CN105652017A - 检测lambda轻链含量的试剂盒、方法及用途 - Google Patents

检测lambda轻链含量的试剂盒、方法及用途 Download PDF

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Abstract

本发明公开一种检测LAMBDA轻链含量的试剂盒，包括：试剂R1、试剂R2和LAMBDA轻链校准品；所述试剂R1包括：第一缓冲液、第一电解质、表面活性剂、第一稳定剂、高分子促进剂和第一防腐剂；所述试剂R2包括：第二缓冲液、抗人LAMBDA轻链抗体、第二电解质、第二稳定剂和第二防腐剂；所述LAMBDA校准品包括：第三缓冲液、第三稳定剂、第三防腐剂、抗氧化剂和LAMBDA轻链抗原。本发明还公开一种检测LAMBDA轻链含量的试剂盒的在检测LAMBDA轻链含量中的用途以及一种采用检测LAMBDA轻链含量的试剂盒检测LAMBDA轻链含量的方法。本发明的试剂盒及检测方法，可简洁快速检测LAMBDA轻链含量。

Description

检测LAMBDA轻链含量的试剂盒、方法及用途
技术领域
本发明属于检测LAMBDA轻链含量的技术领域，具体涉及一种检测LAMBDA轻链含量的试剂盒、方法及用途。
背景技术
轻链(Lightchain，L)大约由214个氨基酸残基组成，通常不含碳水化合物，分子量约为24kD。每条轻链含有两个由链内二硫键所组成的环肽。L链共有两种类型：LAMBDA(κ)与Lambda(λ)，同一个天然免疫球蛋白分子上L链的类型总是相同的。正常人血清中的κ：λ约为2：1。
细胞克隆的异常增生将导致单克隆球蛋白或游离免疫球蛋白片段(游离的轻链)的增加，这将造成κ与λ链的比例失衡，κ与λ的比值失常预示了单克隆Y球蛋白血症。在生成增加的情况下，游离轻链的滤过也增加，当超出肾小管的重吸收能力时，该测试可以定量检测结合及游离免疫球蛋白中的轻链。
定量检测不同种类的轻链含量有助于诊断巨球蛋白血症(巨型球蛋白生成增多)及结缔组织病(如类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮)等疾病。
此外，感染、急慢性肝炎、肝硬化等血中轻链也可增多，但一般均表现为κ、λ同时增多；肾病、糖尿病等患者尿也可出现κ、λ同时增多。
已有的检测方法主要是免疫电泳法、酶联免疫法。前者检测时间较长，操作较为繁琐，对非典型患者不能作出明确诊断。酶联免疫法具有酶催化的扩大效应，定量不够准确，限制了它的应用。采用免疫比浊法不但大大缩短测定时间，还可提高免疫学诊断的敏感性和准确性，临床应用前景广阔。
发明内容
本发明实施例的目的在于克服现有技术的上述不足，提供一种检测LAMBDA轻链含量的试剂盒，可以简洁快速地检测样本中LAMBDA轻链的含量，具有较高的准确度和很好的特异性。
本发明实施例的另一目的在于克服现有技术的上述不足，提供一种上述的检测LAMBDA轻链含量的试剂盒的在检测LAMBDA轻链含量中的用途，可用于简洁快速地检测样本中LAMBDA轻链的含量，具有较高的准确度和很好的特异性。
本发明实施例的再一目的在于克服现有技术的上述不足，提供一种采用上述的检测LAMBDA轻链含量的试剂盒检测LAMBDA轻链含量的方法，可以简洁快速地检测样本中LAMBDA轻链的含量，具有较高的准确度和很好的特异性。
为了实现上述发明目的，本发明实施例的技术方案如下：
一种检测LAMBDA轻链含量的试剂盒，包括：试剂R1、试剂R2和LAMBDA轻链校准品；所述试剂R1包括：第一缓冲液10～600mmol/L、第一电解质5～100g/L、表面活性剂0.5～60g/L、第一稳定剂0.5～20g/L、高分子促进剂1～100g/L和第一防腐剂1～10g/L；所述试剂R2包括：第二缓冲液10～600mmol/L、抗人LAMBDA轻链抗体0.1～20％w/v、第二电解质5～50g/L、第二稳定剂0.5～10g/L和第二防腐剂1～10g/L；所述LAMBDA轻链校准品包括：第三缓冲液10～600mmol/L、第三稳定剂0.5～60g/L、第三防腐剂1～10g/L、抗氧化剂0.01～10g/L和LAMBDA轻链抗原。
