.5克磷酸氢钠。盐溶解后，将溶液倒在一起。所得缓冲液的PH为7。以后的步骤按实施例14进行。

实施例19.在反应器中倒入50升3M盐酸，在其中放入1公斤聚己酰胺纤维针织编织布。将酸的温度提高到60℃，并将编织布在其中保持4小时。在水解结束后冷却并倒出盐酸。用水洗涤针织编织布直到洗涤水中没有盐酸为止。然后在反应器中倒入40升5%的戊二醛。在其中放入1公斤经过水解的针织布。将戊二醛温度提高到50℃并保持4小时。然后冷却戊二醛并倒出。再用水洗涤编织布直到没有戊二醛气味为止。布条的活化过程完成。

由于进行了活化，在针织编织布中形成了有反应能力的官能团，在本例中是醛基团，含量为每1克纺织布上有0.0625毫克当量。

按实施例1进行制备磷酸盐缓冲溶液。所得磷酸盐缓冲液的PH为7.5，在搅拌下加入0.66克酶，在本例中是土曲酶，搅拌10-20分钟直到完全溶解。

这样制备的土曲酶在磷酸盐缓冲液中的溶液，其体积为6.6升，酶浓度为0.01%，在其中放入1公斤已活化的由聚己酰胺纤维制成的针织布，并在室温保持9小时。这时，由于呈现共价化学键而产生酶的固定作用。然后将针织布用生理盐水和水洗涤直到在洗涤水中没有酶（蛋白）为止，酶量使用公知的方法检测。

然后挤干针织布并在空气中干燥几昼夜。结果得到具有生物活性和延长治疗作用的材料，在本例中是编织针织的聚己酰胺布。

所得材料含有0.02%固定的土曲酶（每1克载体上有0.2毫克酶）。

干燥的材料制成药用形式，例如，所要求大小的方巾、放在套中，用周知的方法在气体中消毒。

实施例20.按实施例19，制备活化的针织聚己酰胺布，但使用10%的戊二醛。活化后在针织布中的醛基团含量为，每1克针织布上有0.156毫克当量。

将1公斤活化的布放入盛有6.6升0.03%土曲酶在磷酸盐缓冲液（PH＝7.5）中的溶液中。并在室温保持8小时。然后按实施例19处理针织布。所得的具有生物活性的材料，每1克针织布含有0.6毫克土曲酶，即布重量的0.06%。其它同实施例19。

实施例21.按实施例19制备活化的针织聚己酰胺布，但使用15%戊二醛。活化后在布中的醛基团含量为每1克布为0.26毫克当量。

将1公斤活化的布倒入6.6克0.1%的土曲酶在磷酸缓冲液（PH7.5）中的溶液中，并在室温保持10小时。以后按实施例19对布进行处理。

所得材料在1克载体上含有2毫克土曲酶，即布重量0.2%的酶。

实施例22.与实施例19相似，但使用胰蛋白酶作为酶。所得材料在纺织载体上，在本例中，由聚己酰胺纤维制成的编织的针织布，含有0.02%固定的胰蛋白酶。

实施23.与实施例20相同，但作为酶使用胰蛋白酶，而且将1公斤活化的针织聚己酰胺布放入6.6升0.03%胰蛋白酶的磷酸盐缓冲液溶液中，在室温保持9小时，其余的都同实施例20。

所得材料含有聚己酰胺编织的针织布重量的0.06%的胰蛋白酶。

实施例24.同实施例21，但固定作用是在0.15%胰蛋白酶的磷酸盐缓冲液溶液中进行的。

所得材料含有布重0.3%的胰蛋白酶。

实施例25。将聚己酰胺针织布置入反应器中的硫酸二甲酯中，罐系数为10，在室温下保持10小时。将过量的硫酸二甲酯倒掉。将布在罐系数20时用乙醇在4℃的温度下洗一次，然后在4℃温度下用PH7.5的磷酸盐缓冲液洗三次。处理过的布含有反应能力的偕亚胺醚基团。

