CN105548575A - 检测lambda轻链含量的试剂盒、方法及用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种检测LAMBDA轻链含量的试剂盒,包括:试剂R1、试剂R2和LAMBDA轻链校准品;所述试剂R1包括:第一缓冲液、第一电解质、表面活性剂、第一稳定剂、高分子加速剂和第一防腐剂;所述试剂R2包括:第二缓冲液、抗人LAMBDA轻链抗体、第二电解质和第二防腐剂;所述LAMBDA校准品包括:第三缓冲液、第三稳定剂、第三防腐剂、抗氧化剂和LAMBDA轻链抗原。本发明还公开一种检测LAMBDA轻链含量的试剂盒在检测LAMBDA轻链含量中的用途以及一种采用检测LAMBDA轻链含量的试剂盒检测LAMBDA轻链含量的方法。本发明的试剂盒及检测方法,可简洁快速检测LAMBDA轻链含量。
Description
技术领域
本发明属于检测LAMBDA轻链含量的技术领域,具体涉及一种检测LAMBDA轻链含量的试剂盒、方法及用途。
背景技术
轻链(Lightchain,L)大约由214个氨基酸残基组成,通常不含碳水化合物,分子量约为24kD。每条轻链含有两个由链内二硫键所组成的环肽。L链共有两种类型:KAPPA(κ)与LAMBDA轻链(λ),同一个天然免疫球蛋白分子上L链的类型总是相同的。正常人血清中的κ:λ约为2:1。
细胞克隆的异常增生将导致单克隆球蛋白或游离免疫球蛋白片段(游离的轻链)的增加,这将造成κ与λ链的比例失衡,κ与λ的比值失常预示了单克隆Y球蛋白血症。在生成增加的情况下,游离轻链的滤过也增加,当超出肾小管的重吸收能力时,该测试可以定量检测结合及游离免疫球蛋白中的轻链。
定量检测不同种类的轻链含量有助于诊断巨球蛋白血症(巨型球蛋白生成增多)及结缔组织病(如类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮)等疾病。
此外,感染、急慢性肝炎、肝硬化等血中轻链也可增多,但一般均表现为κ、λ同时增多;肾病、糖尿病等患者尿也可出现κ、λ同时增多。
现有的LAMBDA检测技术存在诸多不足:如需要特殊的设备,样本需要预处理,不能上全自动生化分析仪进行批量检测分析等。酶联免疫法应用比较普遍,其原理是将特异性抗体与固相载体连接,形成固相抗体;洗涤除去未结合的抗体及杂质;加待测样品,使之与固相抗体反应一段时间,让样品中抗原与固相载体上的抗体结合;洗涤除去未结合的物质;加酶标抗体,使固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合;洗涤除去未结合的酶标抗体;此时固相载体上的酶量与样品中的待测物质的量正相关;加入底物反应显色。根据颜色反应的程度对测定物质进行定性或定量测定。该方法为非均相免疫检测系统,测定过程较为繁琐,耗时长,缺少单位测试运行时间;自动化程度不高,批间差和重复性相对较大;需要配备多种专门设备,一定程度上增加了成本。
随着样本检验数量的不断增加,临床上迫切需要一种更为简便、快捷的方法来进行规模化批量操作。免疫比浊法检测LAMBDA可直接在全自动生化分析仪上完成批量样本分析,操作简单、可实现快速、高通量样本的检测。
发明内容
本发明实施例的目的在于克服现有技术的上述不足,提供一种检测LAMBDA轻链含量的试剂盒,可以简洁快速地检测样本中LAMBDA轻链的含量,具有较高的准确度和很好的特异性。
本发明实施例的另一目的在于克服现有技术的上述不足,提供一种上述的检测LAMBDA轻链含量的试剂盒在检测LAMBDA轻链含量中的用途,可用于简洁快速地检测样本中LAMBDA轻链的含量,具有较高的准确度和很好的特异性。
本发明实施例的再一目的在于克服现有技术的上述不足,提供一种采用上述的检测LAMBDA轻链含量的试剂盒检测LAMBDA轻链含量的方法,可以简洁快速地检测样本中LAMBDA轻链的含量,具有较高的准确度和很好的特异性。
为了实现上述发明目的,本发明实施例的技术方案如下:
