CN105548398A - 在线净化-液相色谱-质谱/质谱法测定菊花中吡虫啉和吡蚜酮残留量的方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种菊花中吡虫啉和吡蚜酮残留量的测定方法，尤其是涉及一种通过在线净化-液相色谱-质谱/质谱法对菊花中吡虫啉和吡蚜酮进行定量检测的方法。在线净化-液相色谱-质谱/质谱法测定菊花中吡虫啉和吡蚜酮残留量的方法，该方法称取1.00g样品，置入50mL塑料离心管中，加入约20mL水浸泡30min，均质后加入20mL乙腈和约4g氯化钠，涡旋3min，离心，取上层溶液约1mL过膜，在线净化，液相色谱-质谱/质谱仪测定。本发明的测定方法采用在线净化-液相色谱-质谱/质谱法测定菊花中吡虫啉和吡蚜酮的残留量，方法简便、快速、准确、可靠，检测限、回收率和精密度均符合要求。

Description

在线净化-液相色谱-质谱/质谱法测定菊花中吡虫啉和吡蚜酮残留量的方法

技术领域

本发明涉及一种菊花中吡虫啉和吡蚜酮残留量的测定方法，尤其是涉及一种通过在线净化-液相色谱-质谱/质谱法对菊花中吡虫啉和吡蚜酮进行定量检测的方法。

背景技术

菊花为一种常用药材，收载于中国药典中，功能清肝利胆、健胃消食、利尿消肿；同时其也常用作饮品。吡虫啉和吡蚜酮是吡啶类杀虫剂，具有广谱、高效、低毒的特点，能有效防治菊花花期蚜虫的侵害，是有关部门向菊农推荐使用的有效防治蚜虫的农药；同时这两种农药也就不可避免地在菊花上产生一定的残留。为有效控制菊花的质量，保障人身健康，非常必要对吡虫啉和吡蚜酮在菊花上的残留量进行分析。

目前，涉及菊花中吡虫啉和吡蚜酮残留量测定的检测方法较少。盛静等通过液相色谱对杭白菊中吡虫啉的残留量进行检测，从而对其残留进行动态研究；徐艳等采用高效液相色谱法同时测定中药材亳菊中多菌灵、吡虫啉和啶虫脒的残留量，最低检出浓度为0.02mg/kg。

发明内容

为了弥补采用液相色谱-质谱/质谱法测定菊花中吡虫啉和吡蚜酮残留量的空白，特别是采用在线净化的前处理方法，本发明的目的是提供一种利用在线净化-液相色谱-质谱/质谱法准确、灵敏、简便的测定菊花中吡虫啉和吡蚜酮的检测方法。

为了实现上述的目的，本发明采用了以下的技术方案：

在线净化-液相色谱-质谱/质谱法测定菊花中吡虫啉和吡蚜酮残留量的方法，其特征在于该方法包括以下的步骤：

1)试样处理：称取1.00g样品，置入50mL塑料离心管中，加入约20mL水浸泡30min，均质后加入20mL乙腈和约4g氯化钠，涡旋3min，离心，取上层溶液约1mL过膜，在线净化，液相色谱-质谱/质谱仪测定。

