CN105560178B - 一种还原敏感型多肽前药纳米胶束及其制备与应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种还原敏感型多肽前药纳米胶束及其制备与应用,所述纳米胶束以疏水药物为内核,以细胞穿膜肽为壳层,所述内核与壳层通过还原敏感型双硫键连接;本发明设计出了一种较为简便、通用的将两种不同性质的模块化分子结合起来的方法,即将疏水性药物通过具有还原敏感的双硫键连接上炔基,再合成末端带有叠氮的功能性多肽化合物,最后通过Click反应,制备出具有还原敏感型多肽前药纳米胶束。以本发明为例,在温和的条件下,通过Click反应制备出具有多种功能性的前药纳米胶束,且从前药的释药情况看,在不同体外条件下前药表现出良好的环境响应性。
Description
(一)技术领域
本发明涉及一种生物医药纳米材料制备,特别涉及一种多肽前药纳米胶束的制备方法。
(二)背景技术
智能响应型载药系统在癌症治疗中越来越引起人们的关注。载药系统根据外界因素的变化如温度、pH和场效应等,自发做出响应,从而达到人们预期可控的治疗效果。
还原型谷胱甘肽(GSH)是动物细胞内含量最丰富的含有巯基的生物小分子,还原型谷胱甘肽(GSH)和氧化型谷胱甘肽(GSSG)是体内最主要的氧化还原对。在细胞内外不同的环境中GSH/GSSG的含量存在显著的差异。由于还原型辅酶II(NADPH)利谷胱甘肽还原酶的作用,细胞内GSH浓度是细胞外环境的100-1000倍,从而使细胞内环境保持较强的还原性。此外,研究发现,肿瘤组织中GSH浓度比正常组织至少高4倍,因此,比正常组织有更高的还原性。
多肽分子是基体内重要的一类生物活性物质。与蛋白质比较,具有分子量小,制备容易,抗原性弱,毒副作用小等优点,在医药研究和临床应用上越来越受到重视。由于小片段肽的低毒性、靶向性、无免疫原性、良好的生物相容性以及本身的治疗作用等特点,同时肿瘤细胞表面高表达肽类受体的发现,使得一些短肽可被作为导向物,以配体-受体特异性结合的方式应用于靶向药物递送系统。利用肽与其受体的特异性结合特性,将肽与药物结合形成复合物,增加药物在体内的选择性,减少药物的毒副作用,为提高药物的治疗提供了可能性,显示了良好的研究价值和应用前景。
点击化学(Click Chemistry)由化学家巴里·夏普莱斯在2001年引入的一个合成概念,主旨是通过小单元的拼接,来快速可靠地完成形形色色的分子的化学合成。叠氮与炔基的这类反应属于点击化学的范畴,其操作简单,条件温和,对氧气和水不敏感,反应具有立体选择性,反应效率高,副产物少,在生理条件下稳定。
药物载体的制备过程,通常较为复杂、繁琐,副产物较多而且很难除去。借助点击化学反应,可以实现简便而又高效的制备药物载体。在制备治疗癌症的前药过程中,采用Click反应可以快速高效的将两种不同性质的模块化分子结合起来。
(三)发明内容
本发明目的是克服背景技术存在的问题和缺陷,提供一种制备还原敏感型多肽前药的方法,现有药物载体的制备过程,通常较为复杂、繁琐,副产物较多而且很难除去。本发明借助点击化学反应,可以实现简便而又高效的制备药物载体,即不同种类的药物分子与不同种类的多肽化合物通过叠氮与炔基的环化实现不同特性化合物的高效键合,以制备具有不同功能性的多肽前药。所制备的多肽前药具有环境刺激响应性,可以提高治疗效率,降低治疗的毒副作用。
本发明采用的技术方案是:
本发明提供一种还原敏感型多肽前药纳米胶束,所述纳米胶束以疏水药物为内核,以细胞穿膜肽为壳层,所述内核与壳层通过还原敏感型双硫键连接;所述还原敏感型多肽前药纳米胶束结构通式为:K10-triazole-SS-DOX,K10为细胞穿膜肽序列,triazole为叠氮与炔基环化后的三唑五元环,DOX为疏水药物,SS为连接细胞穿膜肽序列与疏水药物的还原敏感型双硫键。