一种检测LAMBDA轻链含量的试剂盒,包括:试剂R1、试剂R2和LAMBDA轻链校准品;所述试剂R1包括:第一缓冲液5~600mmol/L、第一电解质5~60g/L、表面活性剂1~200g/L、第一稳定剂2~50g/L、高分子加速剂1~100g/L和第一防腐剂0.5~15g/L;所述试剂R2包括:第二缓冲液5~600mmol/L、抗人LAMBDA轻链抗体5~60%w/v、第二电解质5~60g/L和第二防腐剂0.5~15g/L;所述LAMBDA轻链校准品包括:第三缓冲液10~600mmol/L、第三稳定剂2~50g/L、第三防腐剂0.5~15g/L、抗氧化剂0.01~10g/L和LAMBDA轻链抗原。
进一步:所述第一缓冲液、所述第二缓冲液和所述第三缓冲液均选自磷酸盐PBS缓冲液、三羟甲基氨基甲烷TRIS缓冲液、硼酸缓冲液、甘氨酸缓冲液、3-(环己胺)-2-羟基-1-丙磺酸CAPSO缓冲液、4-羟乙基哌嗪乙磺酸HEPES缓冲液中的一种或几种;和/或,所述第一防腐剂、所述第二防腐剂和所述第三防腐剂均选自叠氮钠、苯酚、对羟基苯甲酸、对羟基苯甲酸乙酯和乙基汞硫代硫酸钠中的一种或几种;和/或,所述第一电解质和所述第二电解质均选自氯化钠、硫酸镁、氯化镁和氯化钾中的一种或几种;和/或,所述第一稳定剂和所述第三稳定剂均选自乙二胺四乙酸二钠、甘露糖醇、葡萄糖、海藻糖和牛血清蛋白中的一种或几种;和/或,所述表面活性剂选自Triton系列表面活性剂、Tween系列表面活性剂、月桂醚系列表面活性剂、聚氧乙烯烷基苯基醚、聚氧乙烯壬基苯基醚和聚氧乙烯辛基苯醚中的一种或几种;和/或,所述高分子加速剂选自聚乙二醇2000、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000和聚乙二醇8000中的一种或几种;和/或,所述抗人LAMBDA轻链抗体选自鼠抗人、兔抗人、羊抗人、鸡抗人和鸭抗人LAMBDA轻链抗体中的一种或几种;所述抗氧化剂选自丁基羟基茴香醚、二丁基羟基甲苯、苯多酚、甘草抗氧化物和硫代二丙酸二月桂酯中的一种或几种。
进一步:所述抗人LAMBDA轻链抗体为单克隆抗体和/或多克隆抗体。
进一步:所述第一缓冲液、所述第二缓冲液和所述第三缓冲液均为磷酸盐缓冲液;和/或,所述第一防腐剂、所述第二防腐剂和所述第三防腐剂均为叠氮钠;和/或,所述第一电解质和所述第二电解质均为氯化钠;和/或,所述第一稳定剂和所述第三稳定剂均为乙二胺四乙酸二钠;和/或,所述表面活性剂为聚氧乙烯月桂醚;和/或,所述高分子加速剂为聚乙二醇6000;和/或,所述抗人LAMBDA轻链抗体为羊抗人LAMBDA轻链单克隆抗体;和/或,所述抗氧化剂为丁基羟基茴香醚。
进一步,所述试剂R1包括:第一缓冲液20~400mmol/L、第一电解质6~45g/L、表面活性剂2~80g/L、第一稳定剂2~40g/L、高分子加速剂3~80g/L和第一防腐剂1.5~9g/L;所述试剂R2包括:第二缓冲液20~450mmol/L、抗人LAMBDA轻链抗体15~30%w/v、第二电解质6~48g/L和第二防腐剂1.5~9g/L;所述LAMBDA轻链校准品包括:第三缓冲液15~100mmol/L、第三稳定剂2~45g/L、第三防腐剂4~8.5g/L、抗氧化剂0.4~9g/L和LAMBDA轻链抗原。
进一步,所述试剂R1包括:第一缓冲液10~100mmol/L、第一电解质5~15g/L、表面活性剂1~50g/L、第一稳定剂5~15g/L、高分子加速剂50~100g/L和第一防腐剂1~5g/L;和/或,所述试剂R2包括:第二缓冲液10~100mmol/L、抗人LAMBDA轻链抗体5~60%w/v、第二电解质5~15g/L和第二防腐剂1~5g/L;和/或,所述LAMBDA轻链校准品包括:第三缓冲液10~100mmol/L、第三稳定剂5~15g/L、第三防腐剂1~5g/L、抗氧化剂0.01~0.8g/L和LAMBDA轻链抗原。
进一步,所述LAMBDA轻链校准品包括:第三缓冲液5~600mmol/L、第三稳定剂2~50g/L、第三防腐剂0.5~15g/L、抗氧化剂0.01~10g/L和LAMBDA轻链抗原0~1000mg/dL。
进一步:所述LAMBDA轻链校准品中,所述LAMBDA轻链抗原的浓度为0~800mg/dL。