进一步：所述试剂R1的pH为6～9.5。
进一步：所述试剂R2的pH为6～9.5。
进一步：所述第一缓冲液、所述第二缓冲液和所述第三缓冲液均选自醋酸盐缓冲液、氯化铵缓冲液、磷酸盐缓冲液、三羟甲基氨基甲烷TRIS缓冲液、硼砂-氢氧化钠缓冲液、甘氨酸缓冲液、3-(N-吗啉)丙磺酸MOPS缓冲液、3-(环己胺)-2-羟基-1-丙磺酸CAPSO缓冲液、4-羟乙基哌嗪乙磺酸HEPES缓冲液中的一种或几种；和/或，所述第一稳定剂、所述第二稳定剂和所述第三稳定剂均选自亚氨基二乙酸、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠、乙二胺四乙酸二钠、二乙烯三胺五乙酸钠、1,2-环己二醇缩水甘油、甘露糖、葡萄糖、壳聚糖、山梨醇和牛血清蛋白中的一种或几种；和/或，所述第一防腐剂、所述第二防腐剂和所述第三防腐剂均选自叠氮钠、苯酚、对羟基苯甲酸、对羟基苯甲酸乙酯和乙基汞硫代硫酸钠中的一种或几种；和/或，所述第一电解质和所述第二电解质均选自氯化钠、硫酸镁、氯化镁和氯化钾中的一种或几种；和/或，所述表面活性剂选自Triton系列表面活性剂、Tween系列表面活性剂、月桂醚、聚氧乙烯烷基苯基醚、聚氧乙烯壬基苯基醚和聚氧乙烯辛基苯醚中的一种或几种；和/或，所述高分子促进剂选自聚乙二醇PEG8000、聚乙二醇PEG6000、聚乙二醇PEG4000、聚乙二醇PEG2000、脂肪醇聚氧乙烯醚、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酸钠、乙二醇聚氧乙烯醚、羟丙基甲基纤维素和羟甲基纤维素钠中的一种或几种；和/或，所述抗人LAMBDA轻链抗体选自鼠抗人、兔抗人、羊抗人、鸡抗人或牛抗人LAMBDA轻链抗体；所述抗氧化剂选自丁基羟基茴香醚、没食子酸丙酯、二丁基羟基甲苯、苯多酚、磷脂、甘草抗氧化物、硫代二丙酸二月桂酯、特丁基对苯二酚和维生素系列中的一种或几种。
进一步：所述第一缓冲液、所述第二缓冲液和所述第三缓冲液均为3-(环己胺)-2-羟基-1-丙磺酸CAPSO缓冲液；和/或，所述第一稳定剂、所述第二稳定剂和所述第三稳定剂均为1,2-环己二醇缩水甘油；和/或，所述第一防腐剂、所述第二防腐剂和所述第三防腐剂均为对羟基苯甲酸乙酯；和/或，所述第一电解质和所述第二电解质均为氯化钠；和/或，所述表面活性剂为聚氧乙烯辛基苯醚；和/或，所述高分子促进剂为羟丙基甲基纤维素；和/或，所述抗人LAMBDA轻链抗体为羊抗人LAMBDA轻链抗体；和/或，所述抗氧化剂为二丁基羟基甲苯。
进一步：所述试剂R1包括：硼砂-氢氧化钠缓冲液10～700mmol/L、氯化钠3～100g/L、聚氧乙烯辛基苯醚0.2～60g/L、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠0.2～20g/L、羟丙基甲基纤维素1～100g/L和对羟基苯甲酸乙酯1～20g/L，所述试剂R1的pH为6～9.5；所述试剂R2包括：氯化铵缓冲液10～600mmol/L、抗人LAMBDA轻链抗体0.5～5％w/v、硫酸镁5～50g/L、乙二胺四乙酸二钠0.5～10g/L和对羟基苯甲酸1～10g/L，所述试剂R2的pH为6～9.5；所述LAMBDA轻链校准品包括：甘氨酸缓冲液10～600mmol/L、壳聚糖5～60g/L、对羟基苯甲酸1～10g/L、二丁基羟基甲苯0.01～10g/L和LAMBDA轻链抗原。
一种如上所述的检测LAMBDA轻链含量的试剂盒的在检测LAMBDA轻链含量中的用途。
以及，一种采用如上所述的检测LAMBDA轻链含量的试剂盒检测LAMBDA轻链含量的方法，包括：按待测样品和所述试剂R1的体积比为1～10:200，向所述待测样品中加入所述试剂R1，得到第一混合液，并得到所述第一混合液的吸光度OD1；按所述试剂R2与所述试剂R1体积比为1:1～10，向所述第一混合液中加入所述试剂R2，得到第二混合液，并得到所述第二混合液的吸光度OD2；使用所述LAMBDA轻链校准品得到标准曲线，根据所述吸光度OD1和所述吸光度OD2在所述标准曲线上得到所述待测样品中LAMBDA轻链的含量。