酶的固定作用（在本例中是胰蛋白酶）是在室温，在罐系数10下由在磷酸盐缓冲液中的浓度为0.04%的酶溶液中保持16小时而进行的。

然后用生理盐水和水洗涤布，直到洗涤水中没有酶为止。酶含量用公知的方法检测。

然后，洗涤布条在空气中干燥几昼夜，结果，得到具有生物活性和延期治疗作用的材料（在本例中，是编织针织的聚己酰胺布）。

所得材料含有0.2%固定的胰蛋白酶，即1克载体有2毫克。

实施例26.同实施例25，但酶（本例中为胰蛋白酶）的固定作用，是在罐系数10下在磷酸盐缓冲液的0.008%胰蛋白酶的溶液中进行12小时。所得材料含有0.04%固定的胰蛋白酶（每1克载体有0.4毫克）。

实施例27.同实施例25，但胰蛋白酶的固定化作用是在（罐系数10下）磷酸盐缓冲液的0.024%胰蛋白酶溶液中进行10小时。所得材料在每1克载体上含有胰蛋白酶1.2毫克（每1克载体上有0.12%胰蛋白酶）。

实施例28.同实施例19.但作为酶使用溶菌酶。得到材料含有0.02%（重量）的固定溶菌酶。

实施例29.同实施例20，但作为酶使用溶菌酶。得到材料含有0.06（重量）%，的固定溶菌酶。

实施例30.同实施例21，但作为酶使用溶菌酶。材料含有0.2（重量）%的固定的溶菌酶。

实施例31.同实施例19，但作为酶使用原枯草菌素得到的材料含有0.02%（重量）的固定的原枯草菌素。

实施例32.同实施例20，但作为酶使用原枯草菌素，材料含有0.06（重量）%的固定的原枯草菌素。

实施例33.同实施例21。但作为酶，使用原枯草菌素，所得材料含有0.2（重量）%的固定的原枯草菌素。

实施例34.方法按实施例1进行，但是具有生物活性的消毒材料是纺织的药用棉纱布，而固定在其上并与之共价结合的是水解酶。材料在1克织成的棉纱布上含有0.2毫克水解酶。

将材料制成药用的方巾，可用于治疗脓肿、蜂窝组织炎，手术后的外科缝线并发症。

在使用这种具有生物活性材料时，保证酶的延期治疗作用48～96小时，然后用于治疗同样疾病的天然酶的生命持续时间不超过1小时。在使用这种具有生物活性的材料治疗后，在第17天观察到完全愈合软组织的化脓坏死伤口。在个别情况下，在绷带包扎后最初几小时，病人感到有轻微的灼烧感觉，在绷带下捏伤口表面的感觉。没有有观察到有组织过敏反应。

本申请的具有生物活性材料中的载体和酶之间的键的共价特性是根据在用盐溶液，如氯化钠或缓冲液，如磷酸盐缓冲液，处理材料后酶活性的保持来判断的。在这样处理时，所吸收的蛋白（酶）由载体上洗脱。

这种材料在正常条件下保存五年依然保存治疗性质。

实施例35.方法按实施例1进行。但具有生物活性的材料，在1克纺织棉纱布中含有1.25毫克水解酶。在治疗中，使用这种有固定水解酶的纺织棉纱布，（水解酶是共价结合纱布的）具有局部延长治疗作用，与天然酶的1小时时间相比较，它达到48～96小时。

在使用这种具有生物活性材料后，在第15天软组织的伤口完全愈合。其它的结果类似于实施例34所示的结果。

实施例36.方法按实施例1进行。这种具有生物活性的材料的每1克纺织棉纱布上含有5.0毫克水解酶，在使用这种具有生物活性的材料时完全愈合伤口（实施例34）出现在14天。其它的结果同实施例34所示的结果。