一种如上所述的检测LAMBDA轻链含量的试剂盒在检测LAMBDA轻链含量中的用途。
以及,一种采用如上所述的检测LAMBDA轻链含量的试剂盒检测LAMBDA轻链含量的方法,包括:向待测样品中加入所述试剂R1,所述待测样品的体积为5μL,所述试剂R1的体积为250μL,得到第一混合液,并得到所述第一混合液的吸光度OD1;向所述第一混合液中加入所述试剂R2,所述试剂R2的体积为50μL,得到第二混合液,并得到所述第二混合液的吸光度OD2;使用所述LAMBDA轻链校准品得到标准曲线,根据所述吸光度OD1和所述吸光度OD2在所述标准曲线上得到所述待测样品中LAMBDA轻链的含量。
本发明实施例的有益效果如下:
1、本发明实施例的检测LAMBDA轻链含量的试剂盒,操作简单,使用简便快速,可简洁快速地检测样本中LAMBDA轻链的含量。
2、本发明实施例的检测LAMBDA轻链含量的试剂盒,能够满足临床快速高通量检测样本的要求,检测效率明显提高,在临床应用上具有广阔的前景。
3、本发明实施例的检测LAMBDA轻链含量的试剂盒,还具有特异性强、灵敏度高、重复性好、批间差异小、试剂稳定等优点。
4、本发明实施例的检测LAMBDA轻链含量的试剂盒使其具有检测LAMBDA轻链含量的用途。
5、本发明实施例的检测LAMBDA轻链含量的试剂盒检测LAMBDA轻链含量的方法,简洁快速地检测样本中LAMBDA轻链的含量,检测效率较高,在临床应用上具有广阔的前景。
附图说明
图1是本发明的检测LAMBDA轻链含量的方法的流程图;
图2是本发明的实施例3的LAMBDA轻链含量的检测方法的流程示意图;
图3是本发明的实施例3的检测LAMBDA轻链含量的标准曲线;
图4是本发明的实施例4的检测LAMBDA轻链含量试剂盒与国外对比试剂盒的比较结果示意图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白,以下结合附图和实施例,对本发明进行进一步详细说明。应当理解,此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明,并不用于限定本发明。
本发明提供了一种检测LAMBDA轻链含量的试剂盒。该试剂盒包括:试剂R1、试剂R2和LAMBDA轻链校准品。
其中,试剂R1包括:第一缓冲液5~600mmol/L、第一电解质5~60g/L、表面活性剂1~200g/L、第一稳定剂2~50g/L、高分子加速剂1~100g/L和第一防腐剂0.5~15g/L。试剂R1中,其余为纯化水。
试剂R2包括:第二缓冲液5~600mmol/L、抗人LAMBDA轻链抗体5~60%w/v、第二电解质5~60g/L和第二防腐剂0.5~15g/L。试剂R2中,其余为纯化水。本发明中,w/v表示的意思是单位体积的溶液中所含的溶质质量。
LAMBDA轻链校准品包括:第三缓冲液10~600mmol/L、第三稳定剂2~50g/L、第三防腐剂0.5~15g/L、抗氧化剂0.01~10g/L和LAMBDA轻链抗原。LAMBDA轻链校准品中,其余为纯化水。
优选的,试剂R1包括:第一缓冲液20~400mmol/L、第一电解质6~45g/L、表面活性剂2~80g/L、第一稳定剂2~40g/L、高分子加速剂3~80g/L和第一防腐剂1.5~9g/L。试剂R2包括:第二缓冲液20~450mmol/L、抗人LAMBDA轻链抗体15~30%w/v、第二电解质6~48g/L和第二防腐剂1.5~9g/L。LAMBDA轻链校准品包括:第三缓冲液15~100mmol/L、第三稳定剂2~45g/L、第三防腐剂4~8.5g/L、抗氧化剂0.4~9g/L和LAMBDA轻链抗原。
优选的,试剂R1包括:第一缓冲液10~100mmol/L、第一电解质5~15g/L、表面活性剂1~50g/L、第一稳定剂5~15g/L、高分子加速剂50~100g/L和第一防腐剂1~5g/L。试剂R2包括:第二缓冲液10~100mmol/L、抗人LAMBDA轻链抗体5~60%w/v、第二电解质5~15g/L和第二防腐剂1~5g/L。LAMBDA轻链校准品包括:第三缓冲液10~100mmol/L、第三稳定剂5~15g/L、第三防腐剂1~5g/L、抗氧化剂0.01~0.8g/L和LAMBDA轻链抗原。