2)净化：采用在线净化，条件为：

a)在线净化柱：Cyclone-P，50mm×0.5mm，60μm；

b)流动相：水+乙腈，梯度上样洗脱；

c)进样量：10μL。

3)测定：采用液相色谱-质谱/质谱法，其中：

液相色谱条件为：

a)色谱柱：C18，150mm×4.6mm(内径)，5μm；

b)流动相：乙腈+0.1％甲酸溶液，梯度洗脱；

c)柱温：20℃。

质谱条件为：

a)离子源：电喷雾离子源；

b)扫描方式：正离子扫描；

c)检测方式：多反应监测；

d)电喷雾电压：3200V；

e)离子源温度：300℃；

f)鞘气压力：50Arb；

g)辅助气压力：20Arb；

h)毛细管温度：270℃；

i)碰撞气压力：1.5mTorr；

j)鞘气、辅助气均为高纯氮气；碰撞气为高纯氩气。

4)空白试验

除不加试样外，均按上述测定步骤进行；

5)结果计算和表述

按公式(1)计算试样中吡虫啉或吡蚜酮的残留量：

$X=\frac{CV}{m}...\left(1\right)$

式中：

X—试样中吡虫啉或吡蚜酮的含量，单位为毫克每千克；

C—由标准工作曲线得到样液中吡虫啉或吡蚜酮的浓度，单位为微克每毫升；

V—样液最终体积，单位为毫升；

m—最终样液所代表的试样量，单位为克。

作为优选，上述在线净化的流动相条件如表1：

表1在线净化的流动相条件

作为优选，上述液相色谱的流动相条件如表2：

表2液相色谱的流动相条件

作为优选，上述的多反应监测离子对条件表3：

表3多反应监测离子对和碰撞能量

其中，带“*”的为定量离子，其余为定性离子。

本发明的测定方法采用在线净化-液相色谱-质谱/质谱法测定菊花中吡虫啉和吡蚜酮的残留量，方法简便、快速、准确、可靠，检测限、回收率和精密度均符合要求。

本发明的测定方法具有以下技术效果：

1)首次开发了在线净化-液相色谱-质谱/质谱法同时测定菊花中吡虫啉和吡蚜酮残留量的方法，填补了技术空白；

2)提供了在线净化-液相色谱-质谱/质谱法测定菊花中吡虫啉和吡蚜酮残留量的最优净化条件和仪器条件。

附图说明

图1为标准溶液多反应监测(0.5ng/mL)色谱图。

图2为样品溶液多反应监测色谱图(吡虫啉检出)。

具体实施方式

为进一步说明本发明，结合以下实施例具体说明：

1、试剂和材料

1.1超纯水；

1.2乙腈：色谱纯；

1.3甲酸：色谱纯；

1.40.1％甲酸溶液：准确移取1.0mL甲酸，用水定容至1000mL。

1.5标准品：信息见表4。

表4标准品信息

化合物	英文名	CAS号
			吡虫啉	Imidacloprid	138261-41-3
吡蚜酮	Pymetrozin	123312-89-0

2、仪器和设备

2.1在线净化-液相色谱-质谱/质谱仪，配有电喷雾离子源；

2.2均质器；

2.3离心机。

3、测定步骤

3.1样品前处理

称取1.00g样品，置入50mL塑料离心管中，加入约20mL水浸泡30min，均质后加入20mL乙腈和约4g氯化钠，涡旋3min，离心，取上层溶液约1mL过膜，供在线净化，液相色谱-质谱/质谱仪测定。

