CN105602888A - 一种内皮祖细胞快速扩增体系 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种内皮祖细胞快速扩增体系，该内皮祖细胞快速扩增体系包括内皮祖细胞扩增、内皮祖细胞动员作用、药物对内皮祖细胞扩增作用、羟甲基戊二酰辅酶A还原酶抑制剂、血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂、血管紧张素转化酶抑制剂、雌激素、促红细胞生成素、刺激因子对内皮祖细胞扩增作用和转基因对内皮祖细胞扩增作用，所述内皮祖细胞扩增方式分为内皮祖细胞动员作用、药物对内皮祖细胞扩增作用、刺激因子对内皮祖细胞扩增作用和转基因对内皮祖细胞扩增作用。本发明通过内皮祖细胞动员作用、药物对内皮祖细胞扩增作用、刺激因子对内皮祖细胞扩增作用和转基因对内皮祖细胞扩增作用能扩增足够数量和质量的EPCs。

Description

一种内皮祖细胞快速扩增体系
技术领域
本发明属于细胞扩增领域，尤其涉及一种内皮祖细胞快速扩增体系。
背景技术
内皮祖细胞(endothelialprogenitorcells，EPCs)是血管内皮前体细胞，能定向分化为成熟的内皮细胞，亦称血管母细胞。机体缺血时，EPCs可从骨髓中动员进入外周血，到达缺血组织参与血管新生。把体外培养和扩增的EPCs输入体内，提高循环中EPCs的数量和质量可促进缺血部位的血管新生。因此，EPCs移植成为了治疗缺血性血管疾病的一条新思路。目前内皮祖细胞富集、分离和培养的方法存在较大差异，如何培养和扩增足够数量和质量的EPCs已成为目前研究的热点。现如今没有一种方法能有效的够培养和扩增足够数量和质量的EPCs，严重制约了缺血性血管疾病的治疗。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明提供一种内皮祖细胞快速扩增体系，以此解决目前不足以扩增足够数量和质量的EPCs的问题。
本发明为解决公知技术中存在的技术问题所采取的技术方案是：一种内皮祖细胞快速扩增体系，该内皮祖细胞快速扩增体系包括内皮祖细胞扩增、内皮祖细胞动员作用、药物对内皮祖细胞扩增作用、羟甲基戊二酰辅酶A还原酶抑制剂、血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂、血管紧张素转化酶抑制剂、雌激素、促红细胞生成素、刺激因子对内皮祖细胞扩增作用和转基因对内皮祖细胞扩增作用，所述内皮祖细胞扩增方式分为内皮祖细胞动员作用、药物对内皮祖细胞扩增作用、刺激因子对内皮祖细胞扩增作用和转基因对内皮祖细胞扩增作用，药物对内皮祖细胞扩增作用相关药物为羟甲基戊二酰辅酶A还原酶抑制剂、血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂、血管紧张素转化酶抑制剂、雌激素和促红细胞生成素。
本发明还可以采用如下技术措施：
优选的，所述内皮祖细胞动员作用具体通过粒细胞集落刺激因子、粒-巨噬细胞集落刺激因子和干细胞因子动员。
优选的，所述刺激因子对内皮祖细胞扩增作用具体通过VEGF促进EPCs增殖，VEGF通过细胞膜VEGFR-2受体激动蛋白激酶B，再通过三磷酸肌醇途径激活后续信号调控EPCs的增殖。
优选的，所述刺激因子对内皮祖细胞扩增作用具体通过高密度脂蛋白，促进局部缺血组织的血管生成，其机制是通过三磷酸肌醇途径通路直接刺激EPC增殖。
优选的，所述刺激因子对内皮祖细胞扩增作用具体可通过运动、缺氧、血管流切力、某些疾病状态都能刺激体内EPCs的快速增殖。