优选的,LAMBDA轻链校准品包括:第三缓冲液5~600mmol/L、第三稳定剂2~50g/L、第三防腐剂0.5~15g/L、抗氧化剂0.01~10g/L和LAMBDA轻链抗原0~1000mg/dL。
更优选的,LAMBDA轻链校准品中,LAMBDA轻链抗原的浓度为0~800mg/dL。
应用该试剂盒时,该LAMBDA轻链校准品可以配制成高浓度单点校准品,在使用时用生理盐水稀释成多个不同浓度的参考校准品,也可以直接制备成多个不同浓度的参考校准品。
优选的,试剂R1中,第一缓冲液选自磷酸盐PBS缓冲液、三羟甲基氨基甲烷TRIS缓冲液、硼酸缓冲液、甘氨酸缓冲液、3-(环己胺)-2-羟基-1-丙磺酸CAPSO缓冲液、4-羟乙基哌嗪乙磺酸HEPES缓冲液中的一种或几种。第一电解质选自氯化钠、硫酸镁、氯化镁和氯化钾中的一种或几种。表面活性剂选自Triton系列表面活性剂、Tween系列表面活性剂、月桂醚系列表面活性剂(例如聚氧乙烯月桂醚)、聚氧乙烯烷基苯基醚、聚氧乙烯壬基苯基醚和聚氧乙烯辛基苯醚中的一种或几种。第一稳定剂选自乙二胺四乙酸二钠、甘露糖醇、葡萄糖、海藻糖和牛血清蛋白中的一种或几种。高分子加速剂选自聚乙二醇2000、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000和聚乙二醇8000中的一种或几种。第一防腐剂选自叠氮钠、苯酚、对羟基苯甲酸、对羟基苯甲酸乙酯和乙基汞硫代硫酸钠中的一种或几种。
优选的,试剂R2中,第二缓冲液选自磷酸盐PBS缓冲液、三羟甲基氨基甲烷TRIS缓冲液、硼酸缓冲液、甘氨酸缓冲液、3-(环己胺)-2-羟基-1-丙磺酸CAPSO缓冲液、4-羟乙基哌嗪乙磺酸HEPES缓冲液中的一种或几种。抗人LAMBDA轻链抗体选鼠抗人、兔抗人、羊抗人、鸡抗人和鸭抗人LAMBDA轻链抗体中的一种或几种。更优选的,抗人LAMBDA轻链抗体为单克隆抗体和/或多克隆抗体。第二电解质选自氯化钠、硫酸镁、氯化镁和氯化钾中的一种或几种。第二防腐剂选自叠氮钠、苯酚、对羟基苯甲酸、对羟基苯甲酸乙酯和乙基汞硫代硫酸钠中的一种或几种。
优选的,LAMBDA轻链校准品中,第三缓冲液选自磷酸盐PBS缓冲液、三羟甲基氨基甲烷TRIS缓冲液、硼酸缓冲液、甘氨酸缓冲液、3-(环己胺)-2-羟基-1-丙磺酸CAPSO缓冲液、4-羟乙基哌嗪乙磺酸HEPES缓冲液中的一种或几种。第三稳定剂选自乙二胺四乙酸二钠、甘露糖醇、葡萄糖、海藻糖和牛血清蛋白中的一种或几种。第三防腐剂选自叠氮钠、苯酚、对羟基苯甲酸、对羟基苯甲酸乙酯和乙基汞硫代硫酸钠中的一种或几种。抗氧化剂选自丁基羟基茴香醚、二丁基羟基甲苯、苯多酚、甘草抗氧化物和硫代二丙酸二月桂酯中的一种或几种。
更优选的,试剂R1中,第一缓冲液为磷酸盐缓冲液。第一电解质为氯化钠。表面活性剂为聚氧乙烯辛基苯醚。第一稳定剂为乙二胺四乙酸二钠。高分子加速剂为聚乙二醇6000。第一防腐剂为叠氮钠。
更优选的,试剂R2中,第二缓冲液为磷酸盐缓冲液。抗人LAMBDA轻链抗体为羊抗人LAMBDA轻链单克隆抗体。第二电解质为氯化钠。第二防腐剂为叠氮钠。
更优选的,LAMBDA轻链校准品中,第三缓冲液为磷酸盐缓冲液。第三稳定剂为乙二胺四乙酸二钠。第三防腐剂为叠氮钠。抗氧化剂为丁基羟基茴香醚。
本发明实施例的检测LAMBDA轻链含量的试剂盒,操作简单,使用简便快速,可简洁快速地检测样本中LAMBDA轻链的含量;能够满足临床快速高通量检测样本的要求,检测效率明显提高在临床应用上具有广阔的前景;还具有特异性强、灵敏度高、重复性好、批间差异小、试剂稳定等优点。
本发明实施例还提供了一种上述的检测LAMBDA轻链含量的试剂盒在检测LAMBDA轻链含量中的用途,可以用于简洁快速地检测样本中LAMBDA轻链的含量,具有较高的准确度和很好的特异性。该试剂盒特别适合用于检测尿液样本中LAMBDA轻链的含量。
