CN105566416A - 一种高纯度黄芩苷的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种高纯度黄芩苷的制备方法，属于天然产物化学技术领域。包括如下步骤：1)取黄芩苷粗品，加入二甲基亚砜和低碳醇的混合溶剂中，搅拌加热至30～70℃溶解，得黄芩苷溶液，其中，黄芩苷粗品、二甲基亚砜和低碳醇的加入量的质量比为1:(0.8-3):(0～2)；2)过滤，除去不溶性杂质，收集滤液；3)向所述步骤2)的滤液中再加入低碳醇，低碳醇的加入量与黄芩苷粗品的质量比为(3-10):1，不断搅拌下，搅拌加热至50-90℃，生成黄色沉淀，保温0.5-3小时；4)冷却，过滤，低碳醇洗涤、干燥，得到黄色粉末，即得。本发明操作条件温和，未使用高沸点的二类溶剂，方便残留溶剂的后续处理，适合规模化生产。

Description

一种高纯度黄芩苷的制备方法

技术领域

本发明涉及天然产物化学技术领域，尤其涉及一种高纯度黄芩苷的制备方法。

背景技术

黄芩苷是常用中药黄芩的主要药用成分，具有抗炎、抗病毒、抗肿瘤、抗变态、降血脂及降压等活性，还具有抗氧化、清除氧自由基的功效，能抑制黑色素的生成。高纯度黄芩苷在临床上用于肺炎、肝炎、感染等疾病的治疗，也常常用作保健品、美容化妆品的原料。

黄芩苷为一连有葡萄糖醛酸结构的黄酮衍生物，水解后产生黄芩素和葡萄糖醛酸。黄芩苷的分子结构如下：

黄芩苷pKa值为5.047，为弱酸性药物。黄芩苷在趋碱性溶液中极不稳定，在强酸性水溶液中也容易水解，而在有机溶剂中的稳定性较好。

黄芩苷的提取工艺通常为水溶液中的酸碱工艺，该工艺由于酸化时快速形成很细的黄芩苷无定形结晶，夹带了大量的杂质，难以达到很高的纯度。高纯度的黄芩苷通常需要在有机溶剂中制取，目前黄芩苷的纯化以酸碱处理工艺和树脂吸脱为主，如：

2008年北京中医药大学王庆国等(CN101475618A)公开了一种注射用黄芩苷的精制方法，通过加热碱溶、过滤、酸化、过滤、洗涤等工艺，得到纯度在92％以上的黄芩苷。2009年贾继明等(CN200910075217.8)公开了一种黄芩苷粗品的精制方法，采用乙醇、盐酸、氢氧化钠及去离子水分步除去不同极性的杂质，得到纯度98％以上的黄芩苷。

2011年沈阳药科大学邱峰等(CN102584918)公开了一种制备高纯度黄芩苷的方法以大孔吸附树脂吸附，0-30％的乙醇水洗脱除掉杂质，继续用40-60％的乙醇水洗脱，洗脱液减压浓缩后冷冻干燥，得到黄芩苷含量大于80％的粗品，该粗品用乙醇/水/乙酸溶剂系统在进行重结晶，得到的产品为淡黄色，经高效液相检测，纯度在98％以上。

2013年南京通泽农业科技有限公司杨存(CN103450298)发明了一种从黄芩中提取黄芩苷的新方法提取液经大孔吸附树脂柱吸附，水洗树脂柱至无糖色，再加入乙醇洗脱有效成分，收集洗脱液，减压浓缩，浓缩液放置结晶，滤除粗结晶，乙醇重结晶2次，得到纯度在96％以上的黄芩苷。

2014年山西大学张立伟等(CN104356185)发明了一种快速高效提取黄芩苷的方法，采用离子液提取，具有溶剂沸点高，并抑制水解酶活性的特点。

2015年山东中医药研究院的于蓓蓓等(CN104610401)发明了一种从黄芩中同时提取黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素的方法，将提取浓缩液经大孔树脂吸附，以乙醇溶液分步洗脱得到不同组分，经后处理得到的黄芩苷含量大于95％。