进一步,所述细胞穿膜肽由8~30个碱性氨基酸缩合而成,优选10个氨基酸。
进一步,所述氨基酸包括赖氨酸、精氨酸或组氨酸,优选赖氨酸。
进一步,所述疏水药物包括阿霉素(DOX)、喜树碱或紫杉醇,优选阿霉素。
本发明还提供一种所述还原敏感型多肽前药纳米胶束的制备方法,所述方法为:(1)DOX-SS-alkyne:将疏水药物溶解在二甲基甲酰胺(DMF)中,加入三乙胺、二硫代酸酐,20℃~70℃搅拌0.1h~4h后(优选25℃搅拌反应22min),再加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC)、N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)和丙炔胺,室温避光搅拌混匀,将混合液用去离子水沉淀,离心,沉淀干燥,得到DOX-SS-alkyne;所述疏水药物与二硫代二丙酸酐、三乙胺物质的量之比为1:0.5~1.5:1~1.2;所述疏水药物与1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐、N-羟基琥珀酰亚胺和丙炔胺的物质的量之比为1:2~4:2~4:4~6;所述二甲基甲酰胺体积用量以疏水药物物质的量计为100~130L/mol;(2)K10-triazole-SS-DOX:将步骤(1)制备的DOX-SS-alkyne和K10-N3加入二甲基甲酰胺中,在氮气保护下加入催化剂碘化亚铜,20℃~30℃反应完全后(优选25℃反应24h),将反应液用0.005~0.020mol/L(优选0.013mol/L)乙二胺四乙酸二钠水溶液作为透析液进行透析(优选透析袋(MWCO1000Da),通过乙二胺四乙酸二钠与过渡金属铜离子的络合作用,以除去铜离子),取截留液冷冻干燥,得到还原敏感型多肽前药纳米胶束K10-triazole-SS-DOX;所述K10-N3为末端连接叠氮的细胞穿膜肽序列;所述DOX-SS-alkyne与K10-N3物质的量之比为1:0.7~0.9;所述催化剂用量以DOX-SS-alkyne和K10-N3的物质的量之和计为1%-6%;所述二甲基甲酰胺体积用量以DOX-SS-alkyne质量计为10~50ml/g。
进一步,优选步骤(1)所述疏水药物与二硫代二丙酸酐、三乙胺物质的量之比为1:1~1.2:1~1.1(最优选1:0.96:1.03);所述疏水药物与1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐、N-羟基琥珀酰亚胺和丙炔胺的物质的量之比为1:3~4:3~4:4.5~5.5(最优选1:3.5:3.5:4.8)。
进一步,优选步骤(2)所述DOX-SS-alkyne与K10-N3物质的量之比为1:0.8~0.9(最优选1:0.83);所述催化剂用量以DOX-SS-alkyne和K10-N3物质的量之和计为3%-5%(最优选4.5%)。
进一步,优选步骤(2)所述K10-N3通过FMOC多肽方法合成:先合成侧链带有保护基的多肽序列,继而利用同样的方法加入氨基受FMOC保护之后的12-氨基十二酸,脱去12-氨基十二酸上的FMOC后,暴露出活性氨基,再加入叠氮乙酸,最后通过多肽固相合成方法合成K10-N3,具体步骤是:
(1)取树脂于DMF中,搅拌、静置溶胀,之后,抽干树脂并用DMF洗涤,所述DMF的用量以树脂质量计为12~16ml/g。
(2)称取氨基受保护的赖氨酸Fmoc-Lys(Boc)-OH、N,N-二异丙基乙胺(DIEA)溶于DMF,向树脂加入后搅拌,反应完成,抽干树脂并用DMF洗涤。所述树脂上活性点与Fmoc-Lys(Boc)-OH、DIEA的物质量之比为1:0.6~0.8:0.012~0.015;DMF的用量以树脂质量计为10ml~13ml/g。