本发明实施例还提供了一种采用上述的检测LAMBDA轻链含量的试剂盒检测LAMBDA轻链含量的方法。本发明方法为免疫比浊法,其是一种抗原抗体结合动态测定方法。其基本原理是:样本中的LAMBDA轻链抗原和试剂R2中的抗人LAMBDA轻链抗体发生相应的抗原抗体反应,形成不溶性的抗原-抗体复合物,使反应液产生一定的浊度。反应液中抗人LAMBDA轻链抗体过量时,形成的免疫复合物的量随着样本中LAMBDA轻链抗原量的增加而增加,反应液的浊度也相应增加。在特定波长下测定该复合物的吸光值,与校准品标定的校准曲线比较,即可计算出样本中的LAMBDA轻链的含量。如图1所示,为本发明的检测LAMBDA轻链含量的方法的流程图。该方法包括如下的步骤:
步骤S10:向待测样品中加入试剂R1,待测样品的体积为5μL,试剂R1的体积为250μL,得到第一混合液,并得到第一混合液的吸光度OD1。
步骤S20:向第一混合液中加入试剂R2,试剂R2的体积为50μL,得到第二混合液,并得到第二混合液的吸光度OD2。
步骤S30:使用LAMBDA轻链校准品得到标准曲线,根据吸光度OD1和吸光度OD2在标准曲线上得到待测样品中LAMBDA轻链的含量。
其中,标准曲线的拟合模式包括:Spline、二次方程、logit-log3p、logit-log4p、logit-log5p或Polygonal。
下面以具体实施例对本发明的技术方案做进一步说明。
实施例1
该检测LAMBDA轻链含量的试剂盒包括:试剂R1、试剂R2和LAMBDA轻链校准品。
其中,试剂R1包括如下的成分:
试剂R2包括如下的成分:
LAMBDA轻链校准品包括如下的成分:
按照需要的校准品浓度将相应量的LAMBDA轻链抗原添加到上述其他试剂的混合液中,混合得到LAMBDA轻链校准品。该LAMBDA轻链校准品可以是高浓度单点校准品,在使用时用生理盐水稀释成5个不同浓度的参考校准品,也可以直接制备成5个不同浓度的参考校准品。本实施例配制5个不同浓度的LAMBDA轻链校准品,其LAMBDA轻链抗原的浓度分别为:0mg/dL、100mg/dL、200mg/dL、400mg/dL和800mg/dL。将LAMBDA轻链校准品用0.22μm的滤膜过滤除菌,在2~8℃下保存。
实施例2
该检测LAMBDA轻链含量的试剂盒包括:试剂R1、试剂R2和LAMBDA轻链校准品。
其中,试剂R1包括如下的成分:
试剂R2包括如下的成分:
LAMBDA轻链校准品包括如下的成分:
按照需要的校准品浓度将相应量的LAMBDA轻链抗原添加到上述其他试剂的混合液中,混合得到LAMBDA轻链校准品。该LAMBDA轻链校准品可以是高浓度单点校准品,在使用时用生理盐水稀释成5个不同浓度的参考校准品,也可以直接制备成5个不同浓度的参考校准品。本实施例选用的是高浓度单点参考校准品,LAMBDA轻链抗原浓度为800mg/dL,将LAMBDA轻链校准品用0.22μm的滤膜过滤除菌,在2~8℃下保存。使用时用生理盐水稀释成5个不同浓度的LAMBDA轻链校准品。LAMBDA轻链抗原的浓度分别为:0mg/dL、100mg/dL、200mg/dL、400mg/dL和800mg/dL。
实施例3
1.试剂盒制备
该检测LAMBDA轻链含量的试剂盒包括:试剂R1、试剂R2和LAMBDA轻链校准品。
其中,试剂R1包括如下的成分:
试剂R2包括如下的成分:
LAMBDA轻链校准品包括如下的成分:
按照需要的校准品浓度将相应量的LAMBDA轻链抗原添加到上述其他试剂的混合液中,混合得到LAMBDA轻链校准品。该LAMBDA轻链校准品可以是高浓度单点校准品,在使用时用生理盐水稀释成5个不同浓度的参考校准品,也可以直接制备成5个不同浓度的参考校准品。本实施例配制5个不同浓度的LAMBDA轻链校准品,其LAMBDA轻链抗原的浓度分别为:0mg/dL、100mg/dL、200mg/dL、400mg/dL和800mg/dL。将LAMBDA轻链校准品用0.22μm的滤膜过滤除菌,在2~8℃下保存。
2.检测方法
采用上述实施例3的试剂盒,通过全自动生化分析仪对待测样品进行检测分析,分析方法为两点终点法。如图2所示,为本发明的实施例3的LAMBDA轻链含量的检测方法的流程示意图。向待测样品中加入试剂R1,待测样品的体积为5μL,试剂R1的体积为250μL,混合得到第一混合液,并在37℃保温5分钟,然后读取该第一混合液的吸光度OD1。再向第一混合液中进一步加入试剂R2,试剂R2体积为50μL,得到第二混合液,并在37℃保温5分钟,读取第二混合液的吸光度OD2。根据第一混合液的吸光度OD1和第二混合液的吸光度OD2。检测的主波长为340nm,副波长为700nm。