上述黄芩苷的制备工艺普遍存在以下缺点:(1)强酸强碱以及加热条件的联合应用，容易在生产过程中造成黄芩苷的进一步水解，产率及纯度都受到影响。并且强腐蚀性的酸碱对原料储运、生产操作等设备和工艺都有更严苛的要求。(2)水中及醇中形成的黄芩苷沉淀为非常细的无定形结晶，容易和溶剂形成糊状物，过滤操作非常繁琐。(3)树脂吸附效率不高，通常也要配合溶剂结晶处理，不易实现规模化生产。(4)处理规模小，不适合工业生产的要求。

申请人之前的中国专利申请CN104650165A公开了一种通过加入酰胺溶剂将黄芩苷溶解，并通过醇类稀释，通过两次晶型转化获得高纯度黄芩苷的方法，虽然无需采用树脂吸附，能够实现规模化生产，但仍然需要进行两次结晶转化，仍然要进行多次过滤操作才能获得高纯度黄芩苷，且医药工业中酰胺溶剂通常为高沸点二类溶剂，溶剂残留去除工序较复杂。因此，操作方法和溶剂选择仍需优化。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种操作条件温和，避免黄芩苷二次水解，无需采用树脂吸附，能够实现规模化生产且方便残留溶剂的后续处理的高效节能、工艺简单的高纯度黄芩苷的制备方法。

为解决上述技术问题，本发明提供技术方案如下：

一方面，提供一种高纯度黄芩苷的制备方法，包括如下步骤：

1)取黄芩苷粗品，加入二甲基亚砜和低碳醇的混合溶剂中，搅拌加热至30～70℃溶解，得黄芩苷溶液，其中，黄芩苷粗品、二甲基亚砜和低碳醇的加入量的质量比为1:(0.8-3):(0～2)；

2)过滤，除去不溶性杂质，收集滤液；

3)向所述步骤2)的滤液中再加入低碳醇，低碳醇的加入量与黄芩苷粗品的质量比为(3-10):1，不断搅拌下，搅拌加热至50-90℃，生成黄色沉淀，保温0.5-3小时；

4)冷却，过滤，低碳醇洗涤、干燥，得到黄色粉末，即得所述高纯度黄芩苷。

本发明的黄芩苷粗品是指质量百分含量在85％以下的黄芩苷，高纯度的黄芩苷产品是指经高效液相色谱法测定纯度在97％以上。

本发明采用二甲基亚砜溶解黄芩苷粗品，利用低碳醇降低了溶液的粘度，便于过滤，以除去不溶性性杂质以及活性炭吸附分离，通过醇类的稀释，于高温下，形成粉状的黄色结晶，冷却，过滤，洗涤、干燥得到粉状的黄色结晶，不需要进行两次结晶转化即得高纯度的黄芩苷，而且本发明使用的二甲基亚砜为三类溶剂，未使用高沸点的二类溶剂(如酰胺类)，方便残留溶剂的后续处理，更有利于临床应用；本发明操作条件温和，不用强酸，避免了黄芩苷的二次水解，降低对设备的腐蚀；本发明制备的黄芩苷结晶颗粒大，容易过滤，无需采用树脂吸附，可以处理大量样品，适合规模化生产；本发明制备的黄芩苷不仅收率高、纯度高，而且工艺简单，生产成本低，适于广泛推广。

进一步地，所述步骤1)中，所述黄芩苷粗品、二甲基亚砜和低碳醇的质量比为1:(1-2.5):(0～1.5)。三者合适的比例才能在保证黄芩苷充分溶解的基础上除去其它杂质。

优选地，所述步骤1)中，所述黄芩苷粗品、二甲基亚砜和低碳醇的质量比为1:(1-1.5):(0.5～0.8)。三者合适的比例才能在保证黄芩苷充分溶解的基础上除去其它杂质。