(3)向树脂中加入DMF、MeOH和DIEA的混合液,反应完成之后,抽干树脂并用DMF洗涤。完成对未反应活性Cl的封端。所述DMF的量以树脂质量计为4~10ml/g,MeOH的量以树脂质量计为2~5ml/g,DIEA的量以树脂质量计为0.06~1.5ml/g。
(4)向树脂中加入哌啶、DMF的混合液,反应完成后,抽干树脂并用DMF洗涤。完成FMOC保护基的脱除。所述DMF的量以树脂质量计为2.5~10ml/g,哌啶的量以树脂质量计为15~22ml/g。
(5)固相合成下一个赖氨酸:配制Fmoc-Lys(Boc)-OH、O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸盐(HBTU)、1-羟基苯并三唑(HOBT)、DIEA的DMF混合液。向树脂中加入混合液,搅拌反应之后,抽干树脂并用DMF洗涤。所述树脂上活性点与Fmoc-Lys(Boc)-OH、HBTU、HOBT的物质量之比为1:3~5:7~9:7~9;DIEA的量以树脂质量计为1.5~2ml/g,DMF的量以树脂质量计为2.5~10ml/g。
(6)茚三酮检测:取微量树脂与试管中,加入茚三酮甲醇溶液(茚三酮质量浓度1%~5%),加热试管。如果茚三酮变成蓝紫色,则说明第(5)步反应中还有游离的氨基,须重复第(5)步,直到茚三酮检测时,颜色不变。
重复(4)、(5)、(6)步骤完成10肽赖氨酸的合成。
再合成FMOC保护的12氨基十二酸(FMOC-ADDA)。具体步骤:取12氨基十二酸(ADDA),溶解于Na2CO3水溶液中,在-1℃~3℃条件下逐渐滴加二氧六环的FMOC-Cl溶液,撤去冰浴,常温反应3h~6h。旋转蒸发出去溶剂后,加入去离子水,用盐酸调节溶液pH至1~4左右。然后,利用乙酸乙酯萃取得到FMOC保护的ADDA。再经无水MgSO4干燥产物过夜,旋蒸得到粗产物,最后利用乙腈重结晶产物两次,得到纯度很高的FMOC-ADDA.所述ADDA与FMOC-cl的物质量之比为1:1~3.Na2CO3水溶液的质量分数为8%~12%,Na2CO3水溶液的量以ADDA的质量计为22~26ml/g,二氧六环的量以FMOC-cl的质量计为6~8ml/g。
最后合成叠氮乙酸:在低温条件下,向水相中加入叠氮化钠,溶解完成后,再向溶液中逐渐滴加溴乙酸,冰浴反应24~36h。反应结束后,再用稀盐酸调节体系pH值至1~3,用乙醚萃取,得到产物。无水MgSO4干燥产物过夜,旋蒸浓缩得到叠氮乙酸。所述叠氮化钠与溴乙酸的物质量之比为1:1~2,所述水的量以叠氮化钠的质量计为10-15ml/g。
配制FMOC-ADDA、HBTU、HOBT、DIEA的DMF混合液,向树脂中加入混合液,反应1h-2h后,抽干树脂并洗涤。所述树脂上活性点与FMOC-ADDA、HBTU、HOBT的物质量之比为1:3~5:7~9:7~9,DIEA的量以树脂质量计为1.5~2ml/g,DMF的量以树脂质量计为2.5~10ml/g。
重复第(4)步,之后,配制叠氮乙酸、HBTU、HOBT、DIEA的DMF混合液,向树脂中加入混合液,抽干树脂并洗涤。
再重复第(5)步和第(6)步,直到检验合格。
接着脱去赖氨酸侧基保护基BOC,同时将产物从树脂上切除。步骤为,先配制切落剂。向树脂中加入一定量的切落剂,反应完成后,抽干树脂并用甲醇洗涤。收集最终的混合液,旋蒸混合液,并用冰乙醚沉淀,得到产物,最后真空干燥。所述切落剂:三异丙基硅烷与水、三氟乙酸的体积比为1:1~2:35~40,切落剂的量以树脂质量计为13~16ml/g。
至此完成了末端带有叠氮的多肽化合物K10-N3的合成。
本发明还涉及一种所述还原敏感型多肽前药纳米胶束在制备肿瘤靶向药物中的应用。