3.标准曲线绘制
使用LAMBDA轻链校准品在全自动生化分析仪上测得不同浓度LAMBDA标准品的标准曲线。如图3所示,为本发明的实施例3的检测LAMBDA轻链含量的标准曲线,X轴代表LAMBDA轻链含量,Y轴代表吸光度值。该标准曲线可以用于检测标本LAMBDA轻链的含量。
4.不同浓度样本精密性检测
随机取3份临床样本,采用实施例3的试剂盒,通过日立全自动生化分析仪对3份样本分别重复检测10次,检测结果如表1所示。
表1三份样本的LAMBDA轻链含量(10次)及变异系数
结果显示,三份样本测得的变异系数分别为1.8%、2.1%、2.2%,均小于3%,表明本发明的试剂盒具有较高精密度。
实施例4
1.试剂盒制备
该检测LAMBDA轻链含量的试剂盒包括:试剂R1、试剂R2和LAMBDA轻链校准品。
其中,试剂R1包括如下的成分:
试剂R2包括如下的成分:
LAMBDA轻链校准品包括如下的成分:
按照需要的校准品浓度将相应量的LAMBDA轻链抗原添加到上述其他试剂的混合液中,混合得到LAMBDA轻链校准品。该LAMBDA轻链校准品可以是高浓度单点校准品,在使用时用生理盐水稀释成5个不同浓度的参考校准品,也可以直接制备成5个不同浓度的参考校准品。本实施例配制5个不同浓度的LAMBDA轻链校准品,其LAMBDA轻链抗原的浓度分别为:0mg/dL、100mg/dL、200mg/dL、400mg/dL和800mg/dL。将LAMBDA轻链校准品用0.22μm的滤膜过滤除菌,在2~8℃下保存。
2.检测方法
采用实施例4的试剂盒,通过全自动生化分析仪对待测样品进行检测分析,分析方法为两点终点法。向待测样品中加入试剂R1,待测样品的体积为5μL,试剂R1的体积为250μL,混合得到第一混合液,并在37℃保温5分钟,然后读取该第一混合液的吸光度OD1。再向第一混合液中进一步加入试剂R2,试剂R2体积为50μL,得到第二混合液,并在37℃保温5分钟,读取第二混合液的吸光度OD2。根据第一混合液的吸光度OD1和第二混合液的吸光度OD2。检测的主波长为340nm,副波长为700nm。
3.不同试剂对比
采用实施例4的试剂盒绘制标准曲线,其方法与实施例3绘制标准曲线的方法相同。分别采用本发明实施例4的试剂盒和进口对比试剂(ROCHE公司试剂),通过日立全自动生化分析仪对50份临床标本按各自参数同时进行测定,对测定值进行线性回归。线性回归得到的回归方程为Y=0.9832X+1.3965,相关系数R2=0.9972。如图4所示,为本发明实施例4的检测LAMBDA轻链含量试剂盒与国外对比试剂盒的比较结果示意图。图4示出相关性。其中X为本发明试剂,Y为对比试剂。结果表明本发明的试剂盒与对比试剂相关性很好,说明本发明的试剂盒具有很好的特异性和准确度。本发明试剂盒可以适用于日立、奥林巴斯、贝克曼等系列的全自动和半自动生化分析仪,分析方法和参数可以根据不同机型进行适当调整。
实施例5
1.试剂盒制备
该检测LAMBDA轻链含量的试剂盒包括:试剂R1、试剂R2和LAMBDA轻链校准品。
其中,试剂R1包括如下的成分:
试剂R2包括如下的成分:
LAMBDA轻链校准品包括如下的成分:
按照需要的校准品浓度将相应量的LAMBDA轻链抗原添加到上述其他试剂的混合液中,混合得到LAMBDA轻链校准品。该LAMBDA轻链校准品可以是高浓度单点校准品,在使用时用生理盐水稀释成5个不同浓度的参考校准品,也可以直接制备成5个不同浓度的参考校准品。本实施例选用的是高浓度单点参考校准品,LAMBDA轻链抗原浓度为800mg/dL,将LAMBDA轻链校准品用0.22μm的滤膜过滤除菌,在2~8℃下保存。使用时用生理盐水稀释成5个不同浓度的LAMBDA轻链校准品。LAMBDA轻链抗原的浓度分别为:0mg/dL、100mg/dL、200mg/dL、400mg/dL和800mg/dL。
2.检测方法