3.2在线净化和测定

由于测试条件取决于所使用的仪器，因此不可能给出色谱分析的普遍参数。采用下列操作条件已被证明对测试是合适的。

3.2.1在线净化条件

a)在线净化柱：Cyclone-P，50mm×0.5mm，60μm；

b)流动相：水+乙腈，梯度上样洗脱条件见表1；

c)进样量：10μL。

3.2.2液相色谱条件

a)色谱柱：C18，150mm×4.6mm(内径)，5μm；

b)流动相：乙腈+0.1％甲酸溶液，梯度洗脱条件见表2；

c)柱温：20℃。

3.2.3质谱条件

a)离子源：电喷雾离子源；

b)扫描方式：正离子扫描；

c)检测方式：多反应监测；

d)电喷雾电压：3200V；

e)离子源温度：300℃；

f)鞘气压力：50Arb；

g)辅助气压力：20Arb；

h)毛细管温度：270℃；

i)碰撞气压力：1.5mTorr；

j)鞘气、辅助气均为高纯氮气；碰撞气为高纯氩气。

k)监测离子对及碰撞能量见表3。

3.2.4空白试验

除不加试样外，均按上述步骤进行。

4、结果计算和表述

按公式(2)计算试样中吡虫啉或吡蚜酮的残留量：

$X=\frac{CV}{m}...\left(2\right)$

式中：

X—试样中吡虫啉或吡蚜酮的含量，单位为毫克每千克；

C—由标准工作曲线得到样液中吡虫啉或吡蚜酮的浓度，单位为微克每毫升；

V—样液最终体积，单位为毫升；

m—最终样液所代表的试样量，单位为克。

5、方法检出限

本发明方法对于菊花中吡虫啉和吡蚜酮的检出限均为0.01mg/kg。

6、方法的回收率和精密度

本方法回收率实验设定了三个添加浓度，按本方法所确定的实验条件，对每个添加浓度进行6次实验，回收率及精密度结果见表5。

表5回收率及精密度试验(n＝6)

7、结论

综合上述情况，本发明方法的回收率、检出限和精密度等各项技术指标均符合要求，方法应用于菊花中吡虫啉和吡蚜酮残留量的检测，重现性良好。本发明建立的检验方法操作简便、结果准确。

Claims (1)

1.在线净化-液相色谱-质谱/质谱法测定菊花中吡虫啉和吡蚜酮残留量的方法，其特征在于该方法包括以下的步骤：

1)试样处理：称取1.00g样品，置入50mL塑料离心管中，加入约20mL水浸泡30min，均质后加入20mL乙腈和约4g氯化钠，涡旋3min，离心，取上层溶液约1mL过膜，在线净化，液相色谱-质谱/质谱仪测定；

2)净化：采用在线净化，条件为：

a)在线净化柱：Cyclone-P，50mm×0.5mm，60μm；

b)流动相：水+乙腈，梯度上样洗脱；梯度上样洗脱条件如下，水和乙腈的比例为体积比：

时间/min 流速/(mL/min) 水/％ 乙腈/％ 洗脱环 切换阀 0.00 1.50 100 0 Out Waste 1.00 0.10 100 0 Out Waste 1.50 0.10 100 0 In Mass 3.50 1.50 0 100 In Waste 5.50 1.50 70 30 In Waste 9.50 1.50 100 0 Out Waste 14.00 1.50 100 0 Out Waste

c)进样量：10μL；

3)测定：采用液相色谱-质谱/质谱法，其中：

液相色谱条件为：

a)色谱柱：C18，150mm×4.6mm(内径)，5μm；

b)流动相：乙腈+0.1％甲酸溶液，梯度洗脱；梯度洗脱条件如下，其中乙腈和0.1％甲酸的比例为体积比：

时间/min 流速/(mL/min) 0.1％甲酸溶液/％ 乙腈/％ 0.00 0.40 95 5 1.50 0.40 95 5 3.50 0.30 95 5 5.50 0.40 20 80 9.50 0.40 20 80 10.50 0.40 95 5 14.00 0.40 95 5

c)柱温：20℃；

质谱条件为：

a)离子源：电喷雾离子源；

b)扫描方式：正离子扫描；

c)检测方式：多反应监测；

d)电喷雾电压：3200V；

e)离子源温度：300℃；

f)鞘气压力：50Arb；

g)辅助气压力：20Arb；

h)毛细管温度：270℃；

i)碰撞气压力：1.5mTorr；

j)鞘气、辅助气均为高纯氮气；碰撞气为高纯氩气；

k)监测离子对及碰撞能量如下：

4)空白试验

除不加试样外，均按上述步骤2)～3)测定步骤进行；

5)结果计算和表述

按公式(1)计算试样中吡虫啉或吡蚜酮的残留量：

$X=\frac{CV}{m}\mathrm{...}\left(1\right)$

式中：

X—试样中吡虫啉或吡蚜酮的含量，单位为毫克每千克；

C—由标准工作曲线得到样液中吡虫啉或吡蚜酮的浓度，单位为微克每毫升；

V—样液最终体积，单位为毫升；

m—最终样液所代表的试样量，单位为克。