进一步：所述试剂R2与所述试剂R1体积比为1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9或1:10。
进一步，所述标准曲线的拟合模式包括：Spline、二次方程、logit-log3p、logit-log4p、logit-log5p或Polygonal。
本发明实施例的有益效果如下：
1、本发明实施例的检测LAMBDA轻链含量的试剂盒，使用简便快速，可简洁快速地检测样本中LAMBDA轻链的含量。
2、本发明实施例的检测LAMBDA轻链含量的试剂盒，能够满足临床快速高通量检测样本的要求，检测效率明显提高，在临床应用上具有广阔的前景。
3、本发明实施例的检测LAMBDA轻链含量的试剂盒使其具有检测LAMBDA轻链含量的用途。
4、本发明实施例的检测LAMBDA轻链含量的试剂盒检测LAMBDA轻链含量的方法，简洁快速地检测样本中LAMBDA轻链的含量，检测效率较高，在临床应用上具有广阔的前景。
附图说明
图1是本发明的检测LAMBDA轻链含量的方法的流程图；
图2是本发明的实施例1的LAMBDA轻链含量的检测方法的流程示意图；
图3是本发明实施例5的检测LAMBDA轻链含量试剂盒与国外对比试剂盒的比较结果示意图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图和实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
本发明提供了一种检测LAMBDA轻链含量的试剂盒。该试剂盒包括：试剂R1、试剂R2和LAMBDA轻链校准品。
其中，试剂R1包括：第一缓冲液10～600mmol/L、第一电解质5～100g/L、表面活性剂0.5～60g/L、第一稳定剂0.5～20g/L、高分子促进剂1～100g/L和第一防腐剂1～10g/L。
试剂R2包括：第二缓冲液10～600mmol/L、抗人LAMBDA轻链抗体0.1～20％w/v、第二电解质5～50g/L、第二稳定剂0.5～10g/L和第二防腐剂1～10g/L本发明中，w/v表示的意思是单位体积的溶液中所含的溶质质量。
LAMBDA轻链校准品包括：第三缓冲液10～600mmol/L、第三稳定剂0.5～60g/L、第三防腐剂1～10g/L、抗氧化剂0.01～10g/L和LAMBDA轻链抗原。
优选的，试剂R1包括：第一缓冲液50～400mmol/L、第一电解质5～30g/L、表面活性剂1～50g/L、第一稳定剂1～8g/L、高分子促进剂1～100g/L和第一防腐剂2～10g/L。
优选的，试剂R2包括：第二缓冲液100～400mmol/L、抗人LAMBDA轻链抗体0.5～5％w/v、第二电解质5～40g/L、第二稳定剂0.5～10g/L和第二防腐剂2～10g/L本发明中，w/v表示的意思是单位体积的溶液中所含的溶质质量。
优选的，LAMBDA轻链校准品包括：第三缓冲液10～100mmol/L、第三稳定剂11～28g/L、第三防腐剂3～8g/L、抗氧化剂1～7g/L和LAMBDA轻链抗原。
优选的，试剂R1的pH为6～9.5。
优选的，试剂R2的pH为6～9.5。
优选的，试剂R1中，第一缓冲液选自醋酸盐缓冲液、氯化铵缓冲液、磷酸盐缓冲液、三羟甲基氨基甲烷TRIS缓冲液、硼砂-氢氧化钠缓冲液、甘氨酸缓冲液、3-(N-吗啉)丙磺酸MOPS缓冲液、3-(环己胺)-2-羟基-1-丙磺酸CAPSO缓冲液、4-羟乙基哌嗪乙磺酸HEPES缓冲液中的一种或几种。第一电解质选自氯化钠、硫酸镁、氯化镁和氯化钾中的一种或几种。表面活性剂选自Triton系列表面活性剂、Tween系列表面活性剂、月桂醚、聚氧乙烯烷基苯基醚、聚氧乙烯壬基苯基醚和聚氧乙烯辛基苯醚中的一种或几种。第一稳定剂选自亚氨基二乙酸、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠、乙二胺四乙酸二钠、二乙烯三胺五乙酸钠、1,2-环己二醇缩水甘油、甘露糖、葡萄糖、壳聚糖、山梨醇和牛血清蛋白中的一种或几种。高分子促进剂选自聚乙二醇PEG8000、聚乙二醇PEG6000、聚乙二醇PEG4000、聚乙二醇PEG2000、脂肪醇聚氧乙烯醚、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酸钠、乙二醇聚氧乙烯醚、羟丙基甲基纤维素和羟甲基纤维素钠中的一种或几种。第一防腐剂选自叠氮钠、苯酚、对羟基苯甲酸、对羟基苯甲酸乙酯和乙基汞硫代硫酸钠中的一种或几种。