进一步地，所述步骤3)中，搅拌加热温度为70-80℃，保温时间为1-1.5小时。

进一步地，所述步骤1)中的低碳醇为甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇中的一种或多种。

进一步地，所述步骤3)中，所述低碳醇的加入量与黄芩苷粗品的质量比为(4-8):1。

进一步地，所述步骤3)中的低碳醇为甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇中的一种或多种。

优选地，所述步骤4)中的低碳醇为甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇中的一种或多种。

综上所述，本发明的有益效果表现为：

1)本发明采用二甲基亚砜溶解黄芩苷粗品，利用低碳醇降低了溶液的粘度，便于过滤，以除去不溶性性杂质以及活性炭吸附分离，通过低碳醇的稀释，于高温下，形成粉状的黄色结晶，经过冷却，过滤，洗涤、干燥得到粉状的黄色结晶，不需要进行两次结晶转化即得高纯度的黄芩苷；而且本发明使用的二甲基亚砜为三类溶剂，未使用高沸点的二类溶剂(如酰胺类)，方便残留溶剂的后续处理，更有利于临床应用；

2)本发明操作条件温和，不用强酸，避免了黄芩苷的二次水解，降低对设备的腐蚀；

3)本发明制备的黄芩苷结晶颗粒大，容易过滤，无需采用树脂吸附，可以处理大量样品，适合规模化生产；

4)本发明制备的黄芩苷不仅收率高、纯度高，而且工艺简单，生产成本低，适于广泛推广。

附图说明

图1为本发明实施例一制备的黄芩苷的液相图谱；

图2为本发明实施例二制备的黄芩苷的液相图谱；

图3为本发明实施例三制备的黄芩苷的液相图谱；

图4为本发明实施例四制备的黄芩苷的液相图谱；

图5为本发明实施例八制备的黄芩苷的液相图谱；

图6为对比例一制备的黄芩苷的液相图谱；

图7为对比例二制备的黄芩苷的液相图谱。

具体实施方式

为使本发明的实施例要解决的技术问题、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图及具体实施例进行详细描述。但本发明绝非限于这些例子。以下所述仅为本发明较好的实施例，仅仅用以解释本发明，并不能因此而理解为本发明专利范围的限制。应当指出的是，凡在本发明的精神和原则之内所做的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

实施例一：高纯度黄芩苷的制备

1)取黄芩苷粗品100.0g(含量83％)，加入到二甲基亚砜(DMSO)110g和甲醇200g的混合溶剂中，搅拌加热至60℃溶解，得黄芩苷溶液；

2)过滤除去不溶性杂质；

3)滤液中再加入甲醇1000g。

4)搅拌加热至回流，生成黄色沉淀，保温1小时；

5)冷却，过滤，甲醇洗涤、干燥，得到产品75.2g。

黄芩苷的HPLC测定方法为：等度洗脱，检测波长280nm，柱温25℃，流动相:甲醇-0.2％磷酸水溶液(47:53)，十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂。HPLC测定方法按照黄芩苷标准(标准号WS-10001-(HD-0989)-2002)检测，出处《化学药品地方标准上升国家标准(第十册)》D10-239。