优选的，所述转基因对内皮祖细胞扩增作用具体为转导VEGF对EPC增殖。
优选的，所述的内皮祖细胞通过以下方法获得：
步骤一、将多能干细胞于第一培养基中诱导分化形成中内胚层前体细胞；
步骤二、将所述中内胚层前体细胞于第二培养基中诱导分化形成血管内皮细胞祖细胞；
步骤三、进行血管内皮细胞祖细胞集落数及细胞功能的鉴定：鉴定细胞形态、功能及细胞表面分子的表达。
优选的，所述的第一培养基含有DMEM培养基、F12培养基、硒酸钠、碳酸氢钠、维生素C、胰岛素、激活素A、骨形成蛋白4、糖原合成酶激酶-3抑制剂；所述培养基B含有DMEM培养基、F12培养基、硒酸钠、碳酸氢钠、维生素C、胰岛素、血管内皮生长因子和转化生长因子β信号通路抑制剂。
本发明具有的优点和积极效果是：本发明通过内皮祖细胞动员作用、药物对内皮祖细胞扩增作用、刺激因子对内皮祖细胞扩增作用和转基因对内皮祖细胞扩增作用能扩增足够数量和质量的EPCs，为缺血性血管疾病的治疗提供了保障。
附图说明
图1是本发明实施例提供的一种内皮祖细胞快速扩增体系的结构框图。
图中：1.内皮祖细胞扩增、2.内皮祖细胞动员作用、3.药物对内皮祖细胞扩增作用、31.羟甲基戊二酰辅酶A还原酶抑制剂、32.血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂、33.血管紧张素转化酶抑制剂、34.雌激素、35.促红细胞生成素、4.刺激因子对内皮祖细胞扩增作用、5.转基因对内皮祖细胞扩增作用。
具体实施方式
为能进一步了解本发明的发明内容、特点及功效，兹例举以下实施例，并配合附图详细说明如下。
请参阅图1：
本发明提供一种内皮祖细胞快速扩增体系，该内皮祖细胞快速扩增体系包括内皮祖细胞扩增1、内皮祖细胞动员作用2、药物对内皮祖细胞扩增作用3、羟甲基戊二酰辅酶A还原酶抑制剂31、血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂32、血管紧张素转化酶抑制剂33、雌激素34、促红细胞生成素35、刺激因子对内皮祖细胞扩增作用4和转基因对内皮祖细胞扩增作用5，所述内皮祖细胞扩增1方式分为内皮祖细胞动员作用2、药物对内皮祖细胞扩增作用3、刺激因子对内皮祖细胞扩增作用4和转基因对内皮祖细胞扩增作用5，药物对内皮祖细胞扩增作用3相关药物为羟甲基戊二酰辅酶A还原酶抑制剂31、血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂32、血管紧张素转化酶抑制剂33、雌激素34和促红细胞生成素35。
本发明还可以采用如下技术措施：
优选的，所述内皮祖细胞动员作用2具体通过粒细胞集落刺激因子、粒-巨噬细胞集落刺激因子和干细胞因子动员。
优选的，所述刺激因子对内皮祖细胞扩增作用4具体通过VEGF促进EPCs增殖，VEGF通过细胞膜VEGFR-2受体激动蛋白激酶B，再通过三磷酸肌醇途径激活后续信号调控EPCs的增殖。
优选的，所述刺激因子对内皮祖细胞扩增作用4具体通过高密度脂蛋白，促进局部缺血组织的血管生成，其机制是通过三磷酸肌醇途径通路直接刺激EPC增殖。
优选的，所述刺激因子对内皮祖细胞扩增作用4具体可通过运动、缺氧、血管流切力、某些疾病状态都能刺激体内EPCs的快速增殖。
优选的，所述转基因对内皮祖细胞扩增作用5具体为转导VEGF对EPC增殖。
优选的，所述的内皮祖细胞通过以下方法获得：
步骤一、将多能干细胞于第一培养基中诱导分化形成中内胚层前体细胞；
步骤二、将所述中内胚层前体细胞于第二培养基中诱导分化形成血管内皮细胞祖细胞；