优选的，试剂R2中，第二缓冲液选自醋酸盐缓冲液、氯化铵缓冲液、磷酸盐缓冲液、三羟甲基氨基甲烷TRIS缓冲液、硼砂-氢氧化钠缓冲液、甘氨酸缓冲液、3-(N-吗啉)丙磺酸MOPS缓冲液、3-(环己胺)-2-羟基-1-丙磺酸CAPSO缓冲液、4-羟乙基哌嗪乙磺酸HEPES缓冲液中的一种或几种。抗人LAMBDA轻链抗体选自鼠抗人、兔抗人、羊抗人、鸡抗人或牛抗人LAMBDA轻链抗体。第二电解质选自氯化钠、硫酸镁、氯化镁和氯化钾中的一种或几种。第二稳定剂选自亚氨基二乙酸、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠、乙二胺四乙酸二钠、二乙烯三胺五乙酸钠、1,2-环己二醇缩水甘油、甘露糖、葡萄糖、壳聚糖、山梨醇和牛血清蛋白中的一种或几种。第二防腐剂选自叠氮钠、苯酚、对羟基苯甲酸、对羟基苯甲酸乙酯和乙基汞硫代硫酸钠中的一种或几种。
优选的，LAMBDA轻链校准品中，第三缓冲液选自醋酸盐缓冲液、氯化铵缓冲液、磷酸盐缓冲液、三羟甲基氨基甲烷TRIS缓冲液、硼砂-氢氧化钠缓冲液、甘氨酸缓冲液、3-(N-吗啉)丙磺酸MOPS缓冲液、3-(环己胺)-2-羟基-1-丙磺酸CAPSO缓冲液、4-羟乙基哌嗪乙磺酸HEPES缓冲液中的一种或几种。第三稳定剂选自亚氨基二乙酸、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠、乙二胺四乙酸二钠、二乙烯三胺五乙酸钠、1,2-环己二醇缩水甘油、甘露糖、葡萄糖、壳聚糖、山梨醇和牛血清蛋白中的一种或几种。第三防腐剂选自叠氮钠、苯酚、对羟基苯甲酸、对羟基苯甲酸乙酯和乙基汞硫代硫酸钠中的一种或几种。抗氧化剂选自丁基羟基茴香醚、没食子酸丙酯、二丁基羟基甲苯、苯多酚、磷脂、甘草抗氧化物、硫代二丙酸二月桂酯、特丁基对苯二酚和维生素系列中的一种或几种。
更优选的，试剂R1中，第一缓冲液为3-(环己胺)-2-羟基-1-丙磺酸CAPSO缓冲液。第一电解质为氯化钠。表面活性剂为聚氧乙烯辛基苯醚。第一稳定剂为1,2-环己二醇缩水甘油。高分子促进剂为羟丙基甲基纤维素。第一防腐剂为对羟基苯甲酸乙酯。
更优选的，试剂R2中，第二缓冲液为3-(环己胺)-2-羟基-1-丙磺酸CAPSO缓冲液。抗人LAMBDA轻链抗体为羊抗人LAMBDA轻链抗体。第二电解质为氯化钠。第二稳定剂为1,2-环己二醇缩水甘油。第二防腐剂为对羟基苯甲酸乙酯。
更优选的，LAMBDA轻链校准品中，第三缓冲液为3-(环己胺)-2-羟基-1-丙磺酸CAPSO缓冲液。第三稳定剂为1,2-环己二醇缩水甘油。第三防腐剂为对羟基苯甲酸乙酯。抗氧化剂为二丁基羟基甲苯。
更优选的，该试剂盒包括如下的成分：
试剂R1包括：硼砂-氢氧化钠缓冲液10～600mmol/L、氯化钠5～100g/L、聚氧乙烯辛基苯醚0.5～60g/L、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠0.5～20g/L、羟丙基甲基纤维素1～100g/L和对羟基苯甲酸乙酯1～10g/L。试剂R1的pH为6～9.5。试剂R2包括：氯化铵缓冲液10～600mmol/L、抗人LAMBDA轻链抗体0.5～5％w/v、硫酸镁5～50g/L、乙二胺四乙酸二钠0.5～10g/L和对羟基苯甲酸1～10g/L。试剂R2的pH为6～9.5。LAMBDA轻链校准品包括：甘氨酸缓冲液10～600mmol/L、壳聚糖5～60g/L、对羟基苯甲酸1～10g/L、二丁基羟基甲苯0.01～10g/L和LAMBDA轻链抗原。