制备的黄芩苷的液相图谱见图1，其HPLC测定含量为：99.1％。

实施例二：高纯度黄芩苷的制备

1)取黄芩苷粗品100.0g(含量83％)，加入到二甲基亚砜(DMSO)100g和乙醇50g的混合溶剂中，搅拌加热至70℃溶解，得黄芩苷溶液；

2)过滤除去不溶性杂质；

3)滤液中再加入乙醇400g。

4)搅拌加热至回流，生成黄色沉淀，保温1.5小时；

5)冷却，过滤，甲醇洗涤、干燥，得到产品78.5g。。

黄芩苷的测定方法参考实施例一，其液相图谱见图2，HPLC测定含量为：98.7％。

实施例三：高纯度黄芩苷的制备

1)取黄芩苷粗品100.0g(含量83％)，加入到二甲基亚砜(DMSO)250g和异丙醇150g的混合溶剂中，搅拌加热至90℃溶解，得黄芩苷溶液；

2)过滤除去不溶性杂质；

3)滤液中再加入异丙醇800g。

4)搅拌加热至回流，生成黄色沉淀，保温0.5小时；

5)冷却，过滤，乙醇洗涤、干燥，得到产品78.9g。

黄芩苷的测定方法参考实施例一，其液相图谱见图3，HPLC测定含量为：97.6％。

实施例四：高纯度黄芩苷的制备

1)取黄芩苷粗品100.0g(含量83％)，加入到二甲基亚砜(DMSO)150g和95％乙醇80g的混合溶剂中，搅拌加热至80℃溶解，得黄芩苷溶液；

2)过滤除去不溶性杂质；

3)滤液中再加入95％乙醇800g。

4)搅拌加热至回流，生成黄色沉淀，保温1小时；

5)冷却，过滤，95％乙醇洗涤、干燥，得到产品75.8g。

黄芩苷的测定方法参考实施例一，其液相图谱见图4，HPLC测定含量为：98.9％。

实施例五：高纯度黄芩苷的制备

1)取黄芩苷粗品100.0g(含量83％)，加入到二甲基亚砜(DMSO)80g和乙醇80g的混合溶剂中，搅拌加热至70℃溶解，得黄芩苷溶液；

2)过滤除去不溶性杂质；

3)滤液中再加入甲醇300g。

4)搅拌加热至回流，生成黄色沉淀，保温3小时；

5)冷却，过滤，乙醇洗涤、干燥，得到产品81.6g。

黄芩苷的测定方法参考实施例一，其液相图谱未示出，HPLC测定含量为：97.9％。

实施例六：高纯度黄芩苷的制备

1)取黄芩苷粗品100.0g(含量83％)，加入到二甲基亚砜(DMSO)110g、乙醇70g和甲醇80g的混合溶剂中，搅拌加热至50℃溶解，得黄芩苷溶液；

2)过滤除去不溶性杂质；

3)滤液中再加入异丙醇800g。

4)搅拌加热至回流，生成黄色沉淀，保温1小时；

5)冷却，过滤，丙醇洗涤、干燥，得到产品78.0g。

黄芩苷的测定方法参考实施例一，其液相图谱未示出，HPLC测定含量为：97.6％。

实施例七：高纯度黄芩苷的制备

1)取黄芩苷粗品100.0g(含量81％)，加入到二甲基亚砜(DMSO)150g中，搅拌加热至40℃溶解，得黄芩苷溶液；

2)过滤除去不溶性杂质；

3)滤液中再加入甲醇200g、乙醇200g和丙醇400g。

4)搅拌加热至回流，生成黄色沉淀，保温1小时；

5)冷却，过滤，95％乙醇洗涤、干燥，得到产品78.2g。

黄芩苷的测定方法参考实施例一，其液相图谱未示出，HPLC测定含量为：98.3％。

实施例八：高纯度黄芩苷的工业化制备

1)取黄芩苷粗品100.0Kg(含量81％)，加入到二甲基亚砜(DMSO)110Kg和乙醇70Kg的混合溶剂中，搅拌加热至60℃溶解，得黄芩苷溶液；

2)过滤除去不溶性杂质；

3)滤液中再加入乙醇800Kg。

4)搅拌加热至回流，生成黄色沉淀，保温1小时；

5)冷却，过滤，洗涤、干燥，得到产品75.2Kg。

黄芩苷的测定方法参考实施例一，其液相图谱见图5，HPLC测定含量为：98.6％。

对比例一(在先申请CN104650165A的实施例3)