采用实施例5的试剂盒,通过全自动生化分析仪对待测样品进行检测分析,分析方法为两点终点法。向待测样品中加入试剂R1,待测样品的体积为5μL,试剂R1的体积为250μL,混合得到第一混合液,并在37℃保温5分钟,然后读取该第一混合液的吸光度OD1。再向第一混合液中进一步加入试剂R2,试剂R2体积为50μL,得到第二混合液,并在37℃保温5分钟,读取第二混合液的吸光度OD2。根据第一混合液的吸光度OD1和第二混合液的吸光度OD2。检测的主波长为340nm,副波长为700nm。
3.不同实施例试剂盒检测结果对比
绘制标准曲线。配制一份LAMBDA轻链浓度为136mg/dL的样本,分别用实施例3、4、5的试剂盒对样本重复检测10次,检测结果如表2所示。
表2实施例3~5试剂盒的LAMBDA轻链含量检测结果对比
由表2可见,三种实施例试剂盒测得的LAMBDA轻链含量均接近真实值,并且三种试剂盒测得的变异系数均小于5%,说明本发明的试剂盒性能稳定,测量准确。
4.线性范围检测
将LAMBDA轻链含量参考标准品用生理盐水稀释,其浓度从0~800mg/dL均分10个浓度,按照实施例5的检测方法,每个浓度样本重复测定3次,结果如表3所示,将测定浓度的平均值与实际浓度进行回收率分析,结果显示偏差均小于10%的,表示线性能达到800mg/dL。
表3本发明试剂盒线性范围检测结果
5.精密度测定
通过2个不同含量的LAMBDA轻链尿液来测定本发明试剂盒(采用实施例5的试剂盒)批内精密度以及批间精密度,结果如表4和表5所示,本发明的试剂盒批内精密度是2.6%和2.1%,批间精密度是4.7%和3.2%。
表4本发明试剂盒批内精密度
样品浓度 | 80mg/dL | 300mg/dL |
测定均值 | 83.91mg/dL | 329.44mg/dL |
标准差 | 2.1938 | 6.8554 |
批内精密度 | 2.6% | 2.1% |
表5本发明试剂盒批间精密度
样品浓度 | 80mg/dL | 300mg/dL |
测定均值 | 82.97mg/dL | 328.50mg/dL |
标准差 | 3.9185 | 10.5956 |
批间精密度 | 4.7% | 3.2% |
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已,并不用以限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等,均应包括在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种检测LAMBDA轻链含量的试剂盒,其特征在于,包括:试剂R1、试剂R2和LAMBDA轻链校准品;所述试剂R1包括:第一缓冲液5~600mmol/L、第一电解质5~60g/L、表面活性剂1~200g/L、第一稳定剂2~50g/L、高分子加速剂1~100g/L和第一防腐剂0.5~15g/L;所述试剂R2包括:第二缓冲液5~600mmol/L、抗人LAMBDA轻链抗体5~60%w/v、第二电解质5~60g/L和第二防腐剂0.5~15g/L;所述LAMBDA轻链校准品包括:第三缓冲液10~600mmol/L、第三稳定剂2~50g/L、第三防腐剂0.5~15g/L、抗氧化剂0.01~10g/L和LAMBDA轻链抗原。
2.如权利要求1所述的检测LAMBDA轻链含量的试剂盒,其特征在于:
所述第一缓冲液、所述第二缓冲液和所述第三缓冲液均选自磷酸盐PBS缓冲液、三羟甲基氨基甲烷TRIS缓冲液、硼酸缓冲液、甘氨酸缓冲液、3-(环己胺)-2-羟基-1-丙磺酸CAPSO缓冲液、4-羟乙基哌嗪乙磺酸HEPES缓冲液中的一种或几种;和/或,
所述第一防腐剂、所述第二防腐剂和所述第三防腐剂均选自叠氮钠、苯酚、对羟基苯甲酸、对羟基苯甲酸乙酯和乙基汞硫代硫酸钠中的一种或几种;和/或,
所述第一电解质和所述第二电解质均选自氯化钠、硫酸镁、氯化镁和氯化钾中的一种或几种;和/或,
所述第一稳定剂和所述第三稳定剂均选自乙二胺四乙酸二钠、甘露糖醇、葡萄糖、海藻糖和牛血清蛋白中的一种或几种;和/或,