本发明实施例的检测LAMBDA轻链含量的试剂盒使用简便快速，可简洁快速地检测样本中LAMBDA轻链的含量；能够满足临床快速高通量检测样本的要求，检测效率明显提高在临床应用上具有广阔的前景。
本发明实施例还提供了一种上述的检测LAMBDA轻链含量的试剂盒的在检测LAMBDA轻链含量中的用途，可以用于简洁快速地检测样本中LAMBDA轻链的含量，具有较高的准确度和很好的特异性。
本发明实施例还提供了一种采用上述的检测LAMBDA轻链含量的试剂盒检测LAMBDA轻链含量的方法。如图1所示，为本发明的检测LAMBDA轻链含量的方法的流程图。该方法包括如下的步骤：
步骤S10：按待测样品和试剂R1的体积比为1～10:200，向待测样品中加入试剂R1，得到第一混合液，并得到第一混合液的吸光度OD1。该步骤可解除待测样品中抗原周围电子层和水化层，使抗原位点充分暴露。
步骤S20：按试剂R2与试剂R1体积比为1:1～10，向第一混合液中加入试剂R2，得到第二混合液，并得到第二混合液的吸光度OD2。
优选的，试剂R2与试剂R1体积比为1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9或1:10。
步骤S30：使用LAMBDA轻链校准品得到标准曲线，根据吸光度OD1和吸光度OD2在所述标准曲线上得到待测样品中LAMBDA轻链的含量。
其中，标准曲线的拟合模式包括：Spline、二次方程、logit-log3p、logit-log4p、logit-log5p或Polygonal。
下面以具体实施例对本发明的技术方案做进一步说明。
实施例1
该检测LAMBDA轻链含量的试剂盒包括：试剂R1、试剂R2和LAMBDA轻链校准品。
其中，试剂R1包括如下的成分：
试剂R2包括如下的成分：
LAMBDA轻链校准品包括如下的成分：
按照需要的校准品浓度将相应量的LAMBDA轻链抗原添加到上述其他试剂的混合液中，混合得到LAMBDA轻链校准品。本实施例配制5个不同浓度的LAMBDA轻链校准品，其LAMBDA轻链抗原的浓度分别为：0mg/L、100mg/L、200mg/L、400mg/和800mg/L。将LAMBDA轻链校准品用0.22μm的滤膜过滤除菌，在2～8℃下保存。
采用上述试剂盒，通过日立7080全自动生化分析仪对待测样品进行检测分析。如图2所示，为本发明的实施例1的LAMBDA轻链含量的检测方法的流程示意图。首先，使用LAMBDA轻链校准品在全自动生化分析仪上通过内置logit-log(4p)曲线拟合模式拟合标准曲线。然后，向待测样品中加入试剂R1，待测样品的体积为5μL，试剂R1的体积为250μL，混合得到第一混合液，并在37℃保温5分钟，然后读取该第一混合液的吸光度OD1。再向第一混合液中进一步加入试剂R2，试剂R2体积为50μL，得到第二混合液，并在37℃保温5分钟，读取第二混合液的吸光度OD2。根据第一混合液的吸光度OD1和第二混合液的吸光度OD2，在标准曲线上得到待测样品的LAMBDA轻链的含量。检测的主波长为340nm，副波长为700nm。
实施例2
该检测LAMBDA轻链含量的试剂盒包括：试剂R1、试剂R2和LAMBDA轻链校准品。
其中，试剂R1包括如下的成分：
试剂R2包括如下的成分：
LAMBDA轻链校准品包括如下的成分：
本实施例选用高浓度单点校准品，因此LAMBDA轻链抗原浓度为800mg/L。将LAMBDA轻链校准品用0.22μm的滤膜过滤除菌，在2～8℃下保存。在使用时用生理盐水稀释成5个不同浓度的LAMBDA轻链校准品，其LAMBDA轻链抗原的浓度分别为：0mg/L、100mg/L、200mg/L、400mg/L和800mg/L。
采用上述试剂盒，通过日立7080全自动生化分析仪进行检测分析。检测方法同实施例1。
实施例3
该检测LAMBDA轻链含量的试剂盒包括：试剂R1、试剂R2和LAMBDA轻链校准品。
其中，试剂R1包括如下的成分：
试剂R2包括如下的成分：
LAMBDA轻链校准品包括如下的成分：