本发明将疏水性药物通过具有还原敏感的双硫键连接上炔基,然后,通过多肽固相合成的方法制备了末端带有叠氮的多肽化合物,最后在催化剂的作用下,通过叠氮与炔基的Click反应制备了一种具有还原敏感的还原敏感型多肽前药纳米胶束。所述的多肽前药纳米胶束具有还原敏感型指的是分子中含有的双硫键可在还原剂的作用下断裂,而在肿瘤细胞内部,存在有大量的还原性谷胱甘肽,所以当前药纳米胶束被动靶向到肿瘤组织时,在还原性谷胱甘肽的作用下双硫断裂,释放出抗癌药物DOX,从而能明显增加药物在肿瘤部位的浓度,提高其生物利用度和治疗效率,减少其毒副作用。
与现有技术相比,本发明有益效果主要体现在:本发明设计出了一种较为简便、通用的将两种不同性质的模块化分子结合起来的方法,即将疏水性药物通过具有还原敏感的双硫键连接上炔基,再合成末端带有叠氮的功能性多肽化合物,最后通过Click反应,制备出具有还原敏感型多肽前药纳米胶束。以本发明为例,在温和的条件下,通过Click反应制备出具有多种功能性的前药纳米胶束,且从前药的释药情况看,在不同体外条件下前药表现出良好的环境响应性。
(四)附图说明
图1为本发明实施例的DOX-SS-alkyne质谱图;
图2为本发明实施例的K10-N3分子质谱图;
图3为本发明实施例的K10-triazole-SS-DOX合成示意图;
图4为本发明实施例的多肽前药纳米胶束的傅里叶红外光谱图;
图5为本发明实施例的多肽前药纳米胶束的透射电子显微镜(TEM)表征;
图6为本发明实施例的多肽前药纳米胶束的体外释药动力学曲线。
(五)具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述,但本发明的保护范围并不仅限于此:
实施例1 DOX-SS-alkyne的制备
将盐酸阿霉素72.2g(0.135mmol)溶解在DMF 15ml(0.2mol)中,加入21μl(0.14mmol)三乙胺,再加入环化的二硫代二丙酸酐(DTDPA)26mg(0.13mmol)。25℃搅拌22分钟后,陆续加入0.48mmol 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC)、0.48mmolN-羟基琥珀酰亚胺(NHS)以及44.7μl(0.65)mmol丙炔胺。室温搅拌4h,注意避光。将上述混合液用去离子水沉淀得到产物,最后,经离心、干燥得到DOX-SS-alkyne。图1为DOX-SS-alkyne的质谱图。
实施例2 K10-N3的制备
所述的多肽固相合成末端带有叠氮的多肽化合物的具体步骤是,多肽固相合成采用FMOC保护策略,首先合成侧链受BOC保护的10肽赖氨酸,具体步骤是:
(1)取0.8g2-氯三苯甲基氯树脂加入10ml DMF后,25℃搅拌15min,再静置溶胀30min,之后,抽干树脂并用DMF洗涤。
(2)称取0.29g氨基受保护的赖氨酸Fmoc-Lys(Boc)-OH、2ml N,N-二异丙基乙胺(DIEA),溶于8ml DMF,加入步骤(1)树脂,25℃搅拌1.5h,抽滤,滤饼用DMF洗涤。其中Fmoc-Lys(Boc)-OH的摩尔量为所加树脂上活性Cl的60%。
(3)向步骤(2)滤饼中加入mol(DMF:MeOH:DIEA)=6:3:1的混合液20ml后,25℃反应1.5h,之后,抽滤,并用DMF洗涤。完成对未反应活性Cl的封端。
(4)向步骤(3)滤饼中加入V(哌啶:DMF)=1:4的混合液共20ml,每次加入10ml,每次搅拌20min,25℃反应完成后,抽滤,滤饼用DMF洗涤。完成FMOC保护基的脱除。
(5)固相合成下一个赖氨酸:配制2.5mmol Fmoc-Lys(Boc)-OH、5.9mmol O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸盐(HBTU)、5.9mmol 1-羟基苯并三唑(HOBT)、1.3ml DIEA的8mlDMF混合液。将混合液加入到树脂中,25℃搅拌反应2h,之后,抽滤,并用DMF洗涤。其中mol(Fmoc-Lys(Boc)-OH:HBTU:HOBT)=1:2.4:2.4)。