所述表面活性剂选自Triton系列表面活性剂、Tween系列表面活性剂、月桂醚系列表面活性剂、聚氧乙烯烷基苯基醚、聚氧乙烯壬基苯基醚和聚氧乙烯辛基苯醚中的一种或几种;和/或,
所述高分子加速剂选自聚乙二醇2000、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000和聚乙二醇8000中的一种或几种;和/或,
所述抗人LAMBDA轻链抗体选自鼠抗人、兔抗人、羊抗人、鸡抗人和鸭抗人LAMBDA轻链抗体中的一种或几种;
所述抗氧化剂选自丁基羟基茴香醚、二丁基羟基甲苯、苯多酚、甘草抗氧化物和硫代二丙酸二月桂酯中的一种或几种。
3.如权利要求1所述的检测LAMBDA轻链含量的试剂盒,其特征在于:所述抗人LAMBDA轻链抗体为单克隆抗体和/或多克隆抗体。
4.如权利要求1所述的检测LAMBDA轻链含量的试剂盒,其特征在于:
所述第一缓冲液、所述第二缓冲液和所述第三缓冲液均为磷酸盐缓冲液;和/或,
所述第一防腐剂、所述第二防腐剂和所述第三防腐剂均为叠氮钠;和/或,
所述第一电解质和所述第二电解质均为氯化钠;和/或,
所述第一稳定剂和所述第三稳定剂均为乙二胺四乙酸二钠;和/或,
所述表面活性剂为聚氧乙烯月桂醚;和/或,
所述高分子加速剂为聚乙二醇6000;和/或,
所述抗人LAMBDA轻链抗体为羊抗人LAMBDA轻链单克隆抗体;和/或,
所述抗氧化剂为丁基羟基茴香醚。
5.如权利要求1所述的检测LAMBDA轻链含量的试剂盒,其特征在于,
所述试剂R1包括:第一缓冲液20~400mmol/L、第一电解质6~45g/L、表面活性剂2~80g/L、第一稳定剂2~40g/L、高分子加速剂3~80g/L和第一防腐剂1.5~9g/L;
所述试剂R2包括:第二缓冲液20~450mmol/L、抗人LAMBDA轻链抗体15~30%w/v、第二电解质6~48g/L和第二防腐剂1.5~9g/L;
所述LAMBDA轻链校准品包括:第三缓冲液15~100mmol/L、第三稳定剂2~45g/L、第三防腐剂4~8.5g/L、抗氧化剂0.4~9g/L和LAMBDA轻链抗原。
6.如权利要求1所述的检测LAMBDA轻链含量的试剂盒,其特征在于,
所述试剂R1包括:第一缓冲液10~100mmol/L、第一电解质5~15g/L、表面活性剂1~50g/L、第一稳定剂5~15g/L、高分子加速剂50~100g/L和第一防腐剂1~5g/L;和/或,
所述试剂R2包括:第二缓冲液10~100mmol/L、抗人LAMBDA轻链抗体5~60%w/v、第二电解质5~15g/L和第二防腐剂1~5g/L;和/或,
所述LAMBDA轻链校准品包括:第三缓冲液10~100mmol/L、第三稳定剂5~15g/L、第三防腐剂1~5g/L、抗氧化剂0.01~0.8g/L和LAMBDA轻链抗原。
7.如权利要求1所述的检测LAMBDA轻链含量的试剂盒,其特征在于,所述LAMBDA轻链校准品包括:第三缓冲液5~600mmol/L、第三稳定剂2~50g/L、第三防腐剂0.5~15g/L、抗氧化剂0.01~10g/L和LAMBDA轻链抗原0~1000mg/dL。
8.如权利要求1所述的检测LAMBDA轻链含量的试剂盒,其特征在于:所述LAMBDA轻链校准品中,所述LAMBDA轻链抗原的浓度为0~800mg/dL。
9.一种如权利要求1~8任一项所述的检测LAMBDA轻链含量的试剂盒在检测LAMBDA轻链含量中的用途。
10.一种采用如权利要求1~8任一项所述的检测LAMBDA轻链含量的试剂盒检测LAMBDA轻链含量的方法,其特征在于,包括:
向待测样品中加入所述试剂R1,所述待测样品的体积为5μL,所述试剂R1的体积为250μL,得到第一混合液,并得到所述第一混合液的吸光度OD1;
向所述第一混合液中加入所述试剂R2,所述试剂R2的体积为50μL,得到第二混合液,并得到所述第二混合液的吸光度OD2;
使用所述LAMBDA轻链校准品得到标准曲线,根据所述吸光度OD1和所述吸光度OD2在所述标准曲线上得到所述待测样品中LAMBDA轻链的含量。
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