按照需要的校准品浓度将相应量的LAMBDA轻链抗原添加到上述其他试剂的混合液中，混合得到LAMBDA轻链校准品。本实施例配制5个不同浓度的LAMBDA轻链校准品，其LAMBDA轻链抗原的浓度分别为：0mg/L、100mg/L、200mg/L、400mg/L和800mg/L。将LAMBDA轻链校准品用0.22μm的滤膜过滤除菌，在2～8℃下保存。
采用上述试剂盒，通过日立7080全自动生化分析仪进行检测分析。检测方法同实施例1。
实施例4
该检测LAMBDA轻链含量的试剂盒包括：试剂R1、试剂R2和LAMBDA轻链校准品。
其中，试剂R1包括如下的成分：
试剂R2包括如下的成分：
LAMBDA轻链校准品包括如下的成分：
本实施例选用高浓度单点校准品，因此LAMBDA轻链抗原浓度为800mg/L。将LAMBDA轻链校准品用0.22μm的滤膜过滤除菌，在2～8℃下保存。在使用时用生理盐水稀释成5个不同浓度的LAMBDA轻链校准品，其LAMBDA轻链抗原的浓度分别为：0mg/L、100mg/L、200mg/L、400mg/L和800mg/L。
采用上述试剂盒，通过日立7080全自动生化分析仪进行检测分析。检测方法同实施例1。
实施例5
本发明的试剂盒(采用实施例1的试剂盒)与LAMBDA轻链对比试剂(免疫比浊法，购自ROCHE公司)对照测定100例临床标本。比较结果如表1所示。本发明的试剂盒及检测方法同实施例；LAMBDA轻链对比试剂按照说明书设定相关参数，使用日立7080全自动生化分析仪对样本进行分析。
表1本发明试剂盒与对照试剂检测值相关性比较
线性回归得到的回归方程为Y＝0.9818X+1.3918，相关系数R2＝0.9952。如图3所示，为本发明实施例5的检测LAMBDA轻链含量试剂盒与国外对比试剂盒的比较结果示意图。图3示出相关性。数据表明，本发明的试剂盒与对比试剂相关性很好，说明本发明的试剂盒对检测LAMBDA轻链含量具有很好的特异性和准确度。
实施例6
本发明试剂盒(采用实施例1的试剂盒)与对比试剂盒同时进行了抗干扰性试验，试验结果如表2所示，加入干扰物后，对各种干扰物的相对误差均在5％以内。对照试剂对各种干扰物的相对误差都超过5％。即使检测样品中存在一定浓度的干扰物包括血红蛋白、胆红素、Vc、甘油三酯等，对本发明试剂盒的检测结果影响很小。
表2本发明试剂盒的抗干扰性试验结果
干扰物 本试剂 相对误差 某公司试剂 相对误差
样本+水 300 300
样本+1600mg/dl甘油三酯 303 1.00％ 316 5.33％
样本+460mg/dl血红蛋白 308 2.67％ 323 7.67％
样本+50mg/dl Vc 291 3.00％ 267 11.00％
样本+18.2mg/dl胆红素 308 2.67％ 342 14.00％
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包括在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种检测LAMBDA轻链含量的试剂盒，其特征在于，包括：试剂R1、试剂R2和LAMBDA轻链校准品；所述试剂R1包括：第一缓冲液10～600mmol/L、第一电解质5～100g/L、表面活性剂0.5～60g/L、第一稳定剂0.5～20g/L、高分子促进剂1～100g/L和第一防腐剂1～10g/L；所述试剂R2包括：第二缓冲液10～600mmol/L、抗人LAMBDA轻链抗体0.1～20％w/v、第二电解质5～50g/L、第二稳定剂0.5～10g/L和第二防腐剂1～10g/L；所述LAMBDA轻链校准品包括：第三缓冲液10～600mmol/L、第三稳定剂0.5～60g/L、第三防腐剂1～10g/L、抗氧化剂0.01～10g/L和LAMBDA轻链抗原。
2.如权利要求1所述的检测LAMBDA轻链含量的试剂盒，其特征在于：所述试剂R1的pH为6～9.5。
3.如权利要求1所述的检测LAMBDA轻链含量的试剂盒，其特征在于：所述试剂R2的pH为6～9.5。
4.如权利要求1所述的检测LAMBDA轻链含量的试剂盒，其特征在于：