(6)茚三酮检测:取步骤(5)中微量树脂于试管中,加入0.5ml,20mg/ml的茚三酮甲醇溶液,加热试管80℃约2min。如果茚三酮变成蓝紫色,则说明第(5)步反应中还有游离的氨基,须重复第(5)步,直到茚三酮检测时,颜色不变。
重复(4)、(5)、(6)步骤完成10肽赖氨酸K10的合成。
再合成FMOC保护的12氨基十二酸(FMOC-ADDA)。具体步骤:取4.31g 12-氨基十二酸(ADDA),溶解于100ml,10%Na2CO3水溶液中,在-2℃条件下逐渐滴加40ml二氧六环的FMOC-Cl溶液(FMOC-Cl5.18g),撤去冰浴,常温反应4h。旋转蒸发出去溶剂后,加入去离子水,用盐酸调节溶液pH至3左右。然后,利用乙酸乙酯萃取得到FMOC保护的ADDA。再经无水MgSO4干燥产物过夜,旋蒸得到粗产物,最后利用乙腈重结晶产物两次,得到纯度很高的FMOC-ADDA。
最后合成叠氮乙酸:在低温条件下,向水相中加入13g叠氮化钠,溶解完成后,再向溶液中逐渐滴加13.9g溴乙酸,冰浴反应30h。反应结束后,再用稀盐酸调节体系pH值至2,用乙醚萃取,得到产物。无水MgSO4干燥产物过夜,旋蒸浓缩得到叠氮乙酸。
配制FMOC-ADDA 1.63g、HBTU 3.34g、HOBT 1.2g、DIEA 1.7ml的DMF混合液15ml,向树脂中加入混合液,反应2h后,抽干树脂并洗涤。
重复第(4)步,之后,配制叠氮乙酸0.34g、HBTU 3.34g、HOBT 1.2g、DIEA 1.7ml的DMF混合液15ml,向树脂中加入混合液,抽干树脂并洗涤。
再重复第(5)步和第(6)步,直到检验合格。
接着脱去赖氨酸侧基保护基BOC,同时将产物从树脂上切除。步骤为,先配制切落剂[V(三氟乙酸:N,N-二异丙基硅烷:水)=95:2.5:2.5]且1g原始树脂对应切落剂15ml。向树脂中加入一定量的切落剂,反应完成后,抽干树脂并用甲醇洗涤。收集最终的混合液,旋蒸混合液,并用冰乙醚沉淀,得到产物,最后真空干燥。
至此完成了K10-N3的合成。图2为K10-N3的质谱图。
实施例3还原敏感型多肽前药的制备
图3为本发明实施例的还原敏感型多肽前药纳米胶束合成示意图。其还原敏感型可以从图3中看出:分子中含有双硫键,其可以在癌症组织中还原性谷胱甘肽的作用下,双硫键断裂,释放药物。药物DOX本身作为疏水的内核,这样不仅提高了药物的利用率,也避免了一些非治疗分子的引入。亲水性外壳由10肽赖氨酸构成,其不仅有良好的亲水性,而且可以生物降解,无毒副作用。
本发明制备还原敏感型多肽前药的具体方法:
向1.2ml DMF中加入23.45mg(0.03mol)实施例1制备的DOX-SS-alkyne和40mg(0.025mol)实施例2制备的K10-N3,两者摩尔比为1.2:1,在氮气保护下加入0.48mg(0.0025mol)催化剂碘化亚铜。常温(25℃)反应24h,之后在含有8g(0.02mol)乙二胺四乙酸二钠的1.5L水中用MWCO(1000)的透析袋透析3天,最后取截留液-50℃冷冻干燥48h,得到还原敏感型多肽前药纳米胶束。图4为多肽前药纳米胶束的傅里叶红外光谱图;图5为多肽前药纳米胶束的透射电子显微镜(TEM)表征。从图中可以看出胶束粒径约为20~40nm,且粒径分布较为均匀。
实施例4还原敏感型多肽前药纳米胶束的体外释药动力学曲线