按照以下方法制备黄芩苷：

1)取黄芩苷粗品100.0g(含量81％)，加入二甲基甲酰胺(DMF)130ml，常温搅拌溶解；

2)加入异丙醇200g，搅拌10分钟，过滤除去不溶性杂质；

3)滤液中加入异丙醇800g，搅匀后室温放置，黄芩苷慢慢形成结晶；

4)过滤，以异丙醇-DMF混合溶剂(10:1)(W/W)洗涤，得棕色结晶；

5)棕色结晶加异丙醇1000g，搅拌1小时，过滤，以异丙醇洗涤，得到浅黄色粉末状物质。所得粉状物质干燥，得到产品71.5g。

黄芩苷的测定方法参考实施例一，其液相图谱见图6，HPLC测定含量为：98.8％。

对比例二

1)取黄芩苷粗品100.0g(含量81％)，加入二甲基甲酰胺(DMF)130ml，常温搅拌溶解；

2)加入异丙醇200g，搅拌10分钟，过滤除去不溶性杂质；

3)滤液中加入异丙醇1000g，搅匀加热至回流1小时，黄芩苷慢慢形成黄色结晶；

4)冷却至室温，过滤，以异丙醇洗涤，得到黄色粉末状物质。所得粉状物质干燥，得到产品61.2g。

黄芩苷的测定方法参考实施例一，其液相图谱见图7，HPLC测定含量为：92.7％。

通过对本发明制备的黄芩苷的产量和纯度进行测定，可知，本发明制备的黄芩苷的纯度均在97.1％以上，例如实施例五的产量为81.6g，而对比例一(即在先申请CN104650165A产量最高的实施例3)的产量仅71.5g，虽然对比例一的纯度也较高，但本发明的制备工艺更加简单，不需要二次结晶转化且产量更高，而且因为选择二甲基亚风作为溶剂，未使用高沸点的二类溶剂，对于残留溶剂的处理更加方便，而酰胺类的溶剂若不进行二次结晶转化，产量和纯度均不太高。如对比例二的产量为61.2g，纯度不足93％，说明二甲基亚砜在溶解制备黄芩苷的过程中与酰胺类有极大不同。

本发明制备的高纯度黄芩苷的纯度在97％以上，本发明采用二甲基亚砜溶解黄芩苷粗品，利用低碳醇降低了溶液的粘度，便于过滤，以除去不溶性性杂质以及活性炭吸附分离，通过醇类的稀释，于高温下，形成粉状的黄色结晶，冷却，过滤，洗涤、干燥得到粉状的黄色结晶，不需要进行两次结晶转化即得高纯度的黄芩苷；，而且本发明使用的二甲基亚砜为三类溶剂，未使用高沸点的二类溶剂(如酰胺类)，方便残留溶剂的后续处理，更有利于临床应用；本发明操作条件温和，不用强酸，避免了黄芩苷的二次水解，降低对设备的腐蚀；本发明制备的黄芩苷结晶颗粒大，容易过滤，无需采用树脂吸附，可以处理大量样品，适合规模化生产；本发明制备的黄芩苷不仅收率高、纯度高，而且工艺简单，生产成本低，适于广泛推广。

以上所述是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明所述原理的前提下，还可以作出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (8)

1.一种高纯度黄芩苷的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)取黄芩苷粗品，加入二甲基亚砜和低碳醇的混合溶剂中，搅拌加热至30～70℃溶解，得黄芩苷溶液，其中，黄芩苷粗品、二甲基亚砜和低碳醇的加入量的质量比为1:(0.8-3):(0～2)；

2)过滤，除去不溶性杂质，收集滤液；

3)向所述步骤2)的滤液中再加入低碳醇，低碳醇的加入量与黄芩苷粗品的质量比为(3-10):1，不断搅拌下，加热至50-90℃，生成黄色沉淀，保温0.5-3小时；

4)冷却，过滤，低碳醇洗涤、干燥，得到黄色粉末，即得所述高纯度黄芩苷。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤1)中，所述黄芩苷粗品、二甲基亚砜和低碳醇的质量比为1:(1-2.5):(0～1.5)。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤1)中，所述黄芩苷粗品、二甲基亚砜和低碳醇的质量比为1:(1-1.5):(0.5～0.8)。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤3)中，搅拌加热温度为70-80℃，保温时间为1-1.5小时。

5.根据权利要求1至4任一所述的制备方法，其特征在于，所述步骤1)中的低碳醇为甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇中的一种或多种。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤3)中，所述低碳醇的加入量与黄芩苷粗品的质量比为(4-8):1。

7.根据权利要求1至6任一所述的制备方法，其特征在于，所述步骤3)中的低碳醇为甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇中的一种或多种。

8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤4)中的低碳醇为甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇中的一种或多种。