所述第一缓冲液、所述第二缓冲液和所述第三缓冲液均选自醋酸盐缓冲液、氯化铵缓冲液、磷酸盐缓冲液、三羟甲基氨基甲烷TRIS缓冲液、硼砂-氢氧化钠缓冲液、甘氨酸缓冲液、3-(N-吗啉)丙磺酸MOPS缓冲液、3-(环己胺)-2-羟基-1-丙磺酸CAPSO缓冲液、4-羟乙基哌嗪乙磺酸HEPES缓冲液中的一种或几种；和/或，
所述第一稳定剂、所述第二稳定剂和所述第三稳定剂均选自亚氨基二乙酸、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠、乙二胺四乙酸二钠、二乙烯三胺五乙酸钠、1,2-环己二醇缩水甘油、甘露糖、葡萄糖、壳聚糖、山梨醇和牛血清蛋白中的一种或几种；和/或，
所述第一防腐剂、所述第二防腐剂和所述第三防腐剂均选自叠氮钠、苯酚、对羟基苯甲酸、对羟基苯甲酸乙酯和乙基汞硫代硫酸钠中的一种或几种；和/或，
所述第一电解质和所述第二电解质均选自氯化钠、硫酸镁、氯化镁和氯化钾中的一种或几种；和/或，
所述表面活性剂选自Triton系列表面活性剂、Tween系列表面活性剂、月桂醚、聚氧乙烯烷基苯基醚、聚氧乙烯壬基苯基醚和聚氧乙烯辛基苯醚中的一种或几种；和/或，
所述高分子促进剂选自聚乙二醇PEG8000、聚乙二醇PEG6000、聚乙二醇PEG4000、聚乙二醇PEG2000、脂肪醇聚氧乙烯醚、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酸钠、乙二醇聚氧乙烯醚、羟丙基甲基纤维素和羟甲基纤维素钠中的一种或几种；和/或，
所述抗人LAMBDA轻链抗体选自鼠抗人、兔抗人、羊抗人、鸡抗人或牛抗人LAMBDA轻链抗体；
所述抗氧化剂选自丁基羟基茴香醚、没食子酸丙酯、二丁基羟基甲苯、苯多酚、磷脂、甘草抗氧化物、硫代二丙酸二月桂酯、特丁基对苯二酚和维生素系列中的一种或几种。
5.如权利要求1所述的检测LAMBDA轻链含量的试剂盒，其特征在于：
所述第一缓冲液、所述第二缓冲液和所述第三缓冲液均为3-(环己胺)-2-羟基-1-丙磺酸CAPSO缓冲液；和/或，
所述第一稳定剂、所述第二稳定剂和所述第三稳定剂均为1,2-环己二醇缩水甘油；和/或，
所述第一防腐剂、所述第二防腐剂和所述第三防腐剂均为对羟基苯甲酸乙酯；和/或，
所述第一电解质和所述第二电解质均为氯化钠；和/或，
所述表面活性剂为聚氧乙烯辛基苯醚；和/或，
所述高分子促进剂为羟丙基甲基纤维素；和/或，
所述抗人LAMBDA轻链抗体为羊抗人LAMBDA轻链抗体；和/或，
所述抗氧化剂为二丁基羟基甲苯。
6.如权利要求1所述的检测LAMBDA轻链含量的试剂盒，其特征在于：
所述试剂R1包括：硼砂-氢氧化钠缓冲液10～700mmol/L、氯化钠3～100g/L、聚氧乙烯辛基苯醚0.2～60g/L、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠0.2～20g/L、羟丙基甲基纤维素1～100g/L和对羟基苯甲酸乙酯1～20g/L，所述试剂R1的pH为6～9.5；
所述试剂R2包括：氯化铵缓冲液10～600mmol/L、抗人LAMBDA轻链抗体0.5～5％w/v、硫酸镁5～50g/L、乙二胺四乙酸二钠0.5～10g/L和对羟基苯甲酸1～10g/L，所述试剂R2的pH为6～9.5；
所述LAMBDA轻链校准品包括：甘氨酸缓冲液10～600mmol/L、壳聚糖5～60g/L、对羟基苯甲酸1～10g/L、二丁基羟基甲苯0.01～10g/L和LAMBDA轻链抗原。
7.一种如权利要求1～6任一项所述的检测LAMBDA轻链含量的试剂盒的在检测LAMBDA轻链含量中的用途。
8.一种采用如权利要求1～6任一项所述的检测LAMBDA轻链含量的试剂盒检测LAMBDA轻链含量的方法，其特征在于，包括：
按待测样品和所述试剂R1的体积比为1～10:200，向所述待测样品中加入所述试剂R1，得到第一混合液，并得到所述第一混合液的吸光度OD1；
按所述试剂R2与所述试剂R1体积比为1:1～10，向所述第一混合液中加入所述试剂R2，得到第二混合液，并得到所述第二混合液的吸光度OD2；