本次释药实验共分为4组不同条件下的实验组。将实施例3制备的还原敏感型多肽前药纳米胶束分别用pH为7.4、浓度为0.1M的PBS磷酸缓冲液配制4份1ml、0.8mg/ml前药溶液,于透析袋(MWCO(1000))中,将透析袋放于塑料管中并分别加入不同种类的缓冲液。组1加入二硫苏糖醇DTT(具有还原性)的PBS溶液5ml,DTT的浓度为10mmol/L,组2加入木瓜蛋白酶Papain(可降解多肽)的PBS溶液5ml,Papain活性浓度为20U/ml,组3加入DTT和Papain的PBS溶液5ml,DTT的终浓度为10mmol/L,Papain的活性终浓度为20U/ml,组4加入5ml pH7.4、0.1M的PBS。37℃条件下,在摇床上震荡,分别在0.5h、2h、12h之后取出透析袋外部的缓冲液并保存,再分别加入对应各自组别的PBS缓冲液5ml。再用分光光度计进行阿霉素的荧光检测,释放的DOX的量通过荧光分光光度计测定其在560nm处的荧光强度(激发波长为480nm),利用标准曲线计算,标准曲线:y=-0.096*x2+8.579*x-2.2517,其中y为荧光强度,x为释药浓度(单位:μg/ml)。如图6,较为清晰的看到在还原剂DTT的作用下,多肽前药具有较快的释药速度,而且在Papain存在时,释药效率更高。
Claims (6)
1.一种还原敏感型多肽前药纳米胶束,其特征在于所述纳米胶束以疏水药物为内核,以细胞穿膜肽为壳层,所述内核与壳层通过还原敏感型双硫键连接;所述还原敏感型多肽前药纳米胶束结构通式为:K10-triazole-SS-DOX,K10为细胞穿膜肽序列,triazole为叠氮与炔基环化后的三唑五元环,DOX为疏水药物,SS为连接细胞穿膜肽序列与疏水药物的还原敏感型双硫键;
所述还原敏感型多肽前药纳米胶束按如下方法制备:(1)DOX-SS-alkyne:将疏水药物溶解在二甲基甲酰胺中,加入三乙胺、二硫代二丙酸酐,20℃~70℃搅拌0.1h~4h后,再加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐、N-羟基琥珀酰亚胺和丙炔胺,室温避光搅拌混匀,将混合液用去离子水沉淀,离心,沉淀干燥,得到DOX-SS-alkyne;所述疏水药物与二硫代二丙酸酐、三乙胺物质的量之比为1:0.96:1.03;所述疏水药物与1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐、N-羟基琥珀酰亚胺和丙炔胺的物质的量之比为1:3.5:3.5:4.8;所述二甲基甲酰胺体积用量以疏水药物物质的量计为100~130L/mol;(2)K10-triazole-SS-DOX:将步骤(1)制备的DOX-SS-alkyne和K10-N3加入二甲基甲酰胺中,在氮气保护下加入催化剂碘化亚铜,20℃~30℃反应完全后,将反应液用0.005~0.02mol/L乙二胺四乙酸二钠水溶液作为透析液进行透析,取截留液冷冻干燥,得到还原敏感型多肽前药纳米胶束K10-triazole-SS-DOX;所述K10-N3为末端连接叠氮的细胞穿膜肽序列;所述DOX-SS-alkyne与K10-N3物质的量之比为1:0.83;所述催化剂用量以DOX-SS-alkyne和K10-N3的物质的量之和计为4.5%;所述二甲基甲酰胺体积用量以DOX-SS-alkyne物质的量计为40ml/mol。
2.如权利要求1所述还原敏感型多肽前药纳米胶束,其特征在于所述细胞穿膜肽由8~30个碱性氨基酸缩合而成。
3.如权利要求2所述还原敏感型多肽前药纳米胶束,其特征在于所述氨基酸包括赖氨酸、精氨酸或组氨酸。
4.如权利要求1所述还原敏感型多肽前药纳米胶束,其特征在于所述疏水药物包括阿霉素、喜树碱或紫杉醇。
5.如权利要求1所述还原敏感型多肽前药纳米胶束,其特征在于步骤(2)所述K10-N3通过FMOC多肽方法合成:先合成侧链带有保护基的多肽序列,继而利用同样的方法加入氨基受FMOC保护之后的12-氨基十二酸,脱去12-氨基十二酸上的FMOC后,暴露出活性氨基,再加入叠氮乙酸,最后获得K10-N3。
6.一种权利要求1所述还原敏感型多肽前药纳米胶束在制备肿瘤靶向药物中的应用。
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