实施例37.同实施例1，但具生物活性的材料，作为纺织载体使用编织的药用棉纱布，这种材料的治疗结果，类似于实施例34中所示的结果。

实施例38.同实施例1，但具有生物活性的材料，作为纺织载体使用棉纤维无纺材料。这种材料的治疗使用结果相同于实施例34中所示的结果。

实施例39.同实施例1，但具有生物活性的材料，作为纺织载体是亚麻布。这种材料的治疗使用结果相同于实施例34中所示的结果。

实施例40.同实施例1，但具有生物活性的材料，作为纺织载体是天然丝布条。这种材料的治疗使用结果相同于实施例34中所示的结果。

实施例41.同实施例19，但具有生物活性的材料，作为纺织载体是使用纺织聚己酰胺布。

这种材料的治疗使用结果相同于实施例34中所示的结果。

实施例42.同实施例19，但具有生物活性的材料，作为纺织载体是使用编织的聚氨酯布。

这种材料的治疗使用结果相同于实施例34中所示的结果。

实施例43.同实施例1，但具有生物活性的材料，作为纺织载体使用编织的粘胶纤维布。

这种材料的治疗使用结果相同于实施例34中所示的结果。

实施例44.同实施例1，但具有生物活性的材料，作为纺织载体使用二乙酸酯纤维素的编织布。

这种材料的治疗使用结果相同于实施例34中所示的结果。

实施例45.同实施例21，但具有生物活性的材料含有溶菌酶。这种材料在1克纺织载体上含有2毫克溶菌酶。使用这种具有共价结合于载体的溶菌酶材料时，与天然酶治疗作用时期1小时相比较，有延期48-96小时的治疗作用。

在使用这种材料治疗时，在第15天完全治愈软组织伤口。

使用含有固定的溶菌酶的纺织材料对水合作用期的化脓伤口进行治疗，有助于最快消除伤口的感染，较快地减轻化脓或发炎，清除伤口的化脓坏死组织，刺激在伤口细胞中肝糖和核酸的合成（дHK和PHK）、结缔组织细胞（成纤维细胞）的活性增生，加强胶原酶，较快地缩小边缘，伤口收缩并形成上皮。

实施例46.同实施例5，但具有生物活性的材料具有类似实施例5的组成。它含有胶原类的酶-胶原酶。这种材料中每1克纺织载体上含有0.2毫克胶原酶。

在使用这种材料治疗后，在第16天完全愈合软组织的化脓坏死伤口。本材料其它的治疗使用结果相同于实施例34和45中所示的结果。

实施例47.同实施例15，但具有生物活性的材料，具有类似于实施例1中所示的成份。

这种材料具有1.0mm纤维的棉绒形，它用于治疗化脓的、深的、纵的伤口，在直肠中的发炎过程。

治疗效果-完全愈合伤口要17天。

实施例48.同实施例15，具有生物活性的材料，具有类似于例1所述的成份。

这种材料具有8.0mm长纤维绒状，它用于加速治疗牙病灶感染（慢性的粒状牙周炎）。

棉绒形式的材料呈现抗渗出物的作用，主动地与经过根部管道流出的渗出物作用（甚至与弯曲的、细的、可通过的管）。

实施例49.同实施例15，但具有生物活性的材料，具有类似于实施例1中所述的成份。

这种材料具有15mm长纤维绒形式，它用于治疗在直肠中发炎的过程。

在第16.5天观察到治疗效果。

实施例50.同实施例15，但具有生物活性的材料，具有类似于实施例1所述的组成。

这种材料呈粉状，其粒度为0.001mm，它用于治疗手术后外科缝线的并发症。

经这种具有生物活性（酶活性）的粉末治疗后，缝线在第17天完全愈合。

实施例51.同实施例15，但具有生物活性的材料，具有类似于实施例1中所述的组成。

这种材料呈粉状，其粒度为0.5mm，它治疗有复杂的局部和难以进入的腔的化脓坏死的过程。

治疗效果在17天观察到。

实施例52.同实施例15，但具有生物活性的材料具有类似于实施例1中所述的组成。

这种材料呈粉状，其粒度为1.0mm。它用于治疗脓性蜂窝组织炎。

治疗效果在16.5天观察到。

实施例53.是绷带的包扎用品，由三层和固定附件组成，制成有粘性的带。绷带含有顺序安放的保护层、吸收层和贴近伤口层，而且贴近伤口层是由具有生物活性的材料制成，该层按实施例21制得的。

包扎用品用于臀部软组织受伤面积6×4cm²深达4cm时的医治前的阶段。当受伤12小时后病人进入医院观察到没有水肿，病灶周围没有发炎，伤口内表面清洁，组织有生命力。外科处理后在14天完全愈合。

实施例54.是绷带的包扎材料，由三层和固定附件组成，制成有粘性的带。绷带含有顺序安放的保护层、吸收层和贴近伤口层，而且贴近伤口层是由具有生物活性，按实施例21制得的材料制成，吸收层一由具有生物活性、按实施例30制备的材料制成。