使用所述LAMBDA轻链校准品得到标准曲线，根据所述吸光度OD1和所述吸光度OD2在所述标准曲线上得到所述待测样品中LAMBDA轻链的含量。
9.如权利要求8所述的检测LAMBDA轻链含量的方法，其特征在于：所述试剂R2与所述试剂R1体积比为1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9或1:10。
10.如权利要求8所述的检测LAMBDA轻链含量的方法，其特征在于，所述标准曲线的拟合模式包括：Spline、二次方程、logit-log3p、logit-log4p、logit-log5p或Polygonal。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106872718A (zh) * 2017-04-26 2017-06-20 吉林省富生医疗器械有限公司 一种尿微量白蛋白检测试剂盒及其制备方法
CN109187995A (zh) * 2018-09-14 2019-01-11 苏州普瑞斯生物科技有限公司 一种测定轻链Lambda浓度的试剂盒及制备方法
CN109613282A (zh) * 2019-01-24 2019-04-12 浙江夸克生物科技有限公司 一种高密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒及其应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101389959A (zh) * 2005-11-04 2009-03-18 贝克曼考尔特公司 用于血癌分析与临床处理的细胞抗原及靶信号转导蛋白的复合分布
CN101680876A (zh) * 2007-03-22 2010-03-24 商诊疗有限公司 全血检测
CN102906569A (zh) * 2010-03-17 2013-01-30 结合点集团有限公司 Flc作为生物标记
CN103076454A (zh) * 2012-12-26 2013-05-01 潍坊三维生物工程集团有限公司 一种检测载脂蛋白c3的试剂盒及利用其实现的检测方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101389959A (zh) * 2005-11-04 2009-03-18 贝克曼考尔特公司 用于血癌分析与临床处理的细胞抗原及靶信号转导蛋白的复合分布
CN101680876A (zh) * 2007-03-22 2010-03-24 商诊疗有限公司 全血检测
CN102906569A (zh) * 2010-03-17 2013-01-30 结合点集团有限公司 Flc作为生物标记
CN103076454A (zh) * 2012-12-26 2013-05-01 潍坊三维生物工程集团有限公司 一种检测载脂蛋白c3的试剂盒及利用其实现的检测方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
王召晓: "不同检测方法检测免疫球蛋白轻链比值的比较", 《中国医疗设备》 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106872718A (zh) * 2017-04-26 2017-06-20 吉林省富生医疗器械有限公司 一种尿微量白蛋白检测试剂盒及其制备方法
CN109187995A (zh) * 2018-09-14 2019-01-11 苏州普瑞斯生物科技有限公司 一种测定轻链Lambda浓度的试剂盒及制备方法
CN109613282A (zh) * 2019-01-24 2019-04-12 浙江夸克生物科技有限公司 一种高密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒及其应用

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