步骤三、进行血管内皮细胞祖细胞集落数及细胞功能的鉴定：鉴定细胞形态、功能及细胞表面分子的表达。
优选的，所述的第一培养基含有DMEM培养基、F12培养基、硒酸钠、碳酸氢钠、维生素C、胰岛素、激活素A、骨形成蛋白4、糖原合成酶激酶-3抑制剂；所述培养基B含有DMEM培养基、F12培养基、硒酸钠、碳酸氢钠、维生素C、胰岛素、血管内皮生长因子和转化生长因子β信号通路抑制剂。
本发明通过内皮祖细胞动员作用2、药物对内皮祖细胞扩增作用3、刺激因子对内皮祖细胞扩增作用4和转基因对内皮祖细胞扩增作用5能扩增足够数量和质量的EPCs。
利用本发明所述的技术方案，或本领域的技术人员在本发明技术方案的启发下，设计出类似的技术方案，而达到上述技术效果的，均是落入本发明的保护范围。

Claims (8)

1.一种内皮祖细胞快速扩增体系，其特征在于，该内皮祖细胞快速扩增体系包括内皮祖细胞扩增、内皮祖细胞动员作用、药物对内皮祖细胞扩增作用、羟甲基戊二酰辅酶A还原酶抑制剂、血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂、血管紧张素转化酶抑制剂、雌激素、促红细胞生成素、刺激因子对内皮祖细胞扩增作用和转基因对内皮祖细胞扩增作用，所述内皮祖细胞扩增方式分为内皮祖细胞动员作用、药物对内皮祖细胞扩增作用、刺激因子对内皮祖细胞扩增作用和转基因对内皮祖细胞扩增作用，药物对内皮祖细胞扩增作用相关药物为羟甲基戊二酰辅酶A还原酶抑制剂、血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂、血管紧张素转化酶抑制剂、雌激素和促红细胞生成素。
2.如权利要求1所述的内皮祖细胞快速扩增体系，其特征在于，所述内皮祖细胞动员作用具体通过粒细胞集落刺激因子、粒-巨噬细胞集落刺激因子和干细胞因子动员。
3.如权利要求1所述的内皮祖细胞快速扩增体系，其特征在于，所述刺激因子对内皮祖细胞扩增作用具体通过VEGF促进EPCs增殖，VEGF通过细胞膜VEGFR-2受体激动蛋白激酶B，再通过三磷酸肌醇途径激活后续信号调控EPCs的增殖。
4.如权利要求1所述的内皮祖细胞快速扩增体系，其特征在于，所述刺激因子对内皮祖细胞扩增作用具体通过高密度脂蛋白，促进局部缺血组织的血管生成，其机制是通过三磷酸肌醇途径通路直接刺激EPC增殖。
5.如权利要求1所述的内皮祖细胞快速扩增体系，其特征在于，所述刺激因子对内皮祖细胞扩增作用具体可通过运动、缺氧、血管流切力、某些疾病状态都能刺激体内EPCs的快速增殖。
6.如权利要求4所述的内皮祖细胞快速扩增体系，其特征在于，所述转基因对内皮祖细胞扩增作用具体为转导VEGF对EPC增殖。
7.如权利要求1所述的内皮祖细胞快速扩增体系，其特征在于，所述的内皮祖细胞通过以下方法获得：
步骤一、将多能干细胞于第一培养基中诱导分化形成中内胚层前体细胞；
步骤二、将所述中内胚层前体细胞于第二培养基中诱导分化形成血管内皮细胞祖细胞；
步骤三、进行血管内皮细胞祖细胞集落数及细胞功能的鉴定：鉴定细胞形态、功能及细胞表面分子的表达。
8.如权利要求7所述的内皮祖细胞快速扩增体系，其特征在于，所述的第一培养基含有DMEM培养基、F12培养基、硒酸钠、碳酸氢钠、维生素C、胰岛素、激活素A、骨形成蛋白4、糖原合成酶激酶-3抑制剂；所述培养基B含有DMEM培养基、F12培养基、硒酸钠、碳酸氢钠、维生素C、胰岛素、血管内皮生长因子和转化生长因子β信号通路抑制剂。
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