包扎用品用于脚的软组织受伤（面积为4×3cm²，深达2cm）的医治前的阶段中。当受伤后8小时患者进入医院时，观察到没有水肿、病灶周围没有发炎、伤口内表面清洁，组织有生命力。外科处理后，在第12天伤口完全愈合。

实施例55.是绷带的包扎材料，由三层和固定附件组成，制成有粘性的带状。绷带有顺序安放的保护层、吸收层和贴近伤口层，而且贴近伤口层是由具有生物活性、按实施例21制得的材料制成，而吸收层由具有生物活性按实施30制得的材料制成，它是10cm纤维的棉绒。

包扎用品用于臀部软组织受伤（面积5×2cm²，深达3cm）的伤口的医治前阶段中。当受伤10小时后患者进入医院时，观察到没有水肿和发炎。外科处理后，伤口完全愈合是在第12.5天。

Claims (17)

1、一种具有生物活性的材料的制备方法，该材料具有载体和固定在其上面的有生物活性物质-酶，方法为准备(活化)载体，使用缓冲液将酶固定在其上，接着洗涤、干燥并成形，其特征在于，作为载体有纺织材料，同时材料含有固定的酶，它与所述载体共价连结，并具有以下成份比(重量%)，酶-0.02～0.50，载体-99.98～99.50，而且纺织载体是通过在其上面形成有反应能力的官能基团(至其含量为1克载体上0.0625～3.125毫克当量)而进行活化，在活性载体上固定有生物活性的物质一酶，其方法是由PH6.6～7.5的缓冲溶液，在室温进行8-16小时，使纺织载体和酶之间形成共价化学键，其后，将所得材料挤干、用水洗涤直到洗涤水中没有生物活性物质-酶为止，在室温下(20℃左右)干燥，材料成形，将它放在包层内并消毒。

2、根据权利要求1的方法，其特征在于，纺织材料由天然纤维制成。

3、根据权利要求1的方法，其特征在于，纱纺材料由人造纤维制成。

4、根据权利要求1的方法，其特征在于，纺织材料由合成纤维制成。

5、根据权利要求1～4的方法，其特征在于，纺织材料或是织成的或是无纺的或是编织的布。

6、根据权利要求1-5中的任一项方法，其特征在于，作为酶使用蛋白水解酶。

7、根据权利要求1～5中的任一项的方法，其特征在于，作为酶使用胶原溶解酶。

8、根据权利要求1～5中的任一项的方法，其特征在于，作为酶使用细菌溶解酶。

9、根据权利要求1～3，6～8的方法，其特征在于，活化含纤维素的纺织载体是通过用碱金属的过碘酸盐氧化载体到二醛纤维素，它含有的有反应能力的官能醛基团量为每1克载体有0.0625～3.125毫克当量。

10、根据权利要求1，4～8的方法，其特征在于，由合成纤维制成的纺织载体（含纤维素的载体）的活化是通过酸水解作用的方法而进行的，然后用水洗净并将水解的载体与含有反应能力官能基团的溶液相互作用直到在载体中形成有反应能力的官能基团，其含量为每1克载体有0.0625～0.3125毫克当量。

11、根据权利要求1，4～8，10的方法，其特征在于，水解的载体使用戊二醛溶液处理，接着在水中洗净载体。

12、根据权利要求1，4～8，10的方法，其特征在于，水解的载体用硫酸二甲酯溶液处理，将载体在乙醇中和磷酸缓冲液中洗涤。

13、根据权利要求1～12中任一方法，其特征在于，将材料成形为1.0～15毫米的纤维绒状态。

14、根据权利要求1～12中任一方法，其特征在于，将材料加工成形为0.001～1.0毫米的粒度状粉末。

15、包扎用品，是绷带，含有顺序放置的保护层、吸收层和贴近伤口层、其中至少有一层是由按1～12所述的任一方法制备的材料制成。

16、根据权利要求15的包扎用品，其特征在于，贴近伤口层由权利要求1～12的任一方法制备的材料制成的，而吸收层是由不含生物活性物质的纺织材料制成的。

17、根据权利要求15的包扎用品，其特征在于，贴近伤口层由权利要求1～12的任一方法所制备的材料制成，而吸收层由权利要求1～5，7～14的一种方法所制备